DE2805408A1 - Everinomicinderivate, verfahren zu ihrer herstellung und sie enthaltende arzneimittel - Google Patents

Description

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Scherico Ltd., Töpferstr. 5, Luzern/Schweiz

Everinomicxnderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und sie enthaltende Arzneimittel

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Die Erfindung betrifft Everninomicinderivate und ihre Herstellung. Die Erfindung ist insbesondere auf neue N-substituierte und N-unsubstituierte Aminoeverninomicine B, C und D, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Derivate enthaltende Arzneimittelzubereitungen gerichtet.

Die US-PS 3 499 078 beschreibt eine Gruppe von Antibiotika,- die als Everninomicin-Antibiotika bezeichnet werden, einschließlich der Everninomicine B, C und D und ihre Herstellung durch Kultivieren eines Mikroorganismus der Gattung Micromonospora carbonacea in aerober Submerskultur. Hydroxylamino- und Nitrosoderivate der Everninomicine B, C und D und ihre Herstellung werden in den US-PSen 3 901 973 und 3 915 956 beschrieben.

Gegenstand der Erfindung ist eine neue Gruppe von N-substituierten und N-unsubstituierten Aminoeverninomicine B, C und D, die wertvolle antibakterielle Aktivität aufweisen.

Gemäß einem Merkmal umfaßt die Erfindung die N-substituierten und N-unsubstituierten Aminoeverninomicine B, C und D und N-alkyl-, Ν,Ν-dialkyl-, N-acyl- und N-acyl-N-hydroxysubstituierte Aminoeverninomicine B, C und D und die pharmazeutisch unbedenklichen Salze dieser Verbindungen.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung können durch die allgemeine Formel (I)

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_ ya -

OCH

dargestellt werden und umfassen ihre pharmazeutisch unbedenklichen Salze. In der Formel (I) steht X für -NH₉ oder -NR¹R², worin R¹ ein Acylrest oder Alkyl-

2 1

rest und R Wasserstoff ist oder, wenn R ein Acylrest ist, auch eine Hydroxylgruppe oder, wenn R ein Alkylrest ist, auch ein Alkylrest sein kann. Für ein Derivat von Everninomicin/steht Y in der Formel (I) für eine Hydroxylgruppe und Z für die Gruppe CF

-CH

Bei Derivaten von Everninomicin C stehen Y und Z beide für Wasserstoff, während bei Derivaten von Everninomicin^Y Wasserstoff und Z die Gruppe der

—3 OCH-

Formel -CH

3
OCH.

ist.

Unter dem hier gebrauchten Ausdruck "Alkyl" ist eine von einem einwertigen Alkan- oder Cycloalkanrest mit bis zu C-Atomen abgeleitete Gruppe und unter dem Ausdruck •'niederer Alkylrest" eine solche von einem Alkan- oder Cycloalkanrest mit bis zu 6 C-Atomen abgeleitete Gruppe zu verstehen. Als Beispiele solcher Alkylreste sind Methyl, Äthyl, Isopropyl, Cyclobutyl, Pentyl und Hexyl zu nennen.

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Unter dem hier gebrauchten Ausdruck "Acylrest" ist ein Acylrest zu verstehen, der von einer Carbonsäure abgeleitet ist, die mit AcOH, worin Ac der Acylrest ist, bezeichnet werden kann und bis zu 12 C-Atome enthält. Die Carbonsäure kann eine geradkettige oder verzweigte aliphatische Säure oder eine alicyclische, aromatische oder heterocyclische Säure sein. Als' Carbonsäuren eignen sich beispielsweise Aminosäuren und Hydroxysäuren. Als spezielle Beispiele geeigneter Carbonsäuren seien genannt: Essigsäure, Propionsäure, Isobuttersäure, Valeriansäure, Pivalinsäure, Dodecansäure, Cyclobutancarbonsäure, Cyclopentancarbonsaure, Cyclohexancarbonsäuren Cycloheptancarbonsäure, Benzoesäure, Phenylessigsäure, γ-Pheny!buttersäure, Apfel- säure, Milchsäure, Mandelsäure, ThiomiIchsäure, Thioglykolsäure, Chloressigsäure, Bromessigsäure, Cystin, Glycin, Valin, Phenylglycin, Threonin, Thyrosin, Phenylalanin, Thiophen-essigsäure, Furancarbonsäure, Furanessigsäure und Tetrazolylessigsäure*

Die Verbindungen gemäß der Erfindung enthalten eine phenolisehe Hydroxylgruppe in der Dichlorisoeverninsäurekomponentedes Moleküls und vermögen pharmazeutisch unbedenkliche Salze zu bilden. Zu den geeigneten Salzen gehören pharmazeutisch unbedenkliche Alkalisalze, Erdalkalisalze und Ammonium- und substituierte Ammoniumsalze, z.B. die aus Trialkylaminen, Procain, Dibenzylamin, N-Benzylbetaphenäthylamin, N,N¹-Dibenzyläthylendiamin, Dehydroabietylamin, N,N'-Bisdehydroabietyläthylendiamin und N-Niederalkylpiperidinen (z.B. N-Ä'thylpiperidin) und N-Methylglukamin gebildeten Salze. .

Von den erfindungsgemäßen Derivaten von Everninomicin B, C und D werden die von Everninomicin D abgeleitetenDerivateauf Grund der leichten Verfügbarkeit des als Ausgangsmaterial dienenden Everninomicins D, das ein

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überwiegendes Produkt des in der US-PS 3 499 078 beschriebenen Fermentationsverfahrens ist, bevorzugt. Die Erfindung wird daher in erster Linie in Verbindung mit Aminoeverninomicin D und seinen N-substituierten Derivaten beschrieben und veranschaulicht. Zu den bevorzugten N-substituierten Derivaten von Aminoeverninomicin D gehören N-Acylderivate, in denen der Acylteil von einer aliphatischen Säure mit bis zu 6 C-Atomen abgeleitet ist, insbesondere N-Acetyl-aminoeverninomicin D. Wenn die Acylkomponente von einer Cyclo— alkancarbonsäure abgeleitet ist, werden solche Säuren mit bis zu 8 C-Atomen bevorzugt. Bevorzugt als Aminosäure, von der die Acylkomponente abgeleitet werden kann, wird Phenylglycin. Weitere erwähnenswerte Säuren sind Benzoesäure und Phenylessigsäure. Bevorzugt werden N-Alkyl- und Ν,Ν-Dialkylderivate mit bis zu 6 C-Atomen im Alkylrest, z.B. N-Äthylaminoeverninomicin D. Zu den bevorzugten pharmazeutisch unbedenklichen Salzen der Verbindungen gemäß der Erfindung gehören das Natriumsalz und das N-Methylglucaminsalz.

Gemäß einem weiteren Merkmal umfaßt die Erfindung die Herstellung der N-substituierten und N-unsubstituierten Aminoeverninomicine gemäß der Erfindung nach einem aus den folgenden Verfahren A bis C ausgewählten Verfahren:

A: Reduktion eines Everninomicins B, C gder D, eines Hydroxylaminoeverninomicins B, C oder P oder eines 2-Iso>a zolyleverninomicins B, C oder D an der Stickstof funktion,

B: N-Acylierung eines Aminoeverninamicins B, C oder D und

C: N-Alkylierung eines Aminoeverninomicins B, C oder D,

gegebenenfalls mit anschließender Hydrolyse einer beliebigen O-Acyl- oder N_rN-Diacylgruppe und isolierung

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des so gebildeten Aminoeverninomicins B, C oder D oder N-Alkyl-, N,N-Dialkyl-, N-Acyl- oder N-Acyl-N-hydroxy-substituierten Aminoeverninomicins B, C bzw.D in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes.

Bei einem bevorzugten Reduktionsprozess wird ein ' Aminoeverninomicin B, C oder D durch Reduktion von Everninomicin B, C oder D an der Nitrogruppe hergestellt. Die Reduktion wird durch Hydrieren des Aus-IG gangsmaterials in einem inerten Lösungsmittel, das' vorzugsweise eine hohe Dielektrizitätskonstante hat, in Gegenwart eines metallischen Hydrierkatalysators durchgeführt. Bevorzugt als Hydrierkatalysator wird Raney-Nickel. Geeignet sind Lösungsmittel mit einer Dielektrizitätskonstante von mehr als 10. Als Beispiele sind Alkohole wie Methanol, Äthanol und insbesondere Methoxyäthanol, Äther, z.B. Tetrahydrofuran und Bis(2-methoxyäthyl)äther, und andere Lösungsmittel·, z.B. Acetonitril und Dimethylsulfoxyd zu nennen. Zweckmäßig wird die Hydrierung bei Umgebungstemperatur unter einem Druck von einigen Atmosphären durchgeführt, bis die Wasserstoffaufnähme beendet ist. Vorzugsweise wird das als Ausgangsmaterial dienende Aminoeverninomicin in Form eines Salzes verwendet. Bei diesem Verfahren wird Aminoeverninomicin B, C oder D in hoher Ausbeute erhalten. Nur wenig Reinigung ist erforderlich.

Bei einem weiteren Reduktionsverfahren zur Herstellung' von Aminoeverninomicin B, C oder D erfolgt die Reduktion von als Ausgangsmaterial dienendem Everninomicin B, C oder D an der Nitrogruppe unter Verwendung eines Chrom(II)-salzes, z.B. ChromClI)-acetat, in einem inerten, mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, z.B. einem Alkanol, beispielsweise Methanol.

Das Gewichtsverhältnis von Chrom(II)-acetat zu dem als

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Ausgangsmaterial dienenden Everninomicin B, C oder D beträgt zweckmäßig etwa 1,5:1. Die Reduktion wird zweckmäßig bei Umgebungstemperatur durchgeführt. Das Produkt kann in üblicher Weise vom Reaktionsgemisch und das als Reduktionsprodukt erhaltene Aminoeverninomicin B, C oder D chromatographisch von etwaigem gleichzeitig gebildetem Hydroxylamino- oder Nitroso— everninomicin B, C oder D abgetrennt werden.

Bei einem weiteren möglichen Reduktionsverfahren wird ein aus dem als Ausgangsmaterial eingesetzten Evernonomicin B, C oder D nach dem in der US-PS 3 915 beschriebenen Verfahren erhältliches Hydroxylaminoeverninomicin EJ, C oder D mit Aluminiumamalgam unter Anwendung eines Gewichtsverhältnisses von als Aluminium gerechnetem Aluminiumamalgam zu dem eingesetzten Hydroxylaminoeverninomicin B, C oder D von mehr als 2:1, vorzugsweise von 5:1 bis 15:1, weiter reduziert. Die Reduktion kann in einem wässrigen niederen Alka— nol bei Umgebungstemperatur durchgeführt werden. Zweckmäßig beträgt das Volumenverhältnis von Wasser zu niederem Alkanol etwa 0,3:1. Als Alkanol wird vorzugsweise Äthanol verwendet. Das Aminoeverninomicin B, C oder D kann chromatographisch abgetrennt und gereinigt werden.

Bei einem weiteren Verfahren zur Herstellung von Aminoeverninomicin B, C oder D wird ein 2-Isoxazolyleverninomicin B, C oder D als Ausgangsmaterial der reduzierenden Spaltung des Isoxazol'rings am Stickstoffatom durch Behandlung des Ausgangsmaterials mit metal— lischem Zink in einem wässrigen, mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel, z.B. Tetrahydrofuran, unterworfen. Das Gewichtsverhältnis von Zinkstaub zum Ausgangsmaterial' beträgt zweckmäßig 1:1. Die reduzierende Spaltung kann unter neutralen Bedingungen, z.B. unter Verwendung von Zinkstaub in Gegenwart von Ammonium-

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Chlorid (Gewichtsverhältnis vorzugsweise etwa 1:2,5), oder unter alkalischen Bedingungen, z.B. unter Verwendung von Zinkstaub in Gegenwart eines Alkalihydroxyds oder quaternären Ammoniumhydroxyds durchge— führt werden. Als Beispiele geeigneter Hydroxyde sind Natrium-, Kalium- und Lithiumhydroxyd und Tetraniederalkylammoniumhydroxyde, z.B. Tetramethyl-, Tetraäthyl—, Tetrapropyl-, Tetraisopropyl- und Tetrabutylammoniumhydroxyd zu nennen.

Die als Ausgangsmaterialien verwendeten 2-Isoxazolyleverninomicine B, C oder D, die neue Verbindungen sind, können durch Umsetzung eines Hydroxylaminoever*- ninomicins B, C oder D mit einem a,ß-ungesättigten Aldehyd leicht hergestellt werden. Dies kann schematisch wie folgt dargestellt werden:

R.CH=CH.CHO

' " . -NHOH ν

Hierin ist R eine beliebige geeignete Komponente, z.B. ein Alkylrest, Arylrest, Aralkylrest oder eine heterocyclische Gruppe. Zweckmäßig wird als Aldehyd Zimtaldehyd verwendet, wobei R ein Phenylrest ist. Die Herstellung verläuft über die Bildung eines Nitrons, das in situ unter Bildung des 2-Isoxazolylderivats cyclisiert. Das 2-Isoxazolylderivat kann in situ reduzierend gespalten werden, wird jedoch vorzugsweise zuerst isoliert, um es vom restlichen Aldehyd abzutrennen, der ebenfalls der Reduktion unterliegt.

Die Reduktion eines als Ausgangsmaterial dienenden Everninomicins B, C oder D kann auch in Gegenwart eines Acylierungsmittels durchgeführt werden, wobei direkt ein N-Acylaminoeverninomicin erhalten wird. Diese Reduktion kann unter Verwendung von Zink in

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Gegenwart eines Säureanhydrids, das säurefrei ist, durchgeführt werden. Ein etwaiges gleichzeitig gebildetes O-Acylderivat bzw. Ν,Ν-Diacylderivat kann unter milden alkalischen Bedingungen hydrolysiert werden, wobei das gewünschte N-Acylderivat erhalten wird. Gleichzeitig mit dem N—Acylderivat wird das entsprechende N-Hydroxy-N-acylaminoeverninOmicin gebildet, so daß die Trennung dieser Produkte erforderlich ist. Diese Trennung kann unter Verwendung üblicher chromatographischer Verfahren erfolgen.

Die N-Acylaminoeverninomicine B, C und D können auch durch Acylierung des entsprechenden Everninomicins B, C oder D mit einem geeigneten Acylierungsmittel, z.B. einem symmetrischen oder gemischten Säureanhydrid, leicht hergestellt werden. Im allgemeinen wird sowohl die Aminofunktion als auch die phenolische Hydroxylgruppe der Dichloriso'verninsäurekomponente acyliert. Eine Teilhydrolyse zur Entfernung der O-Acylgruppe läßt sich jedoch unter milden alkalischen Bedingungen leicht erreichen, wobei das gewünschte N-Acylderivat in guter Ausbeute erhalten wird. Als Beispiele geeiqneter Acylierungsmittel sind Essigsäureanhydrid als repräsentatives symmetrisches Anhydrid und das von Cyclohexancarbonsäure und einem Chlorformiat oder p-Toluolsulfonylchlorid abgeleitete Anhydrid als repräsentatives gemischtes Anhydrid zu nennen. Wenn das Anhydrid von einer Aminosäure abgeleitet ist, wird die Aminogruppe während der Acylierung durch eine geeignete Schutzgruppe geschützt. Die Acylierung kann in Gegenwart eines Alkohols, z.B. Isopropanol, durchgeführt werden, um Acylierung der phenolischen Hydroxylgruppe zu vermeiden.

Die N—Alkylaminoeverninomicine B, C und D können durch direkte Alkylierung des entsprechenden Aminoeverninomicins B, C bzw. D, zweckmäßig durch reduzierende

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Alkylierung, hergestellt werden. Bei diesem Verfahren wird das Ausgangsmaterial in an sich bekannter Weise mit dem entsprechenden Aldehyd in einem Lösungsmittel, z.B. einem Alkanol, vorzugsweise Methoxyäthanol, umgesetzt und das Reaktionsgemisch oder Produkt anschließend in Gegenwart eines Metallkatalysators, z.B. Raney-Nickel, hydriert. Es ist auch möglich, andere Reduktionsmittel, z.B. Natriumcyanborhydrid, zu verwenden. Bei Verwendung von Natriumcyanborhydrid kann ein Borkomplex, der ungefähr ein Boratom pro N-Alkylaminoeverninomicinmolekül enthält, erhalten werden. Dieser Komplex kann mit Aluminiumamalgam in einem wässrigen Alkanol behandelt werden, v/obei das gewünschte N-Alkylaminoeverninomicin B, C oder D erhalten wird.

Die N,N-Dialkylaminoeverninomicine B, C und D können auch nach Verfahren der reduzierenden Alkylierung hergestellt werden. Beispielsweise kann ein Aminoeverninomicin B, C oder D der Hydrierung bei Normaldruck vorzugsweise in einer alkoholischen Lösung, die den Aldehyd im Überschuss enthält, unterworfen werden. Ein bevorzugter Hydrierkatalysator ist Platinoxyd.

Die pharmazeutisch unbedenklichen Salze der Verbindungen gemäß der Erfindung können nach bekannten Verfahren, z.B. durch Behandlung der N-substituierten oder N-unsubstituierten Aminoeverninomicine B, C oder D in wässriger Lösung mit der geeigneten Menge einer Base (z.B. Natriumhydroxyd) und anschließende Gefriertrocknung der erhaltenen Lösung hergestellt werden.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung weisen antibakterielle Aktivität auf und sind als solche wertvoll für die Behandlung von 'Warmblütern mit Infektionen, die durch empfindliche Bakteriengattungen verursacht werden. Die Behandlung erfolgt vorzugsweise durch

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intramuskuläre oder intravenöse Injektion einer geeigneten parenteralen Lösung einer Verbindung gemäß der Erfindung vorzugsweise in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes, da diese Salze an der phenolischen Hydroxylgruppe gewöhnlich weiß und wasserlöslich sind. -- - "

Die einzelne Dosierungseinheit und Häufigkeit der Verabreichung hängt nicht nur von der Art und Schwere der Bakterieninfektion, die gelindert werden soll, sondern auch vom Alter, Gewicht, der Art des Patienten, dem jeweiligen körperlichen Zustand und vom Darreichungsweg ab. Die zu verabreichende genaue Menge darf nicht toxisch sein, muß jedoch pharmazeutisch wirksam die Symptome der Bakterieninfektion lindern.

Im allgemeinen wird für die Behandlung von bakteriellen Infektionen bei parenteraler Verabreichung eine Tagesdosis von 2,5 bis etwa 50 mg/kg einer Everninomicinverbindung als zweckmäßig angesehen.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele weiter erläutert. Die Beispiele 1 bis 12 veranschaulichen die Herstellung der Verbindungen gemäß der Erfindung und die Beispiele 13 bis 15 die Herstellung von pharmazeutischen Zubereitungen gemäß der Erfindung.

Beispiel 1
N-Methylglucaminsalz von Aminoeverninomicin D

Man löst 1,0 g Everninomicin D und 0,2 g N-Methyl— glucamin in 60 ml Methoxyäthanol. Man hydriert das Gemisch in Gegenwart von 1,5 ml Raney-Nickelaufschlämmung bei 2 Atm. für etwa 40 Stunden. Nach dieser Zeit ist die Wasserstoffaufnähme im wesentlichen beendet.

Man filtriert die Suspension und engt das Filtrat ein, wobei man das. gewünschte Produkt erhält. Ausbeute 1,1 g. Schmelzpunkt der freien Aminoverbindung 184 bis 186°C. (Mit diesem Salz werden erratische Schmelzpunkts ergebnisse erhalten.)

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2&QS4Q8

— pc
: 70i_/^ = -21,2° (CH₃OH).

Beispiel 2 Aminoeverninomicin D

A. 3-(5-Phenyl-isoxazolin-2-yl)everninomicin D

Nan löst 1,0 g Hydroxylaminoeverninomicin D und l*,0 ml Zimtaldehyd in 10 ml (peroxydfreiem) Tetrahydrofuran» Man erhitzt die Lösung auf dem Dampfbad, bis das Hydroxylaminoeverninomicin D vollständig umgesetzt - ist. Die Vollendung der Reaktion wird durch Dünn-Schichtchromatographie an einer Kieselgelplatte unter Verwendung eines aus einem Gemisch von Aceton und Benzol (1:1) bestehenden Lösungsmittelsystems bestimmt. Das Verschwinden des Fleckens mit einem Rf-Wert von 0,45 (entsprechend Hydroxylaminoeverninomiein D) ist ein Anzeichen für vollständige Umsetzung.

Das gewünschte Produkt wird durch preparative Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von Kieselgelplatten isoliert, wobei das gleiche Lösungsmittel— system zur Überwachung der Reaktion verwendet wird. Das hierbei erhaltene Produkt hat die folgenden physikalischen Konstanten:

: Ausbeute 1,0 g; Schmelzpunkt 182-184°C; /α__/* =

-72,4° (CH₃OH); IR-Spektrum (Nujol-"mull")= 1725 era"¹;

■χ CH,OH

_m=w <έ> = 210 (30.60O); 305 (21.000); 340 (17.000). max

B. Aminoeverninomicin D

Man löst 500 mg 3-(5-Phenyl-isoxazolir>-2-yl)evernino- ; micin D in 25 ml Tetrahydrofuran, gibt 600 mg Zinkstaub und anschließend 1,5 g Ammoniumchlorid in . 8,0 ml Wasser zu. Man rührt die Suspension bis zur vollständigen Reduktion, filtriert und engt auf einen Rückstand ein, wobei man das gewünschte Produkt erhält. Ausbeute 335 mg; Schmelzpunkt 184-186°C.

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= -21,2° (CH₃OH).

In der gleichen Weise können bei Verwendung einer äquivalenten Menge Hydroxylaminoeverninomicin B oder Hydroxylaminoeverninomicin C bei dem vorstehend beschriebenen Versuch die entsprechenden Aminoderivate hergestellt werden.

Beispiel 3 Aminoeverninomicin D

Man stellt eine Suspension von 5,0 g Aluminiumpulver in 20 ml destilliertem Wasser her und gibt zu dieser Suspension eine Lösung von 80 mg Quecksilber(II)-Ghlo rid in 10 ml Wasser unter Rühren. Nach dem Beginn der Gasentwicklung des Aluminiumamalgams gibt man eine Lösung von 2 g Everninomicin D in 100 ml Äthanol zu.

i-ian überwacht die Reaktion durch Dünnschichtchromatographie an Kieselgel unter Verwendung eines Methanol und Chloroform im Volumenverhältnis von 20:80 bestehenden Lösungsmittelsystems. Wenn das Produkt aus einem Gemisch von Hydroxylamino- und Aminoeverninomicin D besteht, filtriert man das Reaktionsgemisch, wäscht die Feststoffe mit Äthanol und vereinigt das Filtrat mit den Waschflüssigkeiten. Man stellt eine frische Charge von Aluminiumamalgam her (unter Verwendung von 25 g Aluminium) und wiederholt den Reduktionsprozess durch Zugabe des mit den Waschflüssigkeiten vereinigten Filtrats zum frischen Reduktionsmittel. Man überwacht die Reaktion durch Dünnschicht— Chromatographie unter Verwendung des vorstehend genannten Lösungsmittelsystems.

Ausbeute 1,5 g. Schmelzpunkt 184-186⁰C.

nc

Ax_/J° = _21,2° (CH₃OH)

In der gleichen Weise kann bei Verwendung einer äquivalenten Menge Everninomicin B oder Everninomicin C bei dem in diesem Beispiel beschriebenen Versuch das

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entsprechende Aminoderivat hergestellt werden.

Beispiel 4 Aminoeverninomicin D :

Man löst 1,0 g Everninomicin D in 30 ml sauerstofffreiem Methanol, gibt 1,5 g Chromdl )-acetat unter Rühren zu und rührt noch etwa 3 Stunden. Man destilliert das Methanol im Vakuum ab und löst den Rückstand in 25 ml einer wässrigen Lösung, die 1,0 g N-Methylglucamin enthält. Zur erhaltenen Lösung gibt man 20 ml einer 5%igen wässrigen Natriumcarbonatlösung. Man zentrifugiert das erhaltene Gemisch und dekantiert den Überstand, wobei die ausgefällten Chromsalze zurückbleiben. Man säuert den flüssigen Überstand mit Phosphatpuffer auf pH 5,0 an, wobei man Aminoeverninomicin in Mischung mit etwas Hydroxylaminoeverninomicin und Nitrosoeverninomicin erhält. Diese Verbindungen können durch Chromatographie an Kieselgel unter Verwendung eines aus Methanol und Chloroform im Volumenverhältnis von 20:80 bestehenden Lösungsmittelsystems getrennt werden.

Ausbeute 450 mg. Schmelzpunkt 184-186⁰C. /ö_7^⁶ = -21,2° (CH₃OH)

In der gleichen Weise können durch Verwendung äquivalenter Mengen Everninomicin B oder Everninomicin C nach dem in diesem Beispiel beschriebenen Verfahren die entsprechenden Arninoderivate hergestellt werden.

Beispiel 5 N-Acetylaminoeverninomicin D

Man löst unter Rühren 500 ml Aminoeverninomicin D in 4 ml Essigsäureanhydrid, gibt 600 mg Calciumcarbonat zu und rührt weiter. Man überwacht die Reaktion durch Dünnschichtchromatographie an Kieselgel unter Verwendung von Aceton-Benzol im Volumenver—

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hältnis von 40:60 als Lösungsmittelsystem. Man läßt die Reaktion vonstatten gehen, bis das Amin vollständig umgesetzt ist und entfernt dann das überschüssige Essigsäureanhydrid unter hohem Vakuum. Zur Zerstörung des restlichen Essigsäureanhydrids gibt man 20 ml Ι,Οη-Natriumbicarbonat zu. Man löst das Diacylprodukt in 10 ml Methanol und 10 ml einer 20%igen (Gew./Vol.) Lösung von Tetraäthylammoniumhydroxyd. Man überwacht die Hydrolysenreaktion durch Dünnschichtchromatographie unter Verwendung des gleichen, vorstehend genannten Lösungsmittelsystems. Wenn die phenolische Acylfunktion entfernt ist, stellt man das Reaktionsgemisch mit Phosphatpuffer auf pH 6,5 ein und extrahiert dann das Gemisch mit Äthylacetat.

Man engt den Äthylacetatextrakt auf einen Rückstand ein. Man kristallisiert den Rückstand aus Äthanol und erhält hierbei das gewünschte Produkt. Ausbeute 490 mg. Schmelzpunkt 189° bis 191°C. /pc_/p^Ö = -34,7° (CH₃OH).

In der gleichen Weise können bei Verwendung einer äquivalenten Menge Aminoeverninomicin B oder Amino— everninomicin C bei dem in diesem Beispiel beschriebenen Versuch die entsprechenden N-Acetylderivate hergestellt werden.

Beispiel 6 N-Cyclohexylcarbonylaminoeverninomicin D

Man löst 1,3 g Cyclohexancarbonsäure und 1,05 g Triethylamin in 20 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran. Man kühlt das Reaktionsgemisch auf etwa 5° bis 10⁰C, gibt 1,1 g Äthylchlorformiat unter Rühren zu, rührt das Reaktionsgemisch weitere 10 Minuten und filtriert. Man gibt zum klaren Filtrat 600 mg Aminoeverninomicin D und rührt das Reaktionsgemisch weiter. Man überwacht die Reaktion auf die in Beispiel 5 beschriebene Weise.

Nach Beendigung der Reaktion behandelt man das Reak-

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tionsgemisch mit Natriumbicarbonatlosung und extrahiert mit Äthylacetat. Man engt die das Diacylprodukt enthaltende Lösung zu einem Rückstand ein, löst den Rückstand in Methanol und hydrolysiert mit 20%iger (Gew./Vol.) Lösung von Tetraäthylammonium— hydroxyd in Methanol, wobei man das gewünschte Produkt erhält. . -Ausbeute 585 .mg. Schmelzpunkt 184° bis 186°C. ^ä/p⁶ = -35,9°(CH₃OH).

In der gleichen Weise können bei Verwendung einer

äquivalenten Menge Aminoeverninomicin B oder Amino— everninomicin C bei dem in diesem Beispiel beschriebenen Versuch die entsprechenden N-Cyclohexylcarbo- -. nylderivate hergestellt werden. :

Das vorstehende Beispiel beschreibt ein allgemeines Verfahren, das zur Herstellung von N-AcylaminoeVerninomicin-By N-Acylaminoeverninomicin-C- oder N-Acylaminoeverninomicin-D-Derivaten praktisch jeder Carbonsäure angewendet werden kann. Als Beispiele solcher Carbonsäuren sind Essigsäure, Propionsäure, Isobuttersäure, Valeriansäure,. Pivalinsäure, Dodecansäüre, Adamantancarbonsäure, Cyclobutancarbonsäure, Cyclopentancarbonsäure, Cycloheptancarbonsäure, Benzoesäure, Phenylessigsäure, γ-Phenylbuttersäure und die anderen vorstehend als Beispiele bei der Definition des Ausdrucks "Acyl" genannten Carbonsäuren zu nennen.

"; Beispiel 7

r N-PhenyIglycylaminoeverninomicin D

Man stellt eine Lösung von 950 mg N-Carbobenzyloxyphenylglycin in 30 ml wasserfreiem Methylenchlorid

her und gibt 330 mg Triäthylamin und anschließend : 400 mg Äthylchlorformiat unter Rühren bei -20°C zu.

Man rührt 30 Minuten, gibt 500 mg Aminoeverninomicin D zu und erhöht die Temperatur auf 25⁰C. Man überwacht die Reaktion auf die in Beispiel 5 beschriebene Weise,

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bis sie beendet ist. Man gibt 75 ml Äthylacetat zu, stellt die erhaltene Lösung mit 10 ml Phosphatpuffer auf pH 6,0 ein, wäscht dann mit 20 ml l,On-Natriumbicarbonatlösung und engt die Äthylacetatlösung auf einen Rückstand ein. Man löst den Rückstand in 25 ml Äthanol und hydriert etwa 20 Stunden bei 2 Atm. in Gegenwart von 100 mg Palladium. Man filtriert den Katalysator ab, macht das Filtrat mit 10 ml 20%igem (Gew./Vol.) Tetraäthylammoniumhydroxyd basisch, engt das Filtrat auf einen Rückstand ein und erhält hierbei 270 mg des gewünschten Produkts. Schmelzpunkt 175-177°C. /oJq = -27,5°

In der gleichen Weise können bei Verwendung einer äquivalenten Menge Aminoeverninomicin B oder Aminoeverninomicin C nach dem in diesem Beispiel beschriebenen Verfahren die entsprechenden N-Phenylglycylderivate hergestellt werden.

In der gleichen Weise können nach dem Verfahren dieses Beispiels durch Ersatz des N-Carbobenzyloxyphenylglycins durch eine äquivalente Menge anderer Aminosäuren, die durch Reduktion entfernbare Aminoschutzgruppen enthalten, die entsprechenden Aminoacylaminoderivate von Everninomicin B, C oder D hergestellt werden.

Beispiel 8 N-Acetylaminoeverninomicin D

Man löst 500 mg Everninomicin D in 10 ml säurefreiem Essigsäureanhydrid und gibt portionsweise 800 mg aktiven Zinkstaub zu. Man überwacht die Reaktion durch Dünnschichtchromatographie an Kieselgelplatten unter Verwendung eines aus 40 Vol.—% Aceton und 60 Vol.—% Benzol bestehenden Lösungsmittelsystems. Nach beendeter Reaktion, erkennbar durch fehlendes Ausgangsmaterial, filtriert man das Reaktionsgemisch, engt das

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Filtrat unter Vakuum zu einem Rückstand ein und.macht den Rückstand mit 5 ml einer aus 10% (Gew./Vol.) Tetraathylammoniumhydroxyd in 20 ml Methanol bestehenden Lösung basisch. Man überwacht die Reaktion mit Hilfe des vorstehend beschriebenen Dünnschichtsystems, um festzustellen, wann die Hydrolyse des acetylierten Phenols vollendet ist. Man säuert die Lösung mit Phosphatpuffer auf pH 4,5 an, extrahiert das Produkt mit Äthylacetat, trocknet den Extrakt über wasserfreiem Natriumsulfat und engt den getrockneten Extrakt zu einem Rückstand ein, wobei man 390 mg eines Feststoffs erhält, der aus dem gewünschten Produkt in Mischung mit N-Hydroxy-N-acetylaminoeverninomicin D (N-Acetylhydroxylaminoeverninomicin D) besteht. Die letztgenannte Verbindung hat die folgenden physikalischen Konstanten:
/Öt/26 _ _₃₄o (CH₃GH)_- schmelzpunkt 176-178°C.

In der gleichen Weise können nach dem Verfahren dieses Beispiels unter Verwendung einer äquivalenten Menge Everninomicin C die entsprechenden N-Acylaminoderivate und die entsprechenden N-Hydroxy-N-acylaminoderivate hergestellt werden.

Ebenso können nach dem Verfahren dieses Beispiels bei Verwendung einer äquivalenten Menge eines anderen Carbonsäureanhydrids, z.B. Propionsäureanhydrid, n-Buttersäureanhydrid und n-Valeriansäureanhydrid, an Stelle von Essigsäureanhydrid andere entsprechende N-Acylaminoderivate und N-Hydroxy-N-acylaminoderivate hergestellt werden.

Beispiel 9 N-Äthylaminoeverninomicin D

Man löst 1 g Aminoeverninomicin D in 75 ml Methoxymethanol und 10 ml Acetaldehyd. Man hydriert das Reak-

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tionsgemisch in Gegenwart von 3,5 ml einer Aufschlämmung von aktiviertem Raney-Nickelkatalysator etwa 30 Stunden unter einem Druck von etwa 2 Atm. Man filtriert das Reaktionsgemisch und entfernt das Lösungsmittel unter vermindertem Druck, wobei man einen Rückstand erhält. Man kristallisiert den Rückstand aus Aceton und erhält hierbei die gewünschte Verbindung.
Ausbeute 950 mg. Schmelzpunkt 184-186°C.

/m7q⁶ = -¹⁸° (CH₃OH).

In der gleichen Weise können nach dem Verfahren dieses Beispiels unter Verwendung einer äquivalenten Menge Aminoeverninomicin B oder Aminoeverninomicin C die entsprechenden N-Äthylderivate hergestellt werden.

Ebenso können auf die in diesem Beispiel beschriebene Weise bei Verwendung einer äquivalenten Menge anderer Aldehyde, z.B. Propionaldehyd, n-Butyraldehyd, Isobutyraldehyd, n-Valeraldehyd, Isovaleraldehyd oder n-Caproaldehyd, an Stelle von Acetaldehyd die entsprechenden N-Alkylaminoeverninomicine D hergestellt werden.

Beispiel 10 Ν,Ν-Diäthylaminoeverninomicin D

Man löst 500 mg Aminoeverninomicin D in 15 ml Äthylalkohol und 3 ml Acetaldehyd. Man hydriert das Reaktionsgemisch etwa 30 Stunden bei Normaldruck in Gegenwart von 200 mg Platinoxydkatalysator. Man filtriert das Reaktionsgemisch, engt das Filtrat ein, bis Kristallisation stattfindet, kühlt den Kristallbrei, filtriert und trocknet bis zur Gewichtskonstanz. Ausbeute 350 mg. Schmelzpunkt 173-175°C. IaJ^⁶ = -21,4° (CH₃OH)

In der gleichen Weise können nach dem Verfahren dieses Beispiels unter Verwendung einer äquivalenten Menge

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Aminoeverninomicin B oder Aminoeverninomicin C die entsprechenden N,N-Diäthylderlvate hergestellt werden

Ebenso können nach dem in diesem Beispiel beschriebenen Verfahren unter Verwendung einer äquivalenten Menge anderer Aldehyde, z.B. der in Beispiel 9 genannten Aldehyde, an Stelle von Acetaldehyd die entsprechenden. Ν,Ν-DialkylaminOeverninömicine hergestellt werden.

Herstellung von Salzen der N-Acylaminoeverninomicine

B, C und D ... "

A. N-Methylqlucaminsalze

Man suspendiert 1,55 g N-Acetylaminoeverninomicin D (hergestellt in der oben beschriebenen Weise) in 25 ml destilliertem Wasser. Man gibt zur Suspension unter Rühren 0,39 g N-Methylglucamin in 20 ml destilliertem Wasser. Man rührt die Suspension bei 25⁰C, bis das Amid vollständig gelöst ist, bringt die Apparatur dann unter eine Stickstoffatmosphäre und filtriert. Durch Gefriertrocknen des Filtrats erhält man das N-Methylglucaminsalz von N—Acetylaminoeverninomicin D, das 2 Mol N-Methylglucamin enthält, wobei das zusätzliche Mol die Löslichkeit steigert.

E. Natriumsalz

Man suspendiert 1,55 g N-Acetylaminoeverninomicin D in 15 ml destilliertem Wasser, das 10 ml Methanol enthält. Unter Rühren gibt man eine Lösung von 40 mg Natriumhydroxyd in 5 ml destilliertem Wasser zu. Map rührt die Suspension bis zur vollständigen Auflösung

.3.0··. des Amids, bringt die Apparatur unter eine Stickstoffatmosphäre und filtriert. Man entfernt das Methanol unter hohem Vakuum bei Raumtemperatur und unterwirft die wässrige Lösung der Gefriertrocknung, wobei man das Natriumsalz von N-Acetylaminoeverninomicin D er-

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10 '-'2305408

hält.

In der gleichen Weise können die entsprechenden pharmazeutisch unbedenklichen Salze hergestellt werden, wenn eine äquivalente Menge N-Acetylaminoever— ninomicin B oder N—Acetylaminoeverninomicin C den vorstehend beschriebenen Salzbildungen unterworfe'n wird. ■ . .

Ebenso können nach den vorstehend beschriebenen Verfahren bei Verwendung einer äquivalenten Menge anderer N-Acylamino- oder N-Hydroxy-N-acylaminoeverninomicine B, C oder D deren Salze hergestellt werden.

Pharmazeutisch unbedenkliche Salze von N-Alkylamino— und NjN-Dialkylaminoeverninomicinen B, C und D können ebenfalls nach den vorstehend beschriebenen Verfahren hergestellt werden.

Beispiel 12 N-Äthylaminoeverninomicin D

Zu einer Lösung von 200 mg Aminoeverninomicin D in 10 ml Methanol wurden 0,5 ml 98%iger Acetaldehyd und anschließend 70 mg Natriumcyanborhydrid bei 10 bis 15°C gegeben. Die Reaktion wurde durch Dünnschichtchromatographie verfolgt. Mit fortschreitender Reduktion wurde eine etwas weniger polare Verbindung erhalten. Nach vollendeter Reaktion (etwa 30 Minuten) wurde das Produkt in 75 ml Äthylacetai; aufgenommen und mit 10 ml Phosphatpuffer bis pH 5 und abschließend mit Wasser gewaschen. Das hierbei erhaltene Produkt wurde als Borkomplex identifiziert CBor 0,68% entsprechend 1 g-Atom Bor pro Mol Everninomicin). Durch Behandlung des Borkomplexes mit 800 mg Aluminiumamalgam in 20 ml Methanol und 5 ml Wasser wurde der Komplex in etwa 6 Stunden in die freie Base umgewandelt (erkennbar durch fehlende Bor- und O-Et-Banden im kernmagnetischen Resonanzspektrum). Das Produkt wurde filtriert,

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das Lösungsmittel entfernt und der Rückstand aus Aceton umkristallisiert, wobei die gewünschte Verbindung erhalten wurde.

Nachstehend sind die Schmelzpunkte und die spezifisehen optischen Drehungen für weitere Verbindungen gemäß der Erfindung genannt:

N-Propionylaminoeverninomicin D, Schmelzpunkt 188 bis

pe

19O°C; /α/ρ * -30,6° (CH₃OH).

N-Isobutyrylaminoeverninomicin D, Schmelzpunkt 190 bis 192°C; £vj^ = -34,6° (CH₃OH).

N-Benzoylaminoeverninomicin D, Schmelzpunkt 135 bis 137⁰C (amorph); &/* = -37,5° (CH₃OH).

Daten des Infrarotspektrums und UV-Spektrums für Verbindungen gemäß der Erfindung sind nachstehend in

_ \ Tabelle I genannt. Die Infrarotwerte sind in cm ausgedrückt und wurden unter Verwendung eines Nujol-Mineralöl-"mull" ermittelt. Die Daten des UV-Spektrums sind in mu, gefolgt von der Extinktion £ in Klammern ausgedrückt. Die in Tabelle I genannten Verbindungen sind X-substituierte Aminoeverninomicine D der allgemeinen Formel (I), in der X die in Tabelle I genannte Bedeutung hat.

809833/09(U

Gruppe X

Tabelle I

I.R.-Daten

Amino '

N-Acetylamino

N-Propionylamino

N-Isobutyrylamino

N-Benzoylamino

N-Äthylamino

N,N-Diäfchylamino

N-Acefcyl-N-hydroxyamino

1720; 3400

l66O; 1715

1650; 1720

1650; 1720

N-Cyclohexylcarbonyl-

amino 1650; 1725

1640; 1720

1650

UV-Daten

Λ ^CH3^0H (ε)

max

212 (21,700) 295 (11.200) 212 (25.600) 295 ( 7.200) 212 (24.000) 295 ( 7·000) 212 (30.000) 295 ( 6,400)

212 (24,000)

295 ( 6.400)

225 (41.650)

275 ( 3.200)

215 (20.650)

295 (11.475)

215 (22.040)

295 (13.680)

215

295 ( 6.400)

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58,14	mg
5,0	mg
1,625	mg
0,56	mc
1 ml

Zusammensetzungen von Arzneimittelzubereitungen gemäß der Erfindung werden in den folgenden Beispielen 13 bis 15 genannt.

Beispiel 13 Parenterale Lösung (Mengen pro ml Lösung)

N-Methylglucaminsalz von N-Acetylaminoeverninomicin D

Natriumchlorid Natriumbisulfit

Natriumhydroxyd (In zur Einstellung auf pH 8,7)

Gereinigtes Wasser q.s.

Verfahren

Durch etwa 90% der erforderlichen Wassermenge bläst man Stickstoff. Unter Rühren gibt man das Natriumchlorid und das Natriumbisulfit zu und rührt bis zur Auflösung. Man gibt das N-Methylglucaminsalz von N-Acetylaminoeverninomicin D und dann unter Rühren In-Natriumhydroxyd zu, bis die Lösung einen pH-Wert von 8,7 erreicht. Man gibt Wasser bis zur erforderlichen Gesamtmenge zu und filtriert durch eine sterilisierende Membran. Mit dieser Lösung füllt man Ampullen— flaschen mit unterschiedlicher Dosis, worauf man gefriertrocknet.

Beispiel 14 Parenterale Lösung (Mengen pro ml Lösung)

N-Acetylaminoeverninomicin D von N-Methylglucaminsalz 58,14 mg

Natriumchlorid 5,0 mg

Nätriumbisulfit . - 1,625 mg

Natriumhydroxyd (In bis pH 8,7) 0,56 mg

Methylparaben 1,8 mg

Propylparaben 0,2 mg

Gereinigtes Wasser q.s. 1 ml

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Verfahren

Man bläst Stickstoff durch etwa 9O% der erforderlichen Wassermenge und erhitzt das Wasser auf eine Temperatur von etwa 60 bis 70°C. Man gibt das Methylparaben und das Propylparaben zu, rührt bis zur Auflösung und kühlt dann die Lösung auf 25—3O°C. Das Verfahren wird dann auf die in Beispiel 13 beschriebene Weise weitergeführt.

Beispiel 15
Parenterale Suspension (Mengen pro 2 ml Suspension)

N-Methylglucaminsalz »on
N-Acetylaminoeverninomicln D 100 mg

Natriumcarboxymethylcellulose 3 mg

Polysorbate 80 U.S.P. 1 mg

Methylparaben 3,6 mg

Propylparaben 0,4 mg

Wasser q.s. 2,0 ml

Verfahren

Man stellt eine Lösung aus Natriumcarboxymethylcellulose, Polysorbate 80, Methylparaben und Propylparaben her. Man schlämmt das N-Acetylaminoeverninomicin D

aseptisch mit einem Teil des vorstehend genannten Trägers /auf und gibt das Gemisch durch eine Kolloidmühle. Man mischt die gemahlene Aufschlämmung mit dem Rest des Trägers und füllt dann in sterile Ampullenflaschen ab.

Die pharmakologischen Daten für Verbindungen gemäß der Erfindung sind nachstehend in den Tabellen II bis IV genannt. Hierbei handelt es sich um die folgenden Verbindungen:

Verbindung A: Aminoeverninomicin D Verbindung B: N-Acetylaminoevernlnomicin D Verbindung C: N—Isobutyrylaminoeverninomlcin D

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Die antibakterielle Wirkung in vitro gegen bestimmte Stämme von Staphylococcus aureus ist in Tabelle II angegeben. Die genannten Vierte der Mindesthemmkonzentration (MHI) wurden mit Hilfe des üblichen Verdünnungstests oder Röhrchentests unter Verwendung von Mueller-Hinton-Nährmedium bei einer Bebrütungszeit von 24 Stunden ermittelt. Die genannten Verbindungen wurden in Form ihrer N-Methylglucaminsalze verwendet.

Tabeile II
Antibakterielle Wirkung in vitro

Stamm von Staphylococcus MHK in ug/ml Verbindung aureus . . ; - ■■..'.'..-, . ■.-.

A	B	■ C	25
2.0	0.25	0.	06
0.25	1.0	0.	25
2.0	0.5	0.	125
0.25	0.25	0.	125
1.0	0.125	0.

■ . 2O9P

Giorgio
Gray
59W
Ziegler

Die antibakterielle Wirkung der Verbindung B (N-Acetylaminoeverninomicin D in Form seines N-Methylglucaminsalzes) in vivo bei Mäusen gegen bestimmte Bakterienstämme ist in Tabelle III genannt. Diese Ergebnisse gelten für die subkutane Injektion und sind als Dosis angegeben, die erforderlich ist, um 50% der Versuchstiere zu schützen (PD₅₀). Gruppen von je 7 Mäusen wurden verwendet. Jeweils eine Gruppe wurde bei fünf verschiedenen Dosierungen getestet, wobei 10 Mäuse als Kontrolltiere dienten. Jede Maus erhielt eine Stunde nach der intraperitonealen Infektion mit etwa 10 Mikroorganismen eine einzelne subkutane Dosis. Die Kontrollmäuse waren 18 bis 24 Stunden nach der Infektion allgemein tot. Die überlebenden Tiere

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in den behandelten Gruppen wurden 48 Stunden nach der Infektion ermittelt.

Tabelle	III
Antibakterielle Aktivität in	vivo (Verbindung B)
Bakterienstamm	PD50 (mg/kg)
Staphylococcus aureus
Wood Smith Giorgio 0701605 O7OI6OI Streptococcus (ß-hemolytic)	7 <0.39 1 ή-
0712620 O6186O4 Enterococcus	<0.78 <0.39
1022/72 Streptococcus pneumonia	9
6301	8

Die Toxizitätsdaten für die Verbindung B (N-Acetyl· aminoeverninomicin) sind in Tabelle IV genannt.

809833/09G4

Tabelle IV Toxizität (Verbindung B)

Verabreichung LDr_n bei der Maus mg/kg

Intravenös 275

Intraperitoneal 600

Subkutan 500

Es zeigte sich, daß repräsentative Verbindungen gemäß der Erfindung außer der wertvollen antibakteriel— len Aktivität auch erhöhte Stabilität im Vergleich zu entsprechenden bekannten Everninomicinderivaten aufweisen.

Ferner wurde gefunden, daß die als Zwischenprodukte gebildeten 2-Isoxalolyleverninomicine B, C und D ebenfalls wertvolle antibakterielle Aktivität aufweisen und gegebenenfalls als antibakterielle Mittel verwendet werden können.

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Claims (59)

P ate η t a ns ρ r ü c h e

1) /N—substituierte und N-unsubstituierte Aminoevernino-

micine_T nämlich Aminoeverninomicine B, C und D und ,.-N-alkyl-j N ,N-dialkyl-, N-acyl- und N-acyl-N~hydroxysubstituierte Aminoeverninomicine B, C und D und die pharmazeutisch unbedenklichen Salze dieser Verbiridun-' gen.

2) Verbindungen nach Anspruch 1 mit der allgemeinen Formel

OCH

Cl

OCH_

OH

12 1

worin X für -NH₉ oder -NR R steht, worin R ein Acyl-

rest oder Alkylrest und R Wasserstoff ist oder, wenn R ein Acylrest ist, auch eine Hydroxylgruppe oder,

wenn R ein Alkylrest ist, auch ein Alkylrest sein

kann,

Y für H oder OH und

Z für die Gruppe — CH

3 steht wenn Y OH ist und Z für 3

H oder -CH

OCH,

steht, v/enn Y H ist, und ihre pharmazeu-

tisch unbedenklichen Salze.

3) Verbindungen nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß X für -NH₂ steht.

4) Aminoeverninomicin D.

8 0 9 8 3 3/0904 ORiG'.NAL INSPECTED

5) Verbindungen nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß X für -NR¹R² steht, worin R¹ und R² die in Anspruch 2 genannten Bedeutungen haben.

6) Verbindungen nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,

1 2

daß R ein Acetylrest und R Wasserstoff ist.

7) N-Acetyl—aminoeverninomicin D.

8) Verbindungen nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,

1 2

daß R ein Acetylrest und R eine Hydroxylgruppe ist.

9) N-Acetyl-N-hydroxyaminoeverninomlcin D.

10) Verbindung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,

1 2

daß R ein Athylrest und R Wasserstoff ist.

11) N-Äthylaminoeverninomlcin D.

12) Verbindung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,

12·-
daß R und R beide für Athylreste stehen.

13) Ν,Ν-Diäthyl-aminoeverninomicin D.

14) Verbindungen nach Anspruch 1 bis 13 in Form von pharmazeutisch unbedenklichen Salzen.

15) Verbindungen nach Anspruch 14 in Form der Natriumsalze.

16) Verbindungen nach Anspruch 14 in Form der N-Methylglucaminsalze. ·

17) Natriumsalz von N-Acetyl-aminoeverninomicin D.

18) N-Methylglucaminsalz von N-Acetylaminoeverninomicin D.

19) Verfahren zur Herstellung von Verbindungen nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man

A) ein Everninomicin B, C oder D, ein Hydroxylaminoeverninomicin B, C oder D oder ein 2-Isoxazolyleverninomicin B, C oder D an der Stickstoffunktion reduziert oder

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B) ein Aminoeverninomicin B, C oder D der N-Acylierung unterwirft oder

C) ein Aminoeverninomicin B, C oder D der N-Alkylierung unterwirft,

gegebenenfalls die O-Acylgruppe oder N ,N-Diacylgruppe hydrolysiert und die in dieser Weise erhaltene Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2 in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

20) Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß man beim Verfahren (A) ein Everninomicin B, C oder D als Ausgangsmaterial der Reduktion an der Nitrogruppe durch Hydrieren in Gegenwart eines metallischen Hydrierkatalysators in einem inerten Lösungsmittel, das vorzugsweise eine hohe Dielektrizitätskonstante aufweist, unterwirft und das hierbei erhaltene Aminoeverninomicin B, C oder D in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

21) Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß man als Hydrierkatalysator Raney-Nickel verwendet.

22) Verfahren nach Anspruch 20 oder 21, dadurch gekennzeichnet, daß man als Lösungsmittel ein Alkanol verwendet.

23) Verfahren nach Anspruch 20 bis 22, dadurch gekennzeichnet, daß man als-Lösungsmittel Methoxyäthanol verwendet.

24) Verfahren nach Anspruch 20 bis 23, dadurch gekennzeichnet, daß man das als Ausgangsmaterial dienende Everninomicin B, C oder D in Form eines Salzes verwendet.

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25) Verfahren nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß das Salz ein N-Methylglucaminsalz ist.

26) Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß man beim Verfahren (A) ein Everninomicin B, C oder D als Ausgangsmaterial der Reduktion an der Nitrogruppe durch Reduktion mit einem Chromdl)-salz in einem inerten, mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel unterwirft und das hierbei gebildete Aminoeverninomicin B, C oder D in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

27) Verfahren nach Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, daß man als Chrom(II)—salz Chrom(II)—acetat verwendet,

28) Verfahren nach Anspruch 26 oder 27, dadurch gekennzeichnet, daß man als Lösungsmittel ein Alkanol verwendet .

29) Verfahren nach Anspruch 26 bis 28, dadurch gekennzeichnet, daß man als Alkanol Methanol verwendet.

30) Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß man beim Verfahren (A) ein Hydroxylaminoeverninomicin B, C oder D als Ausgangsmaterial der Reduktion an der Hydroxylaminogruppe durch Reduktion mit Aluminiumamalgam in einem wässrigen niederen Alkanol unterwirft, wobei das Gewichtsverhältnis von als Aluminium gerechnetem Aluminiumamalgam zu dem als Ausgangsmaterial verwendeten Hydroxylaminoeverninomicin über 2:1 liegt,'und das hierbei gebildete Aminoeverninomicin B, C oder D in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

31) Verfahren nach Anspruch 30\ dadurch gekennzeichnet, daß das Gewichtsverhältnis des als Aluminium gerechneten Aluminiumamalgams zu dem als Ausgangsmaterial

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verwendeten Hydroxylaminoeverninomicin über 5:1 liegt.

32) Verfahren nach Anspruch 30 und 31,dadurch gekennzeichnet, daß das Gewichtsverhältnis von Aluminiumamalgam zu Hydroxylaminoeverninomicin im Bereich von 5:1 bis 15:1 liegt. -

33) Verfahren nach Anspruch 30 bis 32, dadurch gekennzeichnet, daß das Volumenverhältnis von Wasser zu niederem Alkanol etwa 0,3:1 beträgt.

34) Verfahren nach Anspruch 30 bis 33, dadurch gekennzeichnet, daß man als niederes Alkanol Äthanol verwendet.

35) Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß man beim Verfahren (A) ein 2-Isoxazolyleverninomicin B, C oder D als Ausgangsmaterial der reduzierenden Spaltung des Isoxazolylringes am Stickstoffatom durch Behandlung des Ausgangsmaterials mit metallischem Zink in einem wässrigen, mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel unterwirft und das hierbei gebildete Aminoeverninomicin B, C oder.D in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

36) Verfahren nach Anspruch 35, dadurch gekennzeichnet, daß man die reduzierende Spaltung unter neutralen Bedingungen durchführt.

37) Verfahren nach Anspruch 35 und 36, dadurch gekennzeichnet, daß man die reduzierende Spaltung unter neutralen Bedingungen unter Verwendung von Zinkstaub und Ammoniumchlorid durchführt.

38) Verfahren nach Anspruch 35 bis 37, dadurch gekennzeichnet, daß das Gewichtsverhältnis von Zinkstaub zu Ausgangsmaterial etwa 1:1 beträgt.

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2805401

39) Verfahren nach Anspruch 37 oder 38, dadurch gekennzeichnet, daß das Gewichtsverhältnis von Ammoniumchlorid zu Zinkstaub etwa 2,5:1 beträgt.

40) Verfahren nach Anspruch 35, dadurch gekennzeichnet, daß man die reduzierende Spaltung unter alkalischen Bedingungen durchführt.

41) Verfahren nach Anspruch 40, dadurch gekennzeichnet, daß man die reduzierende Spaltung unter alkalischen Bedingungen unter Verwendung von Zinkstaub und einem aus Alkalihydroxyden und quaternären Ammoniumhydroxy— den gewählten Hydroxyd durchführt.

42) Verfahren nach Anspruch 19 oder 20 bis 41, dadurch gekennzeichnet, daß man beim Verfahren (A) nach der Reduktionsstufe das gebildete Aminoeverninomicin B, C oder D der N—Acylierung oder N-Alkylierung unterwirft und das hierbei erhaltene N-Acylderivat oder N-Alkylderivat gemäß Anspruch 1 oder 2 in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

43) Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß man beim Verfahren (A) ein Everninomicin B, C oder D als Ausgangsmaterial der reduzierenden Acylierung an der Nitrogruppe unter Verwendung von Zink— staub in Gegenwart eines Acylierungsmittels unterwirft, das hierbei gebildete Produkt der Hydrolyse einer beliebigen O-Acylgruppe oder N,N—Diacy!gruppe unterwirft und das hierbei gebildete N-Acylaminoeverninomicin B, C oder D oder N-Acyl-N-hydroxylaminoeverninomicin B, C oder D in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

44) Verfahren nach Anspruch 43, dadurch gekennzeichnet, daß man die reduzierende Acylierung unter Verwendung

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2805A08

von Zinkstaub und eines säurefreien Säureanhydrids unterwirft.

45) Verfahren nach Anspruch 19 oder 42, dadurch gekennzeichnet, daß man beim Verfahren (B) die N-Acylierung des Aminoeverninomicins B, C oder D unter Verwendung eines Säureanhydrids durchführt, gegebenenfalls anschließend eine beliebige O-Acylgruppe oder N,N-Diacylgruppe hydrolysiert und das hierbei erhaltene N-Acylderivat in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

46) Verfahren nach Anspruch 45, dadurch gekennzeichnet, daß man die N-Acylierung unter Verwendung eines symmetrischen Säureanhydrids durchführt.

47) Verfahren nach Anspruch 45, dadurch gekennzeichnet, daß man die N-Acylierung unter Verwendung eines gemischten Säureanhydrids durchführt.

48) Verfahren nach Anspruch 47, dadurch gekennzeichnet, daß eine Cycloalkancarbonsaure eine der Säuren ist, aus der das gemischte Anhydrid abgeleitet ist.

49) Verfahren nach Anspruch 47, dadurch gekennzeichnet, daß eine Aminosäure eine der Säuren ist, aus der das gemischte Anhydrid abgeleitet ist, wobei die Aminogruppe der Säure während der N-Acylierung durch eine geeignete Schutzgruppe geschützt ist, die anschliessend entfernt wird.

50) Verfahren nach Anspruch 48 oder 49, dadurch gekennzeichnet, daß Chlorameisensäure die andere Säure ist, aus der das gemischte Anhydrid abgeleitet ist.

51) Verfahren nach Anspruch 45 bis 47, dadurch gekennzeichnet, daß die N-Acylierung in Gegenwart eines Alkanols durchgeführt wird.

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52) Verfahren nach Anspruch 51, dadurch gekennzeichnet, daß man als Alkanol Isopropanol verwendet.

53) Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß man beim Verfahren (C) die N-Alkylierung durch reduzierende Alkylierung des Aminoeverninomicins B, C oder D durchführt.

54) Verfahren nach Anspruch 53, dadurch gekennzeichnet, daß man das als Ausgangsmaterial verwendete Aminoeverninomicin B, C oder D mit einem entsprechenden Aldehyd umsetzt, das Reaktionsgemisch oder Produkt in Gegenwart von Raney-Nickel hydriert und das hierbei gebildete N-Alkylaminoeverninomicin B, C oder D in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

55) Verfahren nach Anspruch 53, dadurch gekennzeichnet, daß man das Aminoeverninomicin B, C oder D als Ausgangsmaterial mit einem entsprechenden Aldehyd umsetzt, das Reaktionsprodukt mit Natriumcyanborhydrid reduziert und das hierbei gebildete N-Alkylaminoeverninomicin B, C oder D in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

56) Verfahren nach Anspruch 53, dadurch gekennzeichnet, daß man das Aminoeverninomicin B, C oder D als Ausgangsmaterial mit einem Überschuss des entsprechenden Aldehyds umsetzt, das Reaktionsgemisch oder Produkt in Gegenwart von Platinoxyd hydriert und das hierbei gebildete Ν,Ν-Dialkylaminoeverninomicin B, C oder D in freier Form oder in Form eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes isoliert.

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57) Arzneimittelzubereitung, enthaltend eine Verbindung nach Anspruch 1 bis 19, zusammen mit einem geeigneten pharmazeutischen Träger.

58) Arzneimittelzubereitung nach Anspruch 57 in Form einer festen Dosierungseinheit.

59) Arzneimittelzubereitung nach Anspruch 57 in Form einer parenteralen Lösung oder Suspension.

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