DE10039199A1 - Kombinationspräparate aus einem ERß selektiven Estrogen und einem SERM oder Antiestrogen - Google Patents

Abstract

In der vorliegenden Erfindung wird ein neues Medikament zur Therapie von estrogenmangelbedingten Erkrankungen beschrieben. Es handelt sich um ein Kombinationspräparat, bestehend aus einem ERbeta-selektiven Estrogen und einem ERalpha-selektiven Antiestrogen oder SERM (Selektive Estrogen Receptor Modulator). Vorzugsweise ist das Antiestrogen oder SERM als Komponente des Kombinationspräparats peripherselektiv. Das Präparat ist für eine organselektive Estrogentherapie geeignet und weist gegenüber existierenden Therapien deutliche Überlegenheit auf. Das Präparat ermöglicht durch die Kombination von ERalpha-selektivem SERM und ERbeta-Estrogen eine vollständige Protektion gegen estrogenmangelinduzierten Knochenverlust. Ebenso wirken die Komponenten des Medikaments synergistisch hinsichtlich der Hemmung entzündungsinduzierter Gene, insbesondere entzündlichen Erkrankungen wie Atherosklerose, Athritis oder neurodegenerativen Erkrankungen wie Alzheimer und Multiple Sklerose. Weiterhin sind positive Effekte auf Kognition und Stimmung zu erwarten. DOLLAR A Die protektiven estrogenartigen Wirkungen werden erreicht, ohne dass proliferative Effekte auf Brust oder Uterus zu erwarten sind.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Kombinationspräparat umfassend einen ERβ-spezifischen Agonisten und ein Antiestrogen oder SERM, vorzugsweise ein ERα-selektives Antiestrogen, insbesondere ein peripherselektives ERα- selektives Antiestrogen oder/und einen ERα selektiven SERM.

Die Effizienz von Estrogenen zur Behandlung von hormondefizienzbedingten Symptomen wie Hitzewallungen und Atrophie von Estrogenzielorganen, sowie zur Verhinderung von Knochenmasseverlust bei peri- und postmenopausalen Frauen, ist gut belegt und allgemein akzeptiert. Ebenso ist gut dokumentiert, dass die Estrogenersatztherapie bei postmenopausalen Frauen oder bei Frauen mit anders bedingter ovarieller Dysfunktion, das Risiko von Herzkreislauferkrankungen gegenüber nicht estrogenbehandelten Frauen reduziert (Grady et al. (1992), Ann Intern Med 117, 1016-1037).

Neuere Untersuchungen belegen zudem eine protektive Wirkung von Estrogenen gegen neurodegenerative Erkrankungen, wie z. B. Alzheimersche Krankheit (Henderson (1997), Neurology 48 (Suppl 7), S27-S35; Birge (1997), Neurology 48 (Suppl 7), S36-S41), eine schützende Wirkung auf Gehirnfunktionen, wie Gedächtnisleistung und Lernfähigkeit (McEwen et al. (1997), Neurology 48 (Suppl 7), S8-S15; Sherwin (1997), Neurology 48 (Suppl 7), S21-S26), sowie gegen hormondefizienzbedingte Stimmungsschwankungen (Halbreich (1997), Neurology 48 (Suppl 7), S16-S20).

In der herkömmlichen Estrogen- oder Hormonersatztherapie werden klassische Estrogene wie Estradiol und konjugierte Estrogene aus Pferdeurin entweder allein oder in Kombination mit einem Gestagen eingesetzt.

Wegen der stimulierenden Wirkung klassischer Estrogene auf das Endometrium, die zu einer Erhöhung des Endometriumkarzinomrisikos führt (Harlap S (1992), Am J Obstet Gynecol 166, 1986-1992), werden in der Hormonersatztherapie vorwiegend Estrogen/Gestagen- Kombinationspräparate eingesetzt. Die Estrogen/Gestagen-Kombination vermeidet eine Hypertrophie des Endometriums, allerdings ist mit der Kombination auch das Auftreten ungewünschter Zwischenblutungen verknüpft.

Eine Alternative zu den Estrogen/Gestagen-Kombinationspräparaten stellen selektive Estrogene dar, Substanzen, die estrogenartig auf Gehirn, Knochen und Gefäßsystem, nicht aber proliferativ auf das Endometrium wirken.

Eine Klasse von Substanzen, die das gewünschte Profil eines selektiven Estrogens teilweise erfüllen, sind die so genannten Selective Estrogen Receptor Modulators (SERM) (R. F. Kauffmann, H. U. Bryant (1995), DN@P 8 (9), 531-539). Es handelt sich hierbei um Partialagonisten/-antagonisten des Estrogenrezeptorsubtyps ERα. Diese SERMs wirken an ERβ als reine Antagonisten (McInnerney et al. (1998), Endocrinol. 139, 4513-4522). SERMs sind wegen ihres antiestrogenen Charakters ineffektiv hinsichtlich der Therapie akuter postmenopausaler Beschwerden, wie z. B. Hitzewallungen.

Estrogene üben ihre physiologische Wirkung über ein Rezeptorprotein, den Estrogenrezeptor (ER), aus. Es handelt sich dabei um einen kernständigen, durch Liganden aktivierbaren, Transkriptionsfaktor. Bis vor wenigen Jahren wurde angenommen, dass Estrogene ihre Wirkung über einen einzigen Rezeptor ausüben. Kürzlich wurde jedoch ERβ als zweiter Subtyp des Estrogenrezeptors entdeckt (Kuiper et al. (1996), Proc. Natl. Acad. Sci. 93, 5925-5930; Mosselman, Dijkema (1996), Febs Letters 392, 49-53; Tremblay et al. (1997), Molecular Endocrinology 11, 353-365). Das Expressionsmuster von ERβ unterscheidet sich von dem des ERα (Kuiper et al. (1996), Endocrinology 138, 863-870). So überwiegt ERβ gegenüber ERα in der Rattenprostata (Chang, Prins (1999), The Prostate 40, 115-124), während in Rattenuterus ERα überwiegt. Im Gehirn wurden Areale identifiziert, in denen jeweils nur einer der beiden ER-Subtypen exprimiert wird (Shugrue et al. (1996), Steroids 61, 678-681; Li et al. (1997), Neuroendocrinology 66, 63-67). ERβ wird u. a. in Arealen exprimiert, denen Bedeutung für kognitive Prozesse und "Stimmung" zugewiesen wird (Shugrue et al. (1997), J. Comparative Neurology 388, 507-525).

Weitere Organe, die vorwiegend ERβ exprimieren, sind der Gastrointestinaltrakt (Campbell-Thomson (1997), Bioch. Biophys. Res. Com. 240, 478-483), der Urogenitaltrakt (Kuiper et al. (1996), Endocrinology 138, 863-870), die Granulosazellen des Ovars (Byers et al. (1997), Mol. Endocrinol. 1l, 172-182), und der Herzmuskel (Gustafsson (Nice, September 1999), mündliche Mitteilung). Dagegen wird vorwiegend ERα in der Leber, der Niere und der Hypophyse (Shugrue et al. (1998), Steroids 63, 498-504) exprimiert. Im Uterus dominiert ERα (Wang et al. (1999), Biol. of Reprod. 61, 955-964).

In Knochen (Kuiper et al. (1998), Frontiers in Neuroendocrinology 19, 253-286) und Blutgefäßen werden sowohl ERα als auch ERβ exprimiert (Lafrati et al. (1997), Nature Med. 3, 545-48).

Die ERs üben ihre Wirkung als ligandenaktivierte Transkriptionsfaktoren aus. Nach Bindung des Hormons erfolgt Rezeptordimerisierung. Abhängig von der Expression von ERα und/oder ERβ in einer Zelle, bildet sich ein Homodimer oder Heterodimer ERα und ERβ aus (Cowley et al. (1997), J. Biol. Chem. 272, 19858-19862). Das Dimer bindet an eine spezifische Sequenz im Promotor eines Zielgens, das "estrogen response element" ERE (Kumar, Chambon (1988), Cell 55, 145-156; Klein-Hitpass et al. (1986), Cell 46, 1053-1061). Bindung des Rezeptordimers an das ERE bewirkt die Rekrutierung essentieller Transkriptionsfaktoren und die Initiierung der Transkription.

Interessanterweise ist in Zellen, die sowohl ERα als auch ERβ exprimieren, die Estradiol-induzierte Transkriptionsaktivierung gegenüber Zellen, die nur ERα exprimieren, reduziert. In solchen Zellen wirkt ERβ als Repressor der ERα-stimulierten Transaktivierung (Hall, McDonnell (1999), Endocrinology 140, 5566-5578). Auf diese Funktion von ERβ als Modulator von ERα hinsichtlich Transaktivierung wird zurückgeführt, dass in ERβ-Knockout- Mäusen die Response auf Estrogengabe im Uterus stärker ausgeprägt ist, als in Wildtypmäusen (Gustafsson, Steamboat Springs (February 2000), mündliche Mitteilung).

Neben der Wirkung von ER(s) als Aktivatoren von Transkription, üben sie Kontrolle auf die Expression anderer Gene aus, indem sie deren Aktivierung durch andere Transkriptionsfaktoren hemmen. So wurde gezeigt, dass Estrogene die Expression des Cytokins Interleukin-6 (IL-6) hemmen (Pottratz et al. (1993), J. Clin. Invest. 93, 944-950; Stein, Young (1995), Mol. Cell Biol. 15, 4971-4979). Auch andere entzündungsinduzierte Gene werden durch Estrogene gehemmt, wie z. B. die COXII-Expression in Blutgefäßen der Ratte (Fritzemeier, Hegele-Hartung (1999), Handbook of Pharmacol., Oettel, Schillinger Hrsg., 135/II, 21, 1-94). IL-6 wird als zentraler Mediator von Immun- und Entzündungsreaktionen, sowie der Osteoklastogenese (Sehgal (1992), Res. Immunol., 724-734; Jones (1994), Clin. Endocrinol. 40, 703-713) angesehen. Estrogene unterdrücken die IL-6-Produktion durch Osteoblasten und Stromazellen des Knochenmarks. Da IL-6 die Osteoklastenrekrutierung und -reifung stimuliert, wirken Estrogene auf diesen Prozess inhibitorisch, indem sie die IL-6-Produktion hemmen. Diese Hemmung der IL-6-Produktion erfolgt durch Hemmung der Expression des IL-6-Gens (Pottratz et al. (1993), J. Clin. Invest. 93, 944-950; Stein, Young (1995), Mol. Cell Biol. 15, 4971-4979). Die ER vermittelte inhibitorische Wirkung der Estrogene wird durch Hemmung der Aktivität des Transkriptionsfaktors NF_κb bewirkt. Dieser Transkriptionsfaktor wird durch inflammatorische Signale aktiviert (Thanos, Maniatis (1995), Cell 80, 529-532; Didonato et al. (1997), Nature 388, 548-554). Es wird vermutet, dass der ER direkt mit NF_κb interagiert und seine Bindung an die NF_κb- Bindungsstelle im Promotor von entzündungsinduzierten Genen, wie IL-6, blockiert (Ray et al. (1997), FEBS Lett. 409, 79-85).

Ein IL-6-Reportergenassay wurde von Pottratz et al. (1993), supra, beschrieben. Der ligandaktivierte ER hemmte in verschiedenen Zelllinien die Aktivität eines Reportergens, das im Promotor die NF_κb-Bindungsstelle des IL-6-Gens enthielt (Pottratz et al. (1993), J. Clin. Invest. 93, 944-950).

Ein Nachteil bisheriger Estrogentherapien besteht oftmals in der geringen Organselektivität. Die der vorliegenden Erfindung zu Grunde liegende Aufgabe bestand darin, Präparate für eine Estrogentherapie zu entwickeln, bei denen die Nachteile des Standes der Technik mindestens teilweise beseitigt sind.

Überraschenderweise wurde festgestellt, dass eine organselektive Estrogentherapie durch Verabreichung eines Kombinationspräparats möglich ist, umfassend einen für ERβ-selektiven Agonisten und ein Antiestrogen oder einen selektiven Estrogenrezeptormodulator (SERM). Das Kombinationspräparat eignet sich zur Therapie oder Prophylaxe von estrogenmangelbedingten Erkrankungen. Die beiden Komponenten des Präparats können in einer gemeinsamen Darreichungsform (z. B. ein Präparat mit beiden Komponenten) oder in jeweils separaten Darreichungsformen (zwei Präparate mit jeweils einer Komponente) verabreicht werden.

Das erfindungsgemäße Kombinationspräparat ist hervorragend für eine organselektive Estrogentherapie geeignet und weist gegenüber existierenden Therapien eine deutliche Überlegenheit auf.

In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird als Antiestrogen ein für ERα-selektiver Antagonist, insbesondere ein peripherselektiver ERα- selektiver Antagonist verwendet. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird ein für ERα-selektiver SERM verwendet.

Durch das Medikament wird eine zumindest weitgehend vollständige Estrogenwirkung auf Organsysteme oder Gewebe wie den Knochen, das Gefäßsystem, Gehirnfunktionen und Komponenten des Immunsystems erreicht, während keine oder nur marginale Estrogenwirkung auf Organsysteme wie Uterus, Leber, Brustdrüse und Hypophyse bewirkt wird.

Das neue Medikament ist gegenüber der herkömmlichen Estrogen- oder Hormonersatztherapie mit Estrogenen oder Estrogen/Gestagen- Kombinationen durch eine reduzierte Wirkung auf den Uterus und die Vermeidung von Blutungen überlegen. Gegenüber der Monotherapie mit einem SERM oder einem ERβ-Liganden ist das Medikament durch eine vollständigere Protektion gegen estrogenmangelbedingten Knochenmasseverlust überlegen. Gegenüber der Kombination eines "klassischen" Estrogens wie Estradiol mit einem reinen Antiestrogen ist das hier beschriebene Medikament durch ein verbessertes "therapeutisches Fenster" (deutliche Dissoziation zwischen knochenprotektiver und uterusstimulierenden Dosierungen) überlegen.

Durch die besondere Kombination des ERβ selektiven Estrogens mit dem ERα elektiven Antiestrogen oder SERM wird erreicht, dass in Zellen und Organsystemen, die ausschließlich oder vorwiegend ERβ exprimieren, wie z. B. das Gehirn, ERβ-abhängige Estrogenwirkungen durch die ERβ-selektive Estrogenkomponente des Präparats induziert werden. Im Uterus, in dem ERα gegenüber ERβ dominiert, wirken das ERα-selektive SERM oder Antiestrogen und der ERβ-Agonist gleichsinnig antiproliferativ. In Organen, wie dem Knochen, in dem sowohl ERα als auch ERβ exprimiert werden, wirken das ERα-selektive SERM oder Antiestrogen und das ERβ Estrogen additiv hinsichtlich Protektion gegen estrogenmangelinduzierten Knochenmasseverlust. Ebenfalls gleichsinnige antiproliferative sowie antientzündliche Wirkung üben das ERα-selektive SERM bzw. Antiestrogen und der ERβ-Agonist im Gefäßsystem aus und wirken somit synergistisch hinsichtlich einer Protektion gegen Gefäßerkrankungen wie die Atherosklerose.

Die Erfindung betrifft ein Kombinationspräparat, dessen Herstellung, therapeutische Anwendung und pharmazeutische Darreichungsformen, bestehend aus einem neuartigen selektiven Estrogen, einem ERβ selektiven Estrogen und einem Antiestrogen, vorzugsweise einem so genannten SERM (S. R. Kauffman, H. U. Bryant (1995), DN@P 8 (9), 531-539). Besonders bevorzugt ist die Kombination eines ERβ selektiven Estrogens mit einem SERM oder mit einem Antiestrogen, das höhere Affinität zum Rattenuterusrezeptor, im Vergleich zum Rattenprostatarezeptor oder zu ERα im Vergleich zu ERβ aufweist, insbesondere solchen Verbindungen, die peripherselektiv wirksam sind, d. h. die die Bluthirnschranke nicht passieren. Ein Beispiel für ein ERα- selektives SERM ist das Raloxifen (Barkhelm et al. (1998), Mol. Pharmacol. 54, 105-112), das für die vorliegende Anwendung beansprucht wird. Beispiele für peripherselektive Antiestrogene sind ZM 182780, 11β-Fluoro-7α-(14,14,15,15,15-pentafluoro-6-methyl-10-thia-6- azapentadecyl)-estra-1,3,5(10)-trien-3,17ß-diol und andere 7α-Alkyl­ estratriene (PCT/EP97/045517) und 11β-Fluoro-7α- (13,13,14,14,15,15,16,16,16-nonafluoro-6-methyl-6-azahexadecyl)-estra- 1,3,5(10)-trien-3,17ß-diol. Ein Beispiel für ein peripherselektives SERM ist 5-(4-{5-[(RS)-(4,4,5,5,5-Pentafluorpentyl)sulfinyl]pentyloxy}phenyl)-6- phenyl-8,9-dihydro-7H-benzocyclohepten-2-ol. Peripherselektive Antiestrogene und SERMs können Bestandteil des hier beschriebenen Medikaments sein und werden für diese Anwendung beansprucht. Auch andere SERMs wie 14α,17α-Ethano-11β-{4-[5-(2- pyridinmethylsulfonyl)pentyloxy]phenyl}-1,3,5(10)estratrien-3,17ß-diol (11β-substituierte Steoide), TSE 424 und andere 2-Phenylindole (American Home), EM 652, EM 800, CP 336156 (Lasofoxifene, Pfizer; Hua et al. (2000), Endocrinology 141, 1338-1344) können Bestandteil des Kombinationspräparats sein und werden für diese Anwendung beansprucht.

Ein ERβ-selektives Estrogen als ein Bestandteil des Kombinationspräparats, das Gegenstand dieser Erfindung ist, zeichnet sich durch höhere Affinität zum Estrogenrezeptor von Rattenprostata im Vergleich zu Rattenuterus, oder durch höhere Affinität zu ERβ im Vergleich zu ERα aus. Dies umfasst Substanzen, die in früheren Patentanmeldungen beschrieben wurden: "ERβ- affine Ent-Steroide; 16-OH-Steroide; Nor-Steroide; 8-β-substituierte Steroide". Die vorliegende Anmeldung umfasst auch andere selektive Estrogene, die in verschiedenen Patentanmeldungen beschrieben wurden, als möglichen Bestandteil des Kombinationspräparats: z. B. a) ASTRA, Novel Estrogens, WO97/08188, 9502921-1, PCT/SE96/01028; b) Sumitomo Chemical Co. Ltd., JP 11292872; c) Androstendiol und Prodrugs von Androstendiol; Pharmaceutical compositions and uses for Androstene 3ß, 17ß-Diol, WO99/63973) und d) Pytoestrogene mit höherer Affinität zu ERβ im Vergleich zu ERα.

Der ERβ-Agonist ist vorzugsweise ausgewählt aus 3,16-Dihydroxyestra- 1,3,5(10)-trienderivaten, 8α-H, 9β-H, 10α-H, 13α-H, 14β-H-gonanderivaten, vorzugsweise abgeleitet von ent-13-Alkylgonan, 8β-substituierten Estra- 1,3,5(10)-trienderivaten und Gona-1,3,5(10)-trienderivaten. Beispiele für besonders bevorzugte ERβ-Antagonisten sind in PCT/EP00/01073, DE 199 17 930.1, DE 199 41 105.1 und DE 100 19 167.3 beschrieben. Auf die Offenbarung dieser Dokumente, insbesondere auf die dort gezeigten allgemeinen Strukturformeln und bevorzugten Einzelverbindungen, wird ausdrücklich Bezug genommen.

Eine selektive Estrogenwirkung des erfindungsgemäßen Präparats kann auf Grund der unterschiedlichen Gewebeverteilung von ERα und ERβ durch subtypspezifische Liganden erreicht werden. Substanzen mit Präferenz für ERβ verglichen mit ERα im in vitro Rezeptorbindungstest wurden von Kuiper et al. beschrieben (Kuiper et al. (1996), Endocrinology 138, 863-870). ERβ- Selektivität weisen danach unter anderem das Phytoestrogen Genistein und der DHEA-Metabolit Androstendiol auf. Weitere ERβ-selektive Estrogene wurden in verschiedenen Patentschriften beschrieben: ERβ-affine Ent- Steroide; 16-OH-Steroide; Nor-Steroide; 8-β-substituierte Steroide. Die vorliegende Anmeldung beansprucht weitere selektive Estrogene und Prodrugs, die in verschiedenen Patentanmeldungen beschrieben wurden, als mögliche Komponente des Präparats: a) ASTRA, Novel Estrogens, WO97/08188, 9502921-1, PCT/SE96/01028; b) Sumitomo Chemical Co. Ltd., JP 11292872; c) Androstendiol und Prodrugs von Androstendiol; Pharmaceutical compositions and uses for Androstene 3β, 17β-Diol, WO99/63973); Pytoestrogene mit höherer Affinität zu ERβ im Vergleich zu ERα wie das Genistein.

Westernlind et al. (1998) beschreiben eine differentielle Wirkung von 16α- Hydroxyestron auf den Knochen einerseits und Reproduktionsorgane der weiblichen Ratte andererseits (Westerlind et al. (1998), J. Bone and Mineral Res 13, 1023-1031).

Unsere Untersuchungen ergaben, dass 16α-Hydroxyestron 3-fach besser an den humanen Estrogenrezeptor α (ERα) als an den humanen Estrogenrezeptor β (ERβ) bindet. Der RBA-Wert der Substanz am Rattenprostataestrogenrezeptor ist 5-fach besser als der RBA-Wert der Substanz am Rattenuterusestrogenrezeptor. Die von Westerlind beschriebene Dissoziation der Substanz ist nach unseren Erkenntnissen auf ihre Präferenz für ERβ im Vergleich zu ERα zurückzuführen. 16α- Hydroxyestron ist eine mögliche Komponente des hier beschriebenen Präparats und wird für diese Anwendung beansprucht.

Das erfindungsgemäße Kombinationspräparat ist insbesondere für eine gewebe- oder organselektive Estrogentherapie geeignet; beispielsweise für die Prophylaxe oder Behandlung peri- und postmenopausaler Beschwerden, für die Hormonsubstitution, zur Prophylaxe oder Behandlung hormondefizienzbedingter Beschwerden, insbesondere bei ovarieller Dysfunktion, zur Prophylaxe und Behandlung von hormondefizienzbedingten Knochenmasseverlust und Osteoporose, zur Prophylaxe und Behandlung von Herz-Kreislauf- und Gefäßerkrankungen, zur Prophylaxe und Behandlung von hormondefizienzbedingten und neurodegenerativen Erkrankungen, zur Prophylaxe und Behandlung von hormondefizienzbedingten Beinträchtigungen von Gedächtnis- und Lernfähigkeit und zur Prophylaxe und Behandlung von Erkrankungen des Immunsystems.

Das neue Medikament ist besonders geeignet für die Behandlung peri- und postmenopausaleer Beschwerden, insbesondere Hitzewallungen, Schlafstörungen, Reizbarkeit, Stimmungsschwankungen, Inkontinenz, Vaginalatrophie und hormondefizienzbedingte Gemütserkrankungen. Ebenso ist das Präparat für die Hormonsubstitution und die Therapie von hormondefizienzbedingten Beschwerden bei chirurgisch, medikamentös oder anders bedingter ovarieller Dysfunktion geeignet.

Das Präparat ist außerdem zur Prophylaxe gegen hormondefizienzbedingten Knochenmasseverlust und Osteoporose, zur Vorbeugung gegen Herzkreislauferkrankungen, insbesondere Gefäßerkrankungen wie Atherosklerose und zur Vorbeugung gegen hormondefizienzbedingte neurodegenerative Erkrankungen wie Alzheimersche Krankheit sowie hormondefizienzbedingte Beeinträchtigung von Gedächtnis- und Lernfähigkeit, einsetzbar.

Weiterhin ist das Präparat zur Behandlung von entzündlichen Erkrankungen des Immunsystems, insbesondere Autoimmunerkrankungen, wie z. B. Rheumatoide Arthritis, einsetzbar.

Das Medikament eignet sich zur Therapie und Prophylaxe estrogendefizienzbedingter Erkrankungen sowohl von Frauen als auch Männern.

Das Medikament ist bei Männern insbesondere geeignet zur Therapie von hormondefizienzbedingtem Knochenmasseverlust und Osteoporose, zur Vorbeugung gegen Herzkreislauferkrankungen, insbesondere Gefäßerkrankungen wie Atherosklerose und zur Vorbeugung gegen hormondefizienzbedingte neurodegenerative Erkrankungen wie Alzheimersche Krankheit sowie hormondefizienzbedingte Beeinträchtigung von Gedächtnis- und Lernfähigkeit und zur Therapie der Prostatahyperplasie.

Weiterhin ist das Medikament zur Behandlung von entzündlichen und Erkrankungen des Immunsystems, insbesondere Autoimmunerkrankungen wie z. B. Rheumatoide Arthritis, einsetzbar.

Durch die zur vorliegenden Erfindung führenden Untersuchungen wurde festgestellt, dass ERβ in der Lage ist, NF_κb-gesteuerte Reportergene zu hemmen. So erweisen sich in einem Reportergenassay mit einem NF_κb- gesteuerten Reportergen die SERMs als Partialantagonisten, wenn sie ihre Wirkung über ERα ausüben, d. h. sie bewirken eine estrogenähnliche Hemmung der Reportergenaktivität und üben eine antagonistische (im Sinne einer aktiv transreprimierenden) Wirkung in Gegenwart von Estradiol aus (Abb. 1). Diese Wirkung spiegelt sich in vivo durch eine antiresorptive (knochenprotektive) Wirkung wieder. Wenn SERMs über ERβ wirken, üben sie an einem NF_κb-gesteuerten Reportergen hingegen keine agonistische Wirkung aus (Abb. 2). Bei Contransfektion von ERα und ERβ hemmt ERβ die ERα-vermittelte agonistische Wirkung der SERMs (Abb. 3). Daher ist durch einen SERM alleine in vivo keine vollständige Protektion gegen estrogenmangelinduzierten Knochenmasseverlust erreichbar, da im Knochen ERα und ERβ exprimiert werden. Vollständige Repression des NF_κb-gesteuerten Promotors wird dagegen überraschenderweise durch Coadministration eines SERMs und eines ERβ-spezifischen Estrogens erreicht, wenn ERα und ERβ in die Testzellen cotransfiziert werden (Abb. 4).

Die additive Wirkung bezüglich einer Hemmung des NF_κb-gesteuerten Promotors von SERM und ERβ-selektivem Estrogen in kultivierten Zellen, die ERα und ERβ exprimieren, impliziert eine additive antiresorptive (knochenprotektive) Wirkung in vivo, da Knochenzellen auch im intakten Organismus sowohl ERα als auch ERβ exprimieren. Weiterhin lässt sich schließen, dass die Kombination von ERβ-spezifischem Estrogen und SERM in vivo additiv oder synergistisch hinsichtlich einer Hemmung entzündungsinduzierter Gene wirkt, wenn die Zellen des Zielorgans sowohl ERα als auch ERβ exprimieren. Dies gilt z. B. für das kardiovaskuläre System.

Hinzu kommt, dass SERMs, insbesondere ERα-selektive SERMs, eine selektive Estrogentherapie insofern erlauben, da sie den estrogenmangelinduzierten Knochenmasseverlust hemmen und dabei keine oder geringe Stimulierung des Uteruswachstums bewirken. Ihre knochenprotektive (antiresorptive) Wirkung beruht auf der Hemmung der Expression von osteoklastenstimulierenden Zytokinen. Sie üben diese Wirkung über ERα in Knochenzellen aus (Hemmung von NF_κb). Auf den Uterus wirken SERMs als Antiestrogene; sie hemmen estrogenstimuliertes Wachstum des Uterus, insbesondere die Proliferation des Ephitels. Sie üben diese Wirkung über ERα aus. Ebenfalls antiestrogene- und proliferationshemmende Wirkung üben SERMs auf Brustkrebszellen aus. Weiterhin zeigen SERMs, die nicht peripherselektiv sind, antiestrogene Wirkung auf estrogeninduzierte Gene im Gehirn. Dies führt in Kombination mit einem ERβ selektiven Agonisten zu einer organ- bzw. gewebeselektiven Wirkung. So werden beispielsweise die protektiven estrogenartigen Wirkungen erreicht, ohne dass unerwünschte proliferative Effekte auf Brust und Uterus zu erwarten sind.

Die zu verabreichenden Mengen der Komponenten (a) und (b) des erfindungsgemäßen pharmazeutischen Kombinationspräparates können alle Mengen sein, mit denen der gewünschte Effekt erreicht wird. In Abhängigkeit des zu behandelnden Zustands und der Art der Verabreichung beträgt die Menge der zu verabreichenden Komponente (a) bevorzugt 0,01 µg/kg bis 10 mg/kg Körpergewicht, besonders bevorzugt 0,04 µg/kg bis 1 mg/kg Körpergewicht pro Tag. Beim Menschen entspricht dies in etwa einer Dosis von 0,8 µg bis 800 mg, vorzugsweise von 3,2 µg bis 80 mg täglich. Die zu verabreichende Menge der Komponente (b) beträgt vorzugsweise 0,01 µg/kg bis 10 mg/kg Körpergewicht, besonders bevorzugt von 0,04 µg/kg bis 1 mg/kg Körpergewicht pro Tag. Eine Dosiseinheit des erfindungsgemäßen pharmazeutischen Kombinationspräparates enthält bevorzugt je 0,8 µg bis 800 mg, bevorzugt 1,6 µg bis 200 mg von jeder der Komponenten (a) und (b).

Das Verhältnis der beiden Komponenten (a) und (b) in dem erfindungsgemäßen Kombinationspräparat kann über einen breiten Bereich variieren und beträgt bevorzugt 1 : 99 bis 99 : 1 nach Gewicht, besonders bevorzugt 10 : 90 bis 90 : 10 nach Gewicht. In Abhängigkeit der gewünschten Stimulation kann es vorteilhaft sein, die zu verabreichende Menge der Wirkstoffe aus dem oberen oder unteren Bereich der oben angegebenen Mengenbereiche auszuwählen. Dadurch kann die Selektivität der Wirkstoffe weiter erhöht werden.

Die Verabreichung der Komponenten (a) und (b) kann gleichzeitig oder nacheinander erfolgen. Es ist insbesondere möglich, die Wirkstoffe abwechselnd nacheinander zu verabreichen. Geeignete Verabreichungsprotokolle sind beispielsweise subkutane Verabreichung oder orale Verabreichung. Die Wirkstoffe können mehrmals täglich, beispielsweise ein bis 10 mal täglich und über mehrere Tage, beispielsweise über einen Zeitraum von 1 bis 60 Tagen, bevorzugt von 1 bis 30 Tagen, verabreicht werden.

Die pharmazeutischen Kombinationspräparate enthalten die Wirkstoffe gegebenenfalls in Mischung mit pharmakologisch üblichen Träger-, Hilfs- oder Verdünnungsmitteln sowie gegebenenfalls mit anderen pharmakologisch bzw. pharmazeutisch wirksamen Stoffen wie etwa Gestagenen. Die Herstellung der Arzneimittel erfolgt in bekannter Weise.

Als Träger- und Hilfsstoffe kommen z. B. solche infrage, die in folgenden Literaturstellen als Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete empfohlen bzw. angegeben sind: Ullmanns Encyklopädie der technischen Chemie, Band 4 (1953), Seite 1 bis 39; Journal of Pharmaceutical Sciences, Band 52 (1963), Seite 918 ff., H. v. Czetsch- Lindenwald, Hilfsstoffe für Pharmazie und angrenzende Gebiete; Pharm. Ind., Heft 2 (1961), Seite 72 u. ff.: Dr. H. P. Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe für Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete, Cantor KG, Aulendorf in Württemberg 1971.

Die Verbindungen können oral oder parenteral, beispielsweise intraperitoneal, intramuskulär, subkutan oder perkutan verabreicht werden. Die Verbindungen können auch in das Gewebe implantiert werden.

Zur oralen Verabreichung kommen Kapseln, Pillen, Dragees usw. infrage. Die Dosierungseinheiten können neben dem Wirkstoff einen pharmazeutisch verträglichen Träger wie z. B. Stärke, Zucker, Sorbit, Gelatine, Gleitmittel, Kieselsäure, Talkum usw. enthalten.

Zur parenteralen Verabreichung können die Wirkstoffe in einem physiologisch verträglichen Verdünnungsmittel gelöst oder suspendiert sein. Als Verdünnungsmittel werden sehr häufig Öle mit oder ohne Zusatz eines Lösungsvermittlers, eines oberflächenaktiven Mittels, eines Suspendier- oder Emulgiermittels verwendet. Beispiele für verwendete Öle sind Olivenöl, Erdnußöl, Baumwollsamenöl, Sojabohnenöl, Rizinusöl und Sesamöl.

Die Verbindungen lassen sich auch in Form einer Depotinjektion oder eines Implantatpräparats anwenden, die so formuliert sein können, dass eine verzögerte Wirkstoff-Freigabe ermöglicht wird.

Implantate können als inerte Materialien z. B. biologisch abbaubare Polymere enthalten oder synthetische Silikone wie z. B. Silikonkautschuk. Die Wirkstoffe können außerdem zur perkutanen Applikation z. B. in ein Pflaster eingearbeitet werden.

Für die Herstellung von mit Wirkstoffen beladenen Intravaginal- (z. B. Vaginalringe) oder Intrauterinsystemen (z. B. Pessare, Spiralen, IUSs, Mirena®) für die lokale Verabreichung eignen sich verschiedene Polymere wie z. B. Silikonpolymere, Ethylenvinylacetat, Polyethylen oder Polypropylen.

Um eine bessere Bioverfügbarkeit des Wirkstoffs zu erreichen, können die Verbindungen auch als Cyclodextrinclathrate formuliert werden. Hierzu werden die Verbindungen mit α, β- oder γ-Cyclodextrin oder Derivaten von diesen umgesetzt (PCT/EP95/02656).

Erfindungsgemäß können die Wirkstoffe auch mit Liposomen verkapselt werden.

Weiterhin soll die Erfindung durch die nachfolgenden Abbildungen und Beispiele erläutert werden. Es zeigen

Abb. 1 die Wirkung von Testsubstanzen auf die Expression eines NF_κb-gesteuerten Reportergens in einer ERα-positiven Zelle.

Abb. 2 die Wirkung von Testsubstanzen auf die Expression eines NF_κb-gesteuerten Reportergens in einer ERβ-positiven Zelle.

Abb. 3 und 4 die Wirkung von Testsubstanzen bzw. Kombinationen von Testsubstanzen auf die Expression eines NF_κb-gesteuerten Gens in einer ERα- und ERβ-positiven Zelle.

Beispiele Methodik Antiestrogenität in vitro

Die antiestrogene Wirkung von SERMs wird durch Transaktivierungstest in MVLN-Zellen ermittelt. Es handelt sich dabei um MCF-7 Brustkrebszellen, die stabil mit einem Vitellogenin-ERE-Luciferase-Reportergen transfiziert wurden (Demirpence et al. (1993), J. Steroid Biochem. Mo. Biol. 46, 355-364).

Estrogenrezeptorbindungsstudien

Die Bindungsaffinität der neuen selektiven Estrogene (ERβ-Liganden) und SERMs wurde in Kompetitionsexperimenten unter Verwendung von 3H- Estradiol als Ligand an Estrogenrezeptorpräparationen von Rattenprostata und Rattenuterus getestet. Die Präparation des Prostatacytosols und der Estrogenrezeptortest mit dem Prostatacytosol wurde, wie von Testas et al. (1981) beschrieben, durchgeführt (Testas J. et al. (1981), Endocrinology 109, 1287-1289).

Die Präparation von Rattenuteruscytosol sowie der Rezeptortest mit dem ER-haltigen Cytosol wurden prinzipiell durchgeführt wie von Stack und Gorski, 1985, beschrieben (Stack, Gorski 1985, Endocrinology 117, 2024-2032) mit einigen Modifikationen wie bei Fuhrmann et al. (1995) beschrieben (Fuhrmann U. et al. (1995), Contraception 51, 45-52).

Die im vorliegenden Patent für die Anwendung in dem Kombinationspräparat beanspruchten ERβ-Liganden weisen höhere Bindungsaffinität zu Estrogenrezeptor aus Rattenprostata als aus Rattenuterus auf. Dabei wird davon ausgegangen, dass ERβ gegenüber ERα in der Rattenprostata, in Rattenuterus ERα gegenüber ERβ überwiegt. In Übereinstimmung hiermit finden wir, dass das Verhältnis der Bindung an Prostata- und Uterusrezeptor qualitativ mit dem Quotient der relativen Bindungsaffinität (RBA) an humanen ERβ und ERα von Ratte (nach Kuiper et al. (1996), Endocrinology 138, 863-870) übereinstimmen.

Weiterhin wurde die Prädiktivität des "Prostata-ER versus Uterus-ER- Testsystems" hinsichtlich gewebeselektiver Wirkung durch in vivo Untersuchungen bestätigt. Substanzen mit Präferenz für Prostata-ER sind in vivo hinsichtlich Knochen- und Uteruswirkung dissoziiert.

Repression von JF_κb-induzierten Promotoren

Der Reportergenassay wurde in U2-OS humanen Osteosarkomazellen durchgeführt wie beschrieben (Fritzemeier, Hegele-Hartung (1999), Handbook of Pharmacol., Oettel, Schilling er Hrsg. 135/II, 21, 1-94). Die Zellen wurden transient mit einem Reportergen transfiziert, das unter der Kontrolle eines eine NF_κb-Bindungsstelle enthaltenden Promotors stand. Zusätzlich wurden die Zellen mit Expressionsvektoren für hERα und/oder hERβ transfiziert.

Claims (8)

1. Pharmazeutisches Kombinationspräparat umfassend

• a) mindestens einen für den Estrogenrezeptor β (ERβ) selektiven Agonisten und
• b) mindestens ein Antiestrogen oder/und mindestens einen selektiven Estrogenrezeptor-Modulator (SERM).

2. Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es die Komponenten (a) und (b) in einer gemeinsamen Darreichungsform enthält.

3. Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es die Komponenten (a) und (b) in jeweils separaten Darreichungsformen enthält.

4. Präparat nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass der ERβ Agonist (a) ausgewählt aus 3,16-Dihydroxyestra- 1,3,5(10)-trienderivaten, 8α-H, 9β-H, 10α-H, 13α-H, 14β-H- gonanderivaten, vorzugsweise abgeleitet von ent-13-Alkylgonan, 8β- substituierten Estra-1,3,5(10)-trienderivaten und Gona-1,3,5(10)- trienderivaten.

5. Präparat nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente (b) einen für den Estrogenrezeptor α (ERα) selektiven Antagonisten, insbesondere einen peripherselektiven ERα- selektiven Antagonisten enthält.

6. Präparat nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Komponente (b) einen für ERα selektiven SERM enthält.

7. Verwendung eines Kombinationspräparats nach einem der Ansprüche 1 bis 6 für eine gewebe- oder organselektive Estrogentherapie.

8. Verwendung nach Anspruch 7 für die Prophylaxe oder Behandlung peri- und postmenopausaler Beschwerden, für die Hormonsubstitution, zur Prophylaxe oder Behandlung hormondefizienzbedingter Beschwerden, insbesondere bei ovarieller Dysfunktion, zur Prophylaxe und Behandlung von hormondefizienzbedingten Knochenmasseverlust und Osteoporose, zur Prophylaxe und Behandlung von Herz-Kreislauf- und Gefäßerkrankungen, zur Prophylaxe und Behandlung von hormondefizienzbedingten und neurodegenerativen Erkrankungen, zur Prophylaxe und Behandlung von hormondefizienzbedingten Beinträchtigungen von Gedächtnis- und Lernfähigkeit und zur Prophylaxe und Behandlung von Erkrankungen des Immunsystems.