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DE69619860T2 - Verfahren zur herstellung aktiver substanzen aus perlmutt, resultierende produkte, geeignet für medizinische anwendungen - Google Patents

Verfahren zur herstellung aktiver substanzen aus perlmutt, resultierende produkte, geeignet für medizinische anwendungen

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DE69619860T2
DE69619860T2 DE69619860T DE69619860T DE69619860T2 DE 69619860 T2 DE69619860 T2 DE 69619860T2 DE 69619860 T DE69619860 T DE 69619860T DE 69619860 T DE69619860 T DE 69619860T DE 69619860 T2 DE69619860 T2 DE 69619860T2
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DE
Germany
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pearl
mother
process according
fraction
solvent
Prior art date
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DE69619860T
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DE69619860D1 (de
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Sophie Berland
Michel Giraud
Gilles Gutierrez
Evelyne Lopez
Christian Milet
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Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
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Publication date
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Publication of DE69619860T2 publication Critical patent/DE69619860T2/de
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    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/618—Molluscs, e.g. fresh-water molluscs, oysters, clams, squids, octopus, cuttlefish, snails or slugs
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Description

  • Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von biologisch aktiven Substanzen ausgehend von Perlmutt und auf die Verwendungen der gereinigten Produkte, die so erhalten werden können.
  • Diese Produkte werden insbesondere in der Knochen- und insbesondere der maxillofazialen Chirurgie oder für die Behandlung der degenerativen Knorpelerkrankungen, aber auch in der Dermatologie eingesetzt werden.
  • Perlmutt ist als Knochenersatz- und/oder -regenerationsmaterial insbesondere in der orthopädischen oder maxillofazialen Chirurgie, aber auch für die Herstellung von Zahnimplantaten vorgeschlagen worden.
  • Es ist außerdem gezeigt worden (Lopez et al., Tissue and Cell, 24, 667-679, 1992), dass Perlmutt später knochenleitende und osteogene Effekte auf Knochenzellen in vitro ausübt.
  • Es war folglich wünschenswert, die biologisch aktiven Substanzen, die in Perlmutt vorhanden sind, isolieren zu können.
  • Es ist bekannt, dass Perlmutt oder chonchyliferer Aragonit eine biogene mineralisierte Formation ist; es wird aus einer organischen Matrix von faserartigen und nichtfaserartigen Substanzen, die etwa 1,7% der gesamten Masse ausmacht (Taylor et al., Bulletin of the British Museum (Natural history) Zoology. Suppl. 3., S. 125 ff. + 29 Tafeln ("Planches"), 1969), und Calciumcarbonat, das in Form von Aragonit kristallisiert ist, gebildet. Die Struktur des Perlmutts weist folglich Ähnlichkeiten mit jener des Knochens auf, der eine organische Matrix und eine anorganische oder mineralische Phase, die aus Calciumphosphat irr Form von Hydroxylapatit gebildet wird, umfasst. Andererseits sind etwa 50% der organischen Matrix des Perlmutts löslich.
  • Autoren haben die Extraktion von hinsichtlich der Knochenbildung aktiven Proteinen, den BMP (oder "Bone Morphogenetic Proteins", Knochen-morphogenetischen Proteinen) ausgehend von der unlöslichen Fraktion der Knochenmatrix beschrieben (Urist et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 76 : 1828-1832, 1979). Bei diesem Verfahren wird eine saure Demineralisierung vorgenommen, die Risiken einer Denaturierung der interessierenden Produkte mit sich bringt.
  • Obwohl Perlmutt seit langem als Biomaterial vorgeschlagen worden ist, sind beispielsweise zu den BMP analoge Proteine niemals nachgewiesen worden.
  • Die Anmelderin hat jetzt ein Verfahren gefunden, das es ermöglicht, Substanzen abzutrennen, die eine Zusammenstellung von besonders interessanten biologischen Eigenschaften aufweisen, da es insbesondere keinen denaturierenden Schritt enthält.
  • Aus diesem Grund hat die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von biologisch aktiven Substanzen ausgehend von Perlmutt zum Gegenstand, dadurch gekennzeichnet, dass man:
  • a) Perlmutt in ein Pulver mit einer Teilchengröße unterhalb von etwa 200 um (d. h. im allgemeinen von 50 bis 150 um) zerkleinert,
  • b) es in innigen Kontakt mit einem wässrigen Lösungsmittel, dem gegebenenfalls Salze hinzugefügt worden sind, bringt,
  • c) am Ende der Kontaktzeit die unlösliche Fraktion abtrennt, um die wässrige Fraktion zu gewinnen,
  • d) das Lösungsmittel der wässrigen Fraktion konzentriert, um die in Wasser lösliche oder mitführbare Fraktion des Perlmutts zu gewinnen, welche aus biologisch aktiven Substanzen zusammengesetzt ist, die im wesentlichen von mineralische Bestandteilen befreit ist.
  • Es handelt sich um ein einfach auszuführendes Verfahren, das vorzugsweise bei einer Temperatur zwischen etwa 4ºC und 30ºC ausgeführt wird; es werden gute Ergebnisse bei Umgebungstemperatur erhalten.
  • Das eingesetzte Perlmutt kann ausgehend von den Schalen oder Muscheln von Weichtieren, insbesondere Austern, wie Pinctada maxima, erhalten werden. Man setzt rohes Perlmutt ein, das von den anderen Calcit-reichen Bestandteilen der Schale oder Muschel befreit ist; vorzugsweise geht man von weißem Perlmutt aus; andernfalls muss ein Schritt einer Entfernung der Pigmente vorgesehen werden.
  • Es handelt sich um ein leicht verfügbares Ausgangsmaterial, dessen Verwendung keinen negativen Einfluss auf die natürlichen Populationen hat; tatsächlich bildet der Hauptteil dieser Austern oder anderen Perlmutt-erzeugenden Weichtiere den Gegenstand einer Aquakultur.
  • Außerdem resultiert ein zusätzlicher Vorteil aus der Tatsache, dass das Ausgangsmaterial ausgehend von Austernschalen, die Perlen produziert haben, erhalten werden kann; es wird nämlich eine Perlenauster aus dem Erzeugungspool entfernt, nachdem sie nacheinander maximal 3 Perlen erzeugt hat, wenn sie eine dicke Perlmuttschicht von hervorragender Qualität (Qualitätsstufe A) besitzt. Die Erfindung schlägt folglich eine ergänzende Erweiterung zur Verwendung des Perlmutts nachfolgend zur Perlenkultur vor.
  • Das Perlmutt kann ohne vorab erfolgende Entgiftung oder Dekontamination eingesetzt werden. Die gereinigten biologischen Fraktionen, die aus dem Perlmutt, das von zweischaligen großen Filtrierern (800 l Wasser/Tag) stammt, extrahiert worden sind, sind frei von pathogenen Mitteln, die beim Menschen aktiv sein könnten, was einen wesentlichen Teil der Rahmenbedingungen für ein implantierbares Biomaterial bildet, dessen Langzeit- und Kurzzeit-Unschädlichkeit gegenwärtig eine Hauptsorge darstellt. Diese Sorge ist berechtigt aufgrund der Sorge, die schweren Pathologien zu beseitigen, die in Folge des Einsatzes, beispielsweise in der Knochenchirurgie, von lyophilisiertem Knochen auftreten können.
  • Bei einer der Ausführungsweisen des Verfahrens wird das Perlmutt auf eine Teilchengröße zwischen 50 und 100 um gebracht.
  • Bei einer anderen Ausführungsweise wird das Perlmutt zu einem Pulver mit einer Teilchengröße zwischen 15 und 50 um zerkleinert, was es ermöglicht, die Ausbeute zu verbessern, indem man der Größe der Kristalleinheit nahekommt.
  • In allen Fällen wird man zuallererst eine Grobzerkleinerung, gefolgt von einem Feinmahlen ausführen, da eine einfache Feinzerkleinerung für die Konsistenz des Ausgangsmaterials nicht geeignet ist.
  • Das Lösungsmittel des Schritts b) kann aus reinem, bidestillierkem oder apyrogenem Wasser oder mit Salzen, ausgewählt insbesondere unter NaCl oder Guanidinhydrochlorid, versetztem Wasser ausgewählt werden.
  • Die Erfindung hat es tatsächlich erlaubt, nachzuweisen, dass die für die biologische Aktivität des Perlmutts verantwortlichen Substanzen hydrophil oder in Wasser mitführbar, insbesondere wasserlöslich sind und ab dem ersten Fraktionierungsschritt extrahiert werden können unter dem Vorbehalt, dass fein zerkleinertes Perlmutt behandelt wird, was die Produktionskasten begrenzt.
  • Das Produkt, das durch das zuvor definierte Verfahren direkt erhalten werden kann, umfasst eine Mischung von Proteinen, die biologische Aktivitäten einer Stimulierung der Zellproliferation insbesondere der Osteoblasten, der Chondrozyten, der Keratinozyten und der Fibroblasten aufweisen. Diese Proteine können faserig oder nichtfaserig sein. Die Erfindung betrifft nicht nur das so erhaltene Produkt, sondern auch die verschiedenen durch Fraktionierung ausgehend von dem vollständigen löslichen Produkt gereinigten Substanzen.
  • Sie umfasst insbesondere Proteine, die mit Vorfahren-Proteinen, die aus der Familie der BMP/TGF β (transforming growth factor) stammen, verglichen werden können.
  • Die Erfindung hat spezieller ein oder mehrere die Knochenbildung induzierende, nicht-faserige Proteine zum Gegenstand, die ausgehend von Perlmutt erhalten werden können und die die folgenden Eigenschaften aufweisen:
  • - sie sind in Wasser löslich oder in Wasser mitführbar,
  • - sie sind nicht zytotoxisch,
  • - sie erhöhen die Aktivität der alkalischen Phosphatase und die Synthese von Collagen vom Typ I durch die Osteoblasten.
  • Sie betrifft gleichfalls Nukleotidsequenzen, die ein solches Protein kodieren. Es versteht sich, dass solche Proteine, die aus einer anderen Quelle oder durch Synthese in vivo durch isolierte Organe oder Gewebe oder durch in Kultur befindliche Zellen erhalten werden, gleichfalls in der Erfindung enthalten sind, ebenso wie die Produkte, die durch chemische Synthese oder durch Gentechnologie erhalten werden.
  • Das biologisch aktive Produkt kann in Schritt d) durch Dialyse und/oder Lyophilisation aufkonzentriert werden.
  • In einer Variante des Verfahrens nimmt man nach dem Schritt d) eine Fällung durch Ethanol vor und gewinnt den Bodensatz, der eine biologisch aktive Unterfraktion bildet, wobei die in Lösung gebliebenen Produkte eine andere biologisch aktive Unterfraktion bilden.
  • Der Schritt b) kann insbesondere ausgeführt werden, indem man das Perlmutt-Pulver in dem wässrigen Lösungsmittel unter mechanischem Rühren in Suspension bringt; man kann bei 4ºC während 24 h arbeiten, aber die Dauern und die Temperaturen können vom Fachmann auf diesem Gebiet beispielsweise abhängig von der Ausgangsteilchengröße angepasst werden.
  • Bei einer anderen Ausführungsweise wird Schritt b) durch Hindurchleiten des Lösungsmittels unter Druck durch das immobilisierte Perlmutt-Pulver ausgeführt. Diese Immobilisierung kann beispielsweise durch eine Säule vom HPLC-Typ, gegebenenfalls in einer Mischung mit Füllmaterial-Substanzen bewirkt werden, die eine bessere Diffusion des Lösungsmittels erlauben und die Verdichtung des Perlmutt-Pulvers vermeiden.
  • Die gemäß der Erfindung erhaltenen verschiedenen Produkte sind als Implantat oder Arzneimittel nützlich, das insbesondere dazu bestimmt ist, die Regeneration der insbesondere knochenartigen, knorpelartigen oder hautartigen Gewebe zu verbessern.
  • Die Anwendungsgebiete sind zahlreich und umfassen:
  • - verschiedene Gewebe:
  • -- Skelettgewebe: Knochen, Knorpel, Bänder, Zähne, Zement, Dentin und alle anderen,
  • -- Haut- und Unterhautgewebe,
  • -- alle anderen.
  • - verschiedene Pathologien:
  • -- degenerative, traumatische, tumorale, ästhetische Alterung und Behinderungen,
  • -- rheumatologische Infektionen, darunter Arthrose, Polyarthritis....,
  • -- orthopädische (traumatologische und bei korrigierenden Absichten) Infektionen, Pathologien des Calciumstoffwechsels,
  • -- dermatologische und dermatokosmetische Infektionen,
  • -- oder andere....
  • Die erfindungsgemäßen Produkte werden insbesondere in der Chirurgie, bei der im Rahmen eines Eingriffs erfolgenden Radiologie und bei allen anderen Behandlungstechniken eingesetzt werden können.
  • Man wird verschiedene Anwendungsweisen auf generalisiertem oder örtlichem Wege, mit beabsichtigter sofortiger Wirkung oder mit beabsichtigter verzögerter Wirkung in Betracht ziehen können.
  • Die Produkte und Proteine gemäß der Erfindung können in pharmazeutische Zusammensetzungen Eingang finden. Diese können in verschiedenen Formen vorliegen, wie: Lösungen, Suspensionen, Lyophilisaten, Pulvern, Gelen, Pasten, Leimen, viskosen Materialien, nicht-viskosen Materialien, Beschichtungen, Überzügen u. s. w.
  • Sie werden beispielsweise in den folgenden Fällen eingesetzt werden können:
  • - für Interventionen unter Bilderzeugung
  • -- örtliche (Substanzverlust) oder diffuse (Entmineralisierung) Knochenwiederherstellung; auf der Ebene des Rückgrats, der Glieder (Substantia compacta, Substantia spongiosa), der platten Knochen des Gesichts und der Hirnschale, des thorakalen Skeletts oder anderer Knochen.
  • -- Wiederherstellung von Knorpeln, von Bandscheiben und artikulären Oberflächen, infolge beispielsweise von Zerstörungen vom Arthrosetyp oder traumatologischen Typ oder andersartiger Zerstörungen.
  • - Behandlung der verschiedenen Pathologien der Skelettgewebe
  • -- in allen zuvor aufgeführten Fällen, in der klassischen Chirurgie,
  • -- Herstellung von Knochentransplantaten "am Modell" und in vitro, durch Stimulierung von Osteoblasten oder von Fibroblasten (Induktion der Knochenbildung).
  • - Behandlung von dermatologischen Pathologien
  • -- durch örtliche Anwendung
  • -- durch chirurgische Intervention (Injektion, Transplantation oder anderes....)
  • -- nach in vitro-Produktion von Hauttransplantaten.
  • - Im Falle von Knochenzell-Autotransplantaten, um dazu beizutragen, die phänotypische Expression von knochenbildenden menschlichen Zellen (Osteoblasten) in Kultur zu stimulieren und aufrechtzuerhalten. Diese autologen Osteoblasten sind dazu bestimmt, in Form eines Autotransplantats erneut implantiert zu werden.
  • - Verwendung "per os" in Hinblick auf die Regulation des Calciumstoffwechsels.
  • Gemäß einem vorteilhaften Aspekt enthält die Zusammensetzung außerdem einen festen biokompatiblen Träger; dieser wird durch die Zugabe der biologisch aktiven Produkte in definierter Menge dotiert sein. Man wird die Zusammensetzung als Auffüllmaterial dergestalt einsetzen können, dass man das Skelett in den Fällen von Knochensubstanzverlust und/oder -mangel, gleichgültig ob sie traumatologischer, ästhetischer oder pathologischer Art sind, wiederherstellen kann.
  • Gemäß einem anderen Aspekt enthält die Zusammensetzung für eine Verabreichung auf kutanem Wege angepasste Trägersubstanzen. Sie wird die Hautvernarbung und -regeneration induzieren können.
  • Die Erfindung bezieht sich gleichfalls auf die Erzeugung von gegen die verschiedenen biologisch aktiven, proteinartigen Fraktionen gerichteten Antikörpern, wobei diese Antikörper durch Radioaktivität Fluoreszenz, chromogene Reagenzien oder enzymatisch markiert sein können.
  • Sie betrifft die Produktion von markierten oder nicht-markierten Sonden.
  • Gemäß einem anderen Aspekt betrifft die Erfindung Diagnosekits, die einen Antikörper oder eine Sonde, wie sie zuvor definiert wurden, enthalten.
  • Die erfindungsgemäßen Produkte und Proteine können in kosmetische Zusammensetzungen aufgenommen werden, die insbesondere dazu bestimmt sind, die Auswirkungen der Alterung zu bekämpfen.
  • Schließlich umfasst die Erfindung die Verwendung der wasserlöslichen Substanzen und Proteine, die aus dem Perlmutt extrahiert werden können, als Zusatzstoffe zur Zellkultur wie auch der Kulturmedien, die diese enthalten.
    • Beispiel 1: Extraktion
  • Perlmutt von Pinctada maxima in Form von unregelmäßigen Fragmenten (geliefert von der Gesellschaft EVM Dòveloppement, SARL, 5, rue Capron, 75018 PARIS. SIRET 38348098500019) wird mit fließendem Wasser, dann in drei Durchgängen in destilliertem Wasser gewaschen. Diese Fragmente werden in mikronisierte Form mit einer Teilchengröße zwischen 50 und 100 um überführt. Das erhaltene Pulver wird mit γ-Strahlen entgiftet und wird ohne zuvor erfolgende Entmineralisierung durch mechanisches Rühren bei 4ºC während 24 h durch reines bidestilliertes Wasser oder apyrogenes Wasser oder eine NaCl-Lösung mit einer Konzentration von 25 g/l oder durch eine wässrige Lösung von Guanidinhydrochlorid (pH 7,4) extrahiert. Nach Filtration unter Vakuum wird eine lösliche Fraktion erhalten, durch Lyophilisation aufkonzentriert, dann gegen Wasser mit einer Membran von 40 mm Durchmesser und 12000 bis 14000 Dalton Porosität dialysiert. Ein Teil der erhaltenen Fraktion wird direkt lyophilisiert. Der andere Teil wird mittels Ethanol gefällt (24 h bei 4ºC).
  • Die gesamten ausgeführten Verfahrensschritte werden in dem folgenden Diagramm zusammengefasst:
  • - Fraktionierung, Analyse der Proteine und der Peptide
  • Die U.V.-Absorptionsspektren und die chromatographische Analyse der rohen Fraktionen zeigen, dass diese Fraktionen im wesentlichen von Protein- oder Peptidnatur sind.
  • Die Hauptschritte der Fraktionierung der organischen Matrix in ihre verschiedenen Bestandteile setzen in Kombination die klassischen Techniken der Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) und der Elektrophorese ein. Größenausschluss (SEC), Ionenaustausche (IEX), hydrophobe Wechselwirkungen (HIC), Hydroxylapatit (HPHT), Affinitätschromatographie (AFC) sind die geläufigsten HPLC-Methoden. Es wird davon ausgegangen, dass diese Methoden für die Proteine oder Peptide nicht denaturierend sind, sie folglich keine Veränderung der biologischen Aktivität hervorrufen.
  • Die Elektrophoresetechniken für der Analyse der Proteine sind die Zonenkapillarelektrophorese bei hohem pH (CZE), die analytische Elektrophorese und die präparative Elektrophorese. Alle diese Elektrophoresemethoden sind hochauflösend und nichtdenaturierend.
    • Beispiel 2: Biologische Tests in vitro
  • - Biologisches Versuchsmaterial Menschliche Osteoblasten, Chondroblasten, Fibroblasten und Keratinozyten in Kultur. Zellen der ersten Passage, die von Individuen unterschiedlicher Geschlechter und variablen Alters (Kind - Erwachsener - ältere Person) stammen.
  • - Eingesetzte Auswertungskriterien
  • 1) Zytotoxizität, die Proliferation und die Migration der Zellen werden mittels des MTT-Tests ausgewertet, einer kolorimetrischen Technik, die auf der Umwandlung des Tetrazoliumsalzes (gelb) in ein Formazansalz (blau-violett) durch die NADPH- Reduktase der lebenden Zellen basiert.
  • 2) Stimulierung der Aktivität der bei Konfluenz gehaltenen Osteoblasten, ausgewertet durch Erhöhung des Vorliegens und/oder der Aktivität der alkalischen Phosphatase.
  • 3) Synthese von Collagen vom Typ I durch die Osteoblasten, vom Typ II durch die Chondrozyten, vom Typ III durch die Fibroblasten. Diese Collagene, die die peptidische extrazelluläre Matrix bilden, sind Marker für die Aktivität dieser Zelltypen.
  • 4) Synthese von Chondroitinsulfat und Hyaluronsäure, die die nicht-peptidische extrazelluläre Matrix bilden, die durch die Chondrozyten sezerniert wird.
  • 5) Fixierung von Calcium (Mineralisierungsprozess) auf der extrazellulären organischen Matrix, die durch die Osteoblasten synthetisiert wird (ausgewertet durch Atomabsorptionsspektrophotometrie).
  • 6) Synthese von PTHrp durch die Keratinozyten. Als Beispiel: Aktivität der Fraktionen: Test der Aktivität auf menschliche Osteoblasten in Kultur
  • NS = nicht signifikant Bestimmung der Bestandteile der organischen Matrix: an Extrakten: Immunnachweis nach Elektrophorese und Transfer auf eine Membran - an Rohextrakt -
    • Beispiel 3: In vivo: eingesetzte Auswertungskriterien
  • - Demonstration der Aktivität der Fraktionen: es wird der SAMPATH-Test (SAMPATH et al., 1990), der für die Charakterisierung der biologischen Aktivität (Induktion der Knochenbildung) der Bone Morphogenetic Proteins (BMP) eingesetzt wurde, als Modell gewählt.
  • 1): spezifisch für Knorpel
  • 2): mehrheitlich im Knochen
  • 3): Osteoblastenaktivität
  • - Demonstration der Aktivität auf die Hautregeneration: durch Örtliches Auftragen auf Läsionen (Skarifikationen, Verbrennungen oder sonstiges), die beim Tier (Ratte, Kaninchen) hervorgerufen (provoziert) worden sind.

Claims (18)

1. Verfahren zur Herstellung von biologisch aktiven Substanzen, dadurch gekennzeichnet, dass man:
a) Perlmutt in ein Pulver mit einer Teilchengröße unterhalb von etwa 200 um zerkleinert,
b) es in innigen Kontakt mit einem wässrigen Lösungsmittel bringt,
c) am Ende des Kontaktzeitraumes die unlösliche Fraktion abtrennt, um die wässrige Fraktion zu gewinnen,
d) das Lösungsmittel der wässrigen Fraktion konzentriert, um die in Wasser lösliche oder mitführbare Fraktion des Perlmutts zu gewinnen, welche aus biologisch aktiven Substanzen zusammengesetzt ist, die im wesentlichen von mineralischen Bestandteilen befreit sind.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass in der Stufe a) das Perlmutt auf eine Teilchengröße von 50 bis 100 um gebracht wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt a) das Perlmutt zu einem Pulver mit einer Teilchengröße von 15 bis 50 um zerkleinert wird.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass im Schritt b) das Lösungsmittel aus reinem bidestilliertem oder apyrogenem oder mit Salzen versetztem Wasser ausgewählt ist, welche insbesondere aus NaCl oder Guanidinhydrochlorid ausgewählt sind.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass der Schritt d) durch Konzentrieren, anschließende Dialyse und/oder Lypophilisierung bewirkt wird.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass man nach dem Schritt d) eine Fällung durch Ethanol vornimmt und den Bodensatz gewinnt, der eine biologisch aktive Unterfraktion bildet.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass der Schritt b) bewirkt wird, indem man das Perlmutt-Pulver in dem wässrigen Lösungsmittel unter mechanischem Rühren in Suspension bringt.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass der Schritt b) bewirkt wird, indem man das Lösungsmittel unter Druck durch das immobilisierte Perlmutt-Pulver leitet.
9. Produkte, erhältlich durch das Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8.
10. Die Knochenbildung induzierende, nicht-faserige Proteins, Analoga von BMPs oder anderen, erhältlich ausgehend von Perlmutt, welche die folgenden Eigenschaften aufweisen:
- sie sind in Wasser löslich,
- sie sind nicht zytotoxisch,
- sie erhöhen die Aktivität der alkalischen Phosphatase und die Synthese von Collagen Typ I durch die Osteoplasten.
11. Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, dass sie mindestens ein Produkt nach Anspruch 9 oder ein Protein nach Anspruch 10 enthält.
12. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass sie darüber hinaus einen festen biokompatiblen Träger enthält.
13. Zusammensetzung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass sie Hilfsstoffe enthält, die an Eine Verabreichung auf kutanem Weg angepasst sind.
14. Produkte, erhältlich durch das Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 oder Proteine nach Anspruch 11 als Medikament.
15. Verwendung eines Produktes, das durch das Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 erhältlich ist, oder eines Proteins nach Anspruch 10 für die Herstellung eines Medikaments, das dazu bestimmt ist, die Regeneration insbesondere von Knochen-, Knorpel- oder Hautgeweben zu verstärken.
16. Verwendung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass das Medikament nützlich ist für die Behandlung einer Krankheit, die ausgewählt ist aus: Arthrose, Polarthritis, Osteoporose, degenerativer Alterung, Geschwulstpathologien und posttraumatischen Pathologien, wie Pseudoarthrose und Algodystrophie.
17. Kosmetische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, dass sie mindestens ein Produkt nach Anspruch 9 enthält.
18. Zellkulturmedium, dadurch gekennzeichnet, dass es mindestens ein Produkt nach Anspruch 9 oder ein Protein nach Anspruch 10 enthält.
DE69619860T 1995-12-28 1996-12-27 Verfahren zur herstellung aktiver substanzen aus perlmutt, resultierende produkte, geeignet für medizinische anwendungen Expired - Lifetime DE69619860T2 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9515650A FR2743075B1 (fr) 1995-12-28 1995-12-28 Procede de preparation de substances actives a partir de la nacre, produits obtenus, utiles notamment comme medicaments
PCT/FR1996/002098 WO1997024133A1 (fr) 1995-12-28 1996-12-27 Procede de preparation de substances actives a partir de la nacre, produits obtenus, utiles notamment comme medicaments

Publications (2)

Publication Number Publication Date
DE69619860D1 DE69619860D1 (de) 2002-04-18
DE69619860T2 true DE69619860T2 (de) 2002-11-07

Family

ID=9486075

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE69619860T Expired - Lifetime DE69619860T2 (de) 1995-12-28 1996-12-27 Verfahren zur herstellung aktiver substanzen aus perlmutt, resultierende produkte, geeignet für medizinische anwendungen

Country Status (9)

Country Link
US (1) US6251438B1 (de)
EP (1) EP0869805B1 (de)
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