DE4308443C2 - Arzneimittel zur Behandlung von Retrovirusinfektionen - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft Arzneimittel zur Behandlung von Retro­ virusinfektionen.

Retroviren sind kugelförmige umhüllte RNA-Viren, von denen zwei Subfamilien human- und tierpathogen sind. Kennzeichen der Retroviren ist die reverse Transkriptase, eine RNA-ab­ hängige DNA-Polymerase. Bei der Replikation wird die ein­ strängige Virus-RNA von der reversen Transkriptase in eine doppelsträngige DNA-Zwischenstufe transkribiert und diese wird als Provirus in das Genom der Wirtszelle eingebaut. Vom Provirus aus wird durch eine reguläre Transkription die Bildung RNA-haltiger Viruspartikel eingeleitet, die die Wirts­ zelle nach Knospung verlassen. Retroviren verursachen Leukämien, Autoimmunkrankheiten sowie Immundepressionen, und zwar bei Menschen insbesondere Aids und ARS, nämlich Aids Related Syndrome, die Vorstufe zum vollen Krankheitsbild von Aids. Eine Heilung von Retrovirusinfektionen bei Menschen ist bis heutehin nicht möglich, da bisher alle Versuche, einen Impfstoff gegen das Virus zu entwickeln, wegen dessen sehr hoher Mutationsgeschwindigkeit gescheitert sind. Therapeutisch werden Medikamente bisher verwendet, die die reverse Trans­ kriptase hemmen, hierbei handelt es sich meist um substitu­ ierte Desoxynucleoside von Guanosin, Cytitin und Thymidin. Bisher bekanntester Wirkstoff ist das AZT, das allerdings auch nur in der Lage ist, die Symptome einer Retrovirusin­ fektion deutlich zu verzögern, nicht aber die Krankheit zu heilen.

Völlig überraschend wurde jetzt festgestellt, daß an sich bekannte bakterien- und eiweißfreie Extrakte aus Escherichia coli, ggf. in Kombination mit Extrakten aus Ginkgo biloba in der Lage sind, die Entwicklung von Retrovirusinfektionen deutlich zu verlangsamen, ohne die bisher von den Nukleosid­ therapeutika bekannten Nebenwirkungen aufzuweisen. Die Coli- Extrakte können zusammen mit den Ginkgo-Extrakten als solche eingesetzt werden, es ist aber auch möglich, die Extrakte mit einer Therapie mit Nukleosidtherapeutika zu kombinieren, wobei eine Verringerung der Dosis der Nukleoside und damit auch der zu erwartenden Nebenwirkungen möglich ist.

Extrakte aus den Blättern von Ginkgo biloba werden bereits seit geraumer Zeit für die Therapie von peripheren und zere­ bralen arteriellen Durchblutungsstörungen eingesetzt. Verfahren zur Herstellung von Ginkgo-Extrakten aus grünen Blättern sind beispielsweise aus der DE-PS 17 67 098, DE-PS 21 17 429 sowie in der EP-A 0 324 197, aus der EP-A 0 330 567 und aus der DE-OS 39 40 091 bekannt. Ein weiteres Verfahren zur Extrahierung von gelben Herbstblättern von Ginkgo biloba ist in der EP-B 0 352 146 beschrieben.

Die Blätter von Ginkgo biloba enthalten eine Reihe von unter­ schiedlichen Verbindungen, bei denen die sogenannten Ginkgo­ flavonglykoside überwiegen. Ein typischer Vertreter dieser Substanzklasse ist das 5,7,3′4′-Tetrahydroxy-Flavono-3-O-α rhamnopyranosyl-4-O-β-D-(6′′′-transcumaroyl)-glycopyranosid. in geringeren Mengen sind Terpenlactone enthalten wie bei­ spielsweise die Ginkgolide, die beispielsweise von Okabe et al., J. Chem. SOC (1967), 2201-2206 näher beschrieben wurden. Eng verwandt mit den Terpenlactonen ist auch das Bilobalid, dessen Verwendung zur Behandlung von Neuropathien und ähnlichen Erkrankungen aus der US-PS 4571407 bekannt ist.

Des weiteren enthalten Blätter von Ginkgo biloba noch die sogenannten Ginkgol-Säuren, bei denen es sich um 6-Alkyl­ alicylsäuren handelt, die über Alkylreste mit 13-19 C- Atomen und 0-3 Doppelbindungen verfügen. Aus diesen Ginkgol­ säuren kann biogenetisch oder bei der Aufarbeitung der Blät­ ter das jeweils entsprechend substituierte Phenol entste­ hen, das als allergisierend bekannt ist. Die Herstellungs­ verfahren für die Extrakte unterscheiden sich daher im we­ sentlichen dadurch, daß versucht wird, die unerwünschten Inhalts- oder Begleitstoffe soweit wie möglich zu eliminie­ ren, insbesondere, wenn die Extrakte später in injizierbarer Form angewendet werden sollen. Dem Fachmann stehen aber aus der bekannten Literatur eine Reihe von Verfahren zur Verfü­ gung, um unerwünschte Inhaltsstoffe abzutrennen. Die heute im Handel erhältlichen Ginkgo-Extrakte sind daher in der Regel auch in injizierbarer Form gut verträglich; solche Produkte werden beispielsweise von der Firma Dr. Wilmar Schwa­ be GmbH & Co. in D-7500 Karlsruhe unter der Marke "Tebonin" in den Handel gebracht.

Die EP-B-0 352 146 erwähnt bereits, daß Extrakte aus den gelben Blättern von Ginkgo biloba in der Lage wären, einen erhöhten Spiegel an Gammaglobulinen bei Säugetieren zu redu­ zieren, wie er beispielsweise auch bei Aidskranken zu beobach­ ten ist. Nähere Einzelheiten darüber, ob und mit welchem Erfolg dieser Extrakt tatsächlich bei Aids eingesetzt wer­ den kann, ergeben sich aber nicht als dieser Veröffentlichung.

Auch in der EP-A 373 986 wird die Verwendung spezieller Komponenten aus Ginkgo-Extrakten zur Behandlung von Viruserkrankungen einschließlich solcher durch Retrovieren hervorgerufener Krankheiten wie Aids erwähnt. Darüber hinaus wird in der EP-A3-359 951 eine Wirksamkeit von Ginkgo-Extrakten bei metastatischen Krebserkrankungen angegeben.

Bakterien- und eiweißfreie Filtrate aus Escherichia coli Kulturen werden schon seit langem therapeutische verwendet, und zwar einerseits bei Motilitäts- oder Permeabilitätsstörungen der Darmschleimhaut, aber auch bei Entzündungen wie Morbus Crohn oder nach Antibiotika-, Chemo- oder Strahlentherapie. Ein anderes Anwendungsgebiet der Coli-Extrakte sind Allergien wie Heuschnupfen, Urtikaria, Ekzem, Nahrungsmittelallergien und Asthma. Schließlich hat sich auch ein weiteres therapeu­ tisches Anwendungsgebiet bei Akne und Migräne ergeben und darüber hinaus sind diese Extrakte, wie in der DE-PS 38 16 298 beschrieben, anabol wirksam und führen zu einer Stimula­ tion der nicht erregerspezifischen Immunabwehr. Herstellungs­ verfahren sind unter anderen auch in der DE-PS 38 16 298 beschrieben. Die bakterien- und eiweißfreien Extrakte aus Escherichia coli enthalten relativ kurzkettige Oligopeptide und, wie sich aus den Untersuchungen in Drug Res. 23, 829-830 (1973) ergibt, einen Polysacharidanteil aus überwiegend Glukose, Galaktose und Xylose sowie einen geringen Anteil an Fettsäuren. Nucleinsäuren konnten jedoch nicht nachgewie­ sen werden. Auffallend ist, daß die bisherigen quantitativen Untersuchungen an diesen Peptiden das Fehlen von aromatischen Aminosäuren mit Ausnahme von Histidin bestätigt haben.

Derartige zell- und eiweißfreie Extrakte aus Escherichia coli Kulturen können peroral oder auch als Injektion verab­ reicht werden. Entsprechende Präparate sind beispielsweise von der Fa. Laves Arzneimittel GmbH, Barbarastr. 14, 3003 Ronnenberg unter der Marke "Colibiogen" im Handel.

Ein gemeinsamer Einsatz von zell- und eiweißfreien Extrakten aus E.coli und Ginkgo biloba-Extrakten zur Erzielung einer antineoplastischen Wirkung mittels Stimulierung der Leukozytenproliferation und zur Erzielung eines knochenmarkprotektiven Effektes ist in der WO 92/14 478 beschrieben. Die Verwendbarkeit von derartigen Coli-Extrakten, ggf. zusammen mit Ginkgo biloba-Extrakten gegen Retrovirusinfektionen und insbesondere Aids war aber bisher nicht bekannt.

Die Wirkung von Coli-Extrakten, insbesondere in Kombination mit Ginkgo-Extrakten bei Retrovirusinfektionen läßt sich zur Zeit wissenschaftlich noch nicht eindeutig erklären. Klinische Versuche haben allerdings deutlich gezeigt, daß sich unter dieser Medikation der Allgemeinzustand der Patienten verbessert und daß sich der Anteil an T₄-Lymphozyten erhält oder sogar meist eindeutig erhöht. Nach einer vor kurzem entwickelten Arbeitshypothese beruht der zu beobachtende Ausfall der spezifischen Immunabwehr vermutlich darauf, daß die Infektionen mit Retroviren zu einer Abnahme der T₄-Lympho­ zyten und später auch zu einer Abnahme der T₈-Lymphozyten führt. Eine hierauf beruhende Überproduktion von "ungerichteten" Immunglobulinen durch B-Lymphyzyten soll dann zu einer Schwächung der spezifischen Immunabwehr und zu deren Zusam­ menbruch beitragen. Es gibt aus den klinischen Beobachtungen Gründe für die Annahme, daß die Wirkstoffe im Coli- und Ginkgo- Extrakt die zunehmende Produktion von "ungerichteten" Immun­ globulinen reduzieren bzw. verhindern.

Außerdem hat sich herausgestellt, daß bei Gabe von Coli- und Ginkgo-Extrakten eine Reduzierung der Dosis von retroviren­ spezifischen Arzneimitteln erfolgen kann, womit die Gefahr von Nebenwirkungen, insbesondere sekundären Anämien wesent­ lich verkleinert wird. Die Dosisreduzierung scheint nur zum Teil mit einer besseren Ansprechbarkeit auf Nukleosidtherapeu­ tika begründet zu sein. In wieweit durch die Kombination auch andere biochemische Mechanismen angesprochen werden, ist noch ungeklärt.

Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können peroral, vorzugswei­ se aber als Injektion verabreicht werden. Es hat sich herausge­ stellt, daß Coli- und Ginkgo-Extrakte zusammen mit dem Nukleosid­ therapeutika gegeben werden können, daß es aber andererseits auch Vorzüge aufweist, wenn der Coli- bzw. Ginkgo-Extrakt zeitlich vor der Gabe des Nukleosidtherapeutikums eingesetzt wird, wobei diese zeitliche Verschiebung einige Stunden bis 1-2 Tage betragen kann. Die Erfindung betrifft daher auch einen sogenannten Kit, der die einzelnen Wirkstoffe für die perorale oder parenterale Gabe in räumlich getrennter Form enthält.

Die Dosierung beträgt für die Dosiseinheit beim Coli-Extrakt eiweiß- und zellfreie Stoffwechselprodukte aus etwa 4-9× 10¹² Keimen, während beim Ginkgo-Extrakt die Dosiseinheit etwa 50-200 mg Trockenextrakt enthält. Die Tagesdosis muß für jeden Patienten individuell eingestellt werden. Auch bei Langzeitbehandlung sind bisher keine Nebenwirkungen festgestellt worden.

Die Erfindung wird im folgenden anhand der Beispiele näher erläutert:

Herstellungsbeispiel 1

Die Herstellung des Coli-Extraktes erfolgte nach dem in der DE-PS 38 16 298 näher beschriebenen Verfahren, indem Bouil­ lonkulturen mit einem Stamm der gewünschten E. coli-Serotype beimpft und mindestens 5 Tage bei 37°C bebrütet werden. Vorzugs­ weise wird der Serotyp 02:K1:K6 eingesetzt. Aus dieser Bouil­ lonkultur mit etwa 4 bis 9 × 10¹² koloniebildenden Einheiten/ml werden dann in an sich bekannter Weise unter sterilen Bedingungen bakterien- und eiweißfreie Filtrate hergestellt, die entweder in an sich bekannter Weise zu Injektionslösungen weiterverarbei­ tet oder als solche zur peroralen Medikation eingesetzt werden können. Außerdem können die Extrakte durch schonende Vakuumtrock­ nung vom Wasser befreit und in an sich bekannter Weise zu Kapseln oder Tabletten verarbeitet werden.

Herstellungsbeispiel 2

Zur Herstellung des Ginkgo-Extraktes werden grüne oder gelbe Blätter von Ginkgo biloba fein zerkleinert und in an sich bekannter Weise mit wäßrigem Azeton oder Ethanol, insbesondere eine Mischung von Wasser mit Azeton oder Ethanol im Verhältnis 50 : 50 mehrere Stunden bei Temperaturen zwischen etwa 40-60° extrahiert. Nach der Extraktion wird Flüssigkeit von den Blättern abgepreßt, die nochmals einer weiteren Extraktion unterzogen werden können. Der erhaltene wäßrige Extrakt wird in einer ersten Reinigungsstufe mit einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel, vorzugsweise Cyclohexan, extrahiert. Die wäßrig-ketonische Phase wird dann weiterverarbeitet, die unpolare Phase wird verworfen. Die wäßrig-ketonische Phase wird dann auf etwa die Hälfte ihres Volumens eingeengt und der ausgefallene Niederschlag abfiltriert. Die filtrierte Lösung wird in bekannter Weise mit Ammonsulfat versetzt und mit Butanol extrahiert. Der erhaltene Extrakt wird nach dem Trocknen über Natriumsulfat unter verminderten Druck einge­ engt und abschließend mit Ethanol erschöpfend extrahiert. Dieser Rückstand wird dann unter Vakuum zur Trocknung einge­ engt.

Dieser Extrakt, der nunmehr in üblicher Weise konfektioniert werden kann, enthält im Mittel, das je nach Herkunft und Alter der Blätter um etwa 10% nach oben oder nach unten schwanken kann, etwa 25% Ginkgoflavonglykoside und etwa 5% Terpenlactone.

Beispiel 1

Die bisherigen klinischen Versuche zeigen, daß Patienten mit ARS bei täglich oraler Gabe von einem Teelöffel Coli- Extrakt peroral oder von einer Injektion Coli-Extrakt in 2 Tagen bereits eine deutliche Besserung des Allgemeinbefin­ dens und ein Anstieg der T₄-Lymphozyten-Population zeigten. Wenn zusätzlich zu dem Coli-Extrakt jeweils eine Ampulle des Ginkgo-Extraktes mit einem Trockenextraktgehalt von 50 mg gegeben wurde, konnte selbst in schwereren Fällen ein Anstieg der T₄-Lymphozytenzahl auf über 400/µl erreicht werden. Bei zusätzlicher Gabe von Coli- und Ginkgo-Extrakten unter der Therapie mit Nukleosidtherapeutika wurden deutlich weniger subjektive und objektive Nebenwirkungen beobachtet, so daß bei einer Dauertherapie jetzt erstmals eine Dosisreduzierung vorgenommen werden konnte.

Beispiel 2

Fünf Patienten mit Aids im Stadium CDC-B und -C wurden 2 × pro Woche mit 10 ml Colibiogen als halbstündige iv Infusion in 200 ml isotonischer Kochsalzlösung über sechs Wochen als Monotherapie behandelt. Die Verträglichkeit wurde mit gut bis sehr gut beurteilt. Nebenwirkungen traten nicht auf.

Während des Behandlungszeitraumes traten keine Fieberepisoden, Diarrhoen oder Infektionen auf. Eine Hospitalisierung war in keinem Fall notwendig. Hinsichtlich der Laborbefunde wurde ein prozentualer Anstieg der Leukozyten, Thrombozyten, B- und T-Zellen festgestellt. Der Anstieg der T-Zellen nach zwei Wochen betrug + 50,7%, nach vier Wochen + 52,5% und nach sechs Wochen + 94,4% im Durchschnitt.

Beispiel 3

16 Patienten mit dem Vollbildaids im Stadium CDU und CD-D wurden 2 × pro Woche mit 10 ml Colibiogen als i.v. Infusion und zusätzlich 1 × pro Woche mit einer Ampulle Tebonin Austroplant 87,5 ml seit Mai 1994 in Dauertherapie behandelt. Der durchschnittliche Anstieg der T₄ Lymphozyten betrug im Durchschnitt während der ausgewerteten 15-monatigen Behandlungszeit 25,2%. Das Verhältnis OKT₄ + zu OKT₈ + konnte bei sieben Patienten über den kritischen Wert von 0,5 gesteigert werden.

Claims (5)

1. Verwendung eines bakterien- und eiweißfreien Extraktes, der aus Escherichia Coli-Kulturen erhältlich ist, zur Behandlung von Retrovirusinfektionen.

2. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß zusätzlich Extrakte aus den Blättern der Pflanze Ginkgo biloba verwendet werden.

3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß zusätzlich ein Chemotherapeutikum gegen Retrovirusinfetionen verwendet wird.

4. Verwendung nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Extrakte getrennt eingesetzt werden.

5. Verwendung nach den Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß der E.coli- und Ginkgo biloba-Extrakt zeitlich vor dem Chemotherapeutikum verwendet wird.