DE69623072T3

DE69623072T3 - Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere enthaltend Squalen oder Squalan, Phospholipid und ein Tensid als Adjuvans

Info

Publication number: DE69623072T3
Application number: DE69623072T
Authority: DE
Inventors: Richard Norman King of Prussia Hjorth
Original assignee: Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 1995-06-02
Filing date: 1996-05-31
Publication date: 2007-03-29
Anticipated expiration: 2016-06-01
Also published as: PT745388E; HU9601462D0; DE69623072T2; JP4249807B2; CA2177667A1; DE69623072D1; AU710499B2; DK0745388T3; HUP9601462A2; AU5457496A; US5690942A; NZ286700A; ES2180703T3; KR970000249A; JPH08325162A; CA2177667C; EP0745388B1; ATE222504T1; DK0745388T4; ES2180703T5

Description

Diese Erfindung bezieht sich auf Säugetierimpfstoffe, die Adjuvantien enthalten. Genauer gesagt bezieht sich diese Erfindung auf Impfstoffe, die Squalen oder Squalan oder Mischungen davon, Lecithin und ein oberflächenaktives Mittel als ein Adjuvans verwenden.
Es werden 4 Hauptkategorien von Impfstoffen verwendet, um Antikörper gegen eine Krankheit bei Säugetieren, insbesondere Menschen, zu vermehren. Dies sind Lebendimpfstoffe, abgetötete oder inaktivierte Impfstoffe, Untereinheitsimpfstoffe und Toxoide. Von dieser Gruppe produzieren Lebendimpfstoffe die stärkste Immunantwort beim Wirt. Diese Lebendimpfstoffe sind im Allgemeinen abgeschwächt, so dass sie in der Lage sind, eine längere Immunantwort gegen ihre Antigene aufzubauen, ohne die Krankheit hervorzurufen, mit der sie normalerweise in Zusammenhang stehen.
Abgetötete Impfstoffe sind durch chemische oder andere Mittel inaktiviert, die die antigenen Faktoren, die sie für das Immunsystem des Wirts darstellen, nicht inaktivieren. Beispiele für abgetötete Impfstoffe sind jene gegen Keuchhusten und Salk-Poliomyelitis.
Bei einigen Krankheitsvektoren verhindert auch das Abtöten des Organismus nicht, dass er unerwünschte Wirkungen beim Empfänger auslöst. In solchen Fällen muss der Erreger in Untereinheiten oder Subfraktionen fragmentiert werden, die an sich nicht pathogen sind. Beispiele für solche Untereinheitsimpfstoffe schließen einige Influenza-Impfstoffe und einige experimentelle Impfstoffe gegen Herpesvirus und Hepatitis ein.
Toxoid-Impfstoffe schließlich sind jene, bei welchen ein Toxin, das von einem Organismus ausgeschieden wurde, nicht-toxisch gemacht und dann wie jeder andere antigene Faktor verwendet wird, um eine Immunantwort gegen das Toxin zu stimulieren. Ein Beispiel für einen solchen Impfstoff ist das Tetanus-Toxoid.
Unglücklicherweise stellen die Untereinheits- und Toxoid-Impfstoffe nur selten genügend Antigene bereit, um beim Wirt eine lang anhaltende Immunität zu bewirken. Daher hält die Immunität, die von Nicht-Lebendimpfstoffen und insbesondere hochgradig gereinigten Untereinheitsimpfstoffen induziert wird, nur ein bis zwei Jahre an.
Von verschiedenen Adjuvantien ist beschrieben worden, dass sie die Immunogenizität der Nicht-Lebendimpfstoffe stärken. Dazu zählt Freunds Komplett-Adjuvans, das Mineralöl, Wasser, Emulga tor und abgetötete Tuberkulosebakterien umfasst. Von den zahlreichen Adjuvantien, die für die Verwendung bei Säugetieren zur Verfügung stehen, sind nur einige wenige, einschließlich Aluminiumhydroxid und Aluminiumphosphat, bei Menschen verbreitet verwendet worden. Eine Reihe von Adjuvantien ist für die Verwendung bei Menschen abgelehnt worden, weil sie schwere lokale oder systemische Reaktionen auslösen. Einige von ihnen, wie Freunds Komplett-Adjuvans, das Mineralöl enthält, sind nicht abbaubar und werden als möglicherweise karzinogen angesehen, da sie bei Labortieren Krebs ausgelöst haben. Es sind Adjuvantien unter Verwendung abbaubarer Öle vorgeschlagen worden, und die GB 2189141 offenbart ein Zwei-Phasen-Adjuvanssystem mit einer Lipidemulsion und einem biologischen Adjuvans unter Verwendung eines Endotoxins. Es besteht daher das Bedürfnis nach wirksamen und sicheren Adjuvantien, die die Wirkung von Impfstoffen, insbesondere von Impfstoffen vom Untereinheits-Typ, die derzeit verfügbar sind und die vielleicht entwickelt werden, verstärken können.
Das Dokument "Van Nest, G. A. et al.: 'Advanced adjuvant formulations for use with recombinant subunit vaccines' [Fortschrittliche Adjuvansformulierungen zur Verwendung mit rekombinanten Untereinheitsimpfstoffen], Brown, F, et al. (Ed). Vaccines (Cold Spring Harbor), 92. Modern approaches to new vaccines including prevention of aids. Ninth Annual Meeting, Cold Spring Harbor, New-York, September 19–23, 1991, 1992, Cold Spring Harbor Laboratory Press: Plainview, New-York, USA, Seiten 57–62" offenbart ein wirksamens Adjuvans, das Squalen, oberflächenaktive Mittel und das synthetische Muramyltripeptid-dipalmitoyl-phosphatidylethanolamin (MTP-PE) umfasst. Die Aktivität des besagten Adjuvans ging nicht mit irgendwelchen signifikanten Nebenwirkungen einher.
Das Dokument "Kahn, J. O. et al.: 'Clinical and immunologic responses to human immunodeficiency virus (HIV) type 1SF2 gp120 subunit vaccine combined with MF59 adjuvant with or without muramyltripeptid-dipalmitoyl-phosphatidylethanolamine in non-HIV-infected human volunteers' [Klinische und immunologische Antworten auf menschlichen Immunschwäche-Virus (HIV) Typ 1SF2 gp120 Untereinheitsimpfstoff in Kombination mit MF59 Adjuvans mit oder ohne Muramyltripeptid-dipalmitoyl-phosphatidylethanolamin bei nicht mit HIV infizierten menschlichen Probanden], The Journal of Infectious Diseases, Vol. 170, 1994, Seiten 1288–1291" offen bart die Verwendung des oben genannten Adjuvans in einem HIV-Untereinheitsimpfstoff.
Also wird erfindungsgemäß eine Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere zur Verfügung gestellt, die einen inaktivierten Voll- oder Untereinheitsimpfstoff und eine wirksame Menge eines Adjuvans umfasst, dadurch gekennzeichnet, dass das Adjuvans Squalen oder Squalan oder eine Mischung davon, Lecithin und ein oberflächenaktives Mittel umfasst, wobei die Squalen- und/oder Squalankomponente etwa 1% bis etwa 40% der Gesamtmischung, die Lecithinkomponente etwa 0,5% bis etwa 4% der Gesamtmischung, und die Komponente des oberflächenaktiven Mittels etwa 0,1% bis etwa 4,0% der Gesamtmischung umfasst. Die hier angegebenen Prozentsätze geben die Prozente pro Volumen jeder Komponente an, und es wird verstanden, dass die restlichen Prozentsätze der Gesamtmischung durch den Impfstoff selbst oder durch den Impfstoff und die optionalen Aluminiumsalze und Puffer gebildet werden, die hier beschrieben sind.
Das Adjuvans umfasst Squalen und/oder Squalan, Lecithin und ein oberflächenaktives Mittel. Insbesondere umfasst die Squalen- und/oder Squalankomponente etwa 2,0% bis etwa 83% der Adjuvansmischung, die Lecithinkomponente des Adjuvans umfasst etwa 1,0 bis etwa 8%, und die Komponente des oberflächenaktiven Mittels umfasst etwa 0,2% bis etwa 8%. Die hier angegebenen Prozentsätze geben die Prozente pro Volumen jeder Komponente an, und es wird verstanden, dass die restlichen Prozentsätze des Adjuvans durch die anderen Komponenten gebildet werden, wie hier beschrieben.
In einem mehr bevorzugten Aspekt dieser Erfindung umfasst die Squalen- und/oder Squalankomponente des Impfstoffs für Säugetiere etwa 5% bis etwa 20% der Gesamtmischung, Lecithin umfasst etwa 0,7% bis etwa 2% der Gesamtmischung, und das oberflächenaktive Mittel umfasst etwa 0,15% bis etwa 1,6% der Gesamtmischung. In einem noch mehr bevorzugten Aspekt dieser Erfindung umfasst die Squalen- und/oder Squalankomponente des Impfstoffs für Säugetiere etwa 8% bis etwa 12% der Gesamtmischung, die Lecithinkomponente umfasst etwa 0,8% bis etwa 1,2 der Gesamtmischung, und die Komponente des oberflächenaktiven Mittels umfasst etwa 0,18% bis etwa 0,22% der Gesamtmischung.
Mit dem Ausdruck Squalen wird die Verbindung benannt, die auf Seite 1383 des Merck Index, 11. Ausgabe, als (all-E)- 2,6,10,15,19,23-Hexamethyl-2,6,10,14,18,22-tetracosahexaen, sowie auch mit den Namen Sinacen und Supraen beschrieben ist. Squalan, das ebenfalls auf Seite 1383 des Merck Index, 11. Ausgabe, als 2,6,10,15,19,23-Hexamethyltetracosan; Perhydrosqualen; Dodecahydrosqualen; und Spinacan angegeben ist, kann an Stelle von oder in Mischungen mit der Squalenkomponente der hier beschriebenen Adjuvansmischungen verwendet werden.
Oberflächenaktive Mittel, die mit den vorliegenden Formulierungen verwendet werden können, beinhalten, sind jedoch nicht beschränkt auf Polysorbat 20 (Polyoxyethylen-20-sorbitan-monolaurat), Polysorbat 60, Span 80^® Sorbitanoleat, ein Produkt von ICI Americas, Wilmington, DE, die oberflächenaktiven Mittel Cremophor^®, die von der BASF Corporation, Parsippany, NJ, hergestellt werden, und Polysorbat 80, bekannt als Sorbitan-mono-9-octadecenoat-poly(oxy-1,2-ethandiyl)-Derivate, Polyoxyethylen(20)-sorbitan-monooleat, Sorbitan-monooleat-polyoxyethylen, Sorlat, Tween 80, unter anderen, und gibt einen Oleatester von Sorbit und seinen Anhydriden an, der mit etwa 20 Mol Ethylenoxid pro Mol Sorbit und Sorbitanhydride copolymerisiert ist. Polysorbat 80 ist jenes oberflächenaktive Mittel, das zur Verwendung mit der vorliegenden Erfindung bevorzugt wird.
Lecithin ist ein allgemeiner Ausdruck für Phosphatidylcholin oder eine Mischung verschiedener Diglyceride von Stearin-, Palmitin- und Oleinsäure, die mit dem Cholinester von Phosphorsäure verbunden sind. Es können verschiedene Arten von Lecithin oder Produkten aus Lecithinquellen (wie abgetrennte Phospholipide) als endgültiger Inhaltsstoff der oben genannten Formulierungen verwendet werden. Diese Lecithin-Inhaltsstoffe können zum Beispiel umfassen: Alcolec^® Lecithin, hergestellt von der American Lecithin Company, Danbury, CT, Phosal 50 MCT Phosphatidylcholin und mittelkettige Triglyceride, und Phospholipan 90^® Lecithin, die alle von der Nattermann Phospholipid GMBH, Köln, Deutschland, hergestellt werden, die Lecithine Centrophil^® und Centrophase^®, die von Central Soya, Fort Wayne, IN, hergestellt werden.
Gegebenenfalls enthalten die Adjuvantien auch ein oder mehrere pharmazeutisch annehmbare Aluminiumsalze, wie Aluminiumhydroxid, Aluminiumphosphat oder Aluminiumsulfat, in einer Konzentration von Masse/Volumen von etwa 0,1% bis etwa 2,0%, vorzugsweise etwa 0,3% bis etwa 0,7%, am meisten bevorzugt etwa 0,5%. Aluminiumhydroxid ist das bevorzugte Aluminiumsalz.
Die Adjuvantien können gegebenenfalls auch einen oder mehrere pharmazeutisch annehmbare pH-Puffer enthalten, wie Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS), Tris-HCl, Citrat-Phosphat-Puffer, Tricin-Puffer, Hepes und Maleat-Puffer. Andere Salze, wie KCl, können für das Natriumchlorid im PBS-Puffer substituiert werden, wenn die endgültige Lösung in einem im Wesentlichen isotonen Zustand gehalten wird. Diese Puffer werden vorzugsweise verwendet, um die Adjuvansmischung auf einem pH zwischen 6,0 und 8,0 zu halten.
Die in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung verwendeten Adjuvantien weisen eine deutliche immunmodulierende Aktivität auf, und es wird postuliert, dass der Adjuvans-Effekt dieser Verbindungen ein direktes Ergebnis ihrer Fähigkeit ist, die Immunantwort zu modulieren. Da überdies den Komponenten dieser Adjuvantien weiters reaktogenes Potential fehlt, wird ihre Eignung zur Verwendung als Adjuvantien für Impfstoffe noch weiter gesteigert. Es sollte auch angemerkt werden, dass sich diese Adjuvantien aus bekannten injizierbaren Materialien zusammensetzen und in im Handel erhältlichen Injektionen zu finden sind.
Die in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung verwendeten Impfstoffe können auf jegliche Weise verabreicht werden, die für den speziellen verwendeten Impfstoff vorgeschrieben ist, vorzugsweise durch intramuskuläre oder subkutane Injektionen. Sie können entweder in Veterinär- oder Humanimpfstoffen verwendet werden und schließen sowohl inaktivierte Voll- und Untereinheitsimpfstoffe als auch Toxoide ein. Weiters sind die verwendeten Impfstoffe jene, die eingesetzt werden, um gegen Bakterien-, Rickettsien- und Virenpathogene zu immunisieren. Geeignete Impfstoffe für den Menschen würden zum Beispiel die Voll- und Untereinheitsimpfstoffe gegen Influenza, Poliomyelitis, Arbovirus-Infektionen, Typhoid und Paratyphoid, Cholera, Pest, Keuchhusten, Typhus, Rocky-Mountain-Fleckfieber, Haemophilus influenza Typ B, multivalentes Pneumokokken-Polysaccharid, Meningokokken-Gruppe C und die neu entwickelten Diploid-Zellen-Tollwutimpfstoffe für den Menschen und Hepatitis-Impfstoff einschließen.
Geeignete Veterinärimpfstoffe würden zum Beispiel die Voll- und Untereinheitsimpfstoffe gegen Pferde-Influenza-Viren, Pferde-Herpes-Viren, Pferde-Enzephalomyelitis-Viren, Warzenviren, Virus der Maul- und Klauenseuche, Tollwut, Katzen-Panleukopenie, Katzen-Rhinotracheitis, Katzen-Calicivirus, infektiöse Rinder-Rhino tracheitis, Parainfluenza-3, Rinder-Virusdiarrhöe, Rinder-Adenoviren, Pseudorabies, Virus der übertragbaren Gastroenteritis, Schweine-Parvovirus, Hunde-Adenoviren, Hunde-Staupe-Virus und Hunde-Parainfluenza einschließen. Voll- und Untereinheitsimpfstoffe, Bakterine und Toxoide für Druse, Bruzellose, Vibriose, Leptospirose, Clostridium-Infektionen, Salmonellose, Colibazillose, Anaplasmose, Pasteurella-Infektionen, Haemophilus-Infektionen, Erysipelothrix und Ähnliche. Weiters wird vollkommen bedacht, dass die Impfstoffe der Zukunft, insbesondere vom Viren- und Bakterien-Untereinheits-Typ, wahrscheinlich schwache Immunogene sein können und daher eine Potenzierung durch ein geeignetes und annehmbares Adjuvans benötigen werden, und wir glauben, dass das erfindungsgemäße System sehr gut geeignet sein wird.
Die Vorteile der Verwendung der geoffenbarten potenten Adjuvantien mit Impfstoffen sind signifikant. Durch die Modulierung bestimmter Teile des Immunsystems können die Adjuvantien eine Steigerung der Immunreaktivität der humoralen Immunität herbeiführen, was zu einer potenzierten Antikörperproduktion gegen das antigene Material führt, das in der Impfstoffzubereitung enthalten ist, mit der die Adjuvantien an den Empfänger verabreicht werden. Eine solche Potenzierung ermöglicht natürlich das Erreichen einer stärkeren und länger anhaltenden Immunität, obwohl der immunisierende Wirkstoff ein schwaches Immunogen sein kann, wie es bei vielen der inaktivierten Voll- und insbesondere der Untereinheits-Impfstoffe und Toxoide der Fall sein kann. Diese Potenzierung der Immunantwort auf Antigen hat ein direktes Ergebnis dieses Effekts und den weiteren Vorteil, dass es möglich ist, weniger immunisierendes antigenes Material zu verwenden, wodurch sich die Wahrscheinlichkeit ernsthafter und beschwerlicher Wirtsreaktionen auf die Immunisierung verringert. Dies ist besonders bei der Impfung Jugendlicher wichtig. Zusätzlich zu einer erfolgreicheren und sichereren Immunisierung mit einer reduzierten Dosis gereinigten Antigens kann die Impfstoffproduktion auch wirtschaftlicher und leichter durchführbar gemacht werden.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen werden hergestellt, indem das Adjuvansmaterial im Antigen-Verdünnungsmittel gelöst oder suspendiert wird und dann geeignete Mengen der Adjuvanslösung und der Antigenlösung mit der geeigneten Antigenverdünnung vereinigt werden. Die Antigen-Verdünnungsmittel sind die im Stand der Technik üblichen, wie Phosphat-gepufferte Kochsalzlö sung, minimum-essentielles Medium, Pepton und Ähnliche. Adjuvantien können in einer höheren als der Endkonzentration zusammengemischt und später vor der Verwendung oder Lagerung mit Impfstoff und gegebenenfalls Puffer verdünnt werden. Es ist bevorzugt, dass sterile Adjuvanskomponenten oder in einigen Fällen eine sterile Filtration verwendet werden. Die resultierende Kombination von Adjuvanskomponenten wird dann gründlich homogenisiert, vorzugsweise mit einem Homogenisator mit einer geeigneten Geschwindigkeit und Zeit, um die Homogenisierung der Mischung sicherzustellen, zum Beispiel in einer Zeit von etwa 1 bis etwa 10 Minuten, bevor sie mit dem gewählten Impfstoff gemischt wird.
Genauer gesagt können die Adjuvantien durch die folgenden Schritte hergestellt werden:

1) Alle Adjuvanskomponenten sollten zu erst auf eine Temperatur von etwa 37°C gebracht werden.
2) Der Puffer, wenn einer verwendet wird, die Squalenkomponente und die Lecithinkomponente sollten miteinander gemischt und auf Zimmertemperatur kommen gelassen werden. Diese Mischung sollte etwa 15 Minuten lang auf Zimmertemperatur gehalten werden.
3) Die Komponente des oberflächenaktiven Mittels wird dann der Mischung zugesetzt und gemischt. Diese Gesamtmischung der Adjuvanskomponenten kann dann in einen Autoklaven gegeben und beschallt werden, um eine sterile, homogene Adjuvansmischung herzustellen. Die Beschallung kann mit einem Heat Systems Probe Type Sonicator bei einer Einstellung von etwa Nr. 6 in einem Eisbad komplettiert werden. Es wird eine Gesamt-Beschallungszeit von mindestens 5 Minuten empfohlen, wobei die Zeit in Beschallungspulse von etwa 30 Sekunden eingeteilt ist, gefolgt von Pausen von 15 Sekunden, wo die Adjuvansmischung auf Eis gehalten wird. Als konsequentere und bevorzugte Alternative zu dieser Art der Beschallung kann die Adjuvansmischung mikrofluidisiert oder homogenisiert werden, bis sie durch ein 0,22 μm Filter läuft. Falls gewünscht, können die hier beschriebenen Aluminiumsalze dann unter Mischen der Adjuvanszusammensetzung zugesetzt werden.
4) Dann können der Adjuvansmischung Virus-Impfstoffe oder Impfstoffkonzentrate in der gewünschten Dosis zugesetzt werden.
5) Die Adjuvans/Impfstoff-Kombination kann dann leicht gemischt werden. Beim Mischen kann eine zusätzliche Menge Puffer zugesetzt werden, um die endgültige Mischung auf ein gewünschtes Volumen und eine gewünschte Konzentration der Komponenten zu bringen.

BEISPIEL 1
Adjuvantien und Adjuvantien für Vergleichszwecke wurden hergestellt und mit trivalentem Wyeth-Ayerst 1993 Influenzavirus-Impfstoff (beschrieben auf S. 2578 des Physician's Desk Reference 1993, 47. Auflage) gemischt, um die erfindungsgemäße Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere herzustellen. Injektionen der Impfstoffzusammensetzung, enthaltend 1,5 μg des Hämagglutinins jedes der 3 im Impfstoff vorhandenen Stämme, A/Beijing/32/92, A/Texas/36/91 und B/Panama/45/90, wurden an Gruppen von 6 weiblichen, 7 Wochen alten CD-1-Mäusen verabreicht. Jede Maus erhielt intramuskuläre Injektionen mit 0,2 ml des Impfstoffs von Wyeth-Ayerst. 28 Tage nach der Beimpfung wurde den Mäusen Blut abgenommen, und das Serum wurde einem Assay durch das Hämagglutinations-Inhibitions-Verfahren für Antikörper gegen die A/Beijing-Komponente unterzogen. Die Tabelle I unten zeigt eine Liste der Ergebnisse für jede, ausgedrückt als der geometrische Mitteltiter der 6 Mäuse in jeder Gruppe. Es ist zu beachten, dass PBS-Puffer qs verwendet wurde, um die Adjuvantien und die Adjuvantien für Vergleichszwecke, die hier beschrieben sind, auf das gewünschte Volumen zu bringen.
Die getesteten Impfstoffzusammensetzungen enthielten die folgenden Adjuvantien. Die Mengen der Adjuvans-Komponente sind in Volums-% der endgültigen Impfstoffzusammensetzung angegeben.
Impfstoff Nr. 1: 5% Squalen, 1% Lecithin und 0,2% Tween 80.
Impfstoff Nr. 2: 0,5% Aluminuimhydroxid (Masse/Volumen), 5% Squalen, 1% Lecithin und 0,2% Tween 80.
Vergleichsimpfstoff Nr. 1: Das Vehikel für Syntex Adjuvant Formulation Microfluidized, wie sie in den Laboratorien von Syntex verwendet wird. Dieser Impfstoff umfasste 5% Squalen, 1,25% Pluronic L-121 (das von BASF Wyandotte Corp. im Handel erhältlich ist) und 0,2% Tween 80.
Vergleichsimpfstoff Nr. 2: 5% Squalen, 0,2% Tween 80.
Vergleichsimpfstoff Nr. 3: 5% Squalen, 1,0% Tween 80.
Vergleichsimpfstoff Nr. 4: 5% Squalen, 2,0% Tween 80.
Vergleichsimpfstoff Nr. 5: 5% Squalen, 4,0% Tween 80.
Vergleichsimpfstoff Nr. 6: 5% Squalen, 0,2% Lecithin, 0, 2% Tween 80.
Vergleichsimpfstoff Nr. 7: ca. 5% Squalen, 5% Glycerin, 0,5% Lecithin.
Vergleichsimpfstoff Nr. 8: ca. 5% Squalen, 0,2% Povidon, 0,2% Tween 80.
Tabelle I: Vergleich von Influenza-Adjuvantien:
BEISPIEL 2
Ein zusätzliches Testen von Adjuvantien wurde mit Gruppen von Cynomolgus-Affen durchgeführt. Jede Gruppe von 3 Affen wurde intramuskulär mit 0,5 ml des trivalenten Wyeth-Ayerst 1993 Influenzavirus-Impfstoffs (wie beschrieben auf S. 2578 des Physician's Desk Reference 1993, 47. Auflage) geimpft, das 50:50 mit den unten beschriebenen Adjuvantien gemischt war. Am Tag 28 nach der Erstimpfung wurde den Affen eine Auffrischung mit dem gleichen Impfstoff gegeben. Am Tag 28 und 42 wurde jedem Affen 5 ml Blut für eine Kreatinin-Phosphokinase-(CPK-)Analyse abgenommen, die Ergebnisse für jede Gruppe von 3 Affen sind in Tabelle II unten angeführt. Wie oben erwähnt wurde PBS-Puffer qs verwendet, um die unten beschriebenen Adjuvans/Impfstoff-Kombinationen auf das gewünschte Volumen zu bringen.
Getestete Impfstoffzusammensetzungen:
Impfstoff A: Eine Impfstoffzusammensetzung dieser Erfindung, umfassend 10% Squalen, 1% Lecithin und 0,2% Tween 80, jeweils pro Volumen der Endzusammensetzung.
Vergleichsimpfstoff A: Eine Impfstoffzusammensetzung, die nur Impfstoff in PBS-Puffer enthielt.
Vergleichsimpfstoff B: Eine Impfstoffzusammensetzung, umfassend 2 mg Cholesterinhemisuccinat (CHS) oder Cholesterylhydrogensuccinat-Liposome, die von Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri, Katalog Nr. C 6013, im Handel erhältlich sind.
Vercleichsimpfstoff C: Eine Impfstoffzusammensetzung, enthaltend 5% Squalen, 30% Propylenglykol und 0,2% Tween 80, jeweils pro Volumen der Endzusammensetzung.
Tabelle II: Adjuvantien bei Cynomolgus-Affen HI-Titer gegen A/Beijing (GMT)

Claims

Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere, umfassend einen inaktivierten Voll- oder Untereinheitsimpfstoff und eine wirksame Menge eines Adjuvans, dadurch gekennzeichnet, dass das Adjuvans Squalen oder Squalan oder eine Mischung davon in der Menge von etwa 1%-Vol. bis etwa 40%-Vol. der Gesamtzusammensetzung, Lecithin in der Menge von etwa 0,5%-Vol. bis etwa 4%-Vol. der Gesamtzusammensetzung und ein oberflächenaktives Mittel in der Menge von etwa 0,1% bis etwa 4,0% der Gesamtzusammensetzung umfasst.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere gemäß Anspruch 1, worin das Adjuvans Squalen oder Squalan oder eine Mischung davon in der Menge von etwa 5%-Vol. bis etwa 20%-Vol. der Gesamtzusammensetzung, Lecithin in der Menge von etwa 0,7%-Vol. bis etwa 2%-Vol. der Gesamtzusammensetzung und ein oberflächenaktives Mittel in der Menge von etwa 0,15% bis etwa 1,6% der Gesamtzusammensetzung umfasst.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere gemäß Anspruch 1, worin das Adjuvans Squalen oder Squalan oder eine Mischung davon in der Menge von etwa 8%-Vol. bis etwa 12%-Vol. der Gesamtzusammensetzung, Lecithin in der Menge von etwa 0,8%-Vol. bis etwa 1,2%-Vol. der Gesamtzusammensetzung und ein oberflächenaktives Mittel in der Menge von etwa 0,18% bis etwa 0,22% der Gesamtzusammensetzung umfasst.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, worin das Adjuvans weiters einen pharmazeutisch annehmbaren pH-Puffer umfasst.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, worin das Adjuvans weiters ein Aluminiumsalz umfasst.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere gemäß Anspruch 5, worin das Aluminiumsalz in der Zusammensetzung in einer Konzentration von Masse/Volumen von etwa 0,1% bis etwa 2,0% vorhan den ist.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere gemäß einem der Ansprüche 5 oder 6, worin das Aluminiumsalz Aluminiumhydroxid ist.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, worin der Impfstoff ein Untereinheits-Influenza A-Impfstoff ist.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, worin das Adjuvans Squalen, Lecithin und ein oberflächenaktives Mittel umfasst.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere, umfassend einen inaktivierten Voll- oder Untereinheitsimpfstoff und eine wirksame Menge eines Adjuvans in einem pharmazeutisch annehmbaren Puffer, dadurch gekennzeichnet, dass das Adjuvans Squalen in der Menge von etwa 8%-Vol. bis etwa 12%-Vol. der Gesamtzusammensetzung, Lecithin in der Menge von etwa 0,8%-Vol. bis etwa 1,2%-Vol. der Gesamtzusammensetzung, ein oberflächenaktives Mittel in der Menge von etwa 0,18% bis etwa 0,22% der Gesamtzusammensetzung und etwa 0,1% bis etwa 2,0% eines Aluminiumsalzes umfasst.
Impfstoffzusammensetzung für Säugetiere gemäß Anspruch 10, worin das Aluminiumsalz Aluminiumhydroxid ist.