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DE69929345T2 - Substituierte isoxal-derivate als östrogenrezeptormodulatoren - Google Patents

Substituierte isoxal-derivate als östrogenrezeptormodulatoren Download PDF

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DE69929345T2
DE69929345T2 DE69929345T DE69929345T DE69929345T2 DE 69929345 T2 DE69929345 T2 DE 69929345T2 DE 69929345 T DE69929345 T DE 69929345T DE 69929345 T DE69929345 T DE 69929345T DE 69929345 T2 DE69929345 T2 DE 69929345T2
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alkyl
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Xiaodong Walnut Creek LIN
Ian Rowville JAMES
Liya East Brunswick CHEN
Manoj Pleasant Hill DESAI
C. Jennifer Emeryville MOORE
Beata Armadale KRYWULT
Thayalan San Leandro NAVARATNAM
Rajinder Walnut Creek SINGH
Rob Murrumbeena TRAINOR
Liang Lafayette WANG
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Chiron Corp
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Description

  • 1 Hintergrund der Erfindung
  • 1.1 Gebiet der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung betrifft Verbindungen, die eine biologische Aktivität gegenüber Östrogenrezeptoren haben, und die Verwendung von solchen Verbindungen zur Behandlung von Erkrankungen und Störungen, die mit einer Östrogenrezeptoraktivität in Verbindung stehen. Insbesondere stellt die vorliegende Erfindung selektive Östrogenrezeptormodulatoren („SERMs") zur Verfügung. Die vorliegende Erfindung betrifft daher die Gebiete der Medizin, der medizinischen Chemie, der Biochemie und der Endokrinologie.
  • 1.2 Hintergrund
  • Östrogen ist ein Hormon, das für die normale menschliche Entwicklung und Funktion kritisch ist. Obgleich das Östrogen das vorwiegende „Geschlechtshormon" bei Frauen ist, bei denen das Östrogen die Entwicklung der weiblichen Geschlechtsmerkmale und die Entwicklung und Funktion des Reproduktionssystems kontrolliert (Berkow, Beers et al. 1997), ist dieses auch bei Männern gefunden worden (Gustafsson 1998). Die Frauen produzieren das Östrogen in erster Linie in den Ovarien, jedoch beeinflusst das Östrogen eine Vielzahl von physiologischen Funktionen von Frauen mit Einschluss der Regulierung der Körpertemperatur, der Aufrechterhaltung der Vaginalauskleidung und der Konservierung der Knochendichte (Jordan 1988). Zusätzlich übt das Östrogen weitere Effekte aus, die in Bezug mit seiner Fähigkeit stehen, die Produktion von Cholesterin in der Leber zu modulieren, wie durch das verringerte Auftreten von Atherosklerose bei Frauen im Vergleich zu Männern gezeigt wird, das zum Teil auf eine Verringerung des Lipoproteins mit niedriger Dichte („LDL") (Jordan 1998) zurückzuführen ist. Das Östrogen spielt auch eine Rolle bei der Verzögerung und/oder Verringerung der Schwere der Alzheimererkrankung bzw. Alzheimer-Krankheit (Jordan 1998).
  • Das Versagen, Östrogen zu produzieren, hat bei Frauen ausgeprägte physiologische Konsequenzen. Das Versagen, Östrogen zu produzieren, das von einer unvollständigen oder nicht vorhandenen Entwicklung der Ovarien (Turnersches Syndrom) herrührt, bewirkt Mängel in der Haut, den Knochen (z.B. schwere Osteoporose) und in anderen Organen, die in schwerwiegender Weise das Leben der betroffenen Individuen beeinträchtigen (Dodge 1995). Bei normalen Frauen fällt die Produktion von Östrogen nach dem Einsetzen der Menopause gewöhnlich im Alter von etwa 50 Jahren scharf ab. Die Effekte des Verlusts der Produktion von Östrogen schließen erhöhte atherosklerotische Abscheidungen (was zu einer starken Erhöhung des Auftretens von Herzkrankheiten führt), eine verringerte Knochendichte (Osteoporose) und Schwankungen der Körpertemperatur unter Anderem ein (Jordan 1998). Oftmals werden die Effekte einer verringerten Produktion von Östrogen durch eine Hormonersatztherapie angesprochen (Dodge 1995; Berkow, Beers et al. 1997; Jordan 1998).
  • Jedoch hat das Östrogen auch unerwünschte Wirkungen. Bei Frauen, die sich in der Menopause befinden, ist eine Ergänzungsbehandlung mit Östrogen von einer Milderung der oben beschriebenen unerwünschten Wirkungen begleitet. Jedoch ist die Verabreichung von Östrogen auch mit einem erhöhten Risiko für Brust- und Endometrialkrebs sowie Blutgerinnsel verbunden (Jordan 1998). Das erhöhte Risiko von Endometrialkrebs kann durch die Verabreichung von Progesteron (oder dessen synthetischem Analogen Progestin) angesprochen werden, um eine Menstruation zu reinitiieren und auf diese Weise eine Abschirmung von potentiell bösartigen Zellen zu bewirken. Viele ältere Frauen finden jedoch eine derartige Behandlung als nicht erwünscht (Jordan 1998). Jedoch ist Brustkrebs das bei weitem größere Risiko einer Östrogenersatztherapie, wobei eine Frau von 15 Frauen im Alter von 60 bis 79 von dieser Erkrankung befallen wird (Jordan 1998).
  • Daher waren über eine lange Zeit die Behandlungsoptionen für schwerwiegende Gesundheitsprobleme, die durch ein Unvermögen der Produktion von Östrogen bewirkt wurden, eingeschränkt und mit schweren Risiken behaftet. Die Entdeckung, dass bestimmte Mittel als Östrogenagonisten in einigen Geweben (z.B. im Knochen) und als Antagonisten in anderen Geweben (z.B. in der Brust) wirken, haben dahingehend Hoffnungen erweckt, dass wirksamere Behandlungen für einen Verlust von Östrogen gefunden werden könnten (Gradishar und Jordan 1997; Gustafsson 1998; Jordan 1998; MacGregor und Jordan 1998). Das am besten bekannte Mittel dieser sogenannten selektiven Östrogenrezeptormodulatoren („SERMs"), das Tamoxifen, hat gezeigt, dass es eine therapeutische Eignung für die Behandlung und Prävention von Brustkrebs und zur Erniedrigung der LDL-Konzentrationen, jedoch ohne eine signifikante Verringerung der Knochendichte, hat (Jordan 1998; MacGregor und Jordan 1998). Jedoch ist das Tamoxifen mit Endometrialkrebs und verschiedenen Venenblutgerinnseln assoziiert gewesen (Jordan 1998; MacGregor und Jordan 1998). Zusätzlich kann Tumorresistenz gegenüber Tamoxifen auftreten (MacGregor und Jordan 1998).
  • Auf das Tamoxifen sind neuerdings neuere SERMs, insbesondere das Raloxifen, gefolgt, die dahingehend vielversprechend sind, dass sie viele der Vorteile von Tamoxifen, jedoch mit geringeren Risiken, ergeben (Howell, Downey et al. 1996; Gradishar und Jordan 1997; Gustafsson 1998; Jordan 1988; Purdie 1999; Sato, Grese et al. 1999). Diese neueren SERMs mit Einschluss von Idoxifen (Nuttall, Bradbeer et al. 1998); CP-336,156 (Ke, Paralkar et al. 1998), GW5638 Willson, Norris et al. 1997) LY353581 (Sato, Turner et al. 1998) sind Teil der zweiten und dritten Generation von partiellen Östrogenagonisten/antagonisten. Weiterhin ist auch schon über eine neue Generation von reinen Antiöstrogenen, wie RU 58,688 (Van de Velde, Nique et al. 1994) berichtet worden. Neuerdings ist auch über eine große Anzahl von weiteren partiellen und reinen Östrogenagonist/antagonist-Verbindungen und Behandlungsmodalitäten berichtet worden (Bryant und Dodge 1995; Bryant und Dodge 1995; Cullinan 1995; Dodge 1995; Grese 1995; Labrie und Merand 1995; Labrie und Merand 1995; Thompson 1995; Audia und Neubau er 1996; Black, Bryant et al. 1996; Thompson 1996; Cullinan 1997; Wilson 1997; Miller, Collini et al. 1999; Palkowitz 1999; Wilson 1999).
  • Die EP-A-0026928 beschreibt 3,4-Diarylisoxazol-5-essigsäure-Verbindungen, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Präparate. Diese Druckschrift lehrt, dass die Verbindungen entzündungshemmende, analgetische und antipyretische Aktivitäten sowie eine niedrige Toxizität haben.
  • Kasturi, T.R. et al. beschreiben in der Veröffentlichung "Reaction of Spironaphthalenones with Hydroxylamin Hydrochloride: Part IV" Tetrahedron, Bd. 51, Nr. 10, S. 3051-3060 die Herstellung von Naphth[2,1-c]isoxazol-Derivaten und Naphth[1,2-c]isoxazol-Derivaten von Spironaphthalinonen.
  • Zbigniew Wrobel et al. beschreiben in der Veröffentlichung „Conversion of 1-(o-nitroaryl)alkyl-p-tolylsulfones into isoxazoles" Heterocycles, Bd. 40, Nr. 1, 1995, S. 187-190, dass die teilweise Reduktion von o-Nitrobenzyl-p-tolylsulfonen in einem alkalischen Medium zu der Bildung von Nitrosobenzylsulfoncarbanionen führt, die zu Isoxazolen cyclisiert werden.
  • Die WO-A-9625405 beschreibt eine Klasse von substituierten Isoxazolylverbindungen zur Verwendung bei der Behandlung von Entzündungen und mit Entzündungen einhergehenden Gesundheitsstörungen.
  • Die DE-A-3119727 beschreibt 4-(arylaliphatische)Isoxazole mit einer Aktivität gegenüber Viren, welche dadurch hergestellt werden, dass mit Hydroxylamin ein Diketon der Formel Ar-Y-CH(CO-R)2 umgesetzt wird, wobei Ar für substituiertes Phenyl steht, Y für (CH2)n oder O(CH2)n steht und R für Niederalkyl steht.
  • Jakob Meisenheimer et al. diskutieren in der Veröffentlichung: „Über Triaryl-isoxazole" Chemische Berichte, 1921, S. 3195-3206 die Herstellung von Triarylisoxazolen.
  • Bislang ist jedoch noch kein Wirkstoffkandidat aufgetaucht, der die Bedürfnisse von Frauen erfüllt, die die Vorteile eines Östrogenersatzes für ein produktives Leben und/oder für Behandlungen von Östrogen-abhängigen Krebserkrankungen benötigen. Die Anstrengungen, bessere partielle und reine Östrogenagonisten und -antagonisten zu entwickeln, sind durch mehrere neuere Entwicklungen unterstützt worden, mit Einschluss der Entdeckung, dass der humane Östrogenrezeptor mindestens zwei Isoformen („ERα" und „ERβ") und die Kristallstruktur von ERα hat, was hoch-auflösende Untersuchungen, betreffend die Beziehung zwischen Struktur und Aktivität, ermöglicht hat (Sadler, Cho et al. 1998). Neuerdings wurde über eine Studie unter Anwendung von kombinatorischen synthetischen Verfahren, kombiniert mit einer dreidimensionalen Struktur-Aktivitäts-Analyse, zur Entwicklung von SERMs mit optimalen therapeutischen Profilen berichtet (Fink, Mortensen et al. 1999). In dieser Studie wurden mehrere heterocyclische Strukturmotive (Imidazole, Thiazole, Pyrazole, Oxazole und Isoxazole) untersucht und bestimmte Pyrazol-Motivverbindungen wurden identifiziert, die für eine kombinatorische Entwicklung von SERMs gut geeignet waren. Die relative Bindungswirksamkeit der Pyrazole gegenüber anderen Strukturmotiven baute sich zusätzlich zu Erwägungen bezüglich der Polarität auf ihrer Fähigkeit auf, vier Substituenten zu tragen (vergleiche S. 215). Insbesondere betraf die Studie die Fähigkeit des Pyrazolstrukturmotivs, vier Substituenten zu tragen, was die Bindungswirksamkeit von Pyrazolen im Vergleich zu den schlechten Bindungsergebnissen erläutert, die für Oxazol-, Thiazol- und Isoxazolstrukturmotive gefunden worden sind.
  • Jedoch ist trotz dieser neuerlichen Fortschritte noch kein Wirkstoffkandidat aufgetaucht, der dazu imstande ist, den Erfordernissen von Frauen zu genügen, die die Vorteile eines Östrogenersatzes brauchen, um produktive Leben zu führen, und/oder für Behandlungen von Östrogen-abhängigen Krebserkrankungen. Die vorliegende Erfindung spricht diese und andere Bedürfnisse an.
  • 2 Zusammenfassung der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung stellt Isoxazolöstrogenrezeptoragonist- und -antagonist-Verbindungen zusätzlich zu der Verwendung der Verbindungen und pharmazeutische Präparate zur Behandlung oder Prävention von durch Östrogenrezeptoren vermittelten Störungen zur Verfügung. Es ist gefunden worden, dass die hierin beschriebenen Verbindungen eine unerwartete und überraschende Aktivität zur Modulierung der Östrogenrezeptoraktivität haben. Daher sind die erfindungsgemäßen Verbindungen dazu geeignet, Östrogenrezeptor-vermittelte Störungen, wie Osteoporose, Brust- und Endometrialkrebs, Atherosklerose und Alzheimer-Krankheit zu verhindern oder zu behandeln.
  • Gemäß einer ersten Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung Verbindungen mit der untenstehend angegebenen Struktur:
    Figure 00040001
    und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze zur Verfügung, wobei X1 und X2 unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Stickstoff und Sauerstoff, so dass, wenn eines von X1 und X2 Stickstoff ist, das andere von X1 und X2 Sauerstoff ist, so dass dadurch eine Isoxazolring-Struktur gebildet wird;
    R1 Phenyl ist, das mit einer 4-Hydroxygruppe substituiert ist und gegebenenfalls außerdem mit einer Gruppe substituiert ist, die aus Halogen, Nitro, Cyano, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkyloxy, Halogenniederalkyloxy, Carboxy, Niederalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, (Cycloniederalkyl)oxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, Heteroaryloxycarbonyl, Heteroaralkyloxycarbonyl, (Heterocycloniederalkyl)oxycarbonyl, Niederalkylsulfinyl, Niederalkylsulfonyl, Niederalkylthio, Arylthio, Niederalkylcarbonyloxy, Arylcarbonyloxy, Aralkylcarbonyloxy, Heteroarylcarbonyloxy, Heteroaralkylcarbonyloxy, (Cycloniederalkyl)carbonyloxy, Alkylsulfonylamino, (Heterocycloniederalkyl)carbonyloxy, Aminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl und Heteroaralkylaminocarbonyl ausgewählt ist;
    R3 Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, (Monoaryl)alkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl oder (Cycloheteroalkyl)alkyl, unsubstituiert oder substituiert mit einer Gruppe, ausgewählt aus Hydroxyl, Nitro, Amino, Imino, Cyano, Halogen, Thio, Thioamido, Amidino, Oxo, Oxamidino, Methoxamidino, Imidino, Guanidino, Sulfonamido, Carboxyl, Formyl, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkoxy, Halogenniederalkoxy, Niederalkoxyalkyl, Alkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Aralkylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Heteroaralkylcarbonyl, Alkylthio, Aminoalkyl und Cyanoalkyl, ist, und, wenn R3 Aryl oder (Monoaryl)alkyl ist, Substituenten außerdem aus Aryloxy und Arylthio ausgewählt sein können, wobei einer dieser Substituenten außerdem mit Carboxyl, Halogen, Nitro, Amino, Cyano, Hydroxyl, Niederalkyl, Niederalkoxy, Aminocarbonyl, -SR, Thioamido, -SO3H, -SO2R oder Cycloalkyl, worin R Wasserstoff, Hydroxyl oder Niederalkyl ist, substituiert sein können; und
    R2 ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Thio, Amino, Carboxyl, Formyl, substituiertem Aryl und unsubstituiertem oder substituiertem Aralkyl, Heteroaryl, Heteroaralkyl, Alkenyl, Niederalkyl, Niederalkylcarbonyloxy, Arylcarbonyloxy, Heteroarylcarbonyloxy, Cycloalkylcarbonyloxy, Cycloheteroalkylcarbonyloxy, Aralkylcarbonyloxy, Heteroaralkylcarbonyloxy, (Cycloalkyl)alkylcarbonyloxy, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonyloxy, Niederalkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Cycloalkylcarbonyl, Cycloheteroalkylcarbonyl, Aralkylcarbonyl, Heteroaralkylcarbonyl, (Cycloalkyl)alkylcarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl, Heteroaralkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, (Cycloalkyl)alkylaminocarbonyl, Cycloheteroalkylaminocarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylaminocarbonyl, Niederalkylcarbonylamino, Arylcarbonylamino, Heteroarylcarbonylamino, Cycloalkylcarbonylamino, Cycloheteroalkylcarbonylamino, Aralkylcarbonylamino, Heteroaralkylcarbonylamino, (Cycloalkyl)alkylcarbonylamino, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonylamino, Niederalkylamino, Arylamino, Aralkylamino, Heteroarylamino, Heteroaralkylamino, Niederalkylsulfonyl, Arylsulfonyl, Heteroarylsulfonyl, Cylcoalkylsulfonyl, Cycloheteroalkylsulfonyl, Aralkylsulfonyl, Heteroaralkylsulfonyl, (Cycloalkyl)alkylsulfonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylsulfonyl, Niederalkylsulfinyl, Arylsulfinyl, Heteroarylsulfinyl, Cycloalkylsulfinyl, Cycloheteroalkylsulfinyl, Aralkylsulfinyl, Heteroaralkylsulfinyl, (Cycloalkyl)alkylsulfinyl, (Cycloheteroalkyl)alkylsulfinyl, Niederalkyloxy, Aryloxy, Heteroaryloxy, Cycloalkyloxy, Cycloheteroalkyloxy, Aralkyloxy, Heteroaralkyloxy, (Cycloalkyl)alkyloxy, (Cycloheteroalkyl)alkyloxy, Niederalkylthio, Arylthio, Heteroarylthio, Cycloalkylthio, Cycloheteroalkylthio, Aralkylthio, Heteroaralkylthio, (Cycloalkyl)alkylthio, (Cycloheteroalkyl)alkylthio, Niederalkylthiocarbonyl, Arylthiocarbonyl, Heteroarylthiocarbonyl, Cycloalkylthiocarbonyl, Cycloheteroalkylthiocarbonyl, Aralkylthiocarbonyloxythiocarbonyl, Heteroaralkylthiocarbonyl, (Cycloalkyl)alkylthiocarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylthiocarbonyl, Heteroarylcarbonylthio, Cycloalkylcarbonylthio, Cycloheteroalkylcarbonylthio, Aralkylcarbonylthiooxycarbonylthio, Heteroaralkylcarbonylthio, (Cycloalkyl)alkylcarbonylthio, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonylthio, Niederalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, Heteroaryloxycarbonyl, Cycloalkyloxycarbonyl, Cycloheteroalkyloxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, Heteroaralkyloxycarbonyl, (Cycloalkyl)alkyloxycarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkyloxycarbonyl, Iminoniederalkyl, Iminocycloalkyl, Iminocycloheteroalkyl, Iminoaralkyl, Iminoheteroaralkyl, (Cycloalkyl)iminoalkyl, (Cycloheteroalkyl)iminoalkyl, (Cycloiminoalkyl)alkyl, (Cycloiminoheteroalkyl)alkyl, Oximinoniederalkyl, Oximinocycloalkyl, Oximinocycloheteroalkyl, Oximinoaralkyl, Oximinoheteroaralkyl, (Cycloalkyl)oximinoalkyl, (Cyclooximinoalkyl)alkyl, (Cyclooximinoheteroalkyl)alkyl, (Cycloheteroalkyl)oximinoalkyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenyl, Diniederalkylaminoniederalkyloxyphenyl, (Cycloaminoniederalkyl)niederalkyloxyphenyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl und Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl, wobei, wenn die Gruppe substituiert ist, die Substituenten aus Hydroxyl, Nitro, Amino, Imino, Cyano, Halogen, Thio, Thioamido, Amidino, Oxo, Oxamidino, Methoxamidino, Imidino, Guanidino, Sulfonamido, Carboxyl, Formyl, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkoxy, Halogenniederalkoxy, Niederalkoxyalkyl, Alkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Aralkylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Heteroaralkylcarbonyl, Alkylthio, Aminoalkyl und Cyanoalkyl ausgewählt sind, wobei diese Substituenten weiter mit Carboxyl, Halogen, Nitro, Amino, Cyano, Hydroxyl, Niederalkyl, Niederalkoxy, Aminocarbonyl, -SR, Thioamido, -SO3H, -SO2R oder Cycloalkyl substituiert sein können, worin R Wasserstoff, Hydroxyl oder Niederalkyl ist;
    wobei für jedes R1, R2 und R3 Aryl sich auf monocyclische und polycyclische aromatische Gruppen oder kondensierte Ringsysteme bezieht, die wenigstens einen aromatischen Ring und 3 bis 14 Hauptketten-Kohlenstoffatome haben; und Heteroaryl sich auf monocyclische und polycyclische aromatische Gruppen oder kondensierte Ringsysteme bezieht, die wenigstens einen aromatischen Ring, 3 bis 14 Hauptketten-Kohlenstoffatome und 1 bis 4 Heteroatome als Ringatome in einem aromatischen Ring haben;
    und wobei die Niederalkylgruppen 1 bis 10 Kohlenstoffatome umfassen.
  • Gemäß einer spezielleren Ausführungsform der Erfindung wird R2 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituierten Niederalkyloxy, Aryloxy, Heteroaryloxy, Cycloalkyloxy, Cycloheteroalkyloxy, Aralkyloxy, Heteroaralkyloxy, (Cycloalkyl)alkyloxy und (Cycloheteroalkyl)alkyloxy, Niederalkylthio, Arylthio, Heteroarylthio, Cycloalkylthio, Cycloheteroalkylthio, Aralkylthio, Heteroaralkylthio, (Cycloalkyl)alkylthio, (Cycloheteroalkyl)alkylthio, Aralkyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenyl, Diniederalkylaminoniederalkyloxyphenyl, (Cycloaminoniederalkyl)niederalkyloxyphenyl und (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenyl, Phenylcarbonyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl, Hydroxyphenylcarbonyl, Halogenphenylcarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Diniederalkylaminocarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Hydroxyphenylniederalkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, Niederalkylphenylcarbonyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl und Nitrophenylcarbonyl, ausgewählt.
  • Weitere besondere Ausführungsformen sind solche, bei denen R2 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Phenylcarbonyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl, Hydroxyphenylcarbonyl, Halogenphenylcarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Diniederalkylaminocarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Hydroxyphenylniederalkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, Niederalkylphenylcarbonyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl und Nitrophenylcarbonyl, ausgewählt ist.
  • Beispiele für Substituenten R2 mit verwendbaren Eigenschaften schließen, jedoch ohne Einschränkung darauf, 4-(2-Piperidin-1-ylethyloxy)phenylcarbonyl, 4-Hydroxyphenylcarbonyl, (Phenylmethyl)aminocarbonyl, 3-(2-Oxopyrrolidin-1-yl)propylaminocarbonyl, Di-n-butylaminocarbonyl, (4-Hydroxyphenylmethyl)aminocarbonyl, (Pyridin-3-ylmethyl)aminocarbonyl, (Pyridin-2-ylmethyl)aminocarbonyl, Dimethylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, 4-(2-Morpholinoethyloxy)phenylcarbonyl, Cyclopropylaminocarbonyl, Cyclobutylaminocarbonyl, 4-(1-Methylpiperidin-3-ylmethyloxy)phenylcarbonyl, 4-[2-(1-Methylpyrrolidin-2-yl)ethyloxy]phenylcarbonyl, 4-[2-(4-Methylpiperazin-1-yl)ethyloxy]phenylcarbonyl, 4-(1-Methylpiperidin-4-ylmethyloxy)phenylcarbonyl, 2-Chlorphenylcarbonyl, 3-Chlorphenylcarbonyl, 4-Chlorphenylcarbonyl, 3-Nitrophenylcarbonyl, 4-Nitrophenylcarbonyl, 3,4-Dichlorphenylcarbonyl, 4-n-Butylphenylcarbonyl, 3-Hydroxyphenylcarbonyl, 2-Hydroxyphenylcarbonyl, 4-Methoxyphenylcarbonyl, 3-(2-Piperidin-1-ylethyloxy)phenylcarbonyl, 3-[2-(Pyrrolidin-1-yl)ethyloxy]phenylcarbonyl und 3-(1-Methylpiperidin-3-ylmethyloxy)phenylcarbonyl ein.
  • Gemäß weiteren Ausführungsformen der Erfindung wird R2 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Phenylcarbonyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl, Hydroxyphenylcarbonyl, Halogenphenylcarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Diniederalkylaminocarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Hydroxyphenylniederalkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, Niederalkylphenylcarbonyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl und Nitrophenylcarbonyl, ausgewählt.
  • Beispiele für speziell geeignete Gruppen für R3 schließen, ohne Einschränkung darauf, 2-Methyl-4-hydroxyphenyl, 2-Aminocarbonyl-4-hydroxyphenyl, 4-Methylsulfonylaminophenyl, 3-Aminocarbonyl-4-hydroxyphenyl, 3-Aminocarbonyl-4-methoxyphenyl, 3-Chlor-4-hydroxyphenyl, 4-Methylcarbonyloxyphenyl, 3-n-Hexyl-4-hydroxyphenyl, 4-n-Propylcarbonyloxyphenyl, 3-Ethyl-4-hydroxyphenyl, 2-Methylsulfinyl-4-hydroxyphenyl, 2-Ethyl-4-hydroxyphenyl, 2-Carboxy-4-hydroxyphenyl, 3-Fluor-4-hydroxyphenyl, 2-Iod-4-hydroxyphenyl, 2-n-Butyl-4-hydroxyphenyl, 2-Trifluormethoxyphenyl und 4-Fluorphenyl ein.
  • Gemäß einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei einem Verfahren zur Behandlung oder Prävention einer Östrogenrezeptor-vermittelten Störung in einem Menschen oder einem Tier zur Verfügung. Repräsentative Östrogenrezeptor-vermittelte Störungen schließen z.B. Osteoporose, Atherosklerose, Östrogen-vermittelte Krebserkrankungen (z.B. Brust- und Endometrialkrebs) und Alzheimer-Krankheit ein.
  • Diese und andere Aspekte und Vorteile werden offensichtlich werden, wenn die untenstehende Beschreibung in Verbindung mit den begleitenden Beispielen gelesen wird.
  • 3 Beschreibung von einigen Ausführungsformen der Erfindung
  • 3.1 Definitionen
  • 3.1.1 Östrogenrezeptor
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Östrogenrezeptor" soll jedes beliebige Protein in der Genfamilie der nukleären Rezeptoren bezeichnen, das Östrogen bindet, mit Einschluss, jedoch ohne Einschränkung darauf, von allen beliebigen Isoformen oder Deletionsmutationen mit den eben beschriebenen charakteristischen Eigenschaften. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung einen Östrogenrezeptor bzw. Östrogenrezeptoren für Menschen und nicht-humane Säugetiere (z.B. für die Tiere von veterinärem Interesse, wie Pferde, Kühe, Schafe und Schweine, sowie Haustiere, beispielsweise Katzen und Hunde). Die in der vorliegenden Erfindung eingeschlossenen humanen Östrogenrezeptoren schließen die α- und β-Isoformen (hierin als „ERα und „ERβ" bezeichnet) zusätzlich zu allen beliebigen weiteren Isoformen, wie es dem Fachmann auf dem Gebiet der Biochemie geläufig ist, ein.
  • 3.1.2 Östrogenrezeptomodulator
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Östrogenrezeptormodulator" soll eine Verbindung bezeichnen, die als ein Östrogenrezeptoragonist oder als Antagonist eines Östrogenrezeptors mit einem IC50- oder EC50-Wert bezüglich ERα und/oder ERβ von nicht mehr als etwa 10 μM, bestimmt unter Verwendung des nachstehend beschriebenen (Abschnitt 4.2.2.3) ERα- und/oder ERβ-Transaktivierungsassays, wirken kann. Genauer gesagt haben erfindungsgemäße Östrogenrezeptormodulatoren IC50- oder EC50-Werte (als Agonisten oder Antagonisten) von nicht mehr als etwa 5 μM. Es ist gefunden worden, dass repräsentative Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung eine agonistische oder antagonistische Aktivität gegenüber einem Östrogenrezeptor zeigen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben vorzugsweise einen antagonistischen oder agonistischen IC50- oder EC50-Wert bezüglich ERα und/oder ERβ von nicht mehr als etwa 5 μM, mehr bevorzugt von nicht mehr als etwa 500 nM, noch mehr bevorzugt von nicht mehr als etwa 1 nM und am meisten bevorzugt von nicht mehr als etwa 500 pM, gemessen durch ERα- und/oder ERβ-Transaktivierungsassays. Unter der Bezeichnung „IC50" soll die Konzentration des Inhibitors verstanden werden, die die Aktivität eines Targets (z.B. ERα oder ERβ) auf den Halb-Maximalwert verringert. Die Bezeichnung „EC50" ist die Konzentration des Modulators, der den Halb-Maximaleffekt erzeugt.
  • 3.1.3 Selektiver Östrogenrezeptormodulator
  • Ein „selektiver Östrogenrezeptormodulator" (oder „SERM") ist eine Verbindung, die eine Aktivität als Agonist oder als Antagonist eines Östrogenrezeptors (z.B. ERα oder ERβ) in gewebeabhängiger Weise zeigt. Für den Fachmann auf dem Gebiet der Biochemie und der Endokrinologie wird daher ersichtlich, dass erfindungsgemäße Verbindungen, die als SERMs wirken, als Östrogenrezeptoragonisten in einigen Geweben (z.B. Knochen, Hirn und/oder Herz) und als Antagonisten in anderen Gewebetypen, beispielsweise in Brustgewebe und/oder der Uterusauskleidung, wirken können.
  • 3.1.4 Gegebenenfalls substituiert
  • „Gegebenenfalls substituiert" bedeutet den Ersatz eines Wasserstoffatoms durch einen einwertigen oder mehrwertigen Rest. Geeignete Substitutionsgruppen schließen z.B. die Gruppen Hydroxyl, Nitro, Amino, Imino, Cyano, Halogen, Thio, Thioamido, Amidino, Oxo, Oxamidino, Methoxamidino, Imidino, Guanidino, Sulfonamido, Carboxyl, Formyl, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkoxy, Halogenniederalkoxy, Niederalkoxyalkyl, Alkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Aralkylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Heteroarlkylcarbonyl, Alkylthio, Aminoalkyl, Cyanoalkyl und dergleichen ein. Die Substitutionsgruppe selbst kann ebenfalls substituiert sein. Die Substitutionsgruppe auf der Substitutionsgruppe kann z.B. die Gruppe Carboxyl, Halogen; Nitro, Amino, Cyano, Hydroxyl, Niederalkyl, Niederalkoxy, Aminocarbonyl, -SR, Thioamido, -SO3H, -SO2R oder Cycloalkyl sein, wobei R typischerweise für Wasserstoff, Hydroxyl oder Niederalkyl steht. Wenn ein substituierter Substituent eine geradkettige Gruppe einschließt, dann kann die Substitution entweder innerhalb der Kette (z.B. im Falle von 2-Hydroxypropyl, 2-Aminobutyl und dergleichen) oder am Kettenende (z.B. im Falle von 2-Hydroxyethyl, 3-Cyanopropyl und dergleichen) erfolgt sein. Die substituierten Substituenten können geradkettige, verzweigte oder cyclische Anordnungen von covalent gebundenen Kohlenstoff- oder Heteroatomen sein.
  • 3.1.5 Niederalkyl und damit verwandte Bezeichnungen
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Niederalkyl" bedeutet verzweigte oder geradkettige Alkylgruppen, umfassend ein bis zehn Kohlenstoffatome, die unabhängig voneinander unsubstituiert oder substituiert sind, z.B. mit einer oder mehreren Halogen-, Hydroxyl- oder anderen Gruppen. Beispiele für Niederalkylgruppen schließen, jedoch ohne Begrenzung darauf, die Gruppen Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, n-Butyl, t-Butyl, n-Hexyl, Neopentyl, Trifluormethyl, Pentafluorethyl und dergleichen ein.
  • Die Bezeichnung „Alkylenyl" bedeutet einen zweiwertigen geradkettigen oder verzweigten gesättigten aliphatischen Rest mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen. Typische Alkylenylgruppen in den erfindungsgemäß verwendeten Verbindungen sind Niederalkylenylgruppen, die 1 bis etwa 6 Kohlenstoffatome in ihrem Gerüst haben. Die Bezeichnung „Alkenyl" bedeutet hierin geradkettige, verzweigte oder cyclische Reste mit einer oder mit mehreren Doppelbindungen mit 2 bis 20 Kohlenstoffatomen. Die Bezeichnung „Alkinyl" bedeutet hierin geradkettige, verzweigte der cyclische Reste mit einer oder mit mehreren Dreifachbindungen und 2 bis 20 Kohlenstoffatomen.
  • Die Bezeichnung „Halogenniederalkyl" bedeutet einen Niederalkylrest, der mit einem oder mehreren Halogenatomen substituiert ist.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Niederalkoxy" bedeutet die Gruppierung RO-, worin R für Niederalkyl steht. Repräsentative Beispiele für Niederalkoxygruppen schließen die Gruppen Methoxy, Ethoxy, t-Butoxy, Trifluormethoxy und dergleichen ein.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Niederalkylthio" bedeutet die Gruppe RS-, worin R für Niederalkyl steht.
  • Die hierin verwendete Bezeichung „Alkoxyalkyl" bedeutet die Gruppierung -alk1-O-alk2, worin alk1 für Alkylenyl oder Alkenyl steht und alk2 für Alkyl oder Alkenyl steht. Die hierin verwendete Bezeichnung „Niederalkoxyalkyl" bedeutet eine Alkoxyalkylgruppierung, wobei alk1 für Niederalkylenyl oder Niederalkenyl steht und alk2 für Niederalkyl oder Niederalkenyl steht. Die hierin verwendete Bezeichnung „Aryloxyalkyl" bedeutet die Gruppierung -Alkylenyl-O-aryl. Die hierin verwendete Bezeichnung „Aralkoxyalkyl" bedeutet die Gruppe -Alkylenyl-O-aralkyl, wobei Aralkyl eine Niederaralkylgruppe bedeutet.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Cycloalkyl" bedeutet einen mono- oder polycyclischen Niederalkyl-Substituenten. Typische Cycloalkyl-Substituenten haben 3 bis 8 Skelett- (d.h. Ring-)atome, wobei jedes Skelettatom ein gegebenenfalls substituiertes Kohlenstoffatom ist. Bei Verwendung im Zusammenhang mit Cycloalkyl-Substituenten bedeutet die hierin verwendete Bezeichnung „polycyclisch" kondensierte, nicht-kondensierte cyclische Kohlenstoffstrukturen und Spirocyclen. Beispiele für Cycloalkylgruppen schließen, jedoch ohne Einschränkung darauf, die Gruppen Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl, Adamantyl, Bornyl, Norbornyl und dergleichen ein.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Cycloheteroalkyl" bezeichnet Cycloalkyl-Substituenten, die 1 bis 5, typischer 1 bis 4, Heteroatome (d.h. Nicht-Kohlenstoffatome, wie Stickstoff-, Schwefel- und Sauerstoffatome) in der Ringstruktur haben, wobei die restlichen Atome im Ring gegebenenfalls substituierte Kohlenstoffatome sind. Repräsentative Heterocycloalkylgruppierungen schließen z.B. die Gruppen Morpholino, Piperazinyl, Piperidinyl, Pyrrolidinyl, Methylpyrrolidinyl, Pyrrolidinon-yl und dergleichen ein.
  • Die hierin verwendeten Bezeichnungen „(Cycloalkyl)alkyl" und „(Cycloheteroalkyl)alkyl" bedeuten Alkylketten, die mit Cycloalkyl- bzw. Cycloheteroalkylgruppen substituiert sind.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Halogenalkoxy" bedeutet einen Alkoxyrest, der mit einem oder mit mehreren Halogenatomen substituiert ist. Die hierin verwendete Bezeichnung „Halogenniederalkoxy" bedeutet einen Niederalkoxyrest, der mit einem oder mit mehreren Halogenatomen substituiert ist.
  • 3.1.6 Halogen
  • Unter der hierin verwendeten Bezeichnung „Halogen" soll ein Halogenrest, wie beispielsweise von Fluor, Chlor, Brom oder Iod, verstanden werden.
  • 3.1.7 Aryl und damit verwandte Bezeichnungen
  • Die Bezeichnung „Aryl" bedeutet monocyclische und polycyclische aromatische Gruppen oder kondensierte Ringsysteme mit mindestens einem aromatischen Ring und 3 bis 14 Gerüst-Kohlenstoffatomen. Beispiele für Arylgruppen schließen ohne Einschränkung darauf die Gruppen Phenyl, Naphthyl, Dihydronaphthyl, Tetrahydronaphthyl und dergleichen ein.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Aralkyl" bedeutet eine Alkylgruppe, die mit einer Arylgruppe substituiert ist. Typische Aralkylgruppen in den erfindungsgemäßen Verbindungen haben 1 bis 6 Kohlenstoffatome, die in den Alkylteil der Aralkylgruppe eingebaut sind. Geeignete Aralkylgruppen in den erfindungsgemäßen Verbindungen schließen z.B. die Gruppen Benzyl, Picolyl und dergleichen ein.
  • 3.1.8 Heteroaryl und damit verwandte Bezeichnungen
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Heteroaryl" bedeutet Arylgruppen mit einem bis vier Heteroatomen als Ringatome in einem aromatischen Ring, wobei der Rest der Ringatome aromatische oder nicht-aromatische Kohlenstoffatome sind. Bei Verwendung im Zusammenhang mit Arylsubstituenten bedeutet die hierin verwendete Bezeichnung „polycyclisch" kondensierte und nicht-kondensierte cyclische Strukturen, bei denen mindestens eine cyclische Struktur aromatisch ist. Beispiele hierfür sind die Gruppen Benzodioxozolo, Naphthyl und dergleichen. Beispielhafte Heteroarylgruppierungen, die als Substituenten in den erfindungsgemäßen Verbindungen enthalten sind, schließen die Gruppen Pyridyl, Pyrimidinyl, Thiazolyl, Indolyl, Imidazolyl, Oxadiazolyl, Tetrazolyl, Pyrazinyl, Triazolyl, Thiophenyl, Furanyl, Chinolinyl, Purinyl, Benzothiazolyl, Benzopyridyl und Benzimidazolyl und dergleichen ein.
  • 3.1.9 Amino und damit verwandte Bezeichnungen
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Amino" bedeutet die Gruppe -NH2. Die hierin verwendete Bezeichnung „Niederalkylamino" bedeutet die Gruppe -NRR', wobei R und R' jeweils unabhängig voneinander aus Wasserstoff oder Niederalkyl ausgewählt werden. Die hierin verwendete Bezeichnung „Arylamino" bedeutet die Gruppe -NRR', wobei R für Aryl steht und R' für Wasserstoff, Niederalkyl, Aryl oder Aralkyl steht. Die hierin verwendete Bezeichnung „Aralkylamino" bedeutet die Gruppe -NRR', wobei R für Aralkyl steht und R' für Wasserstoff, Niederalkyl, Aryl oder Aralkyl steht. Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Heteroarylamino und Heteroaralkylaminocarbonyl" werden in Analogie zu den Gruppierungen Arylamino und Aralkylamino definiert.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Aminocarbonyl" bedeutet die Gruppe -C(O)-NH2. Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Niederalkylaminocarbonyl", „Arylaminocarbonyl", „Aralkylaminocarbonyl", „Heteroarylaminocarbonyl" und „Heteroaralkylaminocarbonyl" bedeuten die Gruppierung -C(O)NRR', wobei R und R' unabhängig voneinander für Wasserstoff und gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Aralkyl, Heteroaryl bzw. Heteroaralkyl in Analogie zu den entsprechenden oben angegebenen Bezeichnungen stehen.
  • 3.1.10 Thio, Sulfonyl, Sulfinyl und damit verwandte Bezeichnungen
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Thio" bedeutet die Gruppe-SH. Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Niederalkylthio", „Arylthio", „Heteroarylthio" „Cycloalkylthio", „Cycloheteroalkylthio" „Aralkylthio", „Heteroaralkylthio" „(Cycloalkyl)alkylthio" und „(Cycloheteroalkyl)alkylthio" bedeuten die Gruppierung -SR, wobei R für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, Aralkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl steht.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Sulfonyl" bedeutet die Gruppierung -SO2-. Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Niederalkylsulfonyl" „Arylsulfonyl", „Heteroarylsulfonyl", „Cycloalkylsulfonyl", „Cycloheteroalkylsulfonyl" „Aralkylsulfonyl", „Heteroaralkylsulfonyl" „(Cycloalkyl)alkylsulfonyl" und „(Cycloheteroalkyl)alkylsulfonyl" bedeuten die Gruppierung -SO2R, wobei R für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, Aralkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl steht.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Sulfinyl" bedeutet die Gruppierung -SO-, Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Niederalkylsulfinyl", „Arylsulfinyl", „Heteroarylsulfinyl", „Cycloalkylsulfinyl", „Cycloheteroalkylsulfinyl", „Aralkylsulfinyl", „Heteroaralkylsulfinyl", „(Cycloalkyl)alkylsulfinyl" und „(Cycloheteroalkyl)alkylsulfinyl" bedeuten die Gruppierung -SOR, wobei R für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cyloheteroalkyl, Aralkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl steht.
  • 3.1.11 Formyl, Carboxyl, Carbonyl, Thiocarbonyl und damit verwandte Bezeichnungen
  • Die Bezeichnung „Formyl" bedeutet die Gruppierung -C(O)H.
  • Die Bezeichnung „Carboxyl" bedeutet die Gruppierung -C(O)OH.
  • Die Bezeichnung „Carbonyl" bedeutet die zweiwertige Gruppierung -C(O)-. Die Bezeichnungen „Niederalkylcarbonyl", „Arylcarbonyl", „Heteroarylcarbonyl", „Cycloalkylcarbonyl", „Cycloheteroalkylcarbonyl", „Aralkylcarbonyl", „Heteroaralkylcarbonyl" „(Cycloalkyl)alkylcarbonyl" und „(Cycloheteroalkyl)alkylcarbonyl" bezeichnen die Grupppierung -C(O)R, worin R für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, Aralkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl steht.
  • Die Bezeichnung „Thiocarbonyl" bedeutet die Gruppierung -C(S)-. Die Bezeichnungen „Niederalkylthiocarbonyl", „Arylthiocarbonyl", „Heteroarylthiocarbonyl" „Cycloalkylthiocarbonyl" „Cycloheteroalkylthiocarbonyl"; „Aralkylthiocarbonyloxythiocarbonyl" „Heteroaralkylthiocarbonyl", „(Cycloalkyl)alkylthiocarbonyl" und „(Cycloheteroalkyl)alkylthiocarbonyl" bedeuten die Gruppierung -C(S)R, wobei R für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, Aralkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl steht.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Carbonyloxy" bedeutet allgemein die Gruppieurng -C(O)-O-. Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Niederalkylcarbonyloxy", „Arylcarbonyloxy", „Heteroarylcarbonyloxy", „Cycloalkylcarbonyloxy", „Cycloheteroalkylcarbonyloxy", „(Cycloheteroalkyl)alkylcarbonyloxy" bedeuten die Gruppierung -C(O)OR, wobei R für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, Aralkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl steht.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Oxycarbonyl" bedeutet die Gruppierung -O-C(O)-. Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Niederalkyloxycarbonyl" „Aryloxycarbonyl", „Heteroaryloxycarbonyl", „Cycloalkyloxycarbonyl", „Cycloheteroalkyloxycarbonyl", „Aralkyloxycarbonyloxyoxycarbonyl", „Heteroaralkyloxycarbonyl", „(Cycloalkyl)alkyloxycarbonyl", „(Cycloheteroalkyl)alkyloxycarbonyl" bedeuten die Gruppierung -O-C(O)R, worin R für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, Aralkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl steht.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Carbonylamino" bedeutet die Gruppierung -NH-C(O)-. Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Niederalkylcarbonylamino", „Arylcarbonylamino", „Heteroarylcarbonylamino", „Cycloalkylcarbonylamino", „Cycloheteroalkylcarbonylamino", „Aralkylcarbonylamino", „Heteroaralkylcarbonylamino", „(Cycloalkyl)alkylcarbonylamino" und „(Cycloheteroalkyl)alkylcarbonylamino" bedeuten die Gruppierung -NH-C(O)R, wobei R für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, Aralkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl steht. Weiterhin schließt die vorliegende Erfindung N-substituierte Carbonylaminoreste (-NR'C(O)R) ein, wobei R' für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Aralkyl oder Heteroaralkyl steht und R die vorstehend angegebene Definition beibehält.
  • Die Bezeichnung „Carbonylthio" bedeutet die Gruppierung -C(O)-S-. Die Bezeichnungen „Niederalkylcarbonylthio", „Arylcarbonylthio", „Heteroarylcarbonylthio", „Cycloalkylcarbonylthio", „Cycloheteroalkylcarbonylthio", „Aralkylcarbonylthio", „Heteroaralkylcarbonylthio", „(Cycloalkyl)alkylcarbonylthio" „(Cycloheteroalkyl)alkylcarbonylthio" bedeuten die Gruppierung -C(O)SR, wobei R für gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, Aralkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl steht.
  • 3.1.12 Guanidino oder Guanidyl
  • Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Guanidino" oder „Guanidyl" bedeuten Gruppierungen, die sich von Guanidin, H2N-C(=NH)-NH2 ableiten. Derartige Gruppierungen schließen diejenigen, die an das Stickstoffatom, das die Formal-Doppelbindung (die „2"-Position des Guanidins, z.B. im Falle von Diaminomethylenamino, (H2N)2C=NH-), trägt, und diejenigen ein, die an einem der Stickstoffatome, das die Formal-Einfachbindung trägt (d.h. den „1"- und/oder „3"-Positionen des Guanidins, z.B. im Falle von H2N-C(=NH)-NH-), gebunden sind, ein. Die Wasserstoffatome an jedem Stickstoffatom können durch einen geeigneten Substituenten, wie Niederalkyl, Aryl oder Niederaralkyl ersetzt sein.
  • 3.1.13 Amidino
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Amidino" bedeutet die Gruppierungen R-C(=N)-NR'- (wobei sich der Rest an dem „N1"-Stickstoffatom befindet) und R(NR')C=N- (wobei sich der Rest an dem „N2"-Stickstoffatom befindet), wobei R und R' für Wasserstoff, Niederalkyl, Aryl oder Niederaralkyl stehen können.
  • 3.1.14 Imino und Oximino
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Imino" bedeutet die Gruppierung -C(=NR)-, wobei R für Wasserstoff oder gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl bzw. Heteroaralkyl stehen kann. Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Iminoniederalkyl", „Iminocycloalkyl", „Iminocycloheteroalkyl", „Iminoaralkyl", „Iminoheteroaralkyl" „(Cycloalkyl)iminoalkyl", „(Cycloiminoalkyl)alkyl", „(Cycloiminoheteroalkyl)alkyl" und „(Cycloheteroalkyl)iminoalkyl" bedeuten gegebenenfalls substituierte Niederalkyl-, Cycloalkyl-, Cycloheteroalkyl-, Aralkyl-, Heteroaralkyl-, (Cycloalkyl)akyl- bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl-Gruppen, die eine Iminogruppe einschließen.
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Oximino" bedeutet die Gruppierung -C(=NOR)-, wobei R für Wasserstoff („Hydroximino") oder gegebenenfalls substituiertes Niederalkyl, Aryl, Heteroaryl bzw. Heteroaralkyl stehen kann. Die hierin verwendeten Bezeichnungen „Oximinoniederalkyl", „Oximinocycloalkyl", „Oximinocycloheteroalkyl", „Oximinoaralkyl", „Oximinoheteroaralkyl", „(Cycloalkyl)oximinoalkyl", „(Cyclooximinoalkyl)alkyl", „(Cyclooximinoheteroalkyl)alkyl" und „(Cycloheteroalkyl)oximinoalkyl" bedeuten gegebenenfalls substituierte Niederalkyl-, Cycloalkyl-, Cycloheteroalkyl-, Aralkyl-, Heteroaralkyl-, (Cycloalkyl)alkyl- bzw. (Cycloheteroalkyl)alkyl-Gruppen, die eine Oximinogruppe einschließen.
  • 3.1.15 Methylen und Methin
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Methylen" bedeutet ein unsubstituiertes, monosubstituiertes oder disubstituiertes Kohlenstoffatom mit einer Formal-sp3-Hybridisierung (d.h. -CRR'-, wobei R und R' für Wasserstoff oder unabhängige Substituenten stehen).
  • Die hierin verwendete Bezeichnung „Methin" bedeutet ein unsubstituiertes oder ein Kohlenstoffatom mit einer Formal-sp2-Hybridisierung (d.h. -CR= oder =CR-, wobei R für Wasserstoff oder einen Substituenten steht).
  • 3.2 Erfindungsgemäße Verbindungen
  • Die vorliegende Erfindung stellt Verbindungen zur Verfügung, die verwertbare Agonisten- und/oder Antagonisten-Aktivität bezüglich Säugetier-Östrogenrezeptoren haben. Weiterhin werden erfindungsgemäß Verbindungen und pharmazeutische Zusammensetzungen zur Verfügung gestellt, die für die Behandlung von Östrogenrezeptor-vermittelten Störungen in Säugetieren geeignet sind. Insbesondere ist festgestellt worden, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen einen überraschenden Aktivitätsgrad gegenüber den α- und β-Isoformen des Human-Östrogenrezeptors haben. Daher haben die hierin beschriebenen Verbindungen und pharmazeutischen Zusammensetzungen eine Verwendbarkeit für die Prävention und/oder Behandlung einer weiten Vielzahl von Östrogenrezeptor-vermittelten Störungen mit Einschluss, jedoch ohne Einschränkung darauf, von Osteoporose, Brustkrebs, Uteruskrebs und kongestiver Herzerkrankung.
  • Gemäß einer ersten Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung Verbindungen mit der Struktur (Verbindung 1):
    Figure 00150001
    Verbindung 1 und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze zur Verfügung. X1 und X2 werden unabhängig aus der Gruppe, bestehend aus Stickstoff und Sauerstoff, so ausgewählt, dass, wenn eines von X1 und X2 Stickstoff ist, dann das andere von X1 und X2 Sauerstoff ist, um hierdurch eine Isoxazol-Ringstruktur zu bilden. Die oben gezeigte generische Struktur umfasst daher die folgenden Regioisomeren:
    Figure 00150002
    je nach den Identitäten der Gruppierungen X1 und X2.
    R1 ist Phenyl, substituiert mit einer 4-Hydroxygruppe und gegebenenfalls mit einer Gruppe, ausgewählt aus Halogen, Nitro, Cyano, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkyloxy, Halogenniederalkyloxy, Carboxy, Niederalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, (Cycloniederalkyl)oxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, Heteroaryloxycarbonyl, Heteroaralkyloxycarbonyl, (Heterocycloniederalkyl)oxycarbonyl, Niederalkylsulfinyl, Niederalkylsulfonyl, Niederalkylthio, Arylthio, Niederalkylcarbonyloxy, Arylcarbonyloxy, Aralkylcarbonyloxy, Heteroarylcarbonyloxy, Heteroaralkylcarbonyloxy, (Cycloniederalkyl)carbonyloxy, Alkylsulfonylamino, (Heterocycloniederalkyl)carbonyloxy, Aminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl und Heteroaralkylaminocarbonyl, weiter substituiert.
    R3 ist Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, (Monoaryl)alkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl oder (Cycloheteroalkyl)alkyl, unsubstituiert oder substituiert mit einer Gruppe, ausgewählt aus Hydroxyl, Nitro, Amino, Imino, Cyano, Halogen, Thio, Thioamido, Amidino, Oxo, Oxamidino, Methoxamidino, Imidino, Guanidino, Sulfonamido, Carboxyl, Formyl, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkoxy, Halogenniederalkoxy, Niederalkoxyalkyl, Alkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Aralkylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Heteroaralkylcarbonyl, Alkylthio, Aminoalkyl und Cyanoalkyl, wobei, wenn R3 Aryl oder (Monoaryl)alkyl ist, die Substituenten zusätzlich aus Aryloxy und Arylthio ausgewählt werden können, wobei beliebige dieser Substituenten mit Carboxyl, Halogen, Nitro, Amino, Cyano, Hydroxyl, Niederalkyl, Niederalkoxy, Aminocarbonyl, -SR, Thioamido, -SO3H, -SO2R oder Cycloalkyl, wobei R für Wasserstoff Hydroxyl oder Niederalkyl steht, weiter substituiert sein können; und wobei
    R2 aus der Gruppe, bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Thio, Amino, Carboxyl, Formyl, substituiertem Aryl und unsubstituiertem oder substituiertem Aralkyl, Heteroaryl, Heteroaralkyl, Alkenyl, Niederalkyl, Niederalkylcarbonyloxy, Arylcarbonyloxy, Heteroarylcarbonyloxy, Cycloalkylcarbonyloxy, Cycloheteroalkylcarbonyloxy, Aralkylcarbonyloxy, Heteroaralkylcarbonyloxy, (Cycloalkyl)alkylcarbonyloxy, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonyloxy, Niederalkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Cycloalkylcarbonyl, Cycloheteroalkylcarbonyl, Aralkylcarbonyl, Heteroaralkylcarbonyl, (Cycloalkyl)alkylcarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl, Heteroaralkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, (Cycloalkyl)alkylaminocarbonyl, Cycloheteroalkylaminocarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylaminocarbonyl, Niederalkylcarbonylamino, Arylcarbonylamino, Heteroarylcarbonylamino, Cycloalkylcarbonylamino, Cycloheteroalkylcarbonylamino, Aralkylcarbonylamino, Heteroaralkylcarbonylamino, (Cycloalkyl)alkylcarbonylamino, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonylamino, Niederalkylamino, Arylamino, Aralkylamino, Heteroarylamino, Heteroaralkylamino, Niederalkylsulfonyl, Arylsulfonyl, Heteroarylsulfonyl, Cylcoalkylsulfonyl, Cycloheteroalkylsulfonyl, Aralkylsulfonyl, Heteroaralkylsulfonyl, (Cycloalkyl)alkylsulfonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylsulfonyl, Niederalkylsulfinyl, Arylsulfinyl, Heteroarylsulfinyl, Cycloalkylsulfinyl, Cycloheteroalkylsulfinyl, Aralkylsulfinyl, Heteroaralkylsulfinyl, (Cycloalkyl)alkylsulfinyl, (Cycloheteroalkyl)alkylsulfinyl, Niederalkyloxy, Aryloxy, Heteroaryloxy, Cycloalkyloxy, Cycloheteroalkyloxy, Aralkyloxy, Heteroaralkyloxy, (Cycloalkyl)alkyloxy, (Cycloheteroalkyl)alkyloxy, Niederalkylthio, Arylthio, Heteroarylthio, Cycloalkylthio, Cycloheteroalkylthio, Aralkylthio, Heteroaralkylthio, (Cycloalkyl)alkylthio, (Cycloheteroalkyl)alkylthio, Niederalkylthiocarbonyl, Arylthiocarbonyl, Heteroarylthiocarbonyl, Cycloalkylthiocarbonyl, Cycloheteroalkylthiocarbonyl, Aralkylthiocarbonyloxythiocarbonyl, Heteroaralkylthiocarbonyl, (Cycloalkyl)alkylthiocarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylthiocarbonyl, Heteroarylcarbonylthio, Cycloalkylcarbonylthio, Cycloheteroalkylcarbonylthio, Aralkylcarbonylthiooxycarbonylthio, Heteroaralkylcarbonylthio, (Cycloalkyl)alkylcarbonylthio, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonylthio, Niederalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, Heteroaryloxycarbonyl, Cycloalkyloxycarbonyl, Cycloheteroalkyloxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, Heteroaralkyloxycarbonyl, (Cycloalkyl)alkyloxycarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkyloxycarbonyl, Iminoniederalkyl, Iminocycloalkyl, Iminocycloheteroalkyl, Iminoaralkyl, Iminoheteroaralkyl, (Cycloalkyl)iminoalkyl, (Cycloheteroalkyl)iminoalkyl, (Cycloiminoalkyl)alkyl, (Cycloiminoheteroalkyl)alkyl, Oximinoniederalkyl, Oximinocycloalkyl, Oximinocycloheteroalkyl, Oximinoaralkyl, Oximinoheteroaralkyl, (Cycloalkyl)oximinoalkyl, (Cyclooximinoalkyl)alkyl, (Cyclooximinoheteroalkyl)alkyl, (Cycloheteroalkyl)oximinoalkyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenyl, Diniederalkylaminoniederalkyloxyphenyl, (Cycloamino niederalkyl)niederalkyloxyphenyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl und Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl, ausgewählt ist, wobei, wenn die genannte Gruppe substituiert ist, die Substituenten aus Hydroxyl, Nitro, Amino, Imino, Cyano, Halogen, Thio, Thioamido, Amidino, Oxo, Oxamidino, Methoxamidino, Imidino, Guanidino, Sulfonamido, Carboxyl, Formyl, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkoxy, Halogenniederalkoxy, Niederalkoxyalkyl, Alkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Aralkylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Heteroaralkylcarbonyl, Alkylthio, Aminoalkyl und Cyanoalkyl ausgewählt sind, wobei diese Substituenten weiter mit Carboxyl, Halogen, Nitro, Amino, Cyano, Hydroxyl, Niederalkyl, Niederalkoxy, Aminocarbonyl, -SR, Thioamido, -SO3H, -SO2R oder Cycloalkyl substituiert sein können, worin R Wasserstoff, Hydroxyl oder Niederalkyl ist;
    wobei bei jedem R1, R2 und R3 Aryl monocyclische und polycyclische aromatische Gruppen oder kondensierte Ringsysteme, die mindestens einen aromatischen Ring und 3 bis 14 Skelett-Kohlenstoffatome haben, bedeutet und wobei Heteroaryl monocyclische und polycyclische aromatische Gruppen oder kondensierte Ringsysteme, die mindestens einen aromatischen Ring, 3 bis 14 Skelett-Kohlenstoffatome und 1 bis 4 Heteroatome als Ringatome in einem aromatischen Ring haben, bedeutet;
    und wobei die genannten Niederalkylgruppen 1 bis 10 Kohlenstoffatome haben.
  • Gemäß einer Ausführungsform ist R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, (Cycloalkyl)alkyl und (Cycloheteroalkyl)alkyl, ausgewählt. Beispiele für solche Gruppen schließen, ohne Einschränkung darauf, Cyclohexyl, Piperidinyl, Adamantyl und Chinuclidyl, die jeweils gegebenenfalls substituiert sind, ein. Weitere Beispiele schließen Cyclohexylmethyl, 2-Cyclohexylethyl und Adamantylmethyl, die wiederum jeweils gegebenenfalls substituiert sind, ein. Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Aryl, Heteroaryl, (Monoaryl)alkyl und Heteroaralkyl, ausgewählt. Speziellere Ausführungsformen der Erfindung sind solche, bei denen R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Heteroaryl und Heteroaralkyl, ausgewählt ist, wie z.B. Pyridinyl, Hydroxypyridyl, Methoxypyridyl, Pyridylmethyl und dergleichen.
  • Alternativ wird R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Aryl und (Monoaryl)alkyl, ausgewählt. Gemäß spezielleren Ausführungsformen wird R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Aryl und (Monoaryl)alkyl, ausgewählt und diese Gruppe ist mit mindestens einer Hydroxyl-, Alkyloxy-, Aryloxy, Thio-, Alkylthio- oder Arylthiogruppe substituiert. Weitere noch speziellere Ausführungsformen sind solche, bei denen R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Aryl und (Monoaryl)alkyl, ausgewählt ist und gegebenenfalls mit mindestens einer Hydroxyl-, Alkyloxy-, Aryloxy-, Thio-, Alkylthio- oder Arylthiogruppe substituiert ist, wobei R3 aus der Gruppe, bestehend aus Phenyl und Phenylniederalkyl, ausgewählt ist und wobei die oben gerade angegebenen Substitutionen einge schlossen sind. Beispiele für geeignete Gruppen R3 schließen, ohne Einschränkung darauf, die Gruppen 4-Hydroxyphenyl, Phenylmethyl, 4-Hydroxyphenylmethyl, 3-Hydroxyphenylmethyl, 2-Thio-4-hydroxyphenylmethyl, 2-(4-Hydroxyphenyl)ethyl, 4-Methoxyphenyl, 2-Hydroxyphenyl und 3-(Phenylthio)-4-hydroxyphenyl ein. Gemäß einer weiteren noch spezielleren Ausführungsform schließt die vorliegende Erfindung Verbindungen der für die Verbindung 1 gezeigten Struktur ein, bei welchen R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Aryl und (Monoaryl)alkyl, ausgewählt ist und R1 Phenyl, substituiert mit einer 4-Hydroxygruppe und gegebenenfalls weiter mit einem Substituenten, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Halogen, Nitro, Cyano, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkyloxy, Halogenniederalkyloxy, Carboxy, Niederalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, (Cycloniederalkyl)oxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, Heteroaryloxycarbonyl, Heteroaralkyloxycarbonyl, (Heterocycloniederalkyl)oxycarbonyl, Niederalkylsulfinyl, Niederalkylsulfonyl, Niederalkylthio, Arylthio, Niederalkylcarbonyloxy, Arylcarbonyloxy, Aralkylcarbonyloxy, Heteroarylcarbonyloxy, Heteroaralkylcarbonyloxy, (Cycloniederalkyl)carbonyloxy, Alkylsulfonylamino, (Heterocycloniederalkyl)carbonyloxy, Aminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl und Heteroaralkylaminocarbonyl, substituiert ist. Weitere noch speziellere Ausführungsformen schließen solche, wie eben angegeben, ein, bei denen RI gegebenenfalls mit einem Substituenten, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Halogen, Nitro, Cyano, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkyloxy, Halogenniederalkyloxy, Carboxy, Niederalkylthio, Aminocarbonyl und Niederalkylsulfinyl, weiter substituiert ist. Beispiele für besonders gut geeignete Gruppen R1 dieser Ausführungsform schließen, ohne Einschränkung darauf, die Gruppen 4-Hydroxyphenyl-2-methyl-4-hydroxyphenyl, 2-Aminocarbonyl-4-hydroxyphenyl, 3-Aminocarbonyl-4-hydroxyphenyl, 3-Chlor-4-hydroxyphenyl, 3-n-Hexyl-4-hydroxyphenyl, 3-Ethyl-4-hydroxyphenyl, 2-Methylsulfinyl-4-hydroxyphenyl, 2-Ethyl-4-hydroxyphenyl, 2-Carboxy-4-hydroxyphenyl, 3-Fluor-4-hydroxyphenyl, 2-Iod-4-hydroxyphenyl und 2-n-Butyl-4-hydroxyphenyl ein.
  • Gemäß weiteren Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung schließt die oben angegebene Verbindung 1 Verbindungen ein, bei denen R2 aus der Gruppe, bestehend aus substituiertem Aryl, Halogen und gegebenenfalls substituiertem Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Aralkyl, Heteroaryl, Heteroaralkyl, Arylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Niederalkylcarbonyl, Aminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, (Heterocycloniederalkyl)alkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl, Heteroaralkylaminocarbonyl, (Cycloniederalkyl)aminocarbonyl, Formyl, Amino, Niederalkylamino und Alkenyl, ausgewählt ist. Spezielle Beispiele für diese Ausführungsformen schließen solche ein, bei denen R2 für Halogen steht. Weitere spezielle Beispiele für diese Ausführungsformen sind solche, bei denen R2 aus der Gruppe, bestehend aus substituiertem Phenyl, gegebenenfalls substituiertem Phenylniederalkyl, Hydroxyphenyl, Niederalkyloxyphenyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenyl, Diniederalkylaminoniederalkyloxyphenyl, (Cycloaminoniederalkyl)niederalkyloxyphenyl und (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenyl, ausgewählt ist. Spezielle Beispiele für solche Gruppen schließen die Gruppen Phenylmethyl, 4-Hydroxyphenyl und 2-(Piperidin-1-yl)ethyloxyphenyl ein. Noch weitere spezielle Ausführungsformen sind solche, bei denen R2 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Hydroxyalkyl und Hydroxyphenylniederalkyl, ausgewählt ist.
  • Gemäß weiteren Ausführungsformen der oben angegebenen Verbindung 1 ist R2 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Phenylcarbonyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl, Hydroxyphenylcarbonyl, Halogenphenylcarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Diniederalkylaminocarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Hydroxyphenylniederalkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, Niederalkylphenylcarbonyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl und Nitrophenylcarbonyl, ausgewählt. Beispiele für Substituenten R2 innerhalb dieser Ausführungsform, die verwendbare Eigenschaften haben, schließen, jedoch ohne Einschränkung darauf, die Gruppen 4-(2-Piperidin-1-ylethyloxy)phenylcarbonyl, 4-Hydroxyphenylcarbonyl, (Phenylmethyl)aminocarbonyl, 3-(2-Oxopyrrolidin-1-yl)propylaminocarbonyl, Di-n-butylaminocarbonyl, (4-Hydroxyphenylmethyl)aminocarbonyl, (Pyridin-3-ylmethyl)aminocarbonyl, (Pyridin-2-ylmethyl)aminocarbonyl, Dimethylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, 4-(2-Morpholinoethyloxy)phenylcarbonyl, Cyclopropylaminocarbonyl, Cyclobutylaminocarbonyl, 4-(1-Methylpiperidin-3-ylmethyloxy)phenylcarbonyl, 4-[2-(1-Methylpyrrolidin-2-yl)ethyloxy]phenylcarbonyl, 4-[2-(4-Methylpiperazin-1-yl)ethyloxy]phenylcarbonyl, 4-(1-Methylpiperidin-4-ylmethyloxy)phenylcarbonyl, 2-Chlorphenylcarbonyl, 3-Chlorphenylcarbonyl, 4-Chlorphenylcarbonyl, 3-Nitrophenylcarbonyl, 4-Nitrophenylcarbonyl, 3,4-Dichlorphenylcarbonyl, 4-n-Butylphenylcarbonyl, 3-Hydroxyphenylcarbonyl, 2-Hydroxyphenylcarbonyl, 4-Methoxyphenylcarbonyl, 3-(2-Piperidin-1-ylethyloxy)phenylcarbonyl, 3-[2-(Pyrrolidin-1-yl)ethyloxy]phenylcarbonyl und 3-(1-Methylpiperidin-3-ylmethyloxy)phenylcarbonyl ein.
  • Gemäß weiteren Ausführungsformen schließen Verbindungen, pharmazeutische Zusammensetzungen und Verwendungen, wie sie erfindungsgemäß zur Verfügung gestellt werden, solche Verbindungen bzw. Zusammensetzungen und Verwendungen ein, bei denen die Verbindungen die Struktur der oben angegebenen Verbindung 1 haben, wobei R2 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Phenylcarbonyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl, Hydroxyphenylcarbonyl, Halogenphenylcarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Diniederalkylaminocarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Hydroxyphenylniederalkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, Niederalkylphenylcarbonyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl und Nitrophenylcarbonyl, ausgewählt ist und R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, (Cycloalkyl)alkyl und (Cycloheteroarlkyl)alkyl, ausgewählt ist. Noch weitere Ausführungsformen schließen solche ein, bei denen R2 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Phenylcarbonyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl, Hydroxyphenylcarbonyl, Halo genphenylcarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Diniederalkylaminocarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Hydroxyphenylniederalkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, Niederalkylphenylcarbonyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl und Nitrophenylcarbonyl, ausgewählt ist und R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Aryl, Heteroaryl(monoaryl)alkyl und Heteroaralkyl, ausgewählt ist. Weitere speziellere Ausführungsformen sind solche, bei denen R2 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Phenylcarbonyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl, Hydroxyphenylcarbonyl, Halogenphenylcarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Diniederalkylaminocarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Hydroxyphenylniederalkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, Niederalkylphenylcarbonyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl und Nitrophenylcarbonyl, ausgewählt ist und R3 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Aryl und (Monoaryl)alkyl, ausgewählt ist, R1 Phenyl, substituiert mit einer 4-Hydroxygruppe, gegebenenfalls substituiert mit einem Substituenten, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Halogen, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkyloxy, Halogenniederalkyloxy, Carboxy, Niederalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, (Cycloniederalkyl)oxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, Heteroaryloxycarbonyl, Heteroaralkyloxycarbonyl, (Heterocycloniederalkyl)oxycarbonyl, Niederalkylsulfinyl, Niederalkylsulfonyl, Niederalkylthio, Arylthio, Niederalkylcarbonyloxy, Arylcarbonyloxy, Aralkylcarbonyloxy, Heteroarylcarbonyloxy, Heteroaralkylcarbonyloxy, (Cycloniederalkyl)carbonyloxy, (Heterocycloniederalkyl)carbonyloxy, Aminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl und Heteroaralkylaminocarbonyl, ausgewählt ist. Beispiele für besonders gut geeignete Substituenten sind oben angegeben worden.
  • 3.3 Synthese der Verbindungen gemäß der Erfindung
  • Die erfindungsgemäßen Verbindungen können dadurch synthetisiert werden, dass Techniken und Materialien verwendet werden, die dem Fachmann bekannt sind (Carey und Sundberg 1983; Carey und Sundberg 1983; Greene und Wuts 1991; March 1992). Ausgangsmaterialien für die erfindungsgemäßen Verbindungen können unter Anwendung von Standardtechniken und unter Verwendung von im Handel erhältlichen Vorläufermaterialien, wie sie beispielsweise von den Firmen Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wis.), Sigma Chemical Co. (St. Louis, Mo.), Lancaster Synthesis (Windham, N.H.), Apin Chemicals, Ltd. (New Brunswick, N.J.), Ryan Scientific (Columbia, S.C.), Maybridge (Cornwall, England), Arcos (Pittsburgh, Pa.) und Trans World Chemicals (Rockville, Md.) erhalten werden.
  • Die hierin zur Synthese der erfindungsgemäßen Verbindungen beschriebenen Verfahrensweisen können eine oder mehrere Stufen des Schutzes und der Abspaltung der Schutzgruppe(n) (z.B. die Bildung und Entfernung von Acetalgruppen) (Greene und Wuts 1991) einschließen. Weiterhin können die untenstehend beschriebenen synthetischen Verfahrensweisen verschiedene Reinigungsverfahren einschließen, wie z.B. die Säulenchromatographie, die Flashchromatographie, die Dünnschichtchromatographie („DC"), die Umkristallisation, die Destilla tion, die Hochdruckflüssigkeitschromatographie („HPLC") und dergleichen. Auch können verschiedene Techniken, die auf dem Gebiet der Chemie für die Identifizierung und quantitative Bestimmung von chemischen Reaktionsprodukten gut bekannt sind, wie die Protonen- und Kohlenstoff-13-kernmagnetische Resonanzanalyse (1H und 13C-NMR), die Infrarot- und die Ultraviolett-Spektroskopie („IR" und „UV"), die Röntgenkristallographie und die Elementaranalyse („EA") angewendet werden. Die HPLC und die Massenspektroskopie („MS") kann genauso gut auch für die Identifizierung, die quantitative Bestimmung und die Reinigung verwendet werden.
  • Schema 1 stellt ein allgemeines Schema für die Synthese von Isoxazolen dar.
  • Figure 00210001
    Schema 1
  • Die Stufe A ist eine Kondensation vom Claisen-Typ, bei der X eine Austrittsgruppe, wie -OR (R = Alkyl, Aryl, Aralkyl, Heteroaryl oder Heteroaralkyl) oder Halogen ist. Wenn X gleich -OR und R für Alkyl steht (z.B. X ist Methoxy oder Ethoxy), dann kann die Umsetzung von 1a und 1b zur Herstellung von 1c unter Anwendung von Verfahrensweisen erfolgen, die dem Fachmann auf dem Gebiet der organischen Chemie bekannt sind (Tietze und Eicher 1989). Wenn X Halogen, z.B. Cl, ist, dann umfasst ein typisches Verfahren die Deprotonierung des Ketons 1a mit einer Base, wie Lithiumbis(trimethylsilyl)amid (LiHMDS), gefolgt von der Zugabe von 1b. Geeignete Lösungsmittel für die Durchführung solcher Reaktionen sind dem Fachmann auf dem Gebiet der organischen Chemie vertraut. Beispiele für geeignete Lösungsmittel schließen Lösungsmittel vom Ether-Typ, wie Tetrahydrofuran („THF"), Diethylether (H3CH2COOH2CH3) oder aliphatische und aromatische Kohlenwasserstoff-Lösungsmittel, wie Cyclohexan (C6H12) und Toluol(C7H8), ein. Typische Reaktionstemperaturen liegen im Bereich von –78°C bis +25°C und die Reaktionszeiten liegen im Bereich von 6 Stunden („h") bis 20 h. Die Stufe B ist eine Cycloadditionsreaktion zur Bildung des gewünschten Isoxazols. Bei einer typischen Verfahrensweise wird ein Gemisch aus 1c, zwei Äquivalenten von Hydroxyaminhydrochlorid und drei Äquivalenten von Pyridin in Ethanol über Nacht am Rückfluss erhitzt. Die Entfernung des Lö sungsmittels, gefolgt von einer Extraktion, liefert ein Rohmaterial, das gereinigt werden kann, um die im Wesentlichen reine Verbindung 1d zu erhalten. Wenn R1 und R2 nicht identisch sind, dann wird ein Gemisch von Regioisomeren gebildet. In einigen Fällen müssen die Schutzgruppen entfernt werden, um die Zielverbindung 1e zu erhalten, wie es in Stufe C gezeigt wird. Der Schutz und die Abspaltung der Schutzgruppe(n) hängt bzw. hängen von den chemischen Eigenschaften des Moleküls und seinen funktionellen Gruppen ab. Geeignete Methoden für den Schutz und die Abspaltung der Schutzgruppe(n) sind dem Fachmann auf dem Gebiet der organischen Chemie gut bekannt (Greene und Wuts 1991).
  • Das Schema 2 beschreibt ein alternatives Verfahren für die Synthese der Verbindung 1c von Schema 1.
  • Figure 00220001
    Schema 2
  • Die Stufe A kann unter Anwendung von verschiedenen Methoden durchgeführt werden, mit denen der Fachmann auf dem Gebiet der organischen Chemie vertraut ist. So können beispielsweise mindestens drei gut bekannte Methoden dazu eingesetzt werden, um 2a in 1c umzuwandeln: 1) Deprotonierung von 2a mit einer Base, wie Natriumhydrid (NaH), in einem aprotischen Lösungsmittel, wie Dimethylformamid („DMF") oder THF, gefolgt von einer Reaktion des resultierenden Anions mit einem Elektorphil R3X, wobei X eine Austrittsgruppe, wie Halogen oder MsO, ist; oder 2) die Verbindung 2a wird mit R3X, Kaliumcarbonat und Tetrabutylammoniumbromid in DMF unter Rühren bei Raumtemperatur – 100°C über einen Zeitraum von 6 bis 24 h zur Umsetzung gebracht. Wenn R3 für Paraalkyloxyphenyl steht, dann kann ein Plumbat-Verfahren zur Anwendung kommen (Craig, Holder et al. 1979; Pinhey, Holder et al. 1979).
  • Die regiospezifische Synthese von erfindungsgemäßen Isoxazolen kann unter Anwendung von bekannten Methoden durchgeführt werden. Ein Beispiel für ein derartiges Verfahren ist im untenstehenden Schema 3 (Perkins, Beam et al.) gezeigt.
  • Figure 00220002
    Schema 3
  • Das Schema 4 beschreibt eine alternative Methode für die Synthese der Verbindung 1d von Schema 1.
  • Figure 00230001
    Schema 4
  • Die Bildung der Isoxazole 4a aus dem 1,3-Diketon 2a (Stufe A) kann unter Anwendung von Stufe B von Schema 1 durchgeführt werden. Die Bromierung von Isoxazol 4a (Stufe B) kann durch Zugabe von Brom in Chloroformlösung zu einer Lösung von 4a bei Temperaturen von Raumtemperatur – 55°C über einen Zeitraum zwischen 0,5 bis 2 h erzielt werden, um das 4-Bromisoxazol 4b zu bilden. Es kann eine Vielzahl von Substituenten an dem R3 in das 4-Bromisoxazol 4b eingeführt werden, um das gewünschte Produkt 1d zu bilden (Stufe C). Dies wird für den Fachmann auf dem Gebiet der organischen Chemie ersichtlich. Beispielsweise kann ein Metall-Halogen-Austausch, gefolgt von einem Abfangen des resultierenden Isoxazolanions mit einem Elektrophil, dazu angewendet werden, um R3 anzuheften. Dies kann beispielsweise durch Umsetzung von Bromisoxazol 4b in THF-Lösung bei –78°C mit n-BuLi geschehen. Das Gemisch wird 1 h lang bei –78°C gerührt. Das gewünschte Elektrophil entsprechend R3 wird dann zugegeben und das Reaktionsgemisch wird auf 0°C bis Raumtemperatur über einen Zeitraum zwischen 2 bis 16 h erwärmt. Geeignete Elektrophile schließen, jedoch ohne Einschränkung darauf, die Folgenden ein: Alkylhalogenide, Disulfide, Iod, N-Chlorsuccinimid, Tosylnitril, Ethylchloroformiat, Säurechloride, Kohlendioxid, Dimethylformamid, Aldehyde, Weinreb-Amide und Sulfonylchloride.
  • Alternativ kann ein 4-Carboxyisoxazol (d.h. R3 = -CO2 –) erhalten werden, wenn Kohlendioxid als Elektrophil eingesetzt wird. Die Carbonsäure kann weiter in verschiedene Ester, Amide und Ketone umgewandelt werden. Um ein Amid an R3 zu bilden, können typische Bildungsbedingungen für Amidbindungen angewendet werden. So kann z.B. die entsprechende Carbonsäure mit 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimid („EDC")-HCl-Salz, 1-Hydroxybenzotriazol („HOBt") und Hünigscher Base aktiviert werden und mit einem primären oder sekundären Amin in THF oder DMF vermischt werden. Die Reaktion ist nach 6 bis 16 h bei Raumtemperatur beendet. Es kann auch eine Suzuki-Kupplungsreaktion angewendet werden, um Aryl- und Alkenylgruppierungen an R3 einzuführen (Miyaura, Author et al. 1979; Miyaura und Suzuki 1979). Die Ullmann-Reaktion kann dazu verwendet werden, um Aryloxygruppen an R3 einzu führen (Knight; Semmelhack, Author et al.). Gruppierungen mit C-N- und C-O-Bindungen an der 4-Position des Isoxazols 4b können erhalten werden, indem durch Palladium katalysierte Kupplungsreaktionen angewendet werden (Palucki, Wolfe et al. 1996; Wolfe und Buchwald 1996; Wolfe, Wagaw et al. 1996).
  • Schema 5 illustriert speziellere Modifikationen an der 4-Position des Isoxazols.
  • Figure 00240001
    Schema 5
  • Das Ausgangsmaterial 5a kann nach den oben beschriebenen Methoden synthetisiert werden. Der Linker Z kann -CH2-, -O-, -S-, -SO2, -NR'R''-, -(C=O)-, -(C=NOR)- sein oder die Arylgruppe kann direkt an dem Isoxazolkern angefügt sein. Im obigen Schema bedeutet R3 eine Phenolschutzgruppe, die selektiv entfernt werden kann (Greene and Wuts 1991), wie es in Stufe A gezeigt wird. Die freie Hydroxylgruppe kann unter Verwendung von bekannten Methoden und Materialien derivatisiert werden (Stufe B). Jedoch können auch andere geeignete Gruppen, wie z.B., jedoch ohne Einschränkung darauf, Thiole, geschützte Thiole, Amine und dergleichen, unter Verwendung von analogen Verfahrensweisen synthetisiert werden. Eine spezielle Verfahrensweise wird im Zusammenhang mit dem untenstehenden Schema 6 bschrieben. In diesem steht Z für -SO2- oder -(C=O)- und Y steht für O, S oder N. Der Index kann 1, 2 oder 3 sein und R4 steht für -NR'R'' oder -N(R')((C=O)R''. Gemäß einem Beispiel wurde Natriumhydrid mit HY(CH2)nR4 vermischt, um das Nucleophil zu erzeugen, und zu 6a in THF- oder DMF-Lösung bei einer Temperatur zwischen Raumtemperatur und 60°C gegeben. Die Reaktion war nach 2 bis 8 h beendet.
  • Figure 00240002
    Schema 6
  • Spezielle Modifikationen an der 5-Position des Isoxazols können unter Anwendung der Verfahrensweisen, wie im untenstehenden Schema 7 beschrieben, durchgeführt werden:
    Figure 00250001
    Schema 7 darin steht E für Alkyl, Aryl, Aralkyl, Halogen, Cyano, Amido, Carboxy, Sulfid und Sulfoxid. Das Ausgangsmaterial 7a kann nach den oben beschriebenen Methoden synthetisiert werden. Die funktionelle Gruppe E wird unter Anwendung der in Stufe C des obigen Schema 4 beschriebenen Methoden eingeführt werden. Modifikationen an der 4-Position des Isoxazols können beispielsweise unter Anwendung der Methoden durchgeführt werden, wie sie im Zusammenhang mit Schema 8 beschrieben werden.
  • Figure 00250002
    Schema 8
  • Das Ausgangsmaterial 8a wurde nach den in Schema 1 beschriebenen Methoden synthetisiert. Die Bromierung an der Methylposition wurde unter Verwendung von N-Bromsuccinimid in Tetrachlorkohlenstoff durchgeführt. Die Alkylierung zur Bildung von Derivaten von 8c, bei denen R4 für -OR, -SR oder -NRR' steht, kann mit einem geeigneten Nucleophil in einem geeigneten Lösungsmittel (d.h. DMF oder THF) bei Temperaturen im Bereich zwischen Raumtemperatur und 100°C durchgeführt werden.
  • Die oben beschriebenen Verfahrensweisen können auch auf entsprechende Festphasen-Verfahrensweisen angewendet werden. Im Einzelfall hängt die tatsächliche Verfahrensweise naturgemäß von Details der gewünschten Produkte und Ausgangsmaterialien ab. Ein Beispiel für eine geeignete Verfahrensweise, wobei R1 für Hydroxyphenyl steht, ist in Schema 9 gezeigt.
  • Figure 00260001
    Schema 9
  • In der Stufe A wird handelsübliches hydroxyliertes Rink-Harz (Firma Calbiochem, La Jolla, CA) mit Mesylchlorid und Hünigscher Base in Methylenchlorid (CH2Cl2) bei 0°C unter Erwärmen auf Raumtemperatur über einen Zeitraum von zwei Stunden umgesetzt. Als nächstes werden 4-Hydroxyacetophenon und Hünigsche Base mit dem Harzprodukt in Methylenchlorid über Nacht bei Raumtemperatur umgesetzt, wodurch das Harz-gebundene Keton 9a erhalten wird. Die Umsetzung des gebundenen Ketons mit einem Ester, der den R3-Substituenten trägt (R3CO2R) und einer Base (z.B. Kalium-tert.-butoxid, t-BuOK und Dibenzo-18-krone-6) in einem geeigneten Lösungsmittel (z.B. THF) bei 70°C über einen Zeitraum von sechs Stunden (Stufe B) liefert das Diketon 9b. Die Deprotonierung von 9b unter Verwendung von beispielsweise tert.-Butylammoniumiodid („TBAI") unter milden Bedingungen (über Nacht 70°C) und des Substituenten R2, der eine geeignete Austrittsgruppe (z.B. Halogen, Tosylat, Mesylat) trägt, liefert die Verbindung 9c. Die Cyclisierung von 9c zur Bildung des gewünschten Isoxazols (Harz-gebundene Regioisomere 9d und 9e) kann durch Umsetzung des gebundenen Diketons mit H2NOH·HCl und Hünigscher Base in einem geeigneten Lösungsmittel (z.B. Dimethylsulfoxid, („DMSO")) bei 70°C über einen Zeitraum von fünfzehn Stunden durchgeführt werden. Die Abspaltung von dem Harz kann unter milden Bedingungen durchgeführt werden (z.B. Umsetzung mit 5% Trifluoressigsäure („TFA") in Methylenchlorid), wodurch die Endprodukte 9d und 9e erhalten werden.
  • 3.4 Biologische Aktivität
  • Die Aktivitäten der erfindungsgemäßen Verbindung, als Östrogenrezeptoragonisten oder -antagonisten zu wirken, kann unter Anwendung einer breiten Vielzahl von Assays bestimmt werden, die dem Fachmann auf dem Gebiet der Biochemie, der medizinischen Chemie und der Endokrinologie bekannt sind. Mehrere geeignete Assays werden allgemein in diesem Abschnitt 3.4 beschrieben. Spezielle Beispiele werden im untenstehenden Abschnitt 4.2 beschrieben.
  • 3.4.1 Assays für die Östrogenrezeptor-modulierende Aktivität in vivo und ex vivo
  • 3.4.1.1 Allen-Doisy-Test der Östrogenität
  • Dieser Test (der untenstehend im Abschnitt 4.2.1.1 genauer beschrieben wird) wird dazu verwendet, um eine Testverbindung hinsichtlich der östrogenen Aktivität und genauer hinsichtlich der Fähigkeit der Testverbindung, eine östrogene Verhornung des Vaginalepithels zu induzieren, zu bewerten (Allen und Doisy 1923; Mühlbock 1940; Terenius 1971). Die Testverbindungen werden formuliert und subkutan an erwachsene, ovariektomisierte weibliche Ratten in Testgruppen verabreicht. In der dritten Woche nach der bilateralen Ovariektomie wurden die Ratten mit einer primären einzelnen subkutanen Dosis von Östradiol geprimet, um die Aufrechterhaltung der Empfindlichkeit und eine größere Gleichförmigkeit der Reaktion zu gewährleisten. In der vierten Wochen, 7 Tage nach der Primärverabreichung, werden die Testverbindungen verabreicht. Die Verbindungen werden in drei gleichen Dosen über einen Zeitraum von zwei Tagen (am Abend des ersten Tages und am Morgen und Abend des zweiten Tages) verabreicht. Dann werden zweimal täglich über den Zeitraum der folgenden drei Tage Vaginalabstriche abgenommen. Das Ausmaß der verhornten und kernhaltigen Epithelzellen sowie die Leukozyten werden bei jedem Abstrich bestimmt.
  • 3.4.1.2 Anti-Allen-Doisy-Test der Antiöstrogenität
  • Dieser Test (im untenstehenden Abschnitt 4.2.1.2 genauer beschrieben) wird dazu verwendet, um eine Testverbindung hinsichtlich der antiöstrogenen Aktivität zu beurteilen. Dies erfolgt durch Beobachtung einer Verhornung des Vaginalepithels von ovariektomisierten Ratten nach Verabreichung einer Testverbindung (Allen und Doisy 1923; Mühlbock 1940; Terenius 1971). Die Bestimmung der antiöstrogenen Aktivität wird unter Verwendung von erwachsenen weiblichen Ratten durchgeführt, die zwei Wochen nach der bilateralen Ovariektomie mit Östradiol behandelt werden, um eine Verhornung des Vaginalepithels zu induzieren. Daran schließt sich die Verabreichung der Testverbindung in einer geeigneten Zubereitung täglich über einen Zeitraum von 10 Tagen an. Vaginalabstriche werden täglich abgenommen, wobei am ersten Tag der Verabreichung der Testverbindung begonnen wird und bis einen Tag nach Verabreichung der Testverbindung weiter so verfahren wird. Das Ausmaß der verhornten und kernhaltigen Epithelzellen und die Leukozyten werden für jeden Abstrich, wie oben beschrieben, bestimmt.
  • 3.4.1.3 Uterotropher("uterotrophic") Bioassay bei der unreifen Ratte zur Bestimmung der Östrogenität und der Antiöstrogenität
  • Veränderungen des Uterusgewichtes in Reaktion auf Östrogenstimulierung können dazu angewendet werden, um die östrogenen Eigenschaften der Testverbindungen auf Uterusgewebe zu bestimmen (Reel, Lamb et al. 1996; Ashby, Odum et al. 1997). Gemäß einem Beispiel, das im untenstehenden Abschnitt 4.2.1.3 beschrieben wird, erhalten unreife weibliche Ratten mit niedrigen endogenen Östrogenspiegeln eine tägliche Dosis der Testverbindung (subkutan) über einen Zeitraum von 3 Tagen. Die Verbindungen werden in geeigneter Weise für die subkutane Injektion formuliert. Als Kontrolle wird das 17-beta-Östradiol allein einer Dosisgruppe verabreicht. Trägerkontroll-Dosisgruppen sind ebenfalls in der Studie eingeschlossen. Vierundzwan zig Stunden nach der letzten Behandlung werden die Tiere seziert und ihre Uteri werden herausgeschnitten, eingeschnitten, geblottet und abgewogen. Jede statistisch signifikante Erhöhung des Uterusgewichtes in einer bestimmten Dosisgruppe im Vergleich zu der Trägerkontrollgruppe stellt ein Beweisanzeichen für eine Östrogenität dar.
  • 3.4.1.4 Östrogenrezeptor-Antagonist-Wirksamkeit im MCF-7-Xenograft-Modell
  • Dieser Test (im untenstehenden Abschnitt 4.2.1.4 im Detail beschrieben) wird dazu verwendet, die Fähigkeit einer Verbindung zu bestimmen, das Wachstum von Östrogen-abhängigem Brust-MCF-7-Tumor in vivo zu antagonisieren. Weiblichen Ncr-nu-Mäusen wird subkutan ein MCF-7-Brusttumor von einer existierenden in vivo-Passage implantiert. Ein 17-β-Östradiolpellet wird am gleichen Tag an der Seite implantiert, die dem Tumorimplantat entgegengesetzt angeordnet ist. Die Behandlung mit der Testverbindung beginnt, wenn die Tumore eine bestimmte minimale Größe (z.B. 75-200 mg) erreicht haben. Die Testverbindung wird subkutan auf täglicher Basis verabreicht und die Tiere werden täglich auf Mortalität überprüft. Körpergewichte und das Tumorvolumen werden zweimal die Woche, beginnend am ersten Tag der Behandlung, bestimmt. Die Verabreichung wird weitergeführt, bis die Tumore 1000 mm3 erreichen. Mäuse mit größeren Tumoren als 4000 mg oder mit ulzerierten Tumoren werden vor dem Tag der Studienbestimmung getötet. Die Tumorgewichte der Tiere in der Behandlungsgruppe werden mit denjenigen in einer unbehandelten Kontrollgruppe sowie mit denjenigen einer Gruppe, die lediglich ein Östradiolpellet erhielten, verglichen.
  • 3.4.1.5 OVX-Ratten-Modell
  • Dieses Modell beurteilt die Fähigkeit einer Verbindung, die Verminderung der Knochendichte und die Erhöhung der Cholesterinspiegel, die von einer Ovariektomie herrühren, umzukehren. Ein Beispiel eines solchen Modells wird im Abschnitt 4.2.1.5 beschrieben. Drei Monate alte weibliche Ratten werden ovariektomisiert und die Testverbindungen werden täglich auf subkutanem Weg, beginnend einen Tag nach dem chirurgischen Eingriff, verabreicht. Als Kontrollgruppen werden scheinoperierte Tiere und ovariektomisierte Tiere mit Trägerkontrollverabreichung verwendet. Nach 28-tägiger Behandlung werden die Ratten gewogen und die Gewichtszunahme des Gesamtkörpergewichts wird erhalten. Die Tiere werden schmerzfrei getötet. Charakteristische Anzeichen für eine östrogene Aktivität, wie Blut-Knochen-Marker (z.B. Osteocalcin, knochenspezifische alkalische Phosphatase), Gesamtcholesterin und Urinmarker (z.B. Desoxypyridinolin, Creatinin) werden zusätzlich zu dem Gewicht des Uterus gemessen. Sowohl die Tibiae als auch die Oberschenkelknochen werden von den Testtieren für eine Analyse, wie die Messung der Knochenmineraldichte, entfernt. Ein Vergleich der ovariektomisierten und der Testträgertiere zu den scheinoperierten und ovariektomisierten Kontrolltieren gestattet eine Bestimmung der gewebespezifischen östrogenen/antiöstrogenen Effekte der Testverbindungen.
  • 3.4.2 Assays für Östrogenrezeptor-modulierende Aktivität in vitro
  • 3.4.2.1 ERα/ERβ-Bindungsassays
  • Zur Bestimmung der ERα/ERβ-Rezeptorbindungsaffinität wird ein homogener Szintillations-Proximitäts-Assay verwendet (beschrieben in den untenstehenden Abschnitten 4.2.2.1 und 4.2.2.2). Platten mit 96 Vertiefungen werden mit einer Lösung von entweder ERα oder ERβ beschichtet. Nach dem Beschichten werden die Platten mit PBS gewaschen. Die Rezeptorlösung wird dann zu den beschichteten Platten gegeben und die Platten werden inkubiert. Für das Screenen einer Bibliothek wird [3H]Östradiol mit den Testverbindungen in den Vertiefungen der Platte mit 96 Vertiefungen kombiniert. Die nicht-spezifische Bindung des Radioliganden wird dadurch bestimmt, dass Östradiol in eine der Vertiefungen als Konkurrent eingegeben wird. Die Platten werden leicht geschüttelt, um die Reagentien miteinander zu vermischen, und eine Probe von jeder der Vertiefungen wird dann zu den vorbeschichteten ERα- oder ERβ Platten überführt. Die Platten werden versiegelt und inkubiert und das Rezeptor-gebundene Östradiol wird direkt nach der Inkubation unter Verwendung eines Szintillationszählers abgelesen, um die Aktivität der Testverbindung zu bestimmen. Wenn Bestimmungen sowohl von gebundenem als auch freiem Ligand gewünscht werden, dann kann der Überstand entfernt werden und getrennt in einem Flüssigszintillationszähler gezählt werden.
  • 3.4.2.2 ERα/ERβ-Transaktivierungsassays
  • Die Östrogenität der erfindungsgemäßen Verbindungen kann in einem in vitro-Bioassay bestimmt werden, wobei Zellen des Eierstocks von Chinesischen Hamstern („CHO") verwendet werden, die stabil mit dem humanen Östrogenrezeptor („hER"), dem Ratten-Oxytocinpromotor („RO") und dem Luciferase-Reportergen („LUC") cotransfiziert worden sind, wie untenstehend in Abschnitt 4.2.2.3 beschrieben wird. Die Östrogen-Transaktivierungsaktivität (Potenzverhältnis) der Testverbindung zur Inhibierung der Transaktivierung des Enzyms Luciferase, wie durch den Östrogenrezeptor vermittelt, wird mit einem Standard und einem reinen Östrogenantagonisten verglichen.
  • 3.4.2.3 MCF-7-Zellproliferationsassays
  • MCF-7-Zellen sind eine übliche Linie von Brustkrebszellen, die dazu verwendet werden, in vitro die Östrogenrezeptoragonist/-antagonist-Aktivität zu bestimmen (MacGregor und Jordan 1998). Der Effekt der Testverbindung auf die Proliferation von MCF-7-Zellen, wie durch die Einarbeitung von 5-Brom-2'-desoxyuridin („BrdU") in ein chemilumineszentes Assayformat gemessen, kann dazu verwendet werden, die relative Agonist/Antagonist-Aktivität der Testverbindung zu bestimmen. MCF-7-Zellen (ATCC HTB-22) werden in einer log-Phasenkultur gehalten. Die Zellen werden plattiert und in einem phenolfreien Medium inkubiert, um äußere Quellen von östrogenem Stimulus zu vermeiden (MacGregor und Jordan 1998). Die Testverbindung wird in verschiedenen Konzentrationen zugesetzt, um die IC50-Werte für die Verbindung zu bestimmen. Zur Bestimmung der agonistischen Aktivität wird das Assaysystem von Östrogen oder Östrogen-wirkenden Stoffen freigehalten. Zur Bestimmung der antagonistischen Aktivität werden kontrollierte Mengen von Östrogen zugesetzt.
  • 3.5 Pharmazeutische Zusammensetzungen
  • Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Form von Salzen, abgeleitet von anorganischen oder organischen Säuren, verwendet werden. Diese Salze schließen jedoch, ohne Einschränkung darauf, die Folgenden ein: Acetate, Adipate, Alginate, Citrate, Aspartate, Benzoate, Benzolsulfonate, Bisulfate, Butyrate, Campherate, Camphersulfonate, Digluconate, Cyclopentanpropionate, Dodecylsulfate, Ethansulfonate, Glucoheptanoate, Glycerophosphate, hemi-Sulfate, Heptanoate, Hexanoate, Fumarate, Hydrochloride, Hydrobromide, Hydroiodide, 2-Hydroxyethansulfonate, Lactate, Maleate, Methansulfonate, Nicotinate, 2-Naphthalinsulfonate, Oxalate, Pamoate, Pectinate, Sulfate, 3-Phenylpropionate, Picrate, Pivalate, Propionate, Succinate, Tartrate, Thiocyanate, p-Toluolsulfonate und Undecanoate. Auch können alle beliebigen basischen Stickstoff-enthaltenden Gruppen mit Mitteln, wie Niederalkylhalogeniden, quaternisiert werden, wie z.B. Methyl-, Ethyl-, Propyl- und Butylchlorid, -bromiden und -iodiden; Dialkylsulfaten, wie Dimethyl-, Diethyl-, Dibutyl- und Diamylsulfate, langkettigen Halogeniden, wie Decyl-, Lauryl-, Myristyl- und Stearylchloriden, -bromiden und -iodiden, Aralkylhalogeniden, wie Benzyl- und Phenethylbromiden, und anderen. Hierdurch werden wasser- oder öllösliche oder darin dispergierbare Produkte erhalten.
  • Beispiele für Säuren, die dazu verwendet werden können, um pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze zu bilden, schließen solche anorganischen Säuren, wie Salzsäure, Schwefelsäure und Phosphorsäure, und organische Säuren, wie Oxasäure, Maleinsäure, Bernsteinsäure und Citronensäure, ein. Basische Additionssalze können in situ während der Endisolierung und Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen hergestellt werden oder sie können getrennt hergestellt werden, indem Carbonsäuregruppierungen mit geeigneten Basen, wie Hydroxiden, Carbonaten oder Bicarbonaten von pharmazeutisch annehmbaren Metallkationen, oder mit Ammoniak oder organischen primären, sekundären oder tertiären Aminen umgesetzt werden. Pharmazeutisch annehmbare Salze schließen, jedoch ohne Einschränkung darauf, Kationen auf der Basis von Alkali- und Erdalkalimetallen, wie Natrium-, Lithium-, Kalium-, Calcium-, Magnesium-, Aluminiumsalze und dergleichen, sowie nicht-toxische Ammonium-, quaternäre Ammonium- und Aminkationen, mit Einschluss von, jedoch ohne Einschränkung darauf Ammonium, Tetramethylammonium, Tetraethylammonium, Methylamin, Dimethylamin, Trimethylamin, Triethylamin, Ethylamin, und dergleichen ein. Weitere repräsentative organische Amine, die für die Bildung von Basenadditionssalzen geeignet sind, schließen Diethylamin, Ethylendiamin, Ethanolamin, Diethanolamin, Piperazin und dergleichen ein.
  • Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auf einer Vielzahl von Wegen verabreicht werden, mit Einschluss von enteralen, parenteralen und topischen Verabreichungswegen. Geeignete Arten der Verabreichung schließen z.B. die orale, die subkutane, die transdermale, die transmucosale, die iontophoretische, die intravenöse, die intramuskuläre, die intraperitoneale, die intranasale, die subdurale, die rektale, die vaginale Verabreichung und dergleichen ein.
  • Gemäß weiteren Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung wird eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verfügung gestellt, die eine Östrogenrezeptor-modulierende Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Exzipiens umfasst.
  • Geeignete pharmazeutisch annehmbare Exzipientien schließen Prozesshilfsmittel und Modifizierungsmittel für die Abgabe des Wirkstoffs sowie Verstärkungsmittel ein, z.B. Calciumphosphat, Magnesiumstearat, Talk, Monosaccharide, Disaccharide, Stärke, Gelatine, Cellulose, Methylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose, Dextrose, Hydroxypropyl-β-cyclodextrin, Polyvinylpyrrolidinon, niedrig schmelzende Wachse, Ionenaustauscherharze und dergleichen sowie Kombinationen von beliebigen zwei oder mehreren der genannten Materialien. Weitere geeignete pharmazeutisch annehmbare Exzipientien werden in der Monographie Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Pub. Co., New Jersey (1991) beschrieben, auf die hierin ausdrücklich Bezug genommen wird.
  • Pharmazeutische Zusammensetzungen, enthaltend Östrogenrezeptor-modulierende Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung können in jeder beliebigen Form vorliegen, die für die vorgesehene Verabreichungsart geeignet ist, z.B. als Lösung, als Suspension oder als Emulsion. Flüssige Träger werden typischerweise zur Herstellung von Lösungen, Suspensionen und Emulsionen eingesetzt. Flüssige Träger, die für die Durchführung der vorliegenden Erfindung in Betracht gezogen werden, schließen z.B. Wasser, Kochsalzlösung, pharmazeutisch annehmbare organische Lösungsmittel, pharmazeutisch annehmbare Öle oder Fette und dergleichen sowie Gemische von zwei oder mehreren der genannten Materialien ein. Der flüssige Träger kann andere geeignete pharmazeutisch annehmbare Additive, wie Solubilisatoren, Emulgatoren, Nährmittel, Puffer, Konservierungsmittel, Suspendierungsmittel, Verdickungsmittel, Regulierungsmittel für die Viskosität, Stabilisatoren und dergleichen enthalten. Geeignete organische Lösungsmittel schließen z.B. einwertige Alkohole, wie Ethanol, und mehrwertige Alkohole, wie Glykole, ein. Geeignete Öle schließen z.B. Sojabohnenöl, Kokosnussöl, Olivenöl, Sonnenblumenöl, Baumwollsamenöl und dergleichen ein. Für die parenterale Verabreichung kann der Träger auch ein öliger Ester, wie Ethyloleat, Isopropylmyristat und dergleichen, sein. Erfindungsgemäße Zusammensetzungen können auch in Form von Mikropartikeln, Mikrokapseln, Liposom-Einkapselungen und dergleichen sowie Kombinationen von beliebigen zwei oder mehreren davon vorliegen.
  • Die erfindungsgemäßen Verbindungen können oral, parenteral, sublingual, durch Inhalationsspray, rektal, vaginal oder topisch in Dosierungseinheits-Zubereitungen verabreicht werden, die herkömmliche nicht-toxische pharmazeutisch annehmbare Träger, Adjuvantien und Vehikel, wie gewünscht, enthalten. Die topische Verabreichung kann auch die Anwendung der transdermalen Verabreichung, wie mittels transdermaler Pflaster, oder von Iontophorese-Vorrichtungen beinhalten. Die hierin verwendete Bezeichnung „parenteral" schließt subkutane Injektionen, die intravenöse, die intramuskuläre, die intrasternale Injektion oder Infusionstechniken ein.
  • Injizierbare Zubereitungen, z.B. sterile injizierbare wässrige oder ölartige Suspensionen, können entsprechend dem Stand der Technik formuliert werden, wobei geeignete Dispergierungs- oder Befeuchtungsmittel und Suspendierungsmittel verwendet werden. Die sterile injizierbare Zubereitung kann auch eine sterile injizierbare Lösung oder Suspension in einem nichttoxischen parenteral annehmbaren Verdünnungsmittel oder Lösungsmittel, z.B. als eine Lösung in 1,3-Propandiol, sein. Unter den annehmbaren Trägern und Lösungsmitteln, die verwendet werden können, befinden sich Wasser, Ringersche-Lösung und eine isotonische Natriumchloridlösung. Weiterhin werden herkömmlicherweise sterile, fette Öle als Lösungsmittel oder als Suspendierungsmittel eingesetzt. Zu diesem Zweck kann jedes beliebige, rohe fette Öl eingesetzt werden mit Einschluss von synthetischen Mono- oder Diglyceriden. Schließlich können Fettsäuren, wie Ölsäure, für die Herstellung von injizierbaren Zubereitungen geeignet sein.
  • Suppositorien für die rektale oder vaginale Verabreichung des Wirkstoffs können dadurch hergestellt werden, dass der Wirkstoff mit einem geeigneten nicht-reizenden Exzipiens, wie Kakaobutter und Polyethylenglykolen, welche bei üblichen Temperaturen fest sind, jedoch bei der Rektaltemperatur flüssig sind und daher im Rektum schmelzen und den Wirkstoff freisetzen werden, vermischt wird.
  • Feste Dosierungsformen für die orale Verabreichung können Kapseln, Tabletten, Pillen, Pulver und Granulate einschließen. In solchen festen Dosierungsformen kann der Wirkstoff mit mindestens einem inerten Verdünnungsmittel, wie Saccharose, Lactose oder Stärke, vermischt sein. Solche Dosierungsformen können auch, wie es die normale Praxis ist, zusätzliche andere Substanzen, außer inerte Verdünnungsmittel, umfassen, z.B. Schmiermittel, wie Magnesiumstearat. Im Falle von Kapseln, Tabletten und Pillen können die Dosierungsformen auch Puffermittel umfassen. Tabletten und Pillen können zusätzlich mit darmlöslichen Überzügen hergestellt werden.
  • Flüssige Dosierungsformen für die orale Verabreichung können pharmazeutisch annehmbare Emulsionen, Lösungen, Suspensionen, Sirupe und Elixiere, enthaltend inerte Verdünnungsmittel, die üblicherweise auf diesem Gebiet verwendet werden, wie Wasser, einschließen. Solche Zusammensetzungen können auch Adjuvantien umfassen, wie Befeuchtungsmittel, Emulgatoren und Suspendierungsmittel, Cyclodextrine und Süßmittel, Aromatisierungsmittel und Geruchsstoffe.
  • Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Form von Liposomen verabreicht werden. Wie es im Stand der Technik bekannt ist, leiten sich Liposomen im Allgemeinen von Phospholipiden oder anderen Lipidsubstanzen ab. Liposome werden durch mono- oder multilamellare hydratisierte Flüssigkristalle, die in einem wässrigen Medium dispergiert sind, gebildet. Alle beliebigen nicht-toxischen, physiologisch annehmbaren und metabolisierbaren Lipide, die dazu imstande sind, Liposomen zu bilden, können zum Einsatz kommen. Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen in Liposomform können zusätzlich zu einer erfindungsgemäßen Verbindung Stabilisatoren, Konservierungsmittel, Exzipientien und dergleichen enthalten. Die be vorzugten Lipide sind Phospholipide und Phosphatidylcholine (Lecithine), sowohl natürliche als auch synthetische. Verfahren zur Bildung von Liposomen sind im Stand der Technik bekannt (Prescott 1976).
  • Während die erfindungsgemäßen Verbindungen als einziger pharmazeutischer Wirkstoff verabreicht werden können, können sie aber auch in Kombination mit einer oder mehreren anderen Verbindung(en), wie hierin beschrieben, und/oder in Kombination mit anderen Mitteln, die für die Behandlung und/oder Prävention von Östrogenrezeptor-vermittelten Störungen verwendet werden, eingesetzt werden. Alternativ können die erfindungsgemäßen Verbindungen sequentiell mit einem oder mehreren solchen Mitteln verabreicht werden, um therapeutische und prophylaktische Depoteffekte zu erzielen. Geeignete Mittel schließen, jedoch ohne Einschränkung darauf, andere SERMs sowie traditionelle Östrogenagonisten und -antagonisten ein. Repräsentative Mittel, die in Kombination mit den erfindungsgemäßen Verbindungen für die Behandlung von Östrogenrezeptor-vermittelten Störungen geeignet sind, schließen z.B. Tamoxifen, 4-Hydroxytamoxifen, Raloxifen, Toremifen, Droloxifen, TAT-59, Idoxifen, RU 58,688, EM 139, ICI 164,384, ICI 182,780, Clomiphen, MER-25, DES, Nafoxiden, CP-336,156, GW5638, LY139481, LY353581, Zuclomiphen, Enclomiphen, Ethamoxytriphetol, Delmadinonacetat, Bisphosphonat und dergleichen ein. Andere Mittel, die mit einer oder mehreren erfindungsgemäßen Verbindungen kombiniert werden können, schließen Aromatasehemmer, wie, jedoch ohne Einschränkung darauf, 4-Hydroxyandrostendion, Plomestan, Exemestan, Aminogluthimid ("aminogluethimid"), Rogletimid, Fadrozol, Vorozol, Letrozol und Anastrozol ein.
  • Weitere Mittel, die zur Kombination mit den erfindungsgemäßen Verbindungen geeignet sind, schließen, jedoch ohne Einschränkung darauf, antineoplastische Mittel, wie Alkylierungsmittel, ein. Weitere Klassen von relevanten antineoplastischen Mitteln schließen Antibiotika, hormonale Antineoplastika und Antimetabolite ein. Beispiele für geeignete Alkylierungsmittel schließen Alkylsulfonate, wie Busulfan, Improsulfan und Piposulfan; Aziridine, wie Benzodizepa, Carboquon, Meturedepa und Uredepa; Ethylenimine und Methylmelamine, wie Altretamin, Triethylenmelamin, Triethylenphosphoramid, Triethylenthiophosphoramid und Trimethylolmelamin; Stickstoffsenfverbindungen, wie Chlorambucil, Chlornaphazin, Cyclophosphamid, Estramustin, Iphosphamid, Mechlorethamin, Mechlorethaminoxidhydrochlorid, Melphalan, Novembichin, Phenesterin, Prednimustin, Trofosfamid und Uracilsenfverbindungen; Nitrosoharnstoffverbindungen, wie Carmustin, Chlorzotocin, Fotemustin, Lomustin, Nimustin, Ranimustin, Dacarbazin, Mannomustin, Mitobronitol, Mitolactol und Pipobroman, ein. Weitere derartige Mittel sind dem Fachmann auf dem Gebiet der medizinischen Chemie und der Onkologie bekannt.
  • Weitere Mittel, die für die Kombination mit erfindungsgemäßen Verbindungen geeignet sind, schließen Proteinsynthesehemmer, wie Abrin, Aurintricarbonsäure, Chloramphenicol, Colicin E3, Cycloheximid, Diphtherietoxin, Edein A, Emetin, Erythromycin, Ethionin, Fluorid, 5-Fluortryptophan, Fusidinsäure, Guanylylmethylendiphosphonat und Guanylylimidodiphosphat, Kanamycin, Kasugamycin, Kirromycin und O-Methylthreonin, Modeccin, Neomycin, Norvalin, Pactamycin, Paromomycin, Puromycin, Ricin, α-Sarcin, Shigatoxin, Showdomycin, Sparsomycin, Spectinomycin, Streptomycin, Tetracyclin, Thiostrepton und Trimethoprim, ein. Hemmer der DNA-Synthese mit Einschluss von Alkylierungsmitteln, wie Dimethylsulfat, Mitomycin C, Stickstoff und Schwefelsenfverbindungen, MNNG und NMS; Interkalationsmittel, wie Acridinfarbstoffe, Actinomycine, Adriamycin, Anthracene, Benzopyren, Ethidiumbromid, Propidiumdiiodid-Verschlingungsverbindungen und Mittel, wie Distamycin und Netropsin, können gleichfalls mit den erfindungsgemäßen Verbindungen in pharmazeutischen Zusammensetzungen kombiniert werden. DNA-Basenanaloga, wie Acyclovir, Adenin, β-1-D-Arabinosid, Amethopterin, Aminopterin, 2-Aminopurin, Aphidicolin, 8-Azaguanin, Azaserin, 6-Azauracil, 2'-Azido-2'-desoxynucleoside, 5-Bromdesoxycytidin, Cytosin, β-1-D-Arabinosid, Diazooxynorleucin, Didesoxynucleoside, 5-Fluordesoxycytidin, 5-Fluordesoxyuridin, 5-Fluoruracil, Hydroxyharnstoff und 6-Mercaptopurin, können gleichfalls in Kombinationstherapien mit den erfindungsgemäßen Verbindungen zum Einsatz kommen. Topoisomeraseinhibitoren, wie Coumermycin, Nalidixinsäure, Novobiocin und Oxolinsäure, Hemmer der Zellteilung mit Einschluss von Colcemid, Colchicin, Vinblastin und Vincristin; und RNA-Synthesehemmer, mit Einschluss von Actinomycin D, α-Amanitin und anderen Pilz-Amatoxinen, Cordycepin (3'-Desoxyadenosin), Dichlorribofuranosylbenzimidazol, Rifampicin, Streptovaricin und Streptolydigin können gleichfalls mit den erfindungsgemäßen Verbindungen kombiniert werden, um pharmazeutische Zusammensetzungen zur Verfügung zu stellen. Weitere solche Mittel sind dem Fachmann auf dem Gebiet der medizinischen Chemie und der Onkologie bekannt.
  • Weiterhin können die erfindungsgemäßen Verbindungen entweder einzeln oder in Kombination wie oben beschrieben, in Kombination mit anderen Maßnahmen zur Prävention oder Behandlung von Östrogenrezeptor-vermittelten Erkrankungen oder Störungen verwendet werden. Solche weiteren Behandlungen schließen, jedoch ohne Einschränkung darauf, chirurgische Maßnahmen, Strahlungen, Hormonergänzungen und Diätregulierungen ein. Diese können sequentiell (z.B. eine Behandlung mit einer erfindungsgemäßen Verbindung nach einem chirurgischen Eingriff oder nach einer Bestrahlung) oder in Kombination (z.B. zusätzlich zu einem Diätschema) durchgeführt werden.
  • Gemäß einer weiteren Ausführungsform schließt die vorliegende Erfindung Verbindungen und Zusammensetzungen ein, bei denen eine erfindungsgemäße Verbindung entweder mit einem cytotoxischen Mittel, das an ein Targetingmittel gebunden ist, wie einen monoklonalen Antikörper (z.B. einen Maus- oder humanisierten monoklonalen Antikörper), kombiniert ist oder daran covalent gebunden ist. Es wird erkannt, dass die zuletzt genannte Kombination die Einführung cytotoxischer Mittel in Krebszellen mit einer größeren Spezifität ermöglichen wird. D.h. die aktive Form des cytotoxischen Mittels (d.h. die freie Form) liegt nur in den Zellen, die von dem Antikörper als Ziel gefunden worden sind, vor. Naturgemäß können die erfindungsgemäßen Verbindungen auch mit monoklonalen Antikörpern kombiniert werden, die eine therapeutische Aktivität gegen Krebs haben.
  • Die zusätzlichen Wirkstoffe können im Allgemeinen in therapeutischen Mengen eingesetzt werden, wie sie in der Monographie PHYSICIANS' DESK REFERENCE (PDR) 53. Auflage (1999), beschrieben werden. Auf diese Druckschrift wird hierin ausdrücklich Bezug genommen. Sie können aber auch in solchen therapeutisch geeigneten Mengen verwendet werden, die dem Fachmann gut bekannt sind. Die erfindungsgemäßen Verbindungen und andere therapeutische Wirkstoffe können mit der empfohlenen maximalen klinischen Dosierung oder mit niedrigeren Dosen verabreicht werden. Die Dosierungslevel der Wirkstoffe in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können so variiert werden, dass die gewünschte therapeutische Reaktion in Abhängigkeit von dem Verabreichungsweg, der Schwere des Krankheitszustandes und der Reaktion des Patienten erhalten wird. Die Kombination kann in Form von getrennten Zusammensetzungen oder als eine Einzeldosierung, enthaltend beide Mittel, verabreicht werden. Bei Verabreichung als eine Kombination können die therapeutischen Mittel als getrennte Zusammensetzungen formuliert werden, die zur gleichen Zeit oder zu verschiedenen Zeiten verabreicht werden, oder die therapeutischen Mittel können als einzige Zusammensetzung verabreicht werden.
  • 3.6 Behandlung von Östrogenrezeptor-vermittelten Störungen
  • Gemäß weiteren Ausführungsformen stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung zur Herstellung eines Medikamentes zur Verwendung bei einem Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Östrogenrezeptor-vermittelten Störungen in einem Menschen oder einem Tier zur Verfügung. Vorzugsweise handelt es sich um einen Menschen oder um ein Tier. Die Modulation der Östrogenrezeptoraktivität, die durch eine Unterdrückung oder Aufwärtsregulierung der Östrogenrezeptoraktivität detektierbar ist, erfolgt entweder im Vergleich zu einer Kontrollprobe oder im Vergleich zu der erwarteten Östrogenrezeptoraktivität.
  • Wirksame Mengen der erfindungsgemäßen Verbindungen schließen im Allgemeinen jede Menge ein, die dazu ausreichend ist, die Östrogenrezeptoraktivität in erfassbarer Weise zu modulieren. Die Bestimmung erfolgt durch einen beliebigen der hierin beschriebenen Assays oder durch andere Aktivitätsassays, die dem Fachmann bekannt sind, oder dadurch, dass die Prävention oder Minderung von Symptomen eines Patienten ermittelt wird, der an einer Östrogenrezeptor-vermittelten Störung leidet.
  • Östrogenrezeptor-vermittelte Störungen, die gemäß der Erfindung behandelt werden können, schließen alle beliebigen biologischen oder medizinischen Störungen ein, bei denen eine Östrogenrezeptoraktivität beteiligt ist, oder bei denen eine Hemmung des Östrogenrezeptors eine Signalgebung durch einen Pfad potenziert oder verzögert, der in charakteristischer Weise bei der zu behandelnden Erkrankung fehlerhaft ist. Der Zustand oder die Störung kann durch eine abnormale Östrogenrezeptoraktivität bewirkt sein oder dadurch charakterisiert sein. Repräsentative Östrogenrezeptor-vermittelte Störungen schließen z.B. Osteoporose, Atherosklerose, Östrogen-vermittelte Krebserkrankungen (z.B. Brust- und Endometrialkrebs), Turnersches Syndrom, gutartige Prostatahyperplasie (d.h. Prostatavergrößerung), Prostatakrebs, erhöhtes Choles terin, Restenose, Endometriose, Uterus-Fibroid-Erkrankung, Haut- und/oder Vaginalatrophien und Alzheimer-Krankheit ein. Die erfolgreiche Behandlung eines Patienten gemäß der Erfindung kann zu einer Prävention, zu einer Einleitung einer Verringerung oder zu einer Milderung der Symptome eines Patienten führen, der an einer Östrogenrezeptor-vermittelten medizinischen oder biologischen Störung leidet. So kann beispielsweise die Behandlung zu einer Verringerung von Brust- oder Endometrialtumoren und/oder von verschiedenen klinischen Markern, die mit solchen Krebserkrankungen assoziiert sind, führen. Gleichermaßen kann eine Behandlung der Alzheimer-Krankheit zu einer Verringerung des Fortschritts der Erkrankung führen, was beispielsweise dadurch festgestellt werden kann, dass die Verringerung der Erhöhungsgeschwindigkeit von Demenzerscheinungen gemessen wird.
  • Die Menge des Wirkstoffs, die mit den Trägermaterialien kombiniert werden kann, um eine Einzeldosierungsform zu erzeugen, variiert entsprechend dem behandelten Patienten und der jeweiligen Art und Weise der Verabreichung. Es wird jedoch darauf hingewiesen, dass das spezifische Dosisniveau für jeden beliebigen Patienten von einer Vielzahl von Faktoren, mit Einschluss der Aktivität der speziell verwendeten Verbindung, des Alters, des Körpergewichts, des allgemeinen Gesundheitszustandes, des Geschlechts, der Ernährungsweise, der Verabreichungszeit, dem Verabreichungsweg, der Ausscheidungsrate, der Wirkstoffkombination und der Schwere der jeweiligen Erkrankung, die therapiert wird, abhängig ist. Die prophylaktisch oder therapeutisch wirksame Menge für eine gegebene Situation kann ohne weiteres durch Routineexperimentierung ermittelt werden und sie liegt innerhalb des Geschicks und der Einschätzung des gewöhnlichen Klinikarztes.
  • Beispielsweise beträgt eine prophylaktische oder therapeutisch wirksame Dosis im Allgemeinen etwa 0,1 mg/kg/Tag bis etwa 100 mg/kg/Tag, vorzugsweise etwa 1 mg/kg/Tag bis etwa 20 mglkg/Tag und am meisten bevorzugt etwa 2 mg/kg/Tag bis etwa 10 mg/kg/Tag einer erfindungsgemäßen Östrogenrezeptor-modulierenden Verbindung. Diese kann in einer oder in mehreren Dosen verabreicht werden.
  • 4 Beispiele
  • Die folgenden Beispiele dienen dazu, bestimmte Gesichtspunkte bzw. Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung zu illustrieren und die Fachleute bei der Ausübung der Erfindung zu unterstützen. Diese Beispiele sollen in keiner Weise dahingehend ausgelegt werden, dass sie den Rahmen der Erfindung in irgendeiner Art und Weise einschränken.
  • 4.1 Herstellung von Verbindungen gemäß der Erfindung
  • 4.1.1 Allgemeine Verfahrensweisen
  • Alle Reaktionen wurden unter einer Stickstoff- oder Argonatmosphäre durchgeführt. Alle von gewerblichen Lieferanten erhaltenen Reagentien wurden ohne weitere Reinigung eingesetzt. Wasserfreie Lösungsmittel wurden von gewerblichen Lieferanten erhalten und ohne weiteres Trocknen eingesetzt. Die Abtrennung und die Reinigung der Produkte erfolgte unter Verwendung irgendeiner der folgenden Verfahren oder einer Kombination davon. Die Flashsäu lenchromatographie wurde mit Silicagel, 200-400 Mesh, 60 A (Aldrich Chemical Company, Inc., Milwaukee, WI) oder einem Flash 40-Chromatographie-System und KP-Sil, 60 A (Biotage, Charlottesville, Virginia) durchgeführt. In typischer Weise verwendete Lösungsmittel waren Dichlormethan (DCM), Methanol (MeOH), Ethylacetat (EtOAc) und Hexan (Hex). Eine präparative DC wurde durchgeführt, wobei Platten mit den Abmessungen von 20 × 20 cm verwendet wurden, die mit Silicagel mit der Bezeichnung GF-254 vom Merch-EM-Typ-60 beschichtet waren. Die präparative HPLC wurde mit einem Dynamax-System unter Verwendung einer C-18-Umkehrphasensäule (Ranin) durchgeführt.
  • Die erfindungsgemäßen Verbindungen wurden durch die LC/MS-Werte charakterisiert, wobei entweder das Waters-Micromass-Platform-LCZ-System (Ionisierungsart: positives Elektronenspray; Säule: HP-Eclipse XDB-C18, 2 × 50 mm, Puffer A: H2O mit 0,1 Trifluoressigsäure (TFA), Puffer B: Acetonitril (MeCN) mit 0,1% TFA, Elutionsgradient: 5-95% Puffer über einen Zeitraum von 5 Minuten, Fließgeschwindigkeit: 0,8 ml/min) oder ein LC/MSD-System der HP 1100-Reihe (Ionisierungsart: positives Elektronenspray; Säule: HP-Eclipse XDB-C18, 2 × 50 mm, Puffer A: H2O mit 0,1 % TFA, Puffer B: MeCN mit 0,1 % TFA, Elutionsgradient: 5-95% Puffer über einen Zeitraum von 3,5-6 Minuten, Fließgeschwindigkeit: 0,8 bis 0,4 ml/min) verwendet wurde. Die Reinheit der Verbindungen wurde ebenfalls durch HPLC bestimmt, wobei ein Waters-Millennium-Chromatographie-System mit einem 2690-Trennmodul (Firma Milford, Massachusetts) verwendet wurde. Die analytischen Säulen waren Umkehrphasensäulen mit der Bezeichnung Alltima C-18 mit den Abmessungen 4,6 × 250 mm von der Firma Alltech (Deerfield, Illinois). Es wurde eine Gradientenelution angewendet, wobei typischerweise mit 5% MeCN/95% Wasser begonnen wurde und über einen Zeitraum von 40 Minuten bis zu 100% MeCN weitergearbeitet wurde. Alle Lösungsmittel enthielten 0,1 % TFA. Die Verbindungen wurden durch Ultraviolettlicht (UV)-Absorption bei 214 nm erfasst. Einige der massenspektrometrischen Analysen wurden mit einem Elektrospray-Massenspektrometer der Firma Fisons durchgeführt. Alle Massen werden als solche von protonierten Ausgangsionen angegeben, wenn nichts anderes bemerkt wird. Die kernmagnetische Resonanz (NMR)-Analyse wurde mit einem Gerät der Firma Varian 300 MHz NMR (Palo Alto, Kalifornien) durchgeführt. Das Referenzspektrum war entweder TMS oder die bekannte chemische Verschiebung des Lösungsmittels. Die Protonen-NMR (1H-NMR)-Daten werden wie folgt angegeben: chemische Verschiebung (δ) in ppm, Multiplizität (s = Singulett, d = Dublett, t = Triplett, q = Quartett, p = Pentett, m = Multiplett, dd = Dublett von Dublett, br = breit), Kupplungskonstante (Hz), Integration und Zuordnung. Die Schmelzpunkte wurden mit einem MEL-TEMP-Gerät der Firma Laboratory Devices (Holliston, Massachusetts) bestimmt und werden unkorrigiert angegeben.
  • Die Verbindungen wurden anhand des Systems NOMENCLATOR (ChemInnovation Software, Inc., San Diego, CA) benannt.
  • 4.1.2 Synthese von Östrogenrezeptor-modulierenden Isoxazolen
  • 4.1.2.1 Synthese von 4-{5-[2-(4-Hydroxyphenyl)ethyl]-4-benzylisoxazol-3-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1 und Schema 3 unter Verwendung von 4'-Methoxyacetophenon und Methyl-3-(4-methoxyphenyl)propanoat für die Claisen-Kondensation und von Benzylbromid für die Alkylierung synthetisiert. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 3, beschrieben in Stufe C des Schemas 1. ESMS m/z 372 (MH+), C24H21NO3 = 371 g/mol; HPLC-Reinheit = 70%.
  • 4.1.2.2 Synthese von 4-[4-Ethyl-5-(phenoxymethyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den oben im Zusammenhang mit Schema 1 beschriebenen Methoden synthetisiert, wobei 1-(4-Methoxyphenyl)butan-1-on und 2-Phenoxyacetylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung wurde unter Anwendung der Methode 3, beschrieben für Stufe C von Schema 1, durchgeführt. ESMS m/z 296 (MH+), C18H17NO3 = 295 g/mol; HPLC-Reinheit = 60%.
  • 4.1.2.3 Synthese von 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-phenylisoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den folgenden, wie oben im Zusammenhang mit Schema 1 beschriebenen Methoden synthetisiert, wobei 1-(4-Methoxyphenyl)-2-phenylethan-1-on und 4-Methoxybenzoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung wurde unter Verwendung der Methode 1, beschrieben für Stufe C von Schema 1, durchgeführt.
    1H-NMR (d6-DMSO): δ 7,60-7,36 (m, 9H), 7,00-6,90 (m, 4H); MS m/z 330 (MH+), C21H15NO3 = 329 g/mol; HPLC-Reinheit = 80%.
  • 4.1.2.4 Synthese von 4-[4-Ethyl-5-(4-Hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den folgenden Methoden, wie sie oben im Zusammenhang mit Schema 1 beschrieben wurden, synthetisiert, wobei 1-(4-Methoxyphenyl)butan-1-on und 4-Methoxybenzoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung wurde unter Anwendung der Methode 1, beschrieben für Stufe C von Schema 1, durchgeführt.
    1H-NMR (d6-DMSO): δ 7,70 (d, J = 8,24 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,24 Hz, 2H), 7,00 (dd, J = 8,24, 2,2 Hz, 4H), 2,80 (q, J 6,75 Hz, 2H), 1,20 (t, J = 6,75 Hz, 3H),; GCMS m/z 281 (M+), C17H15NO3 = 281 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.5 Synthese von 4-{5-[2-(4-Hydroxyphenyl)ethyl]-4-phenylisoxazol-3-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den folgenden Methoden, wie sie oben im Zusammenhang mit Schema 1 beschrieben wurden, synthetisiert, wobei 1-(4-Methoxyphenyl)-2-phenylethan-1-on und 4-Nitrophenyl-3-(4-methoxyphenyl)propanoat als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung wurde unter Anwendung der Methode 3, beschrieben für Stufe C von Schema 1, durchgeführt.
    ESMS m/z 358 (MH+), C23H19NO3 = 357 g/mol; HPLC-Reinheit = 70%.
  • 4.1.2.6 Synthese von 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-benzylisoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den folgenden Methoden, wie sie oben im Zusammenhang mit Schema 1 beschrieben wurden, synthetisiert, wobei 1-(4-Methoxyphenyl)-3-phenylpropan-1-on und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung wurde unter Anwendung der Methode 1, beschrieben für Stufe C von Schema 1, durchgeführt.
    1H-NMR (d4-MeOH) δ 7,60-7,20 (m, 9H), 7,01-6,80 (m, 4H), 4,20 (s, 2H); MS m/z 344 (MH+), C22H17NO3 = 343 g/mol; HPLC-Reinheit = 80%.
  • 4.1.2.7 Synthese von 4-[3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1 und Schema 3 synthetisiert.
    Stufe 1: Zu einer Lösung von 4'-Methoxyacetophenon in THF bei –78°C wurden tropfenweise 1,5 Äq. [(CH3)2Si]2NLi gegeben. Die Lösung wurde 1 h lang bei –78°C gerührt und anschließend mit 1,2 Äq. p-Anisoylchlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 10 min lang bei –78°C und dann 22 h bei RT gerührt, mit 10%iger Citronensäure angesäuert und mit EtOAc extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden mit Wasser gewaschen und auf Na2SO4 getrocknet. Die Entfernung des Lösungsmittels im Vakuum lieferte einen rohen Feststoff, der durch Flashchromatographie (CH2Cl2) gereinigt wurde, wodurch das 1,3-Diketon als weißer Feststoff erhalten wurde.
    Stufe 2: Synthese von p-Methoxyphenylbleitriacetat. Zu einer Lösung von Bleitetraacetat (0,73 Äquiv.) in Chloroform und Dichloressigsäure wurde Anisol (1,0 Äquiv.) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 90 min lang bei Raumtemperatur gerührt. Nach diesem Zeitraum wurde die Lösung mit Wasser gewaschen, und die organische Schicht wurde mit Hexan behandelt. Das Produkt kam zur Ausfällung und wurde durch Filtration gesammelt. Der Feststoff wurde in Chloroform und Essigsäure aufgenommen. Die resultierende Lösung wurde 1 h lang gerührt und dann mit Wasser gewaschen. Die letztgenannten zwei Stufen wurden wiederholt, und die Chloroformschicht wurde mit Hexan behandelt. Dieses Gemisch wurde 24 h lang auf 2°C abgekühlt. Das Material, das ausgefällt worden war, wurde durch Filtration gesammelt und im Vakuum getrocknet, wodurch p-Methoxyphenylbleitriacetat erhalten wurde.
    Stufe 3: Ein Gemisch aus dem 1,3-Diketon (1,0 Äquiv., erhalten in Stufe 1), p-Methoxyphenylbleitriacetat (1,1 Äquiv., erhalten aus Stufe 2) und Pyridin (3,3 Äquiv.) in Chloroform wurde bei Raumtemperatur 48 h lang gerührt. Nach Verstreichen dieses Zeitraums wurde das Reaktionsgemisch mit Chloroform verdünnt und mit Wasser und 4M Schwefelsäure gewaschen. Die wässrigen Waschflüssigkeiten wurden mit Chloroform rückextrahiert. Die kombinierten organischen Extrakte wurden mit Wasser gewaschen, auf Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum konzentriert. Das Rohprodukt wurde durch Flashsäulenchromatographie (Ethylacetat/Hexan, 1:3) gereinigt, wodurch 1,2,3-Tris-(4-methoxyphenyl)propan-1,3-dion als grau-weißer Feststoff erhalten wurde.
    Stufe 4: Ein Gemisch aus in Stufe 3 erhaltenem 1,3-Diketon (1,0 Äquiv.), Hydroxylaminhydrochlorid (1,5 Äquiv.), Pyridin (2,0 Äquiv.) und Ethanol wurde über Nacht am Rück fluss erhitzt. Es wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, und das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt. Es wurden Wasser und Ethylacetat zugesetzt. Die organische Schicht wurde abgetrennt, mit verdünnter Salzsäure und Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet, filtriert, und das Lösungsmittel wurde im Vakuum konzentriert. Das Produkt 1-[4,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-3-yl]-4-methoxybenzol wurde als grau-weißer Feststoff erhalten.
    Stufe 5: Die Demethylierung erfolgte unter Verwendung der Methode 1, beschrieben für Stufe C im Schema 1, wodurch als Produkt 4-[3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]phenol erhalten wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 7,30 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,20 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,10 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,76 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,74 (d, J = 9,0 Hz, 2H); MS m/z 346 (MH+), C21H15NO4 = 345 g/mol; HPLC-Reinheit = 97%.
  • 4.1.2.8 Synthese von 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den Methoden, wie sie oben im Zusammenhang mit Schema 1 beschrieben wurden, synthetisiert, wobei 4'-Acetophenon und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung wurde unter Anwendung der Methode 1, beschrieben für Stufe C von Schema 1, durchgeführt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 7,80-7,75 (m, 4H), 7,5 (s, 1H), 6,99-6,90 (m, 4H); MS m/z 254 (MH+), C15H11NO3 = 253 g/mol; HPLC-Reinheit = 96%.
  • 4.1.2.9 Synthese von 4-{5-(4-Hydroxyphenyl)-4-[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]isoxazol-3-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1, dem Schema 3 und dem Schema 5 synthetisiert.
    Stufe 1: Die Synthese des 1,3-Diketons ist die gleiche wie im Falle der Stufe 1 des Beispiels im Abschnitt 4.1.2.7.
    Stufe 2: Synthese von p-Allyloxyphenylbleitriacetat. Sie verlief ähnlich wie die Stufe 2 im Abschnitt 4.1.2.7, mit der Ausnahme, dass Allylphenylether anstelle von p-Anisol als Ausgangsmaterial verwendet wurde.
    Stufe 3: Ähnlich wie in Stufe 3 im Abschnitt 4.1.2.7, wobei p-Allyloxyphenylbleitriacetat anstelle von p-Methoxyphenylbleitriacetat eingesetzt wurde.
    Stufe 4: Die Bildung des Isoxazolskeletts erfolgte in der gleichen Weise wie in Stufe 4 von Abschnitt 4.1.2.7. Das in dieser Stufe erhaltene Produkt ist das 1-[3,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl]-4-prop-2-enyloxybenzol.
    Stufe 5: Selektive Entfernung der Allylschutzgruppe. Ein Gemisch aus dem obigen Isoxazol (1,0 Äquiv.), Pyrrolidin (20 Äquiv.), Triphenylphosphin (0,05 Äquiv.) und Tetrakis(triphenylphosphin)palladium(0) (0,05 Äquiv.) in THF wurde über Nacht am Rückfluss erhitzt. Die Lösung wurde im Vakuum konzentriert, und das Rohmaterial wurde durch Flashsäulenchromatographie (Ethylacetat/Hexan 1:3) gereinigt. Das Produkt 4-[3,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl]phenol wurde als weißer Feststoff erhalten.
    Stufe 6: Ein Gemisch aus dem Phenol (1,0 Äquiv., erhalten in Stufe 5), 1-(2-Chlorethyl)piperidinmonohydrochlorid (1,2 Äquiv.), Cäsiumcarbonat (2,5 Äquiv.) in DMF (30 ml) wurde über Nacht auf 100°C erhitzt. Die Feststoffe wurden durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde in Ethylacetat aufgenommen. Die Lösung wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, auf Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum konzentriert, wodurch 1-[3,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl]-4-(2-piperidylethoxy)benzol erhalten wurde.
    Stufe 7: Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 2, beschrieben für Stufe C im Schema 1. Zu einer Lösung des in Stufe 6 erhaltenen Isoxazols (1,0 Äquiv.) in Dichlorethan wurden Aluminiumchlorid (5,0 Äquiv.) und Ethanthiol (5,0 Äquiv.) gegeben. Das resultierende Gemisch wurde 40 min lang bei Raumtemperatur gerührt und mit THF, 20% HCl und Wasser abgeschreckt. Es bildete sich ein Niederschlag, der durch Filtration gesammelt wurde. Nach dem Trocknen des Produkts wurde das Material in Methanol aufgenommen, mit Aktivkohle behandelt, durch Natriumsulfat filtriert und im Vakuum konzentriert. Die Reinigung durch Flashchromatographie, gefolgt von Zugabe einer wässrigen HCl-Lösung und einer Lyophilisierung, lieferte dann das Produkt 4-{5-(4-Hydroxyphenyl)-4-[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]isoxazol-3-yl}phenol als Hydrochloridsalz.
    1H-NMR (d4-MeOH) δ 7,43 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,25 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,20 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,77 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,75 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,20 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,90 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,60-2,70 (m, 4H), 1,63-1,75 (m, 4H), 1,50-1,60 (m, 2H); MS m/z 457 (MH+, 100%), C28H28N2O4 = 456 g/mol; HPLC-Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.10 Synthese von 4-{4-(4-Hydroxyphenyl)-3-[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]isoxazol-5-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den Verfahrensweisen synthetisiert, die oben im Zusammenhang mit Schema 1, Schema 3 und Schema 7 beschrieben worden sind.
    Stufe 1: Die Synthese des 1,3-Diketons erfolgte in ähnlicher Weise wie diejenige, die in Stufe 1 des Abschnitts 4.1.2.7 beschrieben wurde. Zu einer Lösung von Desoxyanisoin (1,0 Äquiv.) in THF von –78°C wurde tropfenweise Lithiumbis(trimethylsilyl)amid (1,2 Äquiv.) gegeben. Die resultierende Lösung wurde 40 min lang bei –78°C gerührt, und es wurde tropfenweise eine Lösung von p-Allyloxybenzoylchlorid (1,1 Äquiv.) in THF zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde langsam über Nacht auf Raumtemperatur erwärmen gelassen, wodurch eine orangefarbene Lösung erhalten wurde. Das Gemisch wurde mit 0,5N HCl verdünnt, mit Ethylacetat extrahiert, mit 0,5N HCl, Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, auf Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum konzentriert. Das Rohprodukt wurde durch Umkristallisation gereinigt. Diese Verfahrensweise lieferte die angestrebte Verbindung, und der zurückgebliebene Rest wurde durch Flashsäulenchromatographie (Ethylacetat:Hexane 1:3) gereinigt, wodurch das 1,3-Diketon erhalten wurde.
    Stufe 2: Die Bildung des Isoxazols erfolgte in der gleichen Art und Weise wie in Stufe 4 von Abschnitt 4.1.2.7. Das in dieser Stufe erhaltene Produkt ist das 4-Methoxy-1-[4-(4-methoxyphenyl)-5-(4-prop-2-enyloxyphenyl)isoxazol-3-yl]benzol.
    Stufe 3: Selektive Entfernung der Allylschutzgruppe. Gleich wie Stufe 5 von Abschnitt 4.1.2.9. Das in dieser Stufe erhaltene Produkt ist das 4-[3,4-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol.
    Stufe 4: Alkylierung. Gleich wie Stufe 6 in Abschnitt 4.1.2.9. Das in dieser Stufe erhaltene Produkt ist das 4-Methoxy-1-{4-(4-methoxyphenyl)-5-[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]isoxazol-3-yl}benzol.
    Stufe 5: Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 2, beschrieben für Stufe C in Schema 1 (vergleiche Stufe 7 von Abschnitt 4.1.2.9). Das Produkt war das 4-{4-(4-Hydroxyphenyl)-3-[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]isoxazol-5-yl}phenol.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,70-7,50 (m, 2H), 4,35-4,42 (m, 2H), 3,30-3,50 (m, 2H), 2,90-3,25 (m, 4H), 1,60-1,80 (m, 4H), 1,30-1,45 (m, 2H); MS m/z 457 (MH+, 100%), C28H28N2O4 = 456 g/mol; HPLC-Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.11 Synthese von 3-[4,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1 synthetisiert. Desoxyanisoin und m-Anisoylchlorid wurden als Ausgangsmaterialien eingesetzt. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 1, die für die Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde. Das Produkt wurde als grau-weißer Feststoff erhalten.
    MS m/z 346 (MH+), C21H15NO4 = 345 g/mol; HPLC-Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.12 Synthese von 2-[4,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1 synthetisiert. Desoxyanisoin und o-Anisoylchlorid wurden als Ausgangsmaterialien eingesetzt. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 1, die für die Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde. Das erhaltene Produkt war ein grau-weißer Feststoff.
    MS m/z 346 (MH+), C21H15NO4 = 345 g/mol; HPLC-Reinheit = 96%.
  • 4.1.2.13 Synthese von 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-5yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1 synthetisiert. 1-(4-Methoxyphenyl)propan-1-on und p-Anisoylchlorid wurden als Ausgangsmaterialien eingesetzt. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 1, die für die Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde.
    ESMS m/z 268 (MH+), C16H13NO3 = 267 g/mol; HPLC-Reinheit = 85%.
  • 4.1.2.14 Synthese von 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-5-phenylisoxazol-4-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1 synthetisiert. Desoxyanisoin und Benzoylchlorid wurden als Ausgangsmaterialien eingesetzt. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 1, die für die Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde.
    ESMS m/z 330 (MH+), C21H15NO3 = 329 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.15 Synthese von 4-[5-(4-Fluorphenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1 synthetisiert. Desoxyanisoin und p-Fluorbenzoylchlorid wurden als Ausgangsmaterialien eingesetzt. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 1, die für die Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde.
    ESMS m/z 348 (MH+), C21H14FNO3 = 347 g/mol; HPLC-Reinheit = 85%.
  • 4.1.2.16 Synthese von 4-{4-(4-Hydroxyphenyl)-5-[3-(trifluormethoxy)phenyl]isoxazol-3-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1 synthetisiert. Desoxyanisoin und m-Trifluormethylbenzoylchlorid wurden als Ausgangsmaterialien eingesetzt. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 1, die für die Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde.
    ESMS m/z 414 (MH+), C22H14F3NO4 = 413 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.17 Synthese von 4-{4-(4-Hydroxyphenyl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]isoxarol-3-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde nach dem folgenden Schema 1 synthetisiert. Desoxyanisoin und p-Trifluormethylbenzoylchlorid wurden als Ausgangsmaterialien eingesetzt. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 1, die für die Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde.
    ESMS m/z 414 (MH+), C22H14F3NO4 = 413 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.18 Synthese von 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-(phenoxymethyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den Verfahrensweisen synthetisiert, die im Zusammenhang mit Schema 1 und Schema 8 beschrieben wurden.
    Stufe 1: Bildung des 1,3-Diketons. Gleich wie Stufe 1 von Abschnitt 4.1.2.7, mit der Ausnahme, dass 1-(4-Methoxyphenyl)propan-1-on als Ausgangsmaterial verwendet wurde.
    Stufe 2: Bildung des Isoxazolskeletts. Gleich wie Stufe 4 von Abschnitt 4.1.2.7. Das in dieser Stufe erhaltene Produkt war das 4-Methoxy-1-[5-(4-methoxyphenyl)-4-methylisoxazol-3-yl]benzol.
    Stufe 3: Bromierung von 4-Methylisoxazol. Eine Suspension des obigen 4-Methylisoxazols (1,0 Äq.), von N-Bromsuccinimid (NBS) (1,1 Äq.) und PhCO3H (katalytische Menge) in CCl4 wurde 2 h lang unter Argon am Rückfluss erhitzt, auf RT abgekühlt und filtriert. Das Filtrat wurde mit DCM verdünnt und mit 10% Na2S2O3-Lösung und 10% NaHCO3-Lösung gewaschen, getrocknet und im Vakuum konzentriert. Das resultierende Rohmaterial wurde durch Flashsäulenchromatographie gereinigt, wodurch 1-[4-(Brommethyl)-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-3-yl]-4-methoxybenzol als Produkt erhalten wurde.
    Stufe 4: Alkylierung: Zu einer Lösung von Phenol (1,1 Äq.) in trockenem THF von 0°C wurde pulverförmiges NaH (1,1 Äq.) unter Argon gegeben. Als die Bläschenbildung in der Lö sung abgebrochen war, wurde das oben genannte Bromid zu der Lösung zugegeben, und das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die resultierende Lösung wurde mit gesättigter NH4Cl-Lösung angesäuert und mit Ethylether extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden auf Na2SO4 getrocknet und am Rotationsverdampfer eingedampft, wodurch ein weißer Feststoff erhalten wurde.
    Stufe 5: Demethylierung. Der oben genannte weiße Feststoff wurde in das Produkt 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-(phenoxymethyl)isoxazol-3-yl]phenol umgewandelt, wobei Methode 1, beschrieben für Stufe C von Schema 1, angewendet wurde.
    ESMS m/e = 360 (MH+), C22H17NO4 = 359 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.19 Synthese von 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-(phenylthiomethyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den folgenden Verfahrensweisen, die für Schema 1 und Schema 8 beschrieben wurden, synthetisiert.
    Die Stufen 1-3 sind die gleichen wie diejenigen, die für die Stufen 1-3 von Abschnitt 4.1.2.18 beschrieben wurden.
    Stufe 4: Alkylierung. Gleich wie Stufe 3 von Abschnitt 4.1.2.18, mit der Ausnahme, dass Thiophenol anstelle von Phenol verwendet wurde.
    Stufe 5: Demethylierung. Gleich wie Stufe 5 von Abschnitt 4.1.2.18. Das erhaltene Produkt war 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-(phenylthiomethyl)isoxazol-3-yl]phenol
    ESMS m/e 376 (MH+), C22H17NO3S = 375 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.20 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon
  • Diese Verbindung wurde nach den Verfahrensweisen synthetisiert, die oben im Zusammenhang mit Schema 5 beschrieben wurden.
    Stufe 1: Gleich wie Stufe 1, beschrieben in Abschnitt 4.1.2.7.
    Stufe 2: Bildung des Isoxazolheterocyclus. Gleich wie Stufe 4 in Abschnitt 4.1.2.7. Das in dieser Stufe erhaltene Produkt war das 4-Methoxy-1-[5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-3-yl]benzol.
    Stufe 3: Bromierung. Zu einer Lösung des obigen Isoxazols (1,0 Äq.) in wasserfreiem CHCl3 am Rückfluss (70°C) unter Argon wurde tropfenweise Brom (1,01 Äq.) in einer wasserfreien CHCl3-Lösung gegeben. Das Gemisch wurde 50 min lang am Rückfluss gerührt, gefolgt von einer Zugabe von 10% Na2S2O3 in gesättigter wässriger NaHCO3-Lösung. Die wässrig-organische Lösung wurde aufgetrennt, und die wässrige Schicht wurde mit CH2Cl2 extrahiert. Die kombinierten organischen Phasen wurden auf Na2SO4 getrocknet und durch Rotationsverdampfen eingedampft, wodurch ein gelber Feststoff erhalten wurde, der mit Ethylacetat ("EtOAc") gewaschen wurde. Auf diese Weise wurde das 1-[4-Brom-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-3-yl]-4-methoxybenzol als hellgelber Feststoff mit einer Ausbeute von 92,5% erhalten.
    Stufe 4: Acylierung. Zu einer Lösung des oben genannten 4-Bromisoxazols (1,0 Äq.) in wasserfreiem THF von –98°C unter Argon wurde n-BuLi (1,2 Äq., 1,6 M in Hexan) gegeben. Die resultierende Lösung wurde 1 h lang bei –98°C gerührt und dann tropfenweise in eine Lösung von 4-Allyloxybenzoylchlorid (1,2 Äq.) in THF von –78°C durch eine Nadel mit doppelter Spitze überführt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei –78°C gerührt, mit Wasser verdünnt und dann mit 10%iger wässriger Citronensäure angesäuert. Die organische Schicht wurde auf Na2SO4 getrocknet und durch Flashsäulenchromatographie (CH2Cl2) gereinigt, wodurch das 3,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-prop-2-enyloxyphenylketon als acyliertes Produkt in Form eines hellgelben Feststoffs mit einer Ausbeute von 64% erhalten wurde.
    Stufe 5: Selektive Entfernung der Allylschutzgruppe. Gleich wie Stufe 5 von Abschnitt 4.1.2.9.
    Stufe 6: Alkylierung. Gleich wie Stufe 6 von Abschnitt 4.1.2.9.
    Stufe 7: Die Methylierung erfolgte nach der Methode 2, die im Zusammenhang mit Stufe C von Schema 1 beschrieben wurde. Zu einer Lösung der in der obigen Stufe 6 erhaltenen Verbindung in trockenem CH2Cl2 wurden 5,0 Äquivalente AlCl3 und 5,0 Äquivalente Ethanthiol ("EtSH") gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1,2 h lang bei RT gerührt, und die resultierende Aufschlämmung wurde dann in Eis-Wasser eingegossen. Die organische Schicht wurde abgetrennt. Die wässrige Schicht wurde dreimal mit EtOAc extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurde auf Na2SO4 getrocknet und im Vakuum einer Rotationseindampfung unterworfen, das erhaltene Reaktionsgemisch enthielt das gewünschte Produkt und eine monodemethylierte Verbindung als Nebenprodukt. Das Gemisch wurde durch HPLC aufgetrennt, wodurch als Produkt das 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon mit einer Ausbeute von 22% nach der HPLC-Reinigung erhalten wurde.
  • Das bei der HPLC-Reinigung erhaltene Produkt wurde in EtOAc/ges. NaHCO3 (1:1)-Lösung aufgelöst. Die zweischichtige Lösung wurde heftig geschüttelt und aufgetrennt. Die wässrige Schicht wurde mehrmals mit EtOAc extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden auf MgSO4 getrocknet und einem Eindampfen mittels Rotationsverdampfer unterworfen, wodurch ein gelber Feststoff erhalten wurde. Der Feststoff wurde dann in kaltem Aceton/konz. HCl (2:1) aufgleöst, und die Lösung wurde einem Eindampfen mittels Rotationsverdampfer im Vakuum unterworfen, wodurch das HCl-Salz des 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon als grau-weißes Pulver erhalten wurde. Die Umkristallisation mit Methanol/Wasser lieferte das Salz in Form von feinen, flockenförmigen Kristallen.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 10,2 (s, 1H, OH), 9,93 (s, 1H, OH), 7,8-6,72 (m, 12H, 3Ph), 4,4 (br t, 2H, OCH2-), 3,49 (m, 4H. N(CH2)2), 2,98 (br t, 2H, -CH2-N), 1,79-1,39 (m, 6H. -(CH2)3).
    ESMS m/e 485 (MH+), C29H28N2O5 = 484 g/mol; HPLC-Reinheit = 99%. Fp. 255°C Zers.
  • 4.1.2.21 Synthese von 5-(4-Hydroxyphenyl)-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon
  • Diese Verbindung wurde nach folgendem Schema 5 synthetisiert.
    Die Stufen 1-6 sind exakt die gleichen wie die entsprechenden Stufen von Abschnitt 4.1.2.20.
    Stufe 7: Gleich wie Stufe 7 von Abschnitt 4.1.2.20. Die partielle Demethylierung lieferte die Titelverbindung 5-(4-Hydroxyphenyl)-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon, die durch HPLC isoliert wurde.
    ESMS m/e 499 (MH+), C30H30N2O5 = 498 g/mol; HPLC-Reinheit = 97%.
  • 4.1.2.22 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(hydroxypiperidyl)ethoxy]phenylketon
  • Diese Verbindung wurde als Nebenprodukt der Reaktionen erhalten, die im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben wurden. Das in Stufe 7 von Abschnitt 4.1.2.20 erhaltene Rohmaterial wurde in DMSO aufgelöst und über Nacht bei RT stehengelassen. Die HPLC-Analyse dieses Gemisches zeigte die Bildung einer neuen Verbindung, deren Massengewicht um 16 Masseneinheiten höher war als von irgendeinem der Produkte, die bei der Reaktion von Stufe 7 von Abschnitt 4.1.2.20 gefunden wurden. Die HPLC-Isolierung lieferte so das N-Oxid 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(hydroxypiperidyl)ethoxy]phenylketon.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 10,22 (s, 1H), 9,94 (s, 1H), 7,82-7,79 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,46-7,43 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,34-7,32 (d, J = 8,30 Hz, 2H), 7,04-7,01 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,83-6,80 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78-6,75 (d, J = 8,30 Hz, 2H), 4,55 (br, 2H), 4,05 (br, 2H), 3,67 (br, 4H), 2,00-1,35 (m, 6H); LC/MS m/z 501 (MH+), C29H28N2O6 = 500 g/mol; HPLC-Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.23 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(hydroxypiperidyl)ethoxy]phenylketon
  • Diese Verbindung wurde als Nebenprodukt der Synthese erhalten, die im Abschnitt 4.1.2.21 beschrieben wurde. Das in Stufe 7 erhaltene Rohmaterial wurde in DMSO aufgelöst und über Nacht bei RT stehen gelassen. Die HPLC-Analyse dieses Gemisches zeigte die Bildung einer neuen Verbindung, deren Massengewicht um 16 Masseneinheiten höher war als im Falle irgendeines der Produkte, die zuvor charakterisiert wurden. Die HPLC-Isolierung lieferte das 3-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(hydroxypiperidyl)ethoxy]phenylketon.
    ESMS m/e 515 (MH+), C30H30N2O6 = 514 g/mol; HPLC-Reinheit = 88%.
  • 4.1.2.24 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-hydroxyphenylketon
  • Diese Verbindung wurde nach den Verfahrensweisen synthetisiert, die im Zusammenhang mit Schema 5 beschrieben wurden.
    Die Stufen 1-4 wurden exakt in der gleichen Art und Weise wie die entsprechenden Stufen im Abschnitt 4.1.2.20 durchgeführt.
    Stufe 5: Die Abspaltung der Schutzgruppe erfolgte nach Methode 3, beschrieben für Stufe C in Schema 1. Diese Stufe lieferte das gewünschte 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-hydroxyphenylketon als Produkt.
    ESMS m/e 374 (MH+), C22H15NO5 = 373 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.25 Synthese von 4-[4-Brom-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den Verfahrensweisen synthetisiert, die im Zusammenhang mit Schema 4 beschrieben wurden.
    Die Stufen 1-3 sind exakt die gleichen wie die entsprechenden Stufen in Abschnitt 4.1.2.20.
    Stufe 4: Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 1, beschrieben für Stufe C in Schema 1.
    ESMS m/e 332/334 (MH+), C15H10BrNO3 = 331/333 g/mol (1 Br); HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.26 Synthese von 4-[4-(Brommethyl)-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den oben im Zusammenhang mit Schema 1 und Schema 8 beschriebenen Verfahrensweisen hergestellt.
    Die Stufen 1-3 sind die gleichen wie die entsprechenden Stufen in Abschnitt 4.1.2.20.
    Stufe 4: Die Demethylierung erfolgte nach der Methode 3, die für Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde. Zu einer Lösung des obigen Isoxazols in DCM von –78°C wurden tropfenweise 5 Äq. Bortribromid (1M in DCM-Lösung) gegeben. Das Gemisch wurde langsam auf RT erwärmt und 1,5 h lang unter Argon gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde durch Zugabe von Wasser abgeschreckt und auf einen pH-Wert von 5 neutralisiert. Es wurde mit EtOAc extrahiert, mit Na2SO4 getrocknet und im Vakuum konzentriert, wodurch ein Rohmaterial erhalten wurde. Die Reinigung durch HPLC lieferte 10% des gewünschten Produkts.
    ESMS m/e 346/348 (MH+, 100%), C16H12BrNO3 = 345/347 g/mol (1 Br); HPLC-Reinheit = 80%.
  • 4.1.2.27 Synthese von 4-{5-(4-Hydroxyphenyl)-4-[(4-hydroxyphenoxy)methyl]isoxazol-3-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den Verfahrensweisen synthetisiert, die oben im Zusammenhang mit Schema 1 und Schema 8 beschrieben wurden.
    Die Stufen 1, 2 und 3 sind die gleichen wie die entsprechenden Stufen in Abschnitt 4.1.2.18.
    Stufe 4: Alkylierung. Gleich wie Stufe 4 von Abschnitt 4.1.2.18, mit der Ausnahme, dass 4-(Benzyloxy)phenol bei dieser Verfahrensweise eingesetzt wurde. Das in dieser Stufe erhaltene Produkt ist das 1-{[3,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl]methoxy}-4-(phenylmethoxy)benzol.
    Stufe 5: Die Demethylierung erfolgte nach der Methode 3, die im Zusammenhang mit der Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde. Das erhaltene Produkt war das 4-{5-(4-Hydroxyphenyl)-4-[(4-hydroxyphenoxy)methyl]isoxazol-3-yl}phenol.
    ESMS m/e 376 (MH+), C22H17NO5 = 375 g/mol; HPLC-Reinheit = 80%.
  • 4.1.2.28 Synthese von 4-[4-(Hydroxymethyl)-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde als Nebenprodukt bei der Synthese des Produkts im Abschnitt 4.1.2.27 erhalten. Die Isolierung wurde durch HPLC erreicht.
    ESMS m/z 284 (MH+), C16H13NO4 = 283 g/mol, HPLC-Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.29 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-7-ol
  • Diese Verbindung wurde nach den im Schema 1 beschriebenen Methoden synthetisiert, unter Verwendung von 6-Methoxy-1-tetralon und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien. Die Demethylierung erfolgte nach der Methode 1 von Stufe C in Schema 1.
    ESMS m/e 280 (MH+), C17H13NO3 = 279 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.30 Synthese von 4-(7-Methoxy-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-3-yl)phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.29 beschrieben, synthetisiert. Die partielle Demethylierung lieferte das monomethylierie Produkt 4-(7-Methoxy-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-3-yl)phenol, das durch HPLC isoliert wurde, wodurch das gewünschte Produkt erhalten wurde.
    ESMS m/e 294 (MH+), C18H15NO3 = 293 g/mol; HPLC-Reinheit = 89%.
  • 4.1.2.31 Synthese von 3-[3-(4-Hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.8 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 4'-Methoxyacetophenon und m-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien eingesetzt wurden.
    ESMS m/e 254 (MH+), C15H11NO3 = 253 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.32 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)naphtho[1,2-c]isoxazol-7-ol
  • Diese Verbindung wurde nach den folgenden, im Zusammenhang mit Schema 1 beschriebenen Methoden synthetisiert.
    Stufe 1: Bildung des 1,3-Diketons. Gleich wie Stufe 1 von Abschnitt 4.1.2.7, mit der Ausnahme, dass 6-Methoxy-1-tetralon und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien eingesetzt wurden.
    Stufe 2: Bildung des Isoxazolheterocyclus. Gleich wie Stufe 4 von Abschnitt 4.1.2.7. Das in dieser Stufe erhaltene Produkt war das 7-Methoxy-3-(4-methoxyphenyl)-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol.
    Stufe 3: Oxidation mit 2,3-Dichlor-5,6-dicyano-1,4-benzochinon ("DDQ"). Zu dem Produkt der Stufe 2 in trockenem Toluol wurde DQ (1,1 Äq.) gegeben. Die Lösung wurde über Nacht am Rückfluss gekocht, mit gesättigter NaHCO3- und K2CO3-Lösung abgeschreckt und mit CH2Cl2 extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden auf Mg2SO4 getrocknet und im Vakuum eingedampft, wodurch ein fester Rückstand erhalten wurde. Die Reinigung durch Flashsäulenchromatographie lieferte das Produkt 7-Methoxy-3-(4-methoxyphenyl)naphtho[1,2-c]isoxazol.
    Stufe 4: Die Demethylierung erfolgte nach der Methode 1, die im Zusammenhang mit Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde.
    ESMS m/e 278 (MH+), C17H11NO3 = 277 g/mol; HPLC-Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.33 Synthese von 3-(3-Hydroxyphenyl)-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-7-ol
  • Diese Verbindung wurde in gleicher Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.29 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass m-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien eingesetzt wurde.
    ESMS m/e 280 (MH+), C17H13NO3 = 279 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.34 Synthese von 3-(2-Hydroxyphenyl)-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-7-ol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie in Abschnitt 4.1.2.29 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass o-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien eingesetzt wurde.
    ESMS m/e 280 (MH+), C17H13NO3 = 279 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.35 Synthese von 3-[5-(3-Hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie in Abschnitt 4.1.2.8 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 3'-Methoxyacetophenon und m-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 254 (MH+), C15H11NO3 = 253 g/mol; HPLC-Reinheit = 97%.
  • 4.1.2.36 Synthese von 2-[3-(3-Hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie in Abschnitt 4.1.2.8 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 3'-Methoxyacetophenon und o-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 254 (MH+), C15H11NO3 = 253 g/mol; HPLC-Reinheit = 96%.
  • 4.1.2.37 Synthese von 2-[5-(2-Hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie in Abschnitt 4.1.2.8 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 2'-Methoxyacetophenon und o-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 254 (MH+), C15H11NO3 = 253 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.38 Synthese von 3-[3-(3-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den Verfahrensweisen synthetisiert, die im Zusammenhang mit Schema 1 und Schema 3 beschrieben wurden.
    Stufe 1: Die Bildung des 1,3-Diketons erfolgt in der gleichen Art und Weise wie in Stufe 1, wie in Abschnitt 4.1.2.7 beschrieben, wobei 3'-Methoxyacetophenon und m-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    Stufe 2: Alkylierung. Eine THF-Lösung des obigen 1,3-Diketons (1,0 Äq.) wurde tropfenweise zu einer Suspension von Natriumhydrid (1,1 Äq.) in THF von 0°C gegeben. Das Gemisch wurde 30 min lang bei RT gerührt und anschließend mit Iodmethan (1,1 Äq.) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei RT über Nacht gerührt, in gesättigte wässrige NH4Cl-Lösung eingegossen und mit Ether und DCM extrahiert. Die organischen Extrakte wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, mit MgSO4 getrocknet und im Vakuum konzentriert, wodurch das 1,3-Bis-(3-methoxyphenyl)-2-methylpropan-1,3-dion als Produkt erhalten wurde.
    Stufe 3: Bildung von Isoxazolheterocyclus. Gleich wie Stufe 4, wie im Abschnitt 4.1.2.7 beschrieben. Das in dieser Stufe erhaltene Produkt ist das 3-Methoxy-1-[5-(3-methoxyphenyl)-4-methylisoxazol-3-yl]benzol.
    Stufe 4: Die Demethylierung erfolgte nach der Methode 1 von Stufe C von Schema 1, wodurch das gewünschte Produkt erhalten wurde.
    ESMS m/e 268 (MH+), C16H13NO3 = 267 g/mol; HPLC-Reinheit = 94%.
  • 4.1.2.39 Synthese von 2-[3-(3-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.38 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 3'-Methoxyacetophenon und o-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 268 (MH+), C16H13NO3 = 267 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.40 Synthese von 2-[3-(2-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.38 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 2'-Methoxyacetophenon und o-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 268 (MH+), C16H13NO3 = 267 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.41 Synthese von 3-[4-Ethyl-3-(3-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den Verfahrensweisen synthetisiert, die oben im Zusammenhang mit Schema 1 und Schema 3 beschrieben wurden.
    Die Stufe 1 wurde wie die entsprechende Stufe durchgeführt, die im Abschnitt 4.1.2.38 beschrieben wurde.
    Stufe 2: Die Alkylierung erfolgte wie Stufe 2 von Abschnitt 4.1.2.38, wobei Iodethan als Alkylierungsmittel verwendet wurde.
    Die Stufen 3 und 4 sind genau die gleichen Stufen wie die entsprechenden Stufen, beschrieben in Abschnitt 4.1.2.38. Das erhaltene Produkt war das 3-[4-Ethyl-3-(3-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol.
    ESMS m/e 282 (MH+), C17H15NO3 = 281 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.42 Synthese von 2-[4-Ethyl-3-(3-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.41 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 3'-Methoxyacetophenon und o-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 282 (MH+), C17H15NO3 = 281 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.43 Synthese von 2-[4-Ethyl-3-(2-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.41 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 2'-Methoxyacetophenon und o-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 282 (MH+), C17H15NO3 = 281 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.44 Synthese von 3-[4-(4-Hydroxyphenyl)-5-(3-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.7 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 3'-Methoxyacetophenon und m-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/z 346 (MH+), C21H15NO4 = 345 g/mol; HPLC-Reinheit = 94%.
  • 4.1.2.45 Synthese von 2-[3-(3-Hydroxyphenyl)-4-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.7 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 3'-Methoxyacetophenon und o-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/z 346 (MH+), C21H15NO4 = 345 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.46 Synthese von 2-[4-(4-Hydroxyphenyl)-5-(2-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.2 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 2'-Methoxyacetophenon und o-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/z 346 (MH+), C21H15NO4 = 345 g/mol; HPLC-Reinheit = 94%.
  • 4.1.2.47 Synthese von 3-(2-Hydroxyphenyl)-4,5-dihydronaphtho[2,1-d]isoxazol-7-ol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.29 beschrieben, synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 6-Methoxy-1-tetralon und o-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien eingesetzt wurden. Die Demethylierung erfolgte nach der Methode 1, beschrieben in Stufe C des Schemas 1, wodurch das gewünschte Produkt erhalten wurde.
    ESMS m/e 280 (MH+), C17H13NO3 = 279 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.48 Synthese von 2-(7-Methoxy-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-3-yl)phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise, wie im Abschnitt 4.1.2.47 beschrieben, synthetisiert. Die partielle Demethylierung lieferte das 2-(7-Methoxy-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-3-yl)phenol als monomethyliertes Produkt.
    ESMS m/e 294 (MH+), C18H15NO3 = 293 g/mol; HPLC-Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.49 Synthese von 2-[5-(3-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung ist das Regioisomere der im Abschnitt 4.1.2.39 beschriebenen Verbindung. Beide Regioisomeren wurden unter Anwendung der in diesem Abschnitt beschriebenen Methoden erhalten. Die zwei Regioisomeren wurden durch HPLC aufgetrennt, wobei eine C18-Säule (Reliasil-BDXC18, 10 × 50 mm, Ranin Dynamax) verwendet wurde, und wobei ein erster Puffer von H2O/0,1 % TFA und ein zweiter Puffer von HCN/0,1 % TFA durch einen Gradienten von 5-95% des zweiten Puffers über einen Zeitraum von neun Minuten mit einer Fließgeschwindigkeit von zehn ml/min hindurchlaufen gelassen wurde.
    ESMS m/e 268 (MH+), C16H13NO3 = 267 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.50 Synthese von 2-[4-Ethyl-5-(3-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung ist das Regioisomere der im Abschnitt 4.1.2.42 beschriebenen Verbindung. Beide Regioisomeren wurden unter Anwendung der in diesem Abschnitt beschriebenen Methoden erhalten. Die zwei Regioisomeren wurden durch HPLC aufgetrennt, wobei eine C18-Säule (Reliasil-BDXC18, 10 × 50 mm, Ranin Dynamax) verwendet wurde, und wobei ein erster Puffer von H2O/0,1 % TFA und ein zweiter Puffer von HCN/0,1 % TFA durch einen Gradienten von 5-95% des zweiten Puffers über einen Zeitraum von neun Minuten mit einer Fließgeschwindigkeit von zehn ml/min hindurchlaufen gelassen wurde.
    ESMS m/e 282 (MH+), C17H15NO3 = 281 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.51 Synthese von 2-[4-(4-Hydroxyphenyl)-5-(3-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung ist das Regioisomere der im Abschnitt 4.1.2.45 beschriebenen Verbindung. Beide Regioisomeren wurden unter Anwendung der in diesem Abschnitt beschriebenen Methoden erhalten. Die zwei Regioisomeren wurden durch HPLC aufgetrennt, wobei eine C18-Säule (Reliasil-BDXC18, 10 × 50 mm, Ranin Dynamax) verwendet wurde, und wobei ein erster Puffer von H2O/0,1 % TFA und ein zweiter Puffer von HCN/0,1 % TFA durch einen Gradienten von 5-95% des zweiten Puffers über einen Zeitraum von neun Minuten mit einer Fließgeschwindigkeit von zehn ml/min hindurchlaufen gelassen wurde.
    ESMS m/z 346 (MH+), C21H15NO4 = 345 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.52 Synthese von 3-(5-(3-Hydroxyphenyl)-4-{[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]methyl}isoxazol-3-yl)phenol
  • Diese Verbindung wird wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert. Die verwendeten Ausgangsmaterialien waren 3'-Methoxyacetophenon, m-Anisoylchlorid und 4-Allyloxybenzylbromid.
    ESMS m/z 471 (MH+), C29H30N2O4 = 470 g/mol; HPLC-Reinheit = 88,3%.
  • 4.1.2.53 Synthese von 3-(3-Hydroxyphenyl)-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass m-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien verwendet wurde. Das Produkt wurde als Salzsäure-Salz in Form eines grau-weißen Pulvers erhalten.
    1H-NMR (DMSO-d6) δ 7,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H, ArH, Regioisomeres 1), 7,82 (d, J = 8,76 Hz, 2H, ArH, Regioisomeres 2), 7,44 (d, J = 8,76 Hz, 2H, ArH, Regioisomeres 2), 7,36 (d, J = 8,76 Hz, 2H, ArH, Regioisomeres 1), 7,30-7,09 (m, 2H, ArH), 7,04-7,02 (m, 2H, ArH), 6,94-6,79 (m, 4H, ArH), 4,41 (br t, 2H, OCH2), 3,46 (br m, 4H, NCH2), 2,79 (br m, 2H, NCH2), 1,80-1,32 (m, 6H, CH2); ESMS m/e 485 (MH+), C29H28N2O5 = 484 g/mol; HPLC-Reinheit = 100%.
  • 4.1.2.54 Synthese von 2-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-phenylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.3 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass o-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien verwendet wurde.
    MS m/z 330 (MH+), C21H15NO3 = 329 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.55 Synthese von 3-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-phenylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.54 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass m-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien verwendet wurde.
    MS m/z 330 (MH+), C21H15NO3 = 329 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.56 Synthese von 2-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.54 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass o-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien verwendet wurde.
    ESMS m/z 282 (MH+), C17H15NO3 = 281 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.57 Synthese von 3-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.54 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass m-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien verwendet wurde.
    ESMS m/z 282 (MH+), C17H15NO3 = 281 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.58 Synthese von 2-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.13 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass o-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien verwendet wurde.
    ESMS m/z 268 (MH+), C16H13NO3 = 267 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.59 Synthese von 3-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.13 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass m-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien verwendet wurde.
    ESMS m/z 268 (MH+), C16H13NO3 = 267 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.60 Synthese von 2-[3-(4-Hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.8 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass o-Anisoylchlorid als eines der Ausgangsmaterialien verwendet wurde.
    ESMS m/z 254 (MH+), C15H11NO3 = 253 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.61 Synthese von 4-(5-(4-Hydroxyphenyl)-4-{[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]methyl}isoxazol-3-yl)phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert. Die verwendeten Ausgangsmaterialien waren 4'-Methoxyacetophenon, p-Anisoylchlorid und 4-Allyloxybenzylbromid.
    1H-NMR (d6-DMSO&CDCl3) δ 1,8-2,05 (2H, m), 2,62-2,75 (4H, m), 2,78-2,85 (2H, m), 3,32-3,38 (2H, m), 3,51 (2H, d, J = 11,9 Hz), 3,88 (2H, s), 4,35 (2H, t, J = 4,5 Hz), 6,71 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,74 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,76 (2H, d, J = 8,8Hz), 6,96 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,22 (2H, d, J = 8,6Hz), 7,35 (2H, d, J = 8,8Hz); ESMS m/z 471 (MH+), C29H30N2O4 = 470 g/mol; HPLC-Reinheit = 85,4%.
  • 4.1.2.62 Synthese von 2-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung ist das Regioisomere der im Abschnitt 4.1.2.58 beschriebenen Verbindung. Beide Regioisomeren wurden unter Anwendung der in diesem Abschnitt beschriebenen Methoden erhalten. Die zwei Regioisomeren wurden durch HPLC aufgetrennt, wobei eine C18-Säule (Reliasil-BDXC18, 10 × 50 mm, Ranin Dynamax) verwendet wurde, und wobei ein erster Puffer von H2O/0,1 % TFA und ein zweiter Puffer von HCN/0,1 % TFA durch einen Gradienten von 5-95% des zweiten Puffers über einen Zeitraum von neun Minuten mit einer Fließgeschwindigkeit von zehn ml/min hindurchlaufen gelassen wurde.
    ESMS m/z 268 (MH+), C16H13NO3 = 267 g/mol; HPLC-Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.63 Synthese von 1-(4-Hydroxyphenyl)-4,5-dihydronaphtho[1,2-d]isoxazol-8-ol
  • Diese Verbindung wurde nach den im Zusammenhang mit Schema 1 beschriebenen Verfahrensweisen synthetisiert, wobei 7-Methoxy-2-tetralon und Phenyl-4'-allyloxybenzoat als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung erfolgte nach der Methode 1 von Stufe C.
    ESMS m/e 280 (MH+), C17H13NO3 = 279 g/mol; HPLC-Reinheit = 92%.
  • 4.1.2.64 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-8-ol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.29 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 7-Methoxy-1-tetralon und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 280 (MH+), C17H13NO3 = 279 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.65 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-6-ol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.29 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 5-Methoxy-1-tetralon und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 280 (MH+), C17H13NO3 = 279 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.66 Synthese von 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-iodisoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde gemäß dem Schema 4 synthetisiert.
    Die Stufen 1-3 wurden wie die entsprechenden Stufen, beschrieben im Abschnitt 4.1.2.20, durchgeführt, wodurch das 1-[4-Brom-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-3-yl]-4methoxybenzol erhalten wurde.
    Stufe 4: Zu dem oben genannten 4-Bromisoxazol in THF von –78°C wurden tropfenweise 1,1 Äq. einer n-BuLi-Lösung (1,6 M in Hexan) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1 h lang bei –78°C gehalten, gefolgt von der Zugabe von 1,1 Äq. I2 in THF-Lösung. Das Reaktionsgemisch wurde auf RT erwärmt und über Nacht gerührt und in gesättigte wässrige NH4Cl-Lösung eingegossen und mit DCM extrahiert. Die organischen Extrakte wurden mit wässriger Na2S2O3-Lösung und mit Kochsalzlösung gewaschen, mit MgSO4 getrocknet und im Vakuum konzentriert, wodurch das 1-[4-Iod-5-(3-methoxyphenyl)isoxazol-3-yl]-3-methoxybenzol erhalten wurde.
    Stufe 5: Die Demethylierung erfolgte nach der Methode 1, beschrieben für Stufe C im Schema 1.
    1H-NMR [(CD3)2CO]: δ 7,08 (m, 4H), 7,72 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 8,86 (s, 1H), 9,10 (s, 1H); ESMS m/z 380 (MH+), C15H10INO3 = 379 g/mol; HPLC-Reinheit = 85,8%.
  • 4.1.2.67 Synthese von 4-[4-Chlor-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.66 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 4 N-Chlorsuccinimid (NCS) als Elektrophil verwendet wurde, um das Isoxazolanion abzufangen.
    1H-NMR [(CD3)2CO]: δ 7,09 (m, 4H), 7,82 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,98 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 9,70 (br s, 2H); ESMS m/z 288 (MH+), C15H10ClNO3 = 287 g/mol; HPLC-Reinheit = 96,0%.
  • 4.1.2.68 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)naphtho[1,2-c]isoxazol-8-ol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.32 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass 7-Methoxy-1-tetralon und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    ESMS m/e 278 (MH+), C17H11NO3 = 277 g/mol; HPLC-Reinheit = 80%.
  • 4.1.2.69 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-benrylcarboxamid
  • Diese Verbindung wurde nach den Verfahrensweisen synthetisiert, die oben im Zusammenhang mit Schema 4 beschrieben wurden.
    Die Stufen 1-3 wurden wie die entsprechenden Stufen im Abschnitt 4.1.2.20 durchgeführt, um 1-[4-Brom-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-3-yl]-4-methoxybenzol zu erhalten.
    Stufe 4: Zu dem oben genannten 4-Bromisoxazol in THF von –78°C wurden tropfenweise 1,1 Äq. einer n-BuLi-Lösung (1,6 M in Hexan) gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1 h lang bei –78°C gehalten, gefolgt von einem Einblasen von Kohlendioxidgas aus einem mit ei nem Messgerät kontrollierten Zylinder über einen Zeitraum von ca. 20 min. Das Reaktionsgemisch wurde sorgfältig auf RT erwärmt, in gesättigte wässrige NH4Cl-Lösung eingegossen und mit DCM extrahiert. Die organischen Extrakte wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, mit MgSO4 getrocknet und im Vakuum konzentriert, wodurch 3,5-Bis-(3-methoxyphenyl)isoxazol-4-carbonsäure erhalten wurde.
    Stufe 5: Bildung der Amidbindung. 4-Carboxyisoxazol (erhalten in Stufe 4) wurde in THF aufgelöst und mit EDC HCl-Salz/HOBt/DIEA (1,5:1,5:1,5) aktiviert und 5 min lang bei RT stehengelassen. Dann wurde Benzylamin (1,5 Äquiv.) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei RT stehengelassen und danach mit EtOAc verdünnt und mit 10%iger Citronensäurelösung, 10%iger NaHCO3-Lösung und Kochsalzlösung gewaschen. Das Lösungsmittel wurde entfernt. Der Rückstand wurde in 90% MeCN/H2O lyophilisiert, und es wurden Proben davon abgenommen. Die Produkte wurden durch Flashsäulenchromatographie (EtOAc/Petrolether) gereinigt, wodurch reines [3,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-benzamid erhalten wurde.
    Stufe 6: Die Demethylierung erfolgte gemäß Methode 3 in Stufe C im Schema 1.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 4,39 (2H, d, J = 5,86 Hz), 6,79 (2H, d, J = 8,79 Hz), 6,83 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,22-7,24 (1H, m), 7,26-7,32 (2H, m), 7,50 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,56 (2H, d, J = 8,79 Hz), 9,20 (1H, t, J = 5,95 Hz), 9,87 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 387 (MH+), C23H18N2O4 = 386 g/mol; HPLC-Reinheit = 96,4%.
  • 4.1.2.70 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N,N-dibutylcarboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 N,N-Di-n-butylamin für die Bildung der Amidbindung verwendet wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 0,48 (3H, t, J = 7,33 Hz), 0,85 (2H, q, J = 7,33 Hz), 0,90 (3H, t, J = 7,33 Hz), 1,00 (2H, t, J = 7,42 Hz), 1,23-1,31 (3H, m), 1,51 (2H, t, J = 7,24 Hz), 2,86-2,91 (2H, m), 3,43-3,50 (1H, m), 6,86 (2H, d, J = 8,61 Hz), 6,90 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,51 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,58 (2H, d, J-8,61 Hz), 9,93 (1H, s), 10,13 (1H, s); ESMS m/z 409 (M + H), C24H28N2O4 = 408 g/mol; HPLC-Reinheit = 96,7%.
  • 4.1.2.71 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-[3-(2-oxopyrrolidinyl)propyl]carboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 1-(3-Aminopropyl)pyrrolidin-2-on zur Bildung der Amidbindung eingesetzt wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 1,60 (2H, t, J = 7,05 Hz), 1,90 (2H, d, J = 7,60 Hz), 2,19 (2H, d, J = 8,06 Hz), 3,10 (2H, t, J = 7,14 Hz), 3,16 (2H, q, J = 6,59 Hz), 3,25 (2H, t, J = 6,96 Hz), 3,87 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,62 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,79 Hz), 8,64 (1H, t, J = 5,58 Hz), 9,88 (1H, s), 10,11 (1H, s); ESMS m/z 422 (M + H), C23H23N3O5 = 421 g/mol; HPLC-Reinheit = 92,8%.
  • 4.1.2.72 Synthese von '[3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-(2-phenylethyl)carboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 Benzethylamin zur Bildung der Amidbindung eingesetzt wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 2,75 (2H, d, J = 7,23 Hz), 7,46 (2H, d, J = 6,72 Hz), 6,84 (2H, d, J = 8,61 Hz), 6,88 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,12-7,20 (3H, m), 7,23-7,26 (2H, m), 7,49 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,56 (2H, d, J = 8,79 Hz), 8,76 (1H, t, J = 5,49 Hz), 9,86 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 401 (M + H), C24H20N2O4 = 400 g/mol; HPLC-Reinheit = 82,0%.
  • 4.1.2.73 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-[(4-hydroxyphenyl)methyl]carboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 p-Methoxybenzylamin zur Bildung der Amidbindung eingesetzt wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 4,28 (2H, d, J = 5,86 Hz), 6,68 (2H, d, J = 8,43 Hz), 6,79 (2H, d, J = 8,79 Hz), 6,82 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,03 (2H, d, J = 8,24 Hz), 7,49 (2H, d, J = 8,97 Hz), 7,55 (2H, d, J = 8,79 Hz), 9,08 (1H, t, J = 5,86 Hz), 9,87 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 403 (M + H), C23H18N2O5 = 402 g/mol; HPLC-Reinheit = 93,0%.
  • 4.1.2.74 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-(3-pyridylmethyl)carboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 3-Pyridylmethylamin zur Bildung der Amidbindung eingesetzt wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 4,42 (2H, d, J = 5,86 Hz), 6,79 (2H, d, J = 8,79 Hz), 6,84 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,34 (2H, dd, J = 7,69 Hz, 4,76 Hz), 7,46 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,53 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,62 (2H, d, J = 7,69 Hz), 9,28 (1H, t, J = 5,86 Hz), 9,95 (1H, s), 10,20 (1H, s); ESMS m/z 388 (M + H), C22H17N3O4 = 387 g/mol; HPLC-Reinheit = 92,7%.
  • 4.1.2.75 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-(2-pyridylmethyl)carboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 2-Pyridylmethylamin zur Bildung der Amidbindung eingesetzt wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 4,49 (2H, d, J = 6,04 Hz), 6,82 (2H, d, J = 8,61 Hz), 6,86 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,21 (1H, d, J = 7,88 Hz), 7,29 (1H, dd, J = 6,8 Hz, 5,0 Hz), 7,55 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,63 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,71 (1H, td, J = 7,5 Hz, 1,65 Hz), 8,51 (1H, d, J = 4,03 Hz), 9,29 (1H, t, J = 5,86 Hz), 9,86 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 388 (M + H), C22H17N3O4 = 387 g/mol; HPLC-Reinheit = 91,9%.
  • 4.1.2.76 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N,N-dimethylcarboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 N,N-Dimethylamin zur Bildung der Amidbindung eingesetzt wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 2,72 (3H, s), 6,90 (2H, d, J = 8,79 Hz), 6,94 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,46 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,79 Hz), 10,04 (1H, s), 10,28 (1H, s); ESMS m/z 325 (M + H), C18H16N2O4 = 324 g/mol; HPLC-Reinheit = 95,6%.
  • 4.1.2.77 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-ethylcarboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 Ethylamin zur Bildung der Amidbindung eingesetzt wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 2,49 (3H, t, J = 1,83 Hz), 3,18-3,25 (2H, m), 6,86 (2H, d, J = 8,61 Hz), 6,91 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,55 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,62 (2H, d, J = 8,79 Hz), 8,64 (1H, t, J = 5,49 Hz), 9,87 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 325 (M + H), C18H16N2O4 = 324 g/mol; HPLC-Reinheit = 95,1 %.
  • 4.1.2.78 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-pyrrolidinylethoxy)phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 (2-Chlorethyl)pyrrolidin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 471 (MH+), C28H26N2O5 = 470 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.79 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-morpholin-4-ylethoxy)phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 4-(2-Chlorethyl)morpholin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 487 (MH+), C28H26N2O6 = 486 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.80 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[3-(dimethylamino)propoxy]phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 (3-Chlorpropyl)dimethylamin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 459 (MH+), C27H26N2O5 = 458 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.81 Synthese von 4-[3-(Diethylamino)propoxy]phenyl-3,5-bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-ylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 (3-Chlorpropyl)diethylamin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 487 (MH+), C29H30N2O5 = 486 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.82 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-cyclopropylcarboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 Cyclopropylamin für die Bildung der Amidbindung verwendet wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 0,04-0,08 (2H, m), 0,34-0,37 (2H, m), 2,48-2,51 (1H, m), 6,57 (2H, d, J = 8,61 Hz), 6,62 (2H, d, J = 8,79 Hz), 7,23 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,30 (2H, d, J = 8,79 Hz), 8,40-8,41 (1H, m), 9,64 (1H, s), 9,87 (1H, s); ESMS m/z 337 (M + H, C19H16N2O4 = 336 g/mol; HPLC-Reinheit = 81,1 %.
  • 4.1.2.83 Synthese von [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-cyclobutylcarboxamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.69 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 5 Cyclobutylamin für die Bildung der Amidbindung verwendet wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 1,59-1,67 (2H, m), 1,78-1,88 (2H, m), 2,15-2,22 (2H, m), 4,31-4,37 (1H, m), 6,85 (2H, d, J = 8,59 Hz), 6,90 (2H, d, J = 8,77 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,59 Hz), 7,60 (2H, d, J = 8,77 Hz), 8,88 (1H, d, J = 7,59 Hz), 9,87 (1H, s), 10,11 (1H, s); ESMS m/z 351 (M + H), C20H18N2O4 = 350 g/mol; HPLC-Reinheit = 98,0%.
  • 4.1.2.84 Synthese von 4-[2-(Diethylamino)ethoxy]phenyl-3,5-bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-ylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 (2-Chlorethyl)diethylamin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 473 (MH+), C28H28N2O5 = 472 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.85 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(dimethylamino)ethoxy]phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 (2-Chlorethyl)dimethylamin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 445 (MH+), C26H24N2O5 = 444 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.86 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-{2-[methylbenzylamino]ethoxy}phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 (2-Chlorethyl)methylbenzylamin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 521 (MH+), C32H28N2O5 = 520 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.87 Synthese von 2-(4-{[3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]carbonyl}phenoxy)-N,N-dimethylacetamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 2-Chlor-N,N-dimethylacetamid für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 459 (MH+), C26H22N2O6 = 458 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.88 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(1-methylpyrrolidin-2-yl)ethoxy]phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 2-(2-Chlorethyl)-1-methylpyrrolidin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 485 (MH+), C29H28N2O5 = 484 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.89 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[(1-methyl-(3-piperidyl))methoxy]phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 2-(Chlormethyl)-1-methylpiperidin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 485 (MH+), C29H28N2O5 = 484 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.90 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[3-(4-methylpiperazinyl)propoxy]phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 1-(2-Chlorethyl)-4-methylpiperazin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 514 (MH+), C30H31N3O5 = 513 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.91 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(1-methyl-(4-piperidyloxy))phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert, mit der Ausnahme, dass in Stufe 6 4-Chlor-1-methylpiperidin für die Alkylierung eingesetzt wurde.
    LC/MS m/z 471 (MH+), C28H26N2O5 = 470 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.92 Synthese von 3-Ethyl-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Die Synthese dieser Verbindung erfolgte unter Anwendung der im Zusammenhang mit Schema 7 beschriebenen Methoden.
    Stufe 1: Die Synthese des 1,3-Diketons erfolgte nach der gleichen Verfahrensweise wie im Falle von Stufe 1 im Abschnitt 4.1.2.7, wobei p-Anisoylchlorid und 1-(2-Brom-4-methoxyphenyl)butan-1-on als Ausgangsmaterialien eingesetzt wurden.
    Stufe 2: Die Isoxazolbildung erfolgte nach der gleichen Verfahrensweise, wie im Zusammenhang mit Stufe 4 im Abschnitt 4.1.2.7 beschrieben, wodurch 1-[5-(2-Brom-4-methoxyphenyl)-4-ethylisoxazol-3-yl]-4-methoxybenzol erhalten wurde.
    Stufe 3: Zu einer Lösung von Phenylbromisoxazol (1 Äq., erhalten in der obigen Stufe) in THF von –78°C wurde nBuLi (1,1 Äq., 1,6 M in Hexan) gegeben. Nach 1,5-stündigem Rühren der Lösung bei –78°C wurde sie tropfenweise in eine Lösung des Bromethans (1,2 Äq.) in THF von –78°C eingegeben. Nach 15 min wurde die Lösung auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und über Nacht gerührt. Nach Abschrecken der Reaktion mit 1 M HCl wurden die Schichten getrennt, und die wässrige Schicht wurde mit EtOAc (3x) extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden mit gesättigter NaHCO3-Lösung (1x) und Kochsalzlösung gewaschen, auf Na2SO4 getrocknet, filtriert und konzentriert, wodurch ein Rohproduktgemisch erhalten wurde. Die Flashchromatographie lieferte das alkylierte Produkt.
    Stufe 4: Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der in Stufe C von Schema 1 beschriebenen Methode.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,61 (dd, J = 1,8, 8,8 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 1,8, 8,8 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 2,3, 8,3 Hz, 1H), 2,55 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,13 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 310 (MH+), C19H19NO3 = 309 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.93 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-methylphenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Iodmethan als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,22 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,87 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 2,55 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,22 (s, 3H), 0,95 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 296 (MH+), C18H17NO3 = 295 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.94 Synthese von 3-Brom-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde nach den im Zusammenhang mit Schema 1 beschriebenen Verfahrensweisen synthetisiert, wobei p-Anisoylchlorid und 1-(2-Brom-4-methoxyphenyl)butan-1-on als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 1, die im Zusammenhang mit der Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 2,3 Hz), 7,02-6,99 (m, 3H), 2,56 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 360 (MH+), C17H14BrNO3 = 359 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.95 Synthese von 3-Butyl-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde 1-Brombutan als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,83 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 2,56 (2q, J = 7,4 Hz, 4H), 1,53-1,45 (m, 2H), 1,30-1,22 (m, 2H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,84 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 338 (MH+), C21H23NO3 = 337 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.96 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-hexylphenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde 1-Bromhexan als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 2,56 (2q, J = 7,4 Hz, 4H), 1,52-1,46 (m, 2H), 1,29-1,22 (m, 6H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,83 (t, J = 6,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 366 (MH+), C23H27NO3 = 365 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.97 Synthese von 3-(2-Brompropyl)-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde 3-Brom-1-propen als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,61 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,02-6,99 (m, 3H), 6,92 (dd, J = 8,3, 2,7 Hz, 1H), 4,31-4,27 (m, 1H), 3,14 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 2,58 (q, J = 7,8 Hz, 2H), 1,62 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,98 (t, J = 7,8 Hz, 3H); LC/MS m/z 402 (MH+), C20H20BrNO3 = 401 g/mol; Reinheit = 96%.
  • 4.1.2.98 Synthese von 3, 5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-carbaldehyd
  • Diese Verbindung wurde auf der Basis des Schemas 7 synthetisiert.
    Stufe 1-4: Gleich wie die entsprechenden Stufen im Abschnitt 4.1.2.20.
    Stufe 5: Weinreb-Amidbildung. 4-Carboxyisoxazol (erhalten in den obigen Stufen 1-4) wurde in THF aufgelöst und mit EDC:HOBt:DIEA (1,5:1,5:1,5) aktiviert, und das Reaktionsgemisch wurde 5 min lang bei RT stehen gelassen. Dann wurde N-Methoxymethylamin (1,5 Äquiv.) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde bei RT über Nacht stehengelassen und danach mit EtOAc verdünnt und mit 10%iger Citronensäurelösung, 10%iger NaHCO3-Lösung und Kochsalzlösung gewaschen. Das Lösungsmittel wurde entfernt, und der Rückstand wurde durch Flashchromatographie (EtOAc/Benzin) gereinigt und in 90% MeCN/H2O lyophilisiert, wodurch das gewünschte Produkt als weißes Pulver erhalten wurde.
    Stufe 6: Reduktion des Amids zu dem Aldehyd. Das Weinreb-Amid (erhalten in Stufe 5) wurde in THF aufgelöst und zu einer Suspension von LiAlH4 (4 Äquiv.) in THF von –78°C gegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 2,5 h lang bei –78°C gerührt und durch tropfenweise Zugabe von 1M HCl abgeschreckt. Das Reaktionsgemisch wurde sodann mit EtOAc verdünnt und mit 10%iger NaHCO3-Lösung und Kochsalzlösung gewaschen. Nach dem Trocknen auf Na2SO4 wurde das Lösungsmittel entfernt, und der Rückstand wurde in 90% MeCN/H2O lyophilisiert.
    Stufe 7: Die Demethylierung erfolgte auf der Basis der Methode 3, die für die Stufe C im Schema 1 beschrieben wurde. Der oben genannte Aldehyd wurde in DCM aufgelöst und die Lösung wurde in einem Eisbad abgekühlt. BBr3 (10 Äquiv.) wurde zugegeben, und das Reaktionsgemisch wurde 5 h lang bei RT gerührt. Dann wurde das Reaktionsgemisch in einem Eisbad abgekühlt und mit Wasser abgeschreckt. EtOAc wurde zugesetzt, und das Reaktionsgemisch wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen. Nach dem Trocknen auf Na2SO4 wurde das Lösungsmittel entfernt, und der Rückstand wurde durch Flashsäulenchromatographie (EtOAcBenzin) gereinigt, wodurch ein reines Produkt erhalten wurde.
    1H-NMR (d6-DMSO): δ 6,85 (2H, d, J = 8,42 Hz), 6,93 (2H, d, J = 8,61 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,42 Hz), 7,88 (2H, d, J = 8,61 Hz), 9,81 (1H, s); ESMS m/z 282 (M + H), C16H11NO4 = 281 g/mol; HPLC-Reinheit = 97,1 %.
  • 4.1.2.99 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-iodphenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Iod als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,61 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,54 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 0,98 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 408 (MH+), C17H14INO3 = 407 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.100 Synthese von 3-Chlor-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde NCS als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,05-6,98 (m, 3H), 2,57 (q, J = 7,8 Hz, 2H), 0,96 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 316 (MH+), C17H14ClNO3 = 315 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.101 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-fluorphenol
  • Diese Verbindung wurde entsprechend Schema 1 synthetisiert, wobei p-Anisoylchlorid und 1-(3-Fluor-4-methoxyphenyl)butan-1-on als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der für Stufe C in Schema 1 beschriebenen Methode 1.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ; LC/MS m/z 300 (MH+), C17H14FNO3 = 299 g/mol; Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.102 Synthese von 2-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-5-hydroxybenzoesäure
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Ethylchlorformiat als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,60-7,54 (m, 3H), 7,38 (s, 1H), 7,20 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,56 (q, J = 7,8 Hz, 2H), 0,97 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 326 (MH+), C18H15NO5 = 325 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.103 Synthese von Ethyl-2-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-5-hydroxybenzoat
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Ethylchlorformiat als Elektrophil verwendet. Die Demethylierung erfolgte gemäß der für Stufe C im Schema 1 beschriebenen Methode 3.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,12 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,54 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,08 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,98 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 354 (MH+), C20H19NO5 = 353 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.104 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-(methylsulfinyl)phenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Methyldisulfid als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,66 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,83 (s, 3H), 2,64 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,00 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 344 (MH+), C18H17NO4S = 343 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.105 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-sulfanylphenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Methyldisulfid als Elektrophil verwendet. Die Demethylierung erfolgte gemäß der für Stufe C im Schema 1 beschriebenen Methode 3.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,68 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 8,3, 2,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,65 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,00 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 314 (MH+), C17H15NO3S = 313 g/mol; Reinheit = 87%.
  • 4.1.2.106 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-methylphenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 1 wurden p-Anisoylchlorid und 1-(3-Brom-4-methoxyphenyl)butan-1-on als Ausgangsmaterialien verwendet. In Stufe 3 wurde Iodmethan als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,04-6,96 (m, 3H), 2,74 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,29, 2,28 (2s, 3H), 1,11 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 296 (MH+), C18H17NO3 = 295 g/mol; Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.107 Synthese von 2-Butyl-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.106 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde 1-Brombutan als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,43 (s, 1H), 7,04-6,98 (m, 3H), 2,74 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,72 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,69-1,61 (m, 2H), 1,45-1,38 (m, 2H), 1,12 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,95 (t, J = 7,4Hz, 3H); LC/MS m/z 338 (MH+), C21H23NO3 = 337 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.108 Synthese von 2-Ethyl-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.106 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Bromethan als Elektrophil verwendet.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,44 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,01-6,97 (m, 3H), 2,75 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,73 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 1,13 (t, J = 7,4Hz, 3H); LC/MS m/z 310 (MH+), C19H19NO3 = 309 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.109 Synthese von 2-Brom-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde gemäß Schema 1 synthetisiert, wobei p-Anisoylchlorid und 1-(3-Brom-4-methoxyphenyl)butan-1-on als Ausgangsmaterialien verwendet wurden. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der in Stufe C von Schema 1 beschriebenen Methode 1.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,89 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,20 (dd, J = 1,4, 8,3 Hz, 1H), 7,02 (dd, J = 0,9, 8,8 Hz, 2H), 2,75 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,12 (t, J = 7,9, 3H); LC/MS m/z 360 (MH+), C17H14BrNO3 = 359 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.110 Synthese von 4-[3-(4-Butanoyloxyphenyl)-4-ethylisoxazol-5-yl]phenylbutanoat
  • Diese Verbindung wurde als Derivat der gemäß Abschnitt 4.1.2.4 hergestellten Verbindung hergestellt. Zu einer THF-Lösung von 4-[4-Ethyl-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol wurde Butyrylchlorid (3,0 Äq.) und Pyridin (3,0 Äq.) gegeben. Das Gemisch wurde 24 h lang bei RT gerührt, in kalte NaHCO3-Lösung gegossen und mit EtOAc extrahiert. Die organischen Extrakte wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, mit Na2SO4 getrocknet und im Vakuum konzentriert, wodurch das Produkt als weißes Pulver erhalten wurde.
    LC/MS m/z 422 (MH+), C25H27NO5 = 421 g/mol; Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.111 Synthese von 4-[3-(4-Acetyloxyphenyl)-4-ethylisoxazol-5-yl]phenylacetat
  • Diese Verbindung wurde als Derivat der gemäß Abschnitt 4.1.2.4 hergestellten Verbindung hergestellt. Zu einer THF-Lösung von 4-[4-Ethyl-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol wurde Acetylchlorid (3,0 Äq.) und Pyridin (3,0 Äq.) gegeben. Das Gemisch wurde 24 h lang bei RT gerührt, in kalte NaHCO3-Lösung gegossen und mit EtOAc extrahiert. Die organischen Extrakte wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, mit Na2SO4 getrocknet und im Vakuum konzentriert, wodurch das Produkt als weißes Pulver erhalten wurde.
    LC/MS m/z 366 (MH+), C21H19NO5 = 365 g/mol; Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.112 Synthese von 3-(4-Butanoyloxyphenyl)naphtho[1,2-c]isoxazol-7-ylbutanoat
  • Diese Verbindung wurde als Derivat der Verbindung hergestellt, die wie im Abschnitt 4.1.2.32 beschrieben hergestellt worden war. Zu einer THF-Lösung von 3-(4-Hydroxyphenyl)naphtho[1,2-c]isoxazol-7-ol wurden Butyrylchlorid (3,0 Äq.) und Pyridin (3,0 Äq.) gegeben. Das Gemisch wurde 24 h lang bei RT gerührt, in kalte NaHCO3-Lösung gegossen und mit EtOAc extrahiert. Die organischen Extrakte wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, mit Na2SO4 getrocknet und im Vakuum konzentriert, wodurch das Produkt als weißes Pulver erhalten wurde.
    LC/MS m/z 418 (MH+), C25H23NO5 = 417 g/mol; Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.113 Synthese von 3-(4-Acetyloxyphenyl)naphtho[1,2-c]isoxazol-7-ylacetat
  • Diese Verbindung wurde als Derivat der Verbindung hergestellt, die wie im Abschnitt 4.1.2.32 beschrieben hergestellt worden war. Zu einer THF-Lösung von 3-(4-Hydroxyphenyl)naphtho[1,2-c]isoxazol-7-ol wurden Acetylchlorid (3,0 Äq.) und Pyridin (3,0 Äq.) gegeben. Das Gemisch wurde 24 h lang bei RT gerührt, in kalte NaHCO3-Lösung gegossen und mit EtOAc extrahiert. Die organischen Extrakte wurden mit Kochsalzlösung gewaschen, mit Na2SO4 getrocknet und im Vakuum konzentriert, wodurch das Produkt als weißes Pulver erhalten wurde.
    LC/MS m/z 362 (MH+), C21H15NO5 = 361 g/mol; Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.114 Synthese von 3,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon, Chlorid
  • Diese Verbindung wurde gemäß den im Schema 5 angegebenen Methoden synthetisiert.
    Die Stufen 1-6 wurden wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben durchgeführt.
    Stufe 7: Bildung des HCl-Salzes. Das in Stufe 6 erhaltene Produkt wurde in Aceton aufgelöst. Zu dieser Lösung wurden mindestens 5 Äq. konz. wässrige Salzsäure und eine Acetonitril/H2O (1:1)-Lösung gegeben. Das Gemisch wurde dann über Nacht lyophilisiert, wodurch das Produkt als grau-weißes Pulver erhalten wurde.
    LC/MS m/z 360 (MH+), C17H14BrNO3 = 359 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.115 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-hexylphenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.106 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde 1-Bromhexan als Elektrophil eingesetzt.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,63 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,04-7,97 (m, 3H), 2,76-2,68 (m, 4H), 1,74-1,62 (m, 2H), 1,36-1,33 (m, 6H), 1,12 (t, J = 7,8 Hz, 3H), 0,91 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 366 (MH+), C23H27NO3 = 365 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.116 Synthese von 2-chlor-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.106 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde NCS als Elektrophil eingesetzt.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,67-7,50 (m, 4H), 7,20 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,76 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,13 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 315 (MH+), C17H14ClNO3 = 314 g/mol; Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.117 Synthese von 5-[4-Ethyl-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]pyridin-2-ol
  • Diese Verbindung wurde gemäß Schema 1 synthetisiert, wobei p-Anisoylchlorid und Methyl-6-methoxypyridin-3-carboxylat als Ausgangsmaterialien eingesetzt wurde. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der in Stufe C von Schema 1 beschriebenen Methode 1.
    1H-NMR (d6-DMSO): δ 10,04 (ein Isomeres: s, 1H), 9,87 (ein weiteres Isomeres: s, 1H), 7,78-6,47 (m, 7H), 2,64 (q, J = 7,50 Hz, 2H), 1,08 (ein Isomeres: t, J = 7,50 Hz, 3H), 1,02 (ein weiteres Isomeres: t, J = 7,50 Hz, 3H); LC/MS m/z 283 (MH+), C16H14N2O3 = 282 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.118 Synthese von Ethyl-5-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-hydroxybenzoat
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.106 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Chlorethylformiat als Elektrophil verwendet. Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der für Stufe C im Schema 1 beschriebenen Methode 3.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,89 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 8,8Hz, 1H), 7,04 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,48 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 2,76 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,44 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 1,16 t, J = 7,6 Hz, 3H); LC/MS m/z 354 (MH+), C20H18NO5 = 3 53 g/mol; Reinheit = 91 %.
  • 4.1.2.119 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-methylphenylketon
  • Diese Verbindung wurde gemäß der im Schema 7 beschriebenen Verfahrensweise synthetisiert.
    Die Stufen 1-3 wurden wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben durchgeführt.
    Stufe 4: Wiederum wurde diese Stufe so durchgeführt wie in Stufe 4 von Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben, mit der Ausnahme, dass p-Toluoylchlorid für die Acylierung eingesetzt wurde.
    Stufe 5: Die Demethylierung erfolgte mit der für Stufe C in Schema 1 beschriebenen Methode 3
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 2,26 (3H, s), 6,70 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,76 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,0 Hz), 7,26 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,39 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,63 (2H, d, J = 8,2 Hz), 9,92 (1H, s,br); ESMS m/z 372 (M + H), C23H17NO4 = 371 g/mol; HPLC-Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.120 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-2-chlorphenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 synthetisiert. In Stufe 4 wurde o-Chlorbenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,67 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,18 (1H, ddd, J = 7,8, 7,2, 1,3 Hz), 7,24-7,27 (1H, m), 7,24 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,31 (1H, ddd, J = 7,8, 7,2, 1,8 Hz), 7,46 (1H, dd, J = 7,8, 1,3 Hz), 7,51 (2H, d, J = 9,0 Hz), 9,77 (1H, s,br); ESMS m/z 392 (M + H), C22H14ClNO4 = 391 g/mol; HPLC-Reinheit = 97%.
  • 4.1.2.121 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-chlorphenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde m-Chlorbenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,35 (1H, t, J = 7,8 Hz), 7,43 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,57 (1H, ddd, J = 8,0, 2,2, 1,0 Hz), 7,61 (1H, dt, J = 7,8, 1,2 Hz), 7,70 (1H, t, J = 1,8 Hz), 9,81 (1H, s), 10,14 (1H, s); ESMS m/z 392 (M + H), C22H14ClNO4 = 391 g/mol; HPLC-Reinheit = 86%.
  • 4.1.2.122 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-chlorphenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde p-Chlorbenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,41 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,42 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,72 (2H, d, J = 8,8 Hz), 9,82 (1H, s), 10,14 (1H, s); ESMS m/z 392 (M + H), C22H14ClNO4 = 391 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.123 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-2-fluorphenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde o-Fluorbenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,68 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,01 (1H, dd, J = 11,1, 8,2 Hz), 7,13 (1H, td, J = 7,8, 1,0 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,42-7,48 (1H, m), 7,51 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,59 (1H, td, J = 6,8, 1,8 Hz), 9,89 (1H, s,br); ESMS m/z 376 (M + H), C22H14FNO4 = 375 g/mol; HPLC-Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.124 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-nitrophenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde m-Nitrobenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,68 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,26 (2H, d, J = 8,4 Hz), 7,47 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,59 (1H, t, J = 8,0 Hz), 8,06 (1H, dd, J = 7,8, 1,2 Hz), 8,29 (1H, dd, J = 8,2, 2,3 Hz), 8,36 (1H, t, J = 2,0 Hz), 9,89 (1H, s,br); ESMS m/z 403 (M + H), C22H14N2O6 = 402 g/mol; HPLC-Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.125 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-nitrophenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde p-Nitrobenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,70 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,76 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,44 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,93 (2H, d, J = 9,0 Hz), 8,11 (2H, d, J = 8,8 Hz), 9,90 (1H, s,br); ESMS m/z 403 (M + H), C22H14N2O6 = 402 g/mol; HPLC-Reinheit = 93%.
  • 4.1.2.126 Synthese von 3,4-Dichlorphenyl-3,5-bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-ylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde 3,4-Dichlorbenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,78 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,25 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,44 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,58 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,62 (1H, dd, J = 8,4, 2,0 Hz), 7,88 (1H, d, J = 2,0 Hz), 9,82 (1H, s), 10,16 (1H, s); ESMS m/z 426 (M + H), C22H13Cl2NO4 = 425 g/mol; HPLC-Reinheit = 96%.
  • 4.1.2.127 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-butylphenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde p-n-Butylbenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 0,80 (3H, t, J = 7,4 Hz), 1,16-1,24 (2H, m), 1,40-1,50 (2H, m), 2,53 (2H, t, J = 7,6 Hz), 6,70 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,75 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,6 Hz), 7,26 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,39 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,63 (2H, d, J = 8,4 Hz); ESMS m/z 414 (M + H), C26H23NO4 = 413 g/mol; HPLC-Reinheit = 92%.
  • 4.1.2.128 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(tert.-butyl)phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde p-t-Butylbenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 1,18 (9H, s), 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,76 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,28 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,39 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,40 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,66 (2H, d, J = 8,6 Hz), 9,81 (1H, s), 10,10 (1H, s); ESMS m/z 414 (M + H), C26H23NO4 = 413 g/mol; HPLC-Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.129 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-hydroxyphenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde m-Anisoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,68-6,72 (1H, m), 6,71 (1H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,83 (1H, dd, J = 8,2, 0,6 Hz), 7,27 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,34-7,40 (2H, m), 7,43 (2H, d, J = 8,8 Hz), 9,80 (1H, s), 10,11 (1H, s), 11,0 (1H, s); ESMS m/z 374 (M + H), C22H15NO5 = 373 g/mol; HPLC-Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.130 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-2-hydroxyphenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde o-Anisoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,71 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,77 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,93 (1H, ddd, J = 7,6, 2,6, 1,6 Hz), 7,11-7,19 (3H, m), 7,27 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,39 (2H, d, J = 8,8 Hz), 9,75 (1H, s), 9,83 (1H, s), 10,13 (1H, s); ESMS m/z 374 (M + H), C22H15NO5 = 373 g/mol; HPLC-Reinheit = 96%.
  • 4.1.2.131 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde Benzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 6,69 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,26 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,40 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,53 (1H, t, J = 7,5 Hz), 7,72 (2H, dd, J = 8,3, 1,2 Hz), 9,80 (1H, s), 10,11 (1H, s); ESMS m/z 358 (M + H), C22H15NO4 = 357 g/mol; HPLC-Reinheit = 93%.
  • 4.1.2.132 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-methoxyphenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.119 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde p-Anisoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 3,77 (3H, s), 6,71 (2H, d, J = 9,0 Hz), 6,77 (2H, d, J = 9,0 Hz), 6,91 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,28 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,39 (2H, d, J = 9,0 Hz), 7,72 (2H, d, J = 9,0 Hz), 9,80 (1H, s), 10,12 (1H, s); ESMS m/z 388 (M + H), C23H17NO5 = 387 g/mol; HPLC-Reinheit = 97%.
  • 4.1.2.133 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-phenylthiophenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Phenyldisulfid als Elektrophil eingesetzt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,58 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,42-7,38 (m, 5H), 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,87 (dd, J = 2,8, 8,5 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 2,56 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 0,97 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 390 (MH+), C23H19NO3S = 389 g/mol; Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.134 Synthese von 5-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-hydroxybenzamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.106 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Tosylnitril als Elektrophil eingesetzt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,71 (dd, J = 2,3 8,3 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,07-6,99 (m, 3H), 2,76 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,09 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 325 (MH+), C18H16N2O4 = 324 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.135 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-phenylthiophenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.106 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Phenyldisulfid als Elektrophil eingesetzt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,59-7,36 (m, 9H), 7,14 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,63 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,02 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 390 (MH+), C23H19NO3S = 389 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.136 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-methylthiophenol
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.106 beschrieben synthetisiert. In Stufe 3 wurde Methyldisulfid als Elektrophil eingesetzt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 1), 7,54 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,07-6,99 (m, 3H), 2,76 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 2,50, 2,47 (2s, 3H), 1,14 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 328 (MH+), C18H17NO3S = 327 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.137 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-phenylphenol
  • Die Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben synthetisiert.
    Die Stufen 1 und 2 wurden wie in Abschnitt 4.1.2.92 beschrieben durchgeführt.
    Stufe 3: Die Suzuki-Kupplungsreaktion wurde dazu eingesetzt, um den Phenylring einzuführen. Das in Stufe 2 erhaltene Isoxazol wurde in Toluol aufgelöst, und die Lösung wurde 10 min mit Argon entgast. Zu dieser Lösung wurde Pd(PPh3)4 (4,0 Mol-%) gegeben. Nach weiteren 10 min wurde N2CO3 (5 Äq.) zugesetzt, gefolgt von einer Lösung von Phenylborsäure (1,1 rq.) in Ethanol. Das Reaktionsgemisch wurde zum Rückfluss erhitzt und 16 h lang gerührt. Dann wurde das Reaktionsgemisch in einen Scheidetrichter eingegossen, und die wässrige Schicht wurde zweimal mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Schichten wurden kombiniert, mit Kochsalzlösung gewaschen und auf Na2SO4 getrocknet. Die Reinigung durch Flashchromatogrpahie (40% Ethylacetat/Hexane) ergab das Produkt.
    Stufe 4: Die Demethylierung des Produkts der Stufe 3 wurde wie im Zusammenhang mit der Methode 3 von Stufe C im Schema 1 beschrieben durchgeführt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,45-7,40 (m, 3H), 7,32-7,25 (m, 5H), 7,03-7,01 (m, 2H), 6,93 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 2,15 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 0,63 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 358 (MH+), C23H19NO3 = 357 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.138 Synthese von {4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenyl}(methylsulfonyl)amin
  • Diese Verbindung wurde nach den hierin beschriebenen Verfahrensweisen synthetisiert.
    Stufe 1: Synthese des 1,3-Diketons. Die Synthese erfolgte wie im Zusammenhang mit Stufe 1 von Abschnitt 4.1.2.7 beschrieben, mit der Ausnahme, dass 4'-Methoxybutyrylphenon und Methyl-4-nitrobenzoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    Stufe 2: Die Isoxazolbildung unter Verwendung des obigen Diketons wurde so durchgeführt, wie es im Zusammenhang mit Stufe 4 von Abschnitt 4.1.2.7 beschrieben wurde.
    Stufe 3: Die Reduktion der Nitrogruppe zu Anilin wurde durch eine Pd-katalysierte Hydrierung durchgeführt. Zu einer Lösung des in Stufe 2 erhaltenen Produkts in Ethanol wurde eine katalytische Menge von 10% Pd auf Kohle gegeben. Dieses Gemisch wurde über Nacht unter Wasserstoff (Ballon) gerührt, durch Celite filtriert und mit Ethylacetat gewaschen. Das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde durch Flashsäulenchromatographie gereinigt, wodurch als Produkt 4-[4-Ethyl-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenylamin erhalten wurde.
    Stufe 4: Zu einer DCM-Lösung des obigen Anilins wurden Methansulfonylchlorid (2,0 Äq.) und Pyridin (3,0 Äq.) gegeben. Das Gemisch wurde 4 h lang bei RT gerührt, in Wasser eingegossen und mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Schichten wurden kombiniert, mit Kochsalzlösung gewaschen und auf Na2SO4 getrocknet. Die Reinigung durch Flashsäulenchromatographie lieferte das Produkt {4-[4-Ethyl-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenyl}(methylsulfonyl)amin.
    Stufe 5: Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 2, die für Stufe C in Schema 1 beschrieben wurde.
    1H-NMR (CDCl3) δ 7,74-7,50 (m, 4H), 7,32-7,15 (m, 2H), 6,95-6,88 (m, 2H), 3,06 (m, 3H), 2,68 (m, 2H), 1,14 (m, 3H); LC/MS m/z 359 (MH+), C18H18N2O4S = 358 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.139 Synthese von 5-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-methoxybenzamid
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.134 beschrieben synthetisiert. Die partielle Demethylierung des Produkts lieferte 5-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-methoxybenzamid. Der Verlauf der Reaktion wurde durch Dünnschichtchromatographie verfolgt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 8,42 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,84 (dd, J = 8,8, 2,9 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 7,04 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,12, 4,11 (2s, 3H), 2,77 (q, J = 7,4 Hz, 3H), 1,15 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 339 (MH+), C19H18N2O4 = 338 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.140 Synthese von 5-[4-Ethyl-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-hydroxybenzamid
  • Diese Verbindung ist das Regioisomere der Verbindung, die wie im Abschnitt 4.1.2.139 beschrieben hergestellt wurde. Beide Regioisomeren wurden unter Anwendung der in diesem Abschnitt beschriebenen Methoden erhalten. Die zwei Regioisomeren wurden durch HPLC getrennt, wobei eine C18-Säule (Reliasil-BDXC18, 10 × 50 mm, Ranin Dynamax) verwendet wurde, und wobei ein erster Puffer von H2O/0,1 % TFA und ein zweiter Puffer von HCN/0,1 % TFA durch einen Gradienten von 5-95% des zweiten Puffers über einen Zeitraum von neun Minuten und mit einer Fließgeschwindigkeit von zehn ml/min laufengelassen wurden.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 8,06 (s, 1H), 7,65 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 4,08, 4,07 (2s, 3H), 2,78 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,12 (t, J = 7,4 Hz, 3H); LC/MS m/z 339 (MH+), C19H18N2O4 = 338 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.141 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-(2-piperidylethoxy)phenylketon, Chlorid
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde 3-Allyloxybenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 10,28 (s, 1H), 9,96 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,36-7,30 (m, 5H), 7,24-7,20 (m, 1H), 6,84 (d, J-8,76 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,40-4,30 (br, 2H), 3,50-3,40 (m, 4H), 3,00-2,90 (m, 2H), 1,85-1,65 (m, 6H); LC/MS m/z 485 (MH+), C29H28N2O5 = 484 g/mol; Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.142 Synthese von 5-(4-Hydroxyphenyl)-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-(2-piperidylethoxy)phenylketon, Chlorid
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.142 beschrieben synthetisiert. Die partielle Demethylierung lieferte das monodemethylierte Produkt. Der Fortlauf der Reaktion wurde durch Dünnschichtchromatographie verfolgt.
    1H-NMR (d6-DMSO): δ 7,58 (ein Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,48-7,42 (ein weiteres Isomeres: m, 2H), 7,40-7,28 (m, 5H), 7,28-7,18 (m, 1H), 7,03 (ein Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,97 (ein weiteres Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,83 (ein Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78 (ein weiteres Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,40-4,30 (br, 2H), 3,78 (ein Isomeres: s, 2H), 3,75 (ein weiteres Isomeres: s, 1H), 3,50-3,40 (br, 4H), 3,00-2,90 (m, 2H), 1,85-1,65 (m, 6H); LC/MS m/z 499 (MH+), C30H30N2O5 = 498 g/mol; Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.143 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-(2-pyrrolidinylethoxy)phenylketon, Chlorid
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.141 beschrieben synthetisiert. In Stufe 6 wurde N-(2-Chlorethyl)pyrrolidin für die Alkylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 10,29 (s, 1H), 9,97 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,36-7,30 (m, 5H), 7,25-7,20 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,31 (br, 2H), 3,60-3,45 (m, 4H), 3,15-3,00 (m, 2H), 2,10-1,80 (m, 4H); LC/MS m/z 471 (MH+), C28H26N2O5 = 470 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.144 Synthese von 3-[2-(Diethylamino)ethoxy]phenyl-3,5-bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-ylketon, Chlorid
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.141 beschrieben synthetisiert. In Stufe 6 wurde N-(2-Chlorethyl)diethylamin für die Alkylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 10,31 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 7,46 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,36-7,30 (m, 5H), 7,24-7,20 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,33 (br t, 2H), 3,4 (m, 2H), 3,19-3,14 (m, 4H), 1,25-1,20 (t, J = 7,14 Hz, 6H); LC/MS m/z 473 (MH+), C28H28N2O5 = 472 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.145 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-[(1-methyl-(3-piperidyl))methoxy]phenylketon, Chlorid
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.141 beschrieben synthetisiert. In Stufe 6 wurde 2-(Chlormethyl)-1-methylpiperidin für die Alkylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO): δ 10,31 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 7,45 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,33-7,29 (m, 5H), 7,20-7,12 (m, 1H), 6,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,78 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 3,93-3,74 (m, 2H), 3,50-3,40 (br d, 2H), 2,90-2,70 (m, 5H), 2,40-2,25 (m, 1H), 1,90-1,7 (m, 4H); LC/MS m/z 485 (MH+), C29H28N2O5 = 484 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.146 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-[2-(dimethylamino)ethoxy]phenylketon, Chlorid
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.141 beschrieben synthetisiert. In Stufe 6 wurde N-(2-Chlorethyl)dimethylamin für die Alkylierung eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 10,35 (s, 1H), 10,02 (s, 1H), 7,45 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,37-7,29 (m, 5H), 7,26-7,20 (m, 1H), 6,86-6,83 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,85 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,79 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,33 (t, J = 4,61 Hz, 2H), 3,47 (t, J = 4,61 Hz, 2H), 2,80 (s, 6H); LC/MS m/z 445 (MH+), C26H24N2O5 = 444 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.147 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-[(1-methyl-(3-piperidyl))methoxy]phenylketon, Chlorid
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.145 beschrieben synthetisiert. Die partielle Demethylierung lieferte das monodemethylierte Produkt. Der Fortlauf der Reaktion wurde durch Dünnschichtchromatographie verfolgt.
    1H-NMR (d6-DMSO): δ 10,32 (ein Isomeres: s, 1H), 9,98 (ein weiteres Isomeres: s, 1H), 7,57 (ein Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,44 (ein weiteres Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,34-7,29 (m, 2H), 7,19-7,17 (m, 1H), 7,03 (ein Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,97 (ein weiteres Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,84 (ein Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,80-6,76 (ein weiteres Isomeres: d, J = 8,76 Hz, 2H), 3,94-3,75 (m, 5H), 3,48-3,43 (br d, 2H), 2,90-2,70 (m, 5H), 2,40-2,25 (m, 1H), 1,84 (m, 4H); LC/MS m/z 499 (MH+), C30H30N2O5 = 498 g/mol; Reinheit = 93%.
  • 4.1.2.148 Synthese von 3-[2-(Dimethylamino)ethoxy]phenyl-3-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-ylketon, Chlorid
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.146 beschrieben synthetisiert. Die partiale Demethylierung lieferte das monodemethylierte Produkt. Der Fortlauf der Reaktion wurde durch Dünnschichtchromatographie verfolgt.
    1H-NMR (d6-DMSO): δ 7,59-6,75 (m, 12H), 7,44 (ein weiteres Isomeres: d, 2H, J 8,76), 4,31 (br, 2H), 3,78 (ein Isomeres: s, 3H), 3,75 (ein weiteres Isomeres: s, 3H), 3,47 (br, 2H), 2,82 (s, 6H); LC/MS m/z 459 (MH+), C27H26N2O5 = 458 g/mol; Reinheit = 98%.
  • 4.1.2.149 Synthese von 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxy-2-methylphenyl)isoxazol-5-yl]-3-methylphenol
  • Diese Verbindung wurde unter Anwendung der im Zusammenhang mit Schema 1 beschriebenen Verfahrensweisen synthetisiert, wobei 2'-Methyl-4'-methoxyacetophenon und 2-Methyl-4-methoxybenzoylchlorid als Ausgangsmaterialien eingesetzt wurden.
    1H-NMR (d6-Aceton): δ 7,24 (d, J = 8,29 Hz, 1H, ArH), 7,19 (d, J = 8,29 Hz, 1H, ArH), 6,87-6,79 (m, 4H, ArH), 2,31 (q, J = 7,38 Hz, 2H, CH2), 2,24 (s, 3H, CH3), 2,22 (s, 3H, CH3), 0,82 (t, J = 7,38 Hz, 3H, CH2CH3); LC/MS m/z 310 (MH+), C19H19NO3 = 309 g/mol; Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.150 Synthese von 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-propylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde auf der Basis des Schema 4 synthetisiert.
    Stufe 1-3: Gleich wie die entsprechenden Stufen im Abschnitt 4.1.2.20.
    Stufe 4: Alkylierung. Zu einer Lösung von 4-Bromisoxazol (1 Äq., erhalten in Stufe 3) in THF von –78°C wurde nBuLi (1,1 Äq., 1,6 M in Hexan) gegeben. Nach 1,5-stündigem Rühren der Lösung bei –78°C wurde diese tropfenweise in eine Lösung von Brompropan (1,2 Äq.) in THF von –78°C eingegeben. Nach 15 min wurde die Lösung auf RT erwärmen gelassen und über Nacht gerührt. Nach dem Abschrecken der Reaktion mit 1 M HCl wurden die Schichten getrennt, und die wässrige Schicht wurde mit EtOAc (3 x) extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden mit gesättigter NaHCO3-Lösung (1 x) und mit Kochsalzlösung gewaschen, auf Na2SO4 getrocknet, filtriert und konzentriert, wodurch ein Rohproduktgemisch erhalten wurde. Die Flashsäulenchromatographie lieferte das alkylierte Produkt.
    Stufe 5: Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 3 für Stufe C in Schema 1.
    1H-NMR (CDCl3/DMSO, 6:1): δ 7,29 (d, J = 8,60 Hz, 2H), 7,18 (d, J = 8,60 Hz, 2H), 6,70 (d, J = 8,40 Hz, 2H), 6,68 (d, J = 8,40 Hz, 2H), 2,34-2,39 (m, 2H), 1,21-1,24 (m, 2H), 0,58 (t, J = 7,23 Hz, 3H); ESMS m/z 296 (MH+), C18H17NO3 = 295 g/mol; HPLC-Reinheit = 87,3%.
  • 4.1.2.151 Synthese von 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-prop-2-enylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise wie im Abschnitt 4.1.2.150 mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 4 Allylbromid als Alkylierungsmittel eingesetzt wurde.
    1H-NMR (CDCl3/DMSO, 6:1): δ 9,10 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 7,23 (d, J = 8,79 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,79 Hz, 2H), 6,59 (d, J = 8,79 Hz, 2H), 6,57 (d, J = 8,79 Hz, 2H), 5,69-5,78 (m, 1H), 4,87 (d, J = 10,36 Hz, 1H), 4,71 (d, J = 17,19 Hz, 1H), 3,01-3,02 (m, 2H); ESMS m/z 294 (MH+), C18H15NO3 = 293 g/mol; HPLC-Reinheit = 80,8%.
  • 4.1.2.152 Synthese von 4-[2-(Diethylamino)ethylthio]phenyl-3,5-bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-ylketon
  • Diese Verbindung wurde gemäß den in Zusammenhang mit Schema 6 beschriebenen Verfahrensweisen synthetisiert.
    Die Stufen 1-3 wurden wie in Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben durchgeführt.
    Stufe 4: Diese Stufe wurde wie in Stufe 4 im Abschnitt 4.1.2.20 mit der Ausnahme durchgeführt, dass 4-Fluorbenzoylchlorid für die Acylierung eingesetzt wurde.
    Stufe 5: Zu einer THF-Suspension von Natriumhydrid (1,1 Äq.) wurde 2-Diethylamino-Ethanthiol gegeben. Das Gemisch wurde 30 min lang bei RT gerührt, und dann wurde die in Stufe 4 erhaltene Verbindung zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h lang bei RT gerührt, in Wasser eingegossen, und das Gemisch wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Extrakte wurden kombiniert, mit Kochsalzlösung gewaschen, mit Na2SO4 getrocknet und im Vakuum konzentriert. Die Reinigung durch Flashsäulenchromatographie lieferte das Produkt 4-[2-(Diethylamino)ethylthio]phenyl-3,5-bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-ylketon.
    Stufe 6: Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 2 für Stufe C im Schema 1.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,75 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 7,84 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 8,30 Hz, 2H), 3,10 (t, J = 7,83 Hz, 2H), 2,52 (t, J = 7,07 Hz, 2H), 0,96 (t, J = 7,14 Hz, 2H); LC/MS m/z 489 (MH+), C28H28N2O4S = 488 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.153 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(dimethylamino)ethylthio]phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.152 beschrieben synthetisiert. In Stufe 5 wurde 2-Dimethylamino-Ethanthiol eingesetzt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,74 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 9,22 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 9,22 Hz, 2H), 6,82 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 3,00 (t, J = 7,14 Hz, 2H), 2,54 (t, J = 7,14 Hz, 2H), 2,14 (s, 6H); LC/MS m/z 461 (MH+), C26H24N2O4S = 460 g/mol; Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.154 Synthese von 4-(2-Azaperhydroepinylethoxy)phenyl-3,5-bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-ylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.152 beschrieben synthetisiert. In Stufe 5 wurde 2-Azaperhydroepinylethan-1-ol eingesetzt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,82 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,47 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,93-6,88 (m, 4H), 6,84 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,10 (t, J = 5,99 Hz, 2H), 2,89 (t, J = 5,99 Hz, 2H), 2,72 (t, J = 5,53 Hz, 2H), 1,65-1,52 (m, 6H); LC/MS m/z 499 (MH+), C30H30N2O5 = 498 g/mol; Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.155 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)-2-(trifluormethyl)phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.152 beschrieben synthetisiert. In Stufe 4 wurde 2-Trifluoremthyl-4-methoxybenzoylchlorid eingesetzt. In Stufe 5 wurde N-(2-Hydroxyethyl)piperidin eingesetzt.
    1H-NMR (d6-DMSO) δ 7,56 (d, J = 8,76 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,27 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,27 (8,30 Hz, 1H), 6,86 (dd, J = 8,76 Hz und 2,31 Hz, 1H), 6,81 (t, J = 8,76 Hz, 2H), 6,73 (d, J = 8,76, Hz, 2H), 4,12 (t, J = 5,76 Hz, 2H), 3,31 (br s, 2H), 2,59 (br s, 2H), 2,38 (br m, 4H), 1,46 (br, m, 4H), 1,37 (br m, 2H); LC/MS m/z 553 (MH+), C30H27F3N2O5 = 552 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.156 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-{2-[(2-ethylthioethyl)amino]ethoxy}phenylketon
  • Diese Verbindung wurde wie im Abschnitt 4.1.2.152 beschrieben synthetisiert. In Stufe 5 wurde N-(2-Hydroxyethyl)aziridin eingesetzt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,83 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 7,57 (d, J = 9,22 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 9,22 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 6,83 (d, J = 8,76 Hz, 2H), 4,11 (t, J = 5,53 Hz, 2H), 2,98 (t, J = 5,53 Hz, 2H), 2,82 (t, J = 6,50 Hz, 2H), 2,63 (t, J = 6,50 Hz, 2H), 2,51 (q, J = 7,38 Hz, 2H), 1,17 (t, J = 7,38 Hz, 2H); LC/MS m/z 505 (MH+), C28H28N2O5S = 504 g/mol; Reinheit = 95%.
  • 4.1.2.157 Synthese von 3-(4-Hydroxy-2-methylphenyl)-4,5-dihydronaphtho[1,2-c]isoxazol-7-ol
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.29 beschrieben synthetisiert, wobei 6-Methoxy-1-tetralon und 2-Methyl-4-methoxybenzoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,75 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,86-6,80 (m, 4H), 2,91-2,72 (m, 4H), 2,34 (s, 3H); LC/MS m/z 294 (MH+), C18H15NO3 = 293 g/mol; Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.158 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-carbonitril
  • Diese Verbindung wurde auf der Basis der in Schema 4 beschriebenen Methodologie synthetisiert.
    Die Stufen 1-3 wurden so durchgeführt, wie es im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben wurde.
    Stufe 4: Diese wurde gleichfalls wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben durchgeführt, mit der Ausnahme, dass Tosylnitril als Elektrophil eingesetzt wurde.
    Stufe 5: Die Demethylierung wurde auf der Basis der Methode 3 für Stufe C in Schema 1 durchgeführt.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 8,04 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 8,8 Hz, 1H); LC/MS m/z 279 (MH+), C16H10N2O3 = 278 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.159 Synthese von 4-[4-Ethyl-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]-3-methylphenol
  • Diese Verbindung wurde regiospezifisch nach den im Zusammenhang mit Schema 3 beschriebenen Verfahrensweisen synthetisiert.
    Stufe 1: Oxim-Synthese. Zu einer Suspension von 2'-Methyl-4'-methoxyacetophenon (1,0 Äq.) in Ethanol wurden NH2OH·HCl (1,2 Äq.) und Pyridin (1,2 Äq.) gegeben. Das Gemisch wurde zum Rückfluss erhitzt und über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde in EtOAc aufgelöst. Die Lösung wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, auf Na2SO4 getrocknet, filtriert und konzentriert, wodurch ein Rohproduktgemisch erhalten wurde. Die Flashsäulenchromatographie lieferte das Oxim als zwei Regioisomere mit einer Ausbeute von 85%.
    Stufe 2: Isoxazol-Synthese. Zu einer Lösung des in Stufe 1 erhaltenen Oxims (2 Äq.) in THF von 0°C wurde n-BuLi (4,2 Äq.) gegeben. Nach 30 min wurde Methyl-4-methoxybenzoat (1,0 Äq.) als Lösung in THF zugesetzt. Nach 30-minütigem Rühren bei 0°C wurde das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmt. HCl (10 ml, 5 N) wurde zugesetzt, und das zweiphasige Reaktionsgemisch wurde zum Rückfluss erhitzt und über Nacht gerührt. Nach dem Abkühlen auf 0°C kam das Isoxazol zur Ausfällung und wurde durch Filtration gesammelt. Das Filtrat wurde mit Wasser gewaschen, und die wässrige Schicht wurde mit EtOAc (3 x) extrahiert. Die organischen Schichten wurden kombiniert, mit gesättigter NaHCO3-Lösung und Kochsalzlösung gewaschen, auf Na2SO4 getrocknet, filtriert und konzentriert, wodurch ein Rohreaktionsgemisch erhalten wurde. Die Flashsäulenchromatographie (THF/Hexane) und die Umkristallisation (THF/EtOH) lieferte das Isoxazol.
    Stufe 3: Die Demethylierung wurde in der Weise durchgeführt, wie es im Zusammenhang mit Methode 3 von Stufe C von Schema 1 beschrieben wurde.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 7,67 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,85 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,80 (dd, J = 8,2, 2,5 Hz, 1H), 2,52 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,18 (s, 3H), 0,98 (t, J = 7,6 Hz, 3H); LC/MS m/z 296 (MH=+), C18H17NO3 = 295 g/mol; Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.160 Synthese von 3-(4-Hydroxy-2-methylphenyl)naphtho[1,2-c]isoxazol-7-ol
  • Diese Verbindung wurde wie in Abschnitt 4.1.2.32 beschrieben synthetisiert, wobei 6-Methoxy-1-tetralon und 2-Methyl-4-methoxybenzoylchlorid als Ausgangsmaterialien verwendet wurden.
    1H-NMR (d6-Aceton) δ 8,31 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,47-7,38 (m, 3H), 6,94-6,88 (m, 2H), 2,42, 2,38 (2s, 3H); LC/MS m/z 292 (MH+), C18H13NO3 = 291 g/mol; Reinheit = 85%.
  • 4.1.2.161 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)-4,5,6-trihydrobenzo[a]isoxazolo[3,4-c][7]annulen-8-ol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise wie im Abschnitt 4.1.2.29 mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 1 7-Methoxy-1-benzosuberon zur Bildung des 1,3-Diketons eingesetzt wurde.
    ESMS m/z 294 (MH+), C18H15NO3 = 293 g/mol; HPLC-Reinheit = 80,6%.
  • 4.1.2.162 Synthese von 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-(2-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde auf der Basis von Schema 4 synthetisiert.
    Stufen 1-3 gleich wie die entsprechenden Stufen im Abschnitt 4.1.2.20.
    Stufe 4: Es wurde eine Suzuki-Kupplungsreaktion von 4-Bromisoxazol mit Arylborsäure durchgeführt. Die Reaktion erfolgte unter einer Atmosphäre von Stickstoff. Die Lösungsmittel wurden dadurch entgast, dass 2 h vor der Reaktion Stickstoff hindurchperlen gelassen wurde. Pd(PPh3)4 (0,04 Äq.) in DMF wurde zu dem 4-Bromisoxazol (erhalten in Stufe 3) und 2-Methoxyphenylborsäure (oder Vinyltributylzinn) (1,1 Äq.) zugesetzt. Dann wurde Natriumcarbonat (0,4 ml, 2M) zugesetzt. Das Reaktionsgefäß wurde verschlossen und über Nacht bei 90°C stehen gelassen. Dann wurde Ethylacetat (20 ml) zugegeben, und das Reaktionsgemisch wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen. Die organischen Fraktionen wurden filtriert und bei vermindertem Druck konzentriert. Die Rückstände wurden in 90% MeCN/H2O lyophilisiert. Die Reinigung der Verbindung wurde durch Verrühren mit 60% MeCN/H2O und HPLC-Reinigung erzielt.
    Stufe 5: Die Demethylierung erfolgte gemäß Methode 3, beschrieben für Stufe C in Schema 1.
    1H-NMR (CDCl3 & DMSO-d6): δ 3,04 (3H, s), 6,16 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,20 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,44 (1H, t, J = 7,5 Hz), 6,47 (1H, d, J = 8,4 Hz), 6,58 (1H, dd, J = 7,1 Hz, 1,6 Hz), 6,67 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,78 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,87 (3H, t, J = 8,3 Hz), 8,69 (1H, s), 8,91 (1H, s); ESMS m/z 360 (MH+), C22H17NO4 = 359 g/mol; HPLC-Reinheit = 98,2%.
  • 4.1.2.163 Synthese von 4-{4-[3,5-Bis(trifluormethyl)phenyl]-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise wie das Produkt im Abschnitt 4.1.2.162 mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 4 3,5-Ditrifluormethylphenylborsäure für die Kupplungsreaktion eingesetzt wurde.
    1H-NMR (CDCl3): δ 6,71 (1H, d, J = 8,7 Hz), 6,73 (1H, d, J = 10,8 Hz), 7,04 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,20 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,60 (2H, s), 7,76 (1H, s), 9,25 (1H, s), 9,50 (1H, s); ESMS m/z 466 (MH+), C23H13F6NO3 = 465 g/mol; HPLC-Reinheit = 86,4%.
  • 4.1.2.164 Synthese von 3-[3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise wie das Produkt im Abschnitt 4.1.2.162 mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 4 3-Methoxyphenylborsäure für die Kupplungsreaktion eingesetzt wurde.
    1H-NMR (CDCl3): δ 6,30 (4H, d, J = 6,4 Hz), 6,33 (1H, s), 6,35 (1H, d, J = 7,7 Hz), 6,44 (1H, d, J = 8,1 Hz), 6,80 (1H, t, J = 7,8 Hz), 6,85 (2H, d, J = 7,6 Hz), 6,95 (2H, d, J = 7,8 Hz), 8,64 (1H, s), 8,81 (1H, s), 8,98 (1H, s); ESMS m/z 346 (MH+), C21H15NO4 = 345 g/mol; HPLC-Reinheit = 91 %.
  • 4.1.2.165 Synthese von 4-{3-(4-Hydroxyphenyl)-4-[3-(trifluormethyl)phenyl]isoxazol-5-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise wie das Produkt im Abschnitt 4.1.2.162 mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 4 3-Trifluormethylphenylborsäure für die Kupplungsreaktion eingesetzt wurde.
    1H-NMR (CDCl3): δ 6,13 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,17 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,67 (2H, d, J = 8,7 Hz), 6,87 (1H, s), 6,88 (1H, d, J = 6,9 Hz), 6,97 (1H, t, J = 7,9 Hz), 7,06 (2H, d, J = 8,5 Hz), 8,79 (1H, s), 9,02 (1H, s); ESMS m/z 398 (MH+), C22H14F3NO3 = 397 g/mol; HPLC-Reinheit = 99,3%.
  • 4.1.2.166 Synthese von 4-{3-(4-Hydroxyphenyl)-4-[4-(trifluormethyl)phenyl]isoxarol-5-yl}phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise wie das Produkt im Abschnitt 4.1.2.162 mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 4 4-Trifluormethylphenylborsäure für die Kupplungsreaktion eingesetzt wurde.
    1H-NMR (CDCl3 & DMSO-d6): δ 6,34 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,38 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,75 (2H, d, J = 8,4 Hz), 6,88 (2H, d, J = 8,2 Hz), 6,98 (2H, d, J = 8,1 Hz), 7,22 (2H, d, J = 8,4 Hz), 8,87 (1H, s), 9,09 (1H, s); ESMS m/z 398 (MH+), C22H14F3NO3 = 397 g/mol; HPLC-Reinheit = 98,8%.
  • 4.1.2.167 Synthese von 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-(2-thienyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise wie das Produkt im Abschnitt 4.1.2.162 mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 4 2-Thiophenylborsäure für die Kupplungsreaktion eingesetzt wurde.
    1H-NMR (CDCl3 & DMSO-d6): δ 6,45 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,48 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,69 (1H, dt, J = 3,8, 1,2 Hz), 6,79 (1H, dd, J = 3,8, 1,2 Hz), 7,00 (2H, d, J = 8,2 Hz), 7,11 (2H, d, J = 8,2 Hz), 7,12-7,15 (1H, m), 8,90 (1H, s), 9,46 (1H, s); ESMS m/z 336 (MH+), C19H13NO3S = 335 g/mol; HPLC-Reinheit = 87,9%.
  • 4.1.2.168 Synthese von 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-(3-thienyl)isoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise wie das Produkt im Abschnitt 4.1.2.162 mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 4 3-Thiophenylborsäure für die Kupplungsreaktion eingesetzt wurde.
    1H-NMR (CDCl3 & DMSO-d6): δ 6,32 (2H, d, J = 8,8 Hz), 6,36 (2H, d, J = 8,6 Hz), 6,54 (1H, d, J = 4,8 Hz), 6,76 (1H, s), 6,82 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,94 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,01-7,03 (1H, m), 8,83 (1H, s), 9,03 (1H, s); ESMS m/z 336 (MH+), C19H13NO3S = 335 g/mol; HPLC-Reinheit = 94,0%.
  • 4.1.2.169 Synthese von 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-vinylisoxazol-5-yl]phenol
  • Diese Verbindung wurde in der gleichen Weise wie das Produkt im Abschnitt 4.1.2.162 mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 4 Vinylborsäure für die Kupplungsreaktion eingesetzt wurde.
    1H-NMR (CDCl3 & DMSO-d6): δ 5,03 (1H, dd, J = 11,4, 1,6 Hz), 5,06 (1H, dd, J = 17,8, 1,6 Hz), 6,32 (1H, dd, J = 17,8, 11,4 Hz), 6,65 (2H, d, J = 9,0 Hz), 6,67 (2H, d, 7 = 9,2 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,8 Hz), 7,19 (2H, d, J = 8,8 Hz), 8,95 (1H, s), 9,17 (1H, s); ESMS m/z 280 (MH+), C17H13NO3 = 279 g/mol; HPLC-Reinheit = 93,2%.
  • 4.1.2.170 Synthese von 3-(4-Hydroxy-2-methylphenyl)-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon
  • Diese Verbindung wird wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 1 4'-Methoxy-2'-methylacetophenon und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien eingesetzt werden. Es wird ein Gemisch der Regioisomeren erhalten.
    ESMS m/e 499 (MH+), C30H30N2O5 = 498 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.171 Synthese von 3-(2-Ethyl-4-hydroxyphenyl)-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon
  • Diese Verbindung wird wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 1 4'-Methoxy-2'-ethylacetophenon und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien eingesetzt werden. Es wird ein Gemisch der Regioisomeren erhalten.
    ESMS m/e 513 (MH+), C31H32N2O5 = 512 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.172 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxy-2-methylphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon
  • Diese Verbindung wird wie im Abschnitt 4.1.2.20 beschrieben mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 1 4'-Methoxy-2'-methylacetophenon und 4-Methoxy-2-methylbenzoylchlorid als Ausgangsmaterialien eingesetzt werden. ESMS m/e 513 (MH+), C31H32N2O5 = 512 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.173 Synthese von 4-(4-{(Hydroxyimino)[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]methyl}-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl)phenol
  • Diese Verbindung wird auf der Basis von Schema 7 synthetisiert.
    Stufen 1-7: Gleich wie die entsprechenden Stufen in Abschnitt 4.1.2.20.
    Stufe 8: Oxim-Synthese. Zu einer Suspension des in Stufe 7 erhaltenen Ketons (1,0 Äq.) in Ethanol werden NH2OH·HCl (1,2 Äq.) und Pyridin (1,2 Äq.) gegeben. Dann wird das Gemisch zum Rückfluss erhitzt und über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wird bei vermindertem Druck entfernt, und der Rückstand wird in EtOAc aufgelöst. Die Lösung wird mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, auf Na2SO4 getrocknet, filtriert und konzentriert, wodurch ein Rohproduktgemisch erhalten wurde. Die Flashchromatographie lieferte das Oxim als Gemisch von zwei Regioisomeren.
    ESMS m/e 500 (MH+), C29H29N3O5 = 499 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.174 Synthese von 4-(4-{(1E)-2-Aza-2-methoxy-1-[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]vinyl}-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl)phenol
  • Diese Verbindung wird in der gleichen Weise wie die oben genannte Verbindung mit der Ausnahme synthetisiert, dass in Stufe 8 Methoxyamin zur Bildung des Oxims eingesetzt wird.
    ESMS m/e 514 (MH+), C30H31N3O5 = 513 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.175 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(tert.-butoxy)ethoxy]phenylketon
  • Diese Verbindung wird in der gleichen Weise wie im Abschnitt 4.1.2.152 synthetisiert. In Stufe 5 wird 2-(tert.-Butoxy)ethan-1-ol als Nucleophil eingesetzt.
    ESMS m/e 474 (MH+), C28H27NO6 = 473 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.176 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon
  • Diese Verbindung wird auf der Basis von Schema 3 und Schema 6 synthetisiert.
    Stufe 1 und 2: Gleich wie die entsprechenden Stufen im Abschnitt 4.1.2.152, mit der Ausnahme, dass 4'-Benzyloxyacetophenon dazu verwendet wird, um das Oxim in Stufe 1 zu bilden.
    Stufe 3-5: Gleich wie die entsprechenden Stufen im Abschnitt 4.1.2.152, mit der Ausnahme, dass 2-Piperidylethan-1-ol in Stufe 5 als Nucleophil eingesetzt wird.
    Stufe 6: Selektive Entfernung der Benzylschutzgruppe. Zu der auf die obige Weise erhaltenen Verbindung in MeOH-Lösung wurde 10% Pd/C (katalytische Menge) gegeben. Das Gemisch wird unter einer Wasserstoffatmosphäre (Ballon) über Nacht bei RT gerührt und durch ein Celite-Kissen filtriert. Ethylacetat wird zum Waschen des Rückstands verwendet. Das Filtrat wird konzentriert und einer Reinigung unterworfen, wodurch die Titelverbindung erhalten wurde.
    ESMS m/e 499 (MH+), C30H30N2O5 = 498 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.177 Synthese von 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)-4-{[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]sulfonyl}isoxazol
  • Diese Verbindung wird auf der Basis von Schema 6 synthetisiert.
    Stufen 1-3: Gleich wie die entsprechenden Stufen im Schema 4.1.2.20.
    Stufe 4: Gleich wie Stufe 4 im Schema 4.1.2.20, mit der Ausnahme, dass 4-Fluorphenylsulfonylchlorid als Elektrophil verwendet wird, um das Isoxazolanion zu quenschen.
    Stufe 5: Gleich wie Stufe 5 im obigen Beispiel.
    Stufe 6: Die Demethylierung erfolgte unter Anwendung der Methode 3, beschrieben für Stufe C im Schema 1.
    ESMS m/e 521 (MH+), C28H28N2O6S = 520 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.178 Synthese von 3-(4-Hydroxyphenyl)isoxazolo[4,3-c]chinolin-7-ol
    • Stufe 1: Bildung des 1,3-Diketons. Gleich wie Stufe 1 im Abschnitt 4.1.2.7, mit der Ausnahme, dass 2-Fluor-4-methoxyacetophenon und p-Anisoylchlorid als Ausgangsmaterialien eingesetzt wurden.
    • Stufe 2: Zu einer THF-Lösung des oben genannten 1,3-Diketons wurde Dimethylformamiddimethylacetal (4 Äq.) gegeben. Das Gemisch wurde 16 h am Rückfluss erhitzt und im Vakuum konzentriert, wodurch ein dunkler Rückstand erhalten wurde. Die Reinigung durch Säulenchromatographie lieferte 2-[(Dimethylamino)methylen]-3-(2-fluor-4-methoxyphenyl)-1-(4-methoxyphenyl)propan-1,3-dion.
    • Stufe 3: Das oben genannte Zwischenprodukt wird mit Ammoniak unter Druck (bombenartige Einrichtung) vermischt, und das Gemisch wird über Nacht auf 60°C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wird auf –78°C abgekühlt, und der Ammoniak wird abdampfen gelassen. Zu dem Rückstand werden Wasser und EtOAc gegeben. Die Routineextraktion, gefolgt von einer Konzentrierung, liefert das Rohprodukt, das gereinigt wird, wodurch das Chinolonprodukt erhalten wurde.
    • Stufe 4: Bildung des Isoxazol-Heterocyclus. Gleich wie Stufe 4 im Abschnitt 4.1.2.7, mit der Ausnahme, dass die auf die obige Art und Weise erhaltene Verbindung als Ausgangsmaterial eingesetzt wurde. Diese Stufe liefert 7-Methoxy-3-(4-methoxyphenyl)isoxazolo[4,3-c]chinolin als Produkt.
    • Stufe 5: Die Demethylierung wird unter Anwendung der Methode 3, beschrieben für Stufe C im Schema 1, durchgeführt.
    • ESMS m/e 279 (MH+), C16H10N2O3 = 278 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.179 Synthese von (2E)-3-(4-{[3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]carbonyl}phenyl)prop-2-ensäure
    • Stufe 1-3: Gleich wie die entsprechenden Stufen in Abschnitt 4.1.2.20.
    • Stufe 4: Es wurde eine Suzuki-Kupplungsreaktion dazu angewendet, um den Phenylring einzuführen. Das in Stufe 3 erhaltene Isoxazol wird in Toluol aufgelöst, und die Lösung wird 10 min lang mit Argon entgast. Zu dieser Lösung wird Pd(PPh3)4 (4,0 Mol-%) gegeben. Nach weiteren 10 min wird Na2CO3 (5 Äq.) zugegeben, gefolgt von einer Lösung von 4-Formylphenylborsäure (1,1 Rq.) in Ethanol. Das Reaktionsgemisch wird zum Rückfluss erhitzt und 16 h gerührt. Dann wird das Reaktionsgemisch in einen Scheidetrichter eingegossen, und die wässrige Schicht wird zweimal mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Schichten werden kombiniert, mit einer Kochsalzlösung gewaschen und auf Na2SO4 getrocknet. Die Reinigung durch Flashchromatographie (40% Ethylacetat/Hexane) liefert dann das Produkt.
    • Stufe 5: Honor-Emmons-Reaktion zur Bildung des α,β-ungesättigten Esters. Das obige Produkt wird Honor-Emmons-Reaktionsbedingungen unterworfen, wobei Trimethylphosphono acetat verwendet wurde, um das Methyl-(2E)-3-{4-[3,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl]phenyl}prop-2-enoat zu erhalten.
    • Stufe 6: Die Verseifung (NaOH in Wasser/THF) der obigen Verbindung ergibt dann die (2E)-3-{4-[3,5-Bis-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl]phenyl}prop-2-ensäure.
    • Stufe 7: Die Demethylierung erfolgt unter Anwendung der Methode 3, beschrieben für Stufe C im Schema 1.
    • ESMS m/e 400 (MH+), C24H17NO5 = 399 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.180 Synthese von 7-Hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)(4,5-dihydroisoxazolo[4,3-c]chinolin-5-yl)-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon
    • Stufen 1-3: Gleich wie in Abschnitt 4.1.2.178.
    • Stufe 4: Reduktion. Zu einer Methanollösung der in Stufe 3 erhaltene Lösung wird 10% Pd/C gegeben. Das Gemisch wird unter einer Wasserstoffatmosphäre (Ballon) über Nacht bei RT gerührt und durch ein Celite-Kissen filtriert. Ethylacetat wird zum Waschen des Rückstand eingesetzt. Das Filtrat wird konzentriert und einer Reinigung unterworfen, wodurch 7-Methoxy-3-[(4-methoxyphenyl)carbonyl]-1,2,3-trihydrochinolin-4-on erhalten wurde.
    • Stufe 5: Bildung des Isoxazol-Heterocyclus. Gleich wie Stufe 4 im Abschnitt 4.1.2.7, mit der Ausnahme, dass die oben erhaltene Verbindung als Ausgangsmaterial eingesetzt wurde. Diese Stufe liefert das 7-Methoxy-3-(4-methoxyphenyl)-4,5-dihydroisoxazolo[4,3-c]chinolin als Produkt.
    • Stufe 6: Acylierung. Zu einer Suspension von Natriumhydrid (1,1 Äq.) in THF wird die obige Verbindung (1,0 Äq.) bei 0°C gegeben. Das Gemisch wird 1 h lang bei RT gerührt oder bis die Blasenbildung abbricht. Zu dem Gemisch wird 4-(2-Piperdylethoxy)benzoylchlorid in THF-Lösung gegeben. Dieses Gemisch wird über Nacht bei RT gerührt und in Wasser eingegossen, gefolgt von einer Routineextraktionsverfahrensweise, wodurch ein Rohprodukt erhalten wurde, das gereinigt wird, wodurch 7-Methoxy-3-(4-methoxyphenyl)(4,5-dihydroxyisoxazolo[4,3-c]chinolin-5-yl)-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon erhalten wurde.
    • Stufe 7: Die Demethylierung erfolgt unter Anwendung der Methode 3, beschrieben für Stufe C im Schema 1.
    • ESMS m/e 512 (MH+), C30H29N3O5 = 511 g/mol; HPLC-Reinheit = 90%.
  • 4.1.2.181 Synthese von 2-[4-Ethyl-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]-5-hydroxybenzolcarbonitril
  • Gleiche Verfahrensweise wie im Abschnitt 4.1.2.92, mit der Ausnahme, dass in Stufe 3 Tosylnitril als Elektrophil verwendet wurde und in Stufe 4 die Demethylierung unter Anwendung der Methode 3 für Stufe C im Schema 1 durchgeführt wurde.
    ESMS m/z 307 (MH+), C18H14N2O3 = 306 g/mol; HPLC-Reinheit = 99%.
  • 4.1.2.182 Synthese von 2-[4-Ethyl-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-3-yl]-5-hydroxybenzolcarbonitril
  • Die partielle Demethylierung der wie im Abschnitt 4.1.2.181 beschriebenen Verbindung lieferte die Titelverbindung.
    ESMS m/z 321 (MH+), C19H16N2O3 = 320 g/mol; HPLC-Reinheit = 99%.
  • 4.2 Biologische Aktivität der Verbindungen gemäß der Erfindung
  • 4.2.1 In vivo Assays
  • 4.2.1.1 Allen-Doisy-Test auf Östrogenität
  • Dieser Test wird dazu eingesetzt, um eine Testverbindung auf östrogene Aktivität zu testen, indem die Verhornung des Vaginalepithels von ovariektomisierten Ratten nach der Verabreichung einer Testverbindung beobachtet wird (Allen und Doisy 1923; Mühlbock 1940; Terenius 1971).
  • Erwachsene weibliche Hsd/Cpb-Ratten mit Anfangsgewichten zwischen etwa 150-200 g wurden von einem gewerblichen Lieferanten (Firma Harlan-CPB, Horst, Niederlande) erhalten. Die Ratten wurden in Aluminiumkäfigen in einem Licht- und Temperatur-kontrollierten Raum (14 Stunden Licht/10 Stunden Dunkelheit bei 19°C-23°C) gehalten. Je Käfig wurden jeweils vier Ratten gehalten. Die Ratten hatten freien Zugang zu einem Standard-pelletisierten Futter und zu Leitungswasser. Nach einem Zeitraum der Akklimatisierung (wenige Tage) wurden die Ratten bilateral ovariektomisiert unter Ether-Anästhesie. Vaginalabstriche wurden über einen Zeitraum von 4-5 Tagen genommen. Ratten mit positiven Abstrichen wurden verworfen.
  • Die Ratten jeder Behandlungsgruppe wurden in zwei nebeneinander angeordneten Käfigen gehalten. Bei jedem Experiment wurden 2 + n-Gruppen von acht Ratten pro Gruppe verwendet. Zwei Referenzgruppen erhielten die Referenzverbindung (Östradiol, 1,3,5(10)-Östratrien-3,17-β-Diol für die subkutane ("sc") Verabreichung; Ethinylöstradiol für die orale Verabreichung); und n-Gruppen erhielten die Testverbindung. Für die subkutane Verabreichung wurde eine Gesamtdosis/Ratte zwischen 0,1 μg und 0,2 μg (ungefähr 0,4-0,8 μg/kg Gesamtdosis) verwendet. Für die orale Verabreichung wurde eine Gesamtdosis/Ratte von 0,008-0,016 mg (ungefähr 0,032-0,064 mg/kg Gesamtdosis) verwendet. Als Träger für die sc-Verabreichung wurden (in bevorzugter Reihenfolge) Arachisöl, Arachisöl mit 100 ml/l Benzylalkohol; Gelatine (5,0 g/l) und Mannit (50 g/l) in Wasser; Methylcellulose (2,0 g/l) und NaCl (9,0 g/l) in Wasser; oder ein beliebiger anderer geeigneter Träger verwendet. Als Träger für die orale Verabreichung wurden (in bevorzugter Reihenfolge): Gelatine (5,0 g/l) und Mannit (50 g/l) in Wasser; Methylcellulose (2,0 g/l) und NaCl (9,0 g/l) in Wasser; Mulgofen (50 g/l) (vertrieben unter der Warenbezeichnung ELF 719, GAF) und NaCl (9,0 g/l) in Wasser; oder ein beliebiger anderer geeigneter Träger verwendet.
  • Drei Wochen nach der Ovariektomie wurden die Ratten mit einer Einzel-sc-Dosis von 1 μg Östradiol (in 0,1 ml Arachisöl) geprimt, um die Aufrechterhaltung der Empfindlichkeit und eine größere Gleichförmigkeit der Reaktion zu gewährleisten. In der vierten Woche wurde 7 Tage nach dem Primen (vorzugsweise an einem Montag) die Referenz- oder die Testverbindung in 3 gleichen Dosen verabreicht, nämlich eine am Nachmittag des ersten Tags der Behandlung, und zwei (eine am Morgen und eine am Nachmittag) des zweiten Tags der Behandlung. Die Dosen der Verbindungen wurden auf der Basis von Extrapolationen der in vitro-Daten ausgewählt, die bei CHO-Transaktivierungs (Abschnitt)- und/oder Bindungsassays für Östrogenrezeptoren unter Verwendung von bekannten Östrogen-Agonisten und -Antagonisten erhalten worden waren. Für die sc-Verabreichung wurde die Referenzverbindung (Östradiol) in Gesamtdosen von 0,1-0,2 μg/Ratte verabreicht. Die Testverbindungen wurden gewöhnlich in Gesamtdosen von 0,01-1,0 mg/Ratte verabreicht. Jede subkutane Gesamtdosis wurde gleich über drei Verabreichungen aufgeteilt, jeweils mit einem Volumen der Dosis von 0,25 ml. Für die orale Verabreichung wurde die Referenzverbindung (Ethinylöstradiol) in Gesamtdosen von 0,008-0,016 mg/Ratte verabreicht. Die Testverbindungen wurden gewöhnlich in Gesamtdosen von 0,01-1,0 mg/Ratte verabreicht. Jede orale Gesamtdosis wurde gleich über 3 Verabreichungen aufgeteilt, jeweils mit einem Volumen der Dosis von 0,25 ml. Für die Angabe der Dosen pro kg wurde ein durchschnittliches Körpergewicht von 250 g angenommen. Vaginalabstriche wurden am Nachmittag des dritten Tags, am Morgen und am Nachmittag des vierten Tags und am Morgen des fünften Tags der Behandlungswoche abgenommen. Weitere Vaginalabstriche wurden an den darauffolgenden Tagen (am Morgen) abgenommen, bis die östrogene Reaktion bzw. Antwort vollständig war. Die Vaginalabstriche wurden auf Mikroskop-Objektträgern hergestellt. Die Objektträger wurden getrocknet und mit 96%igem Ethanol fixiert und etwa zwanzig Minuten lang mit Giemsa-Lösung (Firma Merck, Darmstadt, Deutschland), die mit Leitungswasser im Verhältnis von 1:10 verdünnt worden war, angefärbt. Dann wurde gründlich mit Leitungswasser gewaschen und getrocknet. Der Prozentanteil von verhornten und kernhaltigen Epithelzellen wurde für jeden Abstrich durch mikroskopische Beobachtung (60x) ermittelt. Die Ratten durften eine Woche lang ausruhen (Woche fünf des Experiments). Das Experiment wurde dann mit einem Priming in der sechsten Woche und einer Verabreichung und Beobachtung während der siebten Woche, wie beschrieben, wiederholt. Die Ratten wurden dann schmerzfrei unter tiefer Anästhesie oder mit CO2/O2-Gas getötet.
  • Die Entwicklungsphase des Vaginalepithels für jede Ratte wurde unter Anwendung einer Skala von "a"-"g" wie folgt bewertet (Tabelle 1). Die Vaginalsequenz von normalen, nicht-ovariektomisierten Ratten mit einem Östrogenzyklus von 4 Tagen ist: Diöstrus → Diöstrus → Proöstrus → Östrus. Die gewöhnlichen Phasen, beobachtet jeweils am Morgen des 4-tägigen Östrus-Zyklus unter Verwendung der Skala gemäß Tabelle 1 sind daher a, a, e bzw. g. Die Phasen b, c, d und f sind Zwischenphasen.
  • Tabelle 1
    Figure 00860001
  • Die Anzahl von Ratten mit positiver Reaktion ist ein Maß für die östrogene Aktivität der Testverbindung. Die Interpretation der Ergebnisse erfolgte wie in Tabelle 2 gezeigt. Tabelle 2
    Prozentanteil von Ratten, die eine positive Reaktion zeigen Schlussfolgerung
    0% inaktiv
    1 %-50% schwach aktiv
    > 50% aktiv
  • 4.2.1.2 Anti-Allen-Doisy-Test für die Anti-Östrogenität
  • Dieser Test wird dazu verwendet, eine Testverbindung auf die anti-östrogene Aktivität zu testen, wenn sie in Gegenwart von Östrogen verabreicht wird (Allen und Doisy 1923; Jongh und Laqueur 1938; Mühlbock 1940; Emmens, Cox et al. 1959). Genauer gesagt wird die Fähigkeit der Testverbindung bestimmt, der östrogenen Verhornung des Vaginalepithels entgegenzuwirken.
  • Erwachsene weibliche Cpb-Ratten mit Anfangsgewichten zwischen 150-200 g wurden von einem gewerblichen Lieferanten (Firma CPB-TNO, Zeist, Niederlande) erhalten. Die Ratten wurden in Aluminiumkäfigen in einem Licht- und Temperatur-kontrollierten Raum (14 Stunden Licht/10 Stunden Dunkelheit bei 21°C-23°C) gehalten. Pro Käfig wurden jeweils vier Ratten gehalten. Die Ratten hatten freien Zugang zu einem Standard-pelletisierten Futter und zu Leitungswasser. Nach einem Zeitraum der Akklimatisierung (wenige Tage) wurden die Ratten bilateral ovariektomisiert unter Ether-Anästhesie. Vaginalabstriche wurden über einen Zeitraum von 4-5 Tagen genommen. Ratten mit positiven Abstrichen wurden verworfen.
  • Die Ratten jeder Behandlungsgruppe wurden in zwei nebeneinander angeordneten Käfigen gehalten. Bei jedem Experiment wurden 1 + n Gruppen von acht Ratten pro Gruppe verwendet. Eine Referenzgruppe erhielt die Referenzverbindung (Nafoxidin HCl); und n Gruppen erhielten die Testverbindung. Für die orale Verabreichung wurden 0,25 mg/Ratte/Tag (ungefähr 1,44 mg/kg/Tag) verwendet. Als Träger für die subkutane ("sc") Verabreichung wurden (in bevorzugter Reihenfolge) Arachisöl, Arachisöl mit 10% Benzylalkohol; Gelatine (0,5%) und Mannit (5%) in Wasser; und Methylcellulose (0,2%) und NaCl (9,0%) in Wasser verwendet. Als Träger für die orale Verabreichung wurden (in bevorzugter Reihenfolge): Gelatine (0,5%) und Mannit (5%) in Wasser; Methylcellulose (0,2%) und NaCl (9,0 %) in Wasser; und Mulgofen (5%) (vertrieben unter der Warenbezeichnung ELF 719, GAF) und NaCl (0,9%) in Wasser verwendet.
  • Zwei Wochen nach der Ovariektomie wurden die Ratten mit einer Einzel-sc-Dosis von 0,2 μg Östradiol (in 0,1 ml Arachisöl), täglich über einen Zeitraum von zehn Tagen verabreicht, geprimt, um die Aufrechterhaltung der Empfindlichkeit und eine größere Gleichförmigkeit der Reaktion zu gewährleisten. Auf die Verabreichung von Östradiol erfolgte sofort die Verabreichung der Testverbindung oder des Trägers. Die Testverbindungen wurden mit 1,0 mg/Ratte verabreicht. Für die sc-Verabreichung betrug das Dosisvolumen 0,1 ml; für die orale Verabreichung betrug das Dosisvolumen 0,25 ml. Vaginalabstriche wurden täglich durch den Verabreichungszeitraum hindurch abgenommen. Die Vaginalabstriche wurden auf Mikroskop-Objektträgern gebildet. Die Objektträger wurden getrocknet und mit 96%igem Ethanol fixiert und etwa zwanzig Minuten lang mit Giemsa-Lösung (Firma Merck, Darmstadt, Deutschland), die im Verhältnis von 1:10 mit Leitungswasser verdünnt worden war, angefärbt. Dann wurde gründlich mit Leitungswasser gewaschen und hierauf getrocknet. Der prozentuale Anteil von verhornten und kernhaltigen Epithelzellen wurde für jeden Abstrich durch mikroskopische Beobachtung (60x) ermittelt. Nach dem Experiment wurden die Ratten unter tiefer Anästhesie oder mit CO2/O2-Gas schmerzfrei getötet.
  • Die Entwicklungsphase des Vaginalepithels für jede Ratte wurde unter Anwendung einer Skala von "a"-"g" wie folgt bewertet (Tabelle 3). Die Vaginalsequenz von normalen, nicht-ovariektomisierten Ratten mit einem Östrozyklus von 4 Tagen ist: Diöstrus → Diöstrus → Proöstrus → Östrus. Die gewöhnlichen Phasen, beobachtet jeweils am Morgen des 4-tägigen Östrozyklus unter Verwendung der Skala gemäß Tabelle 3 sind daher a, a, e bzw. g. Die Phasen b, c, d und f sind Zwischenphasen.
  • Tabelle 3
    Figure 00870001
  • Abstriche, die irgendeine der Phasen e, f oder g zeigten, wurden als östrogen angesehen (d.h., das Vaginalepithel zeigte eine Verhornung). Das Endergebnis wurde als Verhältnis der Anzahl von Abstrichen, die eine östrogene Reaktion zeigten, zu der Gesamtzahl der vom dritten Tag bis zum Schlusstag der Studie gesammelten Abstriche ausgedrückt. Die Anzahl der Ratten mit einer positiven Reaktion ist ein Maß für die anti-östrogene Aktivität der Testverbindung. Die Interpretation der Ergebnisse ist in Tabelle 4 zusammengestellt. Tabelle 4
    Prozentanteil von Ratten, die eine positive Reaktion zeigen Schlussfolgerung
    > 70% inaktiv
    35%-70% schwach aktiv
    < 35% aktiv
  • 4.2.1.3 Uterotropher Bioassay bei der unreifen Ratte zur Bestimmung der Östrogenität und Anti-Östrogenität
  • Die antiöstrogene Aktivität wird durch die Fähigkeit einer Testverbindung (3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon), die Erhöhung des Uterusgewichts, resultierend aus einer Verabreichung von 0,2 μg 17-β-Östradiol ("E2") pro Tag, zu unterdrücken, bestimmt. Statistisch signifikante Verringerungen des Uterusgewichts in einer bestimmten Dosisgruppe im Vergleich zu der E2-Kontrollgruppe zeigen eine Antiöstrogenität an.
  • Hundertsechzig (160) junge Hündinnen (10 pro Pflegemuttertier) mit einem Alter von 12 Tagen wurden erhalten. Einhundertvierzig (140) junge Hündinnen (Alter 19 Tage) mit einem Körpergewicht im Bereich von 35-50 g wurden für die Studie ausgewählt. Im Alter von 19 Tagen, als die jungen Hündinnen ein Gewicht von ungefähr 35-50 g hatten, erfolgte eine Randomisierung zu Behandlungsgruppen in der Reihenfolge des Körpergewichts. Zweimal täglich wurden Beobachtungen hinsichtlich der Mortalität, der Morbidität, der Verfügbarkeit von Futter und Wasser, des allgemeinen Aussehens und der Anzeichen von Toxizität gemacht. Junge Hündinnen, die bei der Studie nicht verwendet wurden, wurden zusammen mit den Pflegemuttertieren schmerzfrei getötet. Die Anfangskörpergewichte wurden kurz vor dem Behandlungsbeginn im Alter von 19 Tagen bestimmt. Die Endkörpergewichte wurden am Tag 22 des Alters bei der Nekropsie bestimmt.
  • Die Behandlung begann im Alter von 19 Tagen und wurde bis zum Alter von 20 und 21 Tagen fortgeführt. Jedes Tier erhielt drei subkutane ("sc") Injektionen täglich über einen Zeitraum von 3 aufeinanderfolgenden Tagen. Drei Ratten in jeder der Kontroll- und Mittel- bis Hochdosis-Testgruppen wurden mit einem Ketamin/Xylazin-Gemisch anästhesiert. Ihr Blut wurde unter Blutabsaugung mittels einer 22-Gauge-Nadel und einer 5 ml-Spritze, die mit 10 USP-Einheiten Natriumheparin/ml gespült wurde, durch die absteigende Vena cava gesammelt.
  • Das Blut wurde dann in ein 5 ml-Plasmaröhrchen mit grüner Spitze (Natriumheparin (gefriergetrocknet), 72 USP-Einheiten) überführt. Plasmaproben wurden durch Zentrifugation gesammelt, bei –70°C eingefroren und durch Massenspektrographie analysiert, um das Vorhandensein und die Menge der Testverbindungen in dem Serum zu bestimmen. Auch die Blutchemie wurde analysiert, um andere Blutparameter zu bestimmen. Die Uteri der Ratten wurden herausgeschnitten und abgewogen. Die restlichen Ratten wurden durch Ersticken unter CO2 getötet. Die Uteri dieser Ratten wurden herausgeschnitten, eingeschnitten, geblottet, um Flüssigkeit zu entfernen, und bis auf die nächsten 0,1 mg abgewogen.
  • Um zu bestimmen, ob die Testverbindung signifikant das Endkörpergewicht beeinflusst hatte, wurde eine parametrische einfaktorielle ("one-way") Varianzanalyse (ANOVA) durchgeführt (SIGMASTAT Version 2.0, im Handel von der Firma Jandel Scientific, San Rafael, CA, erhältlich), durchgeführt. Die Östrogen-Agonist- und -Antagonist-Aktivität wurde durch den Vergleich der Nass-Uterusgewichte zwischen den Behandlungsgruppen bestimmt, wobei eine parametrische ANOVA-Methode auf Loglo-transformierten Daten angewendet wurde. Die Daten wurden transformiert, um den Annahmen der Normalität und der Homogenität der Varianz der parametrischen ANOVA-Methode zu genügen. Es wurde bestimmt, dass der F-Wert signifikant ist (p < 0,05). Ein multipler Spannweitentest nach Student-Newman-Kuels wurde durchgeführt, um das Vorhandensein von signifikanten Unterschieden unter den Behandlungsgruppen zu bestimmen. Da die Endkörpergewichte zwischen den Behandlungsgruppen nicht signifikant unterschiedlich waren (p = 0,999), wurden die Verhältnisse Uterusgewicht:Körpergewicht nicht miteinander verglichen.
  • Es wurde festgestellt, dass die Testverbindung als gemischter Östrogen-Agonist/Antagonist wirkt. Die uterotrophe Reaktion war im Vergleich zu derjenigen, die bei dem Referenzöstrogen, 17β-Östradiol, gesehen wurde, submaximal. Eine submaximale uterotrophische Reaktion selbst bei erhöhten Dosiswerten ist für einen partiellen Östrogen-Agonisten charakteristisch. Beim Testen der Testverbindungen in Kombination mit 17β-Östradiol wurde eine partielle Hemmung der uterotrophischen Reaktion bei allen drei Dosiskonzentrationen beobachtet; daher besaß die Testverbindung eine Östrogen-antagonistische Aktivität. Jedoch hemmte die Testverbindung die durch 17β-Östradiol stimulierte uterotrophische Reaktion nicht vollständig, was darauf schließen lässt, dass es sich bei diesem Bioassay um einen gemischten Östrogen-Agonist/Antagonist handelt.
  • 4.2.1.4 Östrogenrezeptor-Antagonist-Wirksamkeit im MCF-7-Xenograft-Modell
  • Menschliche MCF-7 Mammatumore von existierenden in vivo-Passagen wurden subkutan in 95 weibliche Ncr-nu-Mäuse implantiert. Ein 17-β-Östradiol-Pellet (Innovative Research of America) wird auf die Seite implantiert, die entgegengesetzt zu dem Tumor angeordnet ist. Beide Implantate werden am gleichen Tag eingesetzt.
  • Die Behandlung beginnt, wenn die Tumorgrößen zwischen 75 mg und 200 mg liegen. Das Tumorgewicht wird nach der Gleichung für das Volumen eines Ellipsoids,
    Figure 00900001
    berechnet, wobei 1 und w die größeren und kleineren Abmessungen des Tumors sind und eine Einheitstumordichte angenommen wird. Die Testverbindungen werden als BID: q7h × 2 mit einer Arzneimittelzubereitung pro Woche verabreicht. Die Testverbindungen werden zwischen den Injektionen bei +4°C gelagert. Die Dosis der Testverbindung wird entsprechend dem Körpergewicht des einzelnen Tiers an jedem Behandlungstag festgelegt. Die Gesamtkörpergewichte werden zweimal pro Woche bestimmt, wobei am ersten Tag der Behandlung begonnen wird. Mortalitätsüberprüfungen werden täglich durchgeführt. Mäuse mit Tumoren, die größer als 4.000 mg sind, Mäuse mit ulzerierten Tumoren und moribunde Mäuse werden vor dem Tag der Beendigung der Studie getötet. Die Dauer der Studie ist auf 60 Tage vom Tag der Implantation des Tumors begrenzt, jedoch könnte eine Beendigung früher stattfinden, wenn dies erforderlich sein sollte. Ein terminales Ausbluten aller überlebenden Mäuse wird am letzten Tag des Experiments durchgeführt. Eine statistische Analyse wird mit den gesammelten Daten durchgeführt, mit Einschluss der Mortalität, der Gesamtindividual- und Gruppen-Körpergewichte bei jeder Wägung, der individuellen Tumorgewichte und des mittleren Gruppentumorgewichts bei jeder Messung, des Auftretens von partiellen und vollständigen Regressionen und tumorfreien Überlebenden und der kalkulierten Verzögerung des Wachstums des mittleren bzw. durchschnittlichen ("median") Tumors für jede Gruppe.
  • 4.2.1.5 OVX-Modell bei der Ratte
  • Dieses Modell bestimmt die Fähigkeit einer Verbindung, die Verringerung der Knochendichte und die Erhöhung der Cholesterinwerte, resultierend aus einer Ovariektomie, umzukehren (Black, Author et al. 1994; Willson, Author et al. 1997). Drei Monate alte, weibliche Ratten wurden ovariektomisiert ("ovx"), und die Testverbindungen wurden täglich auf subkutanem Weg verabreicht, wobei mit der Verabreichung ein Tag nach dem chirurgischen Eingriff begonnen wurde. Scheinoperierte Tiere und ovx-Tiere, denen die Trägerkontrolle verabreicht wurde, wurden als Kontrollgruppen verwendet. Nach 28 Tagen der Behandlung wurden die Ratten gewogen und die Gesamtkörpergewichtszunahmen bestimmt und die Tiere wurden schmerzfrei getötet. Blutknochen-Marker (z.B. Osteocalcin und Knochen-spezifische alkalische Phosphatase), Gesamtcholesterin und Urin-Marker (z.B. Desoxypyridinolin und Kreatinin) wurden bestimmt. Es wurden auch die Uterusnassgewichte ermittelt. Sowohl die Tibiae als auch die Oberschenkelknochen wurden von den Testtieren für eine periphere quantitative Computertomographie oder eine andere Messung der Knochenmineraldichte entfernt. Die Werte der ovx- und Testträgertiere wurden mit den scheinoperierten und ovx-Kontrolltieren verglichen, um die spezifischen östrogenen/antiöstrogenen Gewebeeffekte der Testverbindungen zu bestimmen.
  • 4.2.2 In vitro Assays
  • 4.2.2.1 ERα-Bindungsassays
  • Ein ERα-Rezeptor (~ 0,2 mg/ml, Affinity Bioreagents) wurde auf etwa 2 × 10–3 mg/ml in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung ("PBS") mit einem pH-Wert von 7,4 verdünnt. Fünfzig Mikroliter der ERα-PBS-Lösung wurden dann in die einzelnen Vertiefungen einer Flashplatte (Wallac SCINTISCTRIPS) eingegeben. Die Platten wurden versiegelt und 16-18 Stunden lang im Dunkeln bei 4°C gelagert. Die gepufferte Rezeptorlösung wurde kurz vor Gebrauch entfernt, und die Platten wurden 3 Mal mit 200 Mikroliter PBS pro Vertiefung gewaschen. Das Waschen wurde typischerweise unter Verwendung einer langsamen Abgabe des Reagenses in die Vertiefungen durchgeführt, um ein Abstreifen des Rezeptors von der Oberfläche der Vertiefungen zu vermeiden.
  • Für das Screenen einer Bibliotheks wurden 150 Mikroliter 1 nM 3H-Östradiol (New England Nuclear, Boston, MA) in 20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10% Glycerin, 6 mM Monothioglycerin, 5 mM KCl, mit einem pH-Wert von 7,8 mit 50 Mikroliter der Testverbindung (im gleichen Puffer) in einer Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen (Costar 3794) vermischt, was zu einer End-Östradiol-Konzentration von 0,6 nM führte. Weiterhin wurden mehrere Verdünnungen von Östradiol auf dem IC50 von 1-2 nM zentriert, gleichfalls in die einzelnen Vertiefungen eingegeben, um eine Standardkurve bzw. Kalibrierkurve zu erstellen. Die Platten wurden leicht geschüttelt, um die Reagentien miteinander zu vermischen. Insgesamt 150 Mikroliter von jeder Vertiefung wurden in die entsprechenden Vertiefungen der vorbeschichteten ERα-Platten eingegeben. Die Platten wurden versiegelt (Packard #6005185) und die Komponenten in den Vertiefungen wurden entweder bei Raumtemperatur 4 Stunden lang oder über Nacht bei 4°C inkubiert. Der Rezeptor-gebundene Ligand wurde direkt nach Inkubation unter Verwendung eines Szintillationszählers (TRILUX, Wallac) abgelesen. Die Menge des Rezeptor-gebundenen Liganden wurde direkt ermittelt, d.h., ohne Trennung des gebundenen von dem freien Liganden. Wenn Abschätzungen sowohl von dem gebundenen als auch dem freien Liganden erforderlich waren, dann wurde der Überstand aus den Vertiefungen entfernt, und ein flüssiges Szintillationsmittel wurde zugegeben. Die Vertiefungen wurden getrennt in einem Flüssigkeitsszintillationszähler einem Zählvorgang unterworfen.
  • 4.2.2.2 ERβ-Bindungsassays
  • Ein ERβ-Rezeptor (~ 0,2 mg/ml), Affinity Bioreagents) wurde auf etwa 2 × 10–3 mg/ml in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung ("PBS") mit einem pH-Wert von 7,4 verdünnt. Fünfzig Mikroliter der ERβ-PBS-Lösung wurden dann in die einzelnen Vertiefungen einer Flashplatte (Wallac SCINTISCTRIPS) eingegeben. Die Platten wurden versiegelt und 16-18 Stunden lang im Dunkeln bei 4°C gelagert. Die gepufferte Rezeptorlösung wurde kurz vor Gebrauch entfernt, und die Platten wurden 3 Mal mit 200 Mikroliter PBS pro Vertiefung gewaschen. Das Waschen wurde typischerweise unter Verwendung einer langsamen Abgabe des Reagenses in die Vertiefungen durchgeführt, um ein Abstreifen des Rezeptors von der Oberfläche der Vertiefungen zu vermeiden.
  • Für das Screenen einer Bibliothek wurden 150 Mikroliter 1 nM 3H-Östradiol (New England Nuclear, Boston, MA) in 20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10% Glycerin, 6 mM Monothioglycerol, 5 mM KCl mit einem pH-Wert von 7,8 mit 50 Mikroliter der Testverbindung (im gleichen Puffer) in einer Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen (Costar 3794) vermischt, was zu einer End-Östradiol-Konzentration von 0,6 nM führte. Weiterhin wurden mehrere Verdünnungen von Östradiol auf dem IC50 von 1-2 nM zentriert, gleichfalls in die einzelnen Vertiefungen eingegeben, um eine Standardkurve bzw. Kalibrierkurve zu erstellen. Die Platten wurden leicht geschüttelt, um die Reagentien miteinander zu vermischen. Insgesamt 150 Mikroliter von jeder Vertiefung wurden in die entsprechenden Vertiefungen der vorbeschichteten ERβ-Platten eingegeben. Die Platten wurden versiegelt (Packard #6005185) und die Komponenten in den Vertiefungen wurden entweder bei Raumtemperatur 4 Stunden lang oder über Nacht bei 4°C inkubiert. Der Rezeptor-gebundene Ligand wurde direkt nach Inkubation unter Verwendung eines Szintillationszählers (TRILUX, Wallac) abgelesen. Die Menge des Rezeptor-gebundenen Liganden wurde direkt ermittelt, d.h., ohne Trennung des gebundenen von dem freien Liganden. Wenn Abschätzungen sowohl von dem gebundenen als auch dem freien Liganden erforderlich waren, dann wurde der Überstand aus den Vertiefungen entfernt, und ein flüssiges Szintillationsmittel wurde zugegeben. Die Vertiefungen wurden getrennt in einem Flüssigkeitsszintillationszähler einem Zählvorgang unterworfen.
  • 4.2.2.3 ERα/ERβ-Transaktivierungsassays
  • 4.2.2.3.1 Konstruktion von transfizierten CHO-Zellen
  • Die oben genannten transfizierten CHO-Zellen waren von CHO KI-Zellen abgeleitet, die von der American Type Culture Collection ("ATCC", Rockville, MD) erhalten worden waren. Die transfizierten Zellen wurden modifiziert, um die folgenden vier Plasmidvektoren zu enthalten: (1) pKCRE mit DNA für den Human-Östrogenrezeptor. (2) pAG-60-neo mit DNA für das Protein, das zu einer Neomycin-Resistenz führt, (3) pRO-LUC mit DNA für den Ratten-Oxytocin-Promotor und für das Glühwürmchen-Luciferaseprotein, und (4) pDR2 mit DNA für das Protein, das zu einer Hygromycin-Resistenz führt. Alle Transformationen mit diesen genetisch modifizierten CHO-Zellen wurden unter einem rec-VMT-Sicherheitsbehälter ("containment") entsprechend den Richtlinien der COGEM (Commissie Genetische Modificatie) durchgeführt. Ein Screenen wurde entweder in Abwesenheit von Östradiol (Östrogenität) oder in Gegenwart von Östradiol (Anti-Östrogenität) durchgeführt.
  • Reagentien
  • Es wurden die folgenden Reagentien hergestellt, wobei ultrareines Wasser (Milli-Q-Qualität) verwendet wurde.
  • 1. Kulturmedium
  • Dulbecco-MEM/HAM-F12-Pulver (12,5 g/l; Gibco, Paisley, UK) wurde in Wasser aufgelöst. Es wurde Natriumbicarbonat (2,5 Gramm/Liter ("g/l")), L-Glutamin (0,36 g/l) und Natri umpyruvat (5,5 × 10–2 g/l) zugegeben. Dieses Medium wurde mit einem wässrigen Gemisch (0,50 ml/l Medium) von Ethanolamin (2,44 ml/l) von Natriumselenit (0,9 mg/l) und 2-Mercaptoethanol (4,2 ml/l) ergänzt bzw. supplementiert. Der pH-Wert des Mediums wurde mit NaOH oder HCl (1 mol/l) auf 7,0 ± 0,1 eingestellt, und das Medium wurde durch Membranfiltration sterilisiert, wobei ein Filter mit Poren von 0,2 μm verwendet wurde. Das resultierende Serum-freie Kulturmedium wurde bei 4°C gelagert.
  • 2. Antibiotikalösung
  • Streptomycinsulfat (25 g; Mycofarm, Delft, Niederlande) und Penicillinnatrium G (25 g, Mycofarm) wurden in 1 l Wasser aufgelöst und durch Membranfiltration sterilisiert, wobei ein Filter mit Poren von 0,2 μm verwendet wurde.
  • 3. Definiertes supplementiertes Rinderkälberserum ("DBCSS")
  • DBCSS (Hyclone, Utah), vom Hersteller sterilisiert, wurde durch 30-minütiges Erhitzen auf 56°C inaktiviert, wobei alle 5 min durchgemischt wurde. Aliquots von 50 ml und 100 ml wurden bei –20°C gelagert.
  • 4. Kohle-behandeltes DBCSS ("cDBCSS")
  • Kohle (0,5 g; Norit A) wurde mit 20 ml Wasser (3 Mal) gewaschen und dann in 200 ml Tris-Puffer suspendiert. Zur Beschichtung wurden 0,05 g Dextran (T70; Pharmacia, Schweden) in einer Suspension aufgelöst, die kontinuierlich 3 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt wurde. Die resultierende Suspension von Dextran-beschichteter Kohle wurde 10 min lang bei 8.000 N/kg zentrifugiert. Der Überstand wurde entfernt, und zu dem Rest wurden 100 ml DBCSS gegeben. Die Suspension wurde 30 min lang bei 45°C unter aseptischen Bedingungen gerührt. Nach dem Rühren wurde die Kohle durch Zentrifugation über einen Zeitraum von 10 min bei 8000 N/kg entfernt. Der Überstand wurde durch Membranfiltration sterilisiert, wobei ein erstes Filter mit einer Porengröße von 0,8 μm verwendet wurde, gefolgt von einer Filtration mit einem zweiten Filter mit einer Porengröße von 0,2 μm. Das sterilisierte, durch Erhitzen inaktivierte cDBCSS wurde bei –20°C gelagert.
  • 5. Tris-Puffer
  • Tromethamin ("Tris", 1,21 g; 10 mmol) wurde in ungefähr 950 ml Wasser aufgelöst. Der pH-Wert der Lösung wurde auf 7,4 unter Verwendung von HCl (0,2 mol/l) eingestellt, und das Volumen wurde mit zusätzlichem Wasser auf 1 l erhöht. Dieser Puffer wurde frisch vor dem Gebrauch hergestellt.
  • 6. Luclit-Substratlösung
  • Ein Luclit-Lumineszenz-Kit, entwickelt für Messungen der Glühwürmchen-Luciferase-Aktivität in Mikrotiterplatten, wurde von einem gewerblichen Lieferanten (Packard, Meriden, CT) erhalten. Zehn Milliliter der oben genannten Pufferlösung wurden zu jedem Kolben des Substrats gegeben.
  • Herstellung der transfizierten Zellen
  • Unter aseptischen Bedingungen wurde das oben beschriebene Kulturmedium mit einer Antibiotikalösung (2,5 ml/l) und durch Hitze-inaktiviertes cDBCSS (50 ml/l) supplementiert, wodurch ein vollständiges Medium erhalten wurde. Ein Gläschen der oben genannten rekombinanten CHO-Zellen wurde von dem Impfvorratsmaterial in flüssigem Stickstoff genommen und in Wasser bei ungefähr 37°C auftauen gelassen. Ein Roux-Kolben (80 cm3) wurde mit etwa 5 × 105 lebensfähigen Zellen/ml in dem kompletten Medium inokuliert. Der Kolben wurde mit 5% CO2 in Luft gespült, bis ein pH-Wert von 7,2-7,4 resultierte. Danach wurden die Zellen bei 37°C inkubiert. Während dieses Zeitraums wurde das komplette Medium zweimal wieder aufgefrischt.
  • Nach der Inkubation wurde die Zellkultur trypsinisiert und bei einer Verdünnung von 1:10 in einem neuen Kolben (180 cm3 Zellkultur) und bei 5 × 103 Zellen mit 100 μl komplettem Medium pro Vertiefung in einer weißen Kulturplatte mit 96 Vertiefungen für Transaktivierungsassays inokuliert. Die Platten mit 96 Vertiefungen wurden zwei Tage lang inkubiert. Die Zellen wurden als eine Monoschicht am Boden der Vertiefungen wachsen gelassen, und sie erreichten eine Konfluenz nach 2 Tagen. Nach einer Zellkulturdauer von 20 Passagen wurden neue Zellen von dem Impfvorratsmaterial in flüssigem Stickstoff genommen.
  • 4.2.2.3.2 Assay der Verbindungen
  • Assay auf Östrogenität
  • Es wurden Experimente in Gruppen von drei Blöcken durchgeführt, wobei jeder Block sich in einer getrennten Mikrotiterplatte befand. Jeder Block schloss die folgenden vier Gruppen
    Gruppe Inhalte
    1 Eine Transaktivierungsgruppe von vier Vertiefungen, jeweils enthaltend Ethanol und transfizierte Zellen. Diese Gruppe wurde zur Bestimmung der gesamten Transaktivierung verwendet.
    2 Eine gesamte Transaktivierungsgruppe von vier Vertiefungen, enthaltend beta-Östradiol (1 × 10–7 M) und transfizierte Zellen. Diese Gruppe wurde zur Bestimmung der gesamten Transaktivierung der Zellen verwendet.
    3 Drei Standardgruppen von jeweils fünf Vertiefungen, enthaltend fünf verschiedene Konzentrationen von nicht-transfizierten und transfizierten Zellen.
    4 Gruppen der Test- oder Referenzverbindung (n-Gruppen, n ≤ 21) von jeweils drei Vertiefungen, enthaltend drei verschiedene Konzentrationen der Test- oder Referenzverbindung und transfizierte Zellen.
  • Aliquots von zehn μl Kontroll-, Standard-, Test- und Referenzverbindungen wurden mittels einer Pipette in die Vertiefungen der wie oben definierten relevanten Gruppen eingegeben.
  • Jede der Vertiefungen enthielt 190 μl komplettes Medium.
    Gruppe Inhalt
    1 Ethanol
    2 Standardlösung in Ethanol (10–9 M, auf eine Endkonzentration von 10–6 M zu erhöhen).
    3 Standardlösungen in Ethanol (0,47 × 10–11 M, 0,95 × 10–11 M, 1,95 × 10–11 M, 3,9 × 10–11 M und 7,8 × 10–11 M, auf 0,47 × 10–11 M, 0,95 × 10–8 M, 1,95 × 10–8 M, 3,9 × 10–8 M bzw. 7,8 × 10–8 M zu erhöhen).
    4 Test- oder Referenzverbindung in sechs verschiedenen Konzentrationen: 1 × 10–5 M, 3,16 × 10–6 M, 1 × 10–6 M, 3,16 × 10–7 M, 1 × 10–7 M bzw. 3,16 × 10–8 M.
  • Assay auf die Anti-Östrogenität
  • Es wurden Experimente in Gruppen von drei Blöcken durchgeführt, wobei jeder Block sich in einer getrennten Mikrotiterplatte befand. Jeder Block enthielt die folgenden vier Gruppen, wobei jede Gruppe Östradiol, 1,3,5(10)-Östratrien-3,17-β-Diol (10–10 M) in dem Endreaktionsgemisch enthielt.
    Gruppe Inhalte
    1 Eine Transaktivierungsgruppe von jeweils vier Vertiefungen, enthaltend Ethanol und transfizierte Zellen. Diese Gruppe wurde zur Bestimmung der gesamten Transaktivierung verwendet.
    2 Eine Gruppe einer vollständig inhibierten Transkativierungsgruppe von vier Vertiefungen, enthaltend ICI 164,384 (10–6 M) und transfizierte Zellen. Diese Gruppe wurde dazu verwendet, um die komplette Inhibierung der Transaktivierung zu bestimmen.
    3 Drei Standardgruppen von jeweils fünf Vertiefungen, enthaltend fünf verschiedene Konzentrationen von nicht-transfizierten und transfizierten Zellen.
    4 Gruppen der Test- oder Referenzverbindung (n Gruppen, n ≤ 21) von jeweils drei Vertiefungen, enthaltend drei verschiedene Konzentrationen der Test- oder Referenzverbindung und transfizierte Zellen.
  • Aliquots von zehn μl Kontroll-, Standard-, Test- und Referenzverbindungen wurden mittels einer Pipette in die Vertiefungen der wie oben definierten relevanten Gruppen eingegeben. Jede der Vertiefungen enthielt 190 μl komplettes Medium.
    Gruppe Inhalte
    1 Ethanol
    2 Standardlösung in Ethanol (10–9 M, auf eine Endkonzentration von10–6 M zu erhöhen).
    3 Standardlösungen in Ethanol (0,47 × 10–11 M, 0,95 × 10–11 M, 1,95 × 10–11 M, 3,9 × 10–11 M und 7,8 × 10–11 M, auf 0,47 × 10–8 M, 0,95 × 10–8 M, 1,95 × 10–8 M, 3,9 × 10–8 M bzw. 7,8 × 10–8 M zu erhöhen).
    4 Test- oder Referenzverbindung in sechs verschiedenen Konzentrationen: 1 × 10–5 M, 3,16 × 10–6 M, 1 × 10–6 M, 3,16 × 10–7 M, 1 × 10–7 M bzw. 3,16 × 10–8 M.
  • Die Mikrotiterplatten wurden mindestens 15 Minuten lang geschüttelt, um eine Auflösung aller Verbindungen zu gewährleisten. Gleichzeitig wurden 100 μl Östradiol, 1,3,5(10)-Östratrien-3,17-β-Diol (10–7 M) zu 40 ml des kompletten Mediums hinzugegeben, geschüttelt und auf 37°C äquilibriert. Etwa 100 μl dieser Lösung wurden zu weißen Mikrotiter-Kulturplatten gegeben, die am Tag zuvor mit 104 transfizierten Zellen in 100 μl komplettem Medium beimpft worden waren. Die weißen Mikrotiter-Kulturplatten wurden mindestens 15 Minuten lang leicht geschüttelt und 16 h lang bei 37°C im Dunkeln unter einer befeuchteten Atmosphäre, gespült mit 5% CO2 in Luft, inkubiert.
  • Am Ende wurden 200 μl komplettes Medium von den Mikrotiterkulturplatten entfernt, während 50 μl einer LUCLIT-Substratlösung zu den restlichen 50 μl Medium und Zellen gegeben wurden. Nach zehn Minuten war die Zelllyse im Wesentlichen vollständig. Nach dem Versiegeln der Oberseite der Platte wurde die Luciferase-Aktivität mit einem Lumineszenz-Zähler ermittelt. Jede Probe wurde einmal 2,5 s lang einer Zählung unterworfen, wobei ein Szintillations (Lumineszenz)-Zähler verwendet wurde. Alle Lumineszenzmessungen wurden auf einem Teleprinter aufgezeichnet.
  • 4.2.2.3.3 Beurteilung der Reaktionen
  • Die Zellwerte wurden zu einer standardisierten Platte korrigiert und in die Anzahl von Lichtimpulsen pro Sekunde ("cps") umgewandelt. Für jeden Block (Mikrotiterplatte) wurden die mittleren cps-Werte für die gesamten und nicht-spezifischen Transaktivierungsgruppen errechnet. Für jede Konzentration des Standards (für jede Vertiefung getrennt) der Test- und der Referenzverbindung wurde die prozentuale Transaktivierungsaktivität, bezogen auf die maximale spezifische Östradiol, 1,3,5(10)-Östratrien-3,17-β-Diol-Transaktivierungsaktivität unter Verwendung der folgenden Gleichung errechnet:
    Figure 00960001
  • Der prozentuale Anteil in den drei Blöcken wurde statistisch bestimmt, wobei die Analyse einer 3-Punkt-Gehaltsbestimmung mit parallelen Wirkungskurven ("3-point parallel line assay") in Blöcken verwendet wurde. Um den Erfordernissen für diese Analyse besser zu genügen, wurden die prozentualen Werte durch die Logit-Werte ersetzt. Die log-Konzentrations-Reaktionskurven für die Standard-, Test- und Referenzverbindungen wurden auf Linearität ge testet und die letztgenannten Kurven auch auf die Parallelität zu der Kurve für die Standardverbindung. Wenn keine signifikante Krümmung und keine signifikante Abweichung von der Parallelität bei 0,01 Werten gefunden wurden, dann wurde die relative Transaktivierungsaktivität der Testverbindung, bezogen auf Östradiol, 1,3,5(10)-Östratrien-3, 17-β-Diol (Potenzverhältnis) zusammen mit einem 95% Konfidenzintervall errechnet. Für die Antagonisten-Assays wurde die relative inhibierende Potenz der Transaktivierungsaktivität der Testverbindung, bezogen auf den Standard-Antagonisten, ICI 164,384, errechnet. Bei Verbindungen, die eine signifikante agonistische oder antagonistische Aktivität bei diesen anfänglichen Screenings zeigten, wurden genauere EC50-Werte dadurch bestimmt, dass Zwölf-Punkt-Kurven mit 3-Fach-Verdünnungen der Verbindungen erstellt wurden. In diesem Fall wurde der Bereich der Konzentrationen auf der Basis der Aktivität der Verbindung bei den Anfangsscreenings ausgewählt.
  • Es wurde festgestellt, dass die folgenden Verbindungen gemäß der Erfindung aktiv waren (d.h., agonistische oder antagonistische Werte von EC50 ≤ 4 × 10–6 M (ERα) und/oder EC50 ≤ 4 × 10–6 M (ERβ)) gegenüber ERα und/oder ERβ hatten: 4-{5-[2-(4-Hydroxyphenyl)ethyl]-4-benzylisoxazol-3-yl}phenol, 4-[4-Ethyl-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol, 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-benzylisoxazol-3-yl]phenol, 4-[3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]phenol, 4-{5-(4-Hydroxyphenyl)-4-[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]isoxazol-3-yl}phenol, 3-[4,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol, 2-[4,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol, 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-5-yl]phenol, 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-5-phenylisoxazol-4-yl]phenol, 4-[5-(4-Fluorphenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]phenol, 4-{4-(4-Hydroxyphenyl)-5-[3-(trifluormethoxy)phenyl]isoxazol-3-yl}phenol, 4-{4-(4-Hydroxyphenyl)-5-[4-(trifluormethoxy)phenyl]isoxazol-3-yl}phenol, 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-(phenylthiomethyl)isoxazol-3-yl]phenol, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon, 5-(4-Hydroxyphenyl)-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(hydroxypiperidyl)ethoxy]phenylketon, 3-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(hydroxypiperidyl)ethoxy]phenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-hydroxyphenylketon, 4-Hydroxyphenyl-3-(4-hydroxyphenyl)-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-ylketon, 4-[4-Brom-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol, 4-[4-Brommethyl)-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol, 4-[4-(Hydroxymethyl)-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol, 2-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 3-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 2-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-5-yl]phenol, 3-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-5-yl]phenol, 4-(5-(4-Hydroxyphenyl)-4-{[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]methyl}isoxazol-3-yl)phenol, 2-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-methylisoxazol-3-yl]phenol, 4-[5-(4-Hydroxyphenyl)-4-iodisoxazol-3-yl]phenol, 4-[4-Chlor-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-3-yl]phenol, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-benzylcarboxamid, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N,N-dibutylcarboxamid, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-[3-(2-oxopyrrolidinyl)propyl]carboxamid, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-(2-phenylethyl)carboxamid, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-[(4-hydroxyphenyl)methyl]carboxamid, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-(3-pyridylmethyl)carboxamid, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-(2-pyridylmethyl)carboxamid, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N,N-dimethylcarboxamid, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-ethylcarboxamid, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-pyrrolidinylethoxy)phenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-morpholin-4-ylethoxy)phenylketon, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-cyclopropylcarboxamid, [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-cyclobutylcarboxamid, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[2-(1-methylpyrrolidin-2-yl)ethoxy)phenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[(1-methyl-(3-piperidylmethoxy]phenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-[3-(4-methylpiperazinylpropoxy]phenylketon, 3-Ethyl-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-methylphenol, 3-Brom-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 3-Butyl-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-hexylphenol, 3-(2-Brompropyl)-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-carbaldehyd, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-iodphenol, 3-Chlor-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-fluorphenol, 2-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-5-hydroxybenzoesäure, Ethyl-2-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-5-hydroxybenzoat, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-(methylsulfinyl)phenol, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-sulfanylphenol, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-methylphenol, 2-Butyl-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 2-Ethyl-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 2-Brom-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-hexylphenol, 2-Chlor-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol, Ethyl-5-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-hydroxybenzoat, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-methylphenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-2-chlorphenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-chlorphenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-chlorphenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-2-fluorphenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-nitrophenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-nitrophenylketon, 3,4-Dichlorphenyl-3,5-bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-ylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-butylphenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(tert.-butyl)phenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-hydroxyphenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-2-hydroxyphenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-ylphenylketon, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-methoxyphenylketon, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-3-phenylthiophenol, 5-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-hydroxybenzamid, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-phenylthiophenol, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-methylthiophenol, {4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenyl}(methylsulfonyl)amin, 5-[4-Ethyl-3-(4-hy droxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-methoxybenzamid, 5-[4-Ethyl-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl]-2-hydroxybenzamid, 2-[4-Ethyl-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-5-yl]-5-hydroxybenzamid, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-(2-piperidylethoxy)phenylketon, Chlorid, 5-(4-Hydroxyphenyl)-3-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-(2-piperidylethoxy)phenylketon, Chlorid, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-(2-pyrrolidinylethoxy)phenylketon, Chlorid, 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-[(1-methyl-(3-piperidyl))methoxy]phenylketon, Chlorid, 3-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methoxyphenyl)isoxazol-4-yl-3-[(1-methyl-(3-piperidyl))methoxy]phenylketon, Chlorid, 4-[4-Ethyl-3-(4-hydroxy-2-methylphenyl)isoxazol-5-yl]-3-methylphenol, 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-propylisoxazol-5-yl]phenol und 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-4-prop-2-enylisoxazol-5-yl]phenol.
  • 4.2.2.4 MCF-7-Zellproliferationsassays
  • Dieser Assay bestimmt die Östrogen-Agonist/Antagonist-Aktivität einer Testverbindung durch den Effekt der Testverbindung auf die Proliferation von MCF-7-Zellen, gemessen durch die Einarbeitung von 5-Brom-2'-desoxyuridin ("BrdU") in ein Chemolumineszenz-Assayformat.
  • MCF-7-Zellen (ATCC HTB-22) wurden in einer log-Phasenkultur unter Verwendung von DMEM/HamF12-Medium (VN 1/1), das mit 10% fötalem Rinderserum ("FBS") supplementiert worden war, bei 37°C und unter einer Atmosphäre von 5% CO2 gehalten. Die Zellen wurden in eine Platte mit 96 Vertiefungen mit einer Dichte von 7000 Zellen pro Vertiefung eingegeben. Nach 24 Stunden wurden die Zellen weiter in Phenolrot-freiem DMEM/HamF12-Medium, supplementiert mit 10% FBS, inkubiert. Letzteres war mit Dextran-beschichteter Kohle filtriert worden, um eine Abreicherung von endogenem Östrogen (DCC-FBS) vorzunehmen. Die Zellen wurden in diesem Medium weitere 24 Stunden lang mit variierenden Konzentrationen jeder Testverbindung inkubiert, um den IC50-Wert für die Verbindung zu bestimmen. Jede Testverbindung wurde mit den Zellen entweder in Abwesenheit von Östradiol (Bestimmung der Östrogen-Agonist-Aktivität) oder in Gegenwart von 1 nM Östradiol (Bestimmung der Östrogen-Antagonist-Aktivität) inkubiert.
  • Die Zellen wurden in Gegenwart der Testverbindungen 24 Stunden lang bei 37°C und unter einer Atmosphäre von 5% CO2 kultiviert. Die Zellproliferation wurde dadurch ermittelt, dass das Ausmaß der BrdU-Einarbeitung in die DNA gemessen wurde. Dies erfolgte unter Verwendung eines im Handel erhältlichen Reagens-Kits (Boeringer Mannheim/Roche). Der Assay wurde nach den Anweisungen des Herstellers durchgeführt. Zehn Mikroliter BrDU-Markierungsreagens, verdünnt gemäß den Anweisungen des Herstellers, wurden direkt in jede Vertiefung eingegeben, und die Inkubation wurde vier Stunden lang fortgeführt. Die Kulturmedien wurden dann aus den Vertiefungen abgesaugt, und es wurden 100 μl Fixierungs-Denaturierungsmittel von dem Kit zugegeben. Die Zellen wurden 30 Minuten lang bei Raumtemperatur fixiert. Die Platten wurden erneut abgesaugt, und 100 μl mit Peroxidase markierter Anti-BrdU-Antikörper aus dem Kit wurden in jede Vertiefung eingegeben. Nach einer Stunde wurden die Platten sechsmal mit Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung ("PBS") gewaschen, und es wurden 100 μl SUPERSIGNAL (ein Chemolumineszenz-Peroxidase-Substrat, Pierce Chemical) zugesetzt. Die Platten wurden zehn Minuten lang bei Raumtemperatur geschüttelt, und die resultierenden Signale der Chemolumineszenz wurden unter Verwendung eines TRILUX-Szintillationszählers gezählt. Zwei erfindungsgemäße Verbindungen, nämlich 4-{5-(4-Hydroxyphenyl)-4-[4-(2-piperidylethoxy)phenyl]isoxazol-3-yl}phenol und 3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon, wurden unter Verwendung des oben beschriebenen Protokolls getestet. Es wurde festgestellt, dass sie IC50-Werte von weniger als 600 nM in Gegenwart von 1 nM Östradiol hatten.
  • Es wird ersichtlich, dass die vorliegende Erfindung neue Verbindungen zur Verfügung stellt, die eine starke Östrogenrezeptor-modulierende Wirkung haben. Diese Verbindungen können in Präparaten und Verfahren zur Behandlung von Östrogen-vermittelten Störungen, wie Osteoporose, Brust- und Endometrialkrebs, Alzheimer-Krankheit und Atherosklerose, verwendet werden.
  • Die obige Offenbarung dient lediglich zu Illustrationszwecken und nicht zu einer Einschränkung. Für den Fachmann (z.B. den organischen Chemiker, den medizinischen Chemiker, den Endokrinologen und den Arzt) wird aus dem Vorstehenden ersichtlich, dass die vorliegende Erfindung viele zusätzliche Ausführungsformen der Erfindung, die explizit nicht beschrieben sind, umfasst, die jedoch trotzdem durch die Lehren der vorliegenden Erfindung zur Verfügung gestellt werden. Solche zusätzlichen Ausführungen schließen, jedoch ohne Begrenzung darauf, andere Östrogenrezeptor-vermittelte Erkrankungen außer Osteoporose, Brust- und Endometrialkrebs, Alzheimer-Krankheit und Atheroklerose ein. Diese Erkrankungen können unter Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen, Präparate und Verfahren verhindert werden oder behandelt werden. Weitere Aspekte schließen Verbindungen ein, die unter Verwendung der Lehren der vorstehenden Offenbarung gestaltet, synthetisiert und auf den therapeutischen oder prophylaktischen Effekt getestet werden können.
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Claims (20)

  1. Verbindung der Formel:
    Figure 01040001
    oder ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze, wobei: X1 und X2 unabhängig ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Stickstoff und Sauerstoff, so dass, wenn eines von X1 und X2 Stickstoff ist, das andere von X1 und X2 Sauerstoff ist, so dass dadurch eine Isoxazolring-Struktur gebildet wird; R1 Phenyl ist, das mit einer 4-Hydroxygruppe substituiert ist und gegebenenfalls außerdem mit einer Gruppe substituiert ist, die aus Halogen, Nitro, Cyano, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkyloxy, Halogenniederalkyloxy, Carboxy, Niederalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, (Cycloniederalkyl)oxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, Heteroaryloxycarbonyl, Heteroaralkyloxycarbonyl, (Heterocycloniederalkyl)oxycarbonyl, Niederalkylsulfinyl, Niederalkylsulfonyl, Niederalkylthio, Arylthio, Niederalkylcarbonyloxy, Arylcarbonyloxy, Aralkylcarbonyloxy, Heteroarylcarbonyloxy, Heteroaralkylcarbonyloxy, (Cycloniederalkyl)carbonyloxy, Alkylsulfonylamino, (Heterocycloniederalkyl)carbonyloxy, Aminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl und Heteroaralkylaminocarbonyl ausgewählt ist; R3 Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, (Monoaryl)alkyl, Heteroaralkyl, (Cycloalkyl)alkyl oder (Cycloheteroalkyl)alkyl, unsubstituiert oder substituiert mit einer Gruppe, ausgewählt aus Hydroxyl, Nitro, Amino, Amino, Cyano, Halogen, Thio, Thioamido, Amidino, Oxo, Oxamidino, Methoxamidino, Imidino, Guanidino, Sulfonamido, Carboxyl, Formyl, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkoxy, Halogenniederalkoxy, Niederalkoxyalkyl, Alkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Aralkylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Heteroaralkylcarbonyl, Alkylthio, Aminoalkyl und Cyanoalkyl, ist, und, wenn R3 Aryl oder (Monoaryl)alkyl ist, Substituenten außerdem aus Aryloxy und Arylthio ausgewählt sein können, wobei einer dieser Substituenten außerdem mit Carboxyl, Halogen, Nitro, Amino, Cyano, Hydroxyl, Niederalkyl, Niederalkoxy, Aminocarbonyl, -SR, Thioamido, -SO3H, -SO2R oder Cycloalkyl, worin R Wasserstoff, Hydroxyl oder Niederalkyl ist, substituiert sein können; und R2 ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Cyano, Nitro, Thio, Amino, Carboxyl, Formyl, substituiertem Aryl und unsubstituiertem oder substituiertem Aralkyl, Heteroaryl, Heteroaralkyl, Alkenyl, Niederalkyl, Niederalkylcarbonyloxy, Arylcarbonyloxy, Heteroarylcarbonyloxy, Cycloalkylcarbonyloxy, Cycloheteroalkylcarbonyloxy, Aralkylcarbonyloxy, Heteroaralkylcarbonyloxy, (Cycloalkyl)alkylcarbonyloxy, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonyloxy, Niederalkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Cycloalkylcarbonyl, Cycloheteroalkylcarbonyl, Aralkycarbonyl, Heteroaralkylcarbonyl, (Cycloalkyl)alkylcarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl, Heteroaralkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, (Cycloalkyl)alkylaminocarbonyl, Cycloheteroalkylaminocarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylaminocarbonyl, Niederalkylcarbonylamino, Arylcarbonylamino, Heteroarylcarbonylamino, Cycloalkylcarbonylamino, Cycloheteroalkylcarbonylamino, Aralkylcarbonylamino, Heteroaralkylcarbonylamino, (Cycloalkyl)alkylcarbonylamino, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonylamino, Niederalkylamino, Arylamino, Aralkylamino, Heteroarylamino, Heteroaralkylamino, Niederalkylsulfonyl, Arylsulfonyl, Heteroarylsulfonyl, Cylcoalkylsulfonyl, Cycloheteroalkylsulfonyl, Aralkylsulfonyl, Heteroaralkylsulfonyl, (Cycloalkyl)alkylsulfonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylsulfonyl, Niederalkylsulfinyl, Arylsulfinyl, Heteroarylsulfinyl, Cycloalkylsulfinyl, Cycloheteroalkylsulfinyl, Aralkylsulfinyl, Heteroaralkylsulfinyl, (Cycloalkyl)alkylsulfinyl, (Cycloheteroalkyl)alkylsulfinyl, Niederalkyloxy, Aryloxy, Heteroaryloxy, Cycloalkyloxy, Cycloheteroalkyloxy, Aralkyloxy, Heteroaralkyloxy, (Cycloalkyl)alkyloxy, (Cycloheteroalkyl)alkyloxy, Niederalkylthio, Arylthio, Heteroarylthio, Cycloalkylthio, Cycloheteroalkylthio, Aralkylthio, Heteroaralkylthio, (Cycloalkyl)alkylthio, (Cycloheteroalkyl)alkylthio, Niederalkylthiocarbonyl, Arylthiocarbonyl, Heteroarylthiocarbonyl, Cycloalkylthiocarbonyl, Cycloheteroalkylthiocarbonyl, Aralkylthiocarbonyloxythiocarbonyl, Heteroaralkylthiocarbonyl, (Cycloalkyl)alkylthiocarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkylthiocarbonyl, Heteroarylcarbonylthio, Cycloalkylcarbonylthio, Cycloheteroalkylcarbonylthio, Aralkylcarbonylthiooxycarbonylthio, Heteroaralkylcarbonylthio, (Cycloalkyl)alkylcarbonylthio, (Cycloheteroalkyl)alkylcarbonylthio, Niederalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, Heteroaryloxycarbonyl, Cycloalkyloxycarbonyl, Cycloheteroalkyloxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, Heteroaralkyloxycarbonyl, (Cycloalkyl)alkyloxycarbonyl, (Cycloheteroalkyl)alkyloxycarbonyl, Iminoniederalkyl, Iminocycloalkyl, Iminocycloheteroalkyl, Iminoaralkyl, Iminoheteroaralkyl, (Cycloalkyl)iminoalkyl, (Cycloheteroalkyl)iminoalkyl, (Cycloiminoalkyl)alkyl, (Cycloiminoheteroalkyl)alkyl, Oximinoniederalkyl, Oximinocycloalkyl, Oximinocycloheteroalkyl, Oximinoaralkyl, Oximinoheteroaralkyl, (Cycloalkyl)oximinoalkyl, (Cyclooximinoalkyl)alkyl, (Cyclooximinoheteroalkyl)alkyl, (Cycloheteroalkyl)oximinoalkyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenyl, Diniederalkylaminoniederalkyloxyphenyl, (Cycloaminoniederalkyl)niederalkyloxyphenyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl und Halogenniederalkylsulfo nylniederalkyloxyphenylcarbonyl, wobei, wenn die Gruppe substituiert ist, die Substituenten aus Hydroxyl, Nitro, Amino, Imino, Cyano, Halogen, Thio, Thioamido, Amidino, Oxo, Oxamidino, Methoxamidino, Imidino, Guanidino, Sulfonamido, Carboxyl, Formyl, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkoxy, Halogenniederalkoxy, Niederalkoxyalkyl, Alkylcarbonyl, Arylcarbonyl, Aralkylcarbonyl, Heteroarylcarbonyl, Heteroaralkylcarbonyl, Alkylthio, Aminoalkyl und Cyanoalkyl ausgewählt sind, wobei diese Substituenten weiter mit Carboxyl, Halogen, Nitro, Amino, Cyano, Hydroxyl, Niederalkyl, Niederalkoxy, Aminocarbonyl, -SR, Thioamido, -SO3H, -SO2R oder Cycloalkyl substituiert sein können, worin R Wasserstoff, Hydroxyl oder Niederalkyl ist; wobei für jedes R1, R2 und R3 Aryl sich auf monocyclische und polycyclische aromatische Gruppen oder kondensierte Ringsysteme bezieht, die wenigstens einen aromatischen Ring und 3 bis 14 Hauptketten-Kohlenstoffatome haben, und Heteroaryl sich auf monocyclische und polycyclische aromatische Gruppen oder kondensierte Ringsysteme bezieht, die wenigstens einen aromatischen Ring, 3 bis 14 Hauptketten-Kohlenstoffatome und 1 bis 4 Heteroatome als Ringatome in einem aromatischen Ring haben; und wobei die Niederalkylgruppen 1 bis 10 Kohlenstoffatome umfassen.
  2. Verbindung nach Anspruch 1, wobei R2 aus der Gruppe bestehend aus gegebenenfalls substituierten Niederalkyloxy, Aryloxy, Heteroaryloxy, Cycloalkyloxy, Cycloheteroalkyloxy, Aralkyloxy, Heteroaralkyloxy, (Cycloalkyl)alkyloxy und (Cycloheteroalkyl)alkyloxy, Niederalkylthio, Arylthio, Heteroarylthio, Cycloalkylthio, Cycloheteroalkylthio, Aralkylthio, Heteroaralkylthio, (Cycloalkyl)alkylthio, (Cycloheteroalkyl)alkylthio, Aralkyl, Halogennieder alkylsulfonylniederalkyloxyphenyl, Diniederalkylaminoniederalkyloxyphenyl, (Cycloaminoniederalkyl)niederalkyloxyphenyl und (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenyl, Phenylcarbonyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl, Hydroxyphenylcarbonyl, Halogenphenylcarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Diniederalkylaminocarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Hydroxyphenylniederalkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, Niederalkylphenylcarbonyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkoxyphenylcarbonyl und Nitrophenylcarbonyl, ausgewählt ist.
  3. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, wobei R1 ausgewählt ist aus: 4-Hydroxyphenyl, 2-Methyl-4-hydroxyphenyl, 2-Aminocarbonyl-4-hydroxyphenyl, 3-Aminocarbonyl-4-hydroxyphenyl, 3-Chlor-4-hydroxyphenyl, 3-n-Hexyl-4-hydroxyphenyl, 3-Ethyl-4-hydroxyphenyl, 2-Methylsulphinyl-4-hydroxyphenyl, 2-Ethyl-4-hydroxyphenyl, 2-Carboxy-4-hydroxyphenyl, 3-Fluor-4-hydroxyphenyl, 2-Iod-4-hydroxyphenyl and 2-n-Butyl-4-hydroxyphenyl.
  4. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, wobei R1 4-Hydroxyphenyl ist.
  5. Verbindung nach Anspruch 1, wobei R3 gegebenenfalls substituiertes Cycloalkyl, Cycloheteroalkyl, (Cycloalkyl)alkyl oder (Cycloheteroalkyl)alkyl ist.
  6. Verbindung nach Anspruch 1, wobei R3 gegebenenfalls substituiertes Aryl, Heteroaryl, (Monoaryl)alkyl oder Heteroaralkyl ist.
  7. Verbindung nach Anspruch 6, wobei R3 gegebenenfalls substituiertes Heteroaryl oder Heteroaralkyl ist.
  8. Verbindung nach Anspruch 6, wobei R3 gegebenenfalls substituiertes Aryl oder (Monoaryl)alkyl ist.
  9. Verbindung nach Anspruch 8, wobei R3 mit wenigstens einer Hydroxyl-, Alkyloxy-, Aryloxy-, Thio-, Alkylthio- oder Arylthiogruppe substituiert ist.
  10. Verbindung nach Anspruch 9, wobei R3 Phenyl, Phenyloxyniederalkyl oder Phenylniederalkyl ist.
  11. Verbindung nach Anspruch 10, wobei R3 außerdem mit einem Substituenten substituiert ist, der aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Nitro, Cyano, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkyloxy, Halogenniederalkyloxy, Carboxy, Niederalkyloxycarbonyl, Aryloxycarbonyl, (Cycloniederalkyl)oxycarbonyl, Aralkyloxycarbonyl, Heteroaryloxycarbonyl, Heteroaralkyloxycarbonyl, (Heterocycloniederalkyl)oxycarbonyl, Niederalkylsulfinyl, Niederalkylsulfonyl, Niederalkylthio, Arylthio, Niederalkylcarbonyloxy, Arylcarbonyloxy, Aralkylcarbonyloxy, Heteroarylcarbonyloxy, Heteroaralkylcarbonyloxy, (Cycloniederalkyl)carbonyloxy, Alkylsulfonylamino, (Heterocycloniederalkyl)carbonyloxy, Aminocarbonyl, Niederalkylaminocarbonyl, Arylaminocarbonyl, Aralkylaminocarbonyl, Heteroarylaminocarbonyl und Heteroaralkylaminocarbonyl ausgewählt ist.
  12. Verbindung nach Anspruch 11, wobei R3 außerdem mit einem Substituenten, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Halogen, Nitro, Cyano, Niederalkyl, Halogenniederalkyl, Niederalkyloxy, Halogenniederalkyloxy, Carboxy, Niederalkylthio, Aminocarbonyl und Niederalkylsulfonyl, substituiert ist.
  13. Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche, wobei R2 aus der Gruppe bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Niederalkylsulfonylniederalkyloxyphenyl, Diniederalkylaminoniederalkyloxyphenyl, (Cycloaminoniederalkyl)niederalkyloxy phenyl und (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenyl, ausgewählt ist.
  14. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 12, wobei R2 aus der Gruppe, bestehend aus gegebenenfalls substituiertem Phenylcarbonyl, (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl, Hydroxyphenylcarbonyl, Halogenphenylcarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Diniederalkylaminocarbonyl, Phenylniederalkylaminocarbonyl, Hydroxyphenylniederalkylaminocarbonyl, Cycloalkylaminocarbonyl, Niederalkylphenylcarbonyl, Halogenniederalkylsulfonylniederalkyloxyphenylcarbonyl und Nitrophenylcarbonyl ausgewählt ist.
  15. Verbindung nach Anspruch 13 oder 14, wobei R2 (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenol oder (Heterocycloalkyl)niederalkyloxyphenylcarbonyl ist.
  16. Verbindung nach Anspruch 1, die 4-[3-(4-Hydroxyphenyl)-5-phenylisoxazol-4-yl]phenol; 3,5-Bis(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon; 5-(4-Hydroxyphenyl)-3-(4-methoxyphenyl)isaxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon; [3,5-Bis-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-[3-(2-oxo-pyrrolidinyl)propyl]carboxamid; [3,5-Bis(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl]-N-cyclobutylcarboxamid; 3-Brom-4-[4-ethyl-3-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-5-yl]phenol; 3,5-Bis(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-methoxyphenylketon oder 3-(4-Hydroxy-2-methylphenyl)-5-(4-hydroxyphenyl)isoxazol-4-yl-4-(2-piperidylethoxy)phenylketon ist.
  17. Verbindung nach einem der vorangehenden Ansprüche zur Verwendung bei der Behandlung einer Östrogenrezeptor-vermittelten Störung bei einem Säuger.
  18. Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 16 in einem pharmazeutisch wirksamen Träger umfasst.
  19. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 16 bei der Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung oder zur Prophylaxe einer Östrogenrezeptor-vermittelten Störung bei einem Säuger.
  20. Verwendung nach Anspruch 19, wobei die Störung Osteoporose, Östrogen-abhängiger Krebs, Alzheimererkrankung oder Östrogen-abhängige Krankheit ist.
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