DE68926427T2 - Vom streptococcus m-protein abgeleitete synthetische peptide und damit hergestellte impfstoffe - Google Patents
Vom streptococcus m-protein abgeleitete synthetische peptide und damit hergestellte impfstoffeInfo
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Description
- Das M-Protein von Streptokokken der Gruppe A ist ein faserförmiges Dimer aus Helices, die in einer Superhelix angeordnet sind, die sich ausgehend von der Oberfläche dieser Organismen über ungefähr 50 nm ausbreitet. Es handelt sich um ein fibrilläres Molekül&sub1; von dem mehr als 80 Serotypen existieren. Das M-Protein führt zur Resistenz der Streptokokken gegen Nichtimmunphagocytose. Es ist der hauptsächliche Virulenzfaktor von Streptokokkenbakterien.
- Hollingshead et al. (The Journal of Biological Chemistry, 261, 1677-1686; 1986) offenbaren die DNA Sequenz des Gens für das 6M- Protein von Stredtococcus Dyogenes. Auf Grundlage von Versuchen zur Antikörper-Kreuzreaktivität und von DNA-Hybridisierungsexperimenten halten es die Autoren für möglich, daß es Regionen im M6-Protein gibt, die allen M-Typen von Gruppe A-Streptokokken gemeinsam sind und die für die Entwicklung eines Peptid-Impfstoffs geeignet sein könnten. Sie geben jedoch weder die Lage noch die Sequenz geeigneter Peptide an.
- Fig. 1 zeigt die vollständige Aminosäuresequenz des M6-Proteins von Stamm D471 einer Gruppe A-Streptokokkenkultur aus der Sammlung der Rockefeller University.
- Fig. 2 erläutert ein Modell für das gesamte M6-Protein des Stamms D471, wie es auf der Zellwand vorliegt.
- Aus Fig. 2 ist ersichtlich, daß ein Teil des M-Proteins, der Carboxyterminus, in das Peptidoglycan und die Membran der Zellwand eingebettet ist. Das benachbarte Segment wird durch das Kohlehydrat der Zellwand geschützt, das sich aus einem Rhamnosegrundgerüst (offene Kreise) mit N-Acetylglycosaminverzweigungen (gefüllte Kreise) zusammensetzt. Der distale Aminoterminus des M-Proteins ist nichthelikal. Zwischen dem schützenden Kohlehydrat und der nichthelikalen Region befindet sich eine exponierte Region.
- Fig. 1 zeigt die vollständige Aminosäuresequenz eines M-Proteins aus einem spezifischen Stamm. M-Proteine anderer Stämme besitzen im allgemeinen die gleichen strukturellen Merkmale und die gleiche Konformation, ihre Aminosäuresequenzen variieren jedoch. Die Hauptvariationen treten zum Aminoterminus hin auf. Zum Carboxyende hin werden die Moleküle zunehmend konservierter. Die Homologie zwischen M-Molekülen verschiedener Serotypen wird also in den Bereichen, die sich näher am carboxyterminus und in unmittelbarer Nähe der Zellwand befinden, immer größer.
- Diese Variabilität des Aminoterminus ist für die Antigenvariation des M-Proteins verantwortlich. Antikörper, die Schutz gegen einen Serotyp verleihen, führen im Opsonophagocytose-Assay nicht zu einer wirksamen Resistenz gegen eine Infektion mit anderen Serotypen. Es ist daher theoretisch möglich, daß ein Individuum viele Male mit unterschiedlichen Streptokokkenstämmen infiziert wird, und jede Infektion dauert so lange, bis das Immunsystem eine Antikörperkonzentration aufgebaut hat, die ausreicht, um den spezifischen Infektionsstamm zu neutralisieren.
- Die Erfahrung zeigt jedoch, daß Streptokokkeninfektionen nahezu ausschließlich bei Kindern auftreten und im Alter von 7 Jahren einen Höhepunkt erreichen. Erwachsene sind anscheinend gegen solche Infektionen resistent, vermutlich weil sie eine Immunität erworben haben, die gegen die meisten Serotypen wirksam ist. Auf Streptokokkeninfektionen könnte also eine Immunantwort erfolgen, die "Memory- Antikörper" liefert, die Epitope auf den meisten, wenn nicht sogar auf allen Streptokokkenserotypen erkennen. Es wurde nunmehr gefunden, daß sich diese Epitope in der konservierten Region des M- Proteins befinden, die nicht durch ihre unmittelbare Nähe zur Zellwand geschützt ist, d.h. in der konservierten exponierten Region des M-Proteins. Wenn auch die Identität der Aminosäuren in dieser Region zwischen den einzelnen Serotypen etwas variiert, so befindet sie sich doch im allgemeinen ungefähr zwischen Position 170 und Position 296 auf dem M-Proteinmolekül.
- Polypeptide aus dieser Region können bei Verabreichung an Säuger, die Schutz vor Streptokokkeninfektionen benötigen, eine schützende Immunantwort auslösen.
- Wie bekannt, kennt der Körper eines Säugers mehrere Möglichkeiten, um sich gegen Infektionen mit Mikroorganismen zu schützen. Eine davon ist das Adaptivsystem, bei dem die Immunantwort auf einen Befall durch einen Organismus durch Produktion von IgG-Antikörpern erfolgt, an die sich eine durch Komplement vermittelte Opsonierung und eine Phagocytose anschließen. Eine weitere Möglichkeit besteht in der Produktion oder Aktivierung von IgA, dem Hauptimmunglobulin seromukoider Sekrete wie Speichel, Tracheobronchialsekreten, Colostrum, Milch und Urogenitalsekreten. Sekret-IgA (sIgA) ist eine IgA-Form, die durch ihre Sekretkomponente vor Proteolyse geschützt ist. IgA verhindert, daß sich infektiöse Mikroorganismen anheften, Kolonien bilden und das muköse Gewebe befallen.
- Das zur Zeit zur Durchführung dieser Erfindung bevorzugte Verfahren beinhaltet in erster Linie die sIgA-Stimulation durch intranasale oder orale Verabreichung. Gleichzeitig kann es zur Produktion von IgG kommen, und beides kann zur Immunisierung beitragen. Die Erfindung wird hauptsächlich so beschrieben, wie sie in diesem Verfahren zur Anwendung kommt. Die erfindungsgemäßen Polypeptide können mittels parenteraler Verabreichung auch dazu verwendet werden, hauptsächlich eine IgG-Antwort bei gleichzeitiger Produktion niedriger IgA-Spiegel zu stimulieren.
- Die erfindungsgemäß verwendeten Polypeptide werden aus Polypeptiden aus dem konservierten exponierten Teil des M-Proteins ausgewählt. Im allgemeinen enthalten sie wenigstens 5 Aminosäurereste und werden als Haptene, konjugiert mit einem Carrier, verabreicht. Im allgemeinen ist es unpraktisch, wenn das Polypeptid mehr als 25 Aminosäurereste enthält, da die Synthese von reinem Material mit zunehmender Anzahl der Aminosäurereste im Peptid schwieriger wird.
- Das Polypeptid läßt sich auch durch selektive enzymatische oder chemische Spaltung aus dem M-Protein erhalten, bei weitem bevorzugt wird das ausgewählte Polypeptid aber nach irgendeiner der bekannten Methoden synthetisiert, z.B. der Festphasensynthese nach Merrifield, bei der das Peptid an einem Harzsubstrat synthetisiert und dann abgetrennt und gereinigt wird. Nach diesem Verfahren lassen sich Polypeptide mit der genauen Aminosäuresequenz des Abschnitts herstellen, der aus der konservierten exponierten Region des M- Proteins ausgewählt wurde. Es ist jedoch nicht wesentlich, daß eine genaue Sequenz eingesetzt wird. Durch Substitution einer oder mehrerer Aminosäuren lassen sich auch geringfügige Modifikationen, insbesondere solche, die die Konformation des Peptids nicht ändern, vornehmen und damit brauchbare Polypeptide herstellen, die im wesentlichen dieselbe Sequenz wie im M-Protein besitzen. Üblicherweise ist die Sequenz des Polypeptids jedoch mit der Sequenz des natürlichen Produkts identisch.
- Es kann auch erwünscht sein, an einen der Termini des ausgewählten Polypeptids ein oder mehrere Aminosäuren anzuhängen. Diese Ausführungsform der Erfindung kommt üblicherweise zur Anwendung, um das Polypeptid an einen Carrier zu binden oder um seine Immunogenität zu erhöhen.
- Die erfindungsgemäßen Polypeptide sind:
- (1) Ser-Lys-Gln-Asp-Ile-Gly-Ala-Leu-Lys-Gln-Glu-Leu-Ala-Lys-Lys- Asp-Glu-Gly-Asn-Lys
- (2) Leu-Asp-Ala-Ser-Arg-Glu-Ala-Lys-Lys-Gln-Val-Glu-Lys-Asp-Leu- Ala-Asn-Leu-Thr-Ala-Glu-Leu
- (3) Glu-Lys-Gln-Ile-Ser-Asp-Ala-Ser-Arg-Gln
- Das erste Peptid wird im folgenden manchmal als Peptid 216-235, das zweite als 248-269 und das dritte als 275-284 bezeichnet. Die Zahlen beziehen sich auf die Positionen des ersten und letzten Aminosäurerests des Polypeptids im M-Proteinmolekül, siehe Fig. 1.
- Die durch diese Peptide repräsentierten Epitope befinden sich in der konservierten exponierten Region der Mehrzahl der bekannten, in der Natur vorkommenden Serotypen. Wenn also gezeigt würde, daß sie Antikörper gegen einen Serotyp bilden, würde man erwarten, daß sie dieselbe Antwort auch mit anderen Serotypen zeigen.
- Die Peptide wurden nach der Methode von Barany und Merrifield ("Le Peotides: Analysis, Synthesis, Biology. E. Gross und J. Meienhofer, Herausgeber; Academic Press, Inc. New York, 1-284) mit einem zusätzlichen Cysteinrest am Carboxyterminus synthetisiert. Sie wurden durch Umkehrphasenflüssigchromatographie an einer Brownlee C-8-Säule gereinigt, mit einem Acetonitrilgradienten in 0,1% Trifluoressigsäure als Einzelpeak eluiert und in lyophilisierter Form bei 4ºC aufbewahrt. Die Aminosäuresequenz wurde sowohl durch die Aminosäurezusammensetzung als auch durch Bestimmung der Aminosäuresequenz bis zum vorletzten Rest bestätigt. Um Disulfidbrücken zu beseitigen, die sich während der Aufbewahrung gebildet hatten, wurden die Peptide mehrere Tage vor Konjugation an die B- Untereinheit von Choleratoxin (CTB) mit 0,14 M β-2-Mercaptoethanol bei pH 7,2 reduziert und anschließend zur Entfernung des Reduktionsmittels mehreren Lyophilisierungs- und Solubilisierungszyklen unterworfen.
- Die Peptide wurden verwendet, um Impfstoffe zur oralen und zur intranasalen Immunisierung von Säugern herzustellen. Für die Präparation wurden die primären Aminogruppen von hochgereinigtem CTB in phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) durch Zugabe eines 15-molaren Überschusses des heterobifunktionellen Vernetzungsmittels N'-Succinimidyl-3-(-2-pyridyldithio)propionat (SPDP; Pierce Chemical Co., Rockford, IL), solubilisiert in Ethanol, derivatisiert. Die Mischung wurde mit einem Magnetrührer solange gerührt, bis sich ein Präzipitat bildete (ungefähr 10 bis 15 Minuten)
- An dieser Stelle wurde die Reaktion durch Zugabe von Ethanolamin in einer Endkonzentration von 70 mM gestoppt, was eine sofortige Klärung des Präzipitats zur Folge hatte. Die Lösung wurde über Nacht bei 4ºC gegen PBS dialysiert. Nach Entnähme einer kleinen Probe des Dialysats wurde die Absorption bei 343 nm vor und nach Zugabe von 5 mM Dithiothreitol gemessen, um auf Basis der Freisetzung von Pyridin-2-thion den Derivatisierungsgrad zu bestimmen [Carlson et al., Biochem. J. 173, 723 (1988)]. Das dialysierte CTB wurde mit jeweils einem der Peptide in einem Verhältnis von 1:1,5 w/w 4 Stunden bei Raumtemperatur und anschließend über Nacht bei 4ºC gemischt. Jedes der drei einzelnen Peptid-CTB-Konjugate (die auch ungebundenes Peptid enthielten) wurden in gleichen Gewichtsmengen gepoolt und Aliquote wurden bis zur Verwendung bei -80ºC aufbewahrt. Freies Peptid wurde nicht von den Peptid-CTB-Konjugaten abgetrennt, sondern die gesamte Mischung, die das freie Peptid und das an CTB gebundene Peptid enthielt, wurde zur Immunisierung verwendet. Die Anzahl der durchschnittlich pro CTB-Monomer kovalent gebundenen Peptidmoleküle wurde auf Basis des A&sub3;&sub4;&sub3;-Werts der Mischung berechnet (Tabelle 1). Bei diesem Substitutionsgrad bleiben im Vergleich mit underivatisiertem CTB (Werte nicht gezeigt) nahezu 100% der CTB-Bindungskapazität für GM&sub1; erhalten, wie bestimmt in einem GM&sub1;-Bindungstest (25) [(Tsang et al. Meth Enz. 92, 391 (1983)]. Eine höhere Substitution von CTB mit SPDP führte zu einer deutlichen Abnahme der GM&sub1;-Bindungskapazität. Tabelle 1: Kovalente Bindung der Peptide an CTB Peptid Molverhältnis Peptid:CTB (a)
- (a) Das Molverhältnis von Peptid zu CTB in kovalent gebundener Form basiert auf der Freisetzung von Pyridin-2-thion, gemessen bei 343 nm.
- Zur Bestimmung, inwieweit die jeweils ausgewählten Peptide und ihre Konjugate eine Immunantwort in Säugern auslösen können, wurden Mäuse mit dem wie oben beschrieben hergestellten Impfstoff über einen Zeitraum von 6 Tagen dreimal intranasal (i.n.) immunisiert. Die Kontrollmäuse wurden nur mit CTB behandelt. Die Tiere wurden 3 Wochen in Ruhe gelassen und dann i.n. mit einer Einzeldosis Antigen einer "Boosterung" unterzogen. Jede Dosis enthielt 20 µg CTB mit oder ohne eine Gesamtmenge von 12 µg eines jeden Peptids. Die angegebene Peptidmenge stellt die Gesamtmenge an freiem und kovalent gebundenem Produkt dar. Der Impfstoff wurde durch eine Hamiltonspritze (Modell 750), die mit einem Mehrfachspender (P8600) und einer Nadel mit stumpfem Ende versehen war, in die Nasenöffnungen von unanästhesierten Mäusen geführt (10 µl pro Nasenloch) Die weiblichen, fremdgezüchteten Swiss CDI-Mäuse (Charles River) waren zu Beginn der Immunisierung 4 bis 5 Wochen alt.
- Die gleiche Zusammensetzung kann direkt in die Mundhöhle verabreicht werden.
- Zur Exposition der geimpften Mäuse wurden Typ 6-Streptokokken (Stamm S43/192 aus der Sammlung der Rockefeller University) verwendet. Der Stamm wurde auf Resistenz gegen 200 µg/ml Streptomycin selektioniert. Die Mausevirulenz von S43/192 wurde&sub1; wie von Phillips et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78, 4689-4693 (1981) beschrieben, durch mehrere intraperitoneale Passagen aufrecht erhalten. Aus einer Übernachtkultur wurde ein einmaliger Vorrat an Mikroorganismen hergestellt, 10-fach konzentriert, bei -80ºC eingefroren und für alle Expositionsexperimente verwendet. Die Stammkulturen wurden 1:500 verdünnt, über Nacht bei 37ºC in Todd- Hewitt-Medium angezogen und dann in frischem Wachstumsmedium 1:20 verdünnt. Sobald die Kulturen eine OD&sub6;&sub8;&sub0; von 0,5 (18 mm-Reagenzglas) erreicht hatten, wurden sie abzentrifugiert und in 1/6 des Volumens physiologischer Kochsalzlösung resuspendiert (ungefähr 2,5 x 108 koloniebildende Einheiten pro ml). Eine mit Peptid-CTB geimpfte Mäusegruppe wurde in vier getrennten Expositionen mit lebenden Streptokokken mit einer Kontrollgruppe (nur CTB) verglichen. In jedem Expositionsexperiment enthielten die mit den Peptiden immunisierte Gruppe und die Kontrollgruppe jeweils 12 bis 14 Mäuse. 10 Tage nach der "Boosterung" wurden den Mäusen 10 µl Streptokokkensuspension pro Nasenloch verabreicht. 24 Stunden nach der Exposition und in Abständen von 24 oder 48 Stunden danach wurden Rachenabstriche genommen (Calgiswab Type 4, Spectrum) und auf Blutagarplatten mit 200 µg/ml Streptomycin kultiviert. Die Kulturen wurden über Nacht bei 37ºC kultiviert und auf Anwesenheit β-hämolytischer Streptokokken ausgewertet.
- Die in Abständen von 24 oder 48 Stunden genommenen Rachenkulturen und die Kolonisierung der Streptokokken wurden ausgewertet. Die Ergebnisse der vier getrennten Expositionen sind in Tabelle 2 zusammengefaßt. Bei Tieren, die den Peptid-CTB-Impfstoff erhalten hatten, nahm die Häufigkeit von Pharynxinfektionen (plus Sterblichkeit) während der 10 Tage nach der Streptokokkenexposition ab. Die Unterschiede in der Kolonisierung zwischen den mit den Peptiden immunisierten Mäusen und der Kontrollgruppe waren für 5 von 6 Zeitpunkten, an denen Pharynxkulturen genommen wurden, signifi kant. Bei jeder Rachenkulturanalyse der vier getrennten Expositionsexperimente übertraf die Anzahl der positiven Rachenkulturen in der Kontrollgruppe die der mit Peptid-CTB immunisierten Gruppe außerdem in 96% der Fälle (23/24 Analysen). Tabelle 2 Schutzvermittelnde Immunität, induziert durch konservierte synthetische Peptide Positive Rachenkultur (plus Tote)/ Gesamtzahl der Abstriche (%) (a) Tag nach Exposition nur CTB Konserviertes Peptid-CTB P-Wert (b)
- (a) Die Tiere wurden mit Peptid-CTB-Konjugaten oder nur mit CTB immunisiert und in vier getrennten Experimenten gegen lebende Streptokokken exponiert. Mäuse, die im Verlauf des Experiments starben, wurden als positiv gewertet. Die Gesamtsterblichkeitsrate betrug 20% und war in den beiden Gruppen nicht signifikant unterschiedlich.
- (b) P-Werte kleiner als 0,05 (*) wurden als statistisch signifikant betrachtet (χ²-Analyse). NS: nicht signifikant.
- Die Mehrzahl der einzelnen Mäuse zeigte ein oder zwei Muster der Pharynxkolonisierung. 75% der Überlebenden, die nur CTB erhalten hatten, und 76% der mit Peptid-CTB immunisierten Mäuse blieben entweder bei jeder Rachenkultur vollständig streptokokkenfrei oder waren für nahezu alle Kulturen Träger von 25 oder mehr koloniebildenden Einheiten. Die restlichen Überlebenden hatten typischerweise nur zu ein oder zwei Zeitpunkten positive Rachenkulturen und 77% von diesen Kulturen zeigten weniger als 10 Kolonien. Die Methode zur Analyse von Pharynxinfektionen ist also sehr gut reproduzierbar und die meisten Tiere befanden sich als Streptokokkenträger entweder in einem stabilen Zustand oder waren organismenfrei. Es ist daher offensichtlich, daß die Polypeptide dieser Erfindung in der Lage sind, bei intranasaler Verabreichung einer wirksamen Dosis in Säugern eine gegen Streptokokkenkolonisierung schützende Antwort auszulösen. Die einzelnen Antigene können in ähnlicher Weise verwendet werden. Die tatsächliche Dosierung kann etwas variieren, liegt aber im allgemeinen in der gleichen Größenordnung wie bei ähnlichen Impfstoffen. Ähnliche Ergebnisse werden auch bei anderen Verabreichungsmethoden für den Impfstoff erreicht, z.B. bei oraler Verabreichung.
- Impfstoffe zum Schutz gegen Streptokokkeninfektionen wurden bereits früher vorgeschlagen. Diese Impfstoffe wurden aus Polypeptiden des hypervariablen Aminoendes des Moleküls hergestellt. Sie wurden insoweit mit Erfolg eingesetzt, als sie zu einer typspezifischen Immunität gegen homologe Serotypen führten. Ihre Wirkung wurde verbessert, indem man mehrere typspezifische Determinanten in einem multivalenten Impfstoff zusammengab. Wenn man die enorme Vielfalt von M-Serotypen berücksichtigt, ist diese Vorgehensweise jedoch nicht attraktiv.
- Der oben beschriebene Carrier ist CTB. Für den Fachmann ist jedoch offensichtlich, daß auch andere Carrier verwendet werden können. Diese umfassen beispielsweise die labile Toxin B-Untereinheit von E. coli oder die Pih von E. coli-Zellen, die als K99-Pili und 987P-Pili identifiziert und von Aizpurua und Russell-Jones in J. Exp. Med. 167, 440 (1988) beschrieben werden. Das Antigen muß nicht unbedingt an den Carrier gebunden sein. Die zwei können, im wesentlichen mit gleicher Wirkung, auch gleichzeitig verabreicht werden.
- Andere natürliche Carrier, die bei der Durchführung dieser Erfindung verwendet werden können, insbesondere bei der parenteralen Verabreichung, umfassen das Tetanus-Toxoid, das Hämocyanin der Schlüssellochschnecke (keyhole limpid), Rinderserumalbumin oder Ovalbumin. Auch die ebenfalls bekannten synthetischen Träger können eingesetzt werden.
- Die Impfstoffe dieser Erfindung können parenteral in einer Emulsion mit verschiedenen Adjuvantien verabreicht werden. Die Adjuvantien dienen als Hilfsstoffe, um mit kleineren Antigenmengen und weniger Dosen eine dauerhaftere und stärkere Immunität zu erreichen, als dies bei alleiniger Verabreichung des Immunogens der Fall wäre. Beispiele für Adjuvantien umfassen Freundsches Adjuvans (komplett oder inkomplett), Adjuvans 65 (enthaltend Erdnußöl, Mannidmonooleat und Aluminiummonostearat) und Mineralgele wie Aluminiumhydroxid, Aluminiumphosphat oder Alaun. Freundsches Adjuvans wird in Impfstofformulierungen für Menschen ebenso wie für Tiere, die später als Nahrungsmittel dienen sollen, nicht mehr verwendet, da es nichtmetabolisierbares Mineralöl enthält und ein potentielles Carcinogen ist; die Mineralgele finden jedoch in handelsüblichen Veterinärimpfstoffen weitverbreitete Anwendung.
Claims (10)
1. Polypeptid mit der Fähigkeit&sub1; in einem Säuger eine sIgA-
Antwort auszulösen, wenn es diesem Säuger verabreicht wird,
das die Aminosäuresequenz Ser-Lys-Gln-Asp-Ile-Gly-Ala-Leu-
Lys-Gln-Glu-Leu-Ala-Lys-Lys-Asp-Glu-Gly-Asn-Lys oder die
Aminosäuresequenz Ser-Lys-Gln-Asp-Ile-Gly-Ala-Leu-Lys-Gln-
Glu-Leu-Ala-Lys-Lys-Asp-Glu-Gly-Asn-Lys mit wenigstens einer
Aminosäuresubstitution, die die Konformation des Polypeptids
nicht verändert, umfaßt.
2. Polypeptid mit der Fähigkeit, in einem Säuger eine sIgA-
Antwort auszulösen, wenn es diesem Säuger verabreicht wird,
das die Aminosäuresequenz Leu-Asp-Ala-Ser-Arg-Glu-Ala-Lys-
Lys-Gln-Val-Glu-Lys-Asp-Leu-Ala-Asn-Leu-Thr-Ala-Glu-Leu oder
die Aminosäuresequenz Leu-Asp-Ala-Ser-Arg-Glu-Ala-Lys-Lys-
Gln-Val-Glu-Lys-Asp-Leu-Ala-Asn-Leu-Thr-Ala-Glu-Leu mit
wenigstens einer Aminosäuresubstitution, die die Konformation des
Polypeptids nicht verändert, umfaßt.
3. Polypeptid mit der Fähigkeit, in einem Säuger eine sIgA-
Antwort auszulösen, wenn es diesem Säuger verabreicht wird,
das die Aminosäuresequenz Glu-Lys-Gln-Ile-Ser-Asp-Ala-Ser-
Arg-Gln oder die Aminosäuresequenz Glu-Lys-Gln-Ile-Ser-Asp-
Ala-Ser-Arg-Gln mit wenigstens einer Aminosäuresubstitution,
die die Konformation des Polypeptids nicht verändert, umfaßt.
4. Antigenkonjugat mit der Fähigkeit, in einem Säuger eine sIgA-
Antwort auszulösen, wenn es diesem Säuger verabreicht wird,
das einen koppelbaren Carrier umfaßt, der kovalent an ein
Polypeptid nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3 gebunden
ist.
5. Antigenkonjugat nach Anspruch 4, worin der Carrier ein
natürlicher Proteincarrier ist.
6. Antigenkonjugat nach irgendeinem der Ansprüche 4 und 5, worin
der Carrier Choleratoxin B ist.
7. Verwendung eines Polypeptids nach irgendeinem der Ansprüche
1 bis 3 oder eines Antigenkonjugats nach irgendeinem der
Ansprüche 4 bis 6 zur Herstellung eines Arzneimittels zur
Bekämpfung von Streptokokkeninfektionen.
8. Verwendung nach Anspruch 71 worin das Arzneimittel zur
intranasalen Verabreichung ist.
9. Verwendung nach Anspruch 7, worin das Arzneimittel zur oralen
Verabreichung ist.
10. Impfstoff, der ein biologisch verträgliches Diluens und eine
sIgA-stimulierende Menge eines Polypeptids nach irgendeinem
der Ansprüche 1 bis 3 umfaßt.
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