DE60124912T2 - Multimerische, einzelkettige, Tandem-Fv-Antikörper - Google Patents
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- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
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Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft multimere Fv-Antikörperkonstrukte, Expressionsvektoren, die die Fv-Antikörperkonstrukte kodieren, und die diagnostische sowie therapeutische Verwendungen der multimeren Fv-Antikörperkonstrukte.
- Natürliche Antikörper sind selbst Dimere und daher bivalent. Wenn zwei Hybridomzellen, die unterschiedliche Antikörper erzeugen, künstlich fusioniert werden, werden einige der Antikörper, die durch das Hybridhybridom erzeugt werden, aus zwei Monomeren mit unterschiedlichen Spezifitäten gebildet. Solche bispezifischen Antikörper können auch durch chemische Konjugation von zwei Antikörpern erzeugt werden. Natürliche Antikörper und ihre bispezifischen Derivate sind relativ groß und teuer in der Herstellung. Die konstanten Domänen von Maus Antikörpern sind auch eine Hauptursache für die humane anti-Maus (HAMA) Reaktion, die ihre ausgedehnte Verwendung als therapeutische Mittel verhindert. Sie können aufgrund ihrer Bindung von Fc-Rezeptoren auch unerwünschte Wirkungen hervorrufen. Aus diesen Gründen konzentrieren sich Molekularimmunologen auf die Herstellung der viel kleineren Fab- und Fv-Fragmente in Mikroorganismen. Diese kleineren Fragmente sind nicht nur viel leichter herzustellen, sie sind auch weniger immunogen, besitzen keine Effektorfunktionen und wegen ihrer relativ kleinen Größe können sie besser in Gewebe und Tumoren eindringen. Im Fall der Fab-Fragmente spielen die konstanten Domänen benachbart den variablen Domänen eine Hauptrolle bei der Stabilisierung des Dimers der schweren Kette und der leichten Kette.
- Das Fv-Fragment ist viel weniger stabil und daher wurde ein Peptid-Linker zwischen die variablen Domänen der schweren Kette und leichten Kette eingefügt, um die Stabilität zu erhöhen. Dieses Konstrukt ist als einzelkettiges Fv(scFv)-Fragment bekannt. Eine Disulfidbindung wird manchmal zwecks zusätzlicher Stabilität zwischen die beiden Domänen eingesetzt. Bisher wurden tetravalente scFv-bezogene Antikörper durch Fusion mit zusätzlichen polymerisierenden Domänen, wie beispielsweise das Streptavidinmonomer, das Tetramere bildet, und mit amphipathischen alpha-Helices erzeugt. Allerdings können diese zusätzlichen Domänen die Immunogenität des tetravalenten Moleküls erhöhen.
- Bivalente und bispezifische Antikörper lassen sich konstruieren, indem nur variable Antikörper-Domänen verwendet werden. Ein ziemlich wirksames und relativ einfaches Verfahren ist es, die Linker-Sequenz zwischen den VH- und VL-Domänen so zu verkürzen, dass sie sich nicht falten und aneinander binden können. Die Verringerung der Linkerlänge auf 3–12 Reste verhindert die monomere Konfiguration des scFv-Moleküls und begünstigt die intermolekularen VH-VL-Paarungen unter Bildung eines 60 kDa nicht kovalenten scFv-Dimer-„Diabody" (Holliger u.a., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 6444–6448). Das Diabody-Format kann auch zur Erzeugung von rekombinanten bispezifischen Antikörpern verwendet werden, die durch die nicht kovalente Verbindung von zwei einzelkettigen Fusionsprodukten, bestehend aus der VH-Domäne von einem Antikörper, der durch einen kurzen Linker mit der VL-Domäne eines anderen Antikörpers verbunden ist, erhalten werden. Die Reduzierung der Linkerlängen noch weiter unter drei Reste kann zur Bildung von Trimeren („Triabody", –90 kDa) oder Tetrameren („Tetrabody", –120 kDa) führen (Le Gall u.a., 1999, FEBS Letters 453, 164–168). Allerdings führt die geringe Größe von bispezifischen Diabodies (50–60 kDa) dazu, dass sie schnell über die Nieren aus dem Blut strom beseitigt werden, was für die Therapie die Anwendung von relativ hohen Dosen erfordert. Darüber hinaus haben bispezifische Diabodies nur eine Bindungsdomäne für jede Spezifität. Allerdings ist eine bivalente Bindung ein wichtiges Mittel zum Erhöhen der funktionellen Affinität und möglicherweise der Selektivität für besondere Zelltypen, die dicht angehäufte Antigene tragen.
- Kipriyanov u.a. (J. Mol. Biol., Bd. 293, Seite 41–56) beschreibt einen multimeren Fv-Antikörper, der aus vier variablen Domänen besteht. Die vier Domänen sind durch drei Linker gebunden. Die Linker sind entweder kurz (12 Aminosäurereste), das zu einer Tandem-Diabody-Bildung führt (alle Antigenbindungsstellen werden durch die jeweiligen VL- oder VH-Domänen von zwei unterschiedlichen Ketten mit jeweils vier Domänen gebildet), oder der zentrale Linker ist „lang" (27 Aminosäurereste) und die anderen beiden Linker sind „kurz" (12 Aminosäurereste) – was zur Bildung eines einzelkettigen Diabody (alle Antigene werden durch die jeweiligen VL und VH-Domänen derselben Kette gebildet) führt. Dasselbe wird auch in der WO 99/57510 offenbart. Ein ähnliches Konstrukt mit einem zentralen „langen" Linker und 2 „kurzen" äußeren Linkern ist in der
DE 198 16 141 offenbart. Ein einzelkettiges Tandem-Konstrukt, das aus vier variablen Domänen besteht, die alle durch eine einzelne Aminosäure verbunden sind, ist in derDE 199 30 433 beschrieben. Demgegenüber beschreibt dieUS 6 025 165 einen einzelkettigen Antikörper, der aus vier variablen Domänen besteht, die durch einen zentralen Linker mit einer Aminosäure und zwei externen Linkern mit 14 Aminosäuren verbunden sind, während zwei Antigen-Bindungsstellen in derselben Kette gebildet werden. - Daher ist es das der vorliegenden Erfindung zugrunde liegende technische Problem, neue multimere Antikörper zur Verfügung zu stellen, die die Nachteile der Fv-Antikörper des Standes der Technik überwinden, und einen allgemeinen Weg vorzusehen, um ein multimeres Fv-Molekül mit mindestens vier Bindungsdomänen zu bilden, das monospezifisch oder multispezifisch ist.
- Die Lösung dieses technischen Problems wird durch Vorsehen der in den Ansprüchen gekennzeichneten Ausführungsformen erreicht.
- Die vorliegende Erfindung beruht auf der Beobachtung, dass scFv-Dimere, -Trimere, und -Tetramere als Multimerisierungsmotive zur Konstruktion von multimeren Fv-Molekülen verwendet werden können und dass zur Herstellung der multimeren Fv-Moleküle der zwischen der ersten und zweiten variablen Domäne eines Monomers und der zweiten und dritten Domäne eines Monomers eingeführte Peptid-Linker lang genug sein muss, damit sich das Molekül über selbst falten kann, d.h. der Peptid-Linker sollte eine Länge von mindestens 12 Aminosäuren, vorzugsweise von mindestens 15 Aminosäuren, haben. Daher stellt die vorliegende Erfindung einen allgemeinen Weg zur Bildung eines multimeren Fv-Moleküls mit mindestens vier Bindungsdomänen zur Verfügung, das monospezifisch oder multispezifisch ist. Jedes Monomer des Fv-Moleküls der vorliegenden Erfindung ist durch eine VH/VL-Antigenbindungseinheit und zwei variable Antikörper-Domänen gekennzeichnet, die nach dem nicht kovalenten Binden an die variablen Domänen der anderen Monomeren (Multimerisierungsmotiv) VH/VL-Antigen-Bindungseinheiten bilden. Dimere, Trimere oder Tetramere werden abhängig von den variablen Domänen und der Länge der Peptid-Linker zwischen den variablen Domänen gebildet, die das Multimerisierungsmotiv umfassen (siehe
1 ,2 und3 ). - Die multimeren Fv-Antikörper der vorliegenden Erfindung sollen sehr stabil sein und eine höhere Bindungskapazität haben. Sie sollten auch für therapeutische Zwecke besonders nützlich sein, da die bisher verwendeten dimeren Diabodies klein sind und über die Nieren ziemlich schnell aus dem Blutstrom herausgefiltert werden. Darüber hinaus ermöglicht es das einzelkettige Format der multimeren Fv-Antikörper der vorliegenden Erfindung, dass sie in eukaryontischen Organismen und nicht nur in Bakterien gebildet werden.
- Demgemäß betrifft die vorliegende Erfindung einen multimeren Fv-Antikörper, der durch die folgenden Merkmale gekennzeichnet ist:
- (a) zwei benachbarte variable Domänen, die eine Antigen bindende VH-VL- oder VL-VH-scFv-Einheit bilden; diese beiden variablen Domänen werden durch einen Peptid-Linker mit mindestens 12 Aminosäureresten verbunden; und
- (b) zwei andere benachbarte variable Domänen, die nicht kovalent an zwei variable Domänen eines anderen Monomers des Fv-Antikörpers gebunden sind, was zur Bildung von zwei zusätzlichen Antigenbindungsstellen führt, um das Multimerisierungsmotiv zu ergeben; diese beiden variablen Domänen jedes Monomers sind durch einen Peptid-Linker verbunden, der aus maximal 10 Aminosäureresten besteht.
- Ein weiteres bevorzugtes Merkmal besteht darin, das die Antigen bindende VH-VL- oder VL-VH-scFv-Einheit, die durch die beiden benachbarten Domänen des einen Monomers gebildet sind, mit den anderen variablen Domänen des Multimerisierungsmotivs durch einen Peptid-Linker von mindestens 15 Aminosäureresten, vorzugsweise mindestens 20 Aminosäureresten, verbunden ist.
- Der Begriff „Fv-Antikörper" betrifft einen Antikörper, der variable Domänen aber keine konstanten Domänen enthält.
- Der Begriff „Peptid-Linker" betrifft jedes Peptid, das in der Lage ist, zwei variable Domänen zu verbinden, wobei seine Länge von den Arten der zu verbindenden variablen Domänen abhängt. Der Peptid-Linker könnte auch jeden Aminosäurerest enthalten, wobei die Aminosäurereste Glycin, Serin und Prolin für den Peptid-Linker, der die zweite und dritte variable Domäne verbindet, bevorzugt sind.
- Ein multimerer Fv-Antikörper der vorliegenden Erfindung kann gemäß Standardverfahren hergestellt werden. Vorzugsweise wird der Fv-Antikörper durch Ligierung von die Peptid-Linker kodierenden DNA Sequenzen mit den die variablen Domänen kodierenden DNA Sequenzen erzeugt, so dass die Peptid-Linker die variablen Domänen verbinden, was zur Bildung einer DNA-Sequenz führt, die ein Monomer des multimeren Fv-Antikörpers kodiert, und DNA-Sequenzen, die die verschiedenen Monomeren kodieren, in einem geeigneten Expressionssystem exprimiert werden, wie in den nachfolgenden Beispielen beschrieben.
- Die Fv-Antikörper der vorliegenden Erfindung können weiter mittels herkömmlicher Verfahren, die auf dem Fachgebiet bekannt sind, modifiziert werden, zum Beispiel mittels Aminosäure-Deletion(en), Insertion(en), Substitution(en), Addition(en) und/oder Rekombination(en) und/oder allen deren Modifikation(en), die auf dem Fachgebiet bekannt sind, und zwar entweder allein oder in Kombination. Verfahren zum Einführen von solchen Modifikationen in die DNA-Sequenz, die der Aminosäuresequenz einer variablen Domäne oder eines Peptid-Linkers zugrunde liegen, sind dem Fachmann bekannt; siehe z.B. Sambrook, Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1989) N.Y.
- Die Fv-Antikörper der vorliegenden Erfindung können mindestens eine weitere Proteindomäne umfassen, wobei die Proteindomäne durch kovalente oder nicht kovalente Bindungen verbunden ist. Die Verbindung kann auf der genetischen Fusion gemäß den auf dem Fachgebiet bekannten und oben beschriebenen Verfahren beruhen oder kann z.B. durch chemische Vernetzung durchgeführt werden, wie beispielsweise in der WO 94/04686 beschrieben. Die zusätzliche Domäne, die in dem Fusionsprotein vorhanden ist, das den gemäß der Erfindung verwendeten Fv-Antikörper umfasst, kann vorzugsweise mit einem flexiblen Linker, vorteilhafterweise einem Peptid-Linker, verbunden werden, wobei der Peptid-Linker mehrere hydrophile peptidgebundene Aminosäuren einer Länge umfasst, die ausreicht, um den Abstand zwischen dem C-terminalen Ende der weiteren Proteindomäne und dem N-terminalen Ende des Fv-Antikörpers oder umgekehrt zu überbrücken.
- In einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfassen die Monomere des multimeren Fv-Antikörpers vier variable Domänen und die dritte und vierte variablen Domänen der Monomere sind durch einen Peptid-Linker von 10 oder weniger Aminosäureresten, vorzugsweise weniger als fünf Aminosäureresten, verbunden. In einer noch weiter bevorzugten Ausführungsform sind die dritte und vierte Domäne direkt ohne intervenierende Aminosäurereste verbunden.
- In einer anderen bevorzugten Ausführungsform des mültimeren Fv-Antikörpers der vorliegenden Erfindung sind die zweite und dritte variable Domäne der Monomeren des Antikörpers über einen Peptid-Linker mit mindestens 12 Aminosäureresten, vorzugsweise mindestens 15 Aminosäureresten, verbunden. Vorzugsweise ist die maximale Anzahl an Aminosäureresten 30. In einer noch weiter bevorzugten Ausführungsform hat der Peptid-Linker die Aminosäuresequenz (Gly4Ser)4.
- In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des multimeren Fv-Antikörpers der vorliegenden Erfindung sind die dritte und/oder vierte variable Domäne um mindestens einen Aminosäurerest an ihrem N- und/oder C-Terminus verkürzt. In einigen Fällen ergibt diese verkürzte Form eine bessere Stabilität des Moleküls wie in der deutschen Patentanmeldung 100 63 048.0 beschrieben.
- In einer besonders bevorzugten Ausführungsform des multimeren Fv-Antikörpers der vorliegenden Erfindung ist die Reihenfolge von Domänen eines Monomers VH-VL.
- In einigen Fällen kann es wünschenswert sein, die Verbindung von zwei variablen Domänen zu stärken. Demgemäß wird in einer weiter bevorzugten Ausführungsform des multimeren Fv-Antikörpers der vorliegenden Erfindung die Bindung von mindestens einem Paar von variablen Domänen durch mindestens eine intermolekulare Disulfidbrücke gestärkt. Dies kann durch Modifizierung der DNA-Sequenzen, die die variablen Domänen entsprechend kodieren, d.h. durch Einführen von Cystein-Kodons, erreicht werden. Die beiden viel versprechendsten Stellen zum Einführen von Disulfidbrücken schienen VH44-VL100, das den Rahmen 2 der schweren Kette mit Rahmen 4 der leichten Kette verbindet, und VH105-VL43 zu sein, das den Rahmen 4 der schweren Kette mit dem Rahmen 2 der leichten Kette verbindet.
- In einer weiter bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist der multimere Fv-Antikörper ein tetravalentes Dimer, hexavalentes Trimer oder oktavalentes Tetramer. Die Bildung von solchen Formen wird vorzugsweise durch bestimmte VH- und VL-Domänen, die das Multimerisierungsmotiv umfassen, und durch die Länge des Linkers bestimmt.
- In einer anderen bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist der multimere Fv-Antikörper ein bispezifischer, trispezifischer, tetraspezifischer Antikörper.
- Die Multimerisierung der monomeren Untereinheiten kann durch das Vorhandensein eines Dimerisierungsmotivs am C-Terminus der vierten variablen Domäne erleichtert werden, bei der es sich vorzugsweise um ein (Poly)peptid handelt, das direkt über eine Peptidbindung verbunden ist. Beispiele für solche Dimerisierungsmotive sind dem Fachmann bekannt und umfassen Streptavidin, amphipatische alpha-Helices. Demgemäß wird in einer weiter bevorzugten Ausführungsform ein Dimerisierungsmotiv mit der letzten Domäne von mindestens zwei Monomeren des multimeren Fv-Antikörpers der vorliegenden Erfindung fusioniert.
- Für bestimmte therapeutische Anwendungen kann mindestens ein Monomer des multimeren Antikörpers der Erfindung nicht-kovalent oder kovalent mit einer biologisch aktiven Substanz (z.B. Cytokine oder Wachstumshormone), einem chemischen Mittel (z.B. Doxorubicin, Cyclosporin), einem Peptid (z.B. α-Amanitin), einem Protein (z.B. Granzym A und B) verbunden werden.
- In einer noch weiter bevorzugten Ausführungsform ist der multimere Fv-Antikörper der vorliegenden Erfindung (I) ein monospezifischer Antikörper, der das CD19 Antigen von B-Lymphozyten oder das carcinoembryonale Antigen (CEA) spezifisch-binden kann; oder (II) ein bispezifischer Antikörper, der (a) CD19 und den CD3-Komplex des T-Zellrezeptors, (b) CD19 und den CD5-Komplex des T-Zellrezeptors, (c) CD19 und das CD28-Antigen auf T-Lymphozyten, (d) CD19 und CD16 auf natürlichen Killerzellen, Makrophagen und aktivierten Monozyten, (e) CEA und CD3, (f) CEA und CD28 oder (g) CEA und CD16 spezifisch binden kann. Die Nukleotidsequenzen der variablen Domänen sind im Fall des Antikörpers anti-CD19 (Kipriyanov u.a., 1996, J. Immunol. Methods 200, 51–62), anti-CD3 (Kipriyanov u.a., 1997, Protein Engeng. 10, 445–453), anti-CD28 (Takemura u.a., 2000, FEBS Lett. 476, 266–271), anti-CD16 (deutsche Patentanmeldung
DE 199 37 264 A1 ), anti-CEA (Griffiths u.a., 1993, EMBO J. 12, 725–734) und anti-CD5 (Better u.a., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 457–461) bereits erhalten und beschrieben worden. - Eine andere Aufgabe der vorliegenden Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines multimeren Fv-Antikörpers gemäß der vorliegenden Erfindung, wobei (a) DNA-Sequenzen, die die Peptid-Linker kodieren, mit den DNA-Sequenzen, die die variablen Domänen kodieren, derart ligiert werden, dass die Peptid-Linker die variablen Domänen verbinden, was zur Bildung einer DNA-Sequenz führt, die ein Monomer des multimeren Fv-Antikörpers kodiert, und (b) die DNA-Sequenzen, die die verschiedenen Monomeren kodieren, in einem geeigneten Expressionssystem exprimiert sind. Die verschiedenen Verfahrensschritte können gemäß Standardverfahren durchgeführt werden, z.B. Verfahren, die in Sambrook u.a. oder in den nachfolgenden Beispielen beschrieben sind.
- Die vorliegende Erfindung betrifft auch DNA-Sequenzen, die den multimeren Fv-Antikörper der vorliegenden Erfindung kodieren, und Vektoren, vorzugsweise Expressionsvektoren, die die DNA-Sequenzen enthalten.
- Eine Vielzahl von Expressionsvektor/Wirts-Systemen kann verwendet werden, um Sequenzen, die den multimeren Fv-Antikörper kodieren, zu umfassen und zu exprimieren. Diese beinhalten Mikroorganismen, wie beispielsweise Bakterien, die mit rekombinantem Bakteriophagen, Plasmid oder Cosmid DNA Expressionsvektoren transformiert sind; Hefe, die mit Hefeexpressionsvektoren transformiert ist; Insektenzellsysteme, die mit Virusexpressionsvektoren infiziert sind (z.B. Baculovirus); Pflanzenzellsysteme, die mit Virusexpressionsvektoren (z.B. Blumenkohlmosaikvirus, CaMV; Tabakmosaikvirus, TMV) oder mit bakteriellen Expressionsvektoren (z.B. Ti oder pBR322 Plasmiden) transformiert sind; oder Tierzellsysteme, sind aber nicht darauf beschränkt. Die Erfindung wird nicht durch die verwendete Wirtszelle eingeschränkt.
- Die „Kontrollelemente" oder „regulatorischen Sequenzen" sind die nicht translatierten Regionen der Vektor-Enhancer, Promotoren, 5'- und 3'- nicht translatierten Regionen, die mit Wirtszellproteinen wechselwirken, um eine Transkription und Translation durchzuführen. Solche Elemente können bezüglich ihrer Stärke und Spezifität variieren. Abhängig vom Vektorsystem und dem verwendeten Wirt kann jede Zahl von geeigneten Transkriptions- und Translationselementen, einschließlich konstitutiven und induzierbaren Promotoren, verwendet werden. Zum Beispiel können beim Klonieren in bakteriellen Systemen induzierbare Promotoren, wie beispielsweise der Hybrid lacZ Promotor des Bluescript.RTM.-Phagemids (Stratagene, LaJolla, Kalifornien) oder das pSport1.TM.-Plasmid (Gibco BRL) und dergleichen verwendet werden. Der Baculovirus-Polyhedrinpromotor kann in Insektenzellen verwendet werden. Promotoren oder Enhancer, die von den Genomen von Pflanzenzellen stammen (z.B. Hitzeschock-, RUBISCO- und Lagerproteingene) oder von Pflanzenviren (z.B. virale Promotoren oder Leader-Sequenzen) können in den Vektor kloniert werden. Bei Säugetierzellsystemen sind Promotoren von Säugetier-Genen oder von Säugetier-Viren bevorzugt. Wenn es notwendig ist, eine Zelllinie zu erzeugen, die mehrere Kopien der Sequenz enthält, die den multimeren Fv-Antikörper kodiert, können Vektoren auf der Grundlage von SV40 oder EBV mit einem geeigneten selektierbaren Marker verwendet werden.
- In bakteriellen Systemen kann ein Anzahl von Expressionsvektoren abhängig von der für den multimeren Fv-Antikörper beabsichtigten Verwendung ausgewählt werden. Vektoren, die zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung geeignet sind, umfassen den pSKK Expres sionsvektor zur Expression in Bakterien, sind aber nicht darauf beschränkt.
- In der Hefe, Saccharomyces cerevisiae, kann eine Anzahl von Vektoren verwendet werden, die konstitutive oder induzierbare Promotoren, wie beispielsweise alpha-Faktor, Alkoholoxidase und PGH enthalten. Für einen Überblick siehe Grant u.a. (1987) Methods Enzymol. 153: 516–544.
- In den Fällen, in denen Pflanzenexpressionsvektoren verwendet werden, kann die Expression von Sequenzen, die den multimeren Fv-Antikörper kodieren, durch jede Zahl von Promotoren betrieben werden. Zum Beispiel können virale Promotoren, wie beispielsweise die 35S und 19S Promotoren von CaMV allein oder in Kombination mit der omega-Leader-Sequenz von TMV (Takamatsu, N. (1987) EMBO J. 6: 307–311) verwendet werden. Alternativ können Pflanzenpromotoren, wie beispielsweise die kleine Untereinheit von RUBISCO- oder Hitzeschockpromotoren verwendet werden (Coruzzi, G. u.a. (1984) EMBO J. 3: 1671–1680; Broglie, R. u.a. (1984) Science 224: 838–843; und Winter, J. u.a. (1991) Results Probl. Cell Differ. 17: 85–105). Diese Konstrukte können in Pflanzenzellen durch direkte DNA-Transformation oder pathogen vermittelte Transfektion eingeführt werden. Solche Techniken werden in einer Anzahl von allgemein verfügbaren Übersichten beschrieben (siehe zum Beispiel Hobbs, S. oder Murry, L. E. in McGraw Hill Yearbook of Science and Technology (1992) McGraw Hill, New York, N.Y.; Seite 191–196.
- Ein Insektensystem kann auch zur Expression des multimeren Fv-Antikörpers verwendet werden. Zum Beispiel wird in einem solchen System der Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) als Vektor zum Exprimieren von Fremd-Genen in Spodoptera frugiperda-Zellen oder in Trichoplusia larvae verwendet. Die den multimeren Fv-Antikörper kodierenden Sequenzen können in eine nicht wesentliche Region des Virus, wie beispielsweise das Polyhedrin-Gen, kodiert und unter die Kontrolle des Polyhedrin-Promotors gestellt werden. Eine erfolgreiche Insertion des multimeren Fv-Antikörpers wird das Polyhedrin-Gen inaktivieren und ein rekombinantes Virus, dem ein Hüllprotein fehlt, erzeugen. Die rekombinanten Viren können dann dazu verwendet werden, um zum Beispiel S. frugiperda-Zellen oder Trichoplusia larvae zu infizieren, in denen APOP exprimiert sein kann (Engelhard, E. K. u.a. (1994) Proc. Nat. Acad. Sci. 91: 3224–3227).
- Bei Säugetierwirtszellen kann eine Anzahl von virusbezogenen Expressionssystemen verwendet werden. In den Fällen, in denen ein Adenovirus als Expressionsvektor verwendet wird, können Sequenzen, die den multimeren Fv-Antikörper kodieren, in einen Adenovirus-Transkriptions/Translations-Komplex ligiert werden, der aus dem late-Promotor und der dreiteiligen Leader-Sequenz besteht. Eine Insertion in eine nicht wesentliche E1 oder E3 Region des Virusgenoms kann dazu verwendet werden, um einen lebensfähigen Virus zu erhalten, der den multimeren Fv-Antikörper in infizierten Wirtszellen exprimieren kann (Logan, J. und Shenk, T. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. 81: 3655–3659). Darüber hinaus können Transkriptions-Enhancer, wie beispielsweise der Rous sarcoma Virus (RSV) Enhancer, dazu verwendet werden, die Expression in Säugetierwirtszellen zu erhöhen.
- Humane künstliche Chromosomen (HACs) können auch dazu verwendet werden, um größere DNA Fragmente abzugeben, als in einem Plasmid enthalten und exprimiert sein können. HACs von 6 bis 10 M werden konstruiert und für therapeutische Zwecke über herkömmliche Abgabeverfahren (Liposome, polykationische Aminopolymere oder Vesikel) abgegeben.
- Spezifische Initiationssignale können auch dazu verwendet werden, um eine wirksamere Translation von Sequenzen zu erreichen, die den multimeren Fv-Antikörper kodieren. Solche Signale umfassen das ATG Initiationskodon und benachbarte Sequenzen. In den Fällen, in denen Sequenzen, die den multimeren Fv-Antikörper, sein Initiationskodon und stromaufwärtige Sequenzen kodieren, in den passenden Expressionsvektor eingefügt werden, werden keine zusätzlichen Transkriptions- oder Translationskontrollsignale benötigt. Wenn aber nur eine Kodierungssequenz eingefügt wird, sollten exogene Translationskontrollsignale, einschließlich das ATG Initiationskodon, vorgesehen werden. Weiterhin sollte sich das Initiationskodon im richtigen Leserahmen befinden, um eine Translation des gesamten Inserts sicherzustellen. Exogene Translationselemente und Initiationskodons können unterschiedlichen Ursprungs sein, sowohl natürlichen als auch synthetischen. Die Expressionswirksamkeit kann durch den Einschluss von für das verwendete bestimmte Zellsystem geeigneten Enhancern erhöht werden, wie beispielsweise die in der Literatur beschriebenen (Scharf, D. u.a. (1994) Results Probl. Cell Differ. 20: 125–162).
- Darüber hinaus kann ein Wirtszellenstamm wegen seiner Fähigkeit gewählt werden, die Expression der eingefügten Sequenzen zu modulieren oder das exprimierte Protein in der gewünschten Form zu verarbeiten. Die post-translationale Verarbeitung, bei der eine „Prepro"-Form des Proteins gespalten wird, kann auch verwendet werden, um eine korrekte Insertion, Faltung und/oder Funktion zu erleichtern. Unterschiedliche Wirtszellen, die eine bestimmte zelluläre Maschinerie und charakteristische Mechanismen für post-translationale Aktivitäten aufweisen (z.B. CHO, HeLa, MDCK, HEK293 und W138), stehen von der American Type Culture Collection (ATCC; Bethesda, Md.) zur Verfügung und können ausgewählt werden, um die korrekte Modifikation und Verarbeitung des Fremdproteins sicherzustellen.
- Für die langfristige Produktion von rekombinanten Proteinen mit hoher Ausbeute ist die stabile Expression bevorzugt. Zum Beispiel können Zelllinien, die den multimeren Fv-Antikörper stabil exprimieren, mittels Expressionsvektoren transformiert werden, die virale Replikationsursprünge und/oder endogene Expressionselemente und ein selektierbares Marker-Gen auf demselben oder auf einem separaten Vektor enthalten können. Nach dem Einführen des Vektors können Zellen für 1–2 Tage in einem angereicherten Medium wachsen gelassen werden, bevor sie auf ausgewählte Medien übertragen werden. Der Zweck des selektierbaren Markers ist es, Resistenz gegenüber der Selektion zu verleihen, und sein Vorhandensein ermöglicht das Wachstum und die Gewinnung von Zellen, die die eingeführten Sequenzen erfolgreich exprimieren. Resistente Klone von stabil transformierten Zellen können mittels Gewebekulturverfahren, die für den Zelltyp geeignet sind, vermehrt werden.
- Jede Anzahl von Selektionssystemen kann zur Gewinnung von transformierten Zelllinien verwendet werden. Diese umfassen die Gene von Herpes simplex Virus Thymidinkinase (Wigler, M. u.a. (1977) Cell 11: 223–32) und Adeninphosphoribosyltransferase (Lowy, I. u.a. (1980) Cell 22: 817–23), die in tk.sup.- bzw. aprt.sup.-Zellen verwendet werden können, sind aber nicht darauf beschrankt. Außerdem kann eine Antimetabolit-, Antibiotika- oder Herbizidresistenz als Grundlage für die Selektion verwendet werden; zum Beispiel dhfr, das eine Resistenz gegenüber Methotrexat verleiht (Wigler, M. u.a. (1980), Proc. Natl. Acad. Sci. 77: 3567–70); npt, das eine Resistenz gegenüber Aminoglycosidneomycin und G-418 verleiht (Colbere-Garapin, F. u.a. (1981), J. Mol. Biol. 150: 1–14), und als oder pat, die eine Resistenz gegenüber Chlorsulfuron bzw. Phosphinotricinacetyltransferase verleihen (Murry, supra). Es sind zusätzliche selektierbare Gene beschrieben worden, zum Beispiel trpB, das es den Zellen ermöglicht, Indol anstelle von Tryptophan zu verwenden, oder hisD, das es den Zellen ermöglicht, Histinol anstelle von Histidin zu verwenden (Hartman, S. C. und R. C. Mulligan (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 8047–51). In letzter Zeit sind die Verwendung von sichtbaren Markern mit solchen Markern wie Anthocyaninen, .beta.Glucuronidase und ihre Substrate GUS und Luciferase und ihr Substrat Luciferin populär geworden, und sie werden nicht nur zum Identifizieren von Transformanten sondern auch viel zum quantitativen Bestimmen der Menge an einer transienten oder stabilen Proteinexpression, die einem spezifischen Vektorsystem zuschreibbar ist, benutzt (Rhodes, C. A. u.a. (1995) Methods Mol. Biol. 55: 121–131).
- Ein bestimmter Expressionsvektor ist pSKK2-scFvL18anti-CD3-LL-scFvL10ant-CD19 (pSKK2-scFv3LL Db19) (hinterlegt bei der DSMZ gemäß dem Budapester Vertrag unter DSM 14470 am 22. August 2001) oder pSKK2-scFvL18anti-Cd19-LL-scFvL10anti-CD3 (pSKK2-scFv19LL Db3) (hinterlegt bei der DSM/gemäß dem Budapester Vertrag unter DSM 14471 am 22. August 2001).
- Die vorliegende Erfindung betrifft auch eine pharmazeutische Zusammensetzung, die einen multimeren Fv-Antikörper der vorliegenden Erfindung, eine DNA-Sequenz oder einen Expressionsvektor, vorzugsweise in Kombination mit geeigneten pharmazeutischen Trägern, enthält. Beispiele für geeignete pharmazeutische Träger sind auf dem Fachgebiet bekannt und umfassen phosphatgepufferte Kochsalzlösungen, Wasser, Emulsionen, wie beispielsweise Öl/Wasser-Emulsionen, verschiedene Arten von Netzmitteln, sterile Lösungen usw. Solche Träger können durch herkömmliche Verfahren formuliert werden und können der Person in einer geeigneten Dosis verabreicht werden. Die Verabreichung der geeigneten Zusammensetzungen kann auf verschiedene Weisen bewirkt werden, z.B. durch intravenöse, intraperitoneale, subkutane, intramuskuläre, topische oder intradermale Verabreichung. Der Verabreichungsweg hängt natürlich von der Natur der Erkrankung, z.B. Tumor, und der Art der Verbindung ab, die in der pharmazeuti schen Zusammensetzung enthalten ist. Der Dosierungsplan wird vom behandelnden Arzt oder von anderen klinischen Faktoren bestimmt. Wie auf dem Fachgebiet der Medizin bekannt ist, hängen die Dosierungen für jeden Patienten von vielen Faktoren ab, einschließlich der Größe, Körperoberfläche, dem Alter und Geschlecht des Patienten, der bestimmten, zu verabreichenden Verbindung, der Zeit und dem Verabreichungsweg, der Art der Störung, dem allgemeinen Gesundheitszustand und anderen, gleichzeitig verabreichten Medikamenten.
- Bevorzugte medizinische Verwendungen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind: (a) die Behandlung einer viralen, bakteriellen, tumoralen oder prionbezogenen Erkrankung, (b) die Agglutination von roten Blutzellen, (c) die Verbindung von zytotoxischen Zellen, z.B. T- oder natürlichen Killerzellen des Immunsystems, mit Tumorzellen oder (d) die Verbindung von aktivierenden Zytokinen, vorzugsweise IL-1, IL-2, IFNγ, TNFα oder GM-CSF, zytotoxischen Substanzen (z.B. Doxorubicin, Cyclosporin, α-Amanitin oder eine Protease, vorzugsweise Granzym B, mit einer Zielzelle.
- Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, einen multimeren Fv-Antikörper der vorliegenden Erfindung zur Diagnose zu verwenden. Zur Verwendung in der diagnostischen Forschung werden von der vorliegenden Erfindung auch Kits zur Verfügung gestellt, wobei die Kits einen multimeren Antikörper der vorliegenden Erfindung umfassen. Der Fv-Antikörper kann so markiert sein, dass er festgestellt werden kann. In einer bevorzugten Ausführungsform ermöglicht der Kit die Diagnose mittels ELISA und enthält den Fv-Antikörper an einen festen Träger, zum Beispiel eine Polystyrolmicrotiterschale oder ein Nitrocellulosepapier, mittels auf dem Fachgebiet bekannter Verfahren gebunden. Alternativ basiert der Kit auf einem RIA und enthält den Fv-Antikörper mit einem radioaktiven Isotop markiert. In einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Kits ist der Antikörper mit Enzymen, fluoreszierenden Verbindungen, lumineszierenden Verbindungen, ferromagnetischen Sonden oder radioaktiven Verbindungen markiert.
- Die vorliegende Erfindung wird weiter im Hinblick auf die Figuren beschrieben.
- Kurze Beschreibung der Zeichnungen:
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1 ,2 und3 : Diagramme der multimeren Fv-Moleküle abhängig von den bestimmten Antikörperdomänen und der Länge des Peptid-Linkers LL zwischen den variablen Domänen die das Multimerisierungsmotiv umfassen - Abkürzungen L0: Die VH und VL Domänen sind direkt ohne intervenierendes Linkerpeptid verbunden; L1: die Linker-Sequenz, die für das SerAlaLysThrThrProLysLeuGlyGly Polypeptid kodiert, das die VH- und VL-Domänen verbindet; LL: Linker-Sequenz, die für das (Gly4Ser)4 Polypeptid kodiert, das Hybrid-scFv-Fragmente verbindet; L18: Linker-Sequenz, die für das SerAlaLysThrThrProLysLeuGluGluGlyGluPheSerGluAlaArgVal Polypeptid kodiert, das die VH- und VL-Domänen verbindet.
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4 und5 : Konstruktionsschema der Plasmide pHOG scFv18αCD3-LL-scFv10αCD19 und pHOG scFv18αCD19-LL-scFv10αCD3 - Abkürzungen c-myc: Die Sequenz, die für ein Epitop kodiert, das durch mAb 9E10 erkannt wird; His: Sequenz, das für sechs C-terminale Histidinreste kodiert; PelB: Signalpeptidsequenz der bakteriellen Pectatlyase (PelB-Leader); rbs: Ribosombindungsstelle; Stop: Stoppkodon (TAA); VH und VL: variable Region der schweren und leichten Kette; L10: Linker-Sequenz, die für das SerAlaLysThrThrProLys LeuGlyGly Polypeptid kodiert, das die VH- und VL-Domänen verbindet; LL: Linker-Sequenz, die für das (Gly4Ser)4 Polypeptid kodiert, das die Hybrid-scFv-Fragmente verbindet; L18: Linker-Sequenz, die für das SerAlaLysThrThrProLysLeuGluGluGlyGluPheSerGluAlaArgVal Polypeptid kodiert, das die VH- und VL-Domänen verbindet; B: BamHI, Ea: EagI, E. EcoRI, Nc: NcoI; N: NotI, P: PvuII, X: XbaI.
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6 : Nukleotid und abgeleitete Aminosäuresequenzen des Plasmids pSKK2 scFv3-LL-Db19 - Abkürzungen His6-Tail bzw. -Schwanz: Die Sequenz, die für sechs C-terminate Histidinreste kodiert; β-Lactamase: Gen, das β-Lactamase kodiert, die eine Resistenz gegenüber Ampicillin verleiht; bp: Basenpaare; c-myc-Epitop: Sequenz, die für ein Epitop kodiert, das von mAb 9E10 erkannt wird; LacP/0: wt lac Operon-Promotor/Operator; PelB-Leader: Signalpeptidsequenz der bakteriellen Pectatlyase; VH und HL: variable Region der schweren und leichten Kette; L10: Linker-Sequenz, die für das SerAlaLysThrThrProLysLeuGlyGly Polypeptid kodiert, das die VH- und VL-Domänen verbindet; LL: Linker-Sequenz, die für das (Gly4Ser)4 Polypeptid kodiert, das die Hybrid-scFv-Fragmente verbindet; L18: Linker-Sequenz, die für das SerAlaLysThrThrProLysLeuGluGluGlyGluPheSerGluAlaArgVal Polypeptid kodiert, das die VH- und VL-Domänen verbindet; rbs: Ribosombindungsstelle; VH und VL: variable Region der schweren und leichten Kette; hok-sok: Plasmid, das den DNA-Lokus stabilisiert, lacI: Gen, das für den lac-Repressor kodiert; lac P/0: wt lac Operon-Promotor/Operator; lacZ': Gen, das für das α-Peptid von β-Galactosidase kodiert; skp-Gen: Gen, das den bakteriellen periplasmatischen Faktor Skp/OmpH kodiert; tLPP: Nukleotidsequenz des Lipoproteinterminators; M13 ori: Ursprung der DNA-Replikation; pBR322ori: Ursprung der DNA-Replikation; tHP: starker Terminator der Transkription; SD1: Ribosombindungsstelle (Shine Dalgarno), abgeleitet von E. coli lacZ-Gen (lacZ); SD2 und SD3: Shine-Dalgarno-Sequenz für das stark exprimierte T7 Gen 10 Protein (T7g10).
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7 : Nukleotid und abgeleitete Aminosäuresequenzen des Plasmids pSKK2 scFv19-LL-Db3 - Abkürzungen His6 Schwanz: Sequenz, die für sechs C-terminale Histidinreste kodiert; β-Lactamase: Gen, das β-Lactamase kodiert, die eine Resistenz gegenüber Ampicillin verleiht; bp: Basenpaare; c-myc-Epitop: Sequenz, die für ein Epitop kodiert, das durch mAb 9E10 erkannt wird; LacP/0: wt lac Operon-Promotor/Operator; PelB-Leader: Signalpeptidsequenz der bakteriellen Pectatlyase; VH und VL: variable Region der schweren und leichten Kette; L10: Linker-Sequenz, die für das SerAlaLysThrThrProLysLeuGlyGly Polypeptid kodiert, das die VH- und VL-Domänen verbindet; LL: Linker-Sequenz, die für das (Gly4Ser)4 Polypeptid kodiert, das die Hybrid-scFv-Fragmente verbindet; L18: Linker-Sequenz, die das SerAlaLysThrThrProLysLeuGluGluGlyGluPheSerGluAlaArgVal Polypeptid kodiert, das die VH- und VL-Domänen verbindet; rbs: Ribosombindungsstelle; hok-sok: Plasmidstabilisierungs-DNA-Lokus; lacI: Gen, das für den lac-Repressor kodiert; lac P/0: wt lac Operon-Promotor/Operator; IacZ': Gen, das für ein α-Peptid von β-Galactosidase kodiert; skp-Gen: Gen, das für den bakteriellen periplasmatischen Faktor Skp/OmpH kodiert; tLPP: Nukleotidsequenz des Lipoproteinterminators; M13 ori: Ursprung der DNA-Replikation, pBR322ori: Ursprung der DNA-Replikation; tHP: starker Transkriptionsterminator; SD1: Ribosombindungsstelle (Shine Dalgarno), die vom E. coli lacZ-Gen (lacZ) stammt; SD2 und SD3: Shine Dalgarno-Sequenz für das stark exprimierte T7 Gen 10 Protein (T7g10).
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8 : Analyse der Spitzenproteingehalte nach IMAC - Es wurde eine Elektrophorese unter reduzierenden Bedingungen durchgeführt; Western Blot mit anti-c-myc monoklonalem Antikörper, im Fall von scFv3 – Db19 (
8A ) und scFv19 × Db3 (8B ) Molekülen. -
9 : Größenausschluss-FPLC-Chromatographie-Elutionsprofile - Eine kalibrierte Superdex 200 HR10/30 Säule wurde verwendet und die Analyse der Spitzenproteingehalte mit Western Blot wurde mit anti-c-myc monoklonalem Antikörper im Fall von scFv3 – Db19 (
9A ) und scFv19 – Db3 (9B ) Molekülen durchgeführt. -
10 : Größenausschluss-FPLC-Chromatographie-Elutionsprofile - Es wurde eine kalibrierte Superdex 200 HR10/3 Säule für die scFv3 – Db19, scFv19 – Db3, scFv19 – scFv3 und scFv3 – scFv19 Moleküle verwendet.
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11 : Durchflusszytometrieergebnisse auf CD3+-Jurkat- und CD19+-JOK-1-Zellen -
12 : Analyse der Zelloberflächenretention auf CD19+JOK-1 (A, B) und CD3+-Jurkat-Zellen (C, D) für die scFv3 – scFv19 und scFv3 – Db19 Moleküle (A, C) und für die scFv19 – scFv3 und scFv19 × Db3 Moleküle (B, D) - Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Erfindung
- Beispiel 1: Konstruktion der Plasmide pSKK2 scFvL18anti-CD3-LL-scFvL10anti-CD19 (scFv3 – Db19) und pSKK2 scFvL18anti-CD19-LL-scFvL10anti-CD3 (scFv19 – Db3) zur Expression von multimeren Fv-Molekülen in Bakterien
- Zur Erzeugung von multimeren Fv-Konstrukten wurden die Plasmide pHOG_HD37, pHOG_Dia_HD37, pHOG_mOKT3 + NotI und pHOG_Dia-mOKT3 verwendet, die die Antikörperfragmente kodieren, die entweder von Hybridom HD37, das für humanes CD19 spezifisch ist (Kipriyanov u.a., 1996, J. Immunol. Meth. 196, 51–62; LeGall u.a., 1999 FEBS Lett., 453, 164–168), oder von Hybridom OKT3 stammen, das für humanes CD3 spezifisch ist (Kipriyanov u.a., 1997, Protein Eng. 10, 445–453).
- Das anti-CD19 scFvL10 Gen, dem ein für ein c-myc Epitop kodierendes Segment und ein Hexahistidinylschwanz folgte, wurde mit PvuII/XabI aus dem Plasmid pHOG Dia HD37 herausgeschnitten und erneut in den mit PvuII/XbaI linearisierten Vektor pDISC-1 LL kloniert (Kipriyanov u.a., 1999, J. Mol. Biol. 293, 41–56) (
4 ). Dieses Hybridplasmid wurde mit NcoI/NotI linearisiert und das Gen, das für das scFVL10 kodiert, das mit NcoI/NotI aus dem Plasmid pHOG mOKT3 + NotI herausgeschnitten wurde, wurde in dieses Plasmid ligiert. Das erhaltene Plasmid ist pHOG scFvL18αCD3-LL-scFvL10αCD19 (scFv3 – Db19) (4 ). - Das linearisierte Hybridplasmid NcoI/NotI wurde auch für die Ligation des für das scFvL18αCD19 kodierende Gens aus dem Plasmid pHOG HD37 verwendet und das erhaltene Plasmid ist pHOG scFL18αCD19-LL-scFvL10αCD19 (scFv19 × Db19) (
4 ). Dieses Plasmid wurde mit PvuII/XbaI linearisiert und das scFvL10 Gen, dem ein für ein c-myc Epitop kodierendes Segment und ein Hexahistidinyl-Schwanz folgte, wurde mit PvuII/XbaI aus dem Plasmid pHOG mDia OKT3 herausgeschnitten. Das erhaltene Plasmid ist pHOG scFvL18αCD19-LL-scFvL10αCD3 (scFv19 – Db3) (5 ). - Um die Ausbeute von funktionellen Antikörperfragmenten im bakteriellen Periplasma zu erhöhen, wurde ein optimierter Expressionsvektor pSKK2 erzeugt. Dieser Vektor wurde auf der Grundlage des Plasmids pHKK konstruiert (Horn, 1996, Appl. Microbiol. Biotechnol., 46, 524–532), der das hok/sok plasmidfreie Zellsuizidsystem enthält (Thisted u.a., 1994, EMBO J., 13, 1950–1956). Zuerst wurde das Gen, das für das Hybrid scFv VH3-VL19 kodiert, mittels PCR aus dem Plasmid pHOG3-19 amplifiziert (Kipriyanov u.a., 1998, Int. J. Cancer 77, 763–772), und zwar unter Verwendung der Primer 5-NDE, 5'-GATATACATATGAAATACCTATTGCCTACGGC und 3-AFL, 5'-CGAATTCTTAAGTTAGCACAGGCCTCTAGAGACACACAGATCTTTAG. Das sich ergebende 921 pb PCR-Fragment wurde mit NdeI und AflII verdaut und in das mit NdeI/AflII linearisierte Plasmid pHKK kloniert, wodurch der Vektor pHKK3-19 erzeugt wurde. Um eine zusätzliche XbaI-Stelle zu deletieren, wurde ein Fragment des pHKK-Plasmids, enthaltend den 3'-terminalen Teil des lacI-Gens (kodiert den lac Repressor), den starken Transkriptionsterminator tHP und Wild-Typ lac-Promotor/Operator, mittels PCR unter Verwendung der Primer 5-NAR, 5'-CACCCTGGCGCCCAATACGCAAACCGCC und 3-NDE, 5'-GGTATTTCATATGTATATCTCCTTCTTCAGAAATTCGTAATCATGG amplifiziert. Das sich ergebende 329 pb DNA-Fragment wurde mit NarI und NdeI verdaut und in das mit NarI/NdeI linearisierte Plasmid pHKK3-19 kloniert, um so den Vektor pHKK Xba zu erzeugen. Um ein Gen einzuführen, das den Skp/OmpH periplasmatischen Faktor für die höhere rekombinante Antikörperproduktion zu kodieren (Bothmann und Plückthun, 1998, Nat. Biotechnol., 16, 376–380), wurde das skp-Gen mittels PCR mit den Primern skp-3, 5'-CGAATTCTTAAGAAGGAGATATACATATGAAAAAGTGGTTATTAGCTGCAGG und skp-4, 5'-CGAATTCTCGAGCATTATTTAACCTGTTTCAGTACGTCGG unter Verwendung des Plasmids pGAH317 als Matrize amplifiziert (Holck und Kleppe, 1988, Gene, 67, 117–124). Das sich ergebende 528 bp PCR-Fragment wurde mit AflII und XhoI verdaut und in das mit AflII/XhoI verdaute Plasmid pHKK Xba kloniert, was zum Expressionsplasmid pSKK2 führte.
- Die Plasmide pHOG scFvL18αCD3-LL-scFvL10αCD19 (scFv3 – Db19) und pHOG scFvL18αCD19-LL-scFL10αCD3 (scFv19 – Db3) wurden mit NcoI/XbaI herausgeschnitten und in das mit NcoI/XbaI linearisierte Plasmid pSKK2 ligiert. Die sich ergebenden Plasmide sind pSKK2 scFvL18CD3-LL-scFvL10αCD19 und pSKK2 scFvL18αCD19-LL-scFL10αCD3. Die vollständigen Nukleotid- und Aminosäuresequenzen sind in der
6 bzw. 7 angegeben. - Beispiel 2: Expression und Reinigung von multimeren Fv-Molekülen in Bakterien
- Der E. coli K12 Stamm RV308 (Maurer u.a., 1980, J. Mol. Biol. 139, 147–161), der mit den Expressionsplasmiden pSKK2 scFVLleocCD3-LL-scFVL10αCD19 und pSSK2 scFvL18αCD19-LL-scFvL10αCD3 transformiert wurde, wurde über Nacht in 2 × YT-Medium mit 50 μg/ml Ampicillin und 100 mM Glucose (2 × YTGA) bei 28°C wachsen gelassen. Verdünnungen (1:50) der Übernacht-Kulturen in 2 × YTGA wurden als Kolbenkulturen bei 28°C unter Schütteln bei 200 UpM wachsen gelassen. Wenn die Kulturen OD600 = 0,8 erreichten, wurden die Bakterien mittels Zentrifugation bei 5.000 × g für 10 min. und bei 20°C pelletiert und in demselben Volumen an frischem, 50 μg/ml enthaltendem Ampicillin YTBS-Medium (2 × YT enthaltend 1 M Sorbit und 2,5 mM Glycinbetain; Blacwell & Horgan, 1991, FEBS Letters, 295, 10–12) resuspendiert. IPTG wurde zu einer Endkonzentration von 0,2 mM zugesetzt und das Wachstum wurde bei 20°C für 18–20 h fortgeführt. Die Zellen wurden mittels Zentrifugation bei 9.000 × g für 20 min. und bei 4°C geerntet. Um die löslichen periplasmatischen Proteine zu isolieren, wurden die pelletierten Bakterien in 5% Endvolumen von eiskaltem 50 mM Tris-HCl, 20% Saccharose, 1 mM EDTA, pH 8,0, resuspendiert.
- Nach einer 1-stündigen Inkubation auf Eis unter gelegentlichem Rühren wurden die Sphäroplasten bei 30.000 × g für 30 Minuten und bei 4°C zentrifugiert, wobei der lösliche periplasmatische Extrakt als Überstand und die Sphäroplasten plus das nicht lösliche periplasmatische Material als Pellet verblieben. Die periplasmatischen Fraktionen wurden gegen Startpuffer (50 mM Tris-HCl, 1 M NaCl, 50 mM Imidazol, pH 7,0) bei 4°C dialysiert. Die dialysierte, das rekombinante Produkt enthaltende Lösung wurde bei 30.000 × g für 30 min. und bei 4°C zentrifugiert. Das rekombinante Produkt wurde mittels Ammoniumsulfatpräzipitation konzentriert (Endkonzentration 70% Sättigung). Das Proteinpräzipitat wurde mittels Zentrifugation (10.000 × g, 4°C, 40 min.) gesammelt und in 10% des Anfangsvolumens von 50 mM Tris-HCl, 1 M NaCl, pH 7,0, gelöst. Die immobilisierte Affinitätschromatographie (IMAC) erfolgte bei 4°C mittels einer 5 ml Chelating Sepharose Säule (Pharmacia), die mit Cu2+ beladen und mit 50 mM Tris-HCl, 1 M NaCl, pH 7,0 (Startpuffer), äquilibriert war. Die Probe wurde durch Durchleiten der Probe über die Säule beladen. Sie wurde dann mit zwanzig Säulenvolumen Startpuffer und anschließend mit 50 mM Imidazol enthaltendem Startpuffer gewaschen, bis das Absorptionsvermögen (280 nm) des Abflusses minimal war (etwa dreißig Säulenvolumen). Absorbiertes Material wurde mit 50 mM Tris-HCl, 1 M NaCl, 250 mM Imidazol, pH 7,0, eluiert. Die Elutionsfraktionen, die die multimeren Fv-Moleküle enthielten, wurden mittels Western-Blot-Analyse unter Verwendung von anti-c-myc Mab 9E10, die wie zuvor beschrieben durchgeführt wurde, identifiziert (Kipriyanov u.a., 1994, Mol. Immunol. 31, 1047–1058), wie in der
8A für scFv3 – Db19 und der8B für scFv19 – Db3 veranschaulicht. - Die positiven Fraktionen wurden gesammelt und auf einem Ultrafree-15 Zentrifugenfilter (Millipore Corporation, Eschborn, Germany) bis 0,5 ml gesammelt.
- Die weitere Reinigung der multimeren Fv-Moleküle erfolgte durch Größenausschluss-FPLC auf einer Superdex 200 HR10/30 Säule (Pharmacia) in PBSI (15 mM Natriumphosphat, 0,15 M NaCl, 50 mM Imidazol, pH 7,0). Die Probenvolumen für die präparative Chromatographie betrugen 500 μl bzw. die Strömungsrate war 0,5 ml/min. Die Säule wurde mit Hoch- und Niedermolekulargewichts-Gelfiltrationskalibrierungs-Kits (Pharmacia) kalibriert. Die Elutionsfraktionen, die die multimeren Fv-Moleküle enthielten, wurden mittels Western-Blot-Analyse unter Verwendung von anti-c-mycMab 9E10 identifiziert, die wie zuvor beschrieben durchgeführt wurde (Kipriyanov u.a., 1994, Mol. Immunol. 31, 1047–1058), und die Ergebnisse sind in der
9A und9B für die scFv3 – Db19 bzw. scFv19 – Db3 Moleküle gezeigt. Die Fraktionen wurden gesammelt und einzeln auf Eis gelagert. - Die erzeugten Fv-Moleküle wurden mit zwei scFv-scFv-Tandems, scFv3 – scFv19 und scFv19 – scFv3 (
10 ) verglichen, die unter denselben Bedingungen erzeugt und gereinigt wurden. Die10 zeigt deutlich, dass die höhermolekularen Formen für das scFv3 × Db19 und scFv19 × Db3 im Vergleich zu scFv3 × scFv19 und scFv19 × scFv3 erhalten wurden. Die Hauptspitze für scFv3 – scFv19 und scFv19 – scFv3 Moleküle entspricht einem Molekulargewicht von etwa 67 kDa und bis etwa 232 kDa für scFv3 – Db19 und scFv19 – Db3. Das Vorhandensein des Dimerisierungsmotivs auf den C-Terminus des Moleküls hat eine positive Wirkung für die Multimerisierung der Moleküle. - Beispiel 3: Charakterisierung der multimeren Fv-Moleküle mittels Durchflusszytometrie
- Die humane CD3+/CD19– akute T-Zellleukämielinie Jurkat und die CD10+/CD3– B-Zelllinie JOK-1 wurden für die Durchflusszytometrie verwendet. Kurz dargestellt wurden 5 × 105 Zellen in 50 μl RPMI 1640 Medium (GIBCO BRL, Eggenstein, Deutschland), das mit 10% FCS und 0,1% Natriumazid (als vollständiges Medium bezeichnet) ergänzt war, mit 100 μl eines multimeren Fv-Molekülpräparats für 45 min. auf Eis inkubiert. Nach dem Waschen mit komplettem Medium wurden die Zellen mit 100 μl 10 μg/ml anti-c-myc-MAb 9E10 (IC Chemikalien, Ismaning, Deutschland) in demselben Puffer für 45 min. auf Eis inkubiert. Nach einem zweiten Waschzyklus wurden die Zellen mit 100 μl FITC-markiertem Ziegen anti-Maus IgG (GIBCO BRL) unter denselben Bedingungen wie zuvor inkubiert. Die Zellen wurden dann wieder gewaschen und in 100 μl 1 μg/ml Propidiumiodidlösung (Sigma, Deisenhofen, Deutschland) in komplettem Medium resuspendiert, um tote Zellen auszuschließen. Die relative Fluoreszenz von gefärbten Zellen wurde mittels eines FACScan Durchflusszytometers (Becton Dickinson, Mountain View, CA) oder Epics XL Durchflusszytometersystemen (Beckman Coulter, Miami, FL) gemessen.
- Durchflusszytometrieexperimente zeigten spezielle Wechselwirkungen sowohl mit humanen CD3+-Jurkat- als auch den CD19+JOK-1-Zellen für alle multimeren Fv-Moleküle (
11 ). - Wegen der CD19- und CD3-Bindungsaffinitäten wurde beschlossen, die Fraktionen zu verenden, die den Monomeren für scFv3 × scFv19 und scFv19 – scFv3 und den Multimeren für scFv3 × Db19 und scFv19 × Db3 entsprechen.
- Beispiel 4: In vitro Zelloberflächenretentionsassay für die multimeren Fv-Moleküle
- Die Zelloberflächenretentionsassays wurden bei 37°C im Wesentlichen wie beschrieben durchgeführt (Adams u.a., 1998, Cancer Res. 58, 485–490), mit der Ausnahme, dass das Feststellen der zurückgehaltenen Antikörperfragmente mittels anti c-myc MAb 9E10 und anschließend mit FITC-markiertem anti-Maus IgG durchgeführt wurde. Die kinetische Dissoziationskonstante (koff) und die Halbwertszeit (t1/2) für die Dissoziation der multimeren Fv-Moleküle wurden von einer einphasigen Exponentialverfallsanpassung der experimentellen Daten mittels „Graph-Pad" Prisma (GraphPad Software, San Diego, CA) abgeleitet. Zur Kontrolle wurde der zuvor beschriebene bispezifische Diabody CD19 × CD3 (BsDb 19 × 3) (Kipriyanov u.a., 1998, Int. J. Cancer 77, 763–777; Cochlovius u.a., 2000, J. Immunol. 165u 888–895) verwendet. Die Ergebnisse der Experimente sind in der
12 gezeigt und in der Tabelle 1 zusammengefasst. - scFv3 – scFv19 hatte eine relativ kurze Retentions-Halbwertzeit (t1/2) auf CD19+JOK-1-Zellen, die fast zweimal geringer war als bei der t1/2 von BsDb 19 × 3 (Tabelle 1). Im Gegensatz dazu wurde scFv3 – Db19 länger auf der Oberfläche von JOK-1-Zellen zurückgehalten. Für scFv19 – scFv3 liegt t1/2 in demselben Bereich wie für t1/2 von BsDb 19 × 3. Die Retention von scFv3 – Db19 im Vergleich zu den anderen Molekülen ist signifikant höher, wobei t1/2 = 65.71 min (Tabelle 1). Die Halbwertzeiten der ganzen multispezifischen Fv-Moleküle auf der Oberfläche von CD3+-Jurkat-Zellen war relativ kurz. Die Länge des Linkers schien einen gewissen Einfluss auf die Antigenbindung zu haben, da scFv3 – Db19 und scFv19 – Db3 einen signifikant langsameren Koff von CD19-positiven Zellen als BsDb 19 × 3, scFv3 × scFv19 und scFv19 – scFv3 zeigten.
- Tabelle 1 Bindungskinetik von rekombinanten bispezifischen Molekülen
Claims (23)
- Multimerer Fv-Antikörper, wobei jedes Monomer des Fv-Antikörpers die folgenden Merkmale umfasst: (a) zwei benachbarte variable Domänen, die eine Antigen bindende VH-VL- oder VL-VH-scFv-Einheit bilden; diese beiden, erste und zweite, variablen Domänen werden durch einen Peptid-Linker mit mindestens 12 Aminosäureresten verbunden; und (b) zwei andere benachbarte variable Domänen, die nicht kovalent an zwei variable Domänen eines anderen Monomers des Fv-Antikörpers gebunden sind, was zur Bildung von zwei zusätzlichen Antigenbindungsstellen führt, um das Multimerisierungsmotiv zu ergeben; diese beiden, dritte und vierte, variablen Domänen jedes Monomers sind durch einen Peptid-Linker verbunden, der aus maximal 10 Aminosäureresten besteht.
- Multimerer Fv-Antikörper nach Anspruch 1, wobei ein weiteres Merkmal darin besteht, dass die Antigen bindende VH-VL- oder VL-VH-scFv-Einheit, die durch die beiden benachbarten Domänen des einen Monomers gebildet werden, mit den anderen variablen Domänen des Multimerisierungsmotivs über einen Peptid-Linker von mindestens 15 Aminosäureresten verbunden ist.
- Multimerer Fv-Antikörper nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Monomeren vier variable Domänen umfassen und wobei die dritte und vierte variable Domäne der Monomeren mittels eines Peptid-Linkers von 5 oder weniger Aminosäureresten verbunden ist.
- Multimerer Fv-Antikörper nach Anspruch 3, wobei die dritte und vierte Domäne der Monomere ohne intervenierende Aminosäurereste direkt verbunden sind.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei die zweite und dritte variable Domäne der Monomeren mittels eines Peptid-Linkers verbunden sind, der aus mindestens 20 Aminosäureresten besteht.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die dritte und/oder vierte variable Domäne der Monomeren um mindestens einen Aminosäurerest an ihrem N- und/oder C-Terminus gekürzt ist.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei die Reihenfolge von Domänen eines Monomers VH-VL ist.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei die Reihenfolge von Domänen eines Monomers VL-VH ist.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei die nicht kovalente Bindung von mindestens einem Paar von variablen Domänen durch mindestens eine Disulfidbrücke verstärkt ist.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 9, welcher ein tetravalentes Dimer, hexavalentes Trimer oder oktavalentes Tetramer ist.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 10, welcher ein bispezifischer oder trispezifischer oder tetraspezifischer Antikörper ist.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 11, wobei mindestens ein Monomer mit einer biologisch aktiven Substanz, einem chemischen Mittel, einem Peptid, einem Protein oder einem Medikament verbunden ist.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder 12, welcher ein monospezifischer Antikörper ist, der in der Lage ist, das CD19-Antigen von B-Lymphozyten oder das CEA-Antigen spezifisch zu binden.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 12, welcher ein bispezifischer Antikörper ist, der in der Lage ist: (a) CD19 und den CD3-Komplex des T-Zell-Rezeptors; (b) CD19 und den CD5-Komplex des T-Zell-Rezeptors; (c) CD19 und das CD28-Antigen auf T-Lymphozyten; (d) CD19 und CD16 auf natürlichen Killerzellen, Makrophagen und aktivierten Monozyten; (e) CEA und CD3; (f) CEA und CD28; oder (g) CEA und CD16 spezifisch zu binden.
- Verfahren zur Herstellung eines multimeren Fv-Antikörpers nach einem der Ansprüche 1 bis 14, wobei (a) DNA-Sequenzen, die die Peptidlinker kodieren, mit den DNA-Sequenzen, die die variablen Domänen kodieren, so ligiert werden, dass die Peptid-Linker die variablen Domänen verbinden, was zur Bildung einer DNA-Sequenz führt, die ein Monomer des multivalenten multimeren Fv-Antikörpers kodiert, und (b) die DNA-Sequenzen, die die verschiedenen Monomeren kodieren, in einem geeigneten Expressionssystem exprimiert werden.
- DNA-Sequenz, die einen multimeren Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 14 kodiert.
- Expressionsvektor, enthaltend die DNA-Sequenz nach Anspruch 16.
- Expressionsvektor nach Anspruch 17, welcher pSKK2-scFvL18anti-CD3-LL-scFvL10anti-CD19, auch bezeichnet als pSKK2-scFv3LL Db19 und hinterlegt als DSM 14470, oder pSKK2-scFvL18anti-CD19-LL-scFvL10anti- CD3, auch bezeichnet als pSKK2-scFv19LL Db3 und hinterlegt als DSM 14471, ist.
- Wirtszelle, enthaltend den Expressionsvektor nach Anspruch 16 oder 18.
- Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend einen multimeren Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 14.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 14 zur Verwendung als diagnostisches Reagenz.
- Multimerer Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 14, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur (a) Behandlung einer viralen, bakteriellen, tumoralen oder prionbezogenen Erkrankung, (b) Agglutination von roten Blutzellen, (c) Verbindung von zytotoxischen Zellen des Immunsystems mit Tumorzellen, oder (d) Binden von aktivierenden Zytokinen, zytotoxischen Substanzen oder einer Protease an eine Zielzelle.
- Diagnostischer Kit, enthaltend einen multimeren Fv-Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 14.
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| US10183986B2 (en) * | 2005-12-15 | 2019-01-22 | Industrial Technology Research Institute | Trimeric collagen scaffold antibodies |
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| US8227577B2 (en) * | 2007-12-21 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
| NZ603059A (en) | 2008-04-11 | 2014-07-25 | Emergent Product Dev Seattle | Cd37 immunotherapeutic and combination with bifunctional chemotherapeutic thereof |
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| US8268314B2 (en) | 2008-10-08 | 2012-09-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies |
| WO2010112194A1 (en) | 2009-04-02 | 2010-10-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Antigen-binding polypeptides and multispecific antibodies comprising them |
| KR101431318B1 (ko) | 2009-04-02 | 2014-08-20 | 로슈 글리카트 아게 | 전장 항체 및 단일쇄 ｆａｂ 단편을 포함하는 다중특이성 항체 |
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| US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
| CA2781519A1 (en) | 2009-09-16 | 2011-03-24 | Genentech, Inc. | Coiled coil and/or tether containing protein complexes and uses thereof |
| US20110206672A1 (en) * | 2010-02-25 | 2011-08-25 | Melvyn Little | Antigen-Binding Molecule And Uses Thereof |
| TWI426920B (zh) | 2010-03-26 | 2014-02-21 | Hoffmann La Roche | 雙專一性、雙價抗－ｖｅｇｆ／抗－ａｎｇ－２抗體 |
| TW201138821A (en) | 2010-03-26 | 2011-11-16 | Roche Glycart Ag | Bispecific antibodies |
| EP2609111B1 (de) | 2010-08-24 | 2017-11-01 | F. Hoffmann-La Roche AG | Bispezifische antikörper die ein disulfid-stabilisiertes fv enthalten |
| JP2014500879A (ja) | 2010-11-16 | 2014-01-16 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Ｂｃｍａ発現に相関性を有する疾患を治療する因子及び方法 |
| JP5766296B2 (ja) | 2010-12-23 | 2015-08-19 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | ポリペプチド−ポリヌクレオチド複合体、およびエフェクター成分の標的化された送達におけるその使用 |
| MX341921B (es) | 2011-02-28 | 2016-09-07 | Hoffmann La Roche | Proteinas de union a antigeno. |
| WO2012116927A1 (en) | 2011-02-28 | 2012-09-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Monovalent antigen binding proteins |
| EP2812357B1 (de) | 2012-02-10 | 2020-11-04 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Einzelketten-antikörper und andere heteromultimere |
| KR101674784B1 (ko) | 2012-04-05 | 2016-11-09 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 인간 tweak 및 인간 il17에 대한 이중특이적 항체 및 이의 용도 |
| US9062120B2 (en) * | 2012-05-02 | 2015-06-23 | Janssen Biotech, Inc. | Binding proteins having tethered light chains |
| US11142563B2 (en) | 2012-06-14 | 2021-10-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecule containing modified Fc region |
| KR20150030744A (ko) | 2012-06-27 | 2015-03-20 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 표적에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 결합 단위를 포함하는 항체 Ｆｃ－영역 접합체의 제조 방법 및 그의 용도 |
| RU2639287C2 (ru) | 2012-06-27 | 2017-12-20 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Способ отбора и получения высокоселективных и мультиспецифичных нацеливающих групп с заданными свойствами, включающих по меньшей мере две различные связывающие группировки, и их применения |
| ES2604012T3 (es) | 2012-07-04 | 2017-03-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Conjugados de antígeno-anticuerpo unidos covalentemente |
| RU2630664C2 (ru) | 2012-07-04 | 2017-09-11 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Антитела к теофиллину и способы их применения |
| WO2014006123A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-biotin antibodies and methods of use |
| SMT202100621T1 (it) | 2012-07-13 | 2022-01-10 | Roche Glycart Ag | Anticorpi bispecifici anti-vegf/anti-ang-2 e loro impiego nel trattamento delle malattie vascolari oculari |
| CN104968682A (zh) | 2013-02-05 | 2015-10-07 | 英格玛布股份公司 | 针对CD3ε和BCMA的双特异性抗体 |
| EP2762496A1 (de) | 2013-02-05 | 2014-08-06 | EngMab AG | Verfahren zur Auswahl von Antikörpern gegen BCMA |
| CA2902561C (en) | 2013-03-15 | 2022-08-02 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Multimerization technologies |
| EP2789630A1 (de) | 2013-04-09 | 2014-10-15 | EngMab AG | Bispezifische Antikörper gegen CD3e und ROR1 |
| CN104341504B (zh) | 2013-08-06 | 2017-10-24 | 百奥泰生物科技(广州)有限公司 | 双特异性抗体 |
| KR20160044060A (ko) | 2013-10-11 | 2016-04-22 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 다중특이적 도메인 교환된 통상의 가변 경쇄 항체 |
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| HRP20200384T1 (hr) | 2013-12-20 | 2020-06-12 | F. Hoffmann - La Roche Ag | Humanizirana anti-tau(ps422) protutijela i načini uporabe |
| KR102278979B1 (ko) | 2014-01-03 | 2021-07-19 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 공유적으로 연결된 헬리카-항-헬리카 항체 접합체 및 그의 용도 |
| JP6521464B2 (ja) | 2014-01-03 | 2019-05-29 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 共有結合で連結されたポリペプチド毒素−抗体コンジュゲート |
| US10561737B2 (en) | 2014-01-03 | 2020-02-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles |
| JOP20200094A1 (ar) | 2014-01-24 | 2017-06-16 | Dana Farber Cancer Inst Inc | جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها |
| JOP20200096A1 (ar) | 2014-01-31 | 2017-06-16 | Children’S Medical Center Corp | جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها |
| LT3116909T (lt) | 2014-03-14 | 2020-02-10 | Novartis Ag | Antikūno molekulės prieš lag-3 ir jų panaudojimas |
| CN106163547A (zh) | 2014-03-15 | 2016-11-23 | 诺华股份有限公司 | 使用嵌合抗原受体治疗癌症 |
| WO2015157629A2 (en) * | 2014-04-10 | 2015-10-15 | Obi Pharma Inc. | Antibodies, pharmaceutical compositions and uses thereof |
| RU2577226C2 (ru) * | 2014-04-10 | 2016-03-10 | Общество с ограниченной ответственностью, "Международный биотехнологический центр "Генериум" ("МБЦ "Генериум") | Способ получения биспецифических антител против cd3*cd19 формата флексибоди в клетках млекопитающих |
| EP2930188A1 (de) | 2014-04-13 | 2015-10-14 | Affimed Therapeutics AG | Trifunktionelles Antigen-bindendes Molekül |
| RU2568910C2 (ru) * | 2014-04-18 | 2015-11-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Международный биотехнологический центр "Генериум" ("МБЦ "Генериум") | Фармацевтические композиции на основе флексибоди против cd3*cd19 для лечения в-клеточных заболеваний |
| AP2016009586A0 (en) | 2014-05-29 | 2016-11-30 | Macrogenics Inc | Tri-specific binding molecules and methods of use thereof |
| AR100978A1 (es) | 2014-06-26 | 2016-11-16 | Hoffmann La Roche | LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS |
| TWI693232B (zh) | 2014-06-26 | 2020-05-11 | 美商宏觀基因股份有限公司 | 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法 |
| US9212225B1 (en) | 2014-07-01 | 2015-12-15 | Amphivena Therapeutics, Inc. | Bispecific CD33 and CD3 binding proteins |
| PE20170286A1 (es) | 2014-07-01 | 2017-03-30 | Pfizer | Diacuerpos heterodimericos biespecificos y sus usos |
| WO2016014530A1 (en) | 2014-07-21 | 2016-01-28 | Novartis Ag | Combinations of low, immune enhancing. doses of mtor inhibitors and cars |
| EP3172237A2 (de) | 2014-07-21 | 2017-05-31 | Novartis AG | Behandlung von krebs mithilfe von humanisiertem chimärem anti-bcma-antigenrezeptor |
| WO2016014553A1 (en) | 2014-07-21 | 2016-01-28 | Novartis Ag | Sortase synthesized chimeric antigen receptors |
| BR112017001242A2 (pt) | 2014-07-21 | 2017-12-05 | Novartis Ag | tratamento de câncer usando um receptor antigênico quimérico a cd33 |
| EP3660042B1 (de) | 2014-07-31 | 2023-01-11 | Novartis AG | T-zellen mit teilmengenoptimierten chimären antigenrezeptoren |
| EP2982693A1 (de) | 2014-08-07 | 2016-02-10 | Affimed Therapeutics AG | CD3 Bindungsdomäne |
| US10851149B2 (en) | 2014-08-14 | 2020-12-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Treatment of cancer using GFR α-4 chimeric antigen receptor |
| TW202140557A (zh) | 2014-08-19 | 2021-11-01 | 瑞士商諾華公司 | 使用cd123嵌合抗原受體治療癌症 |
| WO2016043577A1 (en) | 2014-09-16 | 2016-03-24 | Academisch Medisch Centrum | Ig-like molecules binding to bmp4 |
| MX2017003645A (es) | 2014-09-17 | 2017-05-30 | Novartis Ag | Direccion de celulas citotoxicas con receptores quimericos para inmunoterapia adoptiva. |
| WO2016048938A1 (en) | 2014-09-26 | 2016-03-31 | Macrogenics, Inc. | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd19 and cd3, and uses thereof |
| CA2963692A1 (en) | 2014-10-09 | 2016-04-14 | Engmab Ag | Bispecific antibodies against cd3epsilon and ror1 |
| JP6877339B2 (ja) | 2014-10-14 | 2021-05-26 | ノバルティス アーゲー | Ｐｄ−ｌ１に対する抗体分子およびその使用 |
| TWI880146B (zh) | 2014-11-11 | 2025-04-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 包含經改變之抗體可變區之抗原結合分子的資料庫 |
| JP6721590B2 (ja) | 2014-12-03 | 2020-07-15 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ | 多重特異性抗体 |
| US20180334490A1 (en) | 2014-12-03 | 2018-11-22 | Qilong H. Wu | Methods for b cell preconditioning in car therapy |
| CN104829727B (zh) * | 2015-01-21 | 2019-03-12 | 武汉友芝友生物制药有限公司 | 一种双特异性抗体cd19×cd3的构建及应用 |
| CN104829726B (zh) * | 2015-01-21 | 2019-03-05 | 武汉友芝友生物制药有限公司 | 一种双特异性抗体cd19xcd3的构建及应用 |
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| IL254817B2 (en) | 2015-04-08 | 2023-12-01 | Novartis Ag | Cd20 therapies, cd22 therapies, and combination therapies with a cd19 chimeric antigen receptor (car) - expressing cell |
| US10214574B2 (en) | 2015-04-15 | 2019-02-26 | Ohio State Innovation Foundation | Engineered calmodulin for treatment of ryanopathies |
| EP3286211A1 (de) | 2015-04-23 | 2018-02-28 | Novartis AG | Behandlung von krebs mit chimärem antigenrezeptor- und proteinkinase-a-blocker |
| BR112017025479A2 (pt) | 2015-05-29 | 2018-08-07 | Amphivena Therapeutics Inc | métodos para utilizar proteínas de ligação cd33 e cd3 biespecíficas |
| TWI773646B (zh) | 2015-06-08 | 2022-08-11 | 美商宏觀基因股份有限公司 | 結合lag-3的分子和其使用方法 |
| US10723793B2 (en) * | 2015-06-12 | 2020-07-28 | Ludwig Institute For Cancer Research, Ltd. | TGF-β3 specific antibodies and methods and uses thereof |
| JP6839101B2 (ja) | 2015-06-15 | 2021-03-03 | ヌマブ セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト | ヘテロ二量体多重特異性抗体フォーマット |
| CN113929779B (zh) | 2015-06-24 | 2025-02-25 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 人源化的抗-Tau(pS422)抗体和使用方法 |
| EP3964528A1 (de) | 2015-07-29 | 2022-03-09 | Novartis AG | Kombinationstherapien mit antikörpermolekülen gegen lag-3 |
| EP3878465A1 (de) | 2015-07-29 | 2021-09-15 | Novartis AG | Kombinationstherapien mit antikörpermolekülen gegen tim-3 |
| WO2017019896A1 (en) | 2015-07-29 | 2017-02-02 | Novartis Ag | Combination therapies comprising antibody molecules to pd-1 |
| SG10201906059VA (en) | 2015-07-30 | 2019-08-27 | Macrogenics Inc | Pd-1-binding molecules and methods of use thereof |
| US10683369B2 (en) | 2015-08-03 | 2020-06-16 | Engmab Sàrl | Monoclonal antibodies against BCMA |
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| EP3156417A1 (de) * | 2015-10-13 | 2017-04-19 | Affimed GmbH | Multivalente fv antikörper |
| RU2651776C2 (ru) * | 2015-12-01 | 2018-04-23 | Общество с ограниченной ответственностью "Международный биотехнологический центр "Генериум" ("МБЦ "Генериум") | Биспецифические антитела против cd3*cd19 |
| CR20180318A (es) | 2015-12-14 | 2018-09-19 | Macrogenics Inc | Moléculas biespecíficas que tienen inmunorreactividad con pd-1 y ctla-4, y métodos de uso de las mismas |
| EP3389713A2 (de) | 2015-12-17 | 2018-10-24 | Novartis AG | Kombination von c-met-inhibitor mit antikörpermolekül zu pd-1 und verwendungen davon |
| EP4424322A3 (de) | 2015-12-17 | 2025-04-16 | Novartis AG | Antikörpermoleküle gegen pd-1 und verwendungen davon |
| US11413340B2 (en) | 2015-12-22 | 2022-08-16 | Novartis Ag | Mesothelin chimeric antigen receptor (CAR) and antibody against PD-L1 inhibitor for combined use in anticancer therapy |
| JP6983808B2 (ja) * | 2016-01-08 | 2021-12-17 | メディトープ バイオサイセンシーズ インク.Meditope Biosciences, Inc. | 自己架橋性抗体 |
| ES2847155T3 (es) | 2016-01-21 | 2021-08-02 | Novartis Ag | Moléculas multiespecíficas que fijan como objetivo CLL-1 |
| WO2017142928A1 (en) | 2016-02-17 | 2017-08-24 | Macrogenics, Inc. | Ror1-binding molecules, and methods of use thereof |
| AU2017225733A1 (en) | 2016-03-04 | 2018-09-27 | Novartis Ag | Cells expressing multiple chimeric antigen receptor (CAR) molecules and uses therefore |
| US20170260286A1 (en) | 2016-03-10 | 2017-09-14 | The General Hospital Corporation | Antigen-Binding Fusion Proteins with Modified HSP70 Domains |
| US11549099B2 (en) | 2016-03-23 | 2023-01-10 | Novartis Ag | Cell secreted minibodies and uses thereof |
| CA3021027A1 (en) | 2016-04-15 | 2017-10-19 | Novartis Ag | Compositions and methods for selective expression of chimeric antigen receptors |
| CR20180484A (es) | 2016-04-15 | 2019-03-05 | Macrogenics Inc | Moléculas de unón b7-h3 novedosas, conjugados anticuerpos-fármaco de los mismos y métodos de uso de los mismos |
| US20210177896A1 (en) | 2016-06-02 | 2021-06-17 | Novartis Ag | Therapeutic regimens for chimeric antigen receptor (car)- expressing cells |
| CN110461315B (zh) | 2016-07-15 | 2025-05-02 | 诺华股份有限公司 | 使用与激酶抑制剂组合的嵌合抗原受体治疗和预防细胞因子释放综合征 |
| TW201806619A (zh) | 2016-07-28 | 2018-03-01 | 瑞士商諾華公司 | 嵌合抗原受體及pd-1抑制劑之組合療法 |
| CA3032581A1 (en) | 2016-08-01 | 2018-02-08 | Novartis Ag | Treatment of cancer using a chimeric antigen receptor in combination with an inhibitor of a pro-m2 macrophage molecule |
| MY200337A (en) | 2016-10-07 | 2023-12-20 | Novartis Ag | Nucleic acid molecules encoding chimeric antigen receptors comprising a cd20 binding domain |
| MX2019004621A (es) | 2016-11-02 | 2019-11-28 | Engmab Sarl | Anticuerpo biespecifico contra bcma y cd3 y un farmaco inmunologico para uso combinado en el tratamiento del mieloma multiple. |
| CA3045857A1 (en) | 2016-12-22 | 2018-06-28 | Universita Degli Studi Magna Graecia Catanzaro | A monoclonal antibody targeting a unique sialoglycosilated cancer-associated epitope of cd43 |
| KR102630036B1 (ko) | 2016-12-23 | 2024-01-29 | 마크로제닉스, 인크. | Adam9-결합 분자, 및 이것의 사용 방법 |
| EP4043485A1 (de) | 2017-01-26 | 2022-08-17 | Novartis AG | Cd28-zusammensetzungen und verfahren für chimäre antigenrezeptortherapie |
| EP4389226A3 (de) | 2017-02-24 | 2024-12-18 | MacroGenics, Inc. | Bispezifische, zur bindung von cd137- und tumorantigenen fähige bindungsmoleküle und verwendungen davon |
| EP3589647A1 (de) | 2017-02-28 | 2020-01-08 | Novartis AG | Shp-inhibitor-zusammensetzungen und verwendungen zur chimären antigenrezeptortherapie |
| EP3615068A1 (de) | 2017-04-28 | 2020-03-04 | Novartis AG | Auf bcma abzielender wirkstoff und kombinationstherapie mit einem gamma-sekretase-inhibitor |
| EP3615055A1 (de) | 2017-04-28 | 2020-03-04 | Novartis AG | Zellen, die einen auf bcma abzielenden chimären antigenrezeptor exprimieren, und kombinationsbehandlung mit einem gamma-sekretase-inhibitor |
| WO2018224443A1 (en) | 2017-06-05 | 2018-12-13 | Numab Innovation Ag | Hetero-dimeric multi-specific antibody format targeting at least cd3 and hsa |
| US11312783B2 (en) | 2017-06-22 | 2022-04-26 | Novartis Ag | Antibody molecules to CD73 and uses thereof |
| KR20200022447A (ko) | 2017-06-27 | 2020-03-03 | 노파르티스 아게 | 항-tim-3 항체의 투여 요법 및 그의 용도 |
| CA3069438A1 (en) | 2017-07-11 | 2019-01-17 | Compass Therapeutics Llc | Agonist antibodies that bind human cd137 and uses thereof |
| KR20200031659A (ko) | 2017-07-20 | 2020-03-24 | 노파르티스 아게 | 항-lag-3 항체의 투여 요법 및 그의 용도 |
| WO2019089798A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Novartis Ag | Anti-car compositions and methods |
| WO2019089753A2 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Compass Therapeutics Llc | Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof |
| CA3081602A1 (en) | 2017-11-16 | 2019-05-23 | Novartis Ag | Combination therapies |
| US11851497B2 (en) | 2017-11-20 | 2023-12-26 | Compass Therapeutics Llc | CD137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof |
| US11952422B2 (en) | 2017-12-05 | 2024-04-09 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecule comprising altered antibody variable region binding CD3 and CD137 |
| US11795226B2 (en) | 2017-12-12 | 2023-10-24 | Macrogenics, Inc. | Bispecific CD16-binding molecules and their use in the treatment of disease |
| EP3737692A4 (de) | 2018-01-09 | 2021-09-29 | Elstar Therapeutics, Inc. | Calreticulin-bindende konstrukte und gentechnisch veränderte t-zellen zur behandlung von krankheiten |
| US10561686B2 (en) | 2018-01-12 | 2020-02-18 | Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. | Modified cell expansion and uses thereof |
| CN112088008B (zh) * | 2018-01-11 | 2024-01-02 | 浙江煦顼技术有限公司 | 修饰细胞的扩增及其用途 |
| US20210038659A1 (en) | 2018-01-31 | 2021-02-11 | Novartis Ag | Combination therapy using a chimeric antigen receptor |
| CN111787949A (zh) | 2018-02-15 | 2020-10-16 | 宏观基因有限公司 | 变体cd3-结合结构域及其在用于治疗疾病的组合疗法中的用途 |
| WO2019178362A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof |
| US20210147547A1 (en) | 2018-04-13 | 2021-05-20 | Novartis Ag | Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof |
| US10869888B2 (en) | 2018-04-17 | 2020-12-22 | Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. | Modified cell expansion and uses thereof |
| US20210047405A1 (en) | 2018-04-27 | 2021-02-18 | Novartis Ag | Car t cell therapies with enhanced efficacy |
| JP2021525243A (ja) | 2018-05-21 | 2021-09-24 | コンパス セラピューティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー | Ｎｋ細胞による標的細胞の殺傷を増進するための組成物および方法 |
| WO2019226658A1 (en) | 2018-05-21 | 2019-11-28 | Compass Therapeutics Llc | Multispecific antigen-binding compositions and methods of use |
| EP3801769A1 (de) | 2018-05-25 | 2021-04-14 | Novartis AG | Kombinationstherapie mit therapien mit chimärem antigen-rezeptor (car) |
| WO2019232244A2 (en) | 2018-05-31 | 2019-12-05 | Novartis Ag | Antibody molecules to cd73 and uses thereof |
| EP3806962A1 (de) | 2018-06-13 | 2021-04-21 | Novartis AG | Bcma-chimäre antigenrezeptoren und verwendungen davon |
| PE20210418A1 (es) | 2018-06-19 | 2021-03-08 | Atarga Llc | Moleculas de anticuerpo de componente de complemento 5 y sus usos |
| CN112955465A (zh) | 2018-07-03 | 2021-06-11 | 马伦戈治疗公司 | 抗tcr抗体分子及其用途 |
| AR116109A1 (es) | 2018-07-10 | 2021-03-31 | Novartis Ag | Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos |
| WO2020021465A1 (en) | 2018-07-25 | 2020-01-30 | Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. | Method of treatment of neuroendocrine tumors |
| MX2021000827A (es) | 2018-08-03 | 2021-03-25 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Molecula de union a antigeno que contiene dos dominios de union a antigeno que estan enlazados entre si. |
| US12240915B2 (en) | 2018-08-30 | 2025-03-04 | Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. | Chimeric antigen receptor cells for treating solid tumor |
| JP2022501325A (ja) | 2018-09-28 | 2022-01-06 | 中外製薬株式会社 | 改変された抗体可変領域を含む抗原結合分子 |
| MX2021004774A (es) | 2018-10-29 | 2021-08-24 | Hoffmann La Roche | Formulacion de anticuerpos. |
| WO2020089437A1 (en) | 2018-10-31 | 2020-05-07 | Engmab Sàrl | Combination therapy |
| MX2021005155A (es) * | 2018-11-01 | 2021-09-30 | Shandong New Time Pharmaceutical Co Ltd | Anticuerpo biespecífico y uso del mismo. |
| EP3877399A4 (de) | 2018-11-06 | 2022-10-19 | Alsatech, Inc. | Zellbasierte gentherapie für neurodegenerative erkrankungen |
| BR112021008795A2 (pt) | 2018-11-13 | 2021-08-31 | Compass Therapeutics Llc | Construtos de ligação multiespecíficos contra moléculas de ponto de verificação e seus usos |
| US10918667B2 (en) | 2018-11-20 | 2021-02-16 | Innovative Cellular Therapeutics CO., LTD. | Modified cell expressing therapeutic agent and uses thereof |
| EP3897637A1 (de) | 2018-12-20 | 2021-10-27 | Novartis AG | Dosierungsschema und pharmazeutische kombination mit 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidin-2,6-dion-derivaten |
| EP3897647B1 (de) | 2018-12-20 | 2023-11-01 | Novartis AG | Kombinationen aus einem hdm2-p53-interaktionsinhibitor und einem bcl2-inhibitor und deren verwendung zur behandlung von krebs |
| ES2982474T3 (es) | 2019-02-15 | 2024-10-16 | Novartis Ag | Derivados de 3-(1-oxoisoindolin-2-il)piperidin-1,6-diona sustituidos y usos de estos |
| US10871640B2 (en) | 2019-02-15 | 2020-12-22 | Perkinelmer Cellular Technologies Germany Gmbh | Methods and systems for automated imaging of three-dimensional objects |
| CN113490528B (zh) | 2019-02-15 | 2024-12-03 | 诺华股份有限公司 | 3-(1-氧代-5-(哌啶-4-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途 |
| CN114026122B (zh) | 2019-02-21 | 2024-12-31 | 马伦戈治疗公司 | 结合t细胞相关癌细胞的多功能分子及其用途 |
| WO2020172605A1 (en) | 2019-02-21 | 2020-08-27 | Elstar Therapeutics, Inc. | Antibody molecules that bind to nkp30 and uses thereof |
| WO2020172553A1 (en) | 2019-02-22 | 2020-08-27 | Novartis Ag | Combination therapies of egfrviii chimeric antigen receptors and pd-1 inhibitors |
| EP3946593A1 (de) | 2019-03-29 | 2022-02-09 | Atarga, LLC | Antikörper gegen fgf23 |
| KR20250156861A (ko) | 2019-05-21 | 2025-11-03 | 노파르티스 아게 | Cd19 결합 분자 및 이의 용도 |
| US20220372159A1 (en) | 2019-07-01 | 2022-11-24 | Julius-Maximilians-Universitaet-Wuerzburg | Treatment and Prevention of Ischemic Diseases And/Or Ischemic Tissue Damages |
| BR112022007179A2 (pt) | 2019-10-21 | 2022-08-23 | Novartis Ag | Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos |
| IL292347A (en) | 2019-10-21 | 2022-06-01 | Novartis Ag | Combination treatments with ventoclax and tim-3 inhibitors |
| CA3163104A1 (en) | 2019-11-26 | 2021-06-03 | Novartis Ag | Chimeric antigen receptors and uses thereof |
| IL293889A (en) | 2019-12-20 | 2022-08-01 | Novartis Ag | Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases |
| EP4084823A4 (de) | 2020-01-03 | 2024-05-15 | Marengo Therapeutics, Inc. | Anti-tcr-antikörpermoleküle und ihre verwendungen |
| WO2021146636A1 (en) | 2020-01-17 | 2021-07-22 | Becton, Dickinson And Company | Methods and compositions for single cell secretomics |
| WO2021144657A1 (en) | 2020-01-17 | 2021-07-22 | Novartis Ag | Combination comprising a tim-3 inhibitor and a hypomethylating agent for use in treating myelodysplastic syndrome or chronic myelomonocytic leukemia |
| WO2021163364A1 (en) * | 2020-02-12 | 2021-08-19 | Abbvie Biotechnology Ltd. | Trispecific binding molecules |
| US12076343B2 (en) | 2020-02-19 | 2024-09-03 | Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. | Engineered safety in cell therapy |
| CA3170330A1 (en) | 2020-02-21 | 2021-08-26 | Macrogenics, Inc. | Cd137 binding molecules and uses thereof |
| MX2022010685A (es) | 2020-02-27 | 2022-09-23 | Novartis Ag | Metodos de produccion de celulas que expresan receptores de antigeno quimericos. |
| PE20230077A1 (es) | 2020-03-31 | 2023-01-11 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Moleculas de union al antigeno multiespecificas dirigidas a ligando de tipo delta 3 (dll3) y sus usos |
| EP3892720A1 (de) * | 2020-04-06 | 2021-10-13 | Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. | Präsentierende zelle und deren verwendung in der zelltherapie |
| US20230201258A1 (en) * | 2020-04-23 | 2023-06-29 | Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. | Polyspecific Binding Molecules and their use in Cell Therapy |
| US12043654B2 (en) | 2020-06-02 | 2024-07-23 | Innovative Cellular Therapeutics Holdings, Ltd. | Anti-GCC antibody and CAR thereof for treating digestive system cancer |
| CA3184351A1 (en) * | 2020-06-04 | 2021-12-09 | Amgen Inc. | Bispecific binding constructs |
| WO2021260528A1 (en) | 2020-06-23 | 2021-12-30 | Novartis Ag | Dosing regimen comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives |
| WO2022010798A1 (en) | 2020-07-06 | 2022-01-13 | Kiromic BioPharma, Inc. | Mesothelin isoform binding molecules and chimeric pd1 receptor molecules, cells containing the same and uses thereof |
| MX2023000547A (es) | 2020-07-16 | 2023-02-13 | Novartis Ag | Anticuerpos anti-betacelulina, fragmentos de los mismos, y moleculas de union multiespecificas. |
| WO2022026592A2 (en) | 2020-07-28 | 2022-02-03 | Celltas Bio, Inc. | Antibody molecules to coronavirus and uses thereof |
| WO2022029573A1 (en) | 2020-08-03 | 2022-02-10 | Novartis Ag | Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof |
| KR20230166150A (ko) | 2020-08-19 | 2023-12-06 | 젠코어 인코포레이티드 | 항-cd28 조성물 |
| EP4204021A1 (de) | 2020-08-31 | 2023-07-05 | Advanced Accelerator Applications International S.A. | Verfahren zur behandlung von psma-exprimierenden krebsarten |
| EP4204020A1 (de) | 2020-08-31 | 2023-07-05 | Advanced Accelerator Applications International S.A. | Verfahren zur behandlung von psma-exprimierenden krebsarten |
| WO2022097065A2 (en) | 2020-11-06 | 2022-05-12 | Novartis Ag | ANTIBODY Fc VARIANTS |
| JP2023549504A (ja) | 2020-11-13 | 2023-11-27 | ノバルティス アーゲー | キメラ抗原受容体（ｃａｒ）発現細胞との組合せ療法 |
| CA3202233A1 (en) | 2020-11-18 | 2022-05-27 | Kiromic BioPharma, Inc. | Gamma-delta t cell manufacturing processes and chimeric pd1 receptor molecules |
| US20240141060A1 (en) | 2021-01-29 | 2024-05-02 | Novartis Ag | Dosage regimes for anti-cd73 and anti-entpd2 antibodies and uses thereof |
| TW202304979A (zh) | 2021-04-07 | 2023-02-01 | 瑞士商諾華公司 | 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途 |
| AR125874A1 (es) | 2021-05-18 | 2023-08-23 | Novartis Ag | Terapias de combinación |
| US20250223376A1 (en) | 2021-09-20 | 2025-07-10 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer |
| WO2023092004A1 (en) | 2021-11-17 | 2023-05-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of tau-related disorders |
| WO2023133357A2 (en) * | 2022-01-10 | 2023-07-13 | Expression Therapeutics, Llc | Engineered t cells |
| WO2023150778A1 (en) | 2022-02-07 | 2023-08-10 | Visterra, Inc. | Anti-idiotype antibody molecules and uses thereof |
| CA3252619A1 (en) | 2022-02-23 | 2023-08-31 | Xencor, Inc. | Anti-CD28 and anti-PSMA antibodies |
| US20250295809A1 (en) | 2022-05-13 | 2025-09-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer |
| EP4565597A2 (de) | 2022-08-03 | 2025-06-11 | Voyager Therapeutics, Inc. | Zusammensetzungen und verfahren zur durchquerung der blut-hirn-schranke |
| JP2025539364A (ja) * | 2022-11-22 | 2025-12-05 | エクスプレッション セラピューティクス， エルエルシー | 遺伝子操作ｔ細胞 |
| WO2024151784A1 (en) * | 2023-01-10 | 2024-07-18 | Expression Therapeutics, Llc | Engineered t cells |
| WO2024168061A2 (en) | 2023-02-07 | 2024-08-15 | Ayan Therapeutics Inc. | Antibody molecules binding to sars-cov-2 |
| WO2025059162A1 (en) | 2023-09-11 | 2025-03-20 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Car-engager containing il-2 variants to enhance the functionality of car t cells |
| WO2025122634A1 (en) | 2023-12-05 | 2025-06-12 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of tau-related disorders |
| WO2025129010A1 (en) | 2023-12-14 | 2025-06-19 | Genentech, Inc. | Methods of structure determination using antibodies |
| CN119529105A (zh) * | 2024-11-28 | 2025-02-28 | 北京绿竹生物技术股份有限公司 | 一种结合人CD19、CD3和FcγR的多功能抗体 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2062582C (en) * | 1991-03-27 | 1996-03-26 | Tse-Wen Chang | Methods and substances for recruiting therapeutic agents to solid tissues |
| US6025165A (en) * | 1991-11-25 | 2000-02-15 | Enzon, Inc. | Methods for producing multivalent antigen-binding proteins |
| US20080152586A1 (en) * | 1992-09-25 | 2008-06-26 | Avipep Pty Limited | High avidity polyvalent and polyspecific reagents |
| DE19816141A1 (de) * | 1998-04-09 | 1999-10-14 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Einzelkettiges, mehrfach-antigenbindendes Molekül, dessen Herstellung und Verwendung |
| DE19819846B4 (de) * | 1998-05-05 | 2016-11-24 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Multivalente Antikörper-Konstrukte |
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