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DE69214770T2 - Bildgebender Durchflusszytometer - Google Patents

Bildgebender Durchflusszytometer

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Publication number
DE69214770T2
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DE
Germany
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flow
cell
image
cells
fluorescence
Prior art date
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DE69214770T
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Shinichi Ogino
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Sysmex Corp
Original Assignee
Sysmex Corp
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Publication date
Application filed by Sysmex Corp filed Critical Sysmex Corp
Publication of DE69214770D1 publication Critical patent/DE69214770D1/de
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Publication of DE69214770T2 publication Critical patent/DE69214770T2/de
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Description

  • Diese Erfindung betrifft ein Fluß-abbildendes Zytometer (Zellenmeßeinrichtung) zum Aufnehmen der fluoreszierenden Bilder von Zellen.
  • Die DE-A-3 705 876 offenbart eine Flußzytometer- Abbildungsvorrichtung, bei der ein Bild einer Zelle unter Verwendung von ausgesendeten Laserlicht gebildet wird. Die Beleuchtungsquelle zur Bildherstellung wird durch eine vorherige Erfassung einer Zelle, die sich stromaufwärts von der Abbildungsanordnung befindet, nach einer geeigneten Zeitverzögerung getriggert.
  • Oft wird eine Laserlichtquelle als eine Anregungslichtquelle in Fluß-Zytometern verwendet, um eine Fluoreszenz zu messen, die von nicht markierten Zellen oder von Zellen, die mit einer fluoreszierenden Markierung behandelt worden sind, ausgesendet wird. Der Grund der Verwendung einer derartigen Lichtquelle besteht darin, daß die Verwendung eines Lasers ermöglicht, die gemessene Zone zu verschmälern, mit dem Ergebnis, daß die Intensität der Bestrahlung pro Einheitsfläche in der Meßzone vergrößert werden kann, um die Intensität der Fluoreszenz, die von den bestrahlten Zellen erhalten wird, zu verstärken.
  • Ein Problem, welches sich bei der Verwendung eines Lasers ergibt, besteht darin, daß die Anregungswellenlänge auf eine spezifische Wellenlänge begrenzt ist, mit der Folge, daß hinsichtlich der Lösungen mit einer fluoreszierenden Markierung, die verwendet werden können, Einschränkungen bestehen. Zusätzlich besitzt eine Laserlichtquelle große Abmessungen und weist hohe Kosten auf.
  • Ein Verfahren, welches bei Anstrengungen zum Lösen dieser Probleme verwendet wird, beinhaltet die Verwendung einer Xenon-Lampe oder dergleichen für die Anregungslichtquelle und die Auswahl der Wellenlänge des Anregungslichts unter Verwendung eines Interferenzfilters als ein Filter, welches das Anregungslicht wählt. Da jedoch die bestrahlte Zone in der Weise, die durch einen Laser ermöglicht wird, nicht verschmälert werden kann, wird eine hohe Fluoreszenzintensität nicht erhalten. Das Problem, hinsichtlich der Intensität des Anregungslichts tritt insbesondere in einer Vorrichtung zur Aufnahme eines fluoreszierenden Bilds auf, wie in der Beschreibung der japanischen Patentanmeldungen Nrs. 3-33151, 3-33189, 3-33137 und 3-33138 ausgeführt. Die folgenden Verfahren sind verwendet worden, um eine Fluoreszenz zu intensivieren, um die fluoreszierenden Abbilder von Zellen zu erhalten:
  • 1. Eine Anregungslichtquelle mit einer hohen Lichtemissionsintensität wird verwendet.
  • 2. Das Anregungslicht wird auf die kleinste mögliche Zone verschmälert.
  • 3. Eine schwache Fluoreszenz wird durch einen Bildintensivierer intensiviert, der ein Fotoverstärker- Element ist.
  • Wenn die Intensität der Fluoreszenz, die von einer Zelle emittiert wird, gering ist, führt eine Anwendung einer übermäßigen Verstärkung durch einen Bildintensivierer allerdings wegen einem fotoelektrischen Rauschen zu einem niedrigeren S/N-Verhältnis. Der sich ergebende Nachteil ist eine Verschlechterung der Bildqualität Dies bedeutet, daß hinsichtlich des maximalen mu-Faktors, der verwendet werden kann, eine Grenze existiert, und somit ist die Intensität der Fluoreszenz, die zur Aufnahme des fluoreszierenden Bilds einer Zelle erforderlich ist, ungeeignet.
  • Demzufolge besteht eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung in der Bereitstellung eines Flußabbildungs-Zytometers, in dem die Intensität einer Fluoreszenz, die zum Aufnehmen des fluoreszierenden Bilds einer Zelle benötigt wird, ausreichend erhöht werden kann, wenn die Intensität des Lichts von der Anregungslichtquelle schwach ist.
  • Gemäß der vorliegenden Erfindung wird die voranstehende Aufgabe durch Bereitstellung eines Flußabbildungs-Zytometers gemäß der Ansprüche 1, 6 erzielt.
  • Andere Merkmale und Vorteile der vorliegenden Erfindung ergeben sich aus der folgenden Beschreibung im Zusammenhang mit den beiliegenden Zeichnungen, in denen gleiche Bezugszeichen dergleichen oder ähnlichen Teile überall in den Figuren davoh bezeichnen. In den Zeichnungen zeigen:
  • Fig. 1 ein Blockschaltbild, welches den Aufbau einer ersten Ausführungsform eines Flußabbildungs-Zytometers gemäß der vorliegenden Erfindung zeigt;
  • Fig. 2 ein Kennliniendiagramm, das den Transmissionsgrad eines dichroitischen Spiegels zeigt, der als eine Wellenlängenwähleinrichtung dient;
  • Fig. 3 ein Diagramm, das den Zusammenhang zwischen einem Bildaufnahmebereich und einem Schlitz in einer Flußzelle zeigt;
  • Fig. 4 ein Diagramm, das eine Anordnung von optischen Komponenten in der Nähe der Flußzelle zeigt;
  • Fig. 5 ein Diagramm, das eine Anordnung von optischen Komponenten in der Nähe der Flußzelle für einen Fall zeigt, bei dem der dichroitische Spiegel konkäv ist;
  • Fig. 6 ein Diagramm, das eine Anordnung von optischen Komponenten in der Nähe der Flußzelle in einem Fall zeigt, bei dem die hintere Oberfläche der Flußzelle mit einem aufgedampften Film versehen ist, der als eine Wellenlängenwähleinrichtung dient;
  • Fig. 7 ein Blockschaltbild, das die Konstruktion einer zweiten Ausführungsform eines Flußabbildungs-Zytometers gemäß der vorliegenden Erfindung darstellt;
  • Fig. 8 ein Diagramm zum Beschreiben eines Beispiels einer Signalverarbeitung in einer Zellenvorbeifluß- Entscheidungsschaltung;
  • Fig. 9 ein Diagramm zum Beschreiben eines anderen Beispiels einer Signalverarbeitung in einer Zellenvorbeifluß- Entscheidungsschaltung;
  • Fig. 10 ein Blockschaltbild, das die Konstruktion einer dritten Ausführungsform eines Flußabbildungs-Zytometers gemäß der vorliegenden Erfindung zeigt;
  • Fig. 11 ein Diagramm, das eine Anordnung von optischen Komponenten in der Nahe der Flußzelle für einen Fall zeigt, bei dem der dichroitische Spiegel konkav ist, gemäß der dritten Ausführung; und
  • Fig. 12 eine Draufsicht, die eine kreisförmige Öffnung in einem konkaven Spiegel zeigt.
  • Bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung werden nachstehend eingehend unter Bezugnahme auf die beiliegenden Zeichnungen beschrieben.
  • Fig. 1 ist ein Blockschaltbild, welches die Konstruktion einer ersten Ausführungsform eines Flußabbildungs-Zytometers gemäß der vorliegenden Erfindung zeigt. Die Vorrichtung umfaßt eine Flußzelle 5, die so ausgebildet ist, daß sie einen flachen Flußpfad einschließt, um eine Probenlösung, die Zellen enthält, zu veranlassen, als eine flache Strömung zu fließen. Die Vorrichtung ist dafür ausgelegt, die Bilder von spezifischen Zellen, die durch die Zelle fließen, aufzunehmen.
  • Gemäß einem Merkmal der Erfindung werden die Zellen; die durch die Flußzeile 5 fließen, zu allen Zeiten überwacht und nur die fluoreszierenden Bilder von Zellen, die eine Fluoreszenz emittieren, werden selektiv aufgenommen. Die Ausführungsform von Fig. 1 (und von Fig. 7, die nachstehend beschrieben wird) stellt eine Vorrichtung des Einfallslicht- Typs dar.
  • Die Vorrichtung umfaßt ferner eine Lichtquelle 1 zum Verursachen einer Fluoreszenz. Die Lichtquelle 1, die eine Xenon-Lampe des Typs, der kontinuierlich Licht emittiert, verwendet und ein Anregungslicht emittiert, wirkt als eine Lichtquelle zur Bildaufnahme. Eine Kollimatorlinse 2, die sich vor der Anregungslichtquelle 1 befindet, empfängt das Licht von der Lichtquelle 1 und macht das Licht parallel. Ein Filter 4 zum Wählen von Anregungslicht empfängt das kollimierte Licht und wählt eine Wellenlänge von Licht, durch das die Zellen, die durch die Flußzelle 5 fließen, laufen werden. Genauer gesagt, das Filter 4 wählt eine Wellenlänge, die für die Zellen von Interesse oder für die Lösung der fluoreszierenden Markierung am besten geeignet ist, und ermöglicht einen Durchgang des Lichts der gewählten Wellenlänge.
  • Ein dichroitischer Spiegel 3 auf einer Seite der Flußzelle 5 empfängt das Anregungslicht, welches durch das selektive Filter 4 gelaufen ist und reflektiert das Anregungslicht in einer vorgegebenen Richtung, so daß es auf eine Objektivlinse 6 auf einer Seite der Flußzelle 5 auftrifft. Es sei darauf hingewiesen, daß die Charakteristik des dichroitischen Spiegels 3 so ist, daß fluoreszierendes Licht durch ihn tritt. Ein zweiter dichroitischer Spiegel 3a auf der anderen Seite der Flußzelle 5 wählt und transmittiert eine Fluoreszenz, die von Zellen in der Flußzelle 5 emittiert wird; reflektiert aber das Anregungslicht. Fig. 2 zeigt ein Beispiel der Wellenlängentransmissionsgrad-Kennlinie der dichroitischen Spiegel 3, 3a.
  • Eine Objektivlinse 6a auf der anderen Seite der Flußzelle 5 faßt das fluoreszierende Licht, welches von Zellen emittiert wird, zusammen, fokussiert es und führt das fokussierte Licht an einen Fotoverstärker 8, der als eine Erfassungseinrichtung dient.
  • Zwischen der Objektivlinse 6a und dem Fotoverstärker 8 auf der Lichteinfallsseite des Fotoverstärkers ist ein Schlitz 7 angeordnet, der die Zone zum Erfassen der Fluoreszenz, die von Zellen in dem Bildaufnahmebereich der Flußzelle 7 emittiert wird, begrenzt. Wie in Fig. 3 gezeigt weist der Schlitz 7 einen Lichttransmissionsabschnitt a auf, dessen eine Seite vorzugsweise mit einer Breite von 150 µm übereinstimmt, die von einem Sichtfeld einer Videokamera 12 eingenommen wird. Die andere Seite des Schlitzes 7 weist vorzugsweise eine Breite von 20 µm auf, um so mit der Flußzelle 5 übereinzustimmen. Demzufolge ist es ausreichend, wenn die Dimensionen der Objektivlinse 6a 0,2 x 1,5 mm sind, wenn die verwendete Objektivlinse 6a eine Verstärkung von 10x aufweist und 0,8 x 6 mm, wenn die verwendete Objektivlinse 6a eine Verstärkung von 40x aufweist. Demzufolge würden die Dimensionen des Lichttransmissionsabschnitts a des Schlitzes 7 20 x 15 µm sein und die Dimensionen eines Fluoreszenzbild- Aufnahmebereichs b des Schlitzes 7 würde 150 x 150 µm sein.
  • Eine Zellenvorbeifluß-Entscheidungsschaltung 13 wendet eine vorgegebene Verarbeitung auf das Signal an, welches von dem Fotoverstärker 8 ausgegeben wird, und bestimmt, ob eine erfaßte Zelle eine Zelle von Interesse ist. Wenn die erfaßte Zelle eine Zelle von Interesse ist, erzeugt die Entscheidungsschaltung 13 ein Verschlußbetätigungs- Triggersignal Sn, um einen elektronischen Verschluß 9 zu betätigen.
  • Fig. 8 und 9 zeigen Beispiele der Signalverarbeitung, die von der Zellenvorbeifluß-Entscheidungsschaltung 13 ausgeführt wird. Insbesondere wird bestimmt, daß eine Zelle eine Zelle von Interesse ist, wenn die Impulsbreite eines Fluoreszenzsignals KS, welches von einer Zelle emittiert wird, eine vorgegebene Impulsbreite Pw ist, wenn eine Signalstärke einen größeren Wert als einen vorgegebenen Schwellpegel Sl aufzeigt, oder wenn beide dieser Bedingungen erfüllt sind.
  • Der elektronische Verschluß 9 wählt, welchem von der Objektivlinse 6 empfangenen Licht von dem durch eine Zelle emittierten Fluoreszenzlicht ermöglicht wird, auf einen Bildintensivierer 10 aufzutreffen. Der elektronische Verschluß 9 wird durch die Zellen Zellenvorbeifluß- Entscheidungsschaltung 13 gesteuert. Die Zeitperiode, in der der elektronische Verschluß 9 geöffnet (freigegeben) ist, wird durch die Flußgeschwindigkeit der Zellen, die als eine Probe verwendet werden, bestimmt. Wenn beispielsweise die Flußgeschwindigkeit der Zellen 1m/Sek. beträgt, muß der Verschluß 9 um ungefähr 1 um geöffnet werden. Wenn der Verschluß 9 länger als diese Zeitperiode geöffnet wird, wird sich das Fluoreszenzbild, welches auf dem Bildintensivierer 10 gebildet wird, wegen des Flusses bewegen und ein Standbild kann nicht mehr erhalten werden.
  • Der Bildintensivierer 10 ist ein Fotoverstärkerelement, in dem Licht, welches auf seine fotoelektrische Oberfläche einfällt, mit efhem Faktor von 10³ bis 10&sup6; verstärkt wird, bevor es an eine Seite davon, die eine Fluoreszenzoberfläche aufweist, geliefert wird. Eine Anordnung kann verwendet werden, bei dem der Bildintensivierer 10 eine eingebaute elektronische Verschlußfunktion aufweist, wobei in diesem Fall der elektronische Verschluß 9 getrennt vorgesehen sein würde.
  • Eine Bildherstellungslinse 11, die sich zwischen dem Bildintensivierer 10 und der Videokamera 12 befindet, faßt das Licht, welches das von der Fluoreszenzoberfläche des Bildintensivierers 10 ausgegebene Bild anzeigt, zusammen, fokussiert dieses und bildet das sich ergebende Bild auf einer CCD in der Videokamera 12.
  • Nachstehend wird der Betrieb der Vorrichtung beschrieben.
  • Anregungslicht, welches von der Lichtquelle 1 zum Bewirken einer Fluoreszenz erzeugt wird, tritt durch die Kollimatorlinse 2 und das sich ergebende kollimierte Licht wird dann von dem dichroitischen Spiegel 3 reflektiert. Das reflektierte Licht wird durch die Objektivlinse 6 zusammengefaßt und bestrahlt konstant die Flußzelle 5. Nur eine Fluoreszenz, die von einer Zelle innerhalb der Flußzelle 5 emittiert wird, tritt durch den dichroitischen Spiegel 3a und wird von dem Schlitz 7 transmittiert, wonach es auf den Fotoverstärker 8 einfällt. Der letztere erzeugt ein Erfassungssignal, welches an die Zellenvorbeifluß- Entscheidungsschaltung 13 angewendet wird, die bestimmt, ob das Signal eine Zelle von Interesse anzeigt. Wenn die erfaßte Zelle eine Zelle von Interesse ist, wird der elektronische Verschluß 9 durch den Verschlußbetätigungs-Trigger Sn, der von der Entscheidüngsschaltumg 13 erzeugt wird, ausgelöst. Die komponente des Anregungslichts, die von dem dichroitischen Spiegel 3a reflektiert wird, bestrahlt wieder die Zelle in der Flußzelle 5. Da der Abstand zwischen der Flußzelle 5 und dem dichroitischen Spiegel 3a ausreichend kurz ist, besteht fast keine Zeitdifferenz zwischen dem Anregungslicht, welches die Zelle direkt bestrahlt hat und dem Anregungslicht, welches reflektiert worden ist, um die Zelle zu bestrahlen und deshalb wird die Zelle im wesentlichen gleichzeitig bestrahlt. Infolge dessen ist die Intensität des erhaltenen Anregungslichts äquivalent zu derjenigen, die durch Bestrahlen der Zelle mit einem Anregungslicht, welches ungefähr die doppelte Beleuchtungskraft aufweist, erhalten werden würde. Da die von der Zelle emittierte Fluoreszenz in allen Richtungen isotrop ist, trifft die Fluoreszenz von der Flußzelle 5 auch auf den elektronischen Verschluß 9 über die Objektivlinse 6 zur gleichen Zeit auf, wenn der Fotoverstärker 8 das Fluoreszenzsignal erfaßt. Wenn zu dieser Zeit von der Zellenvorbeifluß-Entscheidumgsschaltung bestimmt wird, daß die erfaßte Zelle eine Zelle von Interesse ist, wird der elektronische Verschluß 9 freigegeben, so daß das Fluoreszenzbild der Zelle auf der fotoelektrischen Oberfläche des Bildintensivierers 10 gebildet wird. Das Fluoreszenzbild wird durch den Bildintensivierer 10 verstärkt und an seine Fluoreszenzoberfläche, das heißt an seine Ausgabeoberfläche, geliefert. Das sich ergebende verstärkte Bild wird auf der CCD der Videokamera 12 durch die Bildherstellungslinse 11 gebildet, wodurch ein Fluoreszenzbild der Zelle erhalten wird.
  • Fig. 4 ist ein Diagramm, das eine Anordnung der optischen Komponenten in der Nähe der Flußzelle 5 gemäß der vorliegenden Erfindung zeigt. Wie in Fig. 4 gezeigt; wird das durch die Objektivlinse 6 konvergiert und bestrahlt die Flußzelle 5 in der Zeichnung von der rechten Seite. Das Anregungslicht wird von dem dichroitischen Spiegel 3a auf der linken Seite der Flußzelle 5 reflektiert und bestrahlt die Zellen innerhalb der Flußzelle erneut. In der Zwischenzeit tritt die Fluoreszenz, die von den bestrahlten Zellen emittiert wird, durch den dichroitischen Spiegel 3a, so daß sie auf den Fotoverstärker 8 auftrifft.
  • Es sei darauf hingewiesen, daß der verwendete dichroitische Spiegel 3a ein derartiger sein kann, dessen Gestalt, wie in Fig. 5 gezeigt, konkav ist. Wenn in einem derartigen Fall der Brennpunkt des reflektierten Lichts von dem dichroitischen Spiegel 3a in der Meßzone der Flußzelle 5 angeordnet wird, dann kann selbst das Anregungslicht, welches auf die Umgebung des konkaven Spiegels auftrifft, in Richtung auf die Meßzone hin konvergiert werden, mit dem Ergebnis, daß das Ausmaß einer Bestrahlung, die von dem Anregungslicht bereitgestellt wird, noch weiter vergrößert werden kann.
  • Wie in Fig. 6 dargestellt, ist es auch möglich, auf der Rückseite der Flußzelle 5 einen wellenlängenselektiven Film aufzudampfen.
  • Fig. 7 ist ein Blockschaltbild, das den Aufbau einer zweiten Ausführungsform eines Flußabbildungs-Zytometers gemäß der vorliegenden Erfindung zeigt.
  • Diese Ausführungsform ist in der Konstruktion vereinfacht, indem das Zellenüberwachungssystem und das Bildaufnahmesystem auf der gleichen Achse angeordnet sind. In diesem Fall ist es erforderlich, daß sich ein Halbspiegel 16 zwischen dem dichroitischen Spiegel 3 und dem elektronischen Verschluß 9 befindet. Hier wird Fluoreszenzlicht, das von dem Halbspiegel 16 reflektiert wird, von dem Fotoverstärker 8 umfaßt und Fluoreszenzlicht, welches von dem Halbspiegel 16 transmittiert wird, wird von der Bildaufnahmeeinrichtung 12 aufgenommen und abgebildet.
  • Fig. 10 ist ein Blockschaltbild, das die Konstruktion einer dritten Ausführungsform eines Flußabbildungs-Zytometers gemäß der vorliegenden Erfindung zeigt.
  • In dieser Ausführungsform sind die dichroitischen Spiegel 3, 3a weggelassen worden, indem das Zellenüberwachungssystem und das Bildaufnahmesystem rechtwinklig zu dem Anregungslicht Bestrahlungssystem angeordnet werden. Bei dieser Anordnung sind die dichroitischen Spiegel 3, 3a durch eine Reflektionseinrichtung 17 als eine Wellenlängenwähleinrichtung ersetzt, um eine Fluoreszenz von einer Seite der Zelle, die die Fluoreszenz emittiert, zu messen. Diesbezüglich ist es erforderlich, daß sich die Reflektionseinrichtung 17 auf der Seite der Flußzelle 5 befindet, die der Lichtquelle 1, die die Fluoreszenz verursacht, gegenüberliegt Beispiele der Reflektionseinrichtung 17 sind ein planarer Spiegel, oder wie in der Anordnung von Fig. 5, ein konkaver Spiegel, dessen Brennpunkt an einer Position in der Meßzone der Flußzelle 5 plaziert ist. Hinsichtlich der Anordnung der Reflektionseinrichtung 17 kann diese in der gleiche Weise wie der dichroitische Spiegel 3a in der Anordnung, die in den Fig. 4, 5 und 6 gezeigt ist, angeordnet werden.
  • In einer noch anderen möglichen Anordnung kann ein konkaver Spiegel 17' mit einer kreisförmigen Öffnung 7a' in seiner mittel, wie in Fig 12 gezeigt, zwischen einer Anregungslicht- Kovergenzimse 15 und der Flußzelle 5 vorgesehen werden. Infolge dessen wird das Anregungslicht an dem konkaven Oberflächenabschnitt reflektiert, um eine weitere Erhöhung der Bestrahlung, die von dem Anregungslicht bereitgestellt wird, zu ermöglichen.
  • Somit kann gemäß dem Flußabbildungs-Zytometer der vorliegenden Erfindung, wie voranstehend beschrieben, wegen einer Reflektion des Anregungslichts durch eine Wellenlängenwähleinrichtung oder eine Reflektionseinrichtung, die hinter einem flachen Flußpfad einer Probenlösung vorgesehen ist, die Gesamtheit einer Zelle mit Anregungslicht bestrahlt werden. Da Zellen in der Probenlösung mit dem Anregungslicht, welches von einer Reflektion herrührt, bestrahlt werden, kann die Bestrahlung, die durch das Anregungslicht bereitgestellt wird, im Vergleich mit einem Fall, bei dem die Probenlösung von nur einer Seite bestrahlt wird, verdoppelt werden. Infolge dessen ist es möglich, die Intensität der Fluoreszenz, die von den bestrahlten Zellen emittiert wird, zu erhöhen.

Claims (11)

1. Flußabbildungs-Zytometer, umfassend:
- Eine Flußzelle, die so ausgebildet ist, daß sie einen Flußpfad aufweist, durch den eine Probenlösung, die zu erfassende Zellen enthält, veranlaßt wird, als eine flache Strömung zu fließen, wobei die Zellen Zellen von Interesse umfassen;
- eine Lichtquelle zum Bestrahlen der Probenlösung in der Flußzelle mit Licht;
- eine Bildaufnahmeeinrichtung zum Aufnehmen eines Standbilds einer Zelle von Interesse in der Probenlösung und zum Erzeugen von Bilddaten, die die Zelle von Interesse, deren Bild aufgenommen worden ist, anzeigen; und
- eine Bildverarbeitungseinrichtung zum Ausführen einer gewünschten Datenverarbeitung auf Grundlage der Bilddaten von der Bildaufnahmeeinrichtung;
- wobei Fluoreszenzbilder der Zellen, die durch die Flußzelle fließen, aufgenommen und analysiert werden;
-das Bestrahlungslicht von der Lichtquelle ein Licht zum Anregen einer Fluoreszenz in den Zellen ist und die flache Strömung der Probenlösung von einer vorderen Seite davon bestrahlt; und
-die Bildaufnahmeeinrichtung zum Aufnehmen von Fluoreszenzbildern von Zellen von der Vorderseite oder einer Rückseite vorgesehen ist;
- wobei das Flußabbildungs-Zytometer ferner umfaßt:
- eine Wellenlängenwähleinrichtung zum Reflektieren von Anregungslicht, welches von der Flußzelle transmittiert wird, und zum Transmittieren einer Fluoreszenz, die von den Zellen in der Flußzelle emittiert wird;
- eine Erfassungseinrichtung zum Erfassen der Fluoreszenz, die von den Zellen in der Flußzelle emittiert wird, getrennt von der Bildaufnahmeeinrichtung, und zum Erzeugen -eines Erfassungssignals, das die erfaßte Fluoreszenz anzeigt; und
- eine Entscheidungssteuereinrichtung zum Erfassen einer Zelle von Interesse auf Grundlage des Erfassungssignals von der Erfassungseinrichtung, zum Bestimmen, ob die Zelle von Interesse zur Aufnahme des Fluoreszenzbilds durch die Bildaufnahmeeinrichtung geeignet ist, und zum Erzeugen eines vorgegebenen Steuersignals.
2. Flußabbildungs-Zytometer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Wellenlängenwähleinrichtung eine planare Oberfläche aufweist.
3. Flußabbildungs-Zytometer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Wellenlängenwähleinrichtung eine konkave Oberfläche aufweist.
4. Flußabbildungs-Zytometer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Wellenlängenwähleinrichtung in engem Kontakt mit einer hinteren Oberfläche der Flußzelle vorgesehen ist.
5. Flußabbildungs-Zytometer nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Wellenlängenwähleinrichtung einen aufgedampften Film umfaßt, der auf einer hinteren Oberfläche der Flußzelle gebildet ist.
6. Flußabbildungs-Zytometer, umfassend:
- Eine Flußzelle, die so ausgebildet ist, daß sie einen Flußpfad aufweist, durch den eine Probenlösung, die zu erfassende Zellen enthält, veranläßt wird, als eine flache Strömung zu fließen, wobei die Zellen eine Zelle von Interesse umfassen;
- eine Lichtquelle zum Bestrahlen einer flachen Flußzone der Probenlösung in der Flußzelle mit Licht;
- eine Bildaufnahmeeinrichtung zum Aufnehmen eines Standbilds einer Zelle von Interesse in der Probenlösung und zum Erzeugen von Bilddaten, die die Zelle von Interesse anzeigen, deren Bild aufgenommen worden ist; und
- eine Bildverarbeitungseinrichtung zum Ausführen einer gewünschten Datenverarbeitung auf Grundlage der Bilddaten von der Bildaufnahmeeinrichtung;
- wobei Fluoreszenzbilder der Zellen, die durch die Flußzelle fließen, aufgenommen und analysiert werden;
- das Bestrahlungslicht von der Lichtquelle ein Licht zum Anregen einer Fluoreszenz in Zellen ist und die flache Strömung der Probenlösung von einer Seite davon bestrahlt; und
- die Bildaufnahmeeinrichtung zum Aufnehmen von Fluoreszenzbildern von Zellen von der vorderen Seite oder einer hinteren Seite vorgesehen ist;
- wobei das Flußabbildungs-Zytometer ferner umfaßt:
- eine Reflektionseinrichtung zum Reflektieren von Anregungslicht, welches von der Flußzelle transmittiert wird;
- eine Erfassungseinrichtung zum Erfassen der Fluoreszenz, die von den Zellen in der Flußzelle emittiert wird, getrennt von der Bildaufnahmeeinrichtung, und zum Erzeugen eines Erfassungssignals, das die erfaßte Fluoreszenz anzeigt; und
- eine Entscheidungssteuereinrichtung zum Erfassen einer Zelle von Interesse auf Grundlage des Erfassungssignals von der Erfassungseinrichtung, zum Bestimmen, ob die Zelle von Interesse zur Bildaufnahme des Fluoreszenzbilds durch die Bildaufnahmeeinrichtung geeignet ist, und zum Erzeugen eines vorgegebenen Steuersignals.
7. Flußabbildungs-Zytometer nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Reflektionseinrichtung eine planare Oberfläche aufweist.
8. Flußabbildungs-Zytometer nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Reflektionseinrichtung eine konkave Oberfläche aufweist.
9. Flußabbildungs-Zytometer nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Reflektionseinrichtung in engem Kontakt mit einer Oberfläche der Flußzelle vorgesehen ist.
10. Flußabbildungs-Zytometer nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Wellenlängenwähleinrichtung einen aufgedampften Film umfaßt, der auf einer Seitenfläche der Flußzelle gebildet ist.
11. Flußabbildungs-Zytometer nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß eine Reflektionseinrichtung mit einer konkaven Oberfläche, die mit einer Öffnung versehen ist, durch die einem bestrahlenden Anregungslicht ermöglicht wird, zu treten, auf einer Seite der Flußzelle vorgesehen ist.
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