DE68904203T4

DE68904203T4 - Cysteinderivate.

Info

Publication number: DE68904203T4
Application number: DE89300651T
Authority: DE
Inventors: Tadashi Iso; Yoichi Kawashima; Shiro Mita; Takakazu Kitasakurazuka Morita
Original assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1988-01-25
Filing date: 1989-01-24
Publication date: 1993-10-28
Anticipated expiration: 2009-01-25
Also published as: EP0326326B1; DE68904203D1; DE68904203T2; EP0326326A1; CA1336979C; DE326326T1; ATE84303T1; KR890011835A; ES2012958A6; CN1036201A

Description

Diese Erfindung betrifft Cysteinderivate mit pharmakologischer Wirksamkeit und ein Verfahren zur Herstellung derartiger Verbindungen.
Die GB-A-2096145 offenbart intra- oder intermolekulare Disulfide der Formel
wobei R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom, eine niedere Alkylgruppe, eine Aryl-, Aralkyl-, niedere Alkanoyl- oder eine Aroylgruppe, und A eine gerad- oder verzweigtkettige Alkylengruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen darstellt. Die Verwendung derartiger Verbindung zur Behandlung von Leberschäden, Katarakten und immunvermittelten Erkrankungen wird offenbart.
N,N-Bis [2-methyl-2-(methylthio)propanoyl]-L-cystin, N,N'-[2,2'-dithiobis(2-methylpropanoyl)] - bis(S-methyl-L-cystein), und (4R)-7,7-Dimethyl-6-oxo-3, 4, 6, 7 - tetrahydro-1,2,5-dithiazepin-4-carbonsäure sind speziell offenbart.
Die US-A-4255446 offenbart Verbindungen der Formel
worin R¹ und R² niedere Alkanoyl-, Benzoyl-, niedere Alkyl- oder durch Carboxygruppen substituierte niedere Alkylgruppen bedeuten; ferner ist die Verwendung dieser Verbindungen zur Unterdrückung von Lebererkrankungen offenbart.
Die US-A-4305958 und GB-A-1530071 offenbaren Verbindungen der Formel
worin Z aus den Gruppen CH&sub3;-CH< , (CH&sub3;)C< , (CH&sub2;)&sub2;< und CH&sub2;< ausgewählt sind, die als Mittel zur Speichelverflüssigung dienen.
Die US-A-4241086 offenbart die Verwendung von N-(2-Mercapto-2-methylpropanoyl)-L-cystein zur Behandlung von Rheumatismus und Arthritis.
Gemäß vorliegender Erfindung wird eine Verbindung der Formel (I)
zur Verfügung gestellt,
worin
R¹ und R² die gleichen niederen Alkylgruppen sind;
R³ und R&sup4;, die gleich oder verschieden sein können, aus Wasserstoff, niederen Alkyl-, niederen Alkanoyl-, gegebenenfalls substituierten Phenylniedrig alkyl- und gegebenenfalls substituierten Phenylcarbonylgruppen ausgewählt sind, wobei die Eventualsubstituenten niedere Alkyl-, niedere Alkoxylgruppen oder Halogen sind; und
R&sup5; eine Hydroxy-, niedere Alkoxy-, Amino- oder niedere Alkylaminogruppe ist;
oder ein pharmazeutisch brauchbares Salz derselben.
Die zuvor definierten Begriffe werden im folgenden genauer erklärt.
Unter dem Begriff "niedere Alkylgruppe" soll eine gerad- oder verzeigtkettige niedere Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen verstanden werden, wie z.B. eine Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl- oder Hexylgruppe.
Unter dem Begriff "niedere Alkanoyl-Gruppe" ist eine gerad- oder verzeigtkettige niedere Alkanoylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen zu verstehen, wie z.B. die Acetyl-, Propionyl-, Pivaloyl- oder Hexanoylgruppe.
Es gibt verschiedene Untersuchungen von Cysteinderivaten; über derartige Untersuchungen wird in der US-A-4305958, US-A-4241086 und US-A-4255446 usw. berichtet.
Bekannterweise weisen die Cysteinderivate viele Wirkungsarten auf, wie z.B. die Unterdrückung von Lebererkrankungen sowie eine antirheumatische Wirkung. Jedoch gibt es sehr wenige Untersuchungen, die über den Einfluß auf die pharmakologische Wirksamkeit berichten, wenn in die Seitenkette des Cysteinderivates eine Alkylengruppe einverleibt, die Länge der Alkylengruppe in der Seitenkette ausgedehnt, oder mit Resten substituiert wird. Infolgedessen wurden die Cysteinderivate im vorliegenden genauer untersucht.
Es wurden verschiedene neue Cysteinderivate synthetisiert und hinsichtlich ihrer pharmagologischen Wirkungen geprüft, insbesondere wurde die Wirkung der Einverleibung einer Alkylengruppe in die Seitenkette der Cysteinderivate und der Verlängerung der Alkylengruppe in der Seitenkette untersucht. Aufgrund der Ergebnisse der pharmakologischen Prüfung, die nachfolgend im pharmakologischen Test näher beschrieben sind, wurde gefunden, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen eine hervorragende Unterdrückungswirkung auf Lebererkrankungen und eine immunregulatorische Wirkung aufweisen.
Die Verbindungen der Formel [I] können nach Verfahren hergestellt werden, die den in der US-A-4305958 und US-A-4255446 oder in der japanischen Patentveröffentlichung 12119/1984 beschriebenen ähnlich sind.
Typische Verfahren werden nachfolgend gezeigt.
(A) Die Verbindungen der Formel [I] können hergestellt werden durch Umsetzung eines Aminosäurederivats der Formel [II] mit einem Carbonsäurederivat der Formel [III] oder einem aktiven Derivat desselben.
Das zuvor erwähnte aktive Derivat ist ein reaktionsfähiges Derivat der Carbonsäure, wie z.B. das Säurechlorid, - anhydrid oder die gemischten Säureanhydride. Das aktive Derivat der Verbindung der Formel [III] kann in die Verbindung der Formel [I] nach üblichen Verfahren, wie z.B. die Schotten-Baumann-Methode, übergeführt werden, welche allgemein zur Kondensation von Aminderivaten mit Carbonsäurederivaten angewandt wird.
Die Carbonsäure der Formel [III] kann direkt in die Verbindung der Formel [I] unter Verwendung eines Kondensationsmittels wie N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) übergeführt werden.
Es ist nicht erforderlich, eine Reaktionsbedingung, wie z.B. die Temperatur oder die Reaktionszeit, genauer anzugeben.
(B) Die Verbindung der Formel [I] kann durch Umsetzung des Aminosäurederivates der Formel [II] mit einem Polythioester der Formel (IV) hergestellt werden:
worin 1 einen Polymerisationsgrad mit einem mittleren Molekulargewicht von etwa 200 bis 1500 bedeutet. Kondensationsmittel
Die Verbindung der Formel [IV] kann aus dem entsprechendem Monomeren der Formel [V] unter Verwendung eines Kondensationsmittels, wie z.B. DCC in einem organischen Lösungsmittel hergestellt werden.
Es ist nicht erforderlich, die Bedingungen für die Kondensation der Verbindung der Formel [II] mit der Verbindung der Formel [IV] genau anzugeben; jedoch wird die Reaktion üblicherweise in Gegenwart einer Base, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, durchgeführt.
Hinsichtlich der zuvor genannten Verfahren (A) und (B) wird auf folgendes hingewiesen:
1) Wenn die Gruppe R³ und/oder R&sup4; ein Wasserstoffatom ist bzw. sind, können diese Gruppe(n) nötigenfalls in von Wasserstoff verschiedene andere Gruppen nach der zuvor genannten Umsetzung übergeführt werden. Die Überführung kann unter Anwendung eines bekannten Verfahrens durchgeführt werden, das zur Einführung einer Schutzgruppe usw. für eine Thiolgruppe benutzt wird.
2) Wenn R&sup5; eine Hydroxygruppe ist, kann diese erforderlichenfalls nach der zuvor genannten Umsetzung in einen Ester oder ein Amid übergeführt werden. Die Überführung kann unter Anwendung eines bekannten Verfahrens durchgeführt werden, das für die Umwandlung einer carboxylgruppe in einen Ester oder ein Amid benutzt wird.
3) Wenn die gemäß R³, R&sup4; oder R&sup5; definierte Gruppe als Schutzgruppe verwendet wird, kann eine derartige Gruppe nach der zuvor genannten Umsetzung entfernt werden. Die Entfernung kann nach einem herkömmlichen Verfahren durchgeführt werden.
Die Verbindung der Formel [I] kann unter Verwendung einer anorganischen oder einer organischen Base in pharmazeutisch brauchbare Salze übergeführt werden.
Beispiele für die Salze sind das Natrium-, Kalium-, Calzium-, Magnesium-, Ammonium-, Diethlamin- und das Triethanolaminsalz.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben Stereoisomere aufgrund der Anwesenheit von einem oder mehreren asymmetrischen Kohlenstoffatomen; diese Isomere sind von der Erfindung umfaßt. Zur Prüfung der Wirkung einer Verbindung auf Lebererkrankungen wird üblicherweise ein Lebererkrankungsmodell benutzt, das durch die Verabreichung von Tetrachlorkohlenstoff an eine Ratte hervorgerufen wird.
GOT- und GPT-Werte im Serum werden als Anzeige eines Lebererkrankungsgrades benutzt. Wenn der Wert, der durch eine Lebererkrankung erhöht ist, nach Verabreichung einer Verbindung fällt, wird die Verbindung als wirksam gegen die Lebererkrankung beurteilt.
Als Ergebnis der Untersuchung, deren genaue Daten im pharmakologischen Test gezeigt werden, unter Verwendung der Verbindungen dieser Erfindung, wurde gefunden, daß die Wirksamkeit der Serumtransaminase in der mit der erfindungsgemäßen Verbindung behandelten Gruppe im Vergleich zur unbehandelten Gruppe signifikant abfiel. Das Experiment belegt, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen eine unterdrückende Wirkung auf die Lebererkrankung haben.
Neuerdings wurde angenommen, daß die Immunität in enger Beziehung zum Mechanismus der Entwicklung und des chronischen Verlaufs einer Lebererkrankung steht. Zur Prüfung des Einflusses der erfindungsgemäßen Verbindung auf das Immunsystem wurde die Immunresponse gegenüber roten Blutzellen des Schafs bei Mäusen untersucht, was üblicherweise zur Prüfung einer immunregulatorischen Wirkung benutzt wird.
Diese experimelle Methode dient zur Prüfung der Wirksamkeit auf das Immunsystem gemäß eines Anstiegs oder Abfalls der Anzahl haemolytischer, plaque-bildender Zellen von Milzzellen der Maus. Wie in dem pharmakologischen Test dargelegt, zeigt die erfindungsgemäße Verbindung eine hervorragende immunsuppressive Wirkung.
Eine Verbindung, die eine den erfindungsgemäßen Verbindungen ähnliche chemische Struktur aufweist, ist in der zuvor genannten US-A-4305958 offenbart. Es ist allgemein anerkannt, daß eine sehr geringe Modifizierung der chemischen Struktur die Wirksamkeit einer Verbindung in starkem Maße beeinflußt. Infolgedessen prüften wir, wie die Modifizierung der chemischen Struktur die Wirksamkeit beeinflußt. Es wurde ein Vergleichsversuch zwischen der immunsuppressiven Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindung und einer bekannten, durch die Formel (VI) repräsentierten Verbindung durchgeführt.
Wie in dem pharmakologischen Test dargelegt, zeigt die erfindungsgemäße Verbindung eine stärkere Wirkung als die in der US-A-4305958 beschriebene Verbindung.
Als Ergebnis wurde gefunden, daß die erfindungsgemäße Verbindung ein neuer Typ eines Arzneimittels für Lebererkrankungen sein muß, weil die Verbindung den Wert von GOT und GPT im Serum senkte und die Immunität dämpfte.
Ferner kann die erfindungsgemäße Verbindung als Arzneimittel für Autoimmunkrankheiten, wie z.B. die rheumatoide Arthritis, verwendet werden.
Die Verbindung(en) gemäß der Erfindung kann bzw. können entweder oral oder parenteral verabreicht werden. Beispiele für Verabreichungsformen sind Tabletten, Kapseln, Pulver, Granalien, Suppositorien, die Injektion, Augentropfen und die perkutane Verabreichung.
Die Dosierung wird in Abhängigkeit des Symptoms, der Dosierungsform usw. eingestellt; jedoch beträgt die Tagesdosis üblicherweise 1 bis 5000 mg in einer oder in wenigen unterteilten Dosen.
Beispiele zur Herstellung der Verbindung und für Formulierungen werden nachfolgend gezeigt.

Beispiele:

Vergleichsbeispiel

N-(2-Mercapto-2-methylpropionyl)-DL-homocystein (Verbindung Nr. 1)

Eine gerührte Lösung von 40,4 g 2-Mercapto-2-methylpropionsäure in 200 ml Ethylacetat wurde unter Kühlen mit Eis tropfenweise mit 69,3 g N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, gelöst in 200 ml Ethylacetat, versetzt. Nach Zugabe wurde das Reaktionsgemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt und sodann filtriert. Das Filtrat wurde im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde mit 400 ml N,N-Dimethylformamid (DMF) versetzt, um die Lösung des Polythioesters in DMF zu erhalten.
Ein Gemisch von 37,9 g DL-Homocystein, 77,4 g Kaliumcarbonat, 400 ml Wasser und 100 ml DMF wurde mit der Lösung des Polythioesters versetzt, und das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 2 l Wasser versetzt und mit Ethylacetat gewaschen. Die wässrige Schicht wurde mit 6 N Salzsäure versetzt und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit einer gesättigten Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der ölige Rückstand wurde durch Säulenchromotographie an Silicagel gereinigt und mit Isopropylether umkristallisiert, wobei 39,8 g (59,9 %) der Verbindung Nr. 1 erhalten wurden.
Fp. 102 bis 104ºC (Isopropylether)
IR(KBr, cm&supmin;¹) 3405, 3335, 2536, 1714, 1599, 1524, 1412, 1296, 1270, 1254, 1213, 1186, 658

Beispiel 1

N-(2,2-Dimethyl-3-mercaptopropionyl)-L-Cystein (Verbindung Nr. 2)

Nach einem Verfahren, das dem im Vergleichsbeispiel beschriebenen ähnlich war, wurde unter Verwendung von 40,3 g 3-Mercaptopivalinsäure und 61,9 g N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid eine Lösung des Polythioesters in DMF hergestellt.
Die Polythioester-Lösung wurde zu einem Gemisch von 52,7 g L-Cysteinhydrochlorid-monohydrat, 124 g Kaliumcarbonat, 400 ml Wasser und 100 ml DMF zugegeben. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt und sodann nach einem Verfahren, das dem in dem Vergleichsbeispiel genannten ähnlich war, behandelt, wobei 47,2 g (66,3 %) der Verbindung Nr. 2 erhalten wurden.
Fp. 83,5 bis 85,5ºC (Isopropylether)
IR (KBr, cm&supmin;¹) 3352, 2596, 1728, 1630, 1528, 1424,
1403, 1296, 1204, 870, 593;
Optische Drehung
[α]25D -3,3º (c=1,0, Methanol) und
[α]25D +57,8º (c=1,0, Chloroform).
Die nachfolgende Verbindung wurde nach einem Verfahren hergestellt, welches demjenigen des Beispiels 1 ähnlich war:

N-[(2-Ethyl-2-mercaptomethyl)-butyryl]-L-cystein (Verbindung Nr. 3)

IR (KBr, cm&supmin;¹) 3350, 1726, 1628, 1526;

Beispiel 2

S-Benzyl-N-(3-benzylthio-2,2-dimethylpropionyl)-L- cystein

(Verbindung Nr. 4)

Eine gerührte Lösung von 11,5 g S-Benzyl-L-cystein in 68 ml einer 2 N Natriumhydroxidlösung wurde mit 14,6 g 3-Benzylthio-2,2-dimethyl-propionylchlorid, gelöst in 10 ml Ether, unter Kühlung mit Eis tropfenweise versetzt. Nach Zugabe wurde das Reaktionsgemisch unter Eiskühlung 20 Minuten und sodann 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Raktionsgemisch wurde mit 6 N Chlorwasserstoffsäure angesäuert und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der ölige Rückstand wurde durch Säulenchromatrographie an Silicagel gereinigt, wobei 19,4 g (85,1%) der Verbindung Nr. 4 erhalten wurden.
IR(Film, cm&supmin;¹) 3344, 1731,1620,1514,1495,1236, 1199, 700
Optische Drehung [α]25D -31,5º(c=1,1, Methanol)
Die nachfolgende Verbindung wurde auf ähnliche Weise wie in Beispiel 2 hergestellt:

S-Benzyl-N-(3-benzylthio-2,2-dimethylpropionyl)-D- cystein

(Verbindung Nr. 5)

IR(Film, cm&supmin;¹) 3344, 1729, 1620, 1513, 1495, 1236, 1200, 699
Optische Drehung [α]25D +33,0º (c=1,0, Methanol).

Beispiel 3

N-(2,2-Dimethyl-3-mercaptopropionyl)-L-cytein

(Verbindung Nr. 2)

Eine Lösung von 18,0g S-Benzyl-N-(3-benzylthio-2,2-dimethylpropionyl)-L- cystein in 250 ml flüssigem Amoniak wurde mit 5,0g in kleine Stücke geschnittenem metallischem Natrium versetzt. Zu dieser Lösung wurde Ammoniumchlorid zugegeben, wonach der flüssige Amoniak abgedampft wurde. Der Rückstand wurde mit Wasser versetzt, und die Lösung wurde mit Ethylacetat gewaschen. Die wässrige Schicht wurde mit 6 N Chlorwasserstoffsäure angesäuert und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der ölige Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silicagel gereinigt und mit einem Gemisch von Ethylacetat und Cyclohexan umkristallisiert, wobei 7,1g (69,6%) der Verbindung Nr. 2 erhalten wurden. Die physikalischen Daten waren mit denjenigen der in Beispiel 1 erhaltenen Verbindung identisch.
Nachfolgende Verbindung wurde nach einem, dem Beispiel 3 ähnlichen Verfahren erhalten:

N-(2,2-Dimethyl-3-mercaptopropionyl)-D-cystein

(Verbindung Nr. 6)

Fp. 83,5 bis 85,0ºC (Ethylacetat-Cyclohexan)
IR(KBr, cm&supmin;¹) 3352, 2595, 1725, 1624, 1522, 1421, 1401, 1295, 1201, 867, 590
Optische Drehung [α]25D -57,1º (c=1,0, Chloroform).

Beispiel 4

N-[2,2-Dimethyl-3-< methylthio)propionyl)-S-methyl- L-cystein, Dicyclohexylaminsalz

(Verbindung Nr. 7)

N-(2,2-Dimethyl-3-mercaptopropionyl)-L-cystein (23,7g) wurde in einer Lösung von 41,5g Kaliumcarbonat in 150 ml Wasser unter Kühlen mit Eis aufgelöst. Diese Lösung wurde mit 36,9g Methyliodid versetzt. Nach Zugabe wurde das Reaktionsgemisch unter Kühlen mit Eis 30 Minuten und 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 15 ml einer 1 N Jodlösung versetzt, und die Lösung wurde mit Ethylacetat gewaschen. Die wässrige Schicht wurde mit 6-N Chlorwasserstoffsäure angesäuert und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit einer Lösung von Natriumhydrogensulfid und einer gesättigten Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der ölige Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silicagel gereinigt. Zum öligen Produkt wurde Dicyclohexylamin zugegeben, wobei sich Kristalle bildeten. Die Kristalle wurden aus einem Gemisch von Ethylacetat und Hexan unkristallisiert, wobei 29,0g (65,0%) der Verbindung Nr. 7 erhalten wurden.
Fp. 98 bis 99,00 (Ethylacetat-Hexan)
IR(KBr, cm&supmin;¹) 3380, 2912, 2848, 1635, 1561, 1498, 1409, 1392, 587
Optische Drehung [α]25D +18,6º (c=1,0, Methanol).

Beispiel 5

N-[2,2-Dimethyl-3-(methylthio)propionyl]-L-cystein, Dicyclohexylaminsalz (Verbindung Nr. 8).

15,6g L-Cysteinhydrochlorid-monohydrat wurden in einer Lösung von 46,8g Kaliumcarbonat in 150 ml Wasser gelöst. Diese Lösung wurde mit 15,6g 2,2-Dimethyl-3-(methylthio)propionylchlorid tropfenweise versetzt. Nach Zugabe wurde das Reaktionsgemisch 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt und mit Ethylacetat gewaschen. Die wässrige Schicht wurde mit 6 N Chlorwasserstoffsäure angesäuert und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der ölige Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silicagel gereinigt. Das ölige Produkt wurde mit Dicyclohexylamin versetzt, wobei Kristalle erhalten wurden. Diese wurden mit einem Gemisch von Ethylacetat und Hexan umkristallisiert, wobei 28,5g (70,1%) der Verbindung Nr. 8 erhalten wurden.
Fp. 122,0 bis 123,5º (Ethylacetat-Hexan)
IR(KBr, cm&supmin;¹) 3404, 2920, 2852, 1629, 1560, 1483, 1412, 1383
Optische Drehung [α]25D +35,0º (c=1,1, Methanol)

Beispiel 6

N-[2,2-Dimethyl-3-(benzoylthio)propionyl]-S-methyl-L- cystein

(Verbindung Nr. 9)

12,3g 2,2-Dimethyl-3-(benzoylthio)propionylchlorid (Kp. 138 bis 145º/1,0 mmHg) wurden unter Kühlung mit Eis tropfenweise einem gerührten Gemisch von 6,5 g S-Methyl-L-cystein, gelöst in 50 ml einer 1,6M wässrigen Kaliumcarbonatlösung, und 50 ml Azeton zugegeben. Nach 10 Minuten wurde das Reaktionsgemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 2N Chlorwasserstoffsäure angesäuert und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der ölige Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silicagel gereinigt, wobei 12,4g (72%) der Verbindung Nr. 9 erhalten wurden.
Als Dicyclohexylaminsalz:
Fp. 101 bis 102ºC (Ethylacetat - Hexan)
IR(KBr, cm&supmin;¹) 3372, 2912, 2852, 1632
Optische Drehung [α]25D +11,8º (c=1,0, Methanol).

Beispiel 7

N-(2,2-Dimethyl-3-mercaptopropionyl)-S-methyl-L- cystein

(Verbindung Nr. 10)

Eine gerührte Lösung von 10,0g N-[2,2-Dimethyl-3- (benzoylthio)-propionyl)-S-methyl-L-cystein in 20 ml Methanol wurde mit 40 ml 28%igem Amoniakwasser versetzt, und das Gemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ethylacetat gewaschen, mit 6 N Chlorwasserstoffsäure angesäuert und mit Ethylacetat extrahiert.
Die organische Schicht wurde mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der ölige Rückstand wurde durch Säulenchromatographie an Silicagel gereinigt, wobei 5,8g (82%) der Verbindung Nr. 10 erhalten wurden.
Als Dicyclohexylaminsalz:
Fp. 97 bis 99ºC (Ethylacetat - Hexan)
IR(KBr, cm&supmin;¹) 3364, 2916, 2852, 1635, 1559
Optische Drehung [α]25D+9,50 (c=1,05, Methanol). Formulierungsbeispiel 1) Tablette Verbindung Nr. Kristalline Cellulose Lactose L-Hydroxypropylcellulose Magnesiumstearat 2) Kapsel Verbindung Nr. Magnesiumstearat Lactose
Durch Veränderung des Verhältnisses der Verbindung Nr. 2 und Lactose wurden Kapseln mit einem Gehalt an 10 mg, 30 mg, 50 mg und 100 mg der Verbindung Nr. 2 hergestellt. 3) Granalien Verbindung Nr. Lactose Kristalline Cellulose Polyvinylpyrrolidon Magnesiumstearat

Pharmakologischer Test

Zur Prüfung der Wirksamkeit eines Arzneimittels für Lebererkrankungen wird das durch CCl&sub4; hervorgerufene Lebererkrankungsmodell der Ratte allgemein benutzt.
Es wurde die Wirksamkeit der Verbindung(en) gemäß der Erfindung auf eine Lebererkrankung unter Verwendung des Rattenmodells geprüft. Ferner wurde die immunregulatorische Wirkung der Verbindung(en) gemäß der Erfindung unter Benutzung der Immunresponse der Maus gegenüber roten Blutzellen des Schafes geprüft, was allgemein zur Prüfung der Wirksamkeit auf das Immunsystem angewandt wird.
1) Die Wirkung auf die durch CCl&sub4; verursachte Lebererkrankung.
Die Testverbindung wurde in Tragacanthgummilösung suspendiert und oral männlichen Wistarratten (5 Ratten pro Gruppe) in einer Dosis von 300 ml/kg verabreicht.
30 Minuten später wurde CCl&sub4; als eine Lebererkrankung hervorrufendes Mittel intraperitoneal in einer Dosis von 0,25 ml/kg verabreicht.
24 Stunden nach Verabreichung von CCl&sub4; wurden die GOT- und GPT-Spiegel des Serums gemessen. Einer Kontrollgruppe wurde eine 0,5%ige Tragacantgummilösung gegeben. Die Ergebnisse des Versuchs mit der Verbindung Nr. 2, einer typischen erfindungsgemäßen Verbindung, sind in nachfolgender Tabelle 1 enthalten. Tabelle 1 Testverbindung Kontrolle Verbindung Nr.
Aus Tabelle 1 ergibt sich, daß die Aktivität der Serumtransaminase der Gruppe, welcher die erfindungsgemäße Verbindung verabreicht wurde, signifikant geringer war als diejenige der Kontrolle. Das Ergebnis belegt, daß die Verbindung gemäß der Erfindung eine hervorragende Wirkung auf bererkrankungen hat.
2) Die Wirkung auf die Immunresponse der Maus gegenüber roten Blutzellen von Schafen.
Gemäß der Methode von Iso (Int. J. Immunotherapie, 1, 93 (1985)), wurden weiblichen BALB/c-Mäusen (3 bis 5 Mäuse pro Gruppe) 5 x 10&sup8; rote Blutzellen von Schafen intraperitoneal verabreicht und diese immunisiert.
Nach Immunisierung wurde die in 1%iger Methylcelluloselösung suspendierte Testverbindung kontinuierlich 4 Tage verabreicht.
Die Mäuse wurden getötet, und die Anzahl haemolytischer, plaque-bildender Milzzellen wurde ermittelt. Aufgrund der Zellenauszählung wurde die 50%ige unterdrückende Dosis berechnet. Zum Vergleich wurde ein gleicher Test mit der bekannten Verbindung der Formel [VI) durchgeführt, die in der US-PS-4305958 beschrieben ist.
Die Ergebnisse sind in nachfolgender Tabelle 2 enthalten: Tabelle 2 Testverbindung 50%ige unterdrückende Dosis Verbindung Nr. 2 bekannte Verbindung
Aus Tabelle 2 ergibt sich, daß die Verbindung gemäß der Erfindung eine hervorragende immunsuppressive Wirkung zeigt, wobei diese Wirkung ausgeprägter ist als bei der bekannten Verbindung.

Toxizitätstest

Akute Toxizität

Die Verbindung Nr. 2 wurde in einer Konzentration von 20% in 0,5%iger Methylcelluloselösung suspendiert. Die Lösung wurde oral ddY-Mäusen (männlich, 5 Wochen alt, 6 Mäuse pro Gruppe) in einer Dosis von 2000 mg/kg verabreicht.

Ergebnis:

Die Toxizität der Verbindung Nr. 2 war schwach, mit einem einzigen Todesfall.
LD&sub5;&sub0; betrug über 2000 mg/kg.

Claims

1. Eine Verbindung der Formel [I]

worin

R¹ und R² die gleichen gerad- oder verzweigtkettigen Alkylgruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen;

R³ und R&sup4; gleich oder verschieden und ausgewählt sind aus Wasserstoff, gerad- oder verzweigtkettigen Alkylgruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, gerad- oder verzweigtkettigen Alkanoylgruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, gegebenenfalls substituierten Phenyl - geradoder verzweigtkettig C&sub1;-bis C&sub6;-alkylgruppen und einer gegebenenfalls substituierten Phenylcarbonylgruppe, wobei die gegebenenfalls vorhandenen Substituenten gerad- oder verzweigtkettige Alkyl-, gerad- oder verzweigtkettige Alkoxygruppen mit jeweils 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder Halogen sind; und R&sup5; eine Hydroxy-, gerad- oder verzweigtkettige Alkoxygruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, eine Amino- oder gerad- oder verzeigtkettige C&sub1;-bis C&sub6;-Alkylaminogruppe ist; oder ein pharmazeutisch brauchbares Salz derselben.

2. N-(2,2-Dimethyl-3-mercaptopropionyl)-L-cystein.

3. Für die Behandlung von Lebererkrankungen brauchbare pharmazeutische Zusammensetzung mit einem Gehalt an (i) einem pharmazeutischen Träger und (ii) einer Verbindung der Formel [I], wie in Anspruch 1 definiert, oder einem pharmazeutisch brauchbarem Salz derselben in einer zur Behandlung der Lebererkrankung ausreichenden Menge.

4. Zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten brauchbare pharmazeutische Zusammensetzung mit einem Gehalt an (i) einem pharmazeutischen Träger und (ii) einer Verbindung der Formel [I], wie in Anspruch 1 definiert, oder einem pharmazeutisch brauchbaren Salz derselben in einer zur Behandlung der Autoimmunkrankheiten ausreichenden Menge.

5. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel [I], wie in Anspruch 1 definiert, oder eines pharmazeutisch brauchbaren Salzes derselben, welches die Umsetzung einer Verbindung der Formel [II] mit einer Verbindung der Formel [III] oder einem aktiven Derivat derselben, oder die Umsetzung einer Verbindung der Formel [II] mit einem Polythioester der Formel [IV] umfaßt,

worin

R¹, R², R³, R&sup4; und R&sup5; die in Anspruch 1 definierten Bedeutungen besitzen, und 1 einen Polymerisationsgrad mit einem mittleren Molekulargewicht von 200 bis 1500 bedeutet;

wobei, wenn R³ und/oder R&sup4; der Verbindung der Formel [I] Wasserstoff ist bzw. sind, die Gruppe(n) erforderlichenfalls in andere Gruppen als Wasserstoff nach der zuvor genannten Umsetzung überführt werden kann bzw. können; wenn R&sup5; der Verbindung der Formel [I] eine Hydroxygruppe ist, diese erforderlichenfalls in andere Gruppen als die Hydroxygruppe nach der zuvor genannten Umsetzung überführt werden kann; und, wenn R³, R&sup4; und/oder R&sup5; als Schutzgruppe benutzt werden, die Schutzgruppe erforderlichenfalls entfernt werden kann.

6. Verfahren gemäß Anspruch 5, wobei die Verbindung der Formel [I]

N-(2,2-Dimethyl-3-mercaptopropionyl)-L-cystein ist.