DE19637518A1 - PTX-sensitive G-Proteine, ihre Herstellung und Verwendung - Google Patents

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue humane G-Proteine, ins­ besondere β3-Untereinheiten der G-Proteine, Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung in Diagnostik und Therapie.

Heterotrimere Guaninnukleotid-bindende Proteine (G-Proteine) haben eine herausragende Bedeutung bei der intrazellulären Signaltransduktion. Sie vermitteln die Weiterleitung extra­ zellulärer Signale nach Stimulation von Hormonrezeptoren und anderen Rezeptoren, welche nach Rezeptoraktivierung eine Kon­ formationsänderung durchmachen. Dies führt zur Aktivierung von G-Proteinen, welche nachfolgend intrazelluläre Effektoren (z. B. Ionenkanäle, Enzyme) aktivieren oder hemmen können. Heterotrimere G-Proteine sind aus drei Untereinheiten, den α-, β- und γ-Unter­ einheiten zusammengesetzt. Bislang wurden mehrere unterschied­ liche α-Untereinheiten, 5 β-Untereinheiten und ca. 12 γ-Unterein­ heiten mittels biochemischer und molekularbiologischer Methoden nachgewiesen (Birnbaumer, L. and Birnbaumer, M. Signaltrans­ duction by G proteins: 1994 edition. J.Recept.Res. 15: 213-252, 1995; Offermanns, S. and Schultz, G. Complex information processing by the transmembrane signaling system involving G proteins. Naunyn Schmiedebergs Arch.Pharmacol. 350: 329-338, 1994; Nürnberg, B., Gudermann, T., and Schultz, G. Receptors and G proteins as primary components of transmembrane signal trans­ duction. Part 2. G proteins: structure and function. J.Mol.Med. 73: 1233-132, 1995; Neer, E.J. Heterotrimeric G proteins: Organi­ zers of Transmembrane Signals. Cell 80: 249-257, 1995; Rens- Domiano, S. and Hamm, H.E. Structural and functional relation­ ships of heterotrimeric G-proteins. FASEB J. 9: 1059-1066, 1995).

Die rezeptorvermittelte Aktivierung bestimmter α-Untereinheiten kann durch Vorbehandlung mit Pertussistoxin (PTX) gehemmt werden. Dazu gehören insbesondere die α-Isoformen αi1, αi2 und αi3, sowie unterschiedliche α0-Untereinheiten. Solche G-Proteine werden auch als "PTX-sensitive G-Proteine" bezeichnet.

βγ-Untereinheiten erfüllen wesentliche Funktionen bei der G-Proteinaktivierung sowie bei der Modulation intrazellulärer Reaktionen. Alle bisher bekannten G-Protein-β-Untereinheiten weisen auf der Ebene der Nukleotidsequenz und auf der Ebene der Aminosäuresequenz hohe Homologien auf. Dabei werden diese Ähnlichkeiten nicht nur innerhalb der humanen β-Untereinheiten gefunden (β1, β2, β3) sondern auch im Vergleich zu β-Unterein­ heiten anderer Spezies, beispielsweise Fruchtfliege oder Hefe.

Aus Röntgenstrukturanalysen konnten diejenigen Aminosäuren in α, β und γ-Untereinheiten ermittelt werden, welche untereinander in Kontakt stehen und die für die geordnete Ausbildung des Hetero­ trimers erforderlich sind.

Alle bislang bekannten G-Protein β-Untereinheiten gehören zu den sog. "WD-Repeat"-Proteinen. Der N-Terminus der β-Untereinheit interagiert vorwiegend mit γ-Untereinheiten, der C-Terminus ist an der Interaktion mit Rezeptoren beteiligt.

β-Untereinheiten bilden sogenannte Propellerstrukturen aus. Die β-Propeller der Gβ-Untereinheiten bestehen aus 7 "β-Propeller­ blättern", wobei jedes Propellerblatt aus 4 antiparallel angeord­ neten Aminosäurebereichen besteht. Die siebenfache Symmetrie der β-Propeller läßt sich auf Ebene der Aminosäuresequenz nachweisen, die 7 sogenannte WD-Repeats beinhaltet. Ein WD-Repeat Motiv umfaßt ca. 40 Aminosäuren und weist eine Anzahl konservierter Aminosäuren auf, darunter Trp-Asp-Dipeptidsequenzen. Dieses WD-Motiv beendet häufig das WD repeat (Abb. 1).

Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß beispielsweise bei Hypertonikern G-Protein β3-Untereinheiten vorkommen, die nur aus 6 anstatt der sonst beschriebenen 7 WD-Repeat Motiven bestehen. Diese Hypertoniker wiesen eine gesteigerte zelluläre Aktivierbar­ keit von PTX-sensitiven G-Proteinen gegenüber Normotonikern auf.

Die molekulare Analyse ergab eine neue Aminosäuresequenz für die β3-Untereinheit bei diesen Hypertonikern, die gegenüber der be­ kannten Sequenz um 41 Aminosäuren verkürzt ist. Die Sequenz ist in SEQ ID NO:2 dargestellt. Formal geht sie aus der bekannten humanen β3-Untereinheit durch Deletion der Aminosäuren 167-207 hervor.

Die entsprechende dafür codierende DNA-Sequenz ist in SEQ ID NO:1 beschrieben.

Die Ursache für das Auftreten der verkürzten Gβ3-Untereinheit bei Hypertonikern ist vermutlich ein alternatives Spleißen des entsprechenden Gens. Es findet sich auf DNA-Ebene genau vor der putativen Spleißstelle ein Intron. Das Intron beginnt hinter dem Nukleotid 497 des offenen Leserahmens (Numerierung gemäß SEQ ID NO:1).

Mittels PCR an genomischer DNA konnte auch ein Intron beginnend etwa bei Nukleotid 620 nachgewiesen werden. Die verkürzte Form kommt offenbar durch Deletion eines kompletten Exons zustande. Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Her­ stellung von verkürzten Formen von humanen Gβ3-Untereinheiten wie sie oben erwähnt sind, durch Expression einer dafür codierenden Nukleinsäuresequenz in einem Wirtsorganismus.

Die rekombinante Expression geschieht bevorzugt durch Herstellen eines Genkonstruktes, das neben der codierenden Nukleinsäure­ sequenz auch noch weitere Signal- und Regulationssequenzen ent­ hält, wie Promotoren, Terminatoren, Ribosomale Bindungsstellen, Polyadenylierungsstellen und ähnliche. Die allgemeine Vorgehens­ weise zur rekombinanten Expression eines Gens ist dem Fachmann geläufig.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Nukleinsäuresequenzen zur Herstellung von Arzneimitteln zur gentherapeutischen Behandlung. Durch Einbringen dieser Nukleinsäuresequenzen in direkter Form oder nach Her­ stellung eines entsprechenden Genvektors in Zellen von Patienten kann in diesen eine erhöhte Aktivierbarkeit von G-Proteinen erreicht werden.

Dies ist bei einer Reihe von Erkrankungen, bei denen eine G-Protein assoziierte Fehlsteuerung vorliegt, wünschenswert.

Unter Krankheiten, die mit einer G-Protein Fehlsteuerung assoziiert sind, sind solche Erkrankungen zu verstehen, bei denen das G-Protein in der Signaltransduktion involviert ist und seine Funktion nicht in physiologischer Weise erfüllt.

Bei den Erkrankungen handelt es sich u. a. um Herz-Kreislauf Erkrankungen, Stoffwechselstörungen und Immunerkrankungen.

Als Herz-Kreislauf Erkrankungen sind zu nennen: Hypertonie, Schwangerschaftshypertonie (Gestose, "hypertension in pregnancy"), koronare Herzkrankheit, lokalisierte und/oder generalisierte Atherosklerose, Stenosen der Blutgefäße, Restenose nach revaskularisierenden Gefäßeingriffen (z. B. PTCA mit und ohne Stentimplantation), Apoplexneigung. Thromboseneigung und gesteigerte Thrombozytenaggregation.

Als Stoffwechselstörungen sind zu nennen: Metabolisches Syndrom, Insulinresistenz und Hyperinsulinämie, Typ II-Diabetes mellitus, diabetische Komplikationen (z. B. Nephro­ pathie, Neuropathie, Retinopathie, etc.) Fettstoffwechsel­ störungen, gestörte zentrale Chemorezeption (CO₂-Toleranz, Azido­ setoleranz, plötzlicher Kindstod (SIDS)).

Als Immunerkrankungen sind zu nennen: Gestörte Stärke der körpereigenen Immunantwort (Bildung von Immunglobulinen, Aggressivität von T-Zellen und NK-Zellen), gestörte generelle Proliferationsneigung inkl. Wundheilungs­ vermögen, Neigung zur Tumorentstehung und Proliferation inkl. Metastasierungspotential maligne transformierter Zellen, Dauer der Latenz zeit nach HIV-Infektion bis zum klinischen Ausbruch der Erkrankung, Kaposi-Sarkom, Neigung zu Leberzhirrose, Trans­ plantatoleranz und Transplantatabstoßung.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Nukleinsäuresequenzen zur Diagnostik von Erkrankungen, vor allem auch zur Ermittlung des Risikos, an einer Krankheit, die mit G-Protein-Fehlsteuerung assoziiert ist, zu erkranken.

Neben der Ermittlung des Risikos für bestimmte Erkrankungen können auch allgemeine physiologische Daten und Aussagen durch die erfindungsgemäße Verwendung gemacht werden, beispielsweise zu zentralen Chemorezeption, CO₂-Toleranz, Azidosetoleranz, Gefahr des plötzlichen Kindstods (SIDS), Tauglichkeit für bestimmte Sportarten.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung von Nukleinsäuresequenzen, die komplementär sind zu den für die verkürzte Form der Gβ3-Untereinheit codierenden Nukleinsäure­ sequenzen. Solche Sequenzen lassen sich als Antisense Konstrukte verwenden zur Behandlung oder zur Prävention von Erkrankungen, die mit einer G-Protein Fehlsteuerung assoziiert sind.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Ermittlung eines relativen Erkrankungsrisikos an mit G-Protein- Fehlsteuerung assoziierten Krankheiten für einen Probanden, dadurch gekennzeichnet, daß man die Gensequenz für humanes G-Protein β3-Untereinheit des Probanden mit der Gensequenz SEQ ID NO:1 vergleicht und für den Fall, daß sie mit SEQ ID NO:1 übereinstimmt, dem Probanden ein erhöhtes Erkrankungsrisiko zuordnet.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren zur Ermittlung des relativen Erkrankungsrisikos wird einem Probanden Körpermaterial entnommen, das die genetische Information des Probanden enthält. Dies wird in der Regel durch Blutentnahme und Isolierung der Nukleinsäure hieraus erreicht.

Aus der isolierten Nukleinsäure des Probanden wird die Gen­ struktur für das G-Protein β3 Untereinheit ermittelt und mit der in SEQ ID NO:1 angegebenen Sequenz verglichen.

Die Ermittlung der Genstruktur kann durch Sequenzierung der Nukleinsäure erfolgen. Dies kann entweder direkt aus der genomischen DNA oder nach Amplifizierung der Nukleinsäure beispielsweise mittels PCR-Technik erfolgen.

Die Genstruktur kann auf auf mRNA oder cDNA Ebene erfolgen.

Bevorzugt ist die Ermittlung durch Sequenzierung nach PCR-Ampli­ fikation der cDNA. Die für die PCR-Reaktion geeigneten Primer lassen sich für den Fachmann leicht aus den in SEQ ID NO:1 dar­ gestellten Sequenzen ableiten. Man verfährt dabei vorteilhafter­ weise so, daß jeweils ein Strang und Gegenstrang bindender Primer vor und nach der Deletionsstelle gewählt wird.

Der Genvergleich kann jedoch auch mit anderen Methoden, beispielsweise durch selektive Hybridisierung oder durch entsprechende Kartierung mit Restriktionsenzymen durchgeführt werden.

Die oben beschriebenen diagnostischen Verfahren können auch auf Proteinebene durchgeführt werden. Beispielsweise können die erfindungsgemäßen Proteine dazu verwendet werden, spezifische Antikörper herzustellen, die die verkürzte Form der Gβ3-Unter­ einheit gezielt erkennen. Mittels solcher Antikörper können dann ggf. mittels üblicher ELISA-Methoden proteinchemische Unter­ suchungen zusätzlich oder alternativ zu den genetischen Unter­ suchungen durchgeführt werden.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist die Herstellung von transgenen Tieren, die die oben beschriebene Genveränderung (Verkürzung der Gβ3-Untereinheit) tragen. Solche transgenen Tiere sind vor allem als Tiermodelle für die Untersuchung und Therapie der oben beschriebenen Krankheiten von großer Bedeutung. Die Ver­ fahren zur Erzeugung transgener Tiere sind dem Fachmann allgemein bekannt.

Die folgenden Beispiele dienen der weiteren veranschaulichung der Erfindung.

Experimenteller Teil 1. Funktionelle Ergebnisse zur G-Protein-Aktivierung bei essen­ tieller Hypertonie

Es erfolgte eine detaillierte Charakterisierung der Aktivierung von G-Proteinen aus Zellen normotensiver Probanden und hyper­ tensiver Patienten. Dazu wurde der stimulierte Einbau von radio­ aktiv markiertem [³⁵S]GTPγS nach der von Wieland et al. beschrie­ benen Methode (Wieland, T., Liedel, K., Kaldenberg-Stasch, S., Meyer zu Heringdorf, D., Schmidt, M., and Jakobs, K.H. Analysis of receptor-G protein interactions in permeabilized cells.

Naunyn-Schmiedeberg′s Arch.Pharmacol. 351: 329-336, 1995) quanti­ fiziert. Die Aktivierung von G-Proteinen erfolgte zunächst durch Stimulation von mit Digitonin permeabiliserten Zellen mittels des Peptids Mastoparan-7. Dieses Peptid ahmt die Konfiguration eines aktivierten, G-Protein-gekoppelten Rezeptors nach, so daß damit eine rezeptorunabhängige, direkte G-Proteinaktivierung induziert werden kann (Ross, E.M. and Higashÿima, T. Regulation of G-protein activation by mastoparan and other cationic peptides. Methods Enzymol. 237: 27-38, 1994). Die durch MAS-7-induzierte Bindung von GTPγS ist vollständig PTX-sensitiv, so daß damit die Aktivierung heterotrimerer G-Proteine vom Gi-Typ quantifiziert wird. In Abb. 2 ist die Konzentrationsabhängigkeit der durch Mastiparan-7 (MAS-7) induzierten G-Proteinaktivierung bei Normo­ tonie (NT) und Hypertonie (HT) dargestellt. An HT-Zellen indu­ ziert MAS-7 eine starke [³⁵S]GTPγS-Bindung, deren EC50 bei ca. 5 µM liegt (Abb. 2). Ein Bindungsmaximum wird bei etwa 25 bis 50 µM MAS-7 erreicht. Im Gegensatz dazu werden für die gleiche [³⁵S]GTPγS-Bindung an NT-Zellen 10fach höhere Konzentration benötigt (Abb. 2). Diese Daten belegen, daß die Aktivierung PTX- sensitiver G-Proteine in HT-Zellen deutlich weniger aktivierten Rezeptor benötigt als die in NT-Zellen.

In Abb. 3 ist der Zeitverlauf der durch Mastoparan-7 stimulierten Bindung von [³⁵S]GTPγS an Zellinien von Normotonikern (NT) und Hypertonikern (HT) dargestellt.

Die Bindung von [³⁵S]GTPγS an Hypertonikerzellen erfolgt deutlich beschleunigt (Geschwindigkeitskonstanten 0,005 s^-1 bei Normotonie versus 0,01 s^-1 bei Hypertonie).

In Abb. 4 ist die GDP-Abhängigkeit der durch Mastoparan-7 stimu­ lierten Bindung von [³⁵S]GTPγS an isolierte Zellmembranen von Normotonikern und Hypertonikern dargestellt. Man erkennt, daß das Maximum der stimulierten [³⁵S]GTPγS-Bindung an Membranen von Hypertonikern bereits bei geringeren Konzentrationen von GDP erfolgt (ca. 0,2 µmol/L), während für den gleichen Effekt bei Normotonikern eine Konzentration von 1 µmol/L GDP benötigt wird.

In ähnlicher Weise benötigt die maximale, durch Mastoparan-7 stimulierte Bindung von [³⁵S]GTPγS an Membranpräparationen von Hypertonikerzellen eine geringe Konzentration an freiem Mg²⁺ (ca. 0,01 mmol/L), während für die gleiche maximale [³⁵S]GTPγS-Bindung an Membranen von Normotonikerzellen eine freie Mg²⁺-Konzentration von 0,1 mmol/l erforderlich ist (Abb. 5).

Nachfolgend wurden Experimente zur Rekonstitution der gesteiger­ ten Aktivierbarkeit von G-Proteinen aus Hypertonikerzellen durch­ geführt. Dazu wurden aus Rinderauge der Photorezeptor Rhodopsin, sowie die G-Proteine-α-Untereinheit Transducin (αt) gereinigt (Phillips, W.J., Wong, S.C., and Cerione, R.A. Rhodopsin/trans­ ducin interactions. II. Influence of the transducin-βγ subunit complex on the coupling of the transducin-a subunit to rhodopsin. J.Biol.Chem. 267: 17040-17046, 1992). Zusätzlich wurden aus Mem­ branen von Normotoniker- und Hypertonikerzellen G-Proteine durch Zugabe von Cholat extrahiert (Mitchell, J., Northup, J.K., and Schimmer, B.P. Defective guanyl nucleotidebinding protein βγ sub­ units in a forskolin-resistant mutant of the Y1 adrenocortical cell line. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 89(19): 8933-8937, 1992). Es wurde die durch Rhodopsin (= Rezeptor) induzierte spezifische Bindung von [³⁵S]GTPγS an α-Transducin (αt) gemessen und der Einfluß von Cholatextrakten aus Membranen von Normotoniker- und Hypertonikerzellen auf diese Bindung wurde untersucht. Die Proteinkonzentration der Cholatextrakte war bei allen Versuchen identisch.

In Abb. 6 ist der Einfluß von Cholatextrakten von Normotoniker- und Hypertonikerzellen auf die durch Rhodopsin stimulierte Bindung von [³⁵S]GTPγS an αt dargestellt.

Hier wird ersichtlich, daß Cholatextrakte aus Hypertonikerzellen die durch Rhodopsin katalysierte Bindung von [³⁵S]GTPγS an αt deutlich stärker fördern, als dies durch Cholatextrakte von Normotonikern vermittelt wird.

Die gezeigten Experimente erlauben die folgenden Schluß­ folgerungen:

• - Bei Hypertonikerzellen liegt eine gesteigerte Aktivierbar­ keit von G-Proteinen vor. Diese erfolgt im Vergleich zur G-Proteinaktivierung bei Normotonikerzellen in der Weise effizienter, als Hypertonikerzellen deutlich weniger akti­ vierten Rezeptor benötigen und zusätzlich die Kinetik der G-Proteinaktivierung deutlich beschleunigt ist (Abb. 2 und 3).
• - Zudem benötigt die maximale G-Proteinaktivierung bei Hyper­ tonikerzellen im Vergleich zu Normotonikerzellen deutlich geringere Konzentrationen an freiem GDP und an freiem Mg²⁺. Dies führt zu der Schlußfolgerung, daß die Proteininter­ aktionen von α-, β- und γ-Untereinheiten in Hypertoniker­ zellen gegenüber der in Normotonikerzellen deutlich effizienter erfolgen (Abb. 4 und 5).
• - Die durch Rhodopsin katalysierte Bindung von [³⁵S]GTPγS an αt wird durch Cholatextrakte aus Hypertonikerzellen deutlich mehr verstärkt als durch Cholatextrakte aus Normotoniker­ zellen. Dies beweist, daß die verstärkte G-Proteinaktivierung bei Hypertonikerzellen in einem in vitro-System rekonsti­ tuierbar ist (Abb. 6). Zudem kann aus diesen Befunden die eindeutige Schlußfolgerung gezogen werden, daß die zugrunde­ liegende Alteration in Hypertonikerzellen bei βγ-Untereinhei­ ten heterotrimerer G-Proteine zu suchen ist. In dem genannten Rekonstitutionssystem werden bei Anwesenheit von αt die in den Cholatextrakten noch vorhandenen α-Untereinheiten nicht mehr aktiviert. Zudem aktiviert der zugegebene Fotorezeptor Rhodopsin spezifisch nur das zugegebene αt, nicht hingegen die endogen in Cholatextrakten verbliebenen α-Untereinheiten.

Das neue Protein besteht aus 299 Aminosäuren. Gegenüber der vormals beschriebenen humanen Gβ3-Untereinheit findet sich eine Deletion im Bereich des 4. WD-Repeats. Aufgrund der Regelmäßig­ keit der Abfolge bestimmter Aminosäuren läßt sich jedoch vorher­ sagen, daß das neue, kurze Gβ3-Protein ebenfalls eine regelrechte Propellerstruktur ausbildet, wobei dieser neue Propeller nicht mehr aus sieben (Abb. 1), sondern nunmehr aus 6 Propellerblättern besteht (Abb. 9).

Da sowohl der N-Terminus, als auch der C-Terminus der neuen, kurzen Gβ3-Untereinheiten gegenüber der früher bekannten Gβ3-Untereinheit unverändert sind, läßt sich eine ungestörte Interaktion mit α- und γ-Untereinheiten heterotrimerer G-Proteine sowie mit koppelnden Rezeptoren vorhersagen. Im Zusammenhang mit den oben beschriebenen, funktionellen Ergebnissen ergibt sich, daß die neue, kurze Gβ3-Untereinheit funktionell die bei Hyper­ tonikern beobachtete, gesteigerte Aktivierung heterotrimerer G-Proteine vermittelt.

Als Ursache für das Auftreten der verkürzten Gβ3-Untereinheiten bei Hypertonikern wird ein alternatives Spleißen des für humanes Gβ3-kodierenden Gens angenommen. Tatsächlich findet sich auf DNS- Ebene genau vor der putativen Spleißstelle ein Intron (Abb. 10).

Das Intron beginnt hinter der Base 497 des offenen Leserahmens, wenn das A des ATG-Startcodons als +1 definiert ist.

Die Introngrenzen und die "Branch-site" sind kursiv wiedergegeben und unterstrichen.

Da mittels PCR an genomischer DNS auch ein Intron beginnend bei ca. Base 620 des offenen Leserahmens nachweisbar ist, ist die hier beschriebene verkürzte Form des humanen Gβ3 offensichtlich das Ergebnis eines alternativen Spleißens des ursprünglichen Gβ3, wobei es zur Deletion eines kompletten Exons kommt.

Claims (22)

1. Beta-3 Untereinheit eines humanen G-Proteins, die aus höchstens sechs WD-Repeat-Motiven besteht.

2. Protein nach Anspruch 1 mit der in SEQ ID NO: 2 dargestellten Aminosäuresequenz.

3. Nukleinsäuresequenz codierend für ein Protein nach Anspruch 1 oder 2.

4. Nukleinsäuresequenz nach Anspruch 3 mit der in SEQ ID NO:1 dargestellten Sequenz.

5. Verfahren zur Herstellung eines Proteins gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Nukleinsäuresequenz gemäß einem der vorstehenden Ansprüche ggf. mit geeigneten Regulationssignalen versieht und in einem Wirtsorganismus zur Expression bringt.

6. Verfahren nach Anspruch 5 wobei die Expression in Immunzellen immundefizienter Personen erfolgt.

7. Verfahren nach Anspruch 6 wobei es sich um HIV positive Personen handelt.

8. Verfahren nach Anspruch 5 wobei die Expression in humanen Körperzellen erfolgt.

9. Verwendung einer Nukleinsäuresequenz gemäß einem der vor­ stehenden Ansprüche zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von mit G-Protein-Fehlsteuerung assoziierten Krankheiten.

10. Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein β3-Untereinheit zur Diagnostik von Erkrankungen.

11. Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein β3-Untereinheit zur Ermittlung des Risikos, an einer Krank­ heit, die mit G-Protein-Fehlsteuerung assoziiert ist, zu erkranken.

12. Verwendung nach Anspruch 10 oder 11, dadurch gekennzeichnet, daß die Genveränderung die in SEQ ID NO: 1 dargestellte Nukleinsäuresequenz umfaßt.

13. Verwendung nach Anspruch 10-12, dadurch gekennzeichnet, daß die Krankheit eine Herz-Kreislauf-Erkrankung, eine Stoff­ wechselstörung oder eine Immunerkrankung ist.

14. Verwendung nach Anspruch 10-12, dadurch gekennzeichnet, daß die Krankheit Hypertonie ist.

15. Verwendung einer Nukleinsäuresequenz nach einem der vor­ stehenden Ansprüche zur Erzeugung transgener Tiere.

16. Verwendung einer Nukleinsäuresequenz, die komplementär zu der Nukleinsäuresequenz gemäß Anspruch 3 oder 4 ist zur Herstellung eines Antisense-Arzneimittels zur Therapie oder Prävention von Krankheiten.

17. Verwendung nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, daß die Krankheiten Hypertonie, Schwangerschaftshypertonie, koronare Herzkrankheit, Restenose nach angioplastischen Verfahren oder Apoplex ist.

18. Verwendung nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, daß die Krankheiten eine diabetische Folgeerkrankung wie Nepropathie, Polyneuropathie oder Retionpathie ist.

19. Verwendung nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, daß die Krankheit ein metastasierender Tumor ist.

20. Verfahren zur Ermittlung eines relativen Erkrankungsrisikos an mit G-Protein-Fehlsteuerung assoziierten Krankheiten für einen Probanden, indem man die Gensequenz für humanes G-Protein β3-Untereinheit des Probanden mit der Gensequenz SEQ ID NO: 1 vergleicht und für den Fall, daß sie mit SEQ ID NO: 1 übereinstimmt, dem Probanden ein erhöhtes Erkrankungsrisiko zuordnet.

21. Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß man den Genvergleich durch Sequenzierung, Restriktionsanalyse oder selektive Hybridisierung vornimmt.

22. Verwendung eines Proteins gemäß Anspruch 1 oder 2 zur Her­ stellung von spezifisch gegen dieses Protein gerichteten Antikörpern.