[go: up one dir, main page]

CZ376597A3 - Derivát dolastatinu, způsob jeho přípravy a jeho použití - Google Patents

Derivát dolastatinu, způsob jeho přípravy a jeho použití Download PDF

Info

Publication number
CZ376597A3
CZ376597A3 CZ973765A CZ376597A CZ376597A3 CZ 376597 A3 CZ376597 A3 CZ 376597A3 CZ 973765 A CZ973765 A CZ 973765A CZ 376597 A CZ376597 A CZ 376597A CZ 376597 A3 CZ376597 A3 CZ 376597A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
methyl
peptide
xab
xaa
residues
Prior art date
Application number
CZ973765A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ293683B6 (cs
Inventor
Andreas Dr. Haupt
Franz Dr. Emling
Cynthia A. Dr. Romerdahl
Original Assignee
Basf Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Basf Aktiengesellschaft filed Critical Basf Aktiengesellschaft
Publication of CZ376597A3 publication Critical patent/CZ376597A3/cs
Publication of CZ293683B6 publication Critical patent/CZ293683B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká peptidu a farmaceutického prostředku, který ho obsahuje
Dosavadní stav techniky
Je známé, že peptidy izolované 2 mořských 2drojů jako Dolastatin-10 (americký patentový spis číslo 4 816444) a Dolastatin-15 (evropský patentový spis číslo EP-A-398558) mají mocnou aktivitu jako inhibitory růstu buněk (Biochem Pharmacology 40, č. 8, str. 1859 až 1864, 1990; J. Nati. Cancer Tnst.
85, str. 483 až 488, 1993 a tam uváděné odkazy na literaturu). Na základě zajímavých výsledků při pokusech s nádorovými systémy in vivo, se provádějí v současné době další preklinická hodnocení těchto přírodních produktů k iniciaci klinických studií na nemocných rakovinou.
Přírodní produkty mají však ten nedostatek, že jsou špatně rozpustné ve vodných rozpouštědlech a investiční náklady pro jejich syntézu jsou vysoké.
Vynález se týká nových peptidů a jejich derivátů, které představují 21epšený terapeutický potenciál pro ošetřování neoplastových onemocnění ve srovnání s Dolastat inem-15. Kromě toho lze nové peptidy podle vynálezu snadno syntetizovat dále podrobně popsaným způsobem.
« * · · ♦
1*1 I ♦· ·· • · · · · · • · ··
• · · • · · ·
Podstata .vynálezu
Podstatou vynálezu je peptid obecného vzorce T
RiRSN - CHX - CO - A - B - D - E - (F)t, - K ( I) kde znamená
R2
R1-N-R2
A
B
D
E
F
X
R2
R1-N-R2
A
B
D
E
F
X methyl, ethyl nebo isopropyl, vodík, methyl nebo ethyl, spolu dohromady pyrroi 1 idinový kruh, zbytky valyl, isoleucyl, leucyl, 2-terč.-buty1glycy1,
2-ethy1glycyl, norleucyl nebo norvalyl, zbytky N-methylvalyl, N-methylleucyl, N-methyli soleucyl, N-methylnorvalyl, N-methyl nor1eucyl, N-methyl-2terc.-buty1g1ycy1, N-methyl-3-terč.-butylalanyl nebo N-methyl-2-ethylglycyl, zbytky 3,4-dehydroprolyl, 4-fluoroproly1, 4,4-difluoroprolyl, azetidin-2-karbonyl, 3-methylprolyl, 4-methylprolyl nebo 5-methy1prolyl, zbytky prolyl, homoprolyl, hydroxyproly1 nebo thiazolidi n-4-karbony1, zbytky valyl, 2-terč.-butylglycyl, isoleucyl, leucyl, 2-cyklohexylglycyl, norleucyl, norvalyl, neopenty1g1ycyl, alanyl, beta-alanyl nebo aminoisobutyroy1, alkyl s výhodou s 2 až 5 atomy uhlíku, cyklopropyl nebo cyklopentyl, • · · · · · t O nebo 1 a
K alkoxy s výhodou s 1 až 4 atomy uhlíku, benzyloxy nebo substituovanou nebo nesubstituovanou aminoskupinu, nebo jeho soli s fyziologicky vhodnými kyselinami. Vynález se také týká způsobů přípravy těchto peptidů obecného vzorce I, farmaceutických prostředků, které tento peptid obecného vzorce I obsahují spolu s farmaceuticky vhodnými nosiči a kterých se používá pro ošetřování rakoviny.
Symbol K znamená obzvláště Ci-4-alkoxy, benzyloxy, NH2, “NH-Ci-n-alkyl, -NH-C(CH3)2CN, -NH-C(CH3)2CCH, -NH-C(CH3)2C-CH2, -NH-C(CH3)2CH2CH2OH, -NH-C(CH3)2CH2OH, -NH-Cj-e-cykloalkyl, -NH-[3,3,0]-bicyklooletyl, noře <^.edryl, norpseudoe^.edryl, -NH-Jtinolyl, -NH-pyrazyl, -NH-CH2-benzimidazolyl, -ΝΗ-adamantyl, -NH-CH2-adamantyl, -NH-CH(CH3)- <£enyl, -NH-C(CH3)2’^enyl, •N(C1.<“alkoxy) Ci-4-alkyl, -NfCi^-alkoxy)-CH2-^enyl, -N(Cj..«-alkoxy)_4enyl/ -N(CH3)OBzl, -NH-(CH2)v-^;enyl (v-0,1,2, .. 3), -NH-(CH2)ra-na^t2yl (m-0, · 1), -NH-(CH2 )w-benzhydryl (w-0,1, or 2), -NH-bifenyl, -NH-pyridyl, -NH-CH2-pyridyl, -NH-CH2-CH2-pyridyl, -NH-benzothiazolyl, -NH-benzoisothiazolyl, -NH-benzopyrazolyl, -ΝΗ-benzoxazolyl, -NH-(CH2)ra-fluorenyl (m-0 } 1)/
-NH-pyrimidyl, -NH-(CH2)m-indanyl (m-0 ;. 1),
-NH-(CH2CH2O)y-CH3 (y-0,1,2,3,4, 5), -NH- (CH2CH2O)y-CH2CH3 (y-0,1,2,3,4, 5), -(CH2CH2O)y-CH3 (y-0,1,2,3,4, 5),
- (CH2CH2O)y-CH2CH3 (y-0,1,2,3,4, -NCH3-NH-CH2-CsH5; tiébřř.
5), -NCH3-NH-C6H5,
- 4 • · >
S
COOCHj
- 5 ·· ·«· * * »« • · · · · » · • · · · · * · é · · · · • · · · · • ·· · · « « ···
- 6 • · ·»·
R1 methyl nebo ethyl,
R2 vodík. methyl nebo ethyl,
A zbytky valyl, isoleucyl nebo 2-terč.-butylg1ycy1,
B zbytky 2-terč. N-methylvalyl, N-methylisoleucyl nebo N-methyl- -buty1glycyl,
D zbytky 3,4-dehydroprolyl, 4-fluoroprolyl, azetidin-2karbonyl, 3-methylprolyl nebo 5-methylprolyl,
E zbytky prolyl, homoprolyl, hydroxyprolyl nebo thiazo1 i din-4-karbony1,
F zbytky D-valyl, 2-terč,-butylg1ycyl , D-isoleucyl, Dleucyl nebo aminoisobutyroy1,
-CH(CH3)3/ -C(CH3)3, 0Γ -CH(CH3)CH2CH3;
t 0 nebo 1 a « ····
- 7 K s výhodou znamená
-OC(CH3)3, -NHCH3, -NHCH2CH3, -NH(CH2)2CH3, -NH(CH2)3CH3, -NH(CH2)4CH3, -NH(CH2)5CH3, -NH(CH2)6CH3, -NH(CH2)7CH3, -NHCH(CH3)2, -NHCH(CH3)CH2CH3, -NHCH(CH3)CH2CH2CH3, -NHCH(CH2CH3)2, -NH(CH2CH2CH3)2, -NHC(CH3)3/
- NHCH (CH2CH3 ) CH2CH2CH3, - NHCH (CH3) CH (CH3) 2 , -NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2, -NHCH(CH3)C(CH3)3, -NH-cyklopropyl, -NH-cyklobutyl, -NH-cyklopentyl, -NH-cyUlohexyl, -NH-cykloheptyl, -NH-cyklooktyl, -NH-bicy|flo[3, 3,0]ofctyl, -N(CH3)OCH3, -N(CH3)OCH2CH3, -N(CH3)OCH3CH2CH3, -N(CH3)OCH(CH3)2, -N(CH2CH3)OCH3, -N(CH2CH3)OCH2CH3, -N(CH(CH3)2)OCH3, -N(CH3)OCH2C6H5, -N(OCH3)CH2-C6H5, ’N(CH3)OC6Hs, -NH-CH2-C6H5, -NH(CH2)2C6H5, -NH(CH2)3C6H5( -NHCH(CH3)C€H5, -NHC(CH3)2C6H5, -NHC(CH3)2CH2CH3, ’NHC(CH3) (CH2ch3)2, ~NHCH(CH3)CH(OH)C6H5, -NHCHrcyklohexyl, -NH-CH2CF3, -NHCH(CH2F)2, -NHC(CH3)2CH2CH2OH, -NH(CH2CH2O)2CH2CH3, -NHC(CH3)2CH(CH3)2, -NHC(CH3)2CN, -NHC(CH3)2CCH, norei-^edryl, norpseudoe^edryl, -NH-ckinolyl, -NH-pyrazyl, -NH-adamantyl(2), -NH-adajnantyl(l), -NH-CH2-adamantyl, -NH-CH2-na^ t\yl, -NH-benzhydryl, -NH-bi^enyl, -NH-pyridyl, -NH-CH2-pyridyl, -NH-CH2-CH2-pyridyl/ -NH-benzothiazolyl, -NH-benzoisothiazolyl, -NH-benzopyrazolyl, -NH-benzoxazolyl, -NH-fluorenyl, -NH-pyrimidyl, -NH~CH2-(4-methyl)thiazolyl(2), -NH-CH2-furanyl(2), -NH-CH2-thienyl(2), -NH-CH2-(5-methyl)thienyl(2), -NH-th.iazolyl(2), -NH-ísoxazolýl(3), -NH-(3-methyl)isoxazolyl(5), -NH-(3-methyl)isothiazolyl(5), -NH-(2 -trifluormethyl)thiadiazoly1(5), -NH-(2 -cyIdopropyl)thiadiazolyl(5), -nhc(GH3)2c-ch2, r~\
/\ s
ález toliko objasňují, nijak jej
H.C HjC
-n-í<] -x-kQ>
však neomezuj í.
- 8 •t ·4··
Pepi, idy obecného vzorce I se skládají
L-aminokse1 in, F muže však znamenat rovněž D-aminokyselinu.
Peptidy obecného vzorce I mohou být ve formě solí s fysiologicky vhodnými kyselinami, jako jsou např í k1ad kyše 1 i na chlorovodíková, citrónová, vinná, mléčná, fosforečná, methansulf onová, octová, mravenčí male inová, fumarová, jablečná, jantarová, malonová, sírová,
L-glutamová,
L-asparagová, pyrohroznová,
Muková, benzoová, glukuronová, štavelová, askorbová a acety1glycin .
Peptidy obecného vzorce I se mohou připravovat o sobě známými způsoby z chemie peptidů. Tak se například mohou postupně skládat z aminokyselin nebo se mohou získat vázáním vhodných malých peptidových fragmentu. Při postupném skládání se vychází z C zakončení peptidového řetězce, který se postupně prodlužuje vždy o jednu aminokyselinu. Při kopulaci fragmentů je možné spolu vázat fragmenty různé délky, přičemž se takové fragmenty získají postupným vázáním aminokyselin nebo rovněž kopulací fragmentů. Při obou těchto způsobech je nutné vázat vzájemně jednotky vytvářením amidové vazby. K tomuto účelu jsou vhodné jak chemické tak enzymatické způsoby.
Chemické způsoby pro vytváření amidové vazby podrobně popsal Mueller (Hetboden der organischen Chemie, svazek XV/2, str. 1 až 364, Thieme Verlag, Stuttgart, 1974; Stewart, Young, Solid Phase Peptide Synthesis, str. 31 až 34, 71 až 82, Pierce Chemical Company, Rockford, 1984; Bodans2ky, Klausner, Ondetti, Peptide Snthesis, str. 85 až 128, John Wiley and Sons, New York, 1976) a které jsou rovněž popsány v jiných základních publikacích o chemii peptidů. Obzvláště výhodným je azidový způsob, symetrický a směsný anhydridový způsob, in šitu generované a předformované aktivní estery, použití urethanu chráněného N-karboxyanhydridy aminokyselin a vytváření amidových vazeb za použití systému kopulační složka/akt ivátory, přičemž
- 9 *· ···· se zvláště uvádějí dicyklohexy1karbodi imid (DCC), diisopropylkarbod i i m i d ( D JO , 1 - et.hoxykarbony 1 - 2-ethoxy- 1, 2 - d i hydroch i nolin (EEDQ), 1 -ethyl-3-( 3-d i wiethy 1 am i nopropyl) karbodi i m i dhydrochlorid (EDCI), anhydrid n-propanfosfonové kyseliny (PPA), N,N-bi s( 2-oxo-3-oxasolidinyl)ami dofosf ory1chlorid ( BOP-Cl) , bromo-tris-pyrrolidinofosfoniumhexaf1uorfosfát (PyBrop), difenylfosforylazid (DPPA) reagencie Castro (BOP, PyBop), O-benzotriazolyl-N,N,N , N -tetramethyluroň iové soli (HBTU), O-azabenzotriazolyl-N,N,N , N -tetramethyluroň iové soli (HATU), diethy1fosfory1kyanid (DEPCN), 2,5-difenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4hydroxythiofendioxid (Steglichovo reakční činidlo, HOTDO) a 1,1 - karbony1diimidazoI (CDI). Kopulační činidla se mohou používat samotná nebo v kombinaci s aditivy, jako jsou například N,N~di methyl - 4-aminopyridin ( DMAP) N-hydroxybenzotriazol (HOBt), N-hydroxysukcini mid (HOSu) nebo 2-hydroxypyridin.
Zatímco je zpravidla možné upustit, od chránících skupin při enzymatické syntéze peptidů, je přechodná ochrana reaktivních skupin, které se nepodílejí na amidové vazbě, nutná pro reakční složky při chemické syntéze, Při chemické syntéze peptidů se dává přednost třem běžným způsobům použití chránících skupin: způsobu používajícího benzyloxykarbony1 (Z), t-butoxykarbonyl (Boc) a 9-f 1 uorenylmethoxykarbonyl (Fitoc). V každém případě se používá chránící skupiny na alfa-aminoskupině jednotky prodlužující řetězec. Podrobný přehlad skupin chránících aminoskupinu uvádí Mueller (Methoden der organischen Chemie, svazek XV/1 , str. 20 až 906, Thieme Verlag, Stuttgart, 1974).
Jednotky, používané pro vytváření peptidového řetězce, se mohou nechávat reagovat v roztoku, v suspenzi nebo podobným způsobem, jaký popsal Murrifield (J. Amer. Chem. Soc, 85, str. 2149, 1963). Obzvláště výhodnými jsou 2působy, při kterých se peptidy vytvářejí postupně nebo kopulací fragmentů za použití chráních skupin Z, Boc nebo Fmoc. Jedna z reakČních složek při způsobu, který popsal Murrifield se váže na nerozpustný ·* ♦· ♦· ·« · · · · ···*· « * · · · ♦ ··· • · · · * · · · · ·· · « « · · 4 · ·♦ *»«· · ·· ·»·· ·· ·♦
- 10 polymeru i nosič (označovaný zde také jako pryskyřice). Peptid se zpravidla vytváří postupně na polvmerním nosiči 2a použití otíráních skupin Boc něho Fmoc, rostoucí peptidový řetězec je kovalentně vázán 0 zakončením na nerozpustné pryskyřičné částice (obr. 1 a 2). Tento způsob umožňuje odstranit reagenční činidla a vedlejší produkty filtrací a tedy je překrysta1 ování meziproduktů zbytečné.
Chráněné aminokyseliny se mohou vázat na jakýkoliv vhodný polymer, který musí být pouze nerozpustný v použitém rozpouštědle a musí mít stálou fyzikální formu, která usnadňuje filtraci . Polymer musí obsahovat funkční skupinu, na kterou se může pevně vázat, první chráněná aminokyselina kovalentní vazbou. Pro tento účel jsou vhodné nejrůznější polymery1 příkladně se uvdějí celulóza, polyviny1 a 1kohol, po1ymethakry1át, sulfonovaný polystyren, kopolymer chlormethylováného styrenu a di viny1 benzenu (Murrifie1dova pryskyřice), 4-methylbenzhydrylaminová pryskyřice (pryskyřice MRHÁ), feny1acetamidomethy1ová pryskyřice (Pam-pryskyřice). p-benzy1oxybenzy1 a1koholová pryskyřice, benzhydry1ami nová pryskyřice (RHA-pryskyřice), 4-(hydroxymethy1)benzoy1oxymethylová pryskyřice, pryskyřice, kterou popsal Breipohl a kol. (Tetrahedron Letters 28, str. 565, 1987, obchodní produkt společnosti BACHEM), 4-(2,4-dimethoxyfenylaminomethyl)fenoxypryskyřice (obchodní produkt společnosti Novabiochem) nebo o-chlortri ty1ová pryskyřice (obchodní produkt společnosti Biohellas).
Pro peptidovou synthesu v roztoku se hodí všechna rozpouštědla, jež jsou inertní za reakčních podmínek, obzvláště voda, N,N-dimethy1formamid (DME), dimethy1 sulfoxid (DMSO), acetonitril, dichlormethan (DCM), 1,4-dioxan, tetrahydrofuran (THF), N-methyl-2-pyrroli don (NMP) a směsi těchto rozpouštědel. Peptidovou synthesu na polymerním nosiči lze provádět ve všech inertních organických rozpouštědlech, ve kterých jsou použité deriváty aminokyselin rozpustné. Výhodná rozpouštědla ·* *»<*
* «··« • «V♦ •· «♦ • » 9 «· ♦ *» * ·4 · jako N,N-di methylformamjd, dichlořmethan, N-methyl-2-pyrroli don, acetonitril a dimethy1su1foxid a jejich směsi však působí bobtnání pryskyřic. Když je synthesa ukončena, peptid se od polymerního nosiče odštěpí. Podmínky, za kterých je odštěpení od různých prykyřic mošně, jsou popsány v literatuře. Nejběžněji používané odštěpovací reakce jsou katalyžovány kyselinami a palladiem, obzvláště je vhodné štěpení v tekutém bezvodém hydrogenf1uoridu, v bezvodé trif1uormethansulfonové kyselině, ve zředěné nebo v koncentrované trif1uoroctové kyselině, palladiem katalyzované štěpení v tetrahydrofuran nebo ve směsi tetrahydrofuranu a dichlormethanu v přítomnosti slabé zásady jako je morfolin nebo štěpení ve směsích kyseliny octové a dichlormethantrifluormethanolu. V závislosti na zvolených chránících skupinách, mohou se tyto skupiny udržet nebo popřípadě odštěpit za štěpících podmínek. Cenné může být také částečné odstranění chránících skupin peptidu, mají-li se provést určité deri vat izační reakce. Peptidy dialkylované na N-zakončení se mohou připravovat
a) kopulací příslušných N,N-dia 1kylami nových kyselin v roztoku nebo na polymerním nosiči,
b) redukční alkylací peptidu vázaného na prykyřici v systému di methylformamid/1% octová kyselina s NaCNBH3 a s příslušným aldehydem nebo ketonem,
c) hydrogenací peptidu v roztoku v přítomnosti aldehydu nebo ketonu a palladia na uhlí.
Různé v přírodě se nevyskytující aminokyseliny podle vynálezu jsou obchodně dostupné nebo se mohou syntetizovat z obchodně dostupných materiálů způsoby známými ze stavu techniky. Obchodně dostupnými výchozími materiály jsou kyselina azetidin-2-karboxylová, 3-methyl-L-prolin, 5-methyl-L-prolin a skupinou Boc nebo Fmoc chráněný 3,4-dehydroprolin (ACROS, NOVABIOCHEM, RACHEM). Cis- a trans-4-f1uoroprolin lze připravit způsobem, který popsal Panasik a kol. (N. Panasik, E.S.
Eberhardt, A.S. Edison, D.R. Povelí, R.T. Raines, Int. J. Pep- 12 -
·» ·«·· • » • »
» 4 * • « v
« • * * ·
• V · * ·
• • • * ·
* * · • * ttlt
Lide Protein Res. 44, str. 262 až 269, 1994) z hydroxyprolinu.
Sloučeniny podle vynálezu mohou sloužit k inhibici nebo jinému léčení pevných nádorů (například nádorů plicních, prsních, tlustého střeva, prostaty, žlučníku, konečníku nebo endometriálních nádorů) nebo hematologických onemocnění (například leukemie, lymphomas), podáváním sloučenin savcům.
Specielní předností nových sloučenin podle vynálezu je, že jsou odolnější vůči enzymatickému rozkladu ve srovnání s Dolastat inem-15.
Podávání může být běžnými farmaceutickými , s výhodou onkologickými prostředky, včetně orálních a parenterálních prostředků, subkutánně, intravenosně, intramuskulárně a intraper i toneá1 ně
Sloučeniny mohou být podávány samotné nebo v podobě farmaceutických prostředků obsahujících sloučeninu obecného vzorce I spolu s farmaceuti oky vhodným nosičem pro danou cestu podávání. Takovými farmaceutickými prostředky mohou být kombinované výrobky, mohou tedy obsahovat jiné terapeuticky účinné přísady
Dávka podávaná savcům obsahuje nádor inhibující účinnou látku, která závisí na běžných faktorech jako je biologická aktivita použité sloučeniny, způsob podání, věk, zdravotní stav a hmotnost pacienta, povaha a druh příznaků, frekvence ošetřování, podávání jiných léků a požadovaný účinek. Typickou denní dávkou je přibližně 0,5 až 50 mg na kg tělesné hmotnosti při orálním podávání a přibližně 0,05 až 20 při parenterálním podáván í.
Nové sloučeniny podle vynálezu lze podávat ve formě běžných pevných nebo tekutých farmaceutických prostředků, tedy povlečených nebo nepovíečených tablet, kapslí, prášků, granulí,
1* ···»
- 13 * ···» ·· • · · Ié • · ·· a · · ·· • ·♦ * * *f «··» ·· *· •* · · •· ·· • ♦· · B· • ·· ·
čípku nebo roztoku. Ty se vyrábějí obvyklým způsobem, llčinné látky mohou být při tom kombinovány s obvyklými farmaceutickými pomocnými látkami, jako s pojivý tablet, plnidly, chránícími činidly, činidly k rozpadavost i tablet,, regulátory tekutosti, zv1áčňovadly, ro2pouštědl antioxidanty a nebo s nosnými zeutische Technologie, Thierae podávané formy léčiv obsahují účinné látky.
látkami zpožďujícími účinek, plyny (H. Sucker a kol. PharmaVerlag, Stuttgart, 1978). Takto normálně hmotnostně 1 až 90 %
Následující příklady vynález objasňují, aniž ho jakkoli omezují. V příkladech jsou proteinové aminokyseliny uváděny zkratkami v běžném 3-písmenovém kódu. Jinými zkratkami jsou: Me2Val = N,N-dimethy1va1 in, MeVal = N-methylva1 in, Z = benzyloxykarbonyl.
Příklady provedení vynálezu
A. Obecné postupy
I. Peptidy podle vynálezu obecného vzorce I jsou buď syntetizovné klasickou roztokovou syntézou standardními shora popsanými způsoby za použití Z a Boc nebo standardními 2působy syntézy v pevném stavu pomocí chránících skupin Boc a Fmoc.
a) Cyklus syntézy pro techniku chránících skupin Fmoc.
1. promytí DHF
2. 20 % piperidinu v DMF
3. 20 % piperidinu v DMF
4. promytí DMF
5.
přidání předem aktivované chránící aminokyseliny (aktivované 1 ekvivalentem
TBTU a 5 ekvivalenty DTPEA v DMF) peptídová kopulce
1x1 min x 4 min x 16 min x 1 min x 61 min
6. promyt í DMF 3x1 m i n
7 není-li konverse úplná,
opakování kopulace (zpět k 5. )
8. promyt í DMF 3 x 1 m i n
9. zpět do 2.
Ke kopulaci aminokyselin po N-aminokyse1 inách se použ í v á
reakčních řinidel B0P-C1 a PyBrop. Reakční doby se příslušně zvětší zařazením dvojných vazeb. Při ro2tokové syntese je pro tento 2pusob kopulace nejvýhodnější použití buď Boc-chráněných (N-karboxy anhydridu) aminokyselin NCA, Z-chráněných (N-karboxyanhydridů) aminokyselin NCA, nebo pivaloy1chloridu jako kondenzačního činidla.
II. Redukční alkylace N-zakončení
Peptidová pryskyřice podle Ala se zbaví chrámcích skupin na N-2akončení (kroky 2 až 4 v Ala) a pak se nechá reagovat s 3-násobným molárním nadbytkem aldehydu nebo ketonu v systému dimehy1formamid/1 % octové kyseliny, s přísadou 3 ekvivalentů NaCNBHa. Po ukončení reakce (negativní Kai ser-test) se pryskyřice promyje několikrát vodou, isopropanolem, dimehy1formamidem a dichlormethanem. Reduktivní alkylace v roztoku 12e například dosáhnout reakcí peptidů zbavených chránících skupin na N-zakončení, peptidových fragmentu nebo aminokyselin s odpovídajícími aldehydy nebo ketony použitím NaCNBH3 nebo systému vodík palladium na uhlí.
III. Zpracování peptidových pryskyřic získaných podle odstavce Ib a II
Peptidová pryskyřice se vysuší za sníženého tlaku a pak se zpracuje 1,5 hodin směsí TFA/voda (95:5) (Wade, Tregear, Howard Florey Fmoc Workshop Manual, Melbourne, 1985). Pryskyřice se odfiltruje a promyje se TFA a dichlormethanem. Filtrát a •4 »*«·
4 «4 · ·4
- 15 «4 * · · · ·· 4 t 4 ** · · · 4 4 · 4·
4 4 · 4444
4444 4 «4 4 4 4 » 4444 promývací roztoky s ^koncentrují a peptid se vysráěí přísadou diethty1 etheru Po ochlazení v ledové lázni se sraženina odfiltruje, vyjme se do 30% octové kyseliny a lyofilizuje se.
IV. Použije-li se o-chlorotri ty1ové pryskyřice (obchodní produkt společnosti Biohellas), míchá se 1 hodinu při teplotě místnosti suspense peptidové pryskyřice v sysstému octová kyseli na/trif1uorethnol/dichlormethan (1:1=3), Pryskyřice se odfiltruje za odsávání a důkladně se promyje štěpícím roztokem. Spojené filtráty se 2koncentrují ve vakuu a zpracuji se etherem. Vysrážená pevná látka se odstraní filtrací nebo odstředěním. promyje se diethyletherem a vysuší se za sníženého t1aku.
V. Čištění a charakter i2ace peptidů
Čištění se provádí gelovou chromatografií (SEPHADEX G-10, G-15/10 % HOAc, SEPHADEX l.H20/Me0H) a/nebo středotlakou chromatografií (stacionární fáze; HD-STT. C-R. 20-45 mikrometrů, 100 Angstrom: mobilní fáze: gradient s A = systém 0,1 % TFA/ voda. B ~ systém O, 1 % TFA/MeOH), nebo preparativní chromatograf i í HPLC (stacionární fáze: Waters Delta-Pak C-18, 15 mikrometrů 100 Angstrom; mobilní fáze: gradient s A = systém 0,1 % TFA/voda, B = systém 0,1% TFA/MeOH).
Čistota výsledných produktů se zjišťuje analytickou chromatografií HPLC (stacionární fáze: 100 2,1 mm VYDAC C-18 300 Angstrom; mobilní fáze: aceton itri 1 - voda gradient, pufrováno s 0,1 % TFA, 40 C). Charakterizace bombardováním rychlými atomy hmotovou spektroskopi í a NMR spekt.roskopi í .
B- Specifické postupy
Příklad 1 (SEQ ID NO; 1)
MeaVal Val - MeVa 1 - 3, 4- dehydroprol y 1 -Pro- am i d • » » · ..··· • * ·· · · · ···* · • · ··· · · * Ml · «····* ·· ·*
- 16 Nechává se reagovat 0,53 g pryskyřice Fmoc-RINK (substituce 0,46 Mol/g), odpovídánící velikosti dávky 0,25 mmol jako v Ala pokaždé s 0,4 mmol
Frooc-Pro-OH,
Fmoc-3,4-dehydroprolin,
Fmoc-MeVal-OH,
Fmoc-Val-OH,
Fmoc-Val-OH.
Aminokyselina následující po N-methylaminokyse1 i ně se spojí dvojnou vazbou kapulačním činidlem ByProp. Po ukončení iterativních syntetických cyklech, se 2 peptidové pryskyřice odstraní chránící skupiny N-2akončení (kroky 2 až 4 v Ala) a nechá se dále reagovyt s vodným roztokem formaldehydu jako v ATI a vysuší se 2a sníženého tlaku. Výsledná pryskyřice se odštěpí TFA jako v ATTT. Surový produkt ( 132 mg) se čistí preparát i vní středotlakou chromatografií, čímž se 2Íská 32 mg žádaného čistého peptidu (10 až 40 % A v 10 ; 40 až 90 % A ve 140 ). Sloučenina se dále charakterizuje bombardováním rychlými atomy hmotovou spektroskopií a NMR spektroskopií. ([M+H1+.
Příklad 2 (SEQ ID NO · 1 )
MeaVal-Val -MeVa1 -[(2S,3S)- 3-methylpyrrolid i n-2-karbony11 -Probensylamid
a) Z-í2S,3S)-3-Methylpyrrolidin-2-karboxylová kyselina
Ve 4 ml vody a 2,33 ml 5N routoku hydroxidu sodného se rozpustí 1,5 g (2S,3S) 3-methy1pyrro1 i din-2-karboxy1ové kyšeliny (11,6 mmol). Během jedné hodiny se přidá při teplotě 4 C 2,12 ml bensylchlorformátu (Z-Cl: 12,8 mmol) a 6,5 ml 2N roztoku hydroxidu sodného. Po míchání směsí přes noc při teplotě místnosti se nastaví hodnota pH na 10. Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (4x) nastaví se na hodnotu pH 2 5N kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje se dich]ormethanem (2x). Spojené · ···· • to to · « to to · ♦ • a λ » « * » · · » • to « · · toto· • toto* · toto · to·· · · · ·
- 17 organické extrakty se vysuší síranem sodným a zkoncentrují se ve vakuu. Získá se 1,75 g produktu v podobě oleje.
b) Z-í25,38)-3-MeLby1pyrro1 i d i n-2-karbony1 -L- pro1y1benzy1 amid
V 66 ml dichlormethanu se rozpustí 1,75 g (2S,3S)-3-methylpyrrolidin-2-karhoxy1ové kyseliny (6,62 mmol) a 1,59 g prolinbenza1dehydbydrochloridu (6,62 mmol) a ochladí se na teplotu 4 C. Po přidání 0,89 ml N-methy]morfoli nu (7,94 mmol), 0,304 g ITOBt (2,21 mmol) a 1,28 g EDCI (6,62 mmol) se reakční směs míchá přes noc při teplotě místnosti, 2ředí se 450 ml dichlormethanu a promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhli či tanu sodného (3x), vodou (lx), 5% citrónovou kyselinou (3x), vodou (1x), a nasyceným roztokem chloridu sodného (1x). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a ^koncentruje se za sníženého tlaku. Získá se 2,63 g produktu v podobě vysoce viskosního ΟΙ e je .
c) (2S.3S) '3-Methylpyrro1 i din- 2-karbony1 -L-proly1benzy1am i d
Ve 43 ml methanolu se rozpustí 2,63 g Z-(2S,3S)-3-methylpyrrolidin-2-karbonyl-L-prolylbenzy1amidu (5,8 mmol). Po přidání 105 mg 10% palladia na uhlí se reakční směs hydrogenuje přes noc. Po filtraci a vysušení se získá 1,88 g cránicích skupin zbaveného dipeptidu.
d) Z-MeVal-[(2S,3S)- 3-Methy1pyrro1 i di n-2-karbony1]- Probenzy1am i d
V 58 ml dichlormethanu se rozpustí 1,54 g Z-MeVal-OH (5,8 mmol) a 1,88 g (2S,3S)- 3 - methylpyrrolidin-2-karbonyl-L-prolylo benzylamidu a ochladí se na teplotu 4 C. Po přidání 0,78 ml N-methylmorfolinu (6,96 mmol), 0,266 g HOBt (1,93 mmol) a 1,12 g EDCI (5,8 mmol) se reakční směs míchá přes noc při teplotě místnosti, zředí se 120 ml dich1ormethanu a promyje se nasyce- 18 *· ···· «< ·« ·· ·· «V · · · · · • · · · · · · · · · · • · ··* · · · • ··· » e * «··* λ* ·· ným roztokem hydrogenuhl iči tanu sodného ( 3x) , vodou (1x), 5% citrónovou kyselinou (3x), vodou (1x) a nasyceným roztokem chloridu sodného (1x). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se za sníženého tlaku Získá se 3,01 g produktu v podobě suché bílé pěny.
e) MeVa 1 -[(2S,35)- 3-Methylpyrroli di n- 2- karbony1]-Pro-benzy1am i d
Ve 39 ml methanolu se rozpustí 3,01 g Z-MeVal-[(2S,3S)-3methylpyrrolidin-2-karbonyl]-Pro-benzylamidu (5,33 mmol). Po přidání 96 mg 10% palladia na uhlí se reakční směs hydrogenuje tři hodiny. Filtrací a odpařením k suchu se získá 2,18 g chránící skupiny zbaveného tripeptidu v podobě čirého oleje.
f) Z-Va1 -MeVa1 - Γ (2S.3S)- 3-Methy1pyrrol i d i n- 2-karbonyl]-Probenzyl am id
V 10 ml dichlormethanu se rozpustí 1,28 g Z-Val-OH (5,11 mmol). Po přidání 0,73 ml triethylaminu (5.37 mmol) a ochlazec ní na teplotu -10 C se pomalu přidá 0,66 ml píva1oy1chloridu (5,37 mmol). Po 1,5 -hodinovém míchání směsi při teplotě -10
C následuje přísada roztoku 2,18 g MeVal - [ ( 2S. 35)-3-methylpyrrolidin-2-karbonyl1-Pro-benzylamidu (5,11 mmol a 0,73 ml triethylami nu (5,37 mmol) v 10 ml dichlormethanu. Rekční směs e
se míchá 1,5 hodin při teplotě -10 0 a při teplotě místnosti přes noc, zředí se dichlormethanem a promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhliči tanu sodného (3x), vodou (1x), 5% citrónovou kyselinou (3x), vodou (lx) a nasyceným roztokem chloridu sodného (1x). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se za sníženého tlaku. Získá se 2,75 g produktu v podobě suché pěny
g) Val-MeVal-í(2S,3S)-3-Methy1pyrroli d i n- 2 -karbonyl]- Probenzy1am i d
Ve 30 ml methanolu se rozpustí 2,75 g Z-Val-MeVal-[(2S,35)• · « 4 4« • · · * · « « »·· · 4 • · · 4 « ··· *♦·» · ·4 · · a 4 «4 ·
- 19 3-me thy 1 pyrro 1 i d i n - 2-karbony 1 ] - Pro-benzy 1 am i du (4,13 mmol ) Po přidání 0,34 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové (4,13 mmol) a 78 mg 10% palladia na uhlí se reakční smés se hydrogenuje tři hodiny. Filtrace a odpaření k suchu poskytne 2,23 g chránící skupiny zbaveného tripeptidu v podobě suché bílé pěny. Surový produkt se dále rozpustí v 50 ml vody a hodnota pH se nastaví na 2 až 3 1N kyselinou chlorovodíkovou. Vodná fáze se extrahuje dichlormethanem (3x), hodnota pH se nastaví na 10 5N roztokem hydroxidu sodného a dále se extrahuje dichlormethanem ( 3x) . Spojené organické extrakty se vysuší síranem sodným za sníženého tlaku, čímž se získá 1,71 g chránící skupiny zbaveného tetrapept j dbenza1dehydu .
h) MezVal - Val -MeVal - 1 ( 2.S, 3S) -3-Methylpyrro1 idin-2-karbonyl ] Pro-benzylamid
Ve 32 ml suchého DMF se rozpustí 0,47 g MezVal-OH (3,24 mmol) a 1,71 g Va1 -MeVa1 -[(2S,3S)-3-methyl pyrrolidin-2-karboo ny 1 ]- Pro-benzyl aiti i du (3,24 mmol). Po ochlazení na teplotu 4 C se přidá 1,07 ml DEPCN (6,48 mmol) a 1,88 ml triethy1ami nu (12,96 mmol). Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a dimehy1formamid se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve 100 ml dichlormethanu promyje se nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (3x), vodou (lx), 5% citrónovou kyselinou (3x), vodou (lx) a nasyceným roztokem chloridu sodného (lx). Organická vrstva se vysuší síranem sodným a zkoncentruje se za sníženého tlaku. Získá se 0,88 g produktu v podobě bezbarvého oleje. Surový produkt se rozpustí ve vroucím diisopropyletheru a vysráěí se za chlazení. Sraženina se oddělí a vysuší se 2a vzniku 0,56 g čistého produktu. Sloučenina se dále charakterizuje hmotovou spektrometrií při bombardování rychlými atomy. ([M+H]+ = 655,6).
Následující sloučeniny byly připraveny a mohou být připraveny pod1e př í k1adu 1 a 2:
• · ·♦** • ·
3 , Xaa Val Xab Xac Xad
4. Xaa Val Xab Xac Xae
5. Xaa Val Xab Xac Xaf
6. Xaa Val Xab Xac Xag
7. Xaa Val Xab Xac Xah
8. Xaa Val Xab Xac Xai
9. Xaa Val Xab Xac Xak
10. Xaa Val Xab Xac Xal
11. Xaa Val Xab Xac Xam
12. Xaa Val Xab Xac Xan
13. Xaa Val Xab Xac Xao
14. Xaa Val Xab Xac Xap
15. Xaa Val Xab Xac Xaq
16. Xaa Val Xab Xac Xar
17. Xaa Val Xab Xac Xas
18. Xaa Val Xab Xac Xat
19. Xaa Val Xab Xac Xat
20. Xaa Val Xab Xac Xav
21. Xaa Val Xab Xac Xaw
22. Xaa Val Xab Xac Xax
23. Xaa Val Xab Xac Xay
24. Xaa Val Xab Xac Xaz
25. Xaa Val Xab Xac Xba
26. Xaa Val Xab Xac Xbb
27. Xaa Val Xab Xac Xbc
28. Xaa Val Xab Xac Xbd
29. Xaa Val Xab Xac Xbe
30. Xaa Val Xab Xac Xbf
31. Xbg Val Xab Xac Xar
32. Xbg Val Xab Xac Xas
33. Xbh Val Xab Xac Xar
34 . Xbh Val Xab Xac Xas
35. Xaa Ile Xab Xac Xar
36. Xaa Ile Xab Xac Xas
37. Xaa Xbk Xab Xac Xar
38. Xaa Xbk Xab Xac Xas
39. Xaa Val Xbi Xac Xar
40. Xaa Val Xbi Xac Xas
41. Xaa Val Xab Xac Xbi
42. Xaa Val Xab Xac Xbra
43 . Xaa Val Xab Xac Xbn
44 . Xaa Val Xab Xbo Xae
45. Xaa Val Xab Xbo Xbp
46. Xaa Val Xab Xbo Xar
47. Xaa Val Xab Xbo Xas
43. Xaa Val Xab Xbo Xbm
49. Xaa Val Xab Xbq Xae
50. Xaa Val Xab Xbq Xar
51. Xaa Val Xab Xbq Xas
52. Xaa Val Xab Xbq Xbm
53. Xaa Val Xab Xbr Xbp
54. Xaa Val Xab Xbr Xae
55. Xaa Val Xab Xbr Xas
56. Xaa Val Xab Xbr Xar
57. Xaa Val Xab Xbs Xae
58. Xaa Val Xab Xbs Xas
59. Xaa Val Xab Xbs Xar
60. Xaa Val Xab Xac Xbu
61. Xaa Val Xab Xac Xbt
62. Xaa Val Xab Xbq Xbu
63. Xaa Val Xab Xbq Xbt
64. Xaa Val Xab Xac Pro Xbv
65. Xaa Val Xab -Xac Pro Xbw
66. Xaa Val Xab Xac Pro Xbx
67. Xaa Val Xab Xac Pro Xby
68. Xaa Val Xab Xac Pro Xbz
64. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbv
65. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbw
66. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbx
67. Xaa Val Xab Xbq Pro Xby
68. Xaa Val Xab Xbq Pro Xbz
69. Xaa Val Xab Xbo Xaz
70. Xaa Val xab Xbq Xaz
71. Xaa Val Xab Xbq Xbn
72. Xaa Val Xab Xbo Xbn
Příklady MS-chara1kteri sace syntetizovaných nových sloučenin jsou uvedeny v následující tabulce.
Příklad Analysa MS při bombardování rychlými atomy
č. Cmol. hmotnost (naměřená)]
45. 627
53.
655 *
·»··
Tabulka I
Identifikace sekvence sloučenin připravených podle příkladu 1 a 2
Sl oučen i na č. Sekvneční ID -c í s1 o
1-34, 39 - 63, 69 -72 1
35, 36 2
37, 38 3
64 - 68 4
Symboly Xaa v součtu mají následující význam:
Xaa : N,N-Dimethy1 val in
Xab '· N-Methylva1 in
3, 4-dehydropro1in f Xad:
ζ Xae:
•4 ··· » · • ·
- 23 1 Xah:
H3C
S Xai:
o H3C s Xak:
0 h3c
0 HjC v- Xam:
»« »
\ Xan:
0 h3c
Xao :
Xaq:
Γ Xar:
Xas:
Xat:
·· ·«·« • * • *
> Xau:
O ·· ·«·· *· ·· ···>
« « • « ·* *··· • · ♦ ·· · · < Xav:
Xaw:
' Xay:
' Xaz:
S Xba:
·; Xbb:
V» ···!
- 26 ; XJbc:
' Xbd:
·. Xbe:
<. Xbf:
Xbg:
N,N-dimethylisoleucin . xbh:
N,N-dimethyl-2-terC.-butyl-glycin
S Xbi:
N-methylisoleucin
Xbk:
2-tert.butylglycin , t‘
r· Xbm:
O ·· «··
• · · * · « · 4 · ··· · · - 27 -
Xbn: γΆ 0 CH,
XbO: L-azetidine-2- arbonyl
: Xbp: 0
Xbq: (4 -fluoro)-L-prolin
- Xbr: (5-methyl)-L-prolin
l Xbs: (3-methyl)-L-prolin
•í Xbt:
; Xbii:
Xbv:
> XbW:
- 28 ·· ·*♦·
««
Sloučeniny podle vynálezu se mohou testovat na účinek proti rakovině běžnými způsoby včetně například dále popsaného způsobu·
A. Metodologie in vítro
Cytotoxicita se měří standardní metodologií pro přilnuté buněčné linie jako je microculture tetrazolium test (MTT). Podrobnosti této zkoušky jsou popsány v literatuře (Alley, MC a kol, Cancer Research 48: str. 589 až 601, 1988). K získání kultur pro mikrotitrační destičky se použije exponenciálně rostoucích kultur nádorových buněk, jako jsou buňky HT-29 colon-carcinoma nebo LX-plicního nádoru. Buňky se nasadí v množství 5000 až 20 000 na důlek v 96-důlkových destičkách β
(ve 150 Lil media) a kultivují se přes noc při teplotě 37 C. Přidají se sloučeniny v 10-násobném zředění 104 M až 10_1° M. Buňky se pak inkubují 48 hodin. Ke zjištění počtu živých buněk »444 • 4 4 «444»4*4
44 4 4 4»4
4 44 « « « 4 4 4 44
4 444«44 •4444 44 4414 4«44
- 29 v každém důlku se přidá barvivo MTT (50 141 roztoku 3 mg/ml 3(4,5-dimethy1th1azo1-2-yI)-2,5-difeny1tetrazo1 iumbromidu v soo laňce). Tato směs se inkubuje 5 hodin při teplotě 37 Ca pak se do každého důlku přidá 50 nl 25% SDS, pH 2. Po celonoční inkubaci se pak odečítá absorhance každého důlku při 550 nm čítačem ELISfi. Vypočtou se střední hodnoty + /- SD dat z replikovaných důlků, za pouužití vzorce % T/C (% ošetřených živých buněk/kontrolních buněk).
OD ošetřených buněk
-- x 100 = % T/C
OD kontrolních buněk
Koncentrace zkoušené sloučeniny, která dává hodnotu inhibice růstu T/C = 50 % je označována jako hodnota IC50.
Sloučenina podle příkladu IC50 1M1
1 . 1 x 10'9
2. 1 x ΙΟ9
45 . 1 y. ÍQ-%
53. 1 x 10-8
B. Metodologie in vivo
Sloučeniny podle vynálezu se zkoušely dále v preklinických testech na aktivitu in vivo, která je indikativní pro klinické použití. Takové testy se provádějí na holých myších, kterým se transplantují (xenoroubují) nádorové tkáně, s výhodou lidského původu, jak je to dobře známo v tomto oboru. Zkoušené sloučeniny se vyhodnocují z hlediska proti nádorové účinnosti po podání myším s xenoimplantátem.
Lidské prsní nádory (MX-1), které rostly v athymické holé myši se transplantují do nové hostitelské myši pomocí nádorových fragmentů o velikosti přibližně 50 nm. Den transplantace
- 30 je dnem O. Šest, až deset dní později se myši ošetří zkoušenými sloučeninami podávanými jako intravenosní injekce ve skupinách po 5 až 10 myších při každé dávce. Sloučeniny se podávaly každý druhý den po dobu tří týdnu v dávkách 1 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti . Průměry nádorů a tě lesná hmotnost se měřily dva krát týdně Objemy nádorů se vypočet,ly p. průměrů měřených posuvným měřítkem a pro každou ošetřovanou skupinu se vypočtou objemy nádorů podle vzorce (délka x šířka2)/2 = mm3 objemu nádoru
Pro každou skupinu se vypočtou střední objemy nádorů a zjistí se hodnoty T/C pro každou skupinu oproti neošetřeným kontrolním nádorům.
Nové sloučeniny vykazují dobré vlastnosti inhibice nádorů.
Průmyslová využitelnost
Peptid pro výrobu farmaceutických prostředků k ošetřování onkologických onemocnění savců.
- 31 · b»«·
Seznam sekvencí (1) Obecné informace
i) Přihlašovatel
A. Adresát'· BASF Akt i engese 1 1 schaf t
B. Ulice- Carl-Bosch-Strasse 38
C. Město: Ltidw i qshaf en
E. Stát: Německá spolková republika
F ZTP: D-67056
G. Telefon: 0621/6048526
H. Telefax: 0621/6043123
I. Telex'· 1762175170 i i) Název vynálezu: Pept, i d a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje i i i) Počet sekvencí: 4 i v) Farma pro počítač
A. Typ média: Disketa 3,5 palce, 2 DD
B. Počítač: IBM AT-kompatibi1ní, 80286 procesor
C. Operační systém: MS-DOS verš i on 5,0
D. Software: WordPerfect
2. Informace o SEO TD. NO: j:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 5 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
D. Topologie: lineární i i) Typ molekuly: peptid xi) Popis sekvence” SEQ ID. NO:1: Xaa Val Xaa Xaa Xaa
2. Informace o SEQ ID. NO: 2:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 5 aminokyselin
B Typ: aminokyse1 i na
D. Topologie: lineární i i) Typ molekuly: peptid xi) Popis sekvence SEQ ID. NO2: Xaa Ile Xaa Xaa Xaa
2. Informace o SEQ ID. NO: 3:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka: 5 aminokyselin
B. Typ: aminokyselina
D. Topologie: lineární i i) Typ molekuly- peptid xi) Popis sekvence SEQ ID. N0;3;
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
2. Informace o SEQ ID. NO: 4:
i) Charakteristiky sekvence
A. Délka’· 6 aminokyselin
B. Typ: aminokyse1 ina
D. Topologie: lineární li) Typ molekuly: peptid xi) Popis sekvence SEQ ID. NO:4: Xaa Val Xaa Xaa Pro Xaa kde
PATENTOVÉ
Pept. i d obecného vzorce I ·· ···· ·« •♦ *· •♦ •a a a • · a a • «

Claims (5)

  1. R1R2N - CHX - CO - A - B - D - E - (F)t znamená ( I)
    R1
    R2 methyl, ethyl nebo isopropyl, vodík, methyl nebo ethyl,
    RÍ-N-R2 spo tu dohromady pyrroi 1 idinový kruh,
    A zbytky valyl, isoleucyl, leucyl, 2-terč.-buty1g1ycy1,
  2. 2-ethylglycyl, norleucyl nebo norvalyl,
    B zbytky N-methyl valyl, N-methyl 1eucyl, N-methyl i soleucy] , N-methylnorva1yl , N-methyl nor]eucyl . N-methyl-2terč.-butylglycyl, N-methyl - 3-terč . -but,y 1 a] any 1 nebo N-methyl-2-ethylglycyl,
    D zbytky 3,4-dehydroproly1, 4-f1uoroproly1, 4,4-difluoroprolyl, azet, í d i n-2-karhonyl , 3-methylprolyl, 4-met,hylprolyl nebo 5-methy1prolyl,
    E zbytky prolyl, homoprolyl, hydroxyproly1 nebo thiazo1idin-4-karbonyl,
    F zbytky valyl, 2-terč. -buty1g1ycy1, isoleucyl, leucyl,
    2-cyk1ohexylglycy1, norleucyl, norvalyl, neopentylglycyl , alanyl, beta-alanyl nebo amino isobutyroy1,
    X alkyl s výhodou s 2 až 5 atomy uhlíku, cyklopropyl nebo cyklopentyl, í
    - 33 4* «· ·«4« • · · · · · ·· · b · · * 4 4·· • · · · ♦ · 4··«· • · · ·· v * • Η MH · ·«4 t O nebo 1 a alkoxy s výhodou s 1 až 4 atomy uhlíku, benzyloxy nebo substituovanou nebo nesubstituovanou aminoskupi nu, nebo jeho soli s fyziologicky vhodnými kyselinami.
    2. Peptid podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, nebo jeho soli pro použití v medicíně zvláště pro ošetřování onkologických nemocí.
  3. 3. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, a farmaceuticky vhodný nosič.
  4. 4. Způsob ošetřování nádorů savců vyznačuj ící setím, že se savcům s nádorovým onemocněním podává nádory inhi bující množství peptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam.
  5. 5 Způsob přípravy peptidu podle nároku 1 obecného vzor- ce T, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam, vyznačující se tím, že se peptid připravuje o sobě známými způsoby z peptidové chemie.
CZ19973765A 1995-06-07 1996-06-03 Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje CZ293683B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/472,453 US5831002A (en) 1992-05-20 1995-06-07 Antitumor peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ376597A3 true CZ376597A3 (cs) 1998-06-17
CZ293683B6 CZ293683B6 (cs) 2004-07-14

Family

ID=23875567

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19973765A CZ293683B6 (cs) 1995-06-07 1996-06-03 Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
CZ19973763A CZ293682B6 (cs) 1995-06-07 1996-06-03 Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19973763A CZ293682B6 (cs) 1995-06-07 1996-06-03 Peptid, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Country Status (33)

Country Link
US (1) US5831002A (cs)
EP (2) EP0832104B1 (cs)
JP (2) JP4221062B2 (cs)
KR (2) KR100437985B1 (cs)
CN (2) CN1182154C (cs)
AR (2) AR003136A1 (cs)
AT (2) ATE224910T1 (cs)
AU (2) AU725164B2 (cs)
BG (2) BG102125A (cs)
BR (2) BR9609423A (cs)
CA (2) CA2219819C (cs)
CO (2) CO4700526A1 (cs)
CZ (2) CZ293683B6 (cs)
DE (2) DE69623992T2 (cs)
DK (2) DK0871656T3 (cs)
ES (2) ES2188759T3 (cs)
HR (2) HRP960257A2 (cs)
HU (2) HU228071B1 (cs)
IL (2) IL122215A (cs)
MX (2) MX9709147A (cs)
MY (2) MY119042A (cs)
NO (2) NO318384B1 (cs)
NZ (2) NZ310443A (cs)
PL (2) PL185762B1 (cs)
PT (2) PT832104E (cs)
RO (2) RO118953B1 (cs)
SI (2) SI0832104T1 (cs)
SK (1) SK282466B6 (cs)
TR (2) TR199701544T1 (cs)
TW (2) TW508357B (cs)
UA (2) UA46776C2 (cs)
WO (2) WO1996040751A1 (cs)
ZA (2) ZA964710B (cs)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807984A (en) * 1995-11-09 1998-09-15 Basf Aktienegesellschaft Oligopeptides, the preparation and use thereof
TW474946B (en) * 1995-12-15 2002-02-01 Basf Ag Novel compounds, the preparation and use thereof
US20010009901A1 (en) * 1996-12-11 2001-07-26 Basf Aktiengesellschaft Germany Antineoplastic peptides
US5965537A (en) * 1997-03-10 1999-10-12 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives with carbonyl and heterocyclic functionalities at the C-terminus
US6103698A (en) 1997-03-13 2000-08-15 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin-15 derivatives in combination with taxanes
US6143721A (en) * 1997-07-18 2000-11-07 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US6015790A (en) * 1997-10-06 2000-01-18 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis
US5985837A (en) * 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
JP2002538151A (ja) 1999-03-02 2002-11-12 ベーリンガー インゲルハイム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド カテプシンの可逆的インヒビターとして有用な化合物
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases
EP1229934B1 (en) 1999-10-01 2014-03-05 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US7018642B2 (en) 2001-04-27 2006-03-28 The Procter & Gamble Company Compounds, compositions, and methods for controlling biofilms
AU2002359792A1 (en) * 2001-12-18 2003-06-30 Proteologics, Inc. Methods and compositions for the inhibition of viral release
EP1531846A4 (en) * 2002-02-27 2006-04-19 Us Gov Health & Human Serv Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
WO2006013552A2 (en) 2004-08-02 2006-02-09 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Articles of peptide nanostructures and method of forming the same
WO2006122408A1 (en) 2005-05-18 2006-11-23 Aegera Therapeutics Inc. Bir domain binding compounds
WO2007024574A2 (en) * 2005-08-19 2007-03-01 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Topical formulations of histone deacetylase inhibitors and methods of using the same
WO2007043048A2 (en) * 2005-10-11 2007-04-19 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Self-assembled fmoc-ff hydrogels
KR101506466B1 (ko) 2006-05-16 2015-03-27 파마사이언스 인크. Ｉａｐ ｂｉｒ 도메인 결합 화합물
AR064235A1 (es) * 2006-07-24 2009-03-25 Tetralogic Pharmaceuticals Cor Dipeptidos antagonistas de iap, una composicion farmaceutica que los comprende y el uso de los mismos para el tratamiento del cancer
CA2683098C (en) * 2007-04-12 2014-03-18 Scinopharm Taiwan Ltd. Process for making galantamine
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
US8283372B2 (en) 2009-07-02 2012-10-09 Tetralogic Pharmaceuticals Corp. 2-(1H-indol-3-ylmethyl)-pyrrolidine dimer as a SMAC mimetic
AU2011214057B2 (en) 2010-02-12 2016-11-17 Pharmascience Inc. IAP BIR domain binding compounds
EA201390988A1 (ru) 2010-12-30 2014-04-30 Энанта Фармасьютикалз, Инк. Фенантридиновые макроциклические ингибиторы сериновой протеазы вируса гепатита c
MX2013007677A (es) 2010-12-30 2013-07-30 Abbvie Inc Inhibidores macrociclicos de serina proteasa de hepatitis.
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
AU2012262560B2 (en) 2011-05-27 2016-06-09 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
WO2015103490A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 Abbvie, Inc. Solid antiviral dosage forms
KR20240051956A (ko) 2021-09-03 2024-04-22 도레이 카부시키가이샤 암의 치료 및/또는 예방용 의약 조성물

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816444A (en) * 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US4879278A (en) * 1989-05-16 1989-11-07 Arizona Board Of Regents Isolation and structural elucidation of the cytostatic linear depsipeptide dolastatin 15
DK0598129T3 (da) * 1991-08-09 2000-07-03 Teikoku Hormone Mfg Co Ltd Nye tetrapeptidderivater
CZ292612B6 (cs) * 1992-05-20 2003-11-12 Abbott Gmbh & Co. Kg Peptid s protirakovinnou aktivitou, jeho použití a farmaceutický prostředek s obsahem takového peptidu
US5504191A (en) * 1994-08-01 1996-04-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide methyl esters
US5530097A (en) * 1994-08-01 1996-06-25 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory peptide amides

Also Published As

Publication number Publication date
HUP9801817A3 (en) 1999-06-28
CZ293682B6 (cs) 2004-07-14
BG102152A (en) 1998-09-30
WO1996040752A1 (en) 1996-12-19
ZA964710B (en) 1997-12-08
ES2186783T3 (es) 2003-05-16
CZ376397A3 (cs) 1998-06-17
ATE224910T1 (de) 2002-10-15
AU6124196A (en) 1996-12-30
DE69623472T2 (de) 2003-08-21
NZ310443A (en) 1999-10-28
PL323723A1 (en) 1998-04-14
CA2219818C (en) 2008-05-20
KR100437985B1 (ko) 2004-09-18
NO317670B1 (no) 2004-11-29
KR100437986B1 (ko) 2004-09-18
SK165397A3 (en) 1998-10-07
CN1187199A (zh) 1998-07-08
DE69623992T2 (de) 2003-05-22
RO118953B1 (ro) 2004-01-30
NO975711L (no) 1998-01-30
CZ293683B6 (cs) 2004-07-14
CO4700526A1 (es) 1998-12-29
MY119042A (en) 2005-03-31
EP0871656B1 (en) 2002-09-25
DE69623992D1 (de) 2002-10-31
UA46775C2 (uk) 2002-06-17
MY124487A (en) 2006-06-30
CN1182154C (zh) 2004-12-29
PL185762B1 (pl) 2003-07-31
MX9709146A (es) 1998-03-31
AU725164B2 (en) 2000-10-05
DK0871656T3 (da) 2003-01-27
NO975711D0 (no) 1997-12-05
SI0871656T1 (en) 2003-08-31
EP0832104A1 (en) 1998-04-01
PT832104E (pt) 2002-12-31
IL122215A (en) 2001-08-26
IL122216A0 (en) 1998-04-05
PL323726A1 (en) 1998-04-14
KR19990022583A (ko) 1999-03-25
AR003427A1 (es) 1998-08-05
HUP9801910A3 (en) 1999-06-28
MX9709147A (es) 1998-03-31
ES2188759T3 (es) 2003-07-01
WO1996040751A1 (en) 1996-12-19
EP0871656A1 (en) 1998-10-21
BR9609423A (pt) 1999-06-29
RO119783B1 (ro) 2005-03-30
CN1182153C (zh) 2004-12-29
HUP9801910A2 (hu) 1999-01-28
DK0832104T3 (da) 2003-01-06
ATE223431T1 (de) 2002-09-15
JP4221062B2 (ja) 2009-02-12
SK282466B6 (sk) 2002-02-05
EP0832104B1 (en) 2002-09-04
HRP960277A2 (en) 1997-10-31
TW508357B (en) 2002-11-01
NZ310444A (en) 1999-11-29
TR199701544T1 (xx) 1998-03-21
US5831002A (en) 1998-11-03
TW424096B (en) 2001-03-01
UA46776C2 (uk) 2002-06-17
IL122215A0 (en) 1998-04-05
NO318384B1 (no) 2005-03-14
DE69623472D1 (de) 2002-10-10
JPH11504653A (ja) 1999-04-27
HU228071B1 (hu) 2012-09-28
CN1187198A (zh) 1998-07-08
SI0832104T1 (en) 2003-08-31
CA2219818A1 (en) 1996-12-19
HUP9801817A2 (hu) 1998-11-30
NO975710D0 (no) 1997-12-05
AU6124296A (en) 1996-12-30
JP3957751B2 (ja) 2007-08-15
CA2219819C (en) 2008-05-20
BR9609424A (pt) 2000-03-28
TR199701545T1 (xx) 1998-04-21
HU228073B1 (hu) 2012-09-28
KR19990022582A (ko) 1999-03-25
ZA964711B (en) 1997-12-08
CO4700527A1 (es) 1998-12-29
AU725170B2 (en) 2000-10-05
AR003136A1 (es) 1998-07-08
JPH11504652A (ja) 1999-04-27
NO975710L (no) 1998-02-02
PT871656E (pt) 2002-12-31
PL185763B1 (pl) 2003-07-31
BG102125A (en) 1998-09-30
HRP960257A2 (en) 1998-02-28
IL122216A (en) 2002-02-10
CA2219819A1 (en) 1996-12-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ376597A3 (cs) Derivát dolastatinu, způsob jeho přípravy a jeho použití
AU679479B2 (en) Dolostatin analog
US6143721A (en) Dolastatin 15 derivatives
JP3523253B2 (ja) ドラスタチン誘導体
JP3939354B2 (ja) 抗腫瘍性ペプチド
SK282467B6 (sk) Peptidy, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20150603