CN1943642A

CN1943642A - 一种药物组合物及其有效部位、活性成分的制备方法

Info

Publication number: CN1943642A
Application number: CN 200610113835
Authority: CN
Inventors: 石任兵; 王永炎; 刘斌; 徐秋萍; 王彦志
Original assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Current assignee: Beijing University of Chinese Medicine
Priority date: 2006-10-18
Filing date: 2006-10-18
Publication date: 2007-04-11
Anticipated expiration: 2026-10-18
Also published as: CN1943642B

Abstract

本发明公开了一种药物组合物及其有效部位、活性成分的制备方法。本发明药物组合物由人参、葛根、赤芍组成，本发明药物组合物有效部位的制备方法为：称取原料药，混合均匀，加乙醇提取，合并各次提取液，减压浓缩。取浓缩液，加水搅拌均匀，通过大孔吸附树脂进行吸附，用水冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得本发明药物组合物有效部位。本发明药物组合物及其有效部位或活性成分用于制备治疗血管性痴呆的药物。

Description

一种药物组合物及其有效部位、活性成分的制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其有效部位、活性成分的制备方法，特别涉及一种抗血管性痴呆的药物组合物及其有效部位、活性成分的制备方法。

背景技术

血管性痴呆(VD)是发生在脑血管病基础上的以记忆、认知功能缺损为主，或伴有语言、视空间能力及情感、人格障碍的获得性智能持续性损害，其主要表现为脑血管病后患者出现记忆力、定向力、计算力、理解力等智能减退，可伴有语言能力下降、情感及性格改变等，影响了患者的生活和社会活动。它的发病率不断升高，已成为影响中老年人健康和生活质量的常见病和多发病。随着我国人口老龄化的发展，已给社会和家庭带来沉重的负担。据调查，65岁以上痴呆的发病率为5％。美国统计，60岁以上缺血性脑血管病存活患者中26.3％会发生痴呆。目前，西医对VD的治疗，一是预防和治疗脑血管病，二是改善脑功能，减轻痴呆症状。中医药学则认为“浊毒损伤脑络”是VD的主要病机，肾精气虚、痰瘀互结，阻滞络脉是VD发生的基础，痰瘀蕴积、酿生浊毒，败坏脑络脑髓，是导致VD发生发展的关键。实践证明，中医药在延缓病情、改善全身症状、一定程度上改善智能方面存在优势，对改善记忆力、定向力有一定作用，尤其是对改善患者神情呆滞、自觉症状以及主动性和改善提高生存质量方面有突出作用。但目前从纯中药制剂中分离出具有抗血管性痴呆活性的药物有效部位及活性成分的方法及相关制剂还未曾见有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种药物组合物；本发明的另一个目的在于提供一种抗血管性痴呆的药物组合物；本发明的第三个目的在于提供该药物组合物有效部位、活性成分的制备方法；本发明的第四个目的在于提供该药物组合物及其有效部位的制药新用途。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

本发明药物组合物的原料组成为：

人参3～18重量份、葛根3～18重量份、赤芍3～18重量份。

本发明药物组合物的原料组成优选为：

人参10重量份、葛根10重量份、赤芍10重量份。

本发明药物组合物的原料组成优选为：

人参3重量份、葛根18重量份、赤芍9重量份。

本发明药物组合物的原料组成优选为：

人参18重量份、葛根3重量份、赤芍12重量份。

上述原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括但不限于胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体制剂或注射剂。

本发明药物组合物有效部位的制备方法任选如下一种：

A、按上述比例称取原料药，混合均匀，加6～10倍体积份的30～80％乙醇提取1～4次，每次1～3小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃的条件下减压浓缩至药材量的1-3倍体积，60～65℃的条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液；取浓缩液，加2-6倍药材量的水搅拌均匀，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得本发明药物组合物有效部位；

B、称取人参，加6～10倍体积份的30～80％乙醇提取1～4次，每次1～3小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃的条件下减压浓缩至药材量的1-3倍体积，60～65℃的条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液；取浓缩液，加2-6倍药材量的水搅拌均匀，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得人参提取部位；

称取葛根，加6～10倍体积份的30～80％乙醇提取1～4次，每次1～3小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的1-3倍体积，60～65℃条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液；取浓缩液，加2-6倍药材量的水搅拌均匀，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得葛根提取部位；

称取赤芍，加6～10倍体积份的30～80％乙醇提取1～4次，每次1～3小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的1-3倍体积，60～65℃下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液；取浓缩液，加2-6倍药材量的水搅拌均匀，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得赤芍提取部位；

取上述人参提取部位、葛根提取部位和赤芍提取部位，按1～20∶1～20∶1～20比例混合均匀，即得本发明药物组合物有效部位。

本发明药物组合物有效部位的制备方法优选如下一种：

A、按上述比例称取原料药，混合均匀，加8倍体积份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液；取浓缩液，加4倍药材量的水搅拌均匀，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得本发明药物组合物有效部位；

B、称取人参，加8倍体积份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃的条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃的条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液；取浓缩液，加4倍药材量的水搅拌均匀，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得人参提取部位；

称取葛根，加8倍体积份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液；取浓缩液，加4倍药材量的水搅拌均匀，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得葛根提取部位；

称取赤芍，加8倍体积份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液；取浓缩液，加4倍药材量的水搅拌均匀，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得赤芍提取部位；

取上述人参提取部位、葛根提取部位和赤芍提取部位，按1∶1∶1，1∶20∶1，1∶1∶20，1∶10∶10或3∶4∶3比例混合均匀，即得本发明药物组合物有效部位；

本发明药物组合物有效部位为淡棕色粉末，具有一定的吸湿性，易溶于水和稀乙醇，难溶于氯仿、石油醚等亲脂性有机溶剂；三氯化铁反应阳性，三氯化铝反应阳性，盐酸-镁粉反应阴性，醋酐-浓硫酸反应阳性，α-萘酚-浓硫酸反应阳性；主要含有异黄酮类、单萜苷和皂苷类成分，其中葛根素含量为15.0～25.0％，大豆苷、3′-甲氧基葛根素和芹糖基葛根素的总含量为12.0～18.0％，芍药苷含量为7.0～15.0％，人参总皂苷的含量为17.0～25.0％。

本发明药物组合物有效部位，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括但不限于胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体制剂或注射剂。

本发明药物组合物活性成分的制备方法为：

赤芍中有效成分的分离：取赤芍3-18重量份，用6-10倍体积份的30～80％乙醇提取1-4次，每次1-3小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至1500-2500体积份后，用水稀释至4000-6000体积份，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

取上述方法制备的干浸膏400-600重量份，进行硅胶柱色谱分离(色谱分离I)，用氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到115～125个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，将色谱分离I得到的流份第4～6、7～16、17～31、32～41、42～74、75～99、100～121分别合并，得到CA、CB、CC、CD、CE、CF、CG七个不同部分；

部分CA进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CAI，用石油醚-丙酮混合溶剂2∶1→7∶5梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离CAI得到的流份5～17合并，硅胶柱色谱分离，即色谱分离CAII，用石油醚-丙酮混合溶剂40～60∶1洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CAII得到的流份3～5合并，析出白色片状结晶，用石油醚重结晶，得到苯甲酸0.01-0.03重量份；

部分CB进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CBI，用氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→50∶1→20∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CBI得到的流份22～27合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CBII，用石油醚-丙酮混合溶剂(7∶2)洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到10～15个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CBII得到的流份9经Sephadex LH-20柱色谱分离，甲醇洗脱，得到1S，2S，4R-反式-2-羟基-1，8-桉叶素0.004-0.006重量份和β-谷甾醇0.01-0.03重量份；

部分CD进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDI，用2-4∶1比例的石油醚-丙酮→5-10∶5比例的石油醚-丙酮→甲醇梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到75～80个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDI得到的流份41～70合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDII，2∶1比例的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到25～30个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDII得到的流份9～16合并，经硅胶柱色谱分离，4-6∶1比例的石油醚-丙酮洗脱，得到二氢芹菜素0.006-0.01重量份；色谱分离CDI得到的甲醇洗脱物用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDIII，2-3∶1比例的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到25～30个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDIII得到的流份9～18合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离CDIV，丙酮洗脱，分份收集，每20-40体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDIV得到的流份5～12合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDV，氯仿-甲醇混合溶剂50∶1→20∶1→10∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到45～50个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDV得到的流份8～12合并，析出白色结晶，用丙酮重结晶得到芍药新苷0.02-0.04重量份，流份13～30合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDVI，氯仿-甲醇混合溶剂20∶1→10∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDVI得到的流份4～18合并，经硅胶制备色谱分离制备，20-40∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂展开，得到苯甲酰芍药苷0.03-0.05重量份；流份25～36合并，经Sephadex LH-20柱色谱分离(色谱分离CDVII)，丙酮洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到10～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDVII得到的流份1～3合并，经硅胶柱色谱纯化，20-40∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得到4-乙基芍药苷0.025-0.045重量份；色谱分离CDV得到的流份31～42合并，经硅胶柱层析纯化，20-40∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到1S，2S，4R-反式-1，8-桉叶素-2-O-β-D-葡萄糖苷0.03-0.05重量份；

部分CE用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEI，石油醚-丙酮混合溶剂6-9∶6洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到28～33个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEI得到的流份19～30合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEII，氯仿-甲醇混合溶剂15∶1→12∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到18～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEII得到的组分1～6合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEIII，氯仿-甲醇混合溶剂50∶1→20∶1→8∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIII得到的流份22～28用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到邻苯三酚0.004-0.008重量份；色谱分离CEII得到的组分11～12合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离CEIV，用水→30％甲醇→50％甲醇梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIV得到的组分9～14合并，用聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离CEV，4～7∶0.5～1.5∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEV得到的流份3～4合并，用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到没食子酸乙酯0.005-0.015重量份；流份8～15合并，经聚酰胺柱色谱纯化，6-10∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得到没食子酸0.015-0.035重量份；色谱分离CEII得到的组分13～15合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVI，氯仿-甲醇混合溶剂5-7∶1洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离CEVI得到的流份14～20合并，硅胶柱层析色谱分离，即色谱分离CEVII，6-10∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVII得到的流份5～9合并，用反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIII，30％甲醇洗脱，分份收集，每10-30体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIII得到的流份4～7合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIX，4～7∶0.5～1.5∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIX得到的流份10～13经反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVX，40％甲醇洗脱，分份收集，每10-30体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVX得到的流份14～19经硅胶柱色谱纯化，6-10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到乙基芍药新苷A(25mg)；色谱分离CEVIX得到的流份14～17合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVXI，4～7∶0.5～1.5∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVXI得到的流份14～17合并，经Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到(1S，2S，4R)-反式-1，8-桉叶素-2-O-(6-O-α-L-鼠李糖基)-β′-D-葡萄糖苷0.02-0.04重量份；

部分CF经Toyopearl柱色谱分离，即色谱分离CFI，用水洗脱，分份收集，每10-30体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CFI得到的流份5用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CFII，17～23∶1～3∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CFII得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱纯化，17～23∶1～3∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水洗脱，得到芍药苷0.02-0.04重量份；色谱分离CFI得到的流份6～7合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CFIII，17～23∶1～3∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CFIII得到的流份15～23合并，经硅胶柱层析纯化，5-15∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到羟基芍药苷0.035-0.055重量份；

葛根中有效成分的分离：取葛根3-18重量份，用6-10倍重量份的30～80％乙醇提取1-4次，每次1-3小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至1500-2500体积份后，用水稀释至4000-6000体积份，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

取方法制备的上述干浸膏300-500重量份进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离II，氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到80个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，将色谱分离II得到的流份第3～5、6～7、8～21、22～68、69～80分别合并，得到GA、GB、GC、GD、GE五个部分；

部分GA经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GAI，氯仿洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到10个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GAI得到的流份2经Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离GAII，甲醇洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GAII得到的流份2～5合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GAIII，6-10∶1比例的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自色谱分离GAIII得到的流份4得到棕榈酸0.005-0.015重量份，流份5得到花生酸0.01-0.015重量份；流份6析出白色结晶，用丙酮重结晶，得到羽扇豆醇0.004-0.008重量份；流份8～9析出白色针状结晶，用甲醇重结晶，得到β-谷甾醇0.01-0.03重量份；

部分GB经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GBI，氯仿洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到18～24个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GBI得到的流份11～17合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GBII，10-30∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到18～24个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GBII得到的流份3析出白色沉淀，甲醇反复洗涤后得到二十四烷酸甘油酯0.02-0.04重量份；流份4放置后析出白色结晶，用甲醇重结晶，得到大豆素0.025-0.045重量份；

部分GC经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GCI，用氯仿-甲醇混合溶剂20∶1→10∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到60～70个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GCI得到的流份30～42合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GCII，5-15∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GCII得到的流份13～20合并，从中析出白色沉淀，甲醇反复洗涤后得到染料木苷0.01-0.03重量份；色谱分离GCI得到的流份43～61合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GCIII，5-15∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GCIII得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱纯化，5-15∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到4′，8-二甲氧基-7-葡萄糖基异黄酮0.015-0.035重量份；色谱分离GCIII得到的流份21～29放置后析出结晶，用甲醇重结晶，得到4′-甲氧基大豆苷0.035-0.055重量份；

部分GD用适量水稀释，通过AB-8大孔吸附树脂，水洗脱至水洗液近无色后，用30～70％乙醇洗至洗脱液颜色较浅时止，合并乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得到浸膏20-40重量份；取上述浸膏用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GDI，氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→10∶1→4∶1→2∶1梯度洗脱，分份收集，每50-150体积份收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDI得到的流份11～19合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GDII，17-23∶1-3∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDII得到的流份2～6合并，用聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离GDIII，17-23∶1-3∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDIII得到的流份2～5合并，经聚酰胺柱色谱纯化，17-23∶1-3∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，得到芒柄花苷0.025重量份；6～14合并，经聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离GDIV，25-35∶1-3∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDIV得到的流份3～5合并，聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离GDV，12-18∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，流份10放置后析出葛根新苷A0.015-0.035重量份，流份13～15放置后析出3′-羟基葛根素0.005-0.015重量份，流份17～20用聚酰胺柱色谱分离，25-35∶1-3∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，得到大豆苷0.01-0.015重量份；流份14～25合并后放置，析出结晶，用甲醇重结晶，得到3′-甲氧基葛根素0.035-0.055重量份；色谱分离GDIII得到的流份15～17合并，经聚酰胺柱色谱分离，氯仿-甲醇混合溶剂5-10∶1比例洗脱，得到葛根素0.045-0.065重量份；色谱分离GDI得到的流份28～36合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GDVI，氯仿-甲醇-水混合溶剂3-8∶0.5-2∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDVI得到的流份13～18放置后析出结晶，用甲醇重结晶，得到芹糖基葛根素0.04-0.06重量份；

人参中有效成分的分离：取人参3-18重量份，用6-10倍重量份的30～80％乙醇提取1-4次，每次1-3小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至1500-2500体积份后，用水稀释至4000-6000体积份，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

取上述方法制备的干浸膏400-800重量份进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离III，氯仿-甲醇混合溶剂19∶1～0∶1梯度洗脱，分份收集，每50-150体积份收集一份，共收集得到100个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，将色谱分离III得到的流份第16～25、26～40、41～55、56～79、80～100分别合并，得到RA、RB、RC、RD、RE五个部分；

部分RB用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RBI，氯仿-甲醇混合溶剂15-35∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBI得到的流份14～22合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离RBII，甲醇洗脱，分份收集，每15-35体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBII得到的流份13～18合并后析出20(S)-人参皂苷Rh₁0.035-0.055重量份；流份20～23合并后析出20(S)-原人参三醇0.005-0.025重量份；

部分RC用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCI，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到28～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCI得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCII，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCII得到的流份10～16合并，用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到20(R)-人参皂苷Rh₁0.02-0.04重量份；

部分RD用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RDI，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RDI得到的流份16～21合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RDII，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RDII得到的流份13～15合并，经反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，分份收集，每10-30体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自流份13～16析出20(S)-人参皂苷Rg₃0.005-0.015重量份；

部分RE用硅胶柱色谱分离，即色谱分离REI，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到83～88个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离REI得到的流份27～38合并，经反相硅胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到人参皂苷Rg₁0.06-0.10重量份和20(S)-人参皂苷Rg₂0.02-0.04重量份；流份42～59合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离REII，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到48～56个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离REII得到的流份18～30合并，经反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，分份收集，每10-30体积份收集一份，共收集得到40～45个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自流份12～18得到人参皂苷Rd0.04-0.06重量份，自流份22～29份得到人参皂苷Re0.03-0.05重量份；色谱分离REII得到的流份32～45合并，经反相硅胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到人参皂苷Rb₁0.04-0.08重量份。

本发明药物组合物活性成分的制备方法优选为：

赤芍中有效成分的分离：取赤芍6重量份，用8倍体积份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至2000体积份后，用水稀释至5000体积份，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

取方法制备的上述干浸膏500重量份，进行硅胶柱色谱分离(色谱分离I)，用氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到115～125个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，将色谱分离I得到的流份第4～6、7～16、17～31、32～41、42～74、75～99、100～121分别合并，得到CA、CB、CC、CD、CE、CF、CG七个不同部分；

部分CA进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CAI，用石油醚-丙酮混合溶剂2∶1→7∶5梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离CAI得到的流份5～17合并，硅胶柱色谱分离，即色谱分离CAII，用石油醚-丙酮混合溶剂40～60∶1洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CAII得到的流份3～5合并，析出白色片状结晶，用石油醚重结晶，得到苯甲酸0.02重量份；

部分CB进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CBI，用氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→50∶1→20∶1梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CBI得到的流份22～27合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CBII，用石油醚-丙酮混合溶剂(7∶2)洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到10～15个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CBII得到的流份9经Sephadex LH-20柱色谱分离，甲醇洗脱，得到1S，2S，4R-反式-2-羟基-1，8-桉叶素0.005重量份和β-谷甾醇0.02重量份；

部分CD进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDI，用3∶1比例的石油醚-丙酮→7.5∶5比例的石油醚-丙酮→甲醇梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到75～80个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDI得到的流份41～70合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDII，2∶1比例的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到25～30个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDII得到的流份9～16合并，经硅胶柱色谱分离，5∶1比例的石油醚-丙酮洗脱，得到二氢芹菜素0.008重量份；色谱分离CDI得到的甲醇洗脱物用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDIII，2.5∶1比例的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到25～30个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDIII得到的流份9～18合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离CDIV，丙酮洗脱，分份收集，每30体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDIV得到的流份5～12合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDV，氯仿-甲醇混合溶剂50∶1→20∶1→10∶1梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到45～50个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDV得到的流份8～12合并，析出白色结晶，用丙酮重结晶得到芍药新苷0.03重量份，流份13～30合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDVI，氯仿-甲醇混合溶剂20∶1→10∶1梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDVI得到的流份4～18合并，经硅胶制备色谱分离制备，30∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂展开，得到苯甲酰芍药苷0.04重量份；流份25～36合并，经Sephadex LH-20柱色谱分离(色谱分离CDVII)，丙酮洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到10～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDVII得到的流份1～3合并，经硅胶柱色谱纯化，30∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得到4-乙基芍药苷0.035重量份；色谱分离CDV得到的流份31～42合并，经硅胶柱层析纯化，30∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到1S，2S，4R-反式-1，8-桉叶素-2-O-β-D-葡萄糖苷0.04重量份；

部分CE用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEI，石油醚-丙酮混合溶剂7.5∶6洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到28～33个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEI得到的流份19～30合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEII，氯仿-甲醇混合溶剂15∶1→12∶1梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到18～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEII得到的组分1～6合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEIII，氯仿-甲醇混合溶剂50∶1→20∶1→8∶1梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIII得到的流份22～28用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到邻苯三酚0.006重量份；色谱分离CEII得到的组分11～12合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离CEIV，用水→30％甲醇→50％甲醇梯度洗脱，分份收集，每30体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIV得到的组分9～14合并，用聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离CEV，5.5∶1.0∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEV得到的流份3～4合并，用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到没食子酸乙酯0.01重量份；流份8～15合并，经聚酰胺柱色谱纯化，8∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得到没食子酸0.025重量份；色谱分离CEII得到的组分13～15合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVI，氯仿-甲醇混合溶剂6∶1洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离CEVI得到的流份14～20合并，硅胶柱层析色谱分离，即色谱分离CEVII，8∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVII得到的流份5～9合并，用反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIII，30％甲醇洗脱，分份收集，每20体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIII得到的流份4～7合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIX，5.5∶1.0∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIX得到的流份10～13经反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVX，40％甲醇洗脱，分份收集，每20体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVX得到的流份14～19经硅胶柱色谱纯化，8∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到乙基芍药新苷A(25mg)；色谱分离CEVIX得到的流份14～17合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVXI，5.5∶1.0∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVXI得到的流份14～17合并，经Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到(1S，2S，4R)-反式-1，8-桉叶素-2-O-(6-O-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷0.03重量份；

部分CF经Toyopearl柱色谱分离，即色谱分离CFI，用水洗脱，分份收集，每20体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CFI得到的流份5用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CFII，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CFII得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱纯化，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水洗脱，得到芍药苷0.03重量份；色谱分离CFI得到的流份6～7合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CFIII，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CFIII得到的流份15～23合并，经硅胶柱层析纯化，10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到羟基芍药苷0.045重量份；

葛根中有效成分的分离：取葛根6重量份，用8倍重量份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至2000体积份后，用水稀释至5000体积份，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

取方法制备的上述干浸膏400重量份进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离II，氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到80个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，将色谱分离II得到的流份第3～5、6～7、8～21、22～68、69～80分别合并，得到GA、GB、GC、GD、GE五个部分；

部分GA经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GAI，氯仿洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到10个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GAI得到的流份2经Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离GAII，甲醇洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GAII得到的流份2～5合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GAIII，8∶1比例的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自色谱分离GAIII得到的流份4得到棕榈酸0.01重量份，流份5得到花生酸0.012重量份；流份6析出白色结晶，用丙酮重结晶，得到羽扇豆醇0.006重量份；流份8～9析出白色针状结晶，用甲醇重结晶，得到β-谷甾醇0.02重量份；

部分GB经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GBI，氯仿洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到18～24个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GBI得到的流份11～17合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GBII，20∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到18～24个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GBII得到的流份3析出白色沉淀，甲醇反复洗涤后得到二十四烷酸甘油酯0.03重量份；流份4放置后析出白色结晶，用甲醇重结晶，得到大豆素0.035重量份；

部分GC经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GCI，用氯仿-甲醇混合溶剂20∶1→10∶1梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到60～70个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GCI得到的流份30～42合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GCII，10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GCII得到的流份13～20合并，从中析出白色沉淀，甲醇反复洗涤后得到染料木苷0.02重量份；色谱分离GCI得到的流份43～61合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GCIII，10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GCIII得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱纯化，10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到4′，8-二甲氧基-7-葡萄糖基异黄酮0.025重量份；色谱分离GCIII得到的流份21～29放置后析出结晶，用甲醇重结晶，得到4′-甲氧基大豆苷0.045重量份；

部分GD用适量水稀释，通过AB-8大孔吸附树脂，水洗脱至水洗液近无色后，用30～70％乙醇洗至洗脱液颜色较浅时止，合并乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得到浸膏30重量份；取上述浸膏用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GDI，氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→10∶1→4∶1→2∶1梯度洗脱，分份收集，每100体积份收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDI得到的流份11～19合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GDII，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDII得到的流份2～6合并，用聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离GDIII，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDIII得到的流份2～5合并，经聚酰胺柱色谱纯化，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，得到芒柄花苷0.025重量份；6～14合并，经聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离GDIV，30∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDIV得到的流份3～5合并，聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离GDV，15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，流份10放置后析出葛根新苷A0.025重量份，流份13～15放置后析出3′-羟基葛根素0.01重量份，流份17～20用聚酰胺柱色谱分离，30∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，得到大豆苷0.012重量份；流份14～25合并后放置，析出结晶，用甲醇重结晶，得到3′-甲氧基葛根素0.045重量份；色谱分离GDIII得到的流份15～17合并，经聚酰胺柱色谱分离，氯仿-甲醇混合溶剂7.5∶1比例洗脱，得到葛根素0.055重量份；色谱分离GDI得到的流份28～36合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GDVI，氯仿-甲醇-水混合溶剂5.5∶1.25∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDVI得到的流份13～18放置后析出结晶，用甲醇重结晶，得到芹糖基葛根素0.05重量份；

人参中有效成分的分离：取人参6重量份，用8倍重量份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至2000体积份后，用水稀释至5000体积份，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

取上述方法制备的干浸膏600重量份进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离III，氯仿-甲醇混合溶剂19∶1～0∶1梯度洗脱，分份收集，每100体积份收集一份，共收集得到100个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，将色谱分离III得到的流份第16～25、26～40、41～55、56～79、80～100分别合并，得到RA、RB、RC、RD、RE五个部分；

部分RB用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RBI，氯仿-甲醇混合溶剂25∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBI得到的流份14～22合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离RBII，甲醇洗脱，分份收集，每25体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBII得到的流份13～18合并后析出20(S)-人参皂苷Rh₁0.045重量份；流份20～23合并后析出20(S)-原人参三醇0.015重量份；

部分RC用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCI，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到28～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCI得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCII，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCII得到的流份10～16合并，用SephadexLH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到20(R)-人参皂苷Rh₁0.03重量份；

部分RD用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RDI，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RDI得到的流份16～21合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RDII，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RDII得到的流份13～15合并，经反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，分份收集，每20体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自流份13～16析出20(S)-人参皂苷Rg₃0.01重量份；

部分RE用硅胶柱色谱分离，即色谱分离REI，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到83～88个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离REI得到的流份27～38合并，经反相硅胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到人参皂苷Rg₁0.08重量份和20(S)-人参皂苷Rg₂0.03重量份；流份42～59合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离REII，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到48～56个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离REII得到的流份18～30合并，经反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，分份收集，每20体积份收集一份，共收集得到40～45个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自流份12～18得到人参皂苷Rd0.05重量份，自流份22～29份得到人参皂苷Re0.04重量份；色谱分离REII得到的流份32～45合并，经反相硅胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到人参皂苷Rb₁0.06重量份。

本发明药物组合物活性成分的结构均经理化常数测定及波谱学方法，如紫外光谱、红外光谱、氢核磁共振光谱、碳核磁共振光谱和质谱等予以鉴定。其中葛根新苷A为首次发现的新化合物，乙基芍药新苷为新的天然产物。4-乙基芍药苷、(1S，2S，4R)-反式-2-羟基-1，8-桉叶素、(1S，2S，4R)-反式-1，8-桉叶素-2-O-β-D-葡萄糖苷、邻苯三酚、二氢芹菜素、4′，8-二甲氧基-7-葡萄糖基异黄酮、花生酸和棕榈酸，为首次从本发明各单味药中分离得到的已知化合物；

采用高效液相色谱法，确认本发明药物组合物中含有4-乙基芍药苷、乙基芍药新苷A、芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药新苷、羟基芍药苷、(1S，2S，4R)-反式-2-羟基-1，8-桉叶素、(1S，2S，4R)-反式-1，8-桉叶素-2-O-β-D-葡萄糖苷、(1S，2S，4R)-反式-1，8-桉叶素-2-O-(6-O-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷、邻苯三酚、苯甲酸、没食子酸、没食子酸乙酯、二氢芹菜素、葛根新苷A、4′，8-二甲氧基-7-葡萄糖基异黄酮、葛根素、3′-甲氧基葛根素、3′-羟基葛根素、染料木苷、芒柄花苷、大豆素、大豆苷、4′-甲氧基大豆苷、芹糖基葛根素、二十四烷酸甘油酯、棕榈酸、花生酸、羽扇豆醇、β-谷甾醇、人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、20(S)-人参皂苷Rg₂、人参皂苷Rd、20(S)-人参皂苷Rg₃、20(R)-人参皂苷Rh₁、20(S)-人参皂苷Rh₁、20(S)-原人参三醇等成分。

本发明药物组合物及其有效部位或活性成分均可按常规工艺，加入常规辅料，制成临床接受的剂型，包括但不限于浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。

本发明所述的重量份与体积份的比例为克/毫升。

下述实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1 对D-半乳糖诱导的脑功能衰退小鼠的保护作用

(一)实验材料

1动物

ICR小鼠，雄性，体重18～20g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。合格证号：SCXK(京)2002-0003。

2药品与试剂

受试药：本发明药物组合物有效部位，实验前用蒸馏水配制成溶液，4℃冰箱保存。

阳性对照药：喜得镇片，瑞士山德士药厂、国营天津华津制药厂合作生产产品。

试药：D-半乳糖，由北京化学试剂公司提供。蛋白定量(考马思亮兰)、SOD、MDA、GSH试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供。

3仪器与器材

水迷宫测试仪由中国医学科学院药物研究所电子仪器室研制。HZQ-C空气浴振荡器，哈尔滨市东明医疗仪器厂生产。400R低温离心机，德国Heraeus产品。722型可见分光光度计，上海分析仪器公司产品。

(二)实验方法与结果

1分组及给药

实验动物随机分为6组，即空白对照组、模型对照组、本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量组、喜得镇片组，给药46天。模型对照组和空白对照组灌服等容积的蒸馏水。

2造模方法

除空白对照组每日皮下注射等容积生理盐水外，其余各组动物均每日皮下注射D-半乳糖120mg/kg，共计46天。

3测定方法

(1)分辨学习能力测定于造模第43、44、45天，采用水迷宫测试仪，测定小鼠的分辨学习能力。在第43天开始训练，条件为室温(22±2)℃，水温为(25±1)℃，水深10cm。整个实验分三天进行，第一天先训练A点一次，B点三次；第二天测定B点，训练C点三次；第三天测定C点。A、B点训练时间限制在2min内，C点限制在4min内。超时者分别按2min和4min计。每只小鼠每次训练和测试均记录到达终点的时间(到达时间)和进入盲端的次数(错误次数)。以训练期B、C二点到达时间和错误次数的均值作为学习成绩，以测试期B、C二点到达时间和错误次数作为记忆成绩。以上测试均各组间平行进行，在给药后1小时后测定。结果分别见表1和表2。

表1 本发明药物组合物有效部位对D-半乳糖诱导的脑功能衰退小鼠分辨学习能力的影响(x±s)

组别	n	剂量(g/kg)	B点测试结果		C点测试结果
			B点测试结果		C点测试结果		到达时间(秒)	错误次数	到达时间(秒)	错误次数
			模型对照组空白对照组喜得镇片组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	141213151411	0.0010.05～0.150.15～0.300.30～0.50	66.88±38.6847.14±36.49^48.41±33.32^48.11±35.67^49.81±37.70^54.88±42.77	到达时间(秒)	错误次数	到达时间(秒)	错误次数	3.31±3.172.08±1.83^2.49±2.082.20±1.55^1.88±1.50^*2.76±2.50	59.45±57.5738.92±27.48^35.46±31.08^31.58±18.44^*36.69±36.80^36.67±30.96^*	3.29±3.052.17±1.68^2.13±1.85^2.13±1.75^1.95±1.56^2.21±2.15

注：与模型对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表2 本发明药物组合物有效部位对D-半乳糖诱导的脑功能衰退小鼠分辨记忆能力的影响(x±s)

组别	n	剂量(g/kg)	B点测试结果		C点测试结果
			B点测试结果		C点测试结果		到达时间(秒)	错误次数	到达时间(秒)	错误次数
			模型对照组空白对照组喜得镇片组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	141213151411	0.0010.05～0.150.15～0.300.30～0.50	47.93±32.3821.83±11.27^15.92±12.57^24.87±21.64^19.86±15.61^**26.45±26.36	到达时间(秒)	错误次数	到达时间(秒)	错误次数	3.36±3.321.00±0.74^0.38±0.51^1.27±1.16^0.93±1.27^1.09±1.22^	59.43±56.8823.75±8.85^21.23±12.13^21.8±10.01^19.14±8.66^23.91±10.25^*	2.93±2.200.75±0.87^0.85±0.99^1.07±1.03^0.79±0.80^1.18±1.33^*

注：与模型对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

(2)生化指标测定于造模第46天，给药1h后，于双耳后部位断头，在4℃冰盘上迅速取脑，去除嗅球、小脑及下位脑干，余下部分加9倍生理盐水制成10％脑匀浆备用，以测定SOD活力、MDA含量、GSH含量。操作均按照南京建成生物工程研究所试剂盒说明进行。结果见表3。

表3 本发明药物组合物有效部位对D-半乳糖诱导的脑功能衰退小鼠生化指标的影响(x±s)

组别	n	剂量(g/kg)	SOD活力(U/mg)	MDA含量(μmol/g)	GSH含量(mg/g)
组别	n	剂量(g/kg)	SOD活力(U/mg)	MDA含量(μmol/g)	GSH含量(mg/g)	模型对照组空白对照组喜得镇片组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	141213151411	0.0010.05～0.150.15～0.300.30～0.50	115.1±8.76141.00±39.38^159.12±17.17^140.37±11.38^143.71±11.25^131.18±13.30^*	3.41±0.771.63±0.83^2.41±0.56^1.39±0.49^1.91±0.39^1.90±0.57^**	30.58±4.8248.00±14.15^37.93±4.86^44.59±6.05^48.42±15.28^58.08±4.69^**

注：与模型对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

(三)结论

颈背部皮下注射D-半乳糖46天可以造成小鼠学习记忆功能障碍，表现为在水迷宫实验例中，到达时间延长，错误次数增多。本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量均可不同程度改善这种学习记忆障碍。颈背部皮下注射D-半乳糖46天可以造成小鼠脑组织生化代谢紊乱，表现为超氧化物歧化酶(SOD)活力下降，谷胱甘肽(GSH)含量降低，丙二醛(MDA)含量升高。本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量可明显改善这种生化代谢异常。

实验例2 对拟气虚血瘀模型小鼠8℃冰水游泳的保护作用

(一)实验例材料

1动物

ICR小鼠，共64只，雌雄各半，体重18-22克，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

2药品

受试药：本发明药物组合物、本发明药物组合物有效部位，用0.5％CMC溶解配成溶液，4℃冰箱保存。

3器材

电子秒表，水桶，温度计等。

(二)实验方法与结果

1分组及给药实验动物随机分为五组，即本发明药物组合物A1组、本发明药物组合物A2组、本发明药物组合物有效部位B1组、本发明药物组合物有效部位B2组、模型组(0.5％CMC)。各组动物连续灌胃给药4天。第4天给药1小时后造模。

2造模方法小鼠尾尖部2.5cm处系一10％体重的橡皮泥球，放入8℃±0.5℃的冰水中游泳，每桶一只，水深15cm，直至小鼠溺水死亡。五组间平行操作，记录小鼠从入水到死亡的这一段时间，即游泳存活时间。

3统计方法组间比较进行t检验，实验结果以 x±S表示。

4实验例结果见表4。

表4 本发明药物组合物对拟气虚血瘀模型小鼠游泳存活时间的影响( x±S)

组别	剂量(g/kg)	n	游泳存活时间(s)
组别	剂量(g/kg)	n	游泳存活时间(s)	正常对照组本发明药物组合物A1组本发明药物组合物A2组本发明药物组合物有效部位B1组本发明药物组合物有效部位B2组	0.5％CMC0.81.60.05～0.250.25～0.50	1212131413	725.00±105.41841.83±149.59^878.31±234.43^796.64±169.24941.46±224.37^**

注：与模型组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01

(三)结论

本发明药物组合物、本发明药物组合物有效部位均有延长拟气虚血瘀模型小鼠游泳存活时间的作用，并且以本发明药物组合物有效部位的作用效果好。

实验例3 对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响

(一)实验例材料

1动物

SD大鼠，雄性，体重288±16g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2002-0003。

2药品及试剂

受试药：本发明药物组合物有效部位，给药前用0.5％CMC溶解配成溶液，4℃冰箱保存。

阳性药：天保宁^银杏叶片，浙江康恩贝集团制药有限公司产品，给药前用0.5％CMC溶解配成溶液，4℃冰箱保存。

3仪器

AEG-220型电子分析天平，日本Shimadzu公司产品；DF-206型鼓风干燥箱，北京西城医疗器械厂产品。

(二)实验方法与结果

1分组及给药

大鼠按体重随机分为5组，即模型对照组、天保宁24mg/kg组、本发明药物组合物小、中、大剂量组。模型组给予等容积0.5％CMC。各组动物连续灌胃给药四天，第四天给药1小时后进行实验。

2实验方法

大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液(3.5ml/kg)麻醉，仰位固定，分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉，将三段聚乙烯管相连，一端插入右颈总动脉，另一端插入左颈外静脉，中间段长10cm，放入一根长为8cm已称重的7^#手术线，管内注满生理盐水，连接右侧颈总动脉和左颈外静脉，开放血流20分钟后中断血流，取出丝线，置已称重的硫酸纸上称湿重，此时总湿重减去原丝线和硫酸纸重即为所形成血栓的湿重。再置于烘箱内60℃烘烤1小时至恒重，冷却称重，此时总干重减去原丝线和硫酸纸重即为所形成血栓的干重，比较组间差异。

3统计方法组间比较进行t检验，实验结果以 x±S表示。

4实验例结果见表5。

表5 本发明药物组合物对大鼠实验性血栓形成的影响( x±S)

组别	n	剂量(g/kg)	血栓湿重(mg)	血栓干重(mg)
组别	n	剂量(g/kg)	血栓湿重(mg)	血栓干重(mg)	模型对照组天保宁组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	1515151414	0.5％CMC0.0240.02～0.060.06～0.120.12～0.24	171.9±41.7123.6±45.0^*135.9±47.0^124.7±42.1^*131.3±42.9^	34.2±11.224.4±13.6^25.5±11.2^25.8±7.5^22.0±10.4^*

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

(三)结论

本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量组均可减轻大鼠动静脉旁路血栓的湿重及干重，与模型组相比具有显著差异(P＜0.05，P＜0.01)，表明本发明药物组合物有效部位具有抗血栓形成的作用。

实验例4 对拟气瘀血虚模型小鼠脑组织能量代谢的影响

(一)实验例材料

1动物

ICR小鼠，雌雄各半，体重20±1g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2002-0003。

2药品及试剂

阳性药：天保宁银杏叶片，浙江康恩贝集团制药有限公司产品。给药前用0.5％CMC溶解配成溶液，4℃冰箱保存。

试药：乳酸试剂盒，蛋白定量(考马斯亮兰法)试剂盒，ATP酶试剂盒，NO试剂盒，NOS试剂盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

3仪器

低温离心机，德国Heraeus产品；HZQ-C空气振荡浴，哈尔滨市东明医疗仪器厂生产；722型分光光度计，上海第三仪器厂生产。

(二)方法与结果

1分组及给药

小鼠随机分为6组，即模型组，空白对照组，阳性对照组(天保宁40mg/kg)，本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量组。模型组和空白组给予等量0.5％CMC。各组动物连续灌胃给药4天，第四天给药1小时后造模。

2造模方法

小鼠尾尖部约2.5cm处系一10％体重的橡皮泥，分别放入8℃±0.5℃的冰水中游泳，每桶一只，游泳5分钟后取出。

3测定指标

取出小鼠立即断头取脑，剔除脑干和嗅球，制备脑组织匀浆，测蛋白含量，LD含量、ATP酶活力、NO活力、NOS活力。

4组织匀浆的制备方法

将断头后取出的大脑剔除脑干，嗅球，小脑，加9倍生理盐水于4℃环境中匀浆，制备10％的组织匀浆液。

5蛋白测定方法

将10％脑匀浆液4℃下1000转离心10分钟，取上清液，按考马斯亮兰蛋白试剂盒说明书用722型分光光度计测定蛋白含量。

6LD测定方法

将10％脑匀浆液4℃下1000转离心5分钟，取上清液，按LD试剂盒说明书用722型分光光度计测定LD含量。

7ATP酶测定方法

将10％脑匀浆液4℃下1000转离心5分钟，取上清液，按ATP酶试剂盒说明书用722型分光光度计测定ATP酶活力。

8NO及NOS测定方法

将10％脑匀浆液4℃下1000转离心5分钟，取上清液，按NO及NOS试剂盒说明书用722型分光光度计测定NO及NOS活力。

9统计方法组间比较进行t检验，实验结果以 x±S表示。

10实验例结果见表6、7。

表6 本发明药物组合物对小鼠8℃冰水游泳后断头张口呼吸时间的影响( x±S)

组别	n	剂量(g/kg)	断头张口呼吸时间(S)
组别	n	剂量(g/kg)	断头张口呼吸时间(S)	空白组模型组天保宁组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	171615161616	0.5％CMC0.5％CMC0.040.05～0.150.15～0.300.30～0.50	15.41±1.94^29.69±4.5334.53±3.52^33.81±5.32^34.38±5.18^35.75±4.92^**

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表7 本发明药物组合物有效部位对小鼠8℃冰水游泳后脑组织LD、ATP酶活力的影响( x±S)

组别	n	剂量(g/kg)	LD含量(μmol/L)	Na⁺-K⁺-ATP酶活力(U/ml)	Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活力(U/ml)
组别	n	剂量(g/kg)	LD含量(μmol/L)	Na⁺-K⁺-ATP酶活力(U/ml)	Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活力(U/ml)	空白组模型组天保宁组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	171615161616	0.5％CMC0.5％CMC0.040.05～0.150.15～0.300.30～0.50	0.253±0.049^*0.430±0.0800.344±0.114^0.342±0.070^0.311±0.076^0.298±0.067^**	1.073±0.298^0.613±0.1940.971±0.295^0.819±0.095^1.184±0.211^1.318±0.296^**	0.703±0.202^0.573±0.1190.800±0.212^0.964±0.278^1.504±0.359^1.859±0.600^*

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

(三)结论

本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量组，可明显延长小鼠断头张口呼吸时间，与模型组相比具有显著差异(P＜0.01，P＜0.05＝。

小鼠经8℃冰水游泳后，脑组织能量代谢出现异常，表现为脑组织乳酸含量增加，Na⁺-K⁺-ATP酶和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活力下降，与空白对照组相比具有显著差异。本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量组均可明显抑制冰水游泳致小鼠脑组织乳酸含量增加，Na⁺-K⁺-ATP酶和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活力下降，与模型组相比具有显著差异(P＜0.05，P＜0.01)。说明本发明药物组合物可对气虚血瘀模型小鼠产生脑保护作用。

实验例5 对双侧颈总动脉结扎大鼠学习记忆能力的影响

(一)材料与方法

1动物

SD大鼠，雄性，体重240-260g，由北京维通利华实验通物中心提供，合格证号为：SCXK(京)：2002-0003。

2药品与试剂

阳性药：喜得镇，由瑞士山德士药厂国营华津制药厂合作生产。给药前用0.5％CMC溶解配成溶液，4℃冰箱保存。

试药：NO试剂盒，NOS试剂盒，Ache试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供。

3仪器

400R低温离心机，德国产品；空气浴振荡器，哈尔滨市东明医疗仪器厂生产；722型分光光度计，上海第三分析仪器厂生产；大鼠水迷宫测试仪，由中国医学科学院药物研究所电子仪器室提供。

(二)方法与结果

1分组及给药：

大鼠随机分为6组，即假手术组，模型对照组，阳性药喜得镇组，本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量组。假手术组和模型对照组给予等量的0.5％CMC。各组动物连续给药44天，第四天给药1小时后造模。

2造模方法：

实验大鼠以10％水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉，固定，消毒，无菌手术。分离双侧颈总动脉，用一号手术丝线进行永久性结扎，缝合肌肉皮肤，腹腔注射硫酸庆大霉素，0.4ml/只。假手术组除不结扎双侧颈总动脉外，余同模型组。术后每天灌胃给药，连续40天，于给药最后五天进行水迷宫行为测定。

3Morris水迷宫行为检测：

水迷宫为一不锈钢圆形水池，直径120cm，高50cm，由池壁四个入水点将水池分为东南，西南，西北和东北四个象限，在西南象限正中距池壁22cm处放置一直径9.5cm，高26.5cm的圆形透明平台。实验室温度保持在26℃左右，于迷宫中加入奶粉两袋(400g/袋)，用热水冲开，再加水至高过平台1cm，水温保持在23℃±0.5℃，迷宫正上方悬挂有摄像机，广角变焦镜头，并连接监视器，插有图像采集卡及Morris水迷宫数据采集和分析软件的计算机等记录显示系统。将实验大鼠头部用染发剂涂黑，晾干后即可进行训练，训练期间保持环境安静，迷宫外参照物保持不变。训练包括四天的定位航行实验例和一天的空间搜索实验例：

(1)定位航行实验例：

用于测量大鼠对水迷宫学习和记忆的获取能力。实验历时四天，受试动物每天分别从东北，西北两个象限入水点依次进行训练，将大鼠面向池壁放入水中，如果大鼠在60s内找到平台，记录其实际逃避潜伏期，如果在60s内未找到平台，则逃避潜伏期记为60s。

(2)空间搜索实验例：

用于测量大鼠学会寻找平台后，对平台空间位置记忆的保持能力。定位航行实验例结束后，于第五天撤除平台，由对侧象限(即东北象限)中点将大鼠面向池壁放入水中，测其在60s内首次穿越平台的时间，穿越原平台相应位置的次数及在平台所在象限的游泳距离占距离的百分比。

4生化指标测定：

在大鼠结束水迷宫行为测定后取血进行生化测定。

(1)NO，NOS测定方法：

将大鼠全血4℃3000转离心8分钟，分别取血清按照试剂盒说明书用722型分光光度计测定含量。

(2)Ache测定方法：

将大鼠全血4℃3000转离心8分钟，取血清按照试剂盒说明书用722型分光光度计测定含量。

5统计方法：组间比较进行t检验，实验结果以 x±S表示。

6实验例结果：见表8、9、10。

(1)对双侧颈总动脉结扎大鼠学习记忆能力的影响

定位航行实验例

表8 本发明药物组合物有效部位对双侧颈总动脉结扎大鼠四天

定位航行实验例中逃避潜伏期的影响( x±S)

组别	n	剂量g/kg	逃避潜伏期(s)
			逃避潜伏期(s)				第一天	第二天	第三天	第四天
			假手术组模型组喜得镇组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	141613181615	0.5％CMC0.5％CMC0.00060.02～0.060.06～0.120.12～0.24	47.5±20.7253.6±15.8958.28±6.6257.70±8.7754.6±15.8954.3±15.29	第一天	第二天	第三天	第四天	44.48±22.1146.63±17.4147.69±18.7652.01±15.4343.96±19.9545.40±20.60	35.95±22.2336.50±24.1242.34±20.0740.03±22.6735.75±24.7841.74±21.66	31.79±20.84^42.70±19.0130.54±23.90^34.23±23.0939.72±22.4730.99±23.44^*

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

空间搜索实验例

表9 本发明药物组合物有效部位对双侧颈总动脉结扎大鼠空间搜索实验例中第一次穿越平台时间、

穿越平台次数、平台所在象限游泳距离占总距离百分比的影响( x±S)

组别	n	剂量g/kg	第一次穿越平台时间(S)	穿越平台次数	原平台象限游泳距离百分比(％)
组别	n	剂量g/kg	第一次穿越平台时间(S)	穿越平台次数	原平台象限游泳距离百分比(％)	假手术组模型组喜得镇组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	141613181615	0.5％CMC0.5％CMC0.00060.02～0.060.06～0.120.12～0.24	42.15±20.40^51.79±15.8538.69±23.69^46.67±20.3843.85±20.4941.93±22.43^*	0.93±1.08^*0.31±0.540.50±0.580.47±0.650.81±1.00^0.70±0.88^*	28.55±10.38^23.16±7.7631.13±14.56^28.49±7.92^27.00±9.0528.50±9.07^

注：与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01(2)对结扎双侧颈总动脉大鼠血清NO、NOS、Ache的影响

表10 本发明药物组合物有效部位对结扎双侧颈总动脉大鼠血清NO、NOS、Ache的影响( x±S)

组别	n	剂量(g/kg)	NO含量(μmol/L)	NOS活力(U/ml)	Ache活力(U/ml)
组别	n	剂量(g/kg)	NO含量(μmol/L)	NOS活力(U/ml)	Ache活力(U/ml)	假手术组模型组喜得镇组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	131312131313	0.5％CMC0.5％CMC0.00060.02～0.060.06～0.120.12～0.24	19.01±5.60^25.17±8.4818.63±4.45^24.27±6.9118.89±4.93^18.50±4.67^	32.12±2.24^29.16±4.3334.05±2.5736.43±7.47^37.27±2.84^41.12±4.00^*	8.85±2.40^26.40±3.4812.88±2.09^25.96±5.2118.47±5.94^13.97±4.52^

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

(三)结论

采用双侧颈总动脉永久性结扎40天的方法可以使大鼠出现学习记忆障碍。行为学实验结果表明，本发明药物组合物有效部位在术后连续灌胃给药44天，能使模型大鼠学习记忆障碍有所改善。生化指标测定结果显示，本发明药物组合物有效部位可以影响双侧颈总动脉永久性结扎大鼠血清中NO，NOS，AchE活力。

实验例6 对8℃冰水游泳拟气虚血瘀模型小鼠凝血时间的影响

(一)材料与方法

1动物

ICR小鼠，雄性，体重17-19g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(京)2002-0003。

2药品

阳性对照药：天保宁银杏叶片，棕色片剂。浙江康恩贝制药有限公司产品。实验前用蒸馏水溶解配成溶液，4℃冰箱贮存。

(二)实验方法与结果

1分组及给药

实验动物随机分为五组，即模型对照组，天保宁组，本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量组。各组动物连续灌胃给药四天，第四天给药1小时后造模，其中模型对照组给予等容积的蒸馏水。

2造模方法

小鼠放入8℃±0.5℃冰水中游泳5分钟，取出。室温保持25℃。

3凝血时间的测定

小鼠自冰水中取出后，立即用毛细管于小鼠眼内眦取血，记录从取血开始至凝血的一段时间作为凝血时间。

4统计方法：组间比较进行t检验，实验结果以 x±S表示。

5实验例结果：见表11。

表11 本发明药物组合物有效部位对8℃冰水游泳拟气虚血瘀模型小鼠凝血时间的影响( x±S)

组别	剂量(g/kg)	n	凝血时间(s)
组别	剂量(g/kg)	n	凝血时间(s)	模型对照组天保宁组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组本发明药物组合物有效部位组	0.040.05～0.150.15～0.300.30～0.50	1414141413	150.64±48.33208.64±38.64^146.5±25.68153.86±27.34237.00±38.61^

注：与模型对照组相比，^**P＜0.01

(三)结论

本发明药物组合物有效部位0.30～0.50g/kg可以明显延长拟气虚血瘀模型小鼠凝血时间，与模型组相比具有显著差异，(P＜0.05，P＜0.01)。

实验例7 对大脑中动脉血栓形成(MCAT)模型大鼠神经症状、脑梗塞范围及水肿程度的影响

实验证明：MCAT大鼠神经症状评分分值增加，脑梗塞范围增大，脑水肿程度提高。本发明药物组合物有效部位小、中、大剂量组均可改善MCAT大鼠神经症状，减少其脑梗塞范围；明显降低MCAT大鼠脑水肿程度。说明其具有拮抗脑缺血损伤的作用。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：

人参10Kg、葛根10Kg、赤芍10Kg

上述原料药加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂。

实施例2：

人参3Kg、葛根18Kg、赤芍9Kg

上述原料药加入常规辅料，按照常规工艺，制成注射剂。

实施例3：

人参18Kg、葛根3Kg、赤芍12Kg

上述原料药加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液。

实施例4：

人参6Kg、葛根15Kg、赤芍12Kg

上述原料药合并水煮，醇沉，过滤，浓缩，将所得混合物加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液。

实施例5：

人参15Kg、葛根6Kg、赤芍12Kg

上述原料药分别水煮，醇沉，过大孔树脂柱吸附，分别过滤，分别浓缩得提取物，将所得提取物混合，加入常规辅料，按照常规工艺，制成注射液。

实施例6：

人参6Kg、葛根12Kg、赤芍15Kg

上述原料药分别水煮，醇沉，过滤，分别浓缩得提取物，将所得提取物混合，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂。

实施例7：

人参10kg、葛根10kg、赤芍10kg

按上述比例称取原料药，混合均匀，加8L的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，即得本发明药物组合物有效部位；

该有效部位加入常规辅料、按照常规工艺，制成浓缩丸剂。

实施例8：

人参3kg、葛根18kg、赤芍9kg

称取人参，加7L的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得人参提取部位；

称取葛根，加9L的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，减压浓缩(请详述浓缩的条件，并作浓缩至？ml或g的限定)，浓缩液通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得葛根提取部位；

称取赤芍，加7L的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液，通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得赤芍提取部位；

该有效部位加入常规辅料、按照常规工艺，制成冻干粉针剂。

实施例9：

人参18Kg、葛根3Kg、赤芍12Kg

该有效部位加入常规辅料、按照常规工艺，制成口服液。

实施例10：

人参18Kg、葛根3Kg、赤芍12Kg

称取人参，加8L的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液，浓缩液通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得人参提取部位；

称取葛根，加8L的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液，浓缩液通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得葛根提取部位；

称取赤芍，加8L的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至药材量的2倍体积，60～65℃条件下相对密度约为1.04～1.05的浓缩液，浓缩液通过AB-8型大孔吸附树脂进行吸附，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，得赤芍提取部位；

该有效部位加入常规辅料、按照常规工艺，制成注射剂。

实施例11：

人参6g、葛根6g、赤芍6g

赤芍中有效成分的分离：取赤芍6g，用8倍体积份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至2000ml后，用水稀释至5000ml，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

取上述方法制备的干浸膏500g，进行硅胶柱色谱分离(色谱分离I)，用氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到115～125个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，将色谱分离I得到的流份第4～6、7～16、17～31、32～41、42～74、75～99、100～121分别合并，得到CA、CB、CC、CD、CE、CF、CG七个不同部分；

部分CA进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CAI，用石油醚-丙酮混合溶剂2∶1→7∶5梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离CAI得到的流份5～17合并，硅胶柱色谱分离，即色谱分离CAII，用石油醚-丙酮混合溶剂40～60∶1洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CAII得到的流份3～5合并，析出白色片状结晶，用石油醚重结晶，得到苯甲酸0.02g；

部分CB进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CBI，用氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→50∶1→20∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CBI得到的流份22～27合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CBII，用石油醚-丙酮混合溶剂(7∶2)洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到10～15个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CBII得到的流份9经Sephadex LH-20柱色谱分离，甲醇洗脱，得到1S，2S，4R-反式-2-羟基-1，8-桉叶素0.005g和β-谷甾醇0.02g；

部分CD进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDI，用3∶1比例的石油醚-丙酮→7.5∶5比例的石油醚-丙酮→甲醇梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到75～80个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDI得到的流份41～70合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDII，2∶1比例的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到25～30个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDII得到的流份9～16合并，经硅胶柱色谱分离，5∶1比例的石油醚-丙酮洗脱，得到二氢芹菜素0.008g；色谱分离CDI得到的甲醇洗脱物用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDIII，2.5∶1比例的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到25～30个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDIII得到的流份9～18合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离CDIV，丙酮洗脱，分份收集，每30ml收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDIV得到的流份5～12合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDV，氯仿-甲醇混合溶剂50∶1→20∶1→10∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到45～50个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDV得到的流份8～12合并，析出白色结晶，用丙酮重结晶得到芍药新苷0.03g，流份13～30合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CDVI，氯仿-甲醇混合溶剂20∶1→10∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDVI得到的流份4～18合并，经硅胶制备色谱分离制备，30∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂展开，得到苯甲酰芍药苷0.04g；流份25～36合并，经Sephadex LH-20柱色谱分离(色谱分离CDVII)，丙酮洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到10～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CDVII得到的流份1～3合并，经硅胶柱色谱纯化，30∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得到4-乙基芍药苷0.035g；色谱分离CDV得到的流份31～42合并，经硅胶柱层析纯化，30∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到1S，2S，4R-反式-1，8-桉叶素-2-O-β-D-葡萄糖苷0.04g；

部分CE用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEI，石油醚-丙酮混合溶剂7.5∶6洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到28～33个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEI得到的流份19～30合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEII，氯仿-甲醇混合溶剂15∶1→12∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到18～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEII得到的组分1～6合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEIII，氯仿-甲醇混合溶剂50∶1→20∶1→8∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIII得到的流份22～28用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到邻苯三酚0.006g；色谱分离CEII得到的组分11～12合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离CEIV，用水→30％甲醇→50％甲醇梯度洗脱，分份收集，每30ml收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIV得到的组分9～14合并，用聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离CEV，5.5∶1.0∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEV得到的流份3～4合并，用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到没食子酸乙酯0.01g；流份8～15合并，经聚酰胺柱色谱纯化，8∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得到没食子酸0.025g；色谱分离CEII得到的组分13～15合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVI，氯仿-甲醇混合溶剂6∶1洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离CEVI得到的流份14～20合并，硅胶柱层析色谱分离，即色谱分离CEVII，8∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVII得到的流份5～9合并，用反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIII，30％甲醇洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIII得到的流份4～7合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIX，5.5∶1.0∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIX得到的流份10～13经反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVX，40％甲醇洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVX得到的流份14～19经硅胶柱色谱纯化，8∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到乙基芍药新苷A(25mg)；色谱分离CEVIX得到的流份14～17合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVXI，5.5∶1.0∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVXI得到的流份14～17合并，经Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到(1S，2S，4R)-反式-1，8-桉叶素-2-O-(6-O-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷0.03g；

部分CF经Toyopearl柱色谱分离，即色谱分离CFI，用水洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CFI得到的流份5用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CFII，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CFII得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱纯化，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水洗脱，得到芍药苷0.03g；色谱分离CFI得到的流份6～7合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离CFIII，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CFIII得到的流份15～23合并，经硅胶柱层析纯化，10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到羟基芍药苷0.045g；

葛根中有效成分的分离：取葛根6g，用8倍重量份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至2000ml后，用水稀释至5000ml，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

取上述方法制备的干浸膏400g进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离II，氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→20∶1→10∶1→5∶1→2∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到80个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，将色谱分离II得到的流份第3～5、6～7、8～21、22～68、69～80分别合并，得到GA、GB、GC、GD、GE五个部分；

部分GA经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GAI，氯仿洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到10个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GAI得到的流份2经Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离GAII，甲醇洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GAII得到的流份2～5合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GAIII，8∶1比例的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自色谱分离GAIII得到的流份4得到棕榈酸0.01g，流份5得到花生酸0.012g；流份6析出白色结晶，用丙酮重结晶，得到羽扇豆醇0.006g；流份8～9析出白色针状结晶，用甲醇重结晶，得到β-谷甾醇0.02g；

部分GB经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GBI，氯仿洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到18～24个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离GBI得到的流份11～17合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GBII，20∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到18～24个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GBII得到的流份3析出白色沉淀，甲醇反复洗涤后得到二十四烷酸甘油酯0.03g；流份4放置后析出白色结晶，用甲醇重结晶，得到大豆素0.035g；

部分GC经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GCI，用氯仿-甲醇混合溶剂20∶1→10∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到60～70个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GCI得到的流份30～42合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GCII，10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GCII得到的流份13～20合并，从中析出白色沉淀，甲醇反复洗涤后得到染料木苷0.02g；色谱分离GCI得到的流份43～61合并，经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GCIII，10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GCIII得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱纯化，10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到4′，8-二甲氧基-7-葡萄糖基异黄酮0.025g；色谱分离GCIII得到的流份21～29放置后析出结晶，用甲醇重结晶，得到4′-甲氧基大豆苷0.045g；

部分GD用适量水稀释，通过AB-8大孔吸附树脂，水洗脱至水洗液近无色后，用30～70％乙醇洗至洗脱液颜色较浅时止，合并乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得到浸膏30g；取上述浸膏用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GDI，氯仿-甲醇混合溶剂100∶0→10∶1→4∶1→2∶1梯度洗脱，分份收集，每100ml收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDI得到的流份11～19合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GDII，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDII得到的流份2～6合并，用聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离GDIII，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDIII得到的流份2～5合并，经聚酰胺柱色谱纯化，20∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，得到芒柄花苷0.025g；6～14合并，经聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离GDIV，30∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDIV得到的流份3～5合并，聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离GDV，15∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，流份10放置后析出葛根新苷A0.025g，流份13～15放置后析出3′-羟基葛根素0.01g，流份17～20用聚酰胺柱色谱分离，30∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂洗脱，得到大豆苷0.012g；流份14～25合并后放置，析出结晶，用甲醇重结晶，得到3′-甲氧基葛根素0.045g；色谱分离GDIII得到的流份15～17合并，经聚酰胺柱色谱分离，氯仿-甲醇混合溶剂7.5∶1比例洗脱，得到葛根素0.055g；色谱分离GDI得到的流份28～36合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GDVI，氯仿-甲醇-水混合溶剂5.5∶1.25∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GDVI得到的流份13～18放置后析出结晶，用甲醇重结晶，得到芹糖基葛根素0.05g；

人参中有效成分的分离：取人参6g，用8倍重量份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至2000ml后，用水稀释至5000ml，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

取上述方法制备的干浸膏600g进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离III，氯仿-甲醇混合溶剂19∶1～0∶1梯度洗脱，分份收集，每100ml收集一份，共收集得到100个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，将色谱分离III得到的流份第16～25、26～40、41～55、56～79、80～100分别合并，得到RA、RB、RC、RD、RE五个部分；

部分RB用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RBI，氯仿-甲醇混合溶剂25∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBI得到的流份14～22合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离RBII，甲醇洗脱，分份收集，每25ml收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBII得到的流份13～18合并后析出20(S)-人参皂苷Rh₁0.045g；流份20～23合并后析出20(S)-原人参三醇0.015g；

部分RC用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCI，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到28～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCI得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCII，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCII得到的流份10～16合并，用SephadexLH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到20(R)-人参皂苷Rh₁0.03g；

部分RD用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RDI，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RDI得到的流份16～21合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RDII，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RDII得到的流份13～15合并，经反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自流份13～16析出20(S)-人参皂苷Rg₃0.01g；

部分RE用硅胶柱色谱分离，即色谱分离REI，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到83～88个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离REI得到的流份27～38合并，经反相硅胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到人参皂苷Rg₁0.08g和20(S)-人参皂苷Rg₂0.03g；流份42～59合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离REII，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到48～56个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离REII得到的流份18～30合并，经反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到40～45个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自流份12～18得到人参皂苷Rd0.05g，自流份22～29份得到人参皂苷Re0.04g；色谱分离REII得到的流份32～45合并，经反相硅胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到人参皂苷Rb₁0.06g；

取上述各活性成分，混匀，加入常规辅料，按照常规工艺，制成胶囊剂。

实施例12：

人参3g、葛根18g、赤芍9g

赤芍中有效成分的分离：取赤芍9g，用8倍体积份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至2000ml后，用水稀释至5000ml，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

部分CE用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEI，石油醚-丙酮混合溶剂7.5∶6洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到28～33个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEI得到的流份19～30合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEII，氯仿-甲醇混合溶剂15∶1→12∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到18～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEII得到的组分1～6合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEIII，氯仿-甲醇混合溶剂50∶1→20∶1→8∶1梯度洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIII得到的流份22～28用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到邻苯三酚0.006g；色谱分离CEII得到的组分11～12合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离CEIV，用水→30％甲醇→50％甲醇梯度洗脱，分份收集，每30ml收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIV得到的组分9～14合并，用聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离CEV，5.5∶1.0∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEV得到的流份3～4合并，用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到没食子酸乙酯0.01g；流份8～15合并，经聚酰胺柱色谱纯化，8∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得到没食子酸0.025g；色谱分离CEII得到的组分13～15合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVI，氯仿-甲醇混合溶剂6∶1洗脱，分份收集，每50ml收集-份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离CEVI得到的流份14～20合并，硅胶柱层析色谱分离，即色谱分离CEVII，8∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVII得到的流份5～9合并，用反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIII，30％甲醇洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIII得到的流份4～7合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIX，5.5∶1.0∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIX得到的流份10～13经反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVX，40％甲醇洗脱，分份收集，每20ml收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVX得到的流份14～19经硅胶柱色谱纯化，8∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到乙基芍药新苷A(25mg)；色谱分离CEVIX得到的流份14～17合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVXI，5.5∶1.0∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVXI得到的流份14～17合并，经Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到(1S，2S，4R)-反式-1，8-桉叶素-2-O-(6-O-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷0.03g；

葛根中有效成分的分离：取葛根18g，用8倍重量份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至2000ml后，用水稀释至5000ml，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

部分GB经硅胶柱色谱分离，即色谱分离GBI，氯仿洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到18～24个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GBI得到的流份11～17合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离GBII，20∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到18～24个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离GBII得到的流份3析出白色沉淀，甲醇反复洗涤后得到二十四烷酸甘油酯0.03g；流份4放置后析出白色结晶，用甲醇重结晶，得到大豆素0.035g；

人参中有效成分的分离：取人参3g，用8倍重量份的30～80％乙醇提取3次，每次2小时，合并各次提取液，在真空度≥0.08Mpa，蒸汽压力不超过0.1Mpa，温度70～80℃条件下减压浓缩至2000ml后，用水稀释至5000ml，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，待提取液全部通过树脂柱后，用水继续冲洗树脂柱，至水洗液近无色止，然后再用30～80％乙醇对树脂柱上吸附的物质进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收溶剂至干，残留物置真空干燥箱中50～70℃干燥，得到干浸膏；

上述活性成分，混合，加入常规辅料，按照常规工艺，制成口服液。

Claims

1、一种抗血管性痴呆的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为：人参3～18重量份、葛根3～18重量份、赤芍3～18重量份。

2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为：人参10重量份、葛根10重量份、赤芍10重量份。

3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为：人参3重量份、葛根18重量份、赤芍9重量份。

4、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料组成为：人参18重量份、葛根3重量份、赤芍12重量份。

5、如权利要求1-4任一所述的药物组合物有效部位的制备方法，其特征在于该方法任选如下一种：

6、如权利要求5所述的药物组合物有效部位的制备方法，其特征在于该方法任选如下一种：

7、如权利要求1-4任一所述的药物组合物活性成分的制备方法，其特征在于该方法为：

部分CE用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEI，石油醚-丙酮混合溶剂6-9∶6洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到28～33个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEI得到的流份19～30合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEII，氯仿-甲醇混合溶剂15∶1→12∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到18～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEII得到的组分1～6合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEIII，氯仿-甲醇混合溶剂50∶1→20∶1→8∶1梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIII得到的流份22～28用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到邻苯三酚0.004-0.008重量份；色谱分离CEII得到的组分11～12合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离CEIV，用水→30％甲醇→50％甲醇梯度洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEIV得到的组分9～14合并，用聚酰胺柱色谱分离，即色谱分离CEV，4～7∶0.5～1.5∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，聚酰胺薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEV得到的流份3～4合并，用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到没食子酸乙酯0.005-0.015重量份；流份8～15合并，经聚酰胺柱色谱纯化，6-10∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得到没食子酸0.015-0.035重量份；色谱分离CEII得到的组分13～15合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVI，氯仿-甲醇混合溶剂5-7∶1洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离CEVI得到的流份14～20合并，硅胶柱层析色谱分离，即色谱分离CEVII，6-10∶1比例的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVII得到的流份5～9合并，用反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIII，30％甲醇洗脱，分份收集，每10-30体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIII得到的流份4～7合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVIX，4～7∶0.5～1.5∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVIX得到的流份10～13经反相硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVX，40％甲醇洗脱，分份收集，每10-30体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVX得到的流份14～19经硅胶柱色谱纯化，6-10∶1比例的氯仿-甲醇洗脱，得到乙基芍药新苷A(25mg)；色谱分离CEVIX得到的流份14～17合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离CEVXI，4～7∶0.5～1.5∶0.1比例的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CEVXI得到的流份14～17合并，经Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到(1S，2S，4R)-反式-1，8-桉叶素-2-O-(6-O-α-L-鼠李糖基)-β-D-葡萄糖苷0.02-0.04重量份；

部分RB用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RBI，氯仿-甲醇混合溶剂15-35∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBI得到的流份14～22合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离RBII，甲醇洗脱，分份收集，每15-35体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBII得到的流份13～18合并后析出20(S)-人参皂苷Rh10.035-0.055重量份；流份20～23合并后析出20(S)-原人参三醇0.005-0.025重量份；

部分RC用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCI，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到28～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCI得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCII，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCII得到的流份10～16合并，用Sephadex LH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到20(R)-人参皂苷Rh10.02-0.04重量份；

部分RD用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RDI，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每50ml收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RDI得到的流份16～21合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RDII，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RDII得到的流份13～15合并，经反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，分份收集，每10-30体积份收集一份，共收集得到15～20个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自流份13～16析出20(S)-人参皂苷Rg30.005-0.015重量份；

部分RE用硅胶柱色谱分离，即色谱分离REI，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到83～88个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离REI得到的流份27～38合并，经反相硅胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到人参皂苷Rg10.06-0.10重量份和20(S)-人参皂苷Rg20.02-0.04重量份；流份42～59合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离REII，氯仿-甲醇混合溶剂5-15∶1比例洗脱，分份收集，每40-60体积份收集一份，共收集得到48～56个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离REII得到的流份18～30合并，经反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，分份收集，每10-30体积份收集一份，共收集得到40～45个流份，反相硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，自流份12～18得到人参皂苷Rd0.04-0.06重量份，自流份22～29份得到人参皂苷Re0.03-0.05重量份；色谱分离REII得到的流份32～45合并，经反相硅胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到人参皂苷Rb10.04-0.08重量份。

8、如权利要求7所述的药物组合物活性成分的制备方法，其特征在于该方法为：

部分CA进行硅胶柱色谱分离，即色谱分离CAI，用石油醚-丙酮混合溶剂2∶1→7∶5梯度洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份；色谱分离CAI得到的流份5～17合并，硅胶柱色谱分离，即色谱分离CAII，用石油醚-丙酮混合溶剂40～6∶1洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到8～12个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离CAII得到的流份3～5合并，析出白色片状结晶，用石油醚重结晶，得到苯甲酸0.02重量份；

部分RB用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RBI，氯仿-甲醇混合溶剂25∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到35～40个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBI得到的流份14～22合并，用Sephadex LH-20柱色谱分离，即色谱分离RBII，甲醇洗脱，分份收集，每25体积份收集一份，共收集得到30～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RBII得到的流份13～18合并后析出20(S)-人参皂苷Rh10.045重量份；流份20～23合并后析出20(S)-原人参三醇0.015重量份；

部分RC用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCI，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到28～35个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCI得到的流份13～19合并，用硅胶柱色谱分离，即色谱分离RCII，氯仿-甲醇混合溶剂10∶1比例洗脱，分份收集，每50体积份收集一份，共收集得到20～25个流份，硅胶薄层色谱检识后合并相同流份，色谱分离RCII得到的流份10～16合并，用SephadexLH-20柱色谱纯化，甲醇洗脱，得到20(R)-人参皂苷Rh10.03重量份；

9、如权利要求1-4任一所述的药物组合物，其特征在于按常规工艺，加入常规辅料，制成临床接受的浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。

10、如权利要求5所述的药物组合物有效部位，其特征在于按常规工艺，加入常规辅料，制成临床接受的浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。

11、如权利要求7所述的药物组合物活性成分，其特征在于按常规工艺，加入常规辅料，制成临床接受的浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。

12、如权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备治疗抗血管性痴呆药物中的应用。

13、如权利要求5所述的药物组合物有效部位在制备治疗抗血管性痴呆药物中的应用。

14、如权利要求6所述的药物组合物有效部位在制备治疗抗血管性痴呆药物中的应用。

15、如权利要求7所述的药物组合物活性成分在制备治疗抗血管性痴呆药物中的应用。

16、如权利要求8所述的药物组合物活性成分在制备治疗抗血管性痴呆药物中的应用。