CN1813782A

CN1813782A - 一种银杏达莫组合物、含有该组合物的药物及其制备方法

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Publication number: CN1813782A
Application number: CN 200510125674
Authority: CN
Inventors: 郭东宇
Original assignee: Guoyu Interllectural Property Right Research Co Ltd Xiamen
Current assignee: Guoyu Interllectural Property Right Research Co Ltd Xiamen
Priority date: 2005-12-02
Filing date: 2005-12-02
Publication date: 2006-08-09
Anticipated expiration: 2025-12-02
Also published as: CN1813782B

Abstract

本发明公开了一种新的银杏达莫组合物、由其制备的药物组合物，特别是注射剂及它们的制备方法。该银杏达莫组合物主要含有以下重量百分比的各成分：银杏总黄酮醇苷18～65％，双嘧达莫6～32％，银杏总内酯4～25％，重金属含量低于9.4ppm(重量)；其中，银杏总内酯由下述重量比例的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C组成：4～40∶7～40∶3～30∶3～40。本发明银杏达莫组合物不仅有效成分含量高，而且所含的银杏酚类物质(例如银杏酸)、蛋白质、鞣质、热源物质等杂质总量低于20ppm(重量)，由此制备得到的药物制剂，尤其是注射剂，对心脑血管疾病疗效显著，临床使用安全，不会产生注射疼痛，热源反应等副作用。

Description

一种银杏达莫组合物、含有该组合物的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，尤其涉及一种含有银杏总黄酮醇苷、双嘧达莫、银杏总内酯(以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计)的银杏达莫组合物，由该药物组合物所制备的制剂及其制备方法，属于中药领域。

背景技术

银杏叶具有改善心脑血管循环，提供记忆力，清除氧自由基，延缓衰老的作用，具有治疗和保健的双重功效。由银杏叶制备的注射液在临床中使用多年，取得了很好的效果。其主要活性成分为银杏总黄酮醇苷和银杏总内酯，银杏总内酯主要包括银杏内酯A、B、C、M和J以及白果内酯等，在银杏内酯A、B和C中以银杏内酯B活性为最高，银杏内酯A与其具有协同作用。而现有技术中的银杏叶注射液仅控制银杏总黄酮的含量，并未控制其中银杏内酯的含量，尤其没有控制白果内酯、银杏内酯A、B和C的比例，以及它们与总黄酮醇苷的比例，因此在治疗疾病时难以取得令人满意的疗效。此外，近年来，将银杏叶提取物与双嘧达莫制备成的复方制剂也已陆续上市，例如CN1454596A公开了一种银杏叶提取物与双嘧达莫复方静脉滴注液，其中每50至500毫升静脉滴注液中含有银杏总黄酮4至30毫克，双嘧达莫1.5至15毫克，由于该静脉滴注液中银杏内酯和总黄酮醇苷含量不高，且未控制银杏内酯各成分间的比例，所以该复方制剂难以取得令人满意的疗效，在临床上应用价值不高。同样的问题也存在于CN1176656C公开的银杏叶提取物与双嘧达莫的冻干粉针剂中，由于有效成分含量相对较低，也同样难以取得令人满意的疗效，而且该制剂中杂质(银杏酸、重金属等)等含量没有得到有效控制，所得药物制剂安全性和稳定性均较差，由于杂质含量较高，毒副作用较大，注射时容易发生过敏、注射疼痛等不良反应。

因此，一直需要制备疗效更高、稳定性和安全性更好，毒副作用小的银杏双嘧达莫复方制剂。

发明内容

本发明人经过深入研究，最终发现不同比例的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C在治疗疾病时具有不同的效果，尤其是当它们与银杏总黄酮醇苷以不同比例配制成组合物后，具有明显不同的治疗效果，并发现一些特定比例的组合物具有令人意想不到突出有益效果，不仅可以大大提高治疗效果，而且其毒副作用也有显著的降低，在此发现的基础上完成了本发明。

本发明所要解决的第一个技术问题是克服现有技术的不足，提供一种新的银杏达莫组合物，该银杏达莫组合物不仅银杏总黄酮醇苷物质含量高，而且双嘧达莫、银杏总内酯(以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计)的含量也高。

本发明所要解决的第一个技术问题是通过以下技术途径来实现的：

一种银杏达莫组合物，该组合物中含有以下重量百分比的各组分：银杏总黄酮醇苷18～65％，双嘧达莫6～32％，银杏总内酯4～25％；其中，所述的银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照4～40∶7～40∶3～30∶3～40的重量比例组成；该组合物的重金属含量低于9.4ppm。

优选的，各组分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷20～40％，双嘧达莫8～18％，银杏总内酯7～20％；其中，银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照8～40∶7～30∶4～20∶5～28的重量比例组成。

进一步优选的，各组分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷22～36％，双嘧达莫9～16％，银杏总内酯8～18％。

再进一步优选的，各组分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷24～32％，双嘧达莫10～15％，银杏总内酯8～13％，其中，银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照10～40∶7～25∶4～18∶5～26的重量比例组成。

更优选的，各组分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷26～32％，双嘧达莫10～12％，银杏总内酯8～12％，其中，银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照10～35∶10～20∶4～15∶5～25的重量比例组成。

最优选的，各组分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷28～32％，双嘧达莫10～12％，银杏总内酯8～12％；其中，银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照20～32∶12～20∶4～10∶6～24的重量比例组成。

此外，本发明组合物中杂质银杏酚酸类物质(例如银杏酸)、蛋白质、鞣质、热源物质等含量低于20ppm，其疗效比现有的银杏叶提取物和银杏达莫复方制剂具有令人意想不到的显著的提高，而且由于控制其中重金属含量以及其它杂质(银杏酸、蛋白质等)的含量在ppm级水平，本发明组合物的稳定性和安全性大大提高，注射时不会发生注射疼痛和过敏反应，便于临床使用，因此完成了本发明。

本发明中的总黄酮醇苷主要是指槲皮素苷，山奈酚苷和异鼠李素苷，其测定方法按照中国药典2000年版的高效液相色谱法进行。同样，银杏内酯的含量也是按照中国药典2000年版的高效液相色谱法进行的。本发明中的银杏总内酯也叫银杏萜类内酯或银杏内酯、银杏总萜类内酯。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种制备上述银杏达莫组合物的方法。

本发明所要解决的第二个技术问题是通过以下技术途径来实现的：

一种制备上述银杏达莫组合物的方法，包括：按照以下重量百分比称取各组分：银杏总黄酮醇苷18～65％，双嘧达莫6～32％，银杏总内酯4～25％；其中，所述的银杏总内酯由白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)和银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)按照4～40∶7～40∶3～30∶3～40的重量比例组成；将上述各组分混合均匀即得。

组合物中的各组分可以市售得到，也可以通过已知方法制备。可以通过将市售的各组分按上述配比进行充分混合后制备得到所述组合物。当以已知方法制备各组分，尤其是从银杏叶提取银杏总黄酮醇苷和银杏内酯时，银杏提取物中除含有上述比例的银杏黄酮醇苷和银杏内酯外，还可能含有从银杏中提取得到的其它有效成分，例如黄酮甙元，山奈酚等，这些有效成分不会影响本发明效果，这时的组合物中由于还含有其它成分，因此上述三种成分的含量之和低于100％，但这些组合物也在本发明的保护范围内。

有关银杏叶提取物的制备方法，可以根据本发明人在先申请公开的方法进行，例如按照公开号为CN1193753C中所公开的方法制备银杏总黄酮醇苷，白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)等。也可以通过下列方法制备得到含有银杏总黄酮醇苷和银杏总内酯的银杏叶提取物，然后将银杏叶提取物与双嘧达莫混合后得到所述银杏达莫组合物。

作为参考，上述银杏叶提取物可按照以下方法制备而成：

1)、银杏叶粉碎后，加60～95％乙醇回流提取1-5次，每次回流提取时间1-3小时，每次加入的乙醇量为银杏叶重量的5-10倍，过滤将滤液浓缩至银杏叶重量的0.3～0.8倍，冷藏3～24小时；

2)、刮去浮油，将刮出的浮油，每次加银杏叶重量的0.03～0.1倍的注射用水，搅拌洗涤1～5次，将洗涤液和浓缩液合并后，加注射用水至银杏叶重量的1～3倍，冷藏16～84小时，过滤，滤液减压浓缩至银杏叶重量的0.2～0.5倍，放至室温，加85％～95％乙醇，使含醇至80％；

3)、将醇沉后的溶液依次进行冷藏、过滤和浓缩并重复进行1～5次；

4)、浓缩后的滤液用阳离子树脂吸附2～8次，控制pH值至1～3，再用阴离子树脂吸附1～5次，控制pH值至2～5，将吸附液过滤并减压浓缩至银杏叶重量的0.2～0.5倍，放至室温，加85％～95％乙醇使含醇量至80％～84％，冷藏16～84小时，过滤减压回收乙醇浓缩至银杏叶重量的0.1～0.5倍，放至室温，加水至银杏叶重量的0.6～2倍，冷藏16-48小时，过滤备用；

5)、分离水层与有机层，有机层回收溶剂，水层浓缩后即得银杏叶提取物。

本发明所要解决的第三个技术问题是提供一种银杏达莫药物组合物。

本发明所要解决的第三个技术问题是通过以下技术途径来实现的：

一种银杏达莫药物组合物，由上述银杏达莫组合物与药用载体或稀释剂组成，该药物组合物中含有(以重量计)18～65％的总黄酮醇苷(优选20-40％，更优选22～36％，进一步优选26～32％，最优选28～32％)、6～32％的双嘧达莫(优选8～18％，更优选9～16％，进一步优选10～15％，最优选10～12％)、4～25％的银杏总内酯(优选7～20％，更优选8～18％，进一步优选8～13％，最优选8～12％)，且银杏总内酯由下述重量比例的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C组成：4～40∶7～40∶3～30∶3～40(优选8～40∶7～30∶4～20∶5～28，更优选10～40∶7～25∶4～18∶5～26，进一步优选10～35∶10～20∶4～15∶5～25，最优选20～32∶12～20∶4～10∶6～24)，余量为药用载体或稀释剂；该药物组合物中重金属含量低于9.4ppm。

上述银杏达莫药物组合物可以为注射剂、冻干粉针剂、大输液、片剂、胶囊、颗粒剂、口服液形式，优选为注射剂。

上述药物组合物中的药用载体或稀释剂可以根据需要从中国药典规定的可以药用的载体、赋形剂中选择。例如可以为吐温-20，吐温-80，聚乙二醇，聚氧乙烯蓖麻油，蓖麻油，聚乙烯吡咯烷酮，甲基纤维素，羟甲基纤维素，泊洛沙姆，滑石粉，淀粉，羟丙基-β-环糊精等中的一种或多种的混合物。

当上述药物组合物是注射剂形式时，上述药物组合物中还可以含有焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸，维生素C、硫代硫酸钠，EDTA及其金属盐，碳酸钠等碱金属碳酸盐，磷酸等酸类以及各种氨基酸等。同时还可以含有氯化钠、氯化钾，乳酸钠，木糖醇，山梨醇，麦芽糖，果糖，右旋糖苷等渗透压调节剂。此外该注射剂中还可以含有助溶剂，分散剂，pH调节剂等。

此外，可以根据需要将本发明的银杏双嘧达莫药物组合物制备成缓释制剂。例如，可以将银杏叶有效成分和双嘧达莫用羟丙甲基纤维素作为亲水性骨架材料，乳糖、糊精作为稀释剂，乙醇作为粘合剂，滑石粉作为润滑剂制成片芯，然后用明胶和单糖浆进行包衣，最后再进行薄膜包衣制成缓释制剂，如缓释片等。

在上述基础上，本发明人进一步完成了下述发明目的：由上述银杏达莫药物组合物制备的注射剂。

具体而言，本发明还提供了一种银杏达莫注射剂，其特征在于每1m1该注射剂含有银杏总黄酮醇苷为0.70～2.275mg(优选0.7～1.4mg，更优选0.77～1.26mg，进一步优选为0.84～1.12mg，再优选为0.91～1.12mg，最优选为1.07mg)，双嘧达莫为0.21～1.12mg(优选为0.28～0.63mg，更优选为0.315～0.56mg，进一步优选为0.35～0.525mg，再优选为0.36～0.44mg，最优选为0.42mg)，银杏总内酯为0.14～0.875mg(优选为0.245～0.70mg，更优选为0.28～0.63mg，进一步优选为0.28～0.455mg，再优选0.28～0.42mg，最优选为0.31mg)；，其中银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照4～40∶7～40∶3～30∶3～40(优选8～40∶7～30∶4～20∶5～28；更优选10～40∶7～25∶4～18∶5～26；进一步优选10～35∶10～20∶4～15∶5～25；再优选20～32∶12～20∶4～10∶6～24；最优选25∶13∶7∶6)的重量比组成；该注射剂重金属含量低于9.4ppm。

本发明的银杏双嘧达莫注射剂的pH值为3.5～7.5，优选为4.0～7.0，最优选为4.5～5.5。

本发明的注射剂优选为冻干粉针剂。

本发明涉及一种制备银杏达莫注射剂的方法，包括：向银杏达莫组合物和/或药用载体中加入注射用水到需要量，使其中各成分比例达到所述含量，灌装，灭菌制成。

本发明还涉及银杏达莫组合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的用途。

本发明银杏达莫组合物不仅总黄酮醇苷和银杏总内酯(银杏总内酯由白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)，银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)，银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)和银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)组成)含量高，而且含有西药双嘧达莫成份；且含银杏酚、蛋白质、鞣质等杂质低于20ppm，重金属含量低于9.4ppm，非常有利于制备成药物制剂使用，尤其适合用于制备要求极高的注射剂，由于有效成分含量高，含杂质低(所含的银杏酚类物质(例如银杏酸)、蛋白质、鞣质、热源物质等杂质低于20ppm)，由此制备得到的注射剂疗效确切，不会引起注射疼痛，也不会引起热源反应。

银杏达莫组合物中白果内酯、银杏内酯A、B和C的比例直接影响到临床治疗效果(见表3)，本发明银杏达莫组合物的白果内酯、银杏内酯A、B和C的比例为4～40∶7～40∶3～30∶3～40，在此比例范围内，各有效成分的协同作用能发挥到最佳，从而使得本发明银杏叶提取物所制备的注射液与阳性对照药物相比具有更好的临床疗效。

通过本发明方法制备得到的银杏达莫组合物∶不仅总黄酮醇苷和银杏总内酯含量高，含有西药双嘧达莫成份，而且白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比为4～40∶7～40∶3～30∶3～40；含银杏酚类物质(例如银杏酸)、蛋白质、鞣质、热源物质等杂质低于20ppm，重金属含量不超过9.4ppm(按照中国药典2000版标准进行检查)。由此制备得到的药物制剂特别有利于临床使用，尤其是由此制备的注射液在临床使用中不会引起注射疼痛，热源反应等。

另外，本发明的银杏达莫组合物注射剂可以制备成冻干粉针剂形式，该冻干粉针在注射用水，葡萄糖注射液及氯化钠注射液等溶剂中可以速溶，不需要使用特殊的溶剂或助溶剂，且溶液澄清，不发生沉淀。且稳定性好，有效期长，储存运输方便。

将本发明产品进行稳定性考察，结果经过一年后，本发明产品有效成分未降低，各种检查均符合国家药品标准要求。

将本发明注射液与市售银杏达莫注射液(杏丁注射液：批号20021104，生产厂家：贵州益佰制药)的治疗心血管疾病的疗效进行了对比分析，其结果见表1。试验结果说明，本发明银杏达莫组合物注射液的总体疗效要明显高于市售银杏叶注射液的总体疗效，且未发现明显不良反应，其安全性也明显优于市售银杏叶注射液。

表1本发明银杏达莫组合物注射液与对照样品(市售银杏达莫注射液)的疗效试验结果对比

	本发明生产的银杏达莫组合物注射液	对照样品
	本发明生产的银杏达莫组合物注射液	对照样品	临床使用评价	总有效率85.8％	总有效率67.6％
临床不良反应评价	未发现明显不良反应	明显不良反应发生率1.83％	临床使用评价	总有效率85.8％	总有效率67.6％

本发明产品经动物试验，证明对血管无刺激性，也未出现过敏反应。经动物急性毒性试验证明毒性小，非常有利于临床使用。

以下通过实施例来进一步描述本发明的有益效果，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的范围。

具体实施方式

实施例1银杏达莫组合物的制备方法

取干燥银杏叶10kg，用粉碎机粉碎成粗粉，加90％乙醇6000ml回流提取6小时，过滤，将残渣用同样的方法再萃取2次，过滤，合并滤液，加碳酸氢钠水溶液调pH至10，静置6小时，过滤，滤液加稀盐酸调pH至5，将滤液浓缩，在浓缩物中加入1500ml蒸馏水并加热至75℃，搅拌下在此温度保持10分钟，将水提液冷藏(0～4℃)过夜，过滤，将滤液上大孔吸附树脂，控制流速至水流尽后，用30～50％乙醇梯度洗脱至流出液无色，将50％乙醇的洗脱液用正己烷∶丙酮(38∶1)混合溶剂萃取两次，分离水层与有机层，有机层回收溶剂，浓缩干燥，即得银杏叶提取物300g。按需要比例加入双嘧达莫41g，加入乙醇，均匀湿润，再装入渗漉器中，乙醇加至高出药物面，放置一段时间后进行渗漉。收集渗漉液，低温减压浓缩至膏稠状，继续浓缩至所需量。把膏稠状物放入干燥箱中干燥，脱水，放入遮光容器中密闭储存，即得银杏达莫组合物320g。

经检测，本实施例所制备的银杏达莫组合物中各成分的重量百分含量如下：总黄酮醇苷30.2％，双嘧达莫12％银杏总内酯(以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计)10.4％(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为25∶13∶7∶6)，重金属含量8.8ppm。

实施例2银杏达莫组合物的制备

取新鲜银杏叶10kg，用打浆机粉碎成糊，加5000ml 75％乙醇回流提取5小时，过滤，将残渣用同样的方法再萃取3次，过滤，合并滤液，加饱和石灰水调pH至9，静置6小时，过滤，滤液加稀盐酸调pH至5.5，将滤液浓缩，在浓缩物中加入水并加热至70℃，搅拌下在此温度保持30分钟，将水提液冷藏(0～4℃)过夜，过滤，将滤液上大孔吸附树脂，控制流速至水流尽后，用30～50％乙醇梯度洗脱至流出液无色，将50％乙醇的洗脱液用正己烷∶丙酮(35∶1)混合溶剂萃取两次，分离水层与有机层，有机层回收溶剂，浓缩干燥，即得银杏叶提取物500g。按需要比例加入双嘧达莫70g，加入乙醇，均匀湿润，再装入渗漉器中，乙醇加至高出药物面，放置一段时间后进行渗漉。收集渗漉液，低温减压浓缩至膏稠状，继续浓缩至所需量。把膏稠状物放入干燥箱中干燥，脱水，放入遮光容器中密闭储存，即得银杏达莫组合物530g。

经检测，本实施例所制备的银杏达莫组合物中各成分的重量百分含量如下：总黄酮醇苷42.2％，双嘧达莫12.3％银杏总内酯(以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计)18.4％(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为23∶14∶16∶37)，重金属含量8.8ppm。

实施例3银杏达莫组合物的制备

银杏叶提取物(购自海南至程医药贸易有限公司)(含银杏总黄酮醇苷33％，银杏总内酯11％)900g，双嘧达莫100g。

精确称取以上重量原料，粉碎、混匀、加入乙醇，均匀湿润，再装入渗漉器中，乙醇加至高出药物面，放置一段时间后进行渗漉。收集渗漉液，低温减压浓缩至膏稠状，继续浓缩至所需量。把膏稠状物放入干燥箱中干燥，脱水，放入遮光容器中密闭储存，即得银杏达莫组合物。

经检测，本实施例所制备的银杏达莫组合物中各成分的重量百分含量如下：总黄酮醇苷29.7％，双嘧达莫10％银杏总内酯(以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计)9.9％(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为6∶12∶7∶6)，重金属含量8.8ppm。

实施例4银杏达莫组合物的制备

银杏叶提取物(购自海南至程医药贸易有限公司)(其中含银杏总黄酮醇苷30％，银杏总内酯12％)900g，双嘧达莫100g。

经检测，本实施例所制备的银杏达莫组合物中各成分的重量百分含量如下：总黄酮醇苷27％，双嘧达莫10％银杏总内酯(以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计)10.8％(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为4∶9∶6∶6)，重金属含量8.8ppm。

实施例5银杏达莫组合物的制备

银杏总黄酮醇苷 0.55kg

双嘧达莫 0.20kg

银杏总内酯025g[其中，含白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)0.067kg，银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)0.066kg，银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)0.050kg，银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)0.067kg]；

精确称取以上重量原料(上述原料均购自海南至程医药贸易有限公司)，粉碎、混匀、加入乙醇，均匀湿润，再装入渗漉器中，乙醇加至高出药物面，放置一段时间后进行渗漉。收集渗漉液，低温减压浓缩至膏稠状，继续浓缩至所需量。把膏稠状物放入干燥箱中干燥，脱水，放入遮光容器中密闭储存，即得银杏达莫组合物0.98kg。

经检测，本实施例所制备的银杏达莫组合物中各成分的重量百分含量如下：总黄酮醇苷55％，双嘧达莫20％银杏总内酯(以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计)25％(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为40∶40∶30∶40)，重金属含量8.6ppm。

实施例6银杏达莫组合物的制备

银杏总黄酮醇苷 0.60kg

双嘧达莫 0.32kg

银杏总内酯0.08kg[其中，含白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)0.019kg，银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)0.033kg，银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)0.014kg，银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)0.014kg]；

经检测，本实施例所制备的银杏达莫组合物中各成分的重量百分含量如下：总黄酮醇苷60％，双嘧达莫32％银杏总内酯(以白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的总量计)8％(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为4∶7∶3∶3)，重金属含量8.6ppm。

实施例7银杏达莫组合物注射液的制备方法

取实施例1的银杏达莫组合物220g，放入搅拌器中，加入注射用水，搅拌溶解，补加注射用水稀释至每1ml含有银杏总黄酮醇苷为1.05mg，双嘧达莫为0.42mg，银杏总内酯以白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的总量计为0.36mg，(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为25∶13∶7∶6)。溶解完全，用葡甲胺调节pH值为5，过滤，灌装安瓿瓶中，灭菌，即得银杏达莫组合物注射液。

本实施例所制备的注射液各成分含量的检测结果见表2。

表2本发明注射液各成分含量的检测结果

成分或检查项目	本发明实施例7所制备的银杏达莫组合物注射液	本发明实施例8所制备的银杏达莫组合物注射液	本发明实施例9所制备的银杏达莫组合物冻干注射剂
成分或检查项目	本发明实施例7所制备的银杏达莫组合物注射液	本发明实施例8所制备的银杏达莫组合物注射液	本发明实施例9所制备的银杏达莫组合物冻干注射剂	总黄酮醇苷(mg/ml)	1.05	1.925	1.05
双嘧达莫(mg/ml)	0.42	0.70	0.42	总黄酮醇苷(mg/ml)	1.05	1.925	1.05
双嘧达莫(mg/ml)	0.42	0.70	0.42	银杏总内酯(mg/ml)	0.36	0.875	0.36
白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例	25∶13∶7∶6	40∶40∶30∶40	24∶13∶15∶37	银杏总内酯(mg/ml)	0.36	0.875	0.36
白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例	25∶13∶7∶6	40∶40∶30∶40	24∶13∶15∶37	蛋白质检查	不混浊	不混浊	不混浊
鞣质检查	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀	蛋白质检查	不混浊	不混浊	不混浊
鞣质检查	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀	银杏酚检查	相应位置无斑点	相应位置无斑点	相应位置无斑点
重金属(ppm)	8.8	8.6	8.6	银杏酚检查	相应位置无斑点	相应位置无斑点	相应位置无斑点

实施例8银杏达莫组合物注射液的制备

取实施例5的银杏达莫组合物500g，放入搅拌器中，加入氯化钠注射用水，搅拌溶解，补加注射用水稀释至每1ml含有银杏总黄酮醇苷为1.925mg，双嘧达莫为0.70mg，银杏总内酯以白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的总量计为0.875mg，(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为40∶40∶30∶40)。溶解完全，用葡甲胺调节pH值为5，过滤，灌装安瓿瓶中，灭菌，即得银杏达莫组合物注射液。

本实施例所制备的注射液各成分含量的检测结果见表2。

实施例9银杏达莫组合物冻干粉针剂的制备

取实施例1的银杏达莫组合物200g，放入搅拌器中，加入注射用水，搅拌溶解完全，补加注射用水稀释至每1ml含有银杏总黄酮醇苷为1.05mg，双嘧达莫为0.42mg，银杏总内酯以白果内酯(C₁₅H₁₉O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的总量计为0.36mg。加入甘露醇，用葡甲胺调节PH值为5，过滤减压浓缩，无菌过滤，灌装于玻璃安瓿瓶中，冷却干燥，即得银杏达莫组合物冻干粉针剂。

本实施例所制备的注射液各成分含量的检测结果见表2。

实施例10银杏达莫注射剂的制备

取实施例5制备的银杏达莫组合物(含银杏总黄酮醇苷55％、双嘧达莫20％、银杏总内酯25％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为40∶40∶30∶40))100g，放入搅拌器中，加入氯化钠注射用水，搅拌溶解，补加注射用水稀释至每1ml含有银杏总黄酮醇苷为1.925mg，双嘧达莫为0.70mg，银杏总内酯以白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的总量计为0.875mg，(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为40∶40∶30∶40)。溶解完全，用葡甲胺调节pH值为5，过滤，灌装安瓿瓶中，灭菌，即得银杏达莫组合物注射液。

实施例11银杏达莫注射剂的制备

取实施例4制备的银杏达莫组合物(含银杏总黄酮醇苷27％、双嘧达莫10％、银杏总内酯10.8％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为4∶9∶6∶6))100g，放入搅拌器中，加入氯化钠注射用水，搅拌溶解，补加注射用水稀释至每1ml含有银杏总黄酮醇苷为0.945mg，双嘧达莫为0.35mg，银杏总内酯以白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的总量计为0.378mg，(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为4∶9∶6∶6)。溶解完全，用葡甲胺调节pH值为6，过滤，灌装安瓿瓶中，灭菌，即得银杏达莫组合物注射液。

实施例12银杏达莫注射剂的制备

取实施例1制备的银杏达莫组合物(含银杏总黄酮醇苷30.2％、双嘧达莫12％、银杏总内酯10.4％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为25∶13∶7∶6))100g，放入搅拌器中，加入氯化钠注射用水，搅拌溶解，补加注射用水稀释至每1ml含有银杏总黄酮醇苷为1.057mg，双嘧达莫为0.42mg，银杏总内酯以白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的总量计为0.364mg，(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为25∶13∶7∶6)。溶解完全，用葡甲胺调节pH值为7，过滤，灌装安瓿瓶中，灭菌，即得银杏达莫组合物注射液。

实施例13银杏达莫注射剂的制备

取实施例6制备的银杏达莫组合物(含银杏总黄酮醇苷60％、双嘧达莫32％、银杏总内酯8％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为4∶7∶3∶3))100g，放入搅拌器中，加入氯化钠注射用水，搅拌溶解，补加注射用水稀释至每1ml含有银杏总黄酮醇苷为2.1mg，双嘧达莫为1.12mg，银杏总内酯以白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的总量计为0.28mg，(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为4∶7∶3∶3)。溶解完全，用葡甲胺调节pH值为5.5，过滤，灌装安瓿瓶中，灭菌，即得银杏达莫组合物注射液。

实施例14银杏达莫注射剂的制备

取实施例2制备的银杏达莫组合物(含银杏总黄酮醇苷42.2％、双嘧达莫12.3％、银杏总内酯18.4％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为23∶14∶16∶37))100g，放入搅拌器中，加入氯化钠注射用水，搅拌溶解，补加注射用水稀释至每1ml含有银杏总黄酮醇苷为1.477mg，双嘧达莫为0.4305mg，银杏总内酯以白果内酯(C₁₅H₁₈O₈)、银杏内酯A(C₂₀H₂₄O₉)、银杏内酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)、银杏内酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的总量计为0.644mg，(白果内酯、银杏内酯A、B和C的重量比例为23∶14∶16∶37)。溶解完全，用葡甲胺调节pH值为6.5，过滤，灌装安瓿瓶中，灭菌，即得银杏达莫组合物注射液

试验例本发明银杏达莫组合物注射液的药效学试验

一、试验材料

1、供试样品：供试样品1：本发明实施例10所制备的银杏达莫注射剂[含银杏总黄酮醇苷55％、双嘧达莫20％、银杏总内酯25％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为40∶40∶30∶40)]；供试样品2：本发明实施例11所制备的银杏达莫注射剂[含银杏总黄酮醇苷27％、双嘧达莫10％、银杏总内酯10.8％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为4∶9∶6∶6)]；供试样品3：本发明实施例12所制备的银杏达莫注射剂[含银杏总黄酮醇苷30.2％、双嘧达莫12％、银杏总内酯10.4％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为(25∶13∶7∶6))；供试样品4：本发明实施例13所制备的银杏达莫注射剂[含银杏总黄酮醇苷60％、双嘧达莫32％、银杏总内酯8％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为4∶7∶3∶3)]；供试样品5：本发明实施例14所制备的银杏达莫注射剂[含银杏总黄酮醇苷42.2％、双嘧达莫12.3％、银杏总内酯18.4％(白果内酯、银杏内酯A、B和C比例为23∶14∶16∶37)]。

2、对照样品：按照申请号为03104645的中国专利申请说明书实施例1所公开方法制备的冻干注射剂。

二、试验内容

1、选取健康的大鼠30只，随机分成6组，对6组大鼠进行麻醉，颈部套一止血带，加压至80-93千帕，减少脑血流量，使之造成大脑缺血症状，注射供试样品1-5和对照样品进行治疗，然后分别对脑电波进行定量分析，结果发现供试样品能显著增强大脑缺血大鼠脑电图各波恢复。该实验说明本发明银杏达莫注射液对减轻大脑缺血造成的损伤有显著作用(结果见表3)。

2、将30只健康大鼠随机分为6组，每组5只。喂食添加胆固醇的饲料以造模。造模成功后，分别用供试样品1-5和对照样品进行治疗，10周后取主动脉行组织形态学和电镜检查，用酶联免疫吸附试验测量可溶性血栓调节蛋白(sTM)水平。结果采用供试样品1-5治疗的大鼠甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平明显低于用对照样品治疗的大鼠甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平。对照样品组的血管内膜下有大量单核细胞浸润，但供试样品组明显较少。对照样品组的血管内皮细胞存在明显的崩解现象，而供试样品组损伤轻微。供试样品组sTM小于对照样组。结果表明本发明银杏达莫注射液可以有效降低血脂水平、减轻动脉粥样斑块局部的炎症反应、保护血管内皮细胞而发挥防治动脉粥样硬化的作用(结果见表3)。

3、选取健康的大鼠30只，随机分成6组，均以D-半乳糖人工催老，通过静脉注射脂多糖使其诱发急性肺损伤，并分别用供试样品1-5和对照样品进行治疗。结果发现，D-半乳糖致衰老大鼠较正常大鼠血中超氧化物歧化酶(SOD)及肺组织活性均显著降低，而血中乳酸脱氢酶(LDH)活性升高。衰老大鼠注射脂多糖后两小时便形成急性肺损伤，光镜下观察肺间质及肺泡中有较多炎性细胞，肺泡灌洗液中蛋白含量及肺通透指数增加，血中乳酸、丙二醛、一氧化氮、内皮素-1、肿瘤坏死因子-α含量和LDH活性以及肺组织中髓过氧化物酶活性均显著升高，而血中SOD活性及肺组织活性均下降。除SOD外，预先给予供试样品1-5治疗的衰老大鼠的上述其它指标较用对照样品治疗，均有显著缓解。上述试验充分说明，本发明银杏达莫注射液能清除自由基，保护血管内皮细胞，改善肺的气体交换，抑制炎症介质的释放，最终能够有效缓解急性肺损伤(结果见表3)。

表3银杏达莫注射液含白果内酯、银杏内酯A、B和C不同比例的动物试验对比

	减轻大脑缺血造成的损伤	动脉粥样硬化的防治和康复	缓解急性肺损伤
	减轻大脑缺血造成的损伤	动脉粥样硬化的防治和康复	缓解急性肺损伤	供试样品1	总有效率91.60％	总有效率86.64％	总有效率83.60％
供试样品2	总有效率92.66％	总有效率86.82％	总有效率85.62％	供试样品1	总有效率91.60％	总有效率86.64％	总有效率83.60％
供试样品2	总有效率92.66％	总有效率86.82％	总有效率85.62％	供试样品3	总有效率93.18％	总有效率88.36％	总有效率86.32％
供试样品4	总有效率95.26％	总有效率89.38％	总有效率88.24％	供试样品3	总有效率93.18％	总有效率88.36％	总有效率86.32％
供试样品4	总有效率95.26％	总有效率89.38％	总有效率88.24％	供试样品5	总有效率83.30％	总有效率82.68％	总有效率80.32％
对照样品	总有效率56.87％	总有效率62.32％	总有效率61.17％	供试样品5	总有效率83.30％	总有效率82.68％	总有效率80.32％

Claims

1.一种银杏达莫组合物，其特征在于该组合物含有以下重量百分比的各成分：银杏总黄酮醇苷18～65％，双嘧达莫6～32％，银杏总内酯4～25％；其中，所述的银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照4～40∶7～40∶3～30∶3～40的重量比例组成；该组合物的重金属含量低于9.4ppm。

2.根据权利要求1的银杏达莫组合物，其特征在于各成分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷20～40％，双嘧达莫8～18％，银杏总内酯7～20％；其中，银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照8～40∶7～30∶4～20∶5～28的重量比例组成。

3.根据权利要求2的银杏达莫组合物，其特征在于各成分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷22～36％，双嘧达莫9～16％，银杏总内酯8～18％。

4.根据权利要求3的银杏达莫组合物，其特征在于各成分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷24～32％，双嘧达莫10～15％，银杏总内酯8～13％，其中，银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照10～40∶7～25∶4～18∶5～26的重量比例组成。

5.根据权利要求4的银杏达莫组合物，其特征在于各成分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷26～32％，双嘧达莫10～12％，银杏总内酯8～12％，其中，银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照10～35∶10～20∶4～15∶5～25的重量比例组成。

6.根据权利要求5的银杏达莫组合物，其特征在于各成分的重量百分比为：银杏总黄酮醇苷28～32％，双嘧达莫10～12％，银杏总内酯8～12％，其中，银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照20～32∶12～20∶4～10∶6～24的重量比例组成。

7.一种银杏达莫药物组合物，其特征在于由权利要求1至6中任意一项的治疗上有效剂量的银杏达莫组合物与药用载体或稀释剂组成。

8.根据权利要求7的银杏达莫药物组合物，其特征在于按照药物制剂常规方法制备成注射剂、冻干粉针剂、大输液、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或缓释制剂。

9.根据权利要求8的银杏达莫药物组合物，其特征在于所述制剂为注射剂。

10.根据权利要求9的银杏达莫药物组合物，其特征在于每1ml所述注射剂中含有银杏总黄酮醇苷0.70～2.275mg，双嘧达莫0.21～1.12mg，银杏总内酯0.14～0.875mg，该注射剂重金属含量低于9.4ppm；pH值为3.5～7.5；其中银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照4～40∶7～40∶3～30∶3～40的重量比例组成。

11.根据权利要求10的银杏达莫药物组合物，其特征在于每1ml该注射剂中含有银杏总黄酮醇苷0.7～1.4mg，双嘧达莫0.28～0.63mg，银杏总内酯0.245～0.70mg，其中银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照6～40∶7～40∶4～30∶5～30的重量比例组成。

12.根据权利要求11的银杏达莫药物组合物，其特征在于每1ml该注射剂含有银杏总黄酮醇苷0.77～1.26mg，双嘧达莫0.315～0.56mg，银杏总内酯0.28～0.63mg，其中银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照8～40∶7～30∶4～20∶5～28的重量比例组成。

13.根据权利要求12的银杏达莫药物组合物，其特征在于每1ml该注射剂含有银杏总黄酮醇苷0.84～1.12mg，双嘧达莫0.35～0.525mg，银杏总内酯0.315～0.455mg，其中银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照10～40∶7～25∶4～18∶5～26的重量比例组成。

14.根据权利要求13的银杏达莫药物组合物，其特征在于每1ml该注射剂含有银杏总黄酮醇苷0.91～1.12mg，双嘧达莫0.35～0.42mg，银杏总内酯0.28～0.42mg，其中银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照10～35∶10～20∶4～15∶5～25的重量比例组成。

15.根据权利要求14的银杏达莫药物组合物，其特征在于每1ml该注射剂含有银杏总黄酮醇苷0.91～1.10mg，双嘧达莫0.36～0.44mg，银杏总内酯0.20～0.35mg，其中银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照20～32∶12～20∶4～10∶6～24的重量比例组成。

16.根据权利要求15的银杏达莫药物组合物，其特征在于每1ml该注射剂含有银杏总黄酮醇苷1.07mg，双嘧达莫0.42mg，银杏总内酯0.31mg，其中银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照25∶13∶7∶6的重量比例组成。

17.根据权利要求10至16中任意一项的银杏达莫药物组合物，其特征在于所述的注射剂为冻干粉针剂形式。

18.一种制备权利要求1银杏达莫组合物的方法，包括：按照以下重量百分比称取各组分：银杏总黄酮醇苷18～65％，双嘧达莫6～32％，银杏总内酯4～25％；其中，所述的银杏总内酯由白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C按照4～40∶7～40∶3～30∶3～40的重量比例组成；将上述各组分混合均匀即得。

19.一种制备权利要求10至16所述的银杏达莫组合物注射剂的方法，包括：向银杏达莫组合物中加入注射用水，使其中各成分比例达到所述含量，灌装，灭菌制成。

20.权利要求1的银杏达莫组合物在制备治疗心脑血管疾病药物中的用途。