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Verfahren zur Darstellung gereinigter Keirndrüsenhornipnpräparate
In der Patentschrift 584 211 ist ein Verfahren zur Anreicherung und Reindarstellung
von Keimdrüsenhormonen beschrieben, das dadurch gekennzeichnet 'ist, daß man die
rohen Hormonpräparate mit solchen Verbindungen kondensiert ' die neben der
zur Kondensation. dienenden Gruppe noch eine zur Salzbildung befähigte Gruppe oder
eine darin überführbare Gruppe enthalten, darauf die salzbildenden von den nichtsalzbildenden
Anteilen trennt und aus dem hormonhaltigen Anteil nach erfolgter Verseifung das
Hormon isoliert.
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So läßt sich z. B. durch Verschmelzen eines Hormonrohextraktes mitPhtlialsäureanhydrid
das Follikelhormon in bequemer Weise von seinen Begleitstoffen trennen.
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Es wurde nun gefunden, daß sich zu dieser Kondensation besonders Sulfocarbonsäuren
der allgemeinen Formel
eignen, wobei R irgendeinen substituierten oder nicht substituierten, aliphatischen,
alicyclischen, aromatischen oder auch heteroeyclischen Rest darstellt. Zu diesem
Zweck läßt man vorteilhaft die Sulfocarbonsäure in Form ihres Chlorides in Anwesenheit
eines tertiären Amins (Pyridin, Chinolin, Dimethylanilin u. dgl.) auf das zu reinigende
Hormonrohpräparat einwirken und fällt den gebildeten Sulfocarbonsäureester der allgemeinen
Formel
als Salz des tertiären Amins durch Zusatz eines mit Wasser nicht mischbaren organischen
Lösungsmittels (wie Benzol, Benzin, Äther u. dgl.) aus. Dabei bleiben die nicht
veresterten Bestandteile in dem Lösungsmittel gelöst und können aus ihm gewonnen
werden.
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Das beschriebene Verfahren besitzt gegenüber den bekannten Verfahren
eine Reihe von
'Vorteileii. So weist es die. bek"anilten"V7orzüge
der Veresfierung mit Säurechloriden in Anwesenheit eines tertiären Amins auf, die
in der schnellem,- -praktisch quantitativen Umsetzung ohne Gefahr der Wasserabspaltung
bestehen. Ein weiterer wesentlicher Vorteil ist die Bildung leicht verseifbarer
Carbonsäureester. Andererseits bedingt die. -Anwesenheit der Sulfogruppe die Bildung
von in organischen Flüssigkeiten unlöslichen Salzen der angewandten Amine. Die Vermeidung
wäßriger Lösungen bei der Trehnung verhindert weiterhin die Bildung von Seifenemulsionen
und die gegense « itige Löslichkeitsbeeinflussung von Seife und peutralen
Bestandteilen. B e i s p1e 11 io g eines durch Extraktion von Männerharn
erhaltenen Rohöles,. von denen etwa 5 mg einer Kapauneneinheit
- entsprechen, werden durch Erhitgen auf dem Wasserbade in i5o ccm Pytidin-
- -gelöst - -und -mit io g
m-Benzoesäuresulfochlorid unter -kräftigem
Rühren versetzt. Nach io Minuten wird die erhaltene Lösung abgekühlt und irf Äther
gegossen. Der Niederschlag, der, aus Pyridinchlorhydrat und den. Pyridoniumsalzen
der veresterten und der: Überschüssig en -Sulföcarbonsäur-- 'besteht, wird abzeAtrifugiert
mehrmals auf der Zentrifuge mit Äther gewaschen, vom Äther befreit und. in Wasser
-,Nia#h.Zpgab6--idn'-iop-ccm' konzentrierter#Karilhüge, wirc#-äü,i- de -in- Wass-erb.ade
e#tWäiräti 'bfs> di(2#.-Vezs8if-unz vollkommen ist. Die srösung- -- W ird- hierauf
- mit Äther eie-trahiert die-'- Ätherlösun# ' durch niehtfaches- Ausschüttelh#-
lüit-, köhzentrierter Näü6iifa-uge--- von- den -phenbli-scheiii Bestandti#il#ii
'bef-X'eit -und die -verbleibende Ätherlöstpig -Waschen mit Wasser konzentriert.
D&-- ve#bleibehde -Rücketand ist ein bräunlich gefärbtes, dickflüssiges
Öl mit einem physiologfgdh#en Wirkungswert von etwa --, mg_ pro Kapauneneinheit.
Es gelingt so, Kohlenwasserstoffe und -andere Stoffe, die nicht fähig sind, Ester;-zu
bilden, wie Ketone u. a., von,-den alkoholischen oder phenolischen Hotmorien- -zu
frei-inen., -Die Aufärbeiiun'g der ei-häIt6n6ii-SÜ-1foe'a,rbo-n:-säufeegter
und. Trennung- - in # ihre einzelnen Koinponeten kähn aü#-h-'auf andeie Weise--
erfolgen. -- Man -kann die---E.sier Üäch ihret--Verstifung. -auch -dem-Plithälääür#,a#hydridsc-hm'e-lz'#,erfa'hren
-na . cli Patent 584 ?- i i unterwerfen.
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- Dieb Vers-eifunk #lef-#Ester kann auch mitfels #Natriumalkoholat-
oder anderer. älkalischer Agenzien erfolgen.
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Als Ausgangsmaterial lass.en sich -auch andere Hormonextrakte oder
-Präparate verwenden, wie z.B. solche aus Stutenharn, Schwangerenharn, Plazenta
und anderen Organen, aus pflanzlichen hormonhaltigen Stoffen ti. dgl.
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Beispie12 15 g eines durch Extraktion von Männerharn erhaltenen
Rohöles, von denen etwa 5 mg einer Kapatineneinheit entsprechen, werden durch
Erhitzen. auf dem Wasserbad in 2oo ccm Pyridin gelöst und mit 15 9
p-Chlorbenzoesäure-m-stilfochloridunterkräftigein
Rühren versetzt. Nach 15 Minuten wird die erhaltene Lösung nach Abkühlen in Äther
gegossen. Der Niederschlag, der aus Pyridinchlorllydrat und den Pyridoniunisalzen
der -veresterten' und der übers-chüssigen Sulfocarbonsäure besteht, wird abzentrifugiert,
mehrmals auf der Zentrifuge mit Äther gewaschen, vom Äther befreit und in Wasser
gelöst. - -Nach Zugabe von 2oo ccrn konzentrierter Kalilauge wird auf dem
Wasserbade erwärm'-ti bis- die- Verseifung vollkommen ist. Die Verseifungslösung
wird hierauf mit Äther extrahiert, die Ätherlö5ung durch mehrfaches Ausschütteln
mit konzentrierter Natronlauge von den phenolischen Bestandteilen befreit und die
verbleibende Ätherlösung nach dern Waschen mit Wasser konzentriert. Der verbleibende
Rückstand ist ein bräunlich gefärbtes, dickflüssiges Öl mit einem physiologischen
, Wirkungswert von etwa; :2 mg pro Kapatineneinheit.
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In gleicher 'Weise kann man auch durch Umsetzung- mit Phenv.lZ#ssigsäure-m.-sulfo.2.
chlorid bzw. Essigsäuresulfochlorid eine Trennung der verschiedenen Hörmonbestandteile
durchführen. Als besonders.geeignet für das voiliegende - Verfahren haben
-sich die aromatischen m-Cärbonsäure-stilfochloride erwiesen, bei denen die-
leicht verseifbaren Carbonsäureester mit freier Sulfogruppe entstehen.-