DD296085A5

DD296085A5 - N-acylderivate des peptideglyenmonoomers, verfahren zur herstellung und ihre verwendung

Info

Publication number: DD296085A5
Application number: DD90339076A
Authority: DD
Inventors: Bozidar Suskovic; Radmila Naumski; Vera Gomercic; Zdenko Mubrin
Original assignee: ��@��k��k@��@�@��@��@�K�K�Kk��
Priority date: 1989-03-27
Filing date: 1990-03-26
Publication date: 1991-11-21
Also published as: CS149090A2; EP0390039A3; YU62689A; PL162969B1; CA2013065A1; BG51456A3; HU901831D0; RU1779258C; RO105699B1; EP0390039A2; JPH04193898A; HU202546B; US5153173A; HUT53661A

Abstract

Die Erfindung bezieht sich auf neue N-Acylderivate des Peptidoglycanmonomers der Formel * worin R fuer eine Acylgruppe einer geradkettigen C2-18-Alkylcarbonsaeure oder einer verzweigtkettigen C5-18-Alkylcarbonsaeure oder einer ungesaettigten C12-18-Alkenylcarbonsaeure oder einer C7-12 aromatischen Carbonsaeure steht, und pharmazeutisch zulaessiger Salze davon, bei dem das Peptidoglycanmonomer (PGM) durch Reaktion mit einer Saeure

Description

N-Acylderivate des Peptidoglycanmonomers, Verfahren zur Herstellung und ihre Verwendung

Die Erfindung betrifft neue N-Acylderivate des Peptidoglycanmonomers (PGM) und pharmazeutisch zulässige Salze davon sowie ein Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung.

Die neuen N-Acylderivate des Peptidoglycanmonomers sind insbesondere als Immunmodulatoren und Immunadjuvantien angezeigt.

Es ist bekannt, daß das Peptidglycanmonomer (PGM) der Formel Il

CH₂OH

- OK

KHOCCH

CH₃

CK^CHCOWHCKCOHHCH-COKKj

CH₂

(H)

CH₇ CH, CH-,

COK¹HCHCOWHCHCOK¹HcHCOOH

CH₂ CH₂

(Carbohydr. Res. 110 [1982], 320-325) eine immunmodulierende (Z. Immun. Forsch. 155 [1979], 312-328) sowie eine antimetastatische Wirksamkeit besitzt (Eur. J. Cancer col. 19 (19831,681-686; Cancer Immunol. Immunother. 15(1983], 84-86; Cancer Immunol. Immunother. 18 [1984], 49-53); es ist nichttoxisch und apyrogen. Es ist gut wasserlöslich, aber unlöslich in organischen Lösungsmitteln. Aufgrund seines stark hydrophilen und lipophoben Charakters kann es nicht durch die lipophilen Membranen in dem Organismus durchdringen. Der Grad der Hydrophilizität und Lipophilizität in solchen Verbindungen könnte ihre Wirksamkeit erheblich beeinflussen.

Aufgabe der Erfindung ist es, neue Derivate des Peptidoglycanmonomers der Formel I aufzufinden, ein Verfahren zu deren Herstellung bereitzustellen und ihre Verwendung aufzuzeigen.

Erfindungsgemäß werden neue N-Acylderivate des Peptidoglycanmonomers der allgemeinen Formel I

CH₂OH

CHM_

1 I \

NHOCCH₃ / NHOCCH₃

CH₃

CH^CHCONHCHCONHCH-CONh₀3 j 2

CH₂

CH₂ CH₃ CH₃

COUHCHCONHCHCCWKCHCOOH

CH₂R-HH-tH-CONH-

(I)

zur Verfugung gestellt, worin R für eine Acylgruppe einer geradkettigen C^ia-Alkylcarbonsäure oder einer verzweigtkettigen C-^s-Alkylcarbonsäure oder einer ungesättigten C₁₂-i₈-Alkenylcarbonsäure oder einer C₇.₁₂ aromatischen Carbonsäure steht, und pharmazeutisch zulässige Salze davon.

R in der Bedeutung eines Acyls in einer geradkettigen C₂_,_e-Alkylcarbonsäure in Formel I steht beispielsweise für ein Acetyl, Capriloyl, Caprinoyl, Lauroyl, Palmitoyl, Stearoyl.

R in der Bedeutung eines Acyls in einer verzweigtkettigen Cs-ie-Alkylcarbonsäure in Formel I steht vorzugsweise für Pivaloyl.

R in der Bedeutung eines Acyls in einer ungesättigten C^-ie-Alkenylcarbonsäure in Formel I steht vorzugsweise für Oleoyl.

R in der Bedeutung eines Acyls in einer C7_|₂-aromatischen Carbonsäure in Formel I steht vorzugsweise für Benzoyl.

Die pharmazeutisch zulässigen Salze der neuen N-Acylderivate des Peptidoglycanmonomers (PQM) umfassen auch deren Salze mit anorganischen oder organischen Basen wie Alkalimetallsalze (z.B. Natriumsalze, Kaliumsalze), Erdalkalimetallsalze (z. B.

Calciumsalze), Ammoniumsalze und Salze organischer Basen (z. B. Ethanolaminsalze, Triethanolaminsalze) und andere physiologisch tolerierten Salze.

Gegenstand der vorliegenden Anmeldung ist weiterhin ein Verfahren zur Hßrstellung der neuen N-Acylderivate des PGM der Formel I. Erfindungsgemäß werden per se bekannte Methoden des Acylierens von PGM der Formel Il durch Reaktion mit der entsprechenden Saure

R-COOH (III)

angewendet, worin R die für die Formel I definierte Bedeutung hat und worin die Säure in aktivierter Form vorliegt, z. B. in der Form eines Anhydrids, insbesondere in der Form eines aktiven Esters, wie der bei der Wechselwirkung der Säure und N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxybenzotriazol, N-Hydroxyphthalimid und ähnlicher Alkohole entstehenden Verbindungen. Die Herstellung von aktiven Estern wird in Gegenwart eines Dehydratisierungsrnittels wie Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) und anderen herkömmlichen, in der Literatur beschriebenen Carbodiimiden, Ν,Ν-Carbonyldiimidazol, p-Toluensulfonat und anderen bekannten Sulfonaten durchgeführt. Die Reaktionsbedingungen für den Einsatz solcher Mittel sind in der Literatur beschrieben. Die Reaktionen mit Carbodiimiden werden bevorzugt, da sie bei 20—25°C durchgeführt werden und hohe Ausbeuten ergeben. Die Acylierung von PGM mit beispielsweise Essigsäureanhydrid wird in Gegenwart einer Base wie Natriumhydrogencarbonat durchgeführt, während die Acetylierung mit dem entsprechenden aktiven Säureester in einem inerten Lösungsmittel wie Dimethylformamid (DMF) in Gegenwart einer organischen Base als Katalysator durchgeführt wird. Das PGM und der aktive Ester werden in einem Verhältnis von 1:1,3 bis 1:2 (Mol/Mol) und PGM und das Lösungsmittel in einem Verhältnis von 1:30 bis 1:100 (Masse/Volumen) eingesetzt. Die organische Base liegt in Form eines Amins vor, z. B. Triethylamin (TEA), und wird im Verhältnis von 1:2 bis 1:5 (Mol/Mol) zu dem PGM hinzugegeben. Die Reaktion wird bei einer Temperatur von 20-25⁰C innerhalb von 24 Stunden durchgeführt. Die Reaktionskontrolle geschieht durch Dünnschichtchromatographie auf einer Grundmasse von Kieselsäuregel als Adsorptionsmittel und in einem Losungsmittelsystem, das für die Trennung der Produkte von den Ausgangsreaktanten geeignet ist, z.B. das Lösungsmittelsystem n-Propanol Wasser 7:3 (Vol./Vol.) (System A). Da s Produkt wird bei Zugabe eines organischen Lösungsmittels, in dem es nicht löslich ist, z. B. Ethylacetat (ET Ac), gewonnen. Es wird nach herkömmlichen Methoden gereinigt, beispielsweise durch Saulenchromatographie auf verschiedenen Adsorptionsmitteln wie Kieselsäuregel, Elution mit dem o.g. System A oder auf Sephadex und Elution mit Wasser. Es ist ein weiteres Ziel der Erfindung, eine Methode zur Herstellung von Pharmazeutika zur Verfügung zu stellen, die eine wirksame, aber physiologisch zulässige Dosis des neuen N-Acylderivats des Peptidoglycanmonomers (I) oder dessen pharmazeutisch zulässiger Salze einschließen, die als Immunmodulations- oder Immunadjuvansarzneimittelformulierungen angezeigt sind. Die aktiven Verbindungen können in Kombination mit einem pharmazeutisch zulässigen Träger formuliert werden. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen werden vorzugsweise parenteral verabreicht. Die biologische Wirksamkeit der beanspruchten Verbindungen wurde an 2 bis 2,5 Monate alten männlichen CBA-Mäusen getestet. Die Tiere wurden mindestens eine Woche vor jedem Test an die Laborbedingungen angepaßt. Die Wirksamkeit des N-Acylderivats von PGM wurde mit den Ergebnissen verglichen, die in Kontrollmäusegruppen erreicht wurden, denen eine physiologische Lösung (Negativkontrolle) und das ursprüngliche PGM (Posiiivkontrolle) verabreicht wurden. Alle untersuchten Substanzen wurden dem Organismus intravenös in einer einzigen Dosis von 200 μg/Maus bzw. 10 mg/kg verabreicht. Es wurden die folgenden Wirkungen der immunpharmakologischen Wirksamkeit beobachtet: Milzgewicht, Lymphozytenzahl und Anzahl der plaquebildenden Zellen (PFC-Zahl) nach der Methode von Jerne (in: Cell Bound Antibodies, Whister Institute Press, Philadelphia (1963], S. 109). Das Milzgewicht ist in mg ausgedrückt. Die Anzahl der Milzlymphozyten wird als die absolute Zahl in 1 ml ausgedrückt, während die Anzahl der plaquebildenden Zellen durch ihre Gesamtzahl und durch ihre Wirksamkeit 10⁶ MiLjlymphozyten ausgedrückt wird. Die Versuchsgruppen und die entsprechenden Kontrollgruppen bestanden aus jeweils 5-7 Mäusen. Die Wirksamkeit eines jeden N-Acylderivats von PGM wurde mindestens dreimal in verschiedenen Zeiträumen untersucht. Die statistische Analyse wurde mit dem parametrischen Student-t-Test unter Anwendung des ursprünglichen Computerprogramms Stat Works durchgeführt. Die Signifikanz der Unterschiede wurde durch einen zweiseitigen Test bei einer Akzeptanzhöhe von 5% oder weniger eingeschätzt. Die zusammengefaßten Ergebnisse der Wirkungen der einzelnen N-Acylderivate auf die Parameter der Immunreaktion sind in Tabelle 1 angeführt.

Tabelle 1: Immunologische Wirksamkeit von N-Acylderivaten von PGM

	H	Spleen weight.	t/p	No. at spleen Ly	l/p	PFC	t/p	PFC/ml Ly	l/P
Exp. No. 1 CONTROL	17	109.1 ±17.34		37.7 ± 7.56		74.5 ± 34.40		185.0 ±93.04
%		100		100		100		100
PGM	17	111.7 ±10.66		35.1 ±5.06		82.9 ±31.71		219.1 ±96.98
%		102		93		112		118
No1637	18	123.6 ±18.63	2.37	37.8 + 6.90		93.4 ± 37.55		219.2 ±67.11
%		113	0.05	100		126		118
Exp. No. 2 CONTROL	11	103.3 ±18.55		38.7 ±9.16		56.3 ± 26.55		138.3 ±74.30
%		100		100		100		100
PGM	11	107.5 ±9.40		35.0 ± 6.01		76.2 ± 32.95		206.9 ±113.24	2.97
%		104		90		135		150	0.01
CONTROL	18	99.8 ±17.14		34.2 ± 9.45		69.3 ± 42.49		198.3 ±144.16
%		100		100		100		100
No1640	19	113.4 ±22.28		34.1 ±9.56		95.7 ± 28.45	2.23	282.1 ± 142.64	1.78
%		114		100		138	0.05	142	0.1
Exp. No. 3 CONTROL	16	120.2 ±17.83		38.8 ±8.19		55.7 ± 40.52		122.1 ±80.16
%		100		100		100		100
PGM	17	138.7 ±11.72	3.54	47.2 ±9.53	2.71	88.8 ± 72.51		156.1 + 102.78
%		115	0.01	122	0.02	159		128
No 1645	18	120.4 ±12.36		46.1 ±11.70	2.08	88.5 ± 75.95		154.2 ± 111.12
%		100		119	0.05	159		126
Exp. No.4 CONTROL	16	120.2 ±17.83		38.8 + 8.19		55.7 ± 40.52		122.1 ±80.16
%		100		100		100		100
PGM	17	138.6 ±11.72	3.52	47.2 ±9.52	2.71	88.8 ± 72.20		156.1 ±102.78
%		115	0.01	122	0.02	159		128
No1646	17	124.4 ±16.54		42.1+10.55		81.6 ±79.80		169.9 ±151.32
%		103		109		147		139
Exp. No. 5 CONTROL	15	121.3 + 16.3		57.1+21.44		77.5 ± 28.59		163.6 ±61.00
%		100		100		100		100
PGM	18	129.5 ±11.80		49.5 ± 8.98		107.7 ±57.78		190.4 + 79.53
%		107		87		139		116
No1647	18	135.5 ±22.60		45.2 ±8.50	2.16	125.4 ±68.45	2.49	254.2 ±132.36	2.44
%		112		79	0.05	162	0.02	155	0.05
Exp. No. 6 CONTROL	21	128.9+14.26		38.8 ± 8.45		47.1 ± 28.06		105.9 ±54.24
%		100		100		100		100
PGM	23	134.3 ±13.9		43.8 ± 7.82	2.04	56.0 ±23.14		117.1 ±48.37
%		104		113	0.05	119		111
CONTROL	28	119.0 ±20.93		35.9 ±9.13		57.8 ± 40.45		152.5 ±127.30
%		100		100		100		100
No 1646	28	123.4 ±23.15		39.1 ± 10.92		95.8 ±75.30	2.35	266.5 ± 279.40	1.95
%		104		109		166	0.05	175	0.1
Exp. No.7 CONTROL	18	108.4 ±16.71		41.2+10.28		86.1+25.80		194.0 + 79.48
%		100		100		100		100
PGM	18	111.8± 10.68		38.8 ± 9.06		87.6 ± 29.76		214.4 ±95.61
%		103		94		102		111
No1665	17	131.7+14.40	4.41	42.3 + 7.96		97.1+41.86		210.8 ±88.40
%		121	0.01	103		113		109

Tabelle 1: Immunologische Wirksamkeit von N-Acylderivaten von PGM (Fortsetzung)

	H	Spleen weight.	t/p No. at spleen Ly	l/P	PFC	t/p PFC/mlLy	l/P
Exp.No.8 CONTROL	17	106.4 ±12.49	43.8 ±10.39		77.1+33.81	170.9 ±93.98
%		100	100		100	100
PGM	17	112.7 ±10.38	40.9 ± 7.86		76.9 ± 28.55	163.6 ± 72.39
%		106	93		100	96
No1668	18	112.3 ±12.08	41.9 + 5.66		85.8 ±33.17	202.7 ±91.97
%		106	96		111	119
Exp.No.9 CONTROL	16	117.4 ±18.71	45.9 ±10.47		69.2 ± 23.72	139.1 ± 50.43
%		100	100		100	100
PGM	18	121.6 ±14.64	46.7 ± 7.99		72.8 + 22.20	141.4 + 40.57
%		104	102		105	102
No1700	18	125.5 + 19.44	42.9 + 9.82		76.4 ± 24.94	163.8 ±52.95
%		107	94		110	118

1637: Na-SaIz von N-Stearoyl-PGM

1646: Na-SaIz von N-Capriloyl-PGM

1647: Na-SaIz von N-Lauroyl-PGM

1665: Na-SaIz von N-Oleoyl-PGM

1700: Na-SaIz von N-Pivaloyl-PGM

1640: Na-SaIz von N-Benzoyl-PGM

1644: Na-SaIz von N-Caprinoyl-PGM

1648: Na-SaIz von N-Palmitoyl-PGM

1668: Na-SaIz von N-Acetyl-PGM

Ly-l.ymphozyten

Eine statistisch signifikante Erhöhung des Milzgewichtes wurde bei Anwendung des Natriumsalzes von N-Stearoyl-PGM und des rVatriumsalzes von N-Oleoyl-PGM (13% bzw. 21 % im Vergleich zu den Kontrollwerten) festgestellt. Eine relative Erhöhung des Milzgewichtes wurde ebenfalls bei der Anwendung des Na-Salzes von N-Benzoyl-PGM, des Na-Salzes von N-Lauroyl-PGM und des N-Salzes von N-Pivaloyl-PGM festgestellt, doch die Unterschiede in bezug auf die Kontrollwerte waren nicht beträchtlich erhöht, obwohl es eine klar ausgeprägte Tendenz einer verbesserten Wirksamke it dieser Derivate gab. Die Veränderungen in der Anzahl der Milzlymphozyten (absolute Zahl in 1 ml) waren für jedes Derivat untei schiedlich. In der Mäusegruppe, der das Na-SaIz von N-Lauroyl-PGM verabreicht wurde, wurde eine statistisch signifikante Reduzierung von 20% im Vergleich zu den Kontrol!werten nachgewiesen. Bei den Mäusen, die mit dem Na-SaIz von N-Capriloyl-PGM behandelt wurden, gab es eine statistisch signifikante Erhöhung der Anzahl der Milzlymphozyten (19%). Eine Verringerung von 4-6% in der Anzahl der Milzlymphozyten wurde in Mäusen bei Verabreichung der Pivaloyl- und Acetylderivate nachgewiesen, während eine Erhöhung von 3-9% bei den Mäusen festgestellt wurde, die mit Oleoyl-, Caprinoyl- und Palmitoylderivaten von PGM behandelt worden waren. Obwohl bei den erreichten Veränderungen eine gewisse Tendenz offensichtlich war, waren diese jedoch ohne statistische Signifikanz.

Keine Wirkung auf die Anzahl der Milzlymphozyten hatten dieNa-SalzederStearoyl- und Benzoylderivate von PGM. Praktisch alle untersuchten Stoffe bewirkten eine Erhöhung des PFC-Wertes (plaquebildende Zellen), die zwischen 10 und 66% gegenüber den Kontrollwerten lag. Ein statistisch signifikanter Unterschied wurde jedoch nur bei den Na-Salzen der N-Benzoyl-, N-Lauroyl- und N-Palmitoylderivate von PGM festgestellt. Alle eingesetzten Stoffe erhöhten die PFC-Wirksamkeit, wie hinsichtlich der Anzahl der Milzlymphozyten offensichtlich ist und die zwischen 9% und 75% gegenüber den bei der Kontrollmäusegruppe ermittelten Werten schwankte. Ein statistisch signifikanter Unterschied wurde für das Lauroylderivat von PGM festgestellt. Eine deutlich ausgeprägte steigernde Tendenz wurde für die Benzoyl-und Acetylderivate von PGM ermittelt, wo die Unterschiede im Vergleich zu den Kontrollwerten praktisch das statistisch signifikante Niveau (0,5 < ρ < 0,1) erreichten.

Auf dei Grundlage der gewonnenen Ergebnisse kann geschlußfolgert werden, daß alle untersuchten immunstimulierende Wirksamkeit aufweisen, obwohl die einzelnen Derivate in ihrer Wirkung unterschiedlich sind. Eine der möglichen Interpretationen der Vielzahl der entstehenden Unterschiede in der Anzahl der Lymphozyten und der Erhöhung des Milzgewichts könnte bei den unterschiedlichen Wirkungsmecrianismen des PGM und der beanspruchten N-Acylderivate davon auf das Zellimmunsystem liegen.

Der andere mögliche Grund könnte die Tatsache sein, daß sie sich im Wirkungsmechanismus ähnlich sind, sich aber in ihrer Eigenaktivität unterscheiden. Die Wirkung auf die humorale Immunität ist aus den Veränderungen in der PFC-Wirksamkeit offensichtlich und unterscheidet sich in gewissem Grad von der Wirkung auf die Anzahl der Milzlymphozyten. Eine signifikante Wirkung auf die Gesamt-PFC-Wirksamkeit wurde bei den Benzoyl-, Lauroyl- und Palmitoylderivaten von PGM festgestellt, die die Anzahl von Lymphozyten in 1 mg Milzgewebe nicht wesentlich verändern oder verringern.

Die strukturellen Modifikationen des PGM-Moleküls führten zu einer neuen und nicht offensichtlichen biologischen Wirksamkeit der beanspruchten N-Acylderivate von PGM, die sich auf zwei unterschiedlichen Wegen zeigt: eine signifikante Wirkung auf die Zellimrrunreaktion, die für die Lauroyl- und Capriloylderivate von PGM charakteristisch ist; auf der anderen Seite spielten die Benzoyl-, Lauroyl- und Palmitoylderivate von PGM bei der humoralen Immunität eine bedeutendere Rolle. Die gewonnenen Ergebnisse demonstrierten die höhere Wirksamkeit des Lauroylderivats von PGM aufgrund seiner Wirkung auf die zelluläre und

humorale Immunität; es zeigte darüber hinaus auch eine erhöhte Wirksamkeit im Vergleich zu dem ursprünglichen PGM bei einer Verabreichung in der gleichen Konzentration.

Die Erfindung wird durch die nachfolgenden Beispiele veranschaulicht.

Beispiel 1

Herstellung des Na-Salzes von N-Acetyl-PGM

Eine Lösung von PGM (500 mg, 0,495mmol) in Wasser (7ml) wurde mit einer gesättigten wäßrigen Natriumhydrogencarbonatlösung (NaHCO₃,2,75 ml) versetzt und im Eisbad bei 5°C gekühlt. Das abgekühlte Gemisch wurde tropfenweise mit Essigsäureanhydrid (2,75ml, 29mmol) versetzt und 24 Stunden lang bei 20°C umgerührt. Das Gemisch wurde dann bei vermindertem Druck unter Bildung eines öligen Niederschlags (0,95g) eingedampft, der in Wasser (2,5ml) aufgelöst und auf einer mit 150 ml Sephadex G-25-fein gefüllten Säule getrennt wurde, wonach er mit Wasser eluiert wurde. Die produktumfassenden Fraktionen wurden vereinigt und lyophilisiert.

Ausbeute 490mg (92%)

Schmelzpunkt 186-188°C, UV_max (H₂O) Iran): 202; IR^KBr (cm"¹): 3400-3240,1 660,1 550,1410.

Ή NMR (D₂O) (ppm): 1,90 (s, 3H CH₃CONH-A₂pm), 1,96 (s, 3H CH₃CONH - GIc), 2,03 (s, 3H CH₃CONH-MUr).

Abkürzungen:	Diaminopimelyl
A₂pm =	Muramoyl
Mur =	Glucosaminyl
GIc

Beispiel 2

Herstellung von N-Stearoyl-PGM

Eine Lösung von PGM (1,546mg, 1,53mmol) in DMF (26,6ml) wurde mit Succinimidstearat (800mg, 2,09mmol) und Triethylamin (TEA) (0,4ml, 2,18mmol) versetzt und 20 Stunden lang bei 20-25⁰C umgerührt. Es entstand eine gelatineartige Suspension, die tropfenweise unter Rühren mit EtOAc (180ml) versetzt wurde und über weitere 5 Stunden umgerührt wurde. Der Niederschlag wurde durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Die Ausbeute betrug 2g. Das Produkt wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselsäuregel (25g) und Elution mit dem Lösungsmittelsystem A gereinigt. Die produktumfassenden Fraktionen wurden vereinigt und durch Verdampfung des Lösungsmittels bei vermindertem Druck eingedickt.

Ausbeute 1,44g (57%)

Schmelzpunkt 217-220⁰C, UV™« (H₂O) (nm): 204; IR^KBr (cm'¹): 3280,2910,2350,1 635,1 530.

Beispiel 3

Herstellung von N-Pivaloyl-PGM

Eine Lösung von PGM (500mg, 0,495mmol) in DMF (10ml) wurde mit Succinimidpivalat 137mg, 0,688mmol) und Triethylamin (TEA) (0,13 ml, 0,7 mmol) versetzt und 24 Stunden lang bei 25⁰C verrührt. In die klare Lösung wurde tropfenweise EtOAc (50ml) gegeben, und der entstandene Niederschlag wurde weitere 2 Stunden lang umgerührt und abgefiltert. Der Niederschlag wurde mit EtOAc (2x 5 ml) gewaschen und getrocknet. Die Ausbeute betrug 550mg. Das Produkt wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselsäuregel und Elution mit dem Lösungsmittelsystem A gereinigt. Die produktumfassenden Fraktionen wurden vereinigt und durch Verdampfung des Lösungsmittels bei vermindertem Druck eingedickt.

Ausbeute 270mg (49,8%).

Schmelzpunkt202-204°C, UV_max (H₂O) (nm): 201; IR^KBt (cm"¹): 3400,3300,3080,3050, 2980,1650,1540.

Beispiel 4

Herstellung von N-Oleoyl-PGM

Eine Lösung von PGM (500mg, 0,495mmol) in DMF (9ml) wurde mit Succinimidoleat (258mg, 0,679mmol) und Triethylamin (TEA) (0,13 ml, 0,7 mmol) versetzt und 24 Stundenlang bei 25 "C verrührt. Es wurde tropfenweise EtOAc (50 ml) hinzugegeben, und der entstandene Niederschlag wurde weitere 3 Stunden lang umgerührt. Der Niederschlag wurde durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Die Ausbeute betrug 680mg. Der Niederschlag wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselsäuregel und Elution mit dem Lösungsmittelsystem A gereinigt. Die produktumfassenden Fraktionen wurden vereinigt und durch Verdampfung des Lösungsmittels bei vermindertem Druck eingedickt.

Ausbeute 0,345g (54,6%)

Schmelzpunkt 204-205⁰C, UV_m„ (H₂O) (nm): 198; IR^Ker (cm"¹): 3300,2950,2875,1 640,1555.

Beispiel 5

Herstellung von N-Benzoyl-PGM

Eine Lösung PGM (1,346mg, 1,33mmol) in DMF (23,3ml) wurde mit Succinimidbenzoat (400mg, 1,825mmol) und Triethylamin (TEA) (0,35ml) versetzt und 24 Stunden lang bei 25°C umgerührt. Es wurde tropfenweise EtOAc (16OmIl hinzugegeben, und die entstandene Suspension wurde weitere 5 Stunden lang umgerührt. Der Niederschlag wurde durch Filtration abgetrennt, mit EtOAc (2x 10ml) gewaschen und getrocknet. Die Ausbeute betrug 1,45g. Das Produkt wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselsäuregel undElution mit dem Lösungsmittelsystem Agereinigt. Die produktumfassenden Fraktionen wurden vereinigt und durch Verdampfung des Lösungsmittels bei vermindertem Druck eingedickt.

Ausbeute 1,04g (69,1 %)

Schmelzpunkt 173-175"C, UV_m,_x(H₂O) (nm): 203,224 (sh); IR¹™' (cm"'): 3260,1680,1515.

Tabelle 2 Wichtigste physikalische Eigenschaften von N-C	Schmelzpunkt	UV_ma)< (H₂O)
N-Acyl-PGM	⁰C	(nm)
	194-195	203
Capiiloyl	196-197	203
Caprinoyl	203-205	204
Lauroyl	205-208	203
Palmitoyl

Beispiel 6-9

Analog zu der in den Beispielen 2-5 beschriebenen Art und Weise wurden die folgenden PGM-Derivate gewonnen: Capriloyl, Caprinoyl, Lauroyl, Palmitoyl. Die wichtigsten physikalischen Eigenschaften dieser Derivate sind in Tabelle 2 dargestellt.

IR^KBr(cm-')

3280.2930,1 655,1 638,1545 2990,1610,1580,1090 3280,2920,2850,1 655,1 543 3 280,2 920,2 845,1 635,1 520

Beispiel 10

Herstellung von N-Stearoyl-PGM

Eine Lösung Stearinsäure (284,5mg, 1 mmol) in einem Lösungsmittelgemisch von Ethylacetat-Tetrahydrofuran (1:1, Vol./Vol., 25ml) wurde mit N-Hydroxybenzothiazol (HOBt) (162,2 mg, 1,2mmol) und DCC (247mg, 1,2 mmol) versetzt und 16 Stunden lang bei 2Q-25"C umgerührt. Der gewonnene Niederschlag wurde durch Filtration abgetrennt und auf einem Filter mit EtOAc (2 x 3ml) gewaschen. Die Mutterlauge und die Extrakte wurden vereinigt und bei vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Das Rohprodukt (470mg) wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselsäuregel (5g) gereinigt und mit dem Lösungsmittelsystem Chloroform-Methanol (100:1, Vol./Vol.) eluiert. Es entstanden 350 mg gereinigtes N-Benztriazolstearat, das in DMF (20 ml) aufgelöst und mit PGM (511mg, 0,499 mmol) und Triethylamin (TEA) (0,13 ml) versetzt wurde. Das Gemisch wurde 16 Stunden lang bei 2O-25°C umgerührt. Es entstand ein gelatineartiger Niederschlag, der mit EtOAc (88ml) versetzt wurde und eine weitere Stunde umgerührt wurde. Der Niederschlag wurde durch Filtration abgetrennt, in EtOAc (45ml) wiederaufgeschwemmt, eine Stunde lang umgerührt und wieder abgefiltert und getrocknet. Die Ausbeute betrug 621 mg. Das Produkt wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselsäuregel (8g) und Edition mit dem Lösungsmittelsystem A gereinigt. Die produktumfassenden Fraktionen wurden vereinigt, das Lösungsmittel wurde bei vermindertem Druck verdampft, und das Produkt wurde getrocknet

Die Ausbeute betrug 542,5g (85%). Das Produkt war mit dem Produkt von Beispiel 2 identisch.

Beispiel 11

Herstellung des Natriumsalzes von N-Stearoyl-PGM

N-Stearoyl-PGM von Beispiel 1 (1 276,5 mg, 1 mmol) wurde zu Wasser (20 ml) hinzugegeben, in dem eine äquimolare Menge Natriumhydroxid aufgelöst worden war. Die klare Lösung wurde eine Stunde lang umgerührt und lyophilisiert. Die Ausbeute betrug 1,281 mg.

Beispiel 12

Herstellung des Natriumsalzes von N-Stearoyl-PGM

Gemäß dem Verfahren von Beispiel 2 wurde das bei Ausfällen mittels Zugabe von EtOAc gewonnene Rohprodukt in Wasser aufgeschwemmt, durch den Zusatz von Natriumhydroxid bis zu einem pH-Wert von 7 neutralisiert. Daraufhin wurde die klare Lösung in eine mit Sephadex G-25-fein gefüllte Säule gegeben und anschließend mit Wasser eluiert. Die Fraktionen, die das gleiche Produkt wie in Beispiel 11 enthielten, wurden vereinigt und lyophilisiert.

Analog zu der in den Beispielen Π und 12 beschriebenen Art und Weise wurden weitere pharmazeutisch zulässige Salze

gewonnen.

Claims

1. N-Acylderivate des Peptidoglycanmonomers der Formel I

CH₂OH

I
IMOCCH,

CH.CHCONHCHCONHCH-CONH., 3 ι 2

CHp

CH, CH. CH₇

CONHCHCOUHCHCONHCHCOOH

CH₂R-Wl-OH-CONH₂

worin R eine Acylgruppe einer geradkettigen C₂-i8-Alkylcarbonsäure oder einer verzweigtkettigen C5-18-Alkylcarbonsäure oder einer ungesättigten Ci₂₁₈-Alkenylcarbonsäure oder einer C₇_₁₂-aromatischen Carbonsäure bedeutet, und pharmazeutisch zulässige Salze davon.

2. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R Acetyl bedeutet.

3. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R Pivaloyl bedeutet.

4. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R Capriloyl bedeutet.

5. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R Caprinoyl bedeutet.

6. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R Lauroyl bedeutet.

7. Verbindungder Formel I nach Anspruch 1, worin R Palmitoyl bedeutet.

8. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R Stearoyl bedeutet.

9. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R Oleoyl bedeutet.

10. Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, worin R Benzoyl bedeutet.

11. Verfahren zur Herstellung von N-Acylderivaten des Peptidglycanmonomers der Formel I

CH₂OH

NHOCCH₃ CH₃

CH^CHCONHCHCONHCH-CONh₀ -> ι <-

H, Ht

COWHCHCOHHCHCONHCHCOOH CH₂

CH₂ CH₂ l-HH-CH-

COKH₂

worin R eine Acylgruppe einer geradkettigen C₂_i8-Alky[carbonsäure oder einer verzweigtkettigen C5_₁₈-Alkylcarbonsäure oder einer ungesättigten C₁₂-₁₈-Alkenylcarbonsäure oder einer C₇_₁₂-aromatischen Carbonsäure bedeutet, und pharmazeutisch zulässigen Salzen davon, dadurch gekennzeichnet, daß ein Peptidoglycanmonomer der Formel Il

CH₂OH

- OH

K¹HO CC H

CH-,CHC0WHCHC0NHCH-C0KH_o

CH₉ CH, CH.

GOH HCHCOMHCHCON'HCHCOOH

CH₂

CH

₂ H-HU-CH-COUH₂

durch Reaktion mit einer Säure R-COOH

(III),

worin R die in Formel I definierte Bedeutung besitzt und wobei die Säure in aktivierter Form vorliegt, in Gegenwart einer Base acyliert wird.

12. Verfahren nach Anspruch 11, worin die Säure III in der Form eines Anhydrids oder Esters vorliegt.

13. Verwendung der Verbindungen der Formel I und ihrer pharmazeutisch zulässigen Salze nach Anspruch 1 für Pharmazeutika.

14. Verwendung der Verbindungen der Formel I und ihrer pharmazeutisch zulässigen Salze nach Anspruch 1 für Immunmodulatoren.

Verwendung der Verbindungen der Formel I und ihrer pharmazeutisch zulässigen Salze nach Anspruch 1 für Immunadjuvantien.