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Verfahren zur Gewinnung der laktationsfördernden Substanz aus Hypophysenvorderlappen.
Die bisherigen Verfahren zur Gewinnung der laktationsfördernden Substanz gehen aus von frischen Hypophysenvorderlappen oder getrockneten Drüsen, die die Gesamtheit der in der Drüse vorhandenen Wirkstoffe enthalten. Es ist eine grosse Reihe von Versuchen bekannt, diese Substanzen aus ihren Extrakten zu isolieren und zu trennen. Stets sind diese Versuche mit ganz erheblichen Verlusten verbunden ; besonders schwierig gestaltet sich die Trennung der gonadotrop wirksamen Substanz von der die Laktation fördernden Substanz.
Es wurde nun gefunden, dass man für die Gewinnung der die Laktation fördernden Substanz mit besonderem Vorteil von solchen Drüsen ausgehen kann, denen durch geeignete Vorbehandlung die gonadotrope Substanz entzogen ist. Es kommen beispielsweise als Ausgangsmaterial solche Drüsen in Frage, die nach dem Verfahren des Patentes Nr. 154539 vorbehandelt sind. Nach dem dort beschriebenen Verfahren werden die gonadotrope Substanz und andere Wirksamen Stoffe der Hypophyse extrahiert und in hoher Ausbeute erhalten.
Behandelt man die beispielsweise nach dem Verfahren des Patentes Nr. 154539 von gonadotroper Substanz befreiten Drüsen mit starkem Alkali in den pH-Grenzen von zirka pH 8-0-12-0 in ähnlicher Weise, wie dies früher mit nicht vorbehandelten Hypophysen geschehen ist, so erhält man einen Extrakt der laktationsfördernden Substanz, der von gonadotroper Substanz weitgehend befreit ist. Die Aufarbeitung dieses Extraktes geschieht etwa in der Weise, dass man die wirksame Substanz in der Nähe des isoelektrischen Punktes ausfällt und nach Wiederauflösung in schwach alkalischem Wasser, zweckmässigerweise unter Zusatz eines Desinfiziens, die Lösung einfriert und trocknet.
Der überragende technische Vorteil besteht darin, dass man ans dem gleichen Drüsenmaterial in einer Ausbeute von annähernd 80-90% die wichtigen Anteile, nämlich die gonadotrope und die laktationsfördernde Substanz erhalten kann, ohne eine anschliessende, sehr verlustreiehe Trennung dieser beiden wichtigen Wirkstoffe der Hypophyse aus einer gemeinsamen Lösung durchführen zu müssen.
Beispiel 1 : Der feuchte Rückstand von 15 der nach Patent Nr. 154539 extrahierten Hypophysenvorderlappen wird mit 150em3 Wasser angerührt und mit n-Natronlauge auf pH : 8'5 eingestellt. Das Gemisch wird anschliessend eine Stunde bei 350 extrahiert und zentrifugiert. Der Rückstand wird noch zweimal ebenso bei pH : 9-0 bzw. pH : 10-0 extrahiert.
Die vereinigten Extrakte werden nochmals zentrifugiert, die klare Lösung auf pH : 5'0 eingestellt und der Niederschlag mit Alkohol getrocknet.
Beispiel 2 : Der feuchte Rückstand von 15 g der nach Patent Nr. 154539 extrahierten Hypophysenvorderlappen wird wie in Beispiel 1 bei pH : 8'5 bis pH : 11'5 bei Zimmertemperatur extrahiert und zentrifugiert. Der bei der anschliessenden pH : 5-Fällung entstehende Niederschlag wird bei pH : 8'0 wieder gelöst, unter Zusatz eines Desinfektionsmittels, z. B. 2-äthyl-quecksiIber-merkapto-benzoxazol- 5-carbonsaure Natrium, in Lösung 1 : 10. 000 gebracht und die Lösung in gefrorenem Zustand im Vakuum getrocknet.
PATENT-ANSPRÜCHE :
1. Verfahren zur Gewinnung der laktationsfördernden Substanz aus Hypophysenvorderlappen, dadurch gekennzeichnet, dass man eine von der gonadotropen Substanz befreite Drüse als Ausgangsmaterial verwendet.
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Process for obtaining the lactation-promoting substance from the anterior pituitary gland.
The previous methods for obtaining the lactation-promoting substance are based on fresh anterior pituitary lobes or dried glands, which contain all of the active substances present in the gland. A large number of attempts are known to isolate and separate these substances from their extracts. These attempts are always associated with very considerable losses; It is particularly difficult to separate the gonadotropically active substance from the substance which promotes lactation.
It has now been found that to obtain the lactation-promoting substance, it is particularly advantageous to start from those glands from which the gonadotropic substance has been withdrawn by suitable pretreatment. For example, glands that have been pretreated according to the method of patent no. 154539 are suitable as starting material. According to the method described there, the gonadotropic substance and other active substances of the pituitary gland are extracted and obtained in high yield.
If the glands freed from gonadotropic substance, for example by the method of patent no. 154539, are treated with strong alkali within the pH limits of about pH 8-0-12-0 in a similar way as was done earlier with untreated pituitary glands an extract of the lactation-promoting substance is obtained, which is largely freed from gonadotropic substance. This extract is worked up in such a way that the active substance is precipitated near the isoelectric point and, after redissolving in weakly alkaline water, conveniently with the addition of a disinfectant, the solution is frozen and dried.
The overriding technical advantage is that you can get the important components, namely the gonadotropic and lactation-promoting substances, from the same gland material in a yield of approximately 80-90%, without a subsequent, very lossy separation of these two important active substances of the pituitary gland a common solution.
Example 1: The moist residue of 15 of the anterior pituitary lobes extracted according to Patent No. 154539 is mixed with 150 ml of water and adjusted to pH: 8-5 with sodium hydroxide solution. The mixture is then extracted at 350 for one hour and centrifuged. The residue is extracted twice more at pH: 9-0 or pH: 10-0.
The combined extracts are centrifuged again, the clear solution is adjusted to pH: 50 and the precipitate is dried with alcohol.
Example 2: The moist residue of 15 g of the anterior pituitary lobes extracted according to Patent No. 154539 is extracted as in Example 1 at pH: 8'5 to pH: 11'5 at room temperature and centrifuged. The precipitate formed during the subsequent pH: 5 precipitation is redissolved at pH: 8'0, with the addition of a disinfectant, e.g. B. 2-ethyl-mercury-mercapto-benzoxazole-5-carboxylic acid sodium, brought into solution 1: 10,000 and the solution dried in a vacuum in the frozen state.
PATENT CLAIMS:
1. A method for obtaining the lactation-promoting substance from the anterior pituitary gland, characterized in that a gland freed from the gonadotropic substance is used as the starting material.
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