CN1816746B - 用于同时鉴定血型抗原的装置和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于在一种液体试样中同时定性或者定量鉴定多种分析物的装置，该装置包括膜片2并具有：用于涂覆液体试样的一涂覆区5；至少两个可与单个和/或者这些分析物相互作用的指示剂区；以及，至少一个吸附通过指示剂区后的液体的吸附区3，其中，指示剂区处于涂覆区5和吸附区3之间。该装置的特点在于：流动方向从涂覆区5经过各自的指示剂区到吸附区3(流动痕迹)基本上平行并存在至少两种不同的流动痕迹。本发明还涉及一种用于在一种液体试样中鉴定多种分析物或其衍生物的方法，该方法包括：将试样涂覆在按权利要求1至8中之一所述装置膜片2的涂覆区5上，其中，该试样以足够的量存在，以便使试样液体在吸附区3的方向上流过指示剂区并使试样液体内的分析物或其衍生物在指示剂区内形成复合体。

Description

用于同时鉴定血型抗原的装置和方法

技术领域

本发明涉及一种装置，用于侧位诊断流动性多参数检验，特别是在血型血清学领域在一种液体试样中同时定性或者定量鉴定多种分析物，包括的膜片具有用于涂覆液体试样的涂覆区，至少两个可与单个和/或者这些分析物相互作用的指示剂区和至少一个吸附通过指示剂区后的液体的吸附区，其中，指示剂区处于涂覆区和吸附区之间，其特征在于，流动方向从涂覆区经过各自的指示剂区到吸附区(流动痕迹)基本上平行并存在至少两种不同的流动痕迹。

本发明还涉及一种方法，用于在一种液体试样中鉴定多种分析物或其衍生物，包括将试样涂覆在依据本发明装置膜片的涂覆区上，其中，该试样以足够的量存在，以便使试样液体在吸附区的方向上流过指示剂区并使试样液体内的分析物或其衍生物在指示剂区内形成复合体，特别是用于同时鉴定血型抗原。

背景技术

在血型血清学诊断中，通常验明特别是与输血或血溶性新生儿疾病相关具有重要意义的参数。它其中涉及验明表明血型特征的红细胞表面的抗原。其他重要的抗原系还有同样在输血和/或者移植术方面具有重要作用的血小板、粒细胞、淋巴囊肿。

公知为鉴定血型抗原将受检人员(供体或者受体)的红细胞与含有血型专用抗体的试剂结合。通常进行液体检验，其中，通过将含有红细胞的试样与含有针对鉴定血型特征的试样相混合产生一种检验附着物。然后将这种检验附着物通过鉴定的时间和在鉴定的条件下孵育，并在孵育结束后或者直接或者在离心分离步骤后或者目测或者采用光学方法检验红细胞可能的凝结或者吸附。血型血清学中主要的最终检验仍然是血细胞凝结。为所要鉴定的每种血型必须用吸管滴入本身的附着物，也就是说，例如鉴定9种最主要的血型A、B、C、c、E、e、Cw和K要求无对照物的9种分离附着物。

侧位流动检验目前例如作为用于鉴定感染标志的妊娠检验或者作为麻醉剂筛选检验的快速检验得到广泛应用。侧位流动检验的设置公知包括上面安装所要检验试样的涂覆区的固定载体、上面结合被采集者抗体或抗原这种结合成分并可以验证结合反应的分离膜片和使所要检验的试样通过分离膜片流动可吸入的吸附区。

传统的侧位流动检验通常采用类似于色谱法的分离进行说明。试样中的分析物专门与固定在膜片上的结合成分结合，这些结合成分一般设置在作为指示剂区存在的连续或重叠的带上。结合复合体通过指示剂粒子可以看到，这些指示剂粒子一般在结合物释放垫内干燥已经存在于该设置内。结合物释放垫典型地安装在涂覆区和膜片之间。预先涂层的着色指示剂粒子例如利用针对已经找到的分析物的抗体涂层。

常用的侧位流动检验方式是所谓的“层状测定”，其中，无论是指示剂区还是指示剂粒子均采用针对已经找到的分析物的配体，一般为抗体涂层.在此方面，配体(结合成分)固定在膜片上.指示剂试剂，一般为与着色的聚苯乙烯粒子或者胶态金属结合的抗体可生长地放置在结合物释放垫内.这种结合复合体作为指示剂粒子使用.在将所要检验的试样涂覆后，该试样非常迅速地浸湿结合物释放垫，由此指示剂粒子移动.指示剂粒子随同液体正面沿可渗透的膜片移动.处于试样内的分析物通过与指示剂粒子连接的抗体结合.如果试样通过指示剂区，那么分析物指示剂粒子复合体在指示剂区内通过分析物与指示剂区内结合的抗体的反应固定，从而形成可见的信号.

另一种用于不能同时结合两种抗体仅具有唯一抗原决定簇小分析物的公知检验方式是所谓的“竞争测定”。与指示剂粒子结合的指示剂试剂通常为与分析物相同的或者类似的分子。将指示剂粒子用吸管滴入结合物释放垫内。指示剂粒子随同液体正面沿可渗透的膜片移动。如果含有分析物的试样和指示剂粒子(同样有效含有分析物)通过指示剂区的话，那么试样内的一部分分析物分子和一部分指示剂粒子结合。处于试样内的分析物越多，它与指示剂粒子结合的竞争越有效，信号也就越弱。

公知这种指示剂粒子主要由胶态黄金或者由采用专业人员公知的方法制造和涂层的聚苯乙烯组成。在典型的侧位流动检验方式中间接鉴定分析物。直接鉴定分析物在这里是指分析物已经与指示剂粒子(例如红细胞)自然结合。在间接鉴定分析物更常见的情况下，所要检验的试样一般含有非细胞结合的例如血浆成分作为分析物，而且除了所要检验的试样外还需要两种试剂成分，即指示剂粒子和结合成分。在间接鉴定时，分析物首先与从结合物释放垫释放出来的指示剂粒子结合，这种复合体然后才通过与指示剂区内结合成分的第二反应固定。

在使用含有红细胞作为结合所要鉴定的分析物，例如血型专用抗原指示剂粒子的传统侧位流动检验时，迄今为止在指示剂区内与对应血型抗原的抗体作为结合成分设置在仅一个流动痕迹的连续或重叠的带内，例如像与血型抗原A或B的抗A、抗B或者与Rh血型系的抗体。在此方面，传统侧位流动检验的缺点是，与抗体结合的红细胞对其他所要检验的分析物，例如其他细胞配对的抗原在试样内形成一种流动障碍。通过细胞在与结合成分的涂覆区邻近带内的凝结或者吸附，特别是与细胞或细胞碎片配对的其他分析物在所要检验的试样内不能不受阻拦和可见分离，并因此不能确切或完全得到验明。这一点例如在血型AB Rh D为阳性的人身上会导致B带和D带的减弱或消除，从而会造成血型A Rh意义上为阴性的错误解释。因此，迄今为止专门在血型血清学诊断中不能使用具有多于一个指示剂区的侧位流动检验。对于检测多个特别是分子结合和血浆的血型参数来说，迄今为止必须单独进行单项参数的检验。

发明内容

本发明的目的在于，克服所列举的现有技术方面的缺点，特别是为同时检验不同的试样参数，特别是细胞和血浆参数的传统侧位流动检验的连续或重叠指示剂区或验明区的缺点。

该目的依据本发明一方面通过一种用于在一种液体试样或者多种液体试样中同时定性或者定量鉴定一种或者多种分析物的装置得以实现，该装置包括一个膜片并具有一个用于涂覆液体试样的涂覆区、至少两个可与单个和/或者这些分析物相互作用的指示剂区以及至少一个吸附通过指示剂区后的液体的吸附区，其中，指示剂区处于涂覆区和吸附区之间.该装置的特点在于：流动方向从涂覆区经过各自的指示剂区到显示流动痕迹的吸附区基本上平行并存在至少两种不同的流动痕迹.指示剂区这样设置，使每个流动痕迹的试样液体不会流经一个以上的指示剂区.例如，指示剂区偏移设置在膜片上.指示剂区的设置在此方面最好以从近侧向远侧或者以相反对角分布的列构成.特殊的实施方式是以V形、W形、M形或者N形或者相反的V形、W形、M形或者N形构成.在另一种实施方式中，指示剂区并排平行偏移以线性列设置.

依据本发明装置的指示剂区处于膜片上并包括拦截或结合单个/这些试样内的单个/这些分析物的结合成分。指示剂区内验明分析物和结合成分之间的结合反应。

只有采用平行偏移的指示剂区才能在侧位的设置中利用作为指示剂粒子的红细胞进行多参数检验。特别优选对角设置实施方式的优点是，结果的标记可以特别具体和很容易读出地涂覆在依据本发明的设置上，因为每个所要验证的参数均具有确定的X和Y位置，可以把依据本发明装置的设置视为具有纵坐标(流动方向的平面)和横坐标(涂覆区的平面)的坐标系。

指示剂区包括抗体或抗体碎片和/或者其中的植物血凝素或碎片，它们拦截或结合试样内所要鉴定的血型抗原以及携带它们的细胞。作为优选的结合成分将对所有可想到的血型系抗原的抗体或抗体碎片和/或者其中的植物血凝素或碎片涂覆到指示剂区内的可渗透膜片上。最好在指示剂区内，最好在与其他所有指示剂区远侧的指示剂区内涂覆对照结合成分(Kontrolle＝ctl)，它显示试样流经指示剂区为阳性。对照结合成分最好为多克隆的抗红细胞抗体。

在此方面在一种优选的实施方式中，各自一个指示剂区包括一种结合成分，最好对所要检验的分析物的抗体或抗体碎片。指示剂区内优选实施方式的抗体或抗体碎片和/或者其中的植物血凝素或碎片为对ABO-血型系、Rh-、Kell-、Lewis-、Hh-、Duffy-、Kidd、MNS-、Lutheran-、P-系抗原的抗体或植物血凝素。作为指示剂区的结合成分进一步优选对Diego、Yt、Scianna、Dombrock、Colton、Chido/Rodgers、Gerbich、Cromer、Knops、Landsteiner-Wiener、Xg、Kx、Indian、Ok、Raph、John Milton Hagen、Langeres 和/或者Sid血型系抗原的抗体。依据本发明装置一种特别优选的实施方式包括具有抗A、抗B、抗AB、抗D、抗D、抗C、抗c、抗E、抗e、抗Cw和/或者抗K-抗体或其抗体碎片结合成分的指示剂区，其中，两个抗D为两种不同的抗体或其抗体碎片。特别是在患者、孕妇或者新生儿的情况下，这一点最好是不检测D^VI-种类的IgM类别的单克隆系的抗体。在供体情况下，这一点最好是检测D^VI-种类的抗体和不检测D^VI-种类的抗体。

通过依据本发明的装置，为血型鉴定不必再为每单项鉴定单独用吸管滴入，而是可以在一种试样上同时鉴定所要检验的血型系大量所要求的抗原，例如一次鉴定血型系ABO、Rh和Kell(A、B、AB、D、C、c、E、e、Cw、K)最主要的血型特征。这一点使操作过程极其合理化。对角设置中显示结果的读出也更加方便。此外，在依据本发明的装置上可以在一个装置上并排鉴定和读出例如ABO-和Rh-特性。结果分配给相关患者变得容易。二维的平面结果以及反应的稳定终点既有利于裸眼读出也有利于采用例如像CCD-摄像机这种流行的图像分析法自动读出结果。即使在手动操作的情况下也降低了操作费用。依据本发明的装置因此降低了环境污染并形成低成本效应。即使在时间紧迫的紧急情况下也能短时间内在唯一的检验设置上进行完整的ABO-血型/Rh-子血型鉴定。在检验技术上侧位对角流动结构与现有技术相比具有明显的优点，它明显降低了所使用的试剂的消耗并在唯一的装置上提供大量的检验参数。

通过依据本发明的装置特别是为血型血清学诊断提供一种侧位流动检验，采用红细胞作为指示剂粒子并在一种检验附着物中可以同时鉴定每种所要检验试样的多种细胞的，特别是红细胞的抗原或抗原决定簇、血浆参数和/或者特别是全血浆成分中的血细胞特征。此外，因此可以提供一种尽可能简单制造和特别是减少检验序列并无需试样准备简单操作和低成本的检验系统，利用该系统可以同时鉴定一个试样或者多个所要检验的试样的不同细胞参数和/或者血浆参数，特别是血型特征。

依据本发明装置的膜片为可渗透的膜片。优选的膜片材料例如为硝化纤维(例如Sartorius的UniSart、Millipore、Whatman的HiFlow、Schleicher&Schuell的AE99或FF85.100)、聚乙烯(Porex公司的Lateral Flo)或者聚酰胺(CUNO的Novylon)。膜片最好具有尽可能大的孔隙度，因为膜片的高孔隙度有利于所要鉴定试样的细胞成分，特别是红细胞渗入可渗透的结构内。特别具有优点的是吸收附着物的膜片。但依据本发明的装置并不局限于这种特性上。优选所有膜片具有毛细流动率(Capillary Speed)，其中，毛细流动率为颜料溶解所需要的时间，以便在所使用的膜片上经过40mm。特别优选其毛细流动率＜100的膜片。

在本发明的一种优选实施方式中，在依据本发明装置的涂覆区后面和指示剂区前面的流动方向上可渗透的膜片上设置密封件。使用二维或者三维的密封件，将它们在可渗透的膜片上定位并利用它们产生与可渗透膜片的其他表面分离的试样涂覆区。密封件依据本发明主要具有拦截液体的作用并可以将试样液体和检验试剂定向分布到可渗透的膜片内。此外，密封件依据本发明密封试样涂覆区，以防止液体不希望地转移到侧位流动装置设置的其他区域内。

密封件优选的实施方式为接片形或者槽形或漏斗形。密封件通过由制造密封件所使用的材料的切割过程成型。在漏斗形或槽形的情况下，密封件具有内部开口，其优选的实施方案为圆形、正方形或者长方形，在漏斗形的情况下为与密封件的底面(膜片接触面)成锥形的形状。

密封件的优选材料为不吸水(疏水)的材料。在一种特殊的实施方式中，材料单面采用胶粘剂膜涂层，例如压力敏感的或自粘贴的丙烯酸盐胶粘剂。密封件因此可以直接粘贴在可渗透膜片的表面上。作为选择密封件可与测位流动外壳例如通过粘贴连接，其中，在这种实施方式中侧位流动外壳将密封件压在可渗透膜片的表面上并因此起到密封件的作用。

用于构成二维密封件的优选材料为任意形状的粘贴带或者粘贴膜(例如BeiersdorfAG的Tesa4124、Adhesives Research的Arcare7815)。

用于构成三维密封件的优选材料为具有最好3-5mm不同材料厚度的柔性封闭孔弹性体材料或者柔性硅材料(例如Pitzner的海绵橡胶EPDM140、Castan的硅橡胶或者实心橡胶，硬度40°或者以下)。

依据本发明的装置通过依据本发明的这种构成可以吸收例如像全血浆这种含有细胞的液态试样，而在此方面不会滤掉细胞。此外，密封件可以使大量试样体积涂覆在可渗透的膜片(涂覆区)上，而不会使其溢流。因此，密封件有助于利用可渗透膜片的吸收特性。密封件还保证了试样的定向流动。但依据本发明的装置有或没有密封件同样正常工作。

为依据本发明装置的吸附区(吸附垫)优选机械上稳定的材料，最好具有20-30g/100cm²的吸水能力(例如Schleicher和Schüll的300型虹吸纸)。依据本发明装置的吸附垫和侧位流动膜片之间的接触通过与可渗透膜片的压紧和重叠产生。吸附垫在膜片上的准确定位通过吸附垫与携带侧位流动膜片的载体层(backing sheet)粘贴产生。

在另一种实施方式中，依据本发明装置的部件出于机械加固的目的安装在衬底或载体层上。但依据本发明的装置有或没有载体层仍能正常工作。优选机械稳定和不吸水的材料，材料厚度最好100μm或者以上，单面或者双面采用例如压力敏感或者自粘贴的丙烯酸盐胶粘剂这种粘贴膜涂层(例如0.005”聚酯W/GL-187，G&L)。可渗透的膜片和吸附垫固定在载体层上。在双面粘贴载体层的情况下，粘贴的第二面为将该层固定在其他表面上例如装入侧位流动外壳的内部。

在另一种实施方式中，有或者没有上面安装依据本发明装置部件载体层的依据本发明的装置与外壳一体化，由此膜片部件彼此压紧，而且外壳有助于密封件的作用。但在此方面依据本发明的装置有或没有外壳同样正常工作。

本发明的另一主题是依据本发明的装置用于分析血浆，特别是用于同时鉴定所有可想得到血型系的血型抗原或血型抗原的抗原决定簇，最好是进行红细胞表面上的那种分析。所要检验的抗原或抗原的抗原决定簇例如为ABO-血型系、Rh-、Kell-、Lewis-、Hh-、Duffy-、Kidd、MNS-、Lutheran-、P-系的，血型系Diego、Yt、Scianna、Dombrock、Colton、Chido/Rodgers、Gerbich、Cromer、Knops、Landsteiner-Wiener、Xg、Kx、Indian、Ok、Raph、John Milton Hagen、Langereis和/或者Sid，特别是A1、A2、B、D、C、c、E、e、Cw、K、k、M、N、S、s、Jk(a)、Jk(b)、Fy(a)、Fy(b)、Kp(a)、Kp(b)、Js(a)、Js(b)、Le(a)、Le(b)、Lu(a)、Lu(b)、P1、I、H、Xg(a)、U、Vw、Wr(a)、Lan。

依据本发明装置的一种优选实施方式同时鉴定多种血型特征，例如A、B、AB、D、C、c、E、e、Cw和K。将所要检验的试样，例如未曾改变的或者抗凝血的全血浆或者红细胞浓缩物或者稀释的红细胞悬液涂覆在依据本发明装置的涂覆区上。试样内含有的携带单个/这些分析物的红细胞同时作为指示剂粒子使用。

该目的依据本发明另一方面通过一种在一种液态试样中鉴定多种分析物或其衍生物的方法得以实现，该方法包括将试样涂覆在依据本发明装置膜片的涂覆区上，其中，该试样以足够的量存在，以便使试样液体在吸附区的方向上流过指示剂区并使试样液体内的分析物或其衍生物与各自的指示剂区结合或在指示剂区内形成复合体。

依据本发明的方法在所要鉴定的分析物方面特别是涉及全部血型系的血型抗原或血型抗原的抗原决定簇，最好是处于红细胞表面上的那种。所要检验的抗原或抗原的抗原决定簇例如为ABO-血型系、Rh-、Kell-、Lewis-、Hh-、Duffy-、Kidd、MNS-、Lutheran-、P-系的，血型系Diego、Yt、Scianna、Dombrock、Colton、Chido/Rodgers、Gerbich、Cromer、Knops、Landsteiner-Wiener、Xg、Kx、Indian、Ok、Raph、John Milton Hagen、Langereis和/或者Sid，特别是A1、A2、B、D、C、c、E、e、Cw、K、k、M、N、S、s、Jk(a)、Jk(b)、Fy(a)、Fy(b)、Kp(a)、Kp(b)、Js(a)、Js(b)、Le(a)、Le(b)、Lu(a)、Lu(b)、P1、I、H、Xg(a)、U、Vw、Wr(a)、Lan。

依据本发明方法的一种优选的实施方式同时鉴定多种血型特征，例如A、B、AB、D、C、c、E、e、Cw和K。将所要检验的试样，例如未曾改变的或者抗凝血的全血浆或者红细胞浓缩物或者有或者没有如对照血浆这种检验液体的稀释红细胞悬液涂覆在依据本发明装置的涂覆区上。试样内含有的携带单个/这些分析物的红细胞同时作为指示剂粒子使用。

附图说明

下面借助不受其限制的附图和实施例对本发明进行详细说明。其中：

图1示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图；

图2示出图1所示依据本发明用于侧位流动检验的装置分体图；

图3示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置连同三维密封件的透视图；

图4示出图3所示依据本发明用于侧位流动检验的装置分体图；

图5示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置连同槽形三维密封件的透视图；

图6示出图5所示依据本发明用于侧位流动检验的装置分体图；

图7示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D、C、c、E、e、Cw和K的侧位流动检验的装置透视图；

图8示出依据本发明作为用于受体和库存血ABO同一性检验构成的床侧检验的侧位流动检验装置的透视图；

图9示出图8所示依据本发明用于侧位流动检验的装置分体图；

图10示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图；

图11示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图；

图12示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图；

图13示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图；

图14示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE采用双向流动的侧位流动检验的装置透视图；

图15示出图14所示依据本发明用于侧位流动检验的装置分体图。

具体实施方式

图1举例示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图。在该实施例中，装置由载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3和以接片方式构成的二维密封件4组成。在此方面，可渗透的膜片2固定在具有压力敏感或自粘贴丙烯酸盐胶粘剂的载体层1上。吸附垫3同样固定在载体层1上，其中，一部分吸附垫3与可渗透的膜片2重叠。固定在可渗透膜片2上的密封件4将涂覆区5与其余的膜片表面分离，并可以使试样液体和检验试剂定向分布到可渗透的膜片2内。在涂覆区5和与吸附垫3接触的可渗透膜片2的区域之间设置指示剂区6。该指示剂区由对角偏移设置在确定的X-和Y-位置上的点状指示剂区I-VI构成，其中，指示剂区由下列结合成分组成：

指示剂区  结合成  分特异性

I         抗体    抗A(单克隆)

II        抗体    抗B(单克隆)

III       抗体    抗AB(单克隆)

IV        抗体    抗D(单克隆)

V         抗体    抗CDE(单克隆)

VI        抗体    抗红细胞(多克隆)

指示剂区VI为对照物(ctl)并含有多克隆红细胞抗体。它与其余所有指示剂区远侧设置。

图2示出图1所示依据本发明用于侧位流动检验的装置分体图，该装置由部件载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3和将涂覆区5与其余膜片分离的密封件4组成，其余膜片也包括从近位向远侧对角偏移设置的指示剂区I-VI。

图3举例示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图。在该实施例中，装置的部件与图1所示装置的部件相应，不同的是密封件4以三维的接片方式构成，固定在可渗透的膜片2上面。

图4示出图3所示依据本发明用于侧位流动检验的装置分体图，部件包括载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3和以三维接片方式构成的密封件4，密封件将涂覆区5与其余的膜片分离，后者也包括带有从近侧向远侧对角偏移设置的指示剂区I-VI的指示剂区6。

图5举例示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图。在该实施例中，装置的部件与图1所示装置的部件相应，不同的是密封件4以三维的槽方式构成，固定在可渗透的膜片2上面。

图6示出图5所示依据本发明用于侧位流动检验的装置分体图，部件包括载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3和以三维槽方式构成的密封件4，密封件将涂覆区5与其余的膜片分离，后者也包括带有从近侧向远侧对角偏移设置的指示剂区I-VI的指示剂区6。

图7举例示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D、C、c、E、e、Cw和K的侧位流动检验的装置透视图。在该实施例中，装置由载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3和以接片方式构成的二维密封件4组成。在此方面，可渗透的膜片2固定在具有压力敏感或自粘贴丙烯酸盐胶粘剂的载体层1上。吸附垫3同样固定在载体层1上，其中，一部分吸附垫3与可渗透的膜片2重叠。固定在可渗透膜片2上的密封件4将涂覆区5与其余的膜片表面分离，并可以使试样液体和检验试剂定向分布到可渗透的膜片2内。在涂覆区5和与吸附垫3接触的可渗透膜片2的区域之间设置指示剂区6。该指示剂区由对角偏移设置在确定的X-和Y-位置上的点状指示剂区I-XI构成，其中，指示剂区由下列结合成分组成：

指示剂区  结合成分  特异性

I         抗体      抗A(单克隆)

II        抗体      抗B(单克隆)

III       抗体      抗AB(单克隆)

IV        抗体      抗D(单克隆)

V         抗体      抗C(单克隆)

VI        抗体      抗c(单克隆)

VII       抗体      抗E(单克隆)

VIII      抗体      抗e(单克隆)

IX        抗体      抗Cw(单克隆)

X         抗体      抗K(单克隆)

XI        抗体      抗红细胞(多克隆)

指示剂区XI为对照物(ctl)并含有多克隆红细胞抗体。它与其余所有指示剂区远侧设置。

图8举例示出依据本发明作为用于受体和库存血ABO同一性检验构成的床侧检验的侧位流动检验装置的透视图。在该实施例中，装置由载体层1、双结构存在的可渗透膜片2a和2b、吸附垫3和以接片方式构成的二维密封件4a和4b组成。两个可渗透的膜片2a和2b平行和同方向固定在具有压力敏感或自粘贴丙烯酸盐胶粘剂的载体层1上。吸附垫3同样固定在载体层1上，其中，一部分吸附垫3与两个可渗透的膜片2以相同的距离重叠。固定在可渗透膜片2a和2b上的密封件4a和4b将各自的涂覆区5a和5b与其余的膜片表面分离，并可以使试样液体和检验试剂定向分布到可渗透的膜片2a和2b内。在涂覆区5a和5b和与吸附垫3接触的可渗透膜片2a和2b的各自区域之间设置指示剂区6a和6b。这些指示剂区由对角偏移设置在确定的X-和Y-位置上的点状指示剂区Ia-IIIa或Ib-IIIb构成，其中，指示剂区由下列结合成分组成：

指示剂区    结合成分  特异性

Ia、Ib      抗体      抗A(单克隆)

IIa、IIb    抗体      抗B(单克隆)

IIIa、IIIb  抗体      抗红细胞(多克隆)

指示剂区IIIa和IIIb为对照物(ctl)并含有多克隆红细胞抗体。它们与其余所有指示剂区远侧设置。

图9示出图8所示依据本发明用于侧位流动检验的装置分体图，部件包括载体层1、可渗透的膜片2a和2b、吸附垫3和密封件4a和4b，密封件各自将涂覆区5a和5b与其余的膜片分离，后者也包括带有从近侧向远侧对角偏移设置的指示剂区Ia-IIIa和Ib-IIIb的指示剂区6a或6b。

图10举例示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图。该实施例为一种右手的侧位流动检验装置，并由载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3和以接片方式构成的二维密封件4组成。在此方面，可渗透的膜片2固定在具有压力敏感或自粘贴丙烯酸盐胶粘剂的载体层1上。吸附垫3同样固定在载体层1上，其中，一部分吸附垫3与可渗透的膜片2重叠。固定在可渗透膜片2上面的密封件4将涂覆区5与其余的膜片表面分离，并可以使试样液体和检验试剂定向分布到可渗透的膜片2内。在涂覆区5和与吸附垫3接触的可渗透膜片2的区域之间设置指示剂区6。该指示剂区由平行并排设置在确定的X-和Y-位置上的点状指示剂区I-VI构成，其中，指示剂区由下列结合成分组成：

指示剂区  结合成分  特异性

I         抗体      抗A(单克隆)

II        抗体      抗B(单克隆)

III       抗体      抗AB(单克隆)

IV        抗体      抗D(单克隆)

V         抗体      抗CDE(单克隆)

VI        抗体      抗红细胞(多克隆)

指示剂区VI为对照物(ctl)并含有多克隆红细胞抗体。它与其余所有指示剂区远侧设置。

图11举例示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图。该实施例为一种左手的侧位流动检验装置，并由载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3和以接片方式构成的二维密封件4组成。在此方面，可渗透的膜片2固定在具有压力敏感域自粘贴丙烯酸盐胶粘剂的载体层1上。吸附垫3同样固定在载体层1上，其中，一部分吸附垫3与可渗透的膜片2重叠。固定在可渗透膜片2上面的密封件4将涂覆区5与其余的膜片表面分离，并可以使试样液体和检验试剂定向分布到可渗透的膜片2内。在涂覆区5和与吸附垫3接触的可渗透膜片2的区域之间设置指示剂区6。该指示剂区由平行并排设置在确定的X-和Y-位置上的点状指示剂区I-VI构成，其中，指示剂区由下列结合成分组成：

指示剂区  结合成分  特异性

I         抗体      抗A(单克隆)

II        抗体      抗B(单克隆)

III       抗体      抗AB(单克隆)

IV        抗体      抗D(单克隆)

V         抗体      抗CDE(单克隆)

VI        抗体      抗红细胞(多克隆)

指示剂区VI为对照物(ctl)并含有多克隆红细胞抗体。它与其余所有指示剂区远侧设置。

图12举例示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图。该实施例为一种右手的侧位流动检验装置，并由载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3和以接片方式构成的二维密封件4组成。在此方面，可渗透的膜片2固定在具有压力敏感或自粘贴丙烯酸盐胶粘剂的载体层1上。吸附垫3同样固定在载体层1上，其中，一部分吸附垫3与可渗透的膜片2重叠。固定在可渗透膜片2上面的密封件4将涂覆区5与其余的膜片表面分离，并可以使试样液体和检验试剂定向分布到可渗透的膜片2内。在涂覆区5和与吸附垫3接触的可渗透膜片2的区域之间设置指示剂区6。该指示剂区由平行并排设置在确定的X-和Y-位置上的带状指示剂区I-VI构成，其中，指示剂区由下列结合成分组成：

指示剂区 结合成分 特异性

I        抗体     抗A(单克隆)

II       抗体     抗B(单克隆)

III      抗体     抗AB(单克隆)

IV       抗体     抗D(单克隆)

V        抗体     抗CDE(单克隆)

VI       抗体     抗红细胞(多克隆)

指示剂区VI为对照物(ctl)并含有多克隆红细胞抗体。它与其余所有指示剂区远侧设置。

图13举例示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE的侧位流动检验的装置透视图。该实施例为一各左手的侧位流动检验装置，并由载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3和以接片方式构成的二维密封件4组成。在此方面，可渗透的膜片2固定在具有压力敏感或自粘贴丙烯酸盐胶粘剂的载体层1上。吸附垫3同样固定在载体层1上，其中，一部分吸附垫3与可渗透的膜片2重叠。固定在可渗透膜片2上面的密封件4将涂覆区5与其余的膜片表面分离，并可以使试样液体和检验试剂定向分布到可渗透的膜片2内。在涂覆区5和与吸附垫3接触的可渗透膜片2的区域之间设置指示剂区6。该指示剂区由平行并排偏移设置在确定的X-和Y-位置上的纵向延伸或点状指示剂区I-VI构成，其中，指示剂区由下列结合成分组成：

指示剂区     结合成分    特异性

I            抗体        抗A(单克隆)

II           抗体        抗B(单克隆)

III          抗体        抗AB(单克隆)

IV           抗体        抗D(单克隆)

V            抗体        抗CDE(单克隆)

VI           抗体        抗红细胞(多克隆)

指示剂区VI为对照物(ctl)并含有多克隆红细胞抗体。它与其余所有指示剂区远侧设置。

图14举例示出依据本发明用于同时鉴定血型特征A、B、AB、D和CDE采用双向流动的侧位流动检验的装置透视图。在该实施例中，装置由载体层1、可渗透膜片2、吸附垫3a和3b和以接片方式构成的二维密封件4a和4b组成。在此方面，可渗透的膜片2固定在具有压力敏感丙烯酸盐胶粘剂的载体层1上。吸附垫3a和3b同样固定在载体层1上，其中，一部分吸附垫3a和3b与可渗透的膜片2重叠。固定在可渗透膜片2上的密封件4a和4b将处于膜片中心的涂覆区5与其余的膜片表面分离，并可以使试样液体和检验试剂定向分布到可渗透的膜片2内。在涂覆区5和与吸附垫3a和3b接触的可渗透膜片2的区域之间设置指示剂区6a和6b。这些指示剂区由对角偏移设置在确定的X-和Y-位置上的点状指示剂区I-VI构成，其中，指示剂区由下列结合成分组成：

指示剂区  结合成分  特异性

I         抗体      抗A(单克隆)

II        抗体      抗B(单克隆)

III       抗体      抗AB(单克隆)

IV        抗体      抗D(单克隆)

V         抗体      抗CDE(单克隆)

VIa、VIb  抗体      抗红细胞(多克隆)

指示剂区VIa和VIb为对照物(ctl)并含有多克隆红细胞抗体。它们与指示剂区I-III或IV-V远侧设置。

图15示出图14所示依据本发明用于侧位流动检验采用双向流动的装置分体图，由部件载体层1、可渗透的膜片2、吸附垫3a和3b和密封件4a和4b组成，密封件将处于中心的涂覆区5与其余的膜片表面分离，这些膜片表面也包括具有从近侧向远侧对角偏移设置的指示剂区I、II、III、VIa或IV、VIb的指示剂区6a和6b.

实施例

实施例1：血型鉴定

制造检验条：

检验条由涂覆区、指示剂区和吸附区组成。将Millipore HiFlow Plus 065型膜片按6点结构15×35mm(宽/长；x/y)的尺寸或按11点结构26×40mm的尺寸裁剪成条并粘贴在载体层(例如G&L的Backing Sheet)上。在使用例如AD3200(Biodot)胶体溶液的情况下，对角偏移或者选择以线性列偏移在指示剂区内涂覆0.2μl点的不同血型专用单克隆抗体溶液：

Anti-A-Klon-Birma(血清，TLJ0105)；Anti-B-Klon-ES-4(血清，NCA0201)；Anti-AB-Klon-AB6、AB26、AB92(检查诊断，010062)；Anti-D-KlonLDM3(SNBTS，Z7180100)；Anti-C-KlonMS-24(血清，非处方或特定方法制备，KGK0212)；Anti-c-KlonMS-33(血清，KNI0207)；Anti-E-Klons MS-80+MS-258(血清，KXE0201)；Klons Anti-eMS-21+MS-63(血清，KLL0205+KQK0205)；Anti-Cw-KlonMS-110(血清，JPK0201)；Anti-K-Klon MS-56(血清，KOA0201)。

将抗A抗体在位置x＝3/y＝10mm的位置上定位。其他所有抗体以与抗A抗体位置x＝1.5/y＝2.2mm的距离叠代法配制。抗红细胞专用的对照抗体(Rabbit IgG Fraction of antiHuman RBC，Rockland，209-4139)以x＝2/y＝3.5mm与血型专用抗体的系列后点偏移涂覆。抗体在15mM磷酸钾缓冲剂pH7.5，10％(v/v)甲醇)中进行如下稀释：抗A抗体1:3、抗B抗体1:2、抗AB抗体1:4、抗D抗体1:4、抗RBC抗体1:3。其他所有抗体溶液不预先稀释，但掺入10％(v/v)的甲醇。

膜片在配制抗体后在40℃下干燥20分钟，随后在恒定的空气湿度下一直保存到进行检验。在与涂覆区远侧的末端上粘贴一个与膜片重叠3mm的15×10mm或26×10mm大的吸附垫(Schleicher&Schüll，300)。涂覆区通过在位置y＝5mm上粘贴1-2mm宽的粘贴条(Tesa 4124)在整个膜片宽度上与其余的膜片分开。

检验附着物：

作为血样使用抗凝结的全血浆。为本身的检验将100μl 1∶6在稀释缓冲剂(EnlisstII，检查诊断或者稀释剂1，SiaMed)稀释的血浆(6点结构)或150μl(11点结构)涂覆到涂覆区内。如果血浆离开涂覆区，一次将100μl或150μl稀释缓冲剂或者最好100μl低渗洗涤缓冲剂(15mM磷酸钾缓冲剂pH 7.4，0.3-0.45％(w/v)NaCI)滴到涂覆区上，以便将未结合的红细胞从膜片洗去。但也可以选择采用50μl1∶3稀释或者不稀释的血浆进行试样涂覆。在这种试样情况下，膜片两次利用稀释缓冲剂或一次利用稀释缓冲剂并随后利用低渗洗涤缓冲剂冲洗。

在所选择的1∶6稀释中，抗RBC对照物作为成功进行检验的指示剂在2分钟后可以看到。采用未稀释的血浆检验时间持续较长。

结果：

如果抗RBC对照物显示明显阳性的信号(红点)，那么检验有效.根据血型抗原的存在或者不存在，在相应位置上出现红点(阳性)或者膜片的几乎白色背景颜色(阴性).

实施例2：床侧检验

制造检验条：

床侧检验由各自两个固定在载体层(Backing Sheet)上的膜片(“库存血”、“受体”)组成，膜片分别由涂覆区、指示剂区和吸附区组成。

将Millipore HiFlow Plus 065型膜片按12.5×30mm(宽/长；x/y)的尺寸裁剪成条。其中各自两个以5mm的距离粘贴在载体层(例如G&L的Backing Sheet)上，从而全部组件的尺寸为30×30mm。

在使用例如AD3200(Biodot)胶体溶液的情况下，对角偏移在两个膜片上分别进行相同的下列涂覆：0.2μl点的单克隆抗体Anti-A-Klon-Birma-1(血清，TLJ0105)，位置x＝4/y＝12mm；Anti-B-Klon ES-4(血清，NCA0201)，位置x＝7/y＝14mm。抗红细胞专用的对照抗体(Rabbit IgG Fraction of anti Human RBC，Rockland，209-4139)以x＝3/y＝4mm与抗B点偏移涂覆。抗体在15mM磷酸钾缓冲剂pH 7.5，10％(v/v)甲醇)中进行如下稀释：抗A抗体1:3、抗B抗体1:2、抗RBC抗体1:3。

膜片在配制抗体后在40℃下干燥20分钟，随后在恒定的空气湿度下一直保存到进行检验。在与涂覆区远侧的末端上粘贴一个与两个膜片重叠3mm的30×10mm大的吸附垫(Schleicher&Schüll，300)。涂覆区通过在各自检验条的位置y＝5mm上粘贴1-2mm宽的粘贴条(Tesa 4124)在整个膜片宽度上与其余的膜片分开。

检验附着物：

作为血样使用：为“库存血”膜片：红细胞浓缩物；为“受体”膜片：全血浆。

为本身的检验将50μl全血浆在“受体”的面上并将50μl红细胞浓缩物在“库存血”的面上涂覆到各自的涂覆区内。在血浆由膜片完全吸收后，利用各自2×100μl的稀释缓冲剂或一次利用稀释缓冲剂并随后利用低渗洗涤缓冲剂冲洗。

结果：

作为成功进行检验指示剂的抗RBC对照物在两个膜片上约2分钟后可以看到。

如果抗RBC对照物显示明显阳性的信号(红点)，那么检验有效。根据各自血型抗原的存在或者不存在，在相应位置上出现红点(阳性)或者膜片的几乎白色背景颜色(阴性)。“受体”和“库存血”的同一图形表示受体和库存血之间的ABO同一性。

实施例3：利用双向流动的侧位流动检验进行血型鉴定

制造检验条：

检验条由一个处于膜片中心的涂覆区、两个指示剂区和两个吸附区组成。将MilliporeHiFlow Plus 065型膜片按15×50mm(宽/长；x/y)的尺寸裁剪成条并粘贴在载体层(例如G&L的Backing Sheet)上。对角偏移或者选择以线性列偏移在指示剂区内涂覆0.2μl点的不同血型专用单克隆抗体溶液。在此方面，条长度(y＝0mm)的中心为指示剂区在y方向上定位的参照尺寸。将下列抗体在使用例如AD3200(Biodot)胶体溶液的情况下进行配制：

Anti-A-Klon-Birma-1(血清，TLJ0105)；Anti-B-Klon ES-4(血清，NCA0201)；Anti-AB-Klon-AB6、AB26、AB92(检查诊断，010062)；Anti-D-KlonLDM3(SNBTS，Z7180100)；Anti-C-Klon MS-24(血清，非处方或特定方法制备，KGK0212)；Anti-E-KloneMS-80+MS-258(血清，KXE0201).为抗CDE指示剂区两倍浓缩抗D和抗C抗体，三倍浓缩抗E抗体并以相同的体积分量混合.

在指示剂区对角偏移的实施方式中，抗A抗体在位置x＝4/y＝10mm的位置上进行配制。抗B和抗AB抗体的位置以与抗A抗体位置x＝3.5/y＝2mm的距离叠代法配制。抗红细胞专用的对照抗体(Rabbit IgG Fraction of anti Human RBC，Rockland，209-4139)以x＝3.5/y＝3.5mm与抗A、抗B和抗AB抗体的系列后点偏移涂覆。抗D抗体在位置x＝4/y＝-10mm上配制，抗CDE抗体在距离x＝3.5/y＝-2mm的距离上配制。抗红细胞专用的对照抗体以x＝3.5/y＝-3.5mm与抗CDE抗体的点偏移涂覆。抗体在15mM磷酸钾缓冲剂pH7.5，10％(v/v)甲醇)中进行如下稀释：抗A抗体1:3、抗B抗体1:2、抗AB抗体1:4、抗D抗体1:3、抗RBC抗体1:3。抗CDE抗体混合液不预先稀释，但掺入10％(v/v)的甲醇。

膜片在配制抗体后在40℃下干燥20分钟，随后在恒定的空气湿度下一直保存到进行检验。在膜片与涂覆区远侧的末端上粘贴两个与膜片重叠3mm的15×10mm大的吸附垫(Schleicher&Schüll，300)。涂覆区通过在位置y＝3mm或y＝-3mm上粘贴两个1-2mm宽的粘贴条(Tesa4124)在整个膜片宽度上与其余的膜片分开。

检验附着物：

作为血样使用抗凝结的全血浆。为本身的检验将100μl 1∶6在稀释缓冲剂(EnlisstII，检查诊断)稀释的血浆涂覆到涂覆区内。如果血浆离开涂覆区，一次将100μl稀释缓冲剂或者100μl低渗洗涤缓冲剂(15mM磷酸钾缓冲剂pH 7.4，0.3-0.45％(w/v)NaCI)滴到涂覆区上，以便将未结合的红细胞从膜片洗去。但也可以选择采用50μl1∶3稀释或者不稀释的血浆进行试样涂覆。在这种试样情况下，膜片两次利用稀释缓冲剂或一次利用稀释缓冲剂并随后利用低渗洗涤缓冲剂冲洗。

在所选择的1∶6稀释中，抗RBC对照物作为成功进行检验的指示剂在2分钟后可以看到。采用未稀释的血浆检验时间持续较长。

结果：

如果抗RBC对照物显示明显阳性的信号(红点)，那么检验有效。根据各自血型抗原的存在或者不存在，在相应位置上出现红点(阳性)或者膜片的几乎白色背景颜色(阴性)。

Claims (20)

1.一种用于在一种液体试样中同时定性或者定量鉴定多种分析物的装置，该装置包括一膜片(2)并具有：

-用于涂覆液体试样的一涂覆区(5)；

-至少两个可与单个和/或者这些分析物相互作用的指示剂区；以及

-至少一个吸附通过指示剂区后的液体的吸附区(3)，

其中，指示剂区处于涂覆区(5)和吸附区(3)之间，

其特征在于，流动痕迹从涂覆区(5)经过各自的指示剂区到吸附区(3)而平行并存在至少两种不同的流动痕迹，诸指示剂区被设置成使每个流动痕迹的试样液体不会流经一个以上的指示剂区。

2.按权利要求1所述的装置，其特征在于，诸指示剂区以对角的、V形、W形、M形、N形或者线性列设置。

3.按权利要求1或2所述的装置，其特征在于，诸指示剂区包括抗体或抗体碎片和/或者其中的植物血凝素或碎片。

4.按权利要求1或2所述的装置，其特征在于，诸指示剂区包括抗A、抗B、抗AB、抗D、抗D、抗C、抗c、抗E、抗e、抗Cw和/或者抗K-抗体或抗体碎片。

5.按权利要求1或2所述的装置，其特征在于，膜片(2)由聚乙烯、硝化纤维或者聚酰胺组成。

6.按权利要求1或2所述的装置，其特征在于，在涂覆区(5)后面和指示剂区前面在膜片(2)上设置至少一个密封件(4)。

7.按权利要求6所述的装置，其特征在于，该装置的各部分被机械加固安装在载体层(1)上。

8.按权利要求6所述的装置，其特征在于，该装置的诸部分与外壳一体化。

9.按权利要求1至8中之一所述的装置在分析血浆上的应用，用于鉴定血型抗原或血型抗原的抗原决定簇。

10.按权利要求9所述的应用，其特征在于，所述装置是用于同时鉴定A-、B-、AB-、D-、C-、c-、E-、e-、Cw-和/或者K-血型抗原或血型抗原的抗原决定簇。

11.一种用于在一种液体试样中鉴定多种分析物或其衍生物的方法，该方法包括以下步骤：将试样涂覆在按权利要求1至8中之一所述装置的膜片(2)的涂覆区(5)上，其中，该试样以足够的量存在，以便使试样液体在吸附区(3)的方向上流过指示剂区并使试样液体内的分析物或其衍生物在指示剂区内形成复合体。

12.按权利要求11所述的方法，其特征在于，分析物为血型抗原或血型抗原的抗原决定簇。

13.按权利要求11或12所述的方法，其特征在于，分析物包括A-、B-、AB-、D-、C-、c-、E-、e-、Cw-和/或者K-血型抗原或血型抗原的抗原决定簇。

14.按权利要求13所述的方法，其特征在于，分析物A-、B-、AB-、D-、C-、c-、E-、e-、Cw-和/或者K-血型抗原或血型抗原的抗原决定簇同时得到确定。

15.按权利要求11或12所述的方法，其特征在于，指示剂粒子为红细胞。

16.按权利要求11或12所述的方法，其特征在于，膜片(2)在涂覆指示剂粒子后被冲洗。

17.按权利要求16所述的方法，其特征在于，洗涤缓冲剂为低渗的。

18.按权利要求11或12所述的方法，其特征在于，液体试样由血浆或者血浆成分组成。

19.按权利要求18所述的方法，其特征在于，液体试样由全血浆、红细胞浓缩物或者试样液体组成。

20.按权利要求19所述的方法，其特征在于，所述试样液体为对照血浆。

Images