CZ31771U1

CZ31771U1 - N-heterocyklické karbenové komplexy zlata s bicyklickými N-donorovými ligandy a použití těchto komplexů pro přípravu léčiv k protinádorové terapii

Info

Publication number: CZ31771U1
Application number: CZ2018-34722U
Authority: CZ
Inventors: Zdeněk Trávníček; Ján Vančo; Zdeněk Dvořák
Original assignee: Univerzita PalackĂ©ho v Olomouci
Priority date: 2018-02-22
Filing date: 2018-02-22
Publication date: 2018-05-15

Description

Oblast techniky

Předložené technické řešení, spadající do oblasti léčiv nádorových onemocnění na bázi koordinačních sloučenin zlata v oxidačním stupni +1, se zabývá protinádorové účinnými N-heterocyklickými karbenovými (NHC) zlatnými komplexy s deprotonizovánými bicyklickými monodentátními /V-donorovými ligandy a jejich použitím k přípravě léčiv v protinádorové terapii, konkrétně pak pro léčbu karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo lidského osteosarkomu.

Dosavadní stav techniky

V soudobé konvenční farmakoterapii (ATC klasifikace WHO, 2018) se užívá zlata a komplexů zlata pouze v indikacích souvisejících se zánětlivými onemocněními, konkrétně pak injekcí koloidálního zlata ¹⁹⁸Au pro radiační synovektomii (ATC kód V10AX06) a komplexů zlata v oxidačním stupni +1 jako jsou Natrium-Aurothiomalát (ATC kód M01CB01), NatriumAurothiosulfát (ATC kód M01CB02), Aurothioglukosa (ATC kód M01CB04) a Aurotioprol (ATC kód M01CB05) v injekční aplikační formě, a Auranofin (ATC kód M01CB03) v perorální formě k chrysoterapii zánětlivých a autoimunitních onemocnění (Bykerk V.P. 55 Nonimmunosuppressive disease-modifying antirheumatic drugs. In: Hochberg M.C. et al. (Eds.), Rheumatology, 6th ed. Vol. 1, Elsevier: Amsterdam, 2015, pp. 434-442). Mimoto je v současnosti evidováno 14 klinických studií (ClinicalTrials.gov, National Library of Medicíně, USA), zabývajících se zejména použitím Auranofinu pro léčbu různých druhů nádorů (např. glioblastom, recidivující nemalobuněčný plicní karcinom, rakovina vaječníků nebo vejcovodů, chronická leukocytická leukémie), dále pak použitím Natrium-Aurothiomalátu pro léčbu různých druhů nádorů (např. nemalobuněčný plicní karcinom), použitím koloidním zlatém modifikovaného tumor-nekrotizujícího faktoru pro léčbu solidních a metastazujících tumorů. Z dalších klinických testů v jiných indikacích je to použití Auranofinu pro tlumení syndromu bolesti indukovaného paklitaxelem, použití Auranofinu k eliminaci latentního virálního rezervoáru u pacientů infikovaných virem HIV, použití Auranofinu k léčbě parazitárních onemocnění gastro-intestinálního traktu a tuberkulózy.

Na rozdíl od výše zmíněných komplexů zlata, organokovové sloučeniny zlata s N-heterocyklickými karbenovými ligandy našly za posledních 15 let využití v syntetické chemii zejména jako katalyzátory cykloisomerizace enynů, hydroarylací, diborací, [3,3]-přesmyků, hydroaminací, hydratací a polymerizací, a v současnosti se také zkoumá jejich uplatnění při aktivaci C-H vazeb alkanů, hydrogenaci olefinů a katalýze cross-couplingových reakcí (Marion N., Nolan S.P., N-Heterocyclic carbenes in gold catalysis. Chem. Soc. Rev. 37 (2008) 17761782). Jejich biologická aktivita, a zejména pak protinádorová aktivita (Liu W., Gust R. Update on metal N-heterocyclic carbene complexes as potential anti-tumor metallodrugs. Coord. Chem. Rev. 329 (2016) 191-213) se stala předmětem zájmu bioanorganických chemiků až v posledním období.

Pečlivým vyhodnocením trendů výzkumu a vývoje protinádorové aktivních N-heterocyklických karbenových komplexů zlata bylo možné identifikovat tři hlavní směry, které dosud vedly k protinádorové účinným derivátům (Liu W., Gust R. Update on metal N-heterocyclic carbene complexes as potential anti-tumor metallodrugs. Coord. Chem. Rev. 329 (2016) 191-213).

První směr reprezentují bis-karbenové zlatné komplexy obecného složení [Au(NHC)2]X, kde X je halogen, z nichž nejúčinnější komplexy bis-[(l,3-diethyl-benzylimidazol-2-yliden)] zlatné vykázaly vysokou cytotoxicitu proti buňkám pankreatického adenokarcinomu (Bxpc3, Miapaca2, Panel, ASPC1 při 72 h inkubační době) s hodnotami IC50 v rozsahu 60 až 280 nM (Cheng X. et

- 1 CZ 31771 U1 al., A TrxR inhibiting gold(I) NHC complex induces apoptosis through ASKl-p38-MAPK signaling in pancreatic cancer cells. Mol. Cancer 13 (2014) 221) a oproti buněčné linii karcinomu prsu (MCF-7) s IC50 na úrovni 100 nM po 72 h inkubaci (Liu W. et al. Synthesis, Characterization, and in Vitro Studies of Bis[l,3-diethyl-4,5-diarylimidazol-2-ylidene]gold(I/III) Complexes. J. Med. Chem. 55 (2012) 3713-3724).

Druhým přístupem vedoucím k řadě protinádorově účinných karbenových zlatných komplexů je příprava dimemích a/nebo bimetalických komplexů. Jednou z protinádorově nej účinnějších skupin komplexů byly identifikovány (4-fenyl-5-ferrocenyl-l,3-diethylimidazol-2-yliden)zlatné komplexy nesoucí chlorido (L) nebo trifenylfosfinové ligandy (L) na Au(I) centru obecného vzorce [Au(C/-NHC)(L)]X nebo bis-karbenové uspořádání obecného vzorce [Au(NHC)₂]X, kde Cf-NHC je 4-fenyl-5-ferrocenyl-l,3-diethylimidazol-2-ylidenový ligand, L = halogen nebo derivát fosfanu a X je halogenidový nebo tetrafluoroboritanový aniont (Muenzner J.K. et al. Ferrocenyl-Coupled N-Heterocyclic Carbene Complexes of Gold(I): A Successful Approach to Multinuclear Anticancer Drugs. Chem. Eur. J. 22 (2016) 18953-18962). Tyto komplexy vykázaly nej lepší in vitro cytotoxicitu proti buněčným liniím karcinomu tlustého střeva (HCT-116) a kolorektálního karcinomu (HT-29) s hodnotami IC50 v rozsahu 90 až 160 nM po 72 h inkubaci. Další z vysoce účinných skupin heterobimetalických komplexů byly identifikovány komplexy obecného vzorce {[RuⁿCl2(p-Cym)]-(Ph2P-Me-PPh2)-[Au^I(NHC)]}C104, kde p-Cym reprezentuje íý-p-cyměnový ligand a Ph2P-Me-PPh₂ můstkující methandiylbis(difenylfosfanový) ligand a NHC je imidazol-2-ylidenový ligand, který je různě substituován v polohách 1 a 3 arénovými nebo alkylovými substituenty (Femández-Gallardo J. et al. Versatile synthesis of cationic N-heterocyclic carbene-gold(I) complexes containing a second ancillary ligand. Design of heterobimetallic ruthenium-gold anticancer agents. Chem. Commun. 52 (2016) 3155-3158). Tato skupina komplexů vykazovala synergický efekt obou kovových center na in vitro cytotoxicitu látek proti liniím renálního karcinomu (Caki-1) a karcinomu tlustého střeva (HCT-116) s hodnotami IC50 v rozsahu 3,8 až 8,1 μΜ po 72 h inkubaci, přičemž byly shledány netoxickými vůči lidským embryonálním buňkám ledvin (HEK-293T) až do 100 μΜ koncentrace.

Třetí skupinou zlatných komplexů, z níž některé dosáhly pozoruhodných výsledků při screeningu protinádorově aktivity, je skupina mononukleámích N-heterocyklických karbenových komplexů zlata s dalšími vhodnými ligandy, koordinovanými na kovovém centru. Skupina možných koligandů je přitom celkem rozsáhlá a zahrnuje zejména:

a) halogenido-ligandy (X), např. u látek obecného složení [Au(NHC)(X)j, kde NHC je derivát l,2,4-triazol-5-ylidenového ligandu, byla nalezena protinádorová aktivita vůči lidským leukemickým liniím (HL60 a CCRF CEM po 72 h inkubaci) s hodnotami IC50 v rozsahu 1,25 až 2,52 μΜ (Turek J. et al. 1,2,4-Triazole-based N-heterocyclic carbene complexes of gold(I): synthesis, characterization and biological activity. Appl. Organomet. Chem. 30 (2016) 318-322) nebo komplex kde NHC = l,3-dibenzyl-4,5-difenylimidazol-2-yliden byl testován na panelu NCI-60, na kterém dosáhl hodnot poloviční koncentrace inhibice růstu GI50 v rozsahu 0,32 až 7,28 μΜ (Walther W. et al. In Vitro and In Vivo Investigations into the Carbene Gold Chloride and Thioglucoside Anticancer Drug Candidates NHC-AuCl and NHC-AuSR. Lett. Drug. Des. Discover. 14 (2017) 125-134),

b) P-donorové ligandy, obvykle deriváty fosfanu PR3, kde R je např. fenyl jako u protinádorově vysoce účinného komplexu [Au(NHC)(PPh3)]I, který vykázal vysokou cytotoxicitu proti buňkám pankreatického adenokarcinomu (Bxpc3, Miapaca2, Panel, ASPC1 při 72 h inkubaci) s hodnotami IC50 v rozsahu 8 až 820 nM (Cheng X. et al., A TrxR inhibiting gold(I) NHC complex induces apoptosis through ASKl-p38-MAPK signaling in pancreatic cancer cells. Mol. Cancer 13 (2014) 221),

c) S-donorové ligandy, zejména ze skupin pseudohalogenidů, thiolů, thionů nebo dithiokarbamátů, příkladem protinádorově účinných komplexů z této skupiny látek je

-2CZ 31771 Ul thiokyanáto-(l,3-dibenzyl-4,5-difenylimidazol-2-yliden)zlatný komplex, [Au(NHC)(SCN)j, který prokázal vysokou účinnost vůči buněčným liniím karcinomu prsu (MCF-7), renálního karcinomu (SN12C), leukemickým buňkám (K-562) a karcinomu tlustého střeva (COLO 205) s hodnotami GI50 v rozmezí 290 až 470 nM (Dada O. et al. Synthesis and cytotoxicity studies of novel NHC-Gold(I) pseudohalides and thiolates. ./. Organomet. Chem. 840 (2017) 30-37) nebo komplexy obecného vzorce [Au(NHC)(Sl)1 nebo {[Au(NHC)]2-p-Sl}, kde Sl představuje monodentátně nebo bidentátně koordinovaný dithiokarbamátový ligand, dosahující vůči buňkám ovariálního karcinomu resistentního vůči cisplatině po 72 h inkubaci hodnoty IC50 na úrovni 820 nM, jak je popsané v dokumentech US9573967 B2 a (Sun R.W.Y et al. Dinuclear Gold(I) Pyrrolidinedithiocarbamato Complex: Cytotoxic and Antimigratory Activities on Cancer Cells and the Use of Metal-Organic Framework. Chem. Eur. J. 21 (2015) 18534—18538),

d) O-donorové ligandy, zejména karboxyláto-ligandy (Hackenberg F. et al. Novel Ruthenium(II) and Gold(I) NHC Complexes: Synthesis, Characterization, and Evaluation of Their Anticancer Properties. Organometallics 32 (2013) 5551-5560),

e) C-donorové ligandy, reprezentované zejména alkynylovými ligandy (Bertrand B., Casini A. A golden future in medicinal inorganic chemistry: the promise of anticancer gold organometallic compounds. Dalton Trans. 43 (2014) 4209-4219), přičemž komplexy obecného složení [Au(NHC)(L)j, kde L =..., s těmito ligandy prokázaly vysokou protinádorovou účinnost, např. vůči buňkám kolorektálního adenokarcinomu (FIT-29) nebo karcinomu prsu (MCF-7) na úrovni IC50 = 0,8 až 9,0 μΜ jak je patrné například z patentových spisů EP2776017 Bl, JP5181480 B2, nebo JP5594139 B2.

f) Y-donořové ligandy, přičemž tato skupina NHC zlatných komplexů je jednoznačně nejmenší. Dosud byly tyto látky studovány zejména jako katalyzátory organických reakcí, což dokumentují komplexy obecného složení [Au(NHC)(Nl)L kde Nl jsou např. deriváty pyridinu jako katalyzátory oxidace benzylalkoholu (Chiou J.Y.Z. et al. Gold(I) Complexes of N-Heterocyclic Carbenes and Pyridines. Eur. J. Inorg. Chem. (2009) 1950-1959) nebo karbazol (Wang H.M.J. et al. Gold(I) N-Heterocyclic Carbene and Carbazolate Complexes. Organometallics 24 (2005) 486-493). Využití N-heterocyklických karbenových zlatných komplexů s aziny pro přípravu emisní vrstvy OLED zařízení popisuje spis WO 2017/046572 Al.

I když skupinu NHC-komplexů zlata s N-donorovými ligandy tvoří cca. desítky látek, protinádorová aktivita těchto látek byla testována pouze ojediněle, konkrétně pak u komplexu (l,2,3,4,6,7,8,9-octahydropyridazino[l,2-a]indazolin-l 1-yliden) zlatného s 4-dimethylaminopyridinem, obecně popsaného vzorcem [Au(NHC)(L)]X, kde L = 4-dimethylaminopyridin (Sivaram H. et al. Cationic gold(I) heteroleptic complexes bearing a pyrazole-derived N-heterocyclic carbene: syntheses, characterizations, and cytotoxic activities. Dalton Trans. 42 (2013) 1242112428) a (bis(2,6-diisopropylfenyl)imidazol-2-yliden)zlatného s deprotonovanou V-atonicni koordinovanou molekulou sacharinu, obecně popsaného vzorcem [Au(NHC)(L)j, kde HL reprezentuje molekulu sacharinu (Weaver J. et al. Cytotoxicity of Gold(I) N-Heterocyclic Carbene Complexes Assessed by Using Human Tumor Cell Lines. Chem. Eur. J. 17 (2011) 6620-6624). V obou případech tyto komplexy byly shledány jako protinádorově neúčinné. Toto zjištění také potvrzuje obecný trend vyplývající z analýzy závislostí mezi složením a protinádorovou aktivitou ve skupině NHC-komplexů zlata s různými ko-ligandy, a to že konkrétní míra protinádorově aktivity není u nových látek predikovatelná.

Použití iontových zlatných komplexů obecného vzorce [Au(L)(Py)]X, kde L je NHC nebo derivát fosfanu, Pyje derivát pyridinu a X je „farmaceuticky akceptovatelný“ aniont, pro použití k léčbě rakoviny popisuje spis W02014/048480 Al. Jako protinádorově účinné látky byly identifikovány také zlatité NHC-komplexy s dvou- nebo tří-donorovými ligandy typu {C,N}, {C,N,C}, {C,N,N} a {Ν,Ν,Ν} jak je dokumentováno ve spisech EP2493896 Bl a US8828984 B2 a přehledném článku (Bertrand B., Casini A. A golden future in medicinal inorganic chemistry: the promise of anticancer gold organometallic compounds. Dalton Trans. 43 (2014) 4209-4219).

-3 CZ 31771 U1

Podstata technického řešení

Podstatou technického řešení jsou N-heterocyklické karbenové komplexy zlata v oxidačním stupni +1 s deprotonizovanými bicyklickými monodentátně se koordinujícími A-donorovými ligandy I obecného složení [Au(NHC)(L)] , vyjádřeného strukturním vzorcem II, kde symbol L představuje derivát NI-deprotonizováného 7-azaindolu strukturního vzorce III vázaného na atom zlata přes atom dusíku NI nebo derivátu N9-deprotonizovaného 97ř-purinu strukturního vzorce IV vázaný na atom zlata přes atom dusíku N9,

kde:

- skupina X představuje atom vodíku nebo atom halogenu vybraný ze skupiny fluor, chlor, brom, jód,

- skupina A představuje atom síry nebo skupinu NH,

- substituent R1 je atom vodíku nebo rozvětvený nebo nerozvětvený uhlovodíkový řetězec tvořený z 1 až 6 atomů uhlíku,

- substituent R2 je atom vodíku nebo atom halogenu nebo methylová skupina nebo trifluoromethylová skupina.

Další podstatou technického řešení krystalosolváty komplexů zlata strukturního vzorce II, jejichž složení vyjadřuje vzorec [Au(NHC)(L)j-nSolv, v němž jsou

- L a NHC definovány výše,

- n udává počet krystalosolvátových molekul, především 1 až 2, a

- Solv je organická molekula, vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, hexan, aceton, A, A-dimctliylformamid, dimethylsulfoxid, ethylacetát, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.

Taktéž je podstatou technického řešení farmakologický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství zlatných komplexů strukturního vzorce II nebo jejich krystalosolvátů, nebo farmaceutickou kompozici zlatných komplexů vzorce II nebo jejich krystalosolvátů s jedním či více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami určený pro použití v lékařství pro výrobu léčiv pro léčení nádorových onemocnění, zejména pro léčbu karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo lidského osteosarkomu.

Objasnění výkresů

Konkrétní příklady provedení technického řešení jsou doloženy připojenými výkresy, kde:

- Obr. 1 je ¹³C NMR spektrum komplexu [Au(NHC)(Li)j 1 rozpuštěného v CDCh měřené při teplotě 298 K a prezentované společně s přiřazením jednotlivých uhlíkových atomů.

-4CZ 31771 U1

- Obr. 2 je ¹³C NMR spektrum komplexu [Au(NHC)(L₄)j 4 rozpuštěného v CDCh měřené při teplotě 298 K a prezentované společně s přiřazením jednotlivých uhlíkových atomů.

- Obr. 3 je zobrazení molekulové struktury komplexu [Au(NHC)(L4)]-//-IIcx (4-H-Hex), tj. n-hexanového krystalosolvátu látky 4. Atomy vodíku byly vynechány z důvodu větší přehlednosti.

Příklady uskutečnění technického řešení

V následující části je technické řešení doloženo, nikoli však limitováno, konkrétními příklady jeho uskutečnění. Rozsah ochrany technického řešení je pak jednoznačně limitován zněním nároků na ochranu.

V níže uvedených příkladech byly připravené látky charakterizovány následujícími fýzikálněchemickými metodami:

- elementární analýza se stanovením procentuálního zastoupení uhlíku, vodíku a dusíku (CHN(O)S analyzátor Flash 2000, Thermo Scientific),

- hmotnostní spektrometrie s ionizací elektrosprejem (ESI+ i ESI- technikou), (LCQ Fleet, Thermo Scientific)

- nukleární magnetická rezonance - II, ¹³C, ¹⁹F (400 MHz NMR spektrometr, Varian a 600 MHz NMR spektrometr JNM-ECA600II, Jeol)

- X-ray monokrystalová difraktometrie (monokrystalový difřaktometr Bruker D8 QUEST vybavený PHOTON 100 CMOS detektorem).

Pro stanovení in vitro cytotoxicity připravených NHC-komplexů zlata byla použita mikrotitrační metoda, která hodnotí životaschopnost buněk na základě schopnosti metabolicky aktivních buněk redukovat 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazolium bromid (MTT) za vzniku modrého formazanového barviva. Jelikož k této redukci dochází pouze v živých buňkách, lze tímto způsobem stanovit cytotoxicitu chemických látek. V buňce jsou za redukci zodpovědné enzymy mitochondriálních dehydrogenas. Modré formazanové barvivo je nerozpustné a je následně kvantifikováno po rozpuštění v DMSO s amoniakem za použití klasického spektrofotometru (ELISA reader). In vitro testy protinádorové aktivity byly provedeny na následujících lidských nádorových buněčných liniích: A2780 = karcinom vaječníků; A2780R = karcinom vaječníků resistentní vůči cisplatině a HOS = osteosarkom. Linie byly udržovány v kultivačních lahvích v DMEM médiu (4,5 g/1 glukosy, 2 mM L-glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný) pro buněčné kultury. Suspenze buněk (25 000 buněk/jamka) byly rozpipetovány po 200 μΐ na 96-ti jamkové mikrotitrační destičky. Tyto byly preinkubovány při 37 °C v atmosféře CO₂ po dobu 24 hodin. Testované komplexy byly rozpuštěny nejdříve v/V,/V-dimethylformamidu, a pak naředěny do koncentrace 50,0 mM a tyto sloužily jako zásobní roztoky. Pro vlastní experiment byly zásobní roztoky ředěny 1000x v kultivačním médiu do maximální koncentrace determinované rozpustností látky (20,0 až 50,0 μΜ). Po odsátí kultivačního média byla směs jednotlivých testovaných látek přidána k preinkubované suspenzi nádorových buněk. Směsi byly následně inkubovány po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C a v atmosféře 5% CO₂. Následně byl přidán zředěný roztok MTT v sérovém médiu (0,3 mg/ml) a následovala inkubace po dobu 1 hodiny. Analýza koncentrace MTT fozmazanu byla provedena spektrofotometricky (TECAN, Schoeller Instruments LLC) při 540 nm. Inhibiční koncentrace testovaných komplexů IC50 (μΜ), odpovídající koncentraci testovaných látek toxické pro 50 % vložených nádorových buněk, byly vypočteny z koncentračních křivek.

Příklad 1: Obecná metoda přípravy a charakterizace zlatných NHC-komplexů s deprotonizovanými N-donorovými ligandy odvozenými od 7-azaindolu a purinu.

-5 CZ 31771 U1

Prekurzor pro přípravu cílových komplexů, chlorido-[l,3-bis(2,6-diisopropylfenyl)imidazol-2-yliden]zlatný komplex byl připraven třístupňovou syntézou dle postupů popsaných v literatuře (Arduengo, A.J. et al. Imidazolylidenes, Imidazolinylidenes and Imidazolidines. Tetrahedron 1999, 55, 14523-14534; Collado, A. et al. Straightforward synthesis of [Au(NHC)X] (NHC = N5 -heterocyclic carbene, X = Cl, Br, I) complexes. Chem. Comm. 2013, 49, 5541-5543) z komerčně dostupného chlorido-(dimethylsulfid)zlatného komplexu, vodného roztoku glyoxalu (40 hmotn. % v H2O) a 2,6-diisopropylanilinu. Prekurzorový komplex byl izolován v podobě bílého prášku a rekrystalizován z acetonu.

V druhém kroku byl chlorido-ligand prekurzoru substituován reakcí s ligandem (HLi = 6-[(2-fluorfenyl)sulfanyl]-9//-purin; HL2 = 6-[(2-trifluormethylfenyl)sulfanyl|-97/-purin; HL3 = 2-fluor-6-benzylamino-9//-purin; HL4 = 5-fluor-7-azaindol; HL5 = 2-methyl-4-chlor-7-azaindol; HLď = 3-chlor-7-azaindol) přidaného v 1,1-násobném nadbytku v suchém propan-2-olu za přítomnosti 1,3-násobného nadbytku uhličitanu česného při 55 °C po dobu 16 h. Finální komplexy byly izolovány jako bezbarvé pevné látky ve výtěžku vyšším jak 60 %.

Následně byl produkt vysušen v exsikátoru nad hydroxidem draselným za sníženého tlaku po dobu minimálně 2 dnů.

{6-[(2-fluorfenyl)sulfanyl]purin-9-ato}-[l,3-bis(2,6-diisopropylfenyl)imidazol-2-yliden]zlatný komplex 1

(1)

Výtěžek: 50 %. Elementární složení pro C39H44AUFN6S vypočteno (nalezeno): C, 55,4 (55,2); H,

5,3 (5,4); N, 10,0 (9,6)%. ESI+ MS (methanol, m/z): 845 (vyp. 845) [Au(NHC)L+H]⁺, 1429 (vyp. 1429) [M₂(NHC)2L]⁺. ESI- MS (methanol, m/z): 843 (vyp 843) [Au(NHC)L-H] . II NMR (CDCh, ppm, SiMe₄): 8,63 (s, CH2, 1H), 7,46 (t, C18H, 2H), 7,41 (s, CH8 1H), 7,37-7,30 (m, C26H, C25H, 2H), 7,27-7,23 (m, C13H, C14H, C17H, 6H), 7,07 (m, C24H, 1H), 7,01 (td, C27H, 1H), 4,45 (s, CH21, 2H), 2,57 (sept, 19CH, 4H), 1,28 (d, C20, 12H), 1,22 (d, C20,

12H). ¹⁹F NMR (CDCh, ppm, externí CF3CO2H): -118. ¹³C NMR (CDCh, ppm, SiMe₄): 174,9 (CIO), 159,7 (C6), 159,1 (C4), 153,5 (C8), 152,7 (C23), 150,1 (C2), 145,8 (06), 134,0 (s, 05),

131,8 (C27), 130,9 (08), 129,6 (C5), 128,6 (C25), 126,1 (C22), 124,4 (s, 07), 124,2 (C26), 123,6 (03, 04), 114,9 (C24), 29,0 (19C), 25,5 (C21), 24,5 (C20), 24,3 (C20).

-6CZ 31771 Ul {6-[(2-trifluormethylfenyl)sulfanyl]purin-9-ato} -[ 1,3-bis(2,6-diisopropylfenyl)imidazol-2-yliden |zlatný komplex 2

(2)

Výtěžek: 54 %. Elementární složení pro C40H44A11F3N6S vypočteno (nalezeno): C, 53,7 (53,6); H, 5,0 (4,9); N, 9,4 (9,1)%. ESI+ MS (methanol, miz)'. 895 (vyp 895) [Au(NHC)L+H]⁺. ESI- MS (methanol, miz)'. 309 (vyp 309) [L-H]^-, 893 (vyp 893) [Au(NHC)L-H] . II NMR (CDCI3, ppm, SiMe₄): 8,59 (s, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,41-7,39 (m, 2H), 7,31 (d, 2H, C17H), 7,20 (s, 2H), 7,19 (s, 1H, C18H), 4,64 (s, 2H), 2,58 (sept, 4H), 1,29 (d, 12H), 1,21 (d, 12H). ¹⁹F NMR (CDCI3, ppm, externí CF3CO2H): -59. ¹³C NMR (CDCI3, ppm, SiMe4): 174,7 (s), 159,1 (s), 153,6, 152,2, 150,2 (C2/C8), 145,8 (s, 05), 134 (s, 07), 132, 131,4, 130,9, 129,5, 126,8, 124,4 (s, 06), 123,7, 29,1 (s, -CH₂-Ph), 29,0 (s, 19C), 24,5 (s, 20,21C), 24,3 (s, 20,21C).

(2-fluor-6-benzylaminopurm-9-ato)-[l,3-bis(2,6-diisopropylfenyl)imidazol-2-yliden]zlatný komplex 3

Výtěžek: 51 %, Elementární složení pro C39H45A11FN7 vypočteno (nalezeno): C, 56,6 (56,3); H, 5,5 (5,6); N, 11,8 (11,6)%. ESI+ MS (methanol, miz)'. 828 (vyp 828) [Au(NHC)L₃+H]⁺, 1413 (vyp 1413) [M2(NHC)2L3]⁺. ESI- MS (methanol, miz)'. 826 (vyp 826) [Au(NHC)L-H] . II NMR (CDCh, ppm, SiMe4): 7,76 (C8H, 1H), 7,63 (NH), 7,54-7,49 (C18H, 2H), 7,55-7,40 (C23H, C24H, 2H), 7,32-7,29 (C17H, 4H), 7,28 (C13H, C14H, 2H), 7,07 (C25H, 1H), 6,96-6,86 (C23H,

C24H, 2H), 4,79 (C21H, 2H), 2,57 (C19H, 4H), 1,36 (C20H, 12H), 1,25 (C20H, 12H). ¹⁹F NMR (CDCI3, ppm, externí CF3CCLH): -119. ¹³C NMR (CDCI3, ppm, SiMe4): ¹³C NMR (CDCI3, ppm, SiMe4): 172,6 (CIO), 154,6 (C4), 152,2 (C8), 151,5 (C6), 145,6 (06), 142,8 (C22), 142,0 (C8), 133,6 (05), 131,2 (08), 129,2 (C25), 128,2 (C25), 124,5 (07), 124,1 (C23), 123,8 (03, 04), 112,3 (C5), 37,9 (C21), 29,1 (08), 24,7 (C20), 24,2 (C20).

-7 CZ 31771 U1 (5-fluor-7-azaindol-l-ato)-[l,3-bis(2,6-diisopropylfenyl)imidazol-2-yliden]zlatný komplex 4

Výtěžek: 83 %, Elementární složení pro C34H40AUFN4 vypočteno (nalezeno): C, 56,7 (56,3); H,

5,8 (6,0); N, 7,4 (7,0)%. ESI+ MS (methanol, m/z): 721 (vyp 721) [Au(NHC)L₄+H]⁺. ESI- MS (methanol, m/z): 719 (vyp 719) [Au(NHC)L⁴-H] . II NMR (CDCh, ppm, SiMe₄): 7,86-7,84 (C6H, 1H), 7,48 (C18H, 2H), 7,37 (C4H, 1H), 7,30-7,26 (C17H, 4H), 7,23 (C13H, C14H, 2H), 6,98 (C2H, 1H), 6,16 (C3H,1H), 2,68 (C19H, 4H), 1,43 (d, C20H, 12H), 1,26 (C20H, 12H). ¹⁹F

NMR (CDCh, ppm, externí CF3CO2H): -144. ¹³C NMR (CDCh, ppm, SiMe₄): 177,4 (CIO), 156,0 (C4), 145,8 (06), 139,3 (C2), 134,3 (05), 130,7 (08), 129,1 (C6), 128,8 (C5), 124,3 (07), 123,3 (03, 04), 120,1 (C9), 111,3 (C4), 97,9 (C3), 29,1 (09), 24,5 (09), 24,2 (C20).

(2-methyl-4-chlor-7-azaindol-l-ato)-[l,3-bis(2,6-diisopropylfenyl)imidazol-2-yliden]zlatný 15 komplex 5

Výtěžek: 54 %. Elementární složení pro: C35H42AUCIN4 vypočteno (nelezeno) %C 55,9 (55,8), %H 5,8 (5,9), %N 7,1 (6,9). ESI+ MS (methanol, m/z): 751 (vyp. 751) [Au(NHC)L₅+H]⁺. Ή20 -NMR (400 MHz, CDCh, 298 K): 1,25 (d, C20H, 12H), 1,41 (d, C20H, 12H), 1,97 (d, CH₃, 3H), 2,68 (sept, C19H, 4H), 5,97 (d, C3H, 1H), 6,66 (d, C6H, 1H), 7,23 (s, C13H, C14H, 2H), 7,30 (d, C17H, 4H), 7,49 (t, C4H, 1H) ppm. ¹³C-NMR (100 MHz, CDCh, 298 K): 17,3 (s, C20), 24,3 (s, 09, C20), 24,5 (s, 09, C20), 29,1 (s, 09), 94,8 (s, C3), 113,0 (s, C4), 121,0 (s, C9), 123,2 (s, 03, 04), 124,3 (s, 07), 130,7 (s, C5), 131,5 (s, 07), 134,4 (s, 08), 139,7 (s, C2), 145,9 (s, 05), 147,1 (s, 06), 157,9 (s, C4), 178,3 (s, CIO) ppm.

(3-chlor-7-azaindol-l-ato)-[l,3-bis(2,6-diisopropylfenyl)imidazol-2-yliden]zlatný komplex 6

Výtěžek: 91 %. Elementární složení pro C35H40AUCIN4 vypočteno (nalezeno): %C 54,6 (55,0), %H 5,4 (5,5), %N 7,5 (7,1). ESI+ MS (methanol, m/z): 737 (vyp. 737) [Au(NHC)L₆+H]⁺. II-NMR (400 MHz, CDCh, 298 K): 1,25 (t, C20H, 12H), 1,42 (t, C20H, 12H), 2,66 (sept, C19H, 4H), 6,76 (dd, C2H, 1H), 6,82 (s, C6H, 1H), 7,22 (s, C13H, C14H, 2H), 7,29 (d, C17H, 4H), 7,48 (t, C18H, 2H), 7,68 (dd, C4H, 1H), 8,00 (dd, C5H, 1H) ppm. ¹³C-NMR (100 MHz, CDCh, 298 K): 24,3 (s, C20), 24,6 (s, 09), 29,1 (s, 09), 99,8 (s, C5), 113,8 (s, C4), 118,1 (s, C9), 123,3 (s, 03, 04), 124,2-124,3 (s, 07), 130,7 (s, 08), 133,3 (s, 05), 134,3 (s, 06), 141,8 (s, C2),

145,8 (s, C6), 154,6 (s, C3), 177,1 (s, CIO) ppm.

Příklad 2: Molekulová struktura n-hexanového krystalosolvátu komplexu [Au(NHC)(L4)]-«-Hcx (4-«-Hex) stanovená monokrystalovou rentgenovou strukturní analýzou.

Základní krystalografické parametry n-hexanového krystalosolvátu komplexu [Au(NHC)(L4)]-n-Hex (4-«-Hex): mřížkové parametry: a (Á) 22,347(5), b (Á) 14,160(3), c (Á) 24,868(6), a (°) 90, β (°) 119,567(10), γ (°) 90, prostorová grupa: C2/c, teplota při experimentu: 120 K, vybrané strukturní parametry: vazebné délky Au-Cl = 2,002(3) Á, Au-N3 = 2,054(2) Á a velikost vazebného úhlu Cl-Au-N3 = 175,43(10)°. (viz obrázek 3). Délky vazeb v krystalografii se konvenčně udávají v jednotkách Á, přičemž platí převodní vztah 1 Á = 1O¹⁰ m.

Příklad 3: In vitro cytotoxicita zlatných komplexů na vybraných lidských nádorových liniích.

Pro stanovení in vitro cytotoxicity studovaných komplexů [Au(NHC)(Li)j 1, [Au(NHC)(L₂)] 2, [Au(NHC)(L3)j 3, [Au(NHC)(L,4)] 4 a cisplatiny byl využit výše popsaný MTT test (HLi = 6-[(2-fluorfenyl)sulfanyl]-9H-purin; HL2 = 6-[(2-trifluormethylfenyl)sulfanyl]-9H-purin; HL3 = 2-fluor-6-benzylamino-9H-purin; HL4 = 5-fluor-7-azaindol). Hodnoty in vitro protinádorové aktivity studovaných komplexů a cisplatiny, jako zvoleného standardu, vyjádřené v průměrných hodnotách inhibiční koncentrace IC50 ± S.D. (μΜ) jsou uvedené v Tabulce 1.

Tabulka 1: Výsledky in vitro cytotoxicity připravených komplexů 1 až 4 vůči vybraným lidským nádorovým liniím a lidským hepatocytům a jejich srovnání s léčivem cisplatinou vyjádřené v hodnotách inhibiční koncentrace IC50 ± S.D. (μΜ)

Komplex	ICso± S.D. (μΜ)
	A2780	A2780R	HOS	Hep220
[Au(NHC)(Li)j 1	3.2 ±0.7	7.4 ±2.3	6.2± 1.1	>50
[Au(NHC)(L₂)] 2	6.4 ± 1.9	5.5 ±2.4	8.6 ±0.5	>50
[Au(NHC)(L₃)] 3	13.3 ±2.5	7.8 ±0.5	8.7 ±0.7	>20
[Au(NHC)(L₄)] 4	1.8 ±0.2	3.4 ±0.7	9.2 ± 1.6	>50
cisplatina	20.1 ±0.3	45.7 ±3.3	47.4 ± 1.3	>50

-9CZ 31771 U1

A2780 = karcinom vaječníků; A2780R = karcinom vaječníků resistentní vůči cisplatině', HOS = osteosarkom; HEP220 = primární kultura lidských hepatocytů; Toxicita vůči HEP220 byla testována jen do uvedené koncentrace v důsledku omezené rozpustnosti komplexů.

S.D. = směrodatná odchylka.

NÁROKY NA OCHRANU

Claims

1. N-heterocyklické karbenové, NHC, komplexy zlata v oxidačním stupni +1 s deprotonizovanými bicyklickými monodentátními A-donorovými ligandy I obecného složení [Au(NHC)(L)j, vyjádřeného strukturním vzorcem II, kde symbol L představuje derivát N1-deprotonizováného 7-azaindolu strukturního vzorce III vázaného na atom zlata přes atom dusíku NI nebo derivátu N9-deprotonizováného 9A-purinu strukturního vzorce IV vázaný na atom zlata přes atom dusíku N9,

R:

kde:

- skupina A představuje atom síry nebo skupinu NH,

2. Krystalosolváty komplexů zlata strukturního vzorce II, jejichž složení vyjadřuje vzorec [Au(NHC)(L)]-/í.Sri/i·, v němž jsou

- L a NHC definovány v nároku 1,

- n udává počet krystalosolvátových molekul, který je 1 až 2, a

- Solv je organická molekula, vybraná ze skupiny voda, primární alkohol, sekundární alkohol, hexan, aceton, A, A-dimcthylformamid, dimethylsulfoxid, ethylacetát, dichlormethan, acetonitril nebo diethylether, a to buď samostatně, nebo v kombinaci uvedených solvátových molekul.

3. Farmakologický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství komplexů zlata strukturního vzorce II podle nároku 1 nebo jejich krystalosolvátů dle nároku 2 s jedním nebo více přijatelnými nosiči a pomocnými látkami.

4. Farmako logický prostředek podle nároku 3 pro použití v lékařství pro výrobu léčiv pro

- 10CZ 31771 U1 léčení nádorových onemocnění, zejména pro léčení karcinomu vaječníků a/nebo karcinomu vaječníků rezistentnímu vůči cisplatině a/nebo lidského osteosarkomu.