CZ279602B6 - Způsob získávání enzymů z proenzymů - Google Patents
Způsob získávání enzymů z proenzymů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ279602B6 CZ279602B6 CZ93531A CZ53193A CZ279602B6 CZ 279602 B6 CZ279602 B6 CZ 279602B6 CZ 93531 A CZ93531 A CZ 93531A CZ 53193 A CZ53193 A CZ 53193A CZ 279602 B6 CZ279602 B6 CZ 279602B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- prothrombin
- trypsin
- factor
- thrombin
- activation
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title description 5
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 title description 3
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 title description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 2
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 claims abstract description 28
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 claims abstract description 20
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 19
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims description 24
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims description 22
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 claims description 5
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 claims description 5
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 claims description 5
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 claims description 5
- 229940012426 factor x Drugs 0.000 claims description 4
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 claims 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 abstract description 4
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 abstract description 4
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 abstract description 2
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 abstract description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108010014806 prothrombinase complex Proteins 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000651439 Homo sapiens Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010047290 Multifunctional Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000006833 Multifunctional Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 150000001252 acrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000011066 ex-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940039715 human prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000001473 noxious effect Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6429—Thrombin (3.4.21.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6427—Chymotrypsins (3.4.21.1; 3.4.21.2); Trypsin (3.4.21.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/647—Blood coagulation factors not provided for in a preceding group or according to more than one of the proceeding groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21005—Thrombin (3.4.21.5)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Separation Of Suspended Particles By Flocculating Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
Abstract
Způsob aktivace faktorů srážení krve trypsinem. při němž se faktor srážení krve získá z frakce, obsahující protrombinový komplex, zpracuje se s trypsinem imobilizovaným na nosiči nerozpustném ve vodě a imobilizovaný trypsin se po aktivaci srážení krve oddělí.ŕ
Description
Způsob aktivace faktorů srážení krve
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu aktivace faktorů srážení krve trypsinem jakož i použití způsobu pro výrobu trombinem.
Dosavadní stav techniky
Srážení krve probíhá sérií po sobě jdoucích reakcí, ve kterých se aktivují faktory srážení krve, které opět katalyzují následující reakce, Nakonec se tvoří fibrin z fibrinogenu působením aktivovaného protrombinu (trombinu). Aktivace faktorů srážení krevních destiček probíhá hlavně proteolýzou zymogenu na proteolyticky účinný enzym. Mechanismus této aktivační reakce je z části ještě neznámý, čímž je in vitro aktivace faktorů srážení krve těžko kontrolovatelná. Přeměna protrombinu na trombin probíhá například samotným faktorem Xa a vápníkem velice pomalu. Probíhá optimálně teprve potom, když je přítomen komplex více faktorů (komplex protrombinázy). Vedle faktoru Xa k tomuto komplexu patří faktor V, fosfolipidy a vápník. Faktor Xa štěpí proteolyticky molekulu protrombinu (mol.hmotnost 68 000 D) a generuje tím aktivní enzym trombin (mol. hmotnost 30 000 D).
Plasmová proteáza trombin je multifunkční enzym, který působí nejen štěpení fibrinogenu na fibrin, ale také mezi jiným aktivuje srážecí faktory, V, VIII a XII a štěpí svůj vlastní proenzym (protrombin). V terapii se používá trombin samotný nebo spolu s fibgrinogenem k uklidnění krvácení nebo v chirurgii ke spojování tkání.
Aktivace protrombinu protrombinázovým komplexem je ex šitu těžko napodobitelná, proto nechybí pokusy, generovat trombin působením proteáz lidského nebo zvířecího původu.
Výzkum aktivace lidského protrombinu hovězím faktorem Xa nebo hovězím trypsinem ukazují, že aktivace trypsinem probíhá přes tytéž fyziologické meziprodukty jako při faktoru Xa. Výtěžek však je maximálně 50 %, protože v případě trypsinu probíhá dále, což vede k odbourání trombinu popřípadě ke vzniku produktů s nízkou molekulární hmotností (Kisiel a Hanahan (1973), Biochim. Biophys. Acta 329, 221 až 232).
Výtěžek trombinu může být zlepšen přídavkem sérového albuminu nebo vysokými koncentracemi glycerinu (50 %) (Landaburu a spol., (1961), Am.J.Physiol, 201, 298 až 302). Na závěr aktivační reakce se produkt musí zbavit trypsinu a škodlivých příměsí před tím, než je možno jej zpracovat na biologicky přijatelný preparát.
Oddělení trypsinu z reakčního média by mohlo být podstatně zjednodušeno použitím imobilizovaného enzymu. Použití imobilizovaného trypsinu k aktivaci protrombinu bylo dosud pokládáno za nemožné. Pokusy ukazují, že na rozdíl od rozpustného trypsinu není imobilizovaný trypsin pro aktivaci protrombinu na trombin vhodný (Zubairov a Zinkevich (1976), Voprosy meditsinskoi khimii 22(2) , 187 až 191).
-1CZ 279602 B6
-/
Úkolem předloženého vynálezu je nalézt jednoduchý způsob aktivace faktorů srážení krve, který vykazuje vysoký výtěžek vztaženo na aktivovaný enzym, aniž by bylo nutné provádět stupeň čištění po aktivační reakci.
Podstata vynálezu
Tento úkol je podle vynálezu řešen způsobem aktivace faktorů srážení krve trypsinem, který spočívá v tom, že se faktor srážení krve získá z frakce, obsahující protrombinový komplex, zpracuje se s trypsinem imobilizovaným na nosiči nerozpustném ve vodě a imobilizovaný trypsin se po aktivaci faktoru srážení krve oddělí. Jako.ye vodě nerozpustný nosič se používají některé celulózy, dextrany, agarozy, akryláty nebo silikáty.
Způsob je vhodný zejména pro aktivaci faktorů srážení krve protrombinu, faktoru IX nebo faktoru X.
Výhodné provedení vynálezu spočívá v provedení aktivace protrombinu, faktoru IX nebo faktoru X při hodnotě pH 5,8 až 7,9, vodivosti 5 až 25 mS a teplotě od 2 do 45 °C.
Způsob podle vynálezu je zvláště dobrý pro získání trombinu z protrombinu. Řízené zpracování frakce, obsahující čištěný protrombin, imobilizovaný trypsinem zahrnuje rychlé a úplné oddělení trypsinu po předem stanovené době ošetření. Produkt neobsahuje v podstatě žádné štěpné produkty. Přídavek běžných stabilizátorů, jako 50 % glycerinu, lze také použít. Frakce, obsahující trombin, mohou být běžným způsobem zpracovány na farmaceutické přípravky.
Pro výrobu aktivovaného enzymu z faktoru srážení krve se může aktivovat buď přečištěný faktor srážení krve, nebo komplex faktoru srážení krve, přičemž se aktivovaný enzym v posledním uvedeném případě výhodně dále čistí. Trombin může být také získán aktivací přečištěného protrombinu nebo komplexu protrombinu.
Další výhoda vynálezu spočívá v tom, že současně s aktivací faktoru srážení krve výrazně klesá aktivita viru v případě, že byl použit výchozí materiál, který pocházel z krve více dárců kontaminované virem.
To, že imobilizovaný trypsin působí inaktivaci viru ve frakcích, obsahujících krevní faktor, je překvapující. Zpracování imobilizovanými neutrálními hyďrolýzami pro inaktivaci rozmnožování schopných filtrovatelných původců chorob bylo známo jedině pro frakce, obsahující imunoglobulin G (EP-A 0247998).
Samozřejmě mohou být v rámci způsobu podle vynálezu použity také další přídavné postupy pro inaktivaci popřípadě přítomných infekčních agens. Například je možno zvlhčený lyofilizovaný výchozí materiál zpracovat pomocí ohřevu parou.
Následujícími příklady je vynález blíže osvětlen.
-2CZ 279602 B6
Příklady provedení vynálezu
1. Imobilizace trypsinu
1,2 g trypsinu typ III (Sigma, Artikel Nr. T 8263) se naváže na 350 ml (100 g prášku) CNBr-aktivované Sepharosy 4B podle pokynů výrobce (fa Pharmacia). Imobilizuje se více než 90 % trypsinu.
2. Aktivace protrombinu ve frakci, obsahující protrombinový komplex.
Z 50 1 lidské na kryoprecipitát chudé krevní plasmy se izoluje protrombinový komplex známým způsobem podle Brummelhuise, Methods of Plasma Fractionation (J.M. Curling vyd., Acad.Press 1980) adsorpcí na aniontovýměnnou pryskyřici. Koncentrace soli frakce, obsahující protrombin se sníží diafiltraci na 150 mM NaCl a produkt se suší vymražením.
Pro případnou inaktivaci obsažených původců chorob se tyto frakce podle AT-B 385657 zahřívají za přítomnosti vodní páry 10 h na 60 °C a 1 h na 80 °C.
Získaný prášek se rozpustí na 25 j. protrombinu/ml (koncentrace proteinu 12 mg/ml) a zpracovává s 1 ml trypsinu, zmobilizovaném na Sepharose, 150 min při 25 °C za pomalého míchání. Aktivita trombinu činí 1 980 j. na ml, specifická aktivita 165 j./mg proteinu.
3. Další čištění trombinu ze stupně 2.
Vyrobí se trombin podle stupně 2 a čistí se průchodem přes sloupec 45 ml S-Sepharosy (Pharmacia). Sloupec se ekvilibruje 25 mM Na3citrátu o pH 6,2. Trombin (105 000 j. ve 25 mM Na3citrátu) se naváže na S-Sepharose, promyje se stejným pufrem a eluuje 150 ml 450 mM NaCl roztoku.
Výtěžek vztaženo na trombin byl na 94 %, specifická aktivita činí 1 735 j/mg proteinu. Tento trombin se za přítomnosti 9 g/1 NaCl a 5 g/1 glycinu suší vymražením na stabilní preparát.
4. Aktivace přečištěného protrombinu
Získání parouzpracovaného protrombinového komplexu z plasmy se provede podle 2.
Vedle protrombinu obsahuje virusinaktivní produkt ještě faktor IX a faktor X. Chromatografickým dělením, na sulfatovaném Sephadexu G50 (Pharmacia) (Miletich a spol., (1980), Analyt.Biochem. 105, 304 až 310) se oddělí faktory IX a X od protrombinu. Po aktivaci přečištěného protrombinu na trombin podle 2. byla specifická aktivita 745 j/mg.
5. Další čištění trombinu ze stupně 4.
110 000 j. trombinu se vyrobí podle 4. a dále se čistí přes sloupec 45 ml S-Sepharosy. Po přečištění má trombin specifickou aktivitu 3 240 j/mg proteinu.
Claims (2)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob aktivace faktorů srážení krve, vybraných ze skupiny zahrnujících protrombin, faktor IX nebo faktor X, trypsinem, obvzláště pro získání trombinu z protrombinu, vyznačující se tím, že se faktor srážení krve zpracuje trypsinem, imobilizováným na ve vodě nerozpustném nosiči a imobilizovaný trypsin se po aktivaci faktoru srážení krve oddělí.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se aktivace protrombinu, faktoru IX nebo faktoru X provádí při hodnotě pH 5,8 až 7,9, vodivosti 5 až 25 mS a teplotě 2 až 45 °C.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0071392A AT396937B (de) | 1992-04-06 | 1992-04-06 | Verfahren zur aktivierung von blutgerinnungsfaktoren |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ53193A3 CZ53193A3 (en) | 1994-01-19 |
| CZ279602B6 true CZ279602B6 (cs) | 1995-05-17 |
Family
ID=3497847
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ93531A CZ279602B6 (cs) | 1992-04-06 | 1993-03-29 | Způsob získávání enzymů z proenzymů |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5393666A (cs) |
| EP (1) | EP0565512B1 (cs) |
| JP (1) | JP2723445B2 (cs) |
| AT (2) | AT396937B (cs) |
| AU (1) | AU663573B2 (cs) |
| CA (1) | CA2092158A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ279602B6 (cs) |
| DE (1) | DE59309217D1 (cs) |
| DK (1) | DK0565512T3 (cs) |
| ES (1) | ES2125971T3 (cs) |
| FI (1) | FI106562B (cs) |
| HU (1) | HU216316B (cs) |
| NO (1) | NO306351B1 (cs) |
| PL (1) | PL298391A1 (cs) |
| SK (1) | SK281266B6 (cs) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK83092D0 (da) * | 1992-06-24 | 1992-06-24 | Unes As | Fremgangsmaade til udvinding af thrombin |
| US5795780A (en) * | 1993-06-23 | 1998-08-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Method of use of autologous thrombin blood fraction in a cell culture with keratinocytes |
| US5677162A (en) * | 1995-05-01 | 1997-10-14 | New York Blood Center, Inc. | Method for activating prothrombin to thrombin |
| AT404597B (de) | 1995-11-24 | 1998-12-28 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von proteinen |
| WO2000062828A1 (en) * | 1996-04-30 | 2000-10-26 | Medtronic, Inc. | Autologous fibrin sealant and method for making the same |
| US5844087A (en) | 1996-11-05 | 1998-12-01 | Bayer Corporation | Method and device for delivering fibrin glue |
| US6274090B1 (en) | 1998-08-05 | 2001-08-14 | Thermogenesis Corp. | Apparatus and method of preparation of stable, long term thrombin from plasma and thrombin formed thereby |
| US6461834B1 (en) | 1998-11-06 | 2002-10-08 | Bionebraska, Inc. | Clostripain catalyzed amidation of peptides |
| US6472162B1 (en) | 1999-06-04 | 2002-10-29 | Thermogenesis Corp. | Method for preparing thrombin for use in a biological glue |
| JP5167146B2 (ja) * | 2005-12-22 | 2013-03-21 | ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド | プレトロンビン−１の活性化方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2757992A1 (de) * | 1977-12-24 | 1979-06-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur prothrombin-bestimmung |
| AT383739B (de) * | 1983-03-16 | 1987-08-10 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von unvertraeglichkeitsreaktionen verursachenden substanzen in immunglobulinhaeltigen blutfraktionen |
| JPS59225064A (ja) * | 1983-06-03 | 1984-12-18 | ユニチカ株式会社 | 生理活性物質固定化用担体 |
| AT385657B (de) * | 1984-03-09 | 1988-05-10 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| AT390560B (de) * | 1986-05-30 | 1990-05-25 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern |
| EP0294851A3 (de) * | 1987-06-12 | 1990-05-09 | Berlin-Chemie Ag | Verfahren zur Herstellung von Humaninsulin und seinen Derivaten |
-
1992
- 1992-04-06 AT AT0071392A patent/AT396937B/de not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-03-17 HU HU9300753A patent/HU216316B/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-03-19 ES ES93890047T patent/ES2125971T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-19 DK DK93890047T patent/DK0565512T3/da active
- 1993-03-19 EP EP93890047A patent/EP0565512B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-19 DE DE59309217T patent/DE59309217D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-19 US US08/034,778 patent/US5393666A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-19 AT AT93890047T patent/ATE174624T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-03-22 CA CA002092158A patent/CA2092158A1/en not_active Abandoned
- 1993-03-29 CZ CZ93531A patent/CZ279602B6/cs unknown
- 1993-03-31 NO NO931221A patent/NO306351B1/no not_active IP Right Cessation
- 1993-03-31 AU AU35622/93A patent/AU663573B2/en not_active Ceased
- 1993-04-05 PL PL29839193A patent/PL298391A1/xx unknown
- 1993-04-06 SK SK308-93A patent/SK281266B6/sk unknown
- 1993-04-06 FI FI931554A patent/FI106562B/fi active
- 1993-04-06 JP JP5079490A patent/JP2723445B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0686674A (ja) | 1994-03-29 |
| HU216316B (hu) | 1999-06-28 |
| DK0565512T3 (da) | 1999-08-23 |
| NO931221L (no) | 1993-10-07 |
| EP0565512B1 (de) | 1998-12-16 |
| HUT68586A (en) | 1995-06-28 |
| HU9300753D0 (en) | 1993-06-28 |
| ES2125971T3 (es) | 1999-03-16 |
| NO931221D0 (no) | 1993-03-31 |
| FI106562B (fi) | 2001-02-28 |
| ATA71392A (de) | 1993-05-15 |
| CA2092158A1 (en) | 1993-10-07 |
| ATE174624T1 (de) | 1999-01-15 |
| AT396937B (de) | 1993-12-27 |
| NO306351B1 (no) | 1999-10-25 |
| EP0565512A1 (de) | 1993-10-13 |
| FI931554A0 (fi) | 1993-04-06 |
| JP2723445B2 (ja) | 1998-03-09 |
| AU3562293A (en) | 1993-10-07 |
| US5393666A (en) | 1995-02-28 |
| CZ53193A3 (en) | 1994-01-19 |
| FI931554L (fi) | 1993-10-07 |
| SK30893A3 (en) | 1993-11-10 |
| DE59309217D1 (de) | 1999-01-28 |
| SK281266B6 (sk) | 2001-01-18 |
| AU663573B2 (en) | 1995-10-12 |
| PL298391A1 (en) | 1993-10-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4101309B2 (ja) | 治療的用途のためのヒトトロンビン濃厚液の製造法 | |
| CZ330992A3 (en) | Thrombin and process for preparing thereof | |
| CZ279602B6 (cs) | Způsob získávání enzymů z proenzymů | |
| US5831025A (en) | Human activated protein C and process for preparing same | |
| WO1992015324A1 (en) | Preparation of factor ix | |
| JPH0698791A (ja) | 酵素的分解によるタンパク質の切断方法およびその利用方法 | |
| US5811279A (en) | Method for activating prothrombin with polyethylene glycol | |
| JPS6147511B2 (cs) | ||
| US6010844A (en) | Methods of preparing and recovering proteins | |
| US5945103A (en) | Process for producing thrombin | |
| RU2167936C2 (ru) | Способ минимизации деградации активированного протеина с (варианты), стабилизированная композиция активированного протеина с | |
| EP3512940B1 (en) | Process for plasminogen purification starting from human plasma | |
| AU740727B2 (en) | Activated vitamin K-dependent blood factor and method for the production thereof | |
| AU4409399A (en) | Human protein c polypeptide | |
| MXPA99008147A (en) | Activated vitamin k-dependent blood factor and method for the production thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic |