DE68929467T2 - HIV-2 Varianten - Google Patents

Description

• Die vorliegende Erfindung betrifft HIV D205, eine HIV-2-Virusvariante, die vom entsprechenden Virusisolat HIV D205 (ECACC V 87122304) geklont werden kann.
• "Molecular cloning of two West African human immunodeficiency virus type 2 isolates which replicate well on macrophages: a Gambian isolate from a case of neurologic aquired immunodeficiency syndrome, and a highly divergent Ghanesian isolate" (N. Kühnel, H. v. Briesen, U. Dietrich, M. Adamski, D. Mix, L. Biesert, R. Kreutz, A. Immelmann, K. Henco, Ch. Meichsner, R. Andreesen, H. Gelderblom, und N. Rübsamen-Waigmann, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. 86, 4, 2383– 2387.
• In der Diagnostik müssen zwei Kriterien erfüllt werden, nämlich die Spezifität und die Empfindlichkeit für das nachzuweisende Antigen. Bei der AIDS-Diagnose kann der Bedarf an einer Spezifität sicherlich der Verwendung der Isolate HTLV-III_B und LAV-2 (M. Guyader et al., "Nature" 326, 1987, 662–669) entsprechen, um HIV-Infektionen von andere Infektionen abzugrenzen und somit eine grobe Zuordnung zu den Klassen der "HIV-2-verwandten Infektionen" oder der "HIV-1-verwandten Infektionen" vorzunehmen. Ein Problem besteht jedoch in der Empfindlichkeit der Diagnose. Im Bereich der sogenannten Serokonversion, d. h. dem anfänglichen Auftreten des Antikörpers in der infizierten Person, impliziert eine Verminderung der Empfindlichkeit eine Erhöhung der Zahl "falsch negativer" Testergebnisse. Folglich besteht ein Hauptziel in einer möglichst großen Verkürzung des Zeitraums zwischen einer Infektion und der Nachweisbarkeit dieser Infektion durch eine Verbesserung der Testempfindlichkeit.
• Eine verminderte Überkreuz-Reaktivität manifestiert sich in der Praxis der häufig eingesetzten ELISA-Diagnostik zum Beispiel durch eine verminderte Empfindlichkeit. Somit bedeutet die Verwendung des beschriebenen HIV-1-Isolat etwa eine mittlere Verminderung der Testempfindlichkeit gegenüber HIV-2-Seren um den Faktor von 100 bis 1000, während das Isolat HTLV-III_B dazu führt, dass fast kein Nachweis mehr bewerkstelligt werden kann.
• Ein verhängnisvolles Prinzip der durch HIV verursachten Krankheiten besteht in der Tatsache, dass es nicht nur einen Typ an Phänotypen und Genotypen jeweils des HIV-1- und des HIV-2-Virus gibt. Statt dessen ist eine große Gruppe verwandter Viren, möglicherweise sogar Populationen, zu postulieren, die keinesfalls strikt voneinander getrennt sind, sondern kontinuierlich ineinander eindringen und eine evolutionäre Entwicklung zu einer immer mehr ansteigenden Divergenz erfahren, während sie gleichzeitig durch Rekombinationsereignisse damit beginnen, Teile des Genoms untereinander auszutauschen. Somit bilden die existierenden HIV-Spezies ein breites, kontinuierliches Populationsniveau, in dem es keine eng abgegrenzten Unterpopulationen einer Virusvariante gibt. Statt dessen ist anzunehmen, dass ein Kontinuum existiert, das im Laufe der Zeit permanenten Schwankungen unterliegt.
• Die klassifizierten Virusvarianten HIV-1 und HIV-2 sind Repräsentanten der diffus voneinander abgegrenzten Unterpopulationen mit einem relativ niedrigen Grad an Beziehungen, was sich durch eine nur teilweise Überkreuzreaktivität zeigt. Andererseits gibt es Varianten der HIV-1-Gruppe (H. Rübsamen-Waigmann et al., "AIDS-Forschung" 10, 1987, 572–575; H. Rübsamen-Waigmann et al., J. Med. Virol. 19, 1986, 335–344; H. v. Briesen et al., J. Med Virol. 23, 1987, 51– 66), die mit HIV-2 signifikant stärkere Überkreuzreaktionen eingehen als das zuerst charakterisierte HIV-1-Isolat selbst (B. Hahn et al., "Nature" 312, 1984, 166–169). Ein aus einem solchen Isolat bestehendes kommerzielles Produkt ermöglicht die Diagnose von deutlich mehr Seren als HIV-2-positiv als das beschriebene Standardisolat HTLV-III_B.
• Ein ideales Diagnostikum oder Therapeutikum sollte wenigstens einen Repräsentanten aus den Populationen als biologisch signifikant voneinander unterschieden enthalten.
• HIV-1-Viren in einer Mehrzahl hoch polymorpher genetischer Mutanten können verschiedene Krankheiten wie ARC, LAS, AIDS und Enzephalopathien (ARC: AIDS-bezogene Krankheitszustände, LAS: Lymphadenopathie-Syndrom, AIDS: erworbenes Immunschwäche-Syndrom) verursachen. Geklonte Virusvarianten unterscheiden sich durch die Sequenz und das Restriktionsmuster sogar dann, wenn sie gleichzeitig, am selben Ort und sogar vom selben Patienten isoliert wurden (N. Rübsamen et all, 1986). Es konnte gezeigt werden, dass Virusvarianten vom HIV-1-Typ sich in einigen Virusantigenen um bis zu etwa 15% unterscheiden. Bei HIV-2 sind sogar mehr als 40% der Aminosäuren mancher Antigene verschieden, wobei Substitutionen, Insertionen und Deletionen in Betracht gezogen worden sind (M. Guyader et al., 1987, A. B. Rabson und M. A. Martin, "Cell" 40, 1985, 477–480).
• Die vorliegende Erfindung macht eine Variante des HIV-2-Virus verfügbar. Die Variante HIV-2 D205 wurde aus einem klinisch asymptomatischen Patienten isoliert. Das Virusisolat erwies sich als Diagnostikum in Bezug auf DNA/RNA sowie in Bezug auf die Virus-Antigene zur serologischen und direkten Identifizierung von Infektionen durch den Typ HIV-2 in der Pre-AIDS- und der AIDS-Stufe.
• Das erfindungsgemäße Virusisolat umfasst Viren und Proviren, deren Merkmale mit denjenigen der offenbarten Restriktionskarte und der Sequenz der geklonten Teilbereiche identisch sind (1–4). Darüber hinaus umfasst das Virusisolat Varianten, die sich von den oben beschriebenen Viren und Proviren dahingehend unterscheiden, dass ihre Nucleotidsequenzen sich von den oben beschriebenen Viren nur um bis zu 5% und vorzugsweise 2%, besonders bevorzugt um 1% unterscheiden.
• Die erfindungsgemäße Virusvariante kann Lymphadenopathien (weiterhin als LAS/AIDS bezeichnet) verursachen. Erfindungsgemäß beansprucht sind auch Expressionsprodukte der Virusvariante und insbesondere Antigene, vorzugsweise in akkumulierter oder reiner Form, und Verfahren zur Herstellung der Expressionsprodukte. Die Expressionsprodukte sollen alle Polypeptide in glycosylierten und/oder meristylierten Formen einschließen, die am positiven oder negativen Strang der geklonten RNA oder DNA kodiert wurden.
• Eine weitere bevorzugte Ausführungsform besteht aus geklonten DNA-Sequenzen, die dazu fähig sind, mit genomischer RNA und DNA der Virusvariante zu hybridisieren. Erfindungsgemäß beansprucht sind stabile Gensonden, die DNA-Sequenzen enthalten, die zum Nachweis der Hybridisierung dieser und anderer HIV-Varianten oder verwandter Viren oder DNA-Proviren in zu untersuchenden Proben, insbesondere biologischen oder halbsynthetischen Proben, fähig sind.
• Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der Erfindung besteht aus einer Virusvariante der RNA/DNA, die oder deren jeweilige Fragmente, insbesondere c-DNA, genomische DNA, rekombinante DNA, synthetische DNA oder Fragmente davon unter strengen Bedingungen an erfindungsgemäßen Virusvarianten hybridisieren. Es gilt als vereinbart, dass diese Varianten oder Fragmente einschließen, die im Vergleich zur erfindungsgemäßen Virusvariante Deletionen und Insertionen aufweisen.
• Als strenge Hybridisierungs- und Waschbedingungen sind diejenigen Bedingungen zu verstehen, aus denen experimentell oder durch Berechnungen abgeleitet werden kann, dass der Schmelzpunkt der zu 100% homologen Nucleinsäurekomplexe unter den Hybridisierungs- und Waschbedingungen unter den eingesetzten Pufferbedingungen um nicht mehr als 5°C abnimmt.
• Ebenfalls erfindungsgemäß beansprucht sind geklonte synthetische Gensonden, die von den oben beschriebenen Virusvarianten stammen können und in Vektorsystemen in Eukaryonten oder Prokaryonten vermehrt werden können. Die beschriebenen geklonten DNA-Fragmente sind zur Hybridisierung mit komplementären Nucleinsäuren (DNA/RNA) zum Zweck des diagnostischen Nachweises der Virusvarianten geeignet. Die erfindungsgemäßen Diagnosetests werden mittels DNA- oder RNA-Sonden durchgeführt. Die Sonden sind radioaktiv oder sind mit fluoreszenten bio- oder chemilumineszenten Gruppen oder Enzymen markiert oder sind mit Enzymen über gekoppelte Reaktionssysteme spezifisch nachweisbar. Die Hybridisierungen können in einer homogenen Phase einer Lösung oder in einer heterogenen Phase mit an Feststoff immobilisierten Nucleinsäuren erfolgen, während es sich beim Feststoff um eine Membran, ein Teilchen, eine Zelle oder ein Gewebe handeln kann, so dass die Hybridisierung auch in situ erfolgen kann.
• Die entsprechenden DNA-Sequenzen (1) aus den erfindungsgemäß beanspruchten Virusisolaten können in E. coli-Bakterien geklont werden, indem eine genomische Lambda-Genbank eingerichtet wird, wobei von der DNA der mit dem Virusisolat infizierten Lymphozyten ausgegangen wird. Die gewünschten Klone werden erhalten, indem ein Plaque-Screening mit STLV-III-Sequenzen des Gag-Pol-Bereichs durchgeführt wird. Noch spezifischer kann eine DNA, die von der veröffentlichten Sequenz HIV-2 ROD (M. Guyader et al., "Nature" 326, 1987, 6623–669) stammt, oder eine DNA-Sonde, die von den Teilsequenzen des erfindungsgemäßen Isolats HIV-2 D205 stammt, als Sonde verwendet werden.
• Das Diagnoseverfahren, das auf der Verwendung der erfindungsgemäß beanspruchten Viren basiert, umfasst die folgenden Schritte: Extraktion der RNA oder DNA aus biologischen Proben, gegebenenfalls die enzymatische Verarbeitung durch Restriktionsenzyme, die Trennung durch Gelelektrophorese und/oder Direkt-Blotting-Verfahren für Nucleinsäure bindende Träger, und die anschließende Hybridisierung mit Teilen der geklonten Fragmente der beanspruchten Viren. Hybridisierungen können auch direkt in chemisch behandelten Zellen oder Geweben erfolgen. Dabei ist der Ursprung der Gewebe oder Flüssigkeiten unerheblich.
• Insbesondere ist ein Verfahren zum in-vitro-Nachweis von Antikörpern gegen Expressionsprodukte der Viren der vorliegenden Erfindung dadurch gekennzeichnet, dass die Expressionsprodukte der Viren oder Teile davon durch immunologische Methoden nachgewiesen werden. Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den Expressionsprodukten um Proteine, Peptide oder Teile davon handelt, die innerhalb der Bedeutung eines offenen Leserasters auf der DNA der proviralen Teilsequenzen nach Anspruch 1 kodiert worden sind und durch synthetische oder biosynthetische Verfahren hergestellt werden.
• Das Verfahren ist weiter dadurch gekennzeichnet, dass zuvor eine definierte Menge oder eine Kombination von Expressionsprodukten oder Teilen davon auf Mikrotiterplatten fixiert wird, wonach anschließend biologische Proben, verdünnt oder unverdünnt, mit den beschichteten Mikrotiterplatten in Kontakt gebracht werden und nach einer Inkubation und anschließenden Waschschritten mittels eines Nachweisreagenzes oder markierten Anti-HIV-Antikörpern identifiziert werden können.
• Alternativ werden Filterstreifen und Kunststoffstreifen oder -stäbe statt Mikrotiterplatten verwendet, wobei die Expressionsprodukte der Viren durch die isolierte Auftragung der verschiedenen Antigene an jeweils spezifischen Positionen fixiert worden sind.
• Die Expressionsprodukte können auch durch Gelelektrophorese getrennt und dann durch Blotting übertragen werden, wonach die Inkubation mit Anti-HIV-Antikörpern und deren Nachweis erfolgen. Der Nachweis erfolgt auf Festphasenträgern, an denen die Antigen-Determinanten gebunden wurden, wobei die Festphasenträger aus Teilchen bestehen.
• Bei Expressionsprodukten kann es sich um Virusantigene handeln, die von in vitro infizierten Zellen stammen, wobei die Antigene mit biologischen Testmaterialien als an fixierte Zellen gebundene Antigene in Kontakt gebracht werden und die anschließende Bindung des Antikörpers mit immunologischen Nachweisreagenzien zum Beispiel mittels eines Cytofluorimeters oder visuell bestimmt werden kann.
• Die Antigene können durch kompetitive ELISA bestimmt werden. HIV-verwandte Nucleinsäuren (DNA und RNA) können unter Bildung der erfindungsgemäßen Nucleinsäuren in biologischen Proben, Zellen und in isolierter Form nachgewiesen werden.
• Expressionsprodukte können durch Materialien unterstützt werden, die einen Bezug zu anderen HIV-Varianten aufweisen, sich jedoch hinsichtlich ihrer biologischen Eigenschaften von den Materialien der Isolate der vorliegenden Erfindung unterscheiden.
• Für diagnostische und therapeutische Aufgaben können die beschriebenen DNA-Segmente auch zur Exprimierung kodierter Antigene verwendet werden. Dabei werden die DNA-Segment unter der gezielten Steuerung von Regulationssequenzen in pro- oder eukaryontische Zielzellen, -gewebe oder aus mehreren Zellen bestehende Zielorganismen eingeführt, um diese zur Produktion der entsprechend kodierten Antigene, Teilen davon oder Kombinationen davon mit fremden Antigenen zu stimulieren. Antigene können über die Reaktion mit Anti-HIV-2-Antikörpern, insbesondere aus den Seren der betreffenden Patienten, nachgewiesen werden. Antigene mit längeren offenen Leserastern (> 50 Aminosäuren) eignen sich dafür genauso wie diejenigen, die auf RNA-Ebene Spleißvorgängen unterworfen sind und somit so zusammengesetzt sind, dass sie die längeren offenen Leseraster bilden.
• Gemäß der Erfindung werden weiterhin Polypeptide beansprucht, die von der erfindungsgemäßen geklonten Virusvariante stammen, um solche Antigene in einem zu untersuchenden Material nachzuweisen, das ähnliche Antigen-Determinanten enthält und deswegen eine immunologische Überkreuzreaktion eingeht. Dies ist zur Diagnose von AIDS und Pre-AIDS von Virenträgern oder asymptomatischen Virenträgern bzw. von Blut stammenden Virusprodukten besonders geeignet. Auch der serologische Nachweis der Antikörper, die gegen diese antigenen Polypeptide als Expressionsprodukte des erfindungsgemäß beanspruchten Virus gerichtet sind, werden durch die Verwendung herkömmlicher Systeme wie ELISA möglich. Die immunogenen Polypeptide können als schützende Polypeptide als Vakzine verwendet werden, um einen Schutz gegen AIDS-Infektionen zu bewirken.
• Die efindungsgemäßen Virusisolate und die davon stammenden Produkte können mit anderen Isolaten der Teilpopulation HIV-2 in Testsystemen kombiniert werden, d. h. mit denjenigen, die sich so weit wie möglich im beschriebenen Populationsniveau entfernt befinden, wie zum Beispiel das Isolat HIV-2 ROD (M. Guyader et al., 1987). Dadurch wird es möglich, auch Populationen entfernter Verwandtschaft in einem Test empfindlich nachzuweisen.
• Die erfindungsgemäße Virusvariante ist vom Spektrum der HIV-1-Varianten hochgradig verschieden und weist eine engere molekulare Verwandtschaft zu dem von Guyader beschriebenen HIV-2-Virus auf, obwohl sie sich davon beträchtlich unterscheidet (1). Auch die biologischen Eigenschaften unterscheiden sich deutlich vom beschriebenen HIV-2-Isolat. Somit bevorzugt die erfindungsgemäße Variante für eine wirksame in-vitro-Replikation Zellen, die von myeloischen Linien stammen. Im Gegensatz dazu reproduziert das Virus sich in lymphozyten Linien schlecht.
• Eine Probe des erfindungsgemäß beanspruchten Virus ist in Form seines Isolats am European Collection of Animal Cell Cultures unter der Bezeichnung HIV D205 (V 87122304) gemäß dem Budapester Vertrag hinterlegt worden.
• 1 zeigt die Restriktionskarten des erfindungsgemäßen Virusisolats im Vergleich zu bekannten HIV-Sequenzen.
• 2 zeigt die partiellen Nucleotidsequenzen von HIV-D205 (entsprechend dem Klon HIV-2 A7.1 von 2).
• 3 zeigt die Sequenzhomologie von HIV-2 D205, 7 im Vergleich zur HIV/SIV-Gruppe (Genniveau; nt/aa).
• 4 zeigt einen Vergleich der Nucleotidsequenz zwischen HIV-2 D205 und HIV- und SIV-Stämmen (in % der Homologie).
• Experimentelle Ergebnisse und Merkmale von HIV-D205 sind in H. Kühnel et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. 86, 4, 2383–2387, beschrieben.
• Die Sequenz von HIV-D205 zeigt viele sogenannte "offene Leseraster". Die meisten dieser Leseraster können durch einen Vergleich von Homologien mit zuvor beschriebenen HIV-Viren mittels eines Vergleichs von Western-Blots, die mit HIV-D2-5-Antigenen durchgeführt wurden, die von infizierten HUT78- oder U937-Zellen stammen, und durch Untersuchungen mit Seren von den entsprechenden Patienten und Bezugsseren mit in vivo exprimierten Proteinen/Antigenen in Beziehung gesetzt werden.
• Andere offene Leseraster werden nicht auf dem Niveau ihrer exprimierten Antigene, die durch die Funktion oder die auf Western-Blots erfolgenden Färbung von Antikörpern definiert sind, identifiziert. Sie können unter bestimmten Umständen jedoch in vivo exprimiert werden. Andere Leseraster, sogar kurze, können gut auf eine Weise exprimiert werden, die auf Grund von Spleißvorgängen allein auf der Grundlage der Nucleinsäure-Sequenzdaten schwierig vorhersagbar ist.
• Antigen-Determinanten auf exprimierten Proteinen, die für die biologische Funktion, für Zielantigene in der Diagnostik oder für die Immunisierung wichtig sind, sind über die gesamte exprimierte lineare Proteinstruktur verteilt. Teile dieser Sequenzen können allgemeinere antigene Eigenschaften als andere haben, wie durch ein Peptid-Screening/eine Peptid-Kartierung für antigene Stellen gezeigt werden kann. Diese Stellen können als einzelne Epitope oder kontinuierliches Polypeptid oder in einer Version von in vitro oder synthetisch gespleißten Antigenen exprimiert werden. Die Antigenität der exprimierten Produkte kann durch eine Fixierung und ein Blotting des Antigens im Western-Blot-Assay gezeigt werden. Konstruktionen zur Antigen-Expression in E. coli können erfolgen, indem herkömmliche Techniken unter Verwendung von synthetischen Genen, Restriktionsfragmenten von geklonten viralen Genomsegmenten, unter Verwendung von mit Exonuclease oder DNase I getrimmten Produkte davon oder unter Verwendung von sequenzspezifischen synthetischen Primern, die das gewünschte gewünschte 5'- und 3'-Ende des zu exprimierenden Fragments zusammen mit geeigneten Restriktionsorten definieren, verwendet werden. Diese Restriktionsorte können leicht zur Ligation in ein Feld von mehrfach klonierende Orte (pEX) aufweisenden Expressionsvektoren verschiedener Organismen wie denjenigen, die von PLc24 (Remault et al., 1981 Gene 15, 81–83) stammen, verwendet werden.
• Es wurde gezeigt, dass die exprimierten Antigene mit Seren von Patienten spezifisch reagieren. Das p27(24) des gag von HIV-D205 reagiert sehr empfindlich mit sowohl typischen HIV-1-Seren als auch mit typischen HIV-2-Seren (siehe Kühnel et al.).

Claims (24)

1. Virusisolat HIV-2 D205 (ECACC V 87122304), das zur in-vitro-Replikation von Knochenmarkzellen stammende Zellen bevorzugt.
2. DNA der proviralen Teilsequenz des Virusisolats von Anspruch 1 gemäß der Merkmale des Endonuclease-Restriktionsorts von 1.
3. cDNA, die sich um bis zu 5% von der Nucleotidsequenz der Virusisolate gemäß Anspruch 1 unterscheidet.
4. Virus-RNA, die sich um bis zu 5% von der Nucleotidsequenz der Virusisolate gemäß Anspruch 1 unterscheidet.
5. Rekombinante DNA, die DNA gemäß der Definition in den Ansprüchen 2 und 3 enthält.
6. DNA oder RNA nach einem der Ansprüche 2 bis 5, wobei die DNA oder RNA als Hybrid mit komplementär markierte DNA- oder RNA-Stränge vorliegt.
7. DNA nach einem der Ansprüche 2, 3, 5 und/oder 6, dadurch gekennzeichnet, dass sie zu viraler DNA komplementär ist.
8. Expressionsprodukte des Virusisolats nach Anspruch 1.
9. Expressionsprodukte nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Proteine oder Peptide durch ein offenes Leseraster auf der DNA nach Anspruch 2 codiert wurden.
10. Ein Verfahren zum in-vitro-Nachweis von Antikörpern gegen Expressionsprodukte der Viren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Expressionsprodukte der Viren mittels immunologischer Verfahren nachgewiesen werden.
11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Expressionsprodukte Proteine oder Peptide sind, die durch ein offenes Leseraster der DNA nach Anspruch 2 codiert werden und durch synthetische oder biosynthetische Verfahren hergestellt werden.
12. Verfahren nach Anspruch 10 oder 11, dadurch gekennzeichnet, dass zuvor eine bestimmte Menge einer Kombination von Expressionsprodukten auf Mikrotiterplatten fixiert wird, woraufhin nacheinander biologische Proben, verdünnt oder unverdünnt, mit den beschichteten Mikrotiterplatten in Kontakt gebracht werden und nach einer Inkubation und nacheinander erfolgenden Waschschritten mittels eines Nachweisreagenz oder mittels markierter Anti-HIV-Antikörper identifiziert werden können.
13. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass Filterstreifen und Kunststoffstreifen oder -stäbe statt Mikrotiterplatten verwendet werden, wobei die Expressionsprodukte der Viren an jeweilig spezifischen Positionen durch isolierte Aufbringung der verschiedenen Antigene fixiert worden sind.
14. Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass die Expressionsprodukte durch Gelelektrophorese getrennt werden und dann durch Blotting transferiert werden, wonach eine Inkubation mit Anti-HIV-Antikörpern und deren Nachweis erfolgen.
15. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass der Nachweis auf Festphasenträgern erfolgt, an die Antigen-Determinanten gebunden wurden, wobei der Festphasenträger aus Teilchen besteht.
16. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 15, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den Expressionsprodukten um Virus-Antigene handelt, die von in vitro infizierten Zellen stammen, wobei die Antigene als an fixierte Zellen gebundene Antigene mit biologischen Testmaterialien in Kontakt gebracht werden und wobei die anschließende Bindung von Antikörpern mittels einer Vorrichtung, zum Beispiel mit einem Cytofluorimeter, oder visuell mit einem immunologischen Nachweisreagenz bestimmt werden kann.
17. Verfahren nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Antigene mittels kompetitiver ELISA bestimmt werden.
18. Verfahren zum Nachweis von HIV-verwandten Nucleinsäuren (DNA und RNA) in biologischen Proben, Zellen und in isolierter Form durch Verwendung der Nucleinsäuren nach den Ansprüchen 2 bis 7.
19. Verfahren nach einem der Ansprüche 10 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass die Expressionsprodukte durch Materialien unterstützt werden, die mit anderen HIV-Varianten verwandt sind, deren biologische Eigenschaften sich jedoch von den Expressionsprodukten des Isolats nach Anspruch 1 unterscheiden.
20. Immunogene Zusammensetzung, enthaltend Expressionsprodukte nach Anspruch 8.
21. Immunogene Zusammensetzung nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei einem Antigen um das gesamte Membranantigen handelt.
22. Antikörper und insbesondere monoklonale Antikörper, die speziell gegen Expressionsprodukte des Virusisolats nach Anspruch 1 gerichtet sind.
23. Isolierte Zellen, die mit Nucleinsäuren nach einem der Ansprüche 2 bis 7 transformiert worden sind.
24. Isolierte Zellen, die mit dem Virusisolat nach Anspruch 1 infiziert worden sind.