DE10039610A1

DE10039610A1 - Azepinoindol-Derivate, deren Herstellung und Anwendung

Info

Publication number: DE10039610A1
Application number: DE10039610A
Authority: DE
Inventors: Wilfried Lubisch; Roland Grandel; Michael Kock; Reinhold Mueller; Thomas Hoeger; Sabine Schult
Original assignee: BASF SE
Current assignee: Abbott GmbH and Co KG
Priority date: 2000-08-09
Filing date: 2000-08-09
Publication date: 2002-02-28

Abstract

Die Erfindung betrifft Verbindungen der Formel I DOLLAR F1 sowie ihre tautomeren Formen, möglichen enantiomeren und diastereomeren Formen und deren Prodrugs, deren Herstellung und Verwendung, wobei die Werte die in der Beschreibung angegebene Bedeutung besitzen.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neuartige Azepinoindol- Derivate, ihre Herstellung und die Verwendung als Inhibitoren des Enzyms Poly(ADP-ribose)polymerase oder PARP (EC 2.4.2.30) zur Herstellung von Arzneimitteln.

Poly(ADP-ribose)polymerase (PARP) bzw. wie es auch genannt wird Poly(ADP-ribose)synthase (PARS) stellt ein regulatorisches Enzym dar, das in Zellkernen gefunden wird (K. Ikai et al., J. Histo chem. Cytochem. 1983, 31, 1261-1264). Man nimmt an, daß PARP eine Rolle bei der Reparatur von DNA-Brüchen spielt (M.S. Satoh et al., Nature 1992, 356, 356-358). Schädigungen oder Brüche der DNA-Stränge aktivieren das Enzym PARP, das, wenn es aktiviert ist, die Übertragung von ADP-Ribose aus NAD katalysiert (S. Shaw, Adv. Radiat. Biol., 1984, 11, 1-69). Dabei wird Nikotinamid aus NAD freigesetzt. Nikotinamid wird unter Verbrauch des Energie trägers ATP von anderen Enzymen wieder in NAD umgewandelt. Eine Überaktivierung von PARP hätte dementsprechend einen unphysio logisch hohen Verbrauch von ATP zur Folge und dies führt im Extremfall zu Zellschädigungen und Zelltod.

Es ist bekannt, daß Radikale wie Superoxid-Anion, NO und Wasser stoffperoxid in Zellen zu DNA-Schädigungen führen können und da mit PARP aktivieren. Die Bildung von großen Mengen an Radikalen wird bei einer Reihe von pathophysiologischen Zuständen beobach tet und man geht davon aus, daß diese Anhäufung von Radikalen zu den beobachteten Zell- bzw Organschäden führen oder beitragen. Dazu zählt von zum Beispiel ischämische Zustände von Organen wie im Schlaganfall, Herzinfarkt (C. Thiemermann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, 94, 679-683) oder Ischämie der Nieren, aber auch Reperfusionsschäden wie sie zum Beispiel nach der Lyse von Herzinfarkt auftreten (s. oben: C. Thiemermann et al.). Die Hemmung von dem Enzym PARP könnte demzufolge ein Mittel sein, um diese Schäden zum mindestens zum Teil zu verhindern oder abzumildern. PARP-Inhibitoren könnten somit ein neues Therapie prinzip zur Behandlung von eine Reihe von Krankheiten darstellen.

Das Enzym PARP beeinflußt die Reparatur von DNA-Schäden und könnte somit auch in der Therapie von Krebs-Erkrankungen eine Rolle spielen, da in Kombination mit cytostatisch wirksamen Stoffen ein höheres Wirkpotential gegenüber Tumorgewebe beobach tet wurde (G. Chen et al., Cancer Chemo. Pharmacol. 1988, 22, 303).

Nicht limitierende Beispiele für Tumoren sind Leukämie, Glio blassome, Lymphome, Melanome, Mama- und Zervikalkarzinome.

Zudem wurde gefunden, daß PARP-Inhibitoren immunosuppressive Wirkung zeigen können (D. Weltin et al., Int. J. Immunopharmacol. 1995, 17, 265-271).

Es wurde ebenfalls entdeckt, daß PARP bei immunologischen Erkrankungen bzw. Krankheiten, in denen das Immunsystem eine wichtige Rolle spielt, wie zum Beispiel rheumatoide Arthritis und septischer Schock, involviert ist, und daß PARP-Inhibitoren einen günstigen Effekt auf den Krankheitsverlauf zeigen können (H. Kröger et al., Infammation 1996, 20, 203-215; W. Ehrlich et al., Rheumatol. Int. 1995, 15, 171-172; C. Szabo et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998, 95, 3867-3872; S. Cuzzocrea et al., Eur. J. Pharmacol. 1998, 342, 67-76).

Unter PARP im Sinne dieser Erfindung werden auch Isoenzyme des oben beschriebenen PARP-Enzyms verstanden.

Weiterhin zeigte der PARP-Inhibitor 3-Aminobenzamid protektive Effekte in einem Model für den Kreislaufschock (S. Cuzzocrea et al., Br. J. Pharmacol. 1997, 121, 1065-1074).

Ebenfalls gibt es experimentelle Hinweise, daß Inhibitoren des Enzymes PARP als Mittel zur Behandlung von Diabetes mellitus nützlich sein könnten (V. Burkart et al., Nature Med. 1999, 5, 314-319).

In WO 00/42040 sind Azepinoindole aufgeführt, die das PARP-Enzym hemmen. Insbesondere sind dort Derivate als wirksam beschrieben die einen Phenylring in 2-Stellung tragen, der noch mit einfachen Substituenten substituiert sein kann.

Die hier erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Ver bindung I sind bisher nicht beschrieben worden und sind demnach neu.

In der vorliegenden Erfindung werden neue Azepinoindol-Derivate der allgemeinen Formeln I beschrieben, die potente PARP- Inhibitoren darstellen.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind substituierte Azepino indol-Derivate der allgemeinen Formel I

worin
A eine Kette C₁-C₃, wobei jedes Kohlenstoff-Atom noch einen oder zwei der folgenden Substituenten tragen kann: C₁-C₄-Alkyl, OH, O-C₁-C₄-Alkyl, COOH, COO-C₁-C₄-Alkyl und Phenyl oder ein C-Atom auch eine =O-Gruppe tragen kann und
X¹ S, O und NH sein kann und
X² ein Kohlenstoff-Atom, das noch eine Kette C₁-C₄ tragen kann, und N und
X³ N und C-R² sein kann, wobei
R² Wasserstoff, verzweigtes und unverzweigtes C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, Phenyl und
X² und X³ nicht gleichzeitig N sein können, und
R¹ Wasserstoff, Chlor, Fluor, Brom, Iod, verzweigtes und unverzweigtes C₁-C₆-Alkyl, OH, Nitro, CF₃, CN, NR¹¹R¹², NH-CO-R¹³, O-C₁-C₄-Alkyl, wobei R¹¹ und R¹² unabhängig von einander Wasserstoff oder C₁-C₄-Alkyl bedeuten und R¹³ Wasser stoff, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl oder Phenyl bedeuten, und
B einen ungesättigten, gesättigten oder partial-ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 15 Kohlen stoffatomen, einen ungesättigten, gesättigten oder partial- ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 14 Kohlenstoffatomen und 0 bis 5 Stickstoffatomen, 0 bis 2 Sauerstoffatomen bzw. 0 bis 2 Schwefelatomen bedeuten kann, die jeweils noch mit einem R⁴ und maximal 3 unterschiedlichen oder gleichen Resten R⁵ substituiert sind, und ein oder zwei Kohlenstoff- bzw. Schwefel-Atome auch eine oder zwei =O-Gruppen tragen können wie z. B. Ketogruppen, Sulfone oder Sulfoxide,
R⁴ -(D)_p-(E)_s-(F¹)_q-G¹-(F²)_r-(G²)-G³ bedeutet, wobei G¹, G² und G³ nicht gleichzeitig Wasserstoff bzw. eine Bindung sein können und wenn p = s = 0 und q oder r = 1 oder p, q und r = 0, dann können zwei Reste G¹, G² und G³ nicht gleichzeitig eine Bindung oder Wasserstoff sein, und
D S, NR⁴³ und O,
E Phenyl,

-SO₂-, -SO₂NH-, -NHCO-, -CONH-, NHSO₂-, -NHCOCH₂X⁴, und
X⁴ S, O oder NH bedeuten kann, und
F¹ eine geradkettige oder verzweigte gesättigte oder unge sättigte Kohlenstoffkette von 1 bis 8 C-Atome sein kann und
F² unabhängig von F¹ die gleiche Bedeutung wie F¹ besitzt,
G¹ eine Bindung bedeutet oder einen ungesättigten, gesättig ten oder partial-ungesättigten mono-, bi- oder tri cyclischen Ring mit maximal 15 Kohlenstoffatomen, einen ungesättigten, gesättigten oder partial-ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 14 Kohlen stoffatomen und 0 bis 5 Stickstoffatomen, 0 bis 2 Sauer stoffatomen bzw. 0 bis 2 Schwefelatomen bedeuten kann, die jeweils noch mit maximal 3 unterschiedlichen oder gleichen Resten R⁵ substituiert sind, und ein oder zwei Kohlenstoff- bzw. Schwefel-Atome auch ein oder zwei =O-Gruppen tragen können, und
G² NR⁴¹R⁴² und

oder eine Bindung bedeutet und
G³ einen ungesättigten, gesättigten oder partial-unge sättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 15 Kohlenstoffatomen, einen ungesättigten, gesättigten oder partial-ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 14 Kohlenstoffatomen und 0 bis 5 Stick stoffatomen, 0 bis 2 Sauerstoffatomen bzw. 0 bis 2 Schwefelatomen bedeuten kann, die jeweils noch mit maximal 3 unterschiedlichen oder gleichen Resten R⁵ substituiert sind, und ein oder zwei Kohlenstoff- bzw. Schwefel-Atome auch ein oder zwei =O-Gruppen tragen können, oder Wasserstoff bedeutet, und
p 0 und 1 bedeuten kann und
s 0 und 1 und
q 0 und 1 sein kann und
r 0 und 1 sein kann und
R⁴¹ Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, wobei jedes Kohlenstoffatom noch bis zu zwei Reste R⁶ tragen kann, Phenyl, der noch maximal zwei Reste R⁶ tragen kann, und (CH₂)_t-K und
R⁴² Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, -CO-R⁸, CO₂-R⁸, SO₂NH₂, SO₂-R⁸, -(C=N)-R⁸ und -(C=N)-NHR⁸ und
R⁴³ Wasserstoff und C₁-C₄-Alkyl und
t 1, 2, 3, 4 und
K NR¹¹R¹², NR¹¹-C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, Pyrrolidin, Piperidin, 1,2,5,6-Tetrahydropyridin, Morpholin, Homopiperidin, Piperazin, das noch mit einem Alkyl-Rest C₁-C₆-Alkyl substituiert sein kann, und Homopiperazin, das noch mit einem Alkyl-Rest C₁-C₆-Alkyl substituiert sein kann, und
R⁵ Wasserstoff, Chlor, Fluor, Brom, Iod, OH, Nitro, CF₃, CN, NR¹¹R¹², NH-CO-R¹³, C₁-C₄-Alkyl-CO-NH-R¹³, COR⁸, C₀-C₄-Alkyl-O-CO-R¹³, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, Phenyl, CO₂-C₁-C₄-Alkyl, und verzweigtes und unverzweigtes C₁-C₆-Alkyl, O-C₁-C₄-Alkyl, S-C₁-C₄-Alkyl, wobei jeder C-Atom der Alkylketten bis zu zwei Reste R⁶ tragen kann und die Alkylketten auch ungesättigt sein können, und
R⁶ Wasserstoff, Chlor, Fluor, Brom, Iod, verzweigtes und unverzweigtes C₁-C₆-Alkyl, OH, Nitro, CF₃, CN, NR¹¹R¹², NH-CO-R¹³, O-C₁-C₄-Alkyl,
R⁷ Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, Phenyl, wobei der Ring noch mit bis zu zwei Resten R⁷¹ substituiert sein kann, und ein Amin NR¹¹R¹² oder ein zyklisches gesättigtes Amin mit 3 bis 7 Gliedern, das noch mit einem Alkyl-Rest C₁-C₆-Alkyl substituiert sein kann, und Homopiperazin, das noch mit einem Alkyl-Rest C₁-C₆-Alkyl substituiert sein kann, und
wobei die Reste R¹¹, R¹² und R¹³ in K, R⁵, R⁶ und R⁷ unabhängig voneinander die gleiche Bedeutung annehmen können wie R¹, und
R⁷¹ OH, C₁-C₆-Alkyl, O-C₁-C₄-Alkyl, Chlor, Brom, Iod, Fluor, CF₃, Nitro, NH₂, und
R⁸ C₁-C₆-Alkyl, CF₃, Phenyl, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, wobei der Ring noch mit bis zu zwei Resten R⁸¹ substituiert sein kann, und
R⁸¹ OH, C₁-C₆-Alkyl, O-C₁-C₄-Alkyl, Chlor, Brom, Iod, Fluor, CF₃, Nitro, NH₂, und
R⁹ Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, CO₂-C₁-C₄-Alkyl- Phenyl, CO₂-C₁-C₄-Alkyl, SO₂-Phenyl, COR⁸ und Phenyl, wobei die Phenyl-Ringe noch mit bis zu zwei Resten R⁹¹ substituiert sein können, und
R⁹¹ OH, C₁-C₆-Alkyl, O-C₁-C₄-Alkyl, Chlor, Brom, Iod, Fluor, CF₃, Nitro, NH₂ sein kann,
sowie ihre tautomeren Formen, möglichen enantiomeren und diastereomeren Formen, und deren Prodrugs.

Bevorzugt sind die Verbindungen der Formel I, wobei
A eine C₂-Kette ist, die substituiert sein kann, und
X¹ O darstellt und
R¹ Wasserstoff ist.

Bevorzugt sind die Verbindungen der Formel I wie oben angegeben, worin
B einen ungesättigten, gesättigten oder partial-ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 15 Kohlen stoffatomen, einen ungesättigten, gesättigten oder partial- ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 14 Kohlenstoffatomen und 0 bis 5 Stickstoffatomen, 0 bis 2 Sauerstoffatomen bzw. 0 bis 2 Schwefelatomen bedeuten kann, die jeweils noch mit einem R⁴ und maximal 3 unterschiedlichen oder gleichen Resten R⁵ substituiert sind, und ein oder zwei Kohlenstoff- bzw. Schwefel-Atome auch eine oder zwei =O-Gruppen tragen können,
bedeutet.

Besonders bevorzugt sind für B die Reste:
B Phenyl, Cyclohexyl, Piperidin, Pyridin, Pyrimidin, Pyrrol, Pyrazol, Thiophen, Furan, Oxazol, Naphthalin, Piperazin, Chinolin, Pyrazin, die noch mit einen R⁴ oder maximal 2 R⁵ substituiert sein können.

Ganz besonders bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, wobei
R⁴ D-F¹ _0,1-G²-G³ mit G³ gleich Wasserstoff bedeutet und
D O und NR⁴³, wobei R⁴³ Wasserstoff und C₁-C₃-Alkyl und
F¹ C₂-C₄-Alkyl.

Die Verbindungen der Formel I können als Racemate, als enantio merenreine Verbindungen oder als Diastereomere eingesetzt werden. Werden enantiomerenreine Verbindungen gewünscht, kann man diese beispielsweise dadurch erhalten, daß man mit einer geeigneten optisch aktiven Base oder Säure eine klassische Racematspaltung mit den Verbindungen der Formel I oder ihren Zwischenprodukten durchführt.

Alkylketten können jeweils verzweigt oder unverzweigt sein. Unverzweigte Alkylketten sind bevorzugt.

Gegenstand der Erfindung sind auch zu Verbindungen der Formel I mesomere oder tautomere Verbindungen.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind die physiologisch ver träglichen Salze der Verbindungen I, die sich durch Umsatz von Verbindungen I mit einer geeigneten Säure oder Base erhalten lassen. Geeignete Säuren und Basen sind zum Beispiel in Fort schritte der Arzneimittelforschung, 1966, Birkhäuser Verlag, Bd. 10, S. 224-285, aufgelistet. Dazu zählen zum Beispiel Salz säure, Citronensäure, Weinsäure, Milchsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Essigsäure, Ameisensäure, Maleinsäure, Fumar säure usw. bzw. Natriumhydroxid, Lithiumhydroxid, Kaliumhydroxid und Tris.

Unter Prodrugs werden solche Verbindungen verstanden, die in vivo in Verbindungen der allgemeinen Formel I metrabolisiert werden. Typische Prodrugs sind Phosphate, Carbamate von Aminosäuren, Ester und andere.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Azepinoindol-Derivate I kann auf verschiedenen Wegen erfolgen wie z. B. in WO 00/42040 beschrieben.

Die in der vorliegenden Erfindung enthaltenen substituierten Azepinoindol-Derivate I stellen Inhibitoren des Enzyms Poly(ADP- ribose)polymerase oder PARP (EC 2.4.2.30) dar.

Die inhibitorische Wirkung der substituierten Azepinoindol- Derivate I kann mit einem in der Literatur bereits bekannten Enzymtest ermittelt werden, wobei als Wirkmaßstab ein K_i-Wert ermittelt wird. Die Azepinoindol-Derivate I wurden in dieser Weise auf Hemmwirkung des Enzyms Poly(ADP-ribose)polymerase oder PARP (EC 2.4.2.30) gemessen.

Die substituierten Azepinoindol-Derivate der allgemeinen Formeln I stellen Inhibitoren der Poly(ADP-ribose)polymerase (PARP) bzw. wie es auch genannt wird Poly(ADP-ribose)synthase (PARS) dar und können somit zur Behandlung und Prophylaxe von Krankheiten, die mit einer erhöhten Enzymaktivität dieser Enzyme verbunden sind, dienen.

Die Verbindungen der Formeln I können zur Herstellung von Arznei mitteln zur Behandlung von Schädigungen nach Ischämien und zur Prophylaxe bei erwarteten Ischämien verschiedener Organe ein gesetzt werden.

Die vorliegenden Azepinoindol-Derivate der allgemeinen Formel I können danach zur Behandlung und Prophylaxe von neurodegenera tiven Krankheiten, die nach Ischämie, Trauma (Schädel-Hirn trauma), Massenblutungen, Subarachnoidal-Blutungen und Stroke auftreten, und von neurodegenerativen Krankheiten wie multipler Infarkt-Dementia, Alzheimer Krankheit, Huntington Krankheit und von Epilepsien, insbesondere von generalisierten epileptischen Anfällen, wie zum Beispiel Petit mal und tonisch-clonische Anfälle und partiell epileptischen Anfällen, wie Temporal Lope, und komplex-partiellen Anfällen, und weiterhin zur Behandlung und Prophylaxe von Schädigungen des Herzens nach cardialen Ischämien und Schädigungen der Nieren nach renalen Ischämien, zum Beispiel der akuten Niereninsuffizienz, verursacht durch medikamentöse Therapien wie z. B. bei der Cyclosporin-Behandlung, des akuten Nierenversagens oder von Schädigungen, die während und nach einer Nierentransplantation auftreten, dienen. Weiterhin können die Verbindungen der allgemeinen Formeln I zur Behandlung des akuten Myocardinfarkts und Schädigungen, die während und nach dessen medikamentöser Lyse auftreten (zum Beispiel mit TPA, Reteplase, Streptokinase oder mechanisch mit einem Laser oder Rotablator) und von Mikroinfarkten während und nach Herzklappenersatz, Aneurysmenresektionen und Herztransplantationen dienen. Ebenfalls können die vorliegenden Azepinoindol-Derivate I zur Behandlung einer Revascularisation kritisch verengter Koronaraterien, zum Beispiel bei der PCTA und Bypass-Operationen, und kritisch ver engter peripherer Arterien, zum Beispiel Beinarterien, dienen. Zudem können die Azepinoindol-Derivate I zur Behandlung von Tumoren und deren Metastasierung nützlich sein und zur Behand lung von Entzündungen und rheumatischen Erkrankungen, wie z. B. rheumatischer Arthritis und auch zur Behandlung von Diabetes mellitus dienen, zur Behandlung des Multiorganversagens z. B. beim septischen Schock und zur Behandlung des ARDS ("acute respiratory distress-syndrom", Schocklunge).

Die erfindungsgemäßen Arzneimittelzubereitungen enthalten neben den üblichen Arzneimittelhilfsstoffen eine therapeutisch wirksame Menge der Verbindungen I.

Für die lokale äußere Anwendung, zum Beispiel in Puder, Salben oder Sprays, können die Wirkstoffe in den üblichen Konzen trationen enthalten sein. In der Regel sind die Wirkstoffe in einer Menge von 0,001 bis 1 Gew.-%, vorzugsweise 0,001 bis 0,1 Gew.-% enthalten.

Bei der inneren Anwendung werden die Präparationen in Einzel dosen verabreicht. In einer Einzeldosis werden pro kg Körper gewicht 0,1 bis 100 mg gegeben. Die Zubereitung können täglich in einer oder mehreren Dosierungen je nach Art und Schwere der Erkrankungen verabreicht werden.

Entsprechend der gewünschten Applikationsart enthalten die erfindungsgemäßen Arzneimittelzubereitungen neben dem Wirkstoff die üblichen Trägerstoffe und Verdünnungsmittel. Für die lokale äußere Anwendung können pharmazeutisch-technische Hilfsstoffe, wie Ethanol, Isopropanol, oxethyliertes Ricinusöl, oxethyliertes Hydriertes Ricinusöl, Polyacrylsäure, Polyethylenglykol, Poly ethylenglykolstearat, ethoxylierte Fettalkohole, Paraffinöl, Vaseline und Wollfett, verwendet werden. Für die innere Anwendung eignen sich zum Beispiel Milchzucker, Propylenglykol, Ethanol, Stärke, Talk und Polyvinylpyrrolidon.

Ferner können Antioxidationsmittel wie Tocopherol und butyliertes Hydroxyanisol sowie butyliertes Hydroxytoluol, geschmacks verbessernde Zusatzstoffe, Stabilisierungs-, Emulgier- und Gleitmittel enthalten sein.

Die neben dem Wirkstoff in der Zubereitung enthaltenen Stoffe sowie die bei der Herstellung der pharmazeutischen Zubereitungen verwendeten Stoffe sind toxikologisch unbedenklich und mit dem jeweiligen Wirkstoff verträglich. Die Herstellung der Arznei mittelzubereitungen erfolgt in üblicher Weise, zum Beispiel durch Vermischung des Wirkstoffes mit anderen üblichen Trägerstoffen und Verdünnungsmitteln.

Die Arzneimittelzubereitungen können in verschiedenen Applikationsweisen verabreicht werden, zum Beispiel peroral, parenteral wie intravenös durch Infusion, subkutan, intra peritoneal und topisch. So sind Zubereitungsformen wie Tabletten, Emulsionen, Infusions- und Injektionslösungen, Pasten, Salben, Gele, Cremes, Lotionen, Puder und Sprays möglich.

Pharmakologisches Beispiel Hemmung des Enzyms Poly(ADP-ribose)polymerase oder PARP (EC 2.4.2.30)

Eine 96well Mikrotiterplatte (Flacon) wird mit Histonen (Type II-AS; SIGMA H7755) beschichtet. Histone werden dazu in Carbonat- Puffer (0,05 M NaHCO₃; pH 9,4) zu einer Konzentration von 50 µg/ml gelöst. Die einzelnen Wells der Mikrotiterplatten werden über Nacht mit je 100 µl dieser Histon Lösung inkubiert. Anschließend wird die Histon Lösung entfernt und die einzelnen Wells mit 200 µl einer 1%igen BSA (Bovine Serum Albumine) Lösung in Carbonat- Puffer für 2 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Anschließend wird dreimal mit Waschpuffer (0,05% Tween10 in PBS) gewaschen. Für die Enzymreaktion werden je Well 50 µl der Enzymreaktions lösung (5 µl Reaktions-Puffer (1 M Tris-HCl pH 8,0, 100 mM MgCl₂, 10 mM DTT), 0,5 µl PARP (c = 0,22 µg/µl), 4 µl aktivierte DNA (SIGMA D-4522, 1 mg/ml in Wasser), 40,5 µl H₂O) mit 10 µl einer Inhibitorlösung für 10 Minuten vorinkubiert. Die Enzymreaktion wird durch Zugabe von 40 µl einer Substratlösung (4 µl Reaktions- Puffer (s.o.), 8 µl NAD-Lösung (100 µM in H₂O), 28 µl H₂O) gestartet. Reaktionszeit ist 20 Minuten bei Raumtemperatur. Die Reaktion wird durch dreimaliges Waschen mit Waschpuffer (s.o.) gestoppt. Anschließend folgt eine einstündige Inkubation bei Raumtemperatur mit einem spezifischen Anti-Poly-ADP-Ribose Anti körper inkubiert. Als Antikörper wurden ein monoklonaler anti- Poly-(ADP-ribose) Antikörper "10H" (Kawamaitsu, H. et al. (1984), Monoclonal antibodies to poly (adenosine diphosphate ribose) recognize different structures, Biochemistry 23, 3771-3777) verwendet. Polyklonale Antikörper können ebenso verwendet werden.

Die Antikörper wurden in einer 1 : 5000 Verdünnung in Antikörper- Puffer (1% BSA in PBS; 0,05% Tween20) eingesetzt. Nach drei maligem Waschen mit Waschpuffer folgt eine einstündige Inkubation bei Raumtemperatur mit dem sekundären Antikörper. Hier wurden für den monoklonalen Antikörper ein anti-Maus-IgG gekoppelt mit Per oxidase (Boehringer Mannheim) und für den Kaninchen Antikörper ein anti-Rabbit-IgG gekoppelt mit Peroxidase (SIGMA A-6154) je weils in einer 1 : 10.000 Verdünnung in Antikörperpuffer verwendet. Nach dreimaligem Waschen mit Waschpuffer erfolgt die Farbreaktion unter Verwendung von 100 µl/Well Farbreagenz (SIGMA, TMB-Fertig mix, T8540) für ca. 15 min. bei Raumtemperatur. Die Farbreaktion wird durch Zugabe von 100 µl 2 M H₂SO₄ gestoppt. Danach wird sofort gemessen (450 nm gegen 620 nm; ELISA Platten Lesegerät "Easy Reader" EAR340AT, SLT-Labinstruments, Österreich). Der IC50-Wert eines zu messenden Inhibitors liegt bei der Inhibitor konzentration, wo eine halbmaximale Farbkonzentrationsänderung auftritt.

Folgende erfindungsgemäße Verbindungen können analog den oben beschriebenen Methoden hergestellt werden:

1. 2-(4-(4-n-Propyl-piperazin-1-yl)-phenyl)-1,3,4,5-tetrahydro- 6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
2. 2-(4-Piperazin-1-yl-phenyl)-1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino- [5,4,3-c,d]-indol-6-on
3. 2-(4-(4-Isopropyl-piperazin-1-yl)-phenyl)-1,3,4,5-tetrahydro- 6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
4. 2-(4-(4-Benzyl-piperazin-1-yl)-phenyl)-1,3,4,5-tetrahydro-6H- azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
5. 2-(4-(4-n-Butyl-piperazin-1-yl)-phenyl)-1,3,4,5-tetrahydro- 6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
6. 2-(4-(4-Ethyl-piperazin-1-yl)-phenyl)-1,3,4,5-tetrahydro-6H- azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
7. 2-(4-(2-N,N-Dimethylamino-eth-1-yloxy)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
8. 2-(4-(2-Pyrrolidin-1-yl-eth-1-yloxy)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
9. 2-(4-(2-Piperidin-1-yl-eth-1-yloxy)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
10. 2-(4-(2-Piperazin-1-yl-eth-1-yloxy)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
11. 2-(4-(2-(4-Methyl-piperazin-1-yl)-eth-1-yloxy)-phenyl)- 1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
12. 2-(4-(2-(4-Propyl-piperazin-1-yl)-eth-1-yloxy)-phenyl)- 1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
13. 2-(4-(2-(4-Ethyl-piperazin-1-yl)-eth-1-yloxy)-phenyl)- 1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
14. 2-(4-(2-(4-Benzyl-piperazin-1-yl)-eth-1-yloxy)-phenyl)- 1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
15. 2-(4-(2-(4-Acetamido-piperazin-1-yl)-eth-1-yloxy)-phenyl)- 1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
16. 2-(4-(2-(4-Benzamido-piperazin-1-yl)-eth-1-yloxy)-phenyl)- 1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
17. 2-(4-Homopiperazin-1-yl-phenyl)-1,3,4,5-tetrahydro-6H- azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
18. 2-(4-(4-Methylhomopiperazin-1-yl)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
19. 2-(4-(4-Benzylhomopiperazin-1-yl)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
20. 2-(4-(4-n-Butyl-homopiperazin-1-yl)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
21. 2-(4-(4-Ethylhomo-piperazin-1-yl)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
22. 2-Piperidin-4-yl-1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]- indol-6-on
23. 2-(1-Methyl-piperidin-4-yl)-1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino [5,4,3-c,d]-indol-6-on
24. 2-(1-n-Propyl-piperidin-4-yl)-1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino [5,4,3-c,d]-indol-6-on
25. 2-(1-Benzyl-piperidin-4-yl)-1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino [5,4,3-c,d]-indol-6-on
26. 2-(1-n-Butyl-piperidin-4-yl)-1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino [5,4,3-c,d]-indol-6-on
27. 2-(1-Isopropyl-piperidin-4-yl)-1,3,4,5-tetrahydro-6H-azepino [5,4,3-c,d]-indol-6-on
28. 2-(2-(N,N-Dimethylamino)-eth-1-ylamino)-phenyl)-1,3,4,5- tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
29. 2-(2-(N,N-Diethylamino)-eth-1-ylamino)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
30. 2-(2-Piperidin-1-yl-eth-1-ylamino)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
31. 2-(2-Pyrrolidin-1-yl-eth-1-ylamino)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
32. 2-(3-(N,N-Dimethylamino)-prop-1-ylamino)-phenyl)-1,3,4,5- tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
33. 2-(3-(N,N-Diethylamino)-prop-1-ylamino)-phenyl)-1,3,4,5- tetrahydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
34. 2-(3-Piperidin-1-yl-prop-1-ylamino)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on
35. 2-(3-Pyrrolidin-1-yl-prop-1-ylamino)-phenyl)-1,3,4,5-tetra hydro-6H-azepino[5,4,3-c,d]-indol-6-on

Claims

1. Verbindungen der Formel I
worin
A eine Kette C₁-C₃, wobei jedes Kohlenstoff-Atom noch einen oder zwei der folgenden Substituenten tragen kann: C₁-C₄-Alkyl, OH, O-C₁-C₄-Alkyl, COOH, COO-C₁-C₄-Alkyl und Phenyl oder ein C-Atom auch eine =O-Gruppe tragen kann und
X¹ S, O und NH sein kann und
X² ein Kohlenstoff-Atom, das noch eine Kette C₁-C₄ tragen kann, und N und
X³ N und C-R² sein kann, wobei
R² Wasserstoff, verzweigtes und unverzweigtes C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, Phenyl und
X² und X³ nicht gleichzeitig N sein können, und
R¹ Wasserstoff, Chlor, Fluor, Brom, Iod, verzweigtes und unverzweigtes C₁-C₆-Alkyl, OH, Nitro, CF₃, CN, NR¹¹R¹², NH-CO-R¹³, O-C₁-C₄-Alkyl, wobei R¹¹ und R¹² unabhängig von einander Wasserstoff oder C₁-C₄-Alkyl bedeuten und R¹³ Wasserstoff, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl oder Phenyl bedeuten, und
B einen ungesättigten, gesättigten oder partial-unge sättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 15 Kohlenstoffatomen, einen ungesättigten, gesättigten oder partial-ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 14 Kohlenstoffatomen und 0 bis 5 Stickstoffatomen, 0 bis 2 Sauerstoffatomen bzw. 0 bis 2 Schwefelatomen bedeuten kann, die jeweils noch mit einem R⁴ und maximal 3 unterschiedlichen oder gleichen Resten R⁵ substituiert sind, und ein oder zwei Kohlenstoff- bzw. Schwefel-Atome auch eine oder zwei =O-Gruppen tragen können,
R⁴ -(D)_p-(E)_s-(F¹)_q-G¹-(F²)_r-(G²)-G³ bedeutet, wobei G¹, G² und G³ nicht gleichzeitig Wasserstoff bzw. eine Bindung sein können und wenn p = s = 0 und q oder r = 1 oder p, q und r = 0, dann können zwei Reste G¹, G² und G³ nicht gleichzeitig eine Bindung oder Wasserstoff sein, und
D S, NR⁴³ und O,
E Phenyl,
-SO₂-, -SO₂NH-, -NHCO-, -CONH-, NHSO₂-, -NHCOCH₂X⁴, und
X⁴ S, O oder NH bedeuten kann, und
F¹ eine geradkettige oder verzweigte gesättigte oder ungesättigte Kohlenstoffkette von 1 bis 8 C-Atome sein kann und
F² unabhängig von F¹ die gleiche Bedeutung wie F¹ besitzt,
G¹ eine Bindung bedeutet oder einen ungesättigten, ge sättigten oder partial-ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 15 Kohlenstoffatomen, einen ungesättigten, gesättigten oder partial-unge sättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 14 Kohlenstoffatomen und 0 bis 5 Stick stoffatomen, 0 bis 2 Sauerstoffatomen bzw. 0 bis 2 Schwefelatomen bedeuten kann, die jeweils noch mit maximal 3 unterschiedlichen oder gleichen Resten R⁵ substituiert sind, und ein oder zwei Kohlenstoff- bzw. Schwefel-Atome auch ein oder zwei =O-Gruppen tragen können, und
G² NR⁴¹R⁴² und
oder eine Bindung bedeutet und
G³ einen ungesättigten, gesättigten oder partial-unge sättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 15 Kohlenstoffatomen, einen ungesättigten, gesättigten oder partial-ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 14 Kohlenstoff atomen und 0 bis 5 Stickstoffatomen, 0 bis 2 Sauer stoffatomen bzw. 0 bis 2 Schwefelatomen bedeuten kann, die jeweils noch mit maximal 3 unterschiedli chen oder gleichen Resten R⁵ substituiert sind, und ein oder zwei Kohlenstoff- bzw. Schwefel-Atome auch ein oder zwei =O-Gruppen tragen können, oder Wasser stoff bedeutet, und
p 0 und 1 bedeuten kann und
s 0 und 1 und
q 0 und 1 sein kann und
r 0 und 1 sein kann und
R⁴¹ Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, wobei jedes Kohlenstoffatom noch bis zu zwei Reste R⁶ tragen kann, Phenyl, der noch maximal zwei Reste R⁶ tragen kann, und (CH₂)_t-K und
R⁴² Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, -CO-R⁸, CO₂-R⁸, SO₂NH₂, SO₂-R⁸, -(C=N)-R⁸ und -(C=N)-NHR⁸ und
R⁴³ Wasserstoff und C₁-C₄-Alkyl und
t 1, 2, 3, 4 und
K NR¹¹R¹², NR¹¹-C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, Pyrrolidin, Piperidin, 1,2,5,6-Tetrahydropyridin, Morpholin, Homopiperidin, Piperazin, das noch mit einem Alkyl-Rest C₁-C₆-Alkyl substituiert sein kann, und Homopiperazin, das noch mit einem Alkyl-Rest C₁-C₆-Alkyl substituiert sein kann, und
R⁵ Wasserstoff, Chlor, Fluor, Brom, Iod, OH, Nitro, CF₃, CN, NR¹¹R¹², NH-CO-R¹³, C₁-C₄-Alkyl-CO-NH-R¹³, COR⁸, C₀-C₄-Alkyl-O-CO-R¹³, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, Phenyl, CO₂-C₁-C₄-Alkyl, und verzweigtes und unverzweigtes C₁-C₆-Alkyl, O-C₁-C₄-Alkyl, S-C₁-C₄-Alkyl, wobei jeder C-Atom der Alkylketten bis zu zwei Reste R⁶ tragen kann und die Alkylketten auch ungesättigt sein können, und
R⁶ Wasserstoff, Chlor, Fluor, Brom, Iod, verzweigtes und unverzweigtes C₁-C₆-Alkyl, OH, Nitro, CF₃, CN, NR¹¹R¹², NH-CO-R¹³, O-C₁-C₄-Alkyl,
R⁷ Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, Phenyl, wobei der Ring noch mit bis zu zwei Resten R⁷¹ substituiert sein kann, und ein Amin NR¹¹R¹² oder ein zyklisches gesättigtes Amin mit 3 bis 7 Gliedern, das noch mit einem Alkyl-Rest C₁-C₆-Alkyl substituiert sein kann, und Homopiperazin, das noch mit einem Alkyl-Rest C₁-C₆-Alkyl substituiert sein kann, und
wobei die Reste R¹¹, R¹² und R¹³ in K, R⁵, R⁶ und R⁷ unabhängig voneinander die gleiche Bedeutung annehmen können wie R¹, und
R⁷¹ OH, C₁-C₆-Alkyl, O-C₁-C₄-Alkyl, Chlor, Brom, Iod, Fluor, CF₃, Nitro, NH₂, und
R⁸ C₁-C₆-Alkyl, CF₃, Phenyl, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, wobei der Ring noch mit bis zu zwei Resten R⁸¹ substituiert sein kann, und
R⁸¹ OH, C₁-C₆-Alkyl, O-C₁-C₄-Alkyl, Chlor, Brom, Iod, Fluor, CF₃, Nitro, NH₂, und
R⁹ Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, CO₂-C₁-C₄-Alkyl-Phenyl, CO₂-C₁-C₄-Alkyl, SO₂-Phenyl, COR⁸ und Phenyl, wobei die Phenyl-Ringe noch mit bis zu zwei Resten R⁹¹ substituiert sein können, und
R⁹¹ OH, C₁-C₆-Alkyl, O-C₁-C₄-Alkyl, Chlor, Brom, Iod, Fluor, CF₃, Nitro, NH₂ sein kann,
sowie ihre tautomeren Formen, möglichen enantiomeren und diastereomeren Formen, und deren Prodrugs.

2. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 1, wobei
A eine C₂-Kette ist, die substituiert sein kann, und
X¹ O darstellt und
R¹ Wasserstoff ist.

3. Verbindungen der Formel I nach einem der Ansprüche 1 oder 2, worin
B einen ungesättigten, gesättigten oder partial-ungesättig ten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 15 Kohlenstoffatomen, einen ungesättigten, gesättigten oder partial-ungesättigten mono-, bi- oder tricyclischen Ring mit maximal 14 Kohlenstoffatomen und 0 bis 5 Stickstoff atomen, 0 bis 2 Sauerstoffatomen bzw. 0 bis 2 Schwefel atomen bedeuten kann, die jeweils noch mit einem R⁴ und maximal 3 unterschiedlichen oder gleichen Resten R⁵ sub stituiert sind, und ein oder zwei Kohlenstoff- bzw. Schwefel-Atome auch eine oder zwei =O-Gruppen tragen können,
bedeutet.

4. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 3, wobei
B Phenyl, Cyclohexyl, Piperidin, Pyridin, Pyrimidin, Pyrrol, Pyrazol, Thiophen, Furan, Oxazol, Naphthalin, Piperazin, Chinolin, Pyrazin, die noch mit einen R⁴ oder maximal 2 R⁵ substituiert sein können.

5. Verbindungen der Formel I nach Anspruch 4, wobei
R⁴ D-F¹ _0,1-G²-G³ mit G³ gleich Wasserstoff bedeutet und
D O und NR⁴³, wobei R⁴³ Wasserstoff und C₁-C₃-Alkyl und
F¹ C₂-C₄-Alkyl,
F¹ C₂-C₄-Alkyl bedeutet.

6. Arzneimittel enthaltend neben üblichen Träger- und Hilfs stoffen Verbindungen der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 5.

7. Verwendung von Verbindungen der allgemeinen Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Herstellung von Arznei mitteln mit PARP-inhibierender Wirkung.

8. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von neuro degenerativen Krankheiten und neuronalen Schädigungen.

9. Verwendung nach Anspruch 7 zur Behandlung von solchen neuro degenerativen Krankheiten und neuronalen Schädigungen, die durch Ischämie, Trauma oder Massenblutungen ausgelöst werden.

10. Verwendung nach Anspruch 7 zur Behandlung des Schlaganfalls und des Schädel-Hirntraumas.

11. Verwendung nach Anspruch 7 zur Behandlung der Alzheimerschen Krankheit, der Parkinsonschen Krankheit und der Huntington- Krankheit.

12. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung oder Prophylaxe von Schädigungen durch Ischämien.

13. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Epilepsien, insbesondere von generalisierten epileptischen Anfällen, wie zum Beispiel Petit mal und tonisch-clonische Anfälle und partiell epileptischen Anfällen, wie Temporal Lope, und komplex-partiellen Anfällen.

14. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Schädigungen der Nieren nach renalen Ischämien, Schädigungen, die durch medikamentöse Therapie verursacht werden, wie zum Beispiel während der Cyclosporie-Therapie, und zur Behandlung während und nach Nierentransplantationen.

15. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Schädigungen des Herzens nach cardialen Ischämien.

16. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Mikro infarkten wie zum Beispiel während und nach Herzklappen ersatz, Aneurysmenresektionen und Herztransplantationen.

17. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung bei einer Revasculariation kritischer verengter Koronararterien wie zum Beispiel bei PTCA und Bypass-Operationen oder kritisch verengter peripherer Arterien, insbesondere Beinarterien.

18. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung des akuten Myocardinfarktes und von Schädigungen während und nach dessen medikamentöser oder mechanischer Lyse.

19. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Tumoren und deren Metastasierung.

20. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Sepsis des Multiorganversagens wie zum Beispiel während des septischen Schocks und des "acute respiratory distress-synchroms".

21. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von immuno logischen Krankheiten wie Entzündungen und rheumatische Erkrankungen, wie zum Beispiel rheumatoide Arthritis.

22. Verwendung von Verbindungen der Formel I nach Anspruch 7 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung von Diabetes mellitus.