DE1213844B - Verfahren zur Gewinnung von reinem Vitamin B - Google Patents

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

AUSLEGESCHRIFT

Int. α.:

C07d

Deutsche Kl.: 12 ρ-10/05

Nummer: 1213 844

Aktenzeichen: P 28466 IV d/12 ρ

Anmeldetag: 22. Dezember 1961

Auslegetag: 7. April 1966

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Gewinnung von reinem Vitamin B₁₂ aus verunreinigten Lösungen durch Fällen mit mehrwertigen Phenolen mit nachfolgendem Abtrennen und Auflösen der so erzeugten Fällung, das darin besteht, daß man der neutralen wäßrigen Vitamin-B₁₂-Lösung etwa die 20fache Menge des darin enthaltenen Vitamins B₁₂ an Tannin zusetzt, die abgetrennte Fällung in verdünnter Essigsäure löst und aus dieser Lösung das Vitamin B₁₂, gegebenenfalls nach Durchführung weiterer Reinigungsmaßnahmen, in bekannter Weise gewinnt.

Man hat Vitamin B₁₂ aus seinen wäßrigen Lösungen bereits durch Ausfällen als Vitamin~B₁₂-Phenol-Komplex und Zerlegen dieses Komplexes in seine Bestandteile gewonnen. Das bekannte Verfahren, bei dem man zur Ausfällung des Vitamins B₁₂ ein Mono-, Di- oder Triphenol zusetzte, ließ sich jedoch nur auf Vitamin-B ₁₂-Lösungen anwenden, die mindestens 0,5 % Vitamin B₁₂ enthielten. Das erfindungsgemäße Verfahren unterliegt keiner solchen Beschränkung und ist auf Lösungen mit sehr geringem Vitamin-B₁₂-Gehalt anwendbar. Es macht die Anwendung großer Mengen Lösungsmittel überflüssig, die bisher bei der Gewinnung von Vitamin B₁₂ aus Zellsuspensionen und Gärlösungen mit niedrigem Vitamin-B₁₂-Gehalt erforderlich waren, und bringt somit eine wesentliche Vereinfachung mit sich, was Betriebsanlagen sowie aufzuwendende Arbeit, Zeit und Kosten anbelangt.

Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens geht man zweckmäßig von einer vorgereinigten Vitamin-B₁₂-Lösung aus, die in folgender Weise erhalten wurde:

Eine Suspension von Vitamin B₁₂ enthaltenden Mikroorganismenzellen wird 10 Minuten auf 100 bis 120⁰C erhitzt und dann zentrifugiert. Die das Vitamin B₁₂ enthaltende zellfreie Lösung wird durch Zusatz von Calciumoxyd gereinigt. Der Calciumoxydzusatz bewirkt eine weitgehende Ausfällung der Verunreinigungen, ohne die Löslichkeit des in der Lösung verbleibenden Vitamins B₁₂ zu beeinträchtigen. Für die Herstellung der vorgereinigten Vitamin-B₁₂-Lösung wird kein Schutz beansprucht.

Der' so vorgereinigten Lösung wird nach ihrer Neutralisierung erfindungsgemäß Tannin im Überschuß über das darin enthaltene Vitamin B₁₂ zugesetzt. Das ausgefällte Vitamin-B₁₂-Tannat wird abzentrifugiert oder abfiltriert und in verdünnter Essigsäure gelöst. Die Gesamtfeststoffe dieser Lösung betragen etwa 0,5 % und der Gehalt an Vitamin B₁₂ etwa 0,010 bis 0,015%. Das in der Lösung Verfahren zur Gewinnung von reinem
Vitamin B₁

-"12

Anmelder:

Pierrel S. p. A., Mailand (Italien)

Vertreter:

Dr. W. Beil, A. Hoeppener und Dr. H. J. Wolff,

Rechtsanwälte,

Frankfurt/M.- Höchst, Adelonstr. 58

Als Erfinder benannt:

Dr. Ivan Rolovich, Neapel;

Dr. Luciano Devescovi, Capua, Caserta;

Giuseppe Pellone, Portici, Neapel (Italien)

Beanspruchte Priorität:

Großbritannien vom 23. Dezember 1960 (44 301)

enthaltene Vitamin B₁₂ wird darauf in üblicher Weise gereinigt. Man erhält es in einem Reinheitsgrad von mehr als 95%. Da das Volumen der in dieser Weise erhaltenen Lösung relativ gering und ihr Reinheitsgrad sehr hoch ist, genügen kleine Betriebsanlagen sowie nur eine weitere Reinigung durch Ionenaustausch oder Chromatographie, um kristallines Vitamin B₁₂ von hoher Reinheit zu erhalten. Das folgende Beispiel erläutert das erfindungsgemäße Verfahren.

Beispiel

Zur Herstellung der Ausgangslösung für das erfindungsgemäße Verfahren werden 101 einer Zellsuspension, die etwa 245 mg Vitamin B₁₂ enthält, 10 Minuten unter Rühren auf 100 bis 120° C erhitzt.

Nach dem Abkühlen unter Rühren werden 101 reines Aceton zugegeben. Das Gemisch wird 30 Minuten gerührt und dann zentrifugiert oder filtriert, um den mit Vitamin B₁₂ angereicherten Extrakt von den Zellen zu trennen. Der Extrakt wird auf drei Zehntel seines ursprünglichen Volumens eingeengt. Die angereicherte, eingeengte wäßrige Lösung hat ein Volumen von etwa 61 und einen Vitamin-B₁₂-Gehalt von 38 bis 40 y/ml, entsprechend einem Gesamtgehalt von etwa 235 mg. Ihr werden unter Rühren 1,5%, d.h. etwa 90g Calciumoxyd zugegeben. Dabei steigt der pH-Wert der Lösung von 6 auf etwa 10. Die Lösung wird 30 Minuten gerührt

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und dann filtriert. Der Rückstand wird zweimal mit je einem Zehntel des ursprünglichen Volumens an entmineralisiertem Wasser gewaschen. Danach hat die Lösung ein Volumen von etwa 7,21 und einen Das Vitamin B₁₂ kann aus dieser Lösung direkt ausgefällt oder kristallisiert werden, doch wird die Lösung vorzugsweise vorher durch Chromatographieren über Xonerde gereinigt.

Gehalt an Vitamin B₁₂ von etwa 220 mg oder 5 Man erhält 185 mg kristallines Vitamin B₁₂, das 30 y/ml. Die Ausbeute beträgt mehr als 9O°/o. Darauf wird der pH-Wert der Lösung durch den Zusatz von normaler Schwefelsäure auf 7 eingestellt.

Dieser vorgereinigten Lösung gibt man nun unter Rühren 4,5 g Tannin, d. h. die etwa zwanzigfache Menge des Vitamins B₁₂, zu, worauf etwa 60 Minuten bei Raumtemperatur gerührt wird. Es entsteht ein Niederschlag aus Vitamin-B₁₂-Tannat, der abzentrifugiert oder abfiltriert wird. Der feuchte Niederschlag, der praktisch das gesamte in der Lösung vorhandene Vitamin B₁₂ enthält, wiegt 20 bis 25 g. Er wird langsam in 500 cm³ einer 5%igen Essigsäurelösung gelöst. Er löst sich vollständig auf. Die klare Lösung hat die für das Vitamin B₁₂ charakteristische Farbe. Die essigsaure Lösung des Vitamin-B₁₂-Tannats wird auf die Hälfte des ursprünglichen Volumens, d. h. auf 250 cm³, eingeengt, um die überschüssige Essigsäure zu entfernen. Danach enthält die eingeengte Lösung 700 bis 800y/cm³ Vitaauf Grund seiner Extinktion (E J*_n) einen Reinheitsgrad von 95% hat.

Claims (1)

1. Patentanspruch:

   Verfahren zur Gewinnung von reinem Vitamin B₁₂ aus verunreinigten Lösungen durch Fällen mit mehrwertigen Phenolen mit nachfolgendem Abtrennen und Auflösen der so erzeugten Fällung, dadurch gekennzeichnet, daß man der neutralen wäßrigen Vitamin-B₁₂-Lösung etwa die 20fache Menge des darin enthaltenen Vitamins B₁₂ an Tannin zugibt, die abgetrennte Fällung in verdünnter Essigsäure löst und aus dieser Lösung das Vitamin B₁₂, gegebenenfalls nach Durchführung weiterer Reinigungsmaßnahmen, in bekannter Weise gewinnt.

   Die Ausbeute betragt 90% und der Vitamm-B₁₂-Gehalt der Lösung etwa 195 mg. Die Gesamtausbeute aus der ursprünglichen Zellsuspension beträgt etwa 80 %.

   In Betracht gezogene Druckschriften:
   Deutsche Patentschriften Nr. 947 193, 842 527;
   deutsche Auslegeschriften Nr. 1060 549,
   012, 1068 429, 1073 151.