CN104800218A - 一种银杏达莫组合物及其制剂和制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种银杏达莫组合物及其制剂和制备方法，所述银杏达莫组合物由银杏黄酮类成分、银杏内酯类成分、双嘧达莫制成，按重量份计：由51-62份槲皮素、36-50份山奈素、10-17份异鼠李素、14-22份银杏内酯A、11-16份银杏内酯B、10-20份银杏内酯C、7-15份银杏内酯M以及20-28份白果内酯、32-42份双嘧达莫制成。本发明银杏达莫组合物及其制剂不仅有效活性成分含量高，而且对槲皮素等有效活性成分之间的比例加以控制，使得在特定的比例范围内，药物生物利用度高，各有效成分的协同治疗作用能发挥到最佳，杂质含量低，具有更好的临床疗效。

Description

一种银杏达莫组合物及其制剂和制备方法

技术领域：

本发明属于医药领域，涉及一种药物组合物及其制剂和制备方法，尤其涉及一种银杏达莫有效成分组合物及其制剂和制备方法。 

背景技术：

银杏叶具有改善心脑血管循环，提高记忆力，清除自由基，延缓衰老的作用，具有治疗和保健的双重功效。由银杏叶制备的注射液在临床中已使用多年，并取得了很好的效果。银杏叶提取物成分复杂，主要活性成分为银杏总黄酮醇苷和银杏总内酯，其中总黄酮醇苷主要是由槲皮素、山奈酚和异鼠李素等酮苷元与葡萄糖等单糖以氧糖苷键连接而成的糖苷组成，具有扩张冠状血管、改善血管末梢和脑血管循环、降低胆固醇，解除平滑肌痉挛、松弛支气管等作用；银杏总内酯主要包括银杏内酯A、B、C、M和J以及白果内酯等，具有抗凝血、防治动脉粥样硬化、保护缺血损伤组织、抗休克、抗炎等诸多药理作用，能有效的抑制多种诱导剂所诱导的血小板聚集，并且银杏内酯已被认为是高效特异的PAF拮抗剂，具有抑制血小板活化因子-PAF和对心肌缺血、脑缺血缺氧的保护作用，在银杏内酯A、B、C中以银杏内酯B活性为最高，银杏内酯A与其具有协同作用。近年来，将银杏叶提取物与双嘧达莫制成的复方制剂已陆续上市，在预防和治疗冠心病、血栓栓塞性疾病以及在治疗急危重症领域发挥着重要作用。 

但由于银杏叶提取物的主要活性成分银杏总黄酮、银杏总内酯及双嘧达莫均难溶于水，并受限于银杏叶主要活性成分的理化性质及药动学特征，其制成的制剂生物利用度低、稳定性差、副作用大且复杂，因此在治疗疾病时难以取得令人满意的疗效。针对上述问题，银杏达莫制剂通过对给药剂型、添加辅料、改变制剂工艺、制成衍生物等来增加药物吸收，取得了重大进展，提高药物生物利用度，进一步提高了药物疗效。但由于银杏叶提取物活性成分复杂，现有技术对其药效活性成分的探究还不够明朗，目前上市的银杏达莫制剂仅控制总黄酮的含量，并未对其有效活性成分间的比例加以控制，使得有效活性成分较低，并且制 剂中杂质如：银杏酸、重金属等含量没有得到有效控制，所得药物制剂安全性和稳定性均较差，毒副作用较大，临床用药安全还存在很大的风险。 

因此，探究出一种疗效更高、稳定性和安全性更好，毒副作用小的银杏达莫组合物及其复方制剂，一直是临床用药安全的愿望和需求。本发明人经过对银杏叶提取物成分的深入研究，发现总黄酮醇苷主要活性成分槲皮素、山奈素、异鼠李素与银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯M以及白果内酯间不同的比例在治疗疾病时具有不同的效果，尤其当调整槲皮素与银杏内酯、双嘧达莫及其他总黄酮醇苷活性成分间的比例时，具有令人意想不到的有益效果，不仅可以大大提高治疗效果，而且其毒副作用也有显著降低，在本发现的基础上完成了本发明。 

发明内容

因此，本发明的目的是提供一种新的银杏达莫组合物，该银杏达莫组合物活性成分明确，银杏酚酸类、蛋白质、鞣质及热源物等杂质含量低，而且银杏总黄酮醇苷、双嘧达莫、银杏总内酯的含量也高。 

为达到上述目的，本发明的技术方案是： 

一种银杏达莫组合物，由银杏黄酮类成分、银杏内酯类成分、双嘧达莫制成，按重量份计：由51-62份槲皮素、36-50份山奈素、10-17份异鼠李素、14-22份银杏内酯A、11-16份银杏内酯B、10-20份银杏内酯C、7-15份银杏内酯M以及20-28份白果内酯、32-42份双嘧达莫制成。 

优选地，按重量份计：由55-58份槲皮素、42-45份山奈素、13-15份异鼠李素、17-19份银杏内酯A、12-14份银杏内酯B、14-17份银杏内酯C、10-12份银杏内酯M、23-25份白果内酯、36-38份双嘧达莫制成。 

更优选地，按重量份计：由56份槲皮素、43份山奈素、14份异鼠李素、18份银杏内酯A、13份银杏内酯B、15份银杏内酯C、11份银杏内酯M、24份白果内酯、37份双嘧达莫制成。 

本发明技术人员通过对银杏叶提取物深入研究，发现槲皮素在银杏叶提取物中的含量不同时，其对治疗疾病具有明显的不同治疗效果，其原因可能槲皮素本身或者其代谢物抑制了外排转移蛋白P-gp、MRP-2、BCRP，从而减少活性成分及其Ⅱ相代谢物被外排转移蛋白外排，提高药物的生物利用度，从而提高了治疗效 果；基于此基础，本发明人通过大量筛选试验，获得一组新的银杏达莫组合物，其疗效比现有的银杏叶提取物和银杏达莫复方制剂具有令人意想不到的显著提高；此外本发明组合物活性成分明确，便于控制，杂质银杏酚酸类物质（如银杏酸）、蛋白质、鞣质、热源物质等含量低于10ppm，重金属含量低于8ppm，使得本发明组合物治疗效果确切，稳定性和安全性大大提高，注射时不会发生注射疼痛和过敏反应，便于临床使用。本发明组合物黄酮类成分中的槲皮素、山奈素、异鼠李素其测定方法按照中国药典2010年版的高效液相色谱进行。同样银杏内酯类成分的含量也是按照中国药典2010年版的高效液相色谱法进行的。 

本发明另一个目的是提供一种制备上述银杏达莫组合物的方法，技术方案如下： 

按照前述各重量配比称取原料，然后分别进行粉碎、过100目筛，混匀，加入80-95%乙醇均匀湿润，再装入渗漉器中，加乙醇至高出药物面，放置10-15个小时后进行渗漉，收集渗漉液，低温减压回收乙醇，药液浓缩至膏稠状，放入真空干燥箱中干燥2-4小时，放入遮光容器中密闭储存，即得到银杏达莫组合物。 

本发明组合物中的各组分可以市售得到，也可以通过已知方法制备。制备方法可以是通过将市售的各组分按上述重量份进行充分混合后制备得到所述组合物，也可以是通过现有技术公开的制备方法从银杏叶提取上述各活性组分，然后将各活性组分与双嘧达莫按上述重量份充分混合后即得到所述的银杏达莫组合物。 

本发明又一目的是提供一种银杏达莫药物组合物制剂。所述制剂是由所述银杏达莫组合物与药用载体或稀释剂按药学常规方法制成注射剂、冻干粉针剂、大输液、片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等形式，优选注射剂。 

上述药物组合物制剂中的药用载体或稀释剂可以根据需要从中国药典规定的可以药用的载体、赋形剂中选择。例如可以为吐温-20，吐温-80，聚乙二醇，蓖麻油，聚乙烯吡咯烷酮，甲基纤维素，羟甲基纤维素，泊洛沙姆，滑石粉，淀粉，β-环糊精等中的一种或多种混合物。 

优选的，上述药物组合物制剂是注射液形式时，上述药物组合物中还可以含有焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、盐酸半胱氨酸、蛋氨酸，维生素C、硫代硫酸钠，EDTA及其金属盐，碳酸钠等碱金属碳酸盐，磷酸等酸类以及各种氨基酸等。同时还可 以含有氯化钠、氯化钾，乳酸钠，木糖醇，山梨醇，麦芽糖，果糖等渗透压调节剂。此外该注射剂中还可以含有助溶剂，分散剂，pH调节剂等。 

在上述基础上，本发明人进一步完成了下属发明目的：由上述银杏达莫药物组合物制备的注射剂。制备方法如下：取上述制得的银杏达莫组合物1份，加入总配制量70%-80%的氯化钠注射用水，总配制量为400份，再加入0.2-0.4份赋形剂，充分搅拌，待完全溶解后，调节pH值至3.0-6.0，加热回流0.5-1小时，冷却至室温，补加余量的氯化钠注射用水至配制量，重调pH值至3.0-6.0，用0.2mm滤膜过滤，滤液再经100000道尔顿以下的超滤膜超滤，滤液高温高压灭菌，放冷，分装入安瓿瓶中，即得到银杏达莫注射液。 

本发明的银杏达莫注射剂的pH为3.0-6.0，最优选4.0-5.0。 

本发明还涉及银杏达莫组合物及其制剂在制备预防和治疗心脑血管疾病药物方面的用途，所述心脑血管疾病为冠心病、血栓栓塞性疾病、缺血性损伤。 

本发明银杏达莫组合物注射液不仅有效活性成分含量高，而且对槲皮素等有效活性成分之间的比例加以控制，使得在分特定的比例范围内，药物生物利用度高，各有效成分的协同治疗作用能发挥到最佳，并且还含有西药双嘧达莫成分，且含银杏酚酸类物质、蛋白质、鞣质等杂质低于10ppm，重金属含量低于8ppm，使得本发明制备的注射液比阳性对照药物组具有更好的临床疗效。 

以下通过实施例来进一步描述本发明的有益效果，应该理解的是，这些实施例仅用于说明本发明，决不限制本发明的范围。下述银杏叶中的活性成分均购于广润生物制品公司，双嘧达莫购自山西新宝源制药有限公司。 

具体实施方式

实施例1：银杏达莫组合物 

处方：槲皮素5.1g；山奈素3.6g；异鼠李素1.0g；银杏内酯A1.4g；银杏内酯B1.1g、银杏内酯C1.0g；银杏内酯M0.7g；白果内酯2.0g；双嘧达莫3.2g。 

制法：精确称取以上重量原料，粉碎、过100目筛，充分混匀，加入95%乙醇均匀湿润，再装入渗漉器中，乙醇加至高出药物面，放置14个小时后进行渗漉；收集渗漉液，低温减压回收乙醇，药液浓缩至膏稠状，放入真空干燥箱中干燥3小时，放入遮光容器中密闭储存，得到银杏达莫组合物18.2g。 

实施例2：银杏达莫组合物 

处方：槲皮素5.5g；山奈素4.2g；异鼠李素1.3g；银杏内酯A1.7g；银杏内酯B1.2g、银杏内酯C1.4g；银杏内酯M1.0g；白果内酯2.3g；双嘧达莫3.6g。 

制法：精确称取以上重量原料，粉碎、过100目筛，充分混匀，加入80%乙醇均匀湿润，再装入渗漉器中，乙醇加至高出药物面，放置15个小时后进行渗漉；收集渗漉液，低温减压回收乙醇，药液浓缩至膏稠状，放入真空干燥箱中干燥2小时，放入遮光容器中密闭储存，得到银杏达莫组合物21.9g。 

实施例3：银杏达莫组合物 

处方：槲皮素5.6g；山奈素4.3g；异鼠李素1.4g；银杏内酯A1.8g；银杏内酯B1.4g、银杏内酯C1.5g；银杏内酯M1.1g；白果内酯2.4g；双嘧达莫3.7g。 

制法：精确称取以上重量原料，粉碎、过100目筛，充分混匀，加入90%乙醇均匀湿润，再装入渗漉器中，乙醇加至高出药物面，放置12个小时后进行渗漉；收集渗漉液，低温减压回收乙醇，药液浓缩至膏稠状，放入真空干燥箱中干燥3小时，放入遮光容器中密闭储存，得到银杏达莫组合物22.4g。 

实施例4：银杏达莫组合物 

处方：槲皮素6.2g；山奈素5.0g；异鼠李素1.7g；银杏内酯A2.2g；银杏内酯B1.6g、银杏内酯C2.0g；银杏内酯M1.5g；白果内酯2.8g；双嘧达莫4.2g。 

制法：精确称取以上重量原料，粉碎、过100目筛，充分混匀，加入85%乙醇均匀湿润，再装入渗漉器中，乙醇加至高出药物面，放置13个小时后进行渗漉；收集渗漉液，低温减压回收乙醇，药液浓缩至膏稠状，放入真空干燥箱中干燥4小时，放入遮光容器中密闭储存，得到银杏达莫组合物25.6g。 

实施例5：银杏达莫组合物注射液（注射液1） 

取实施例1-4任一方法制得的银杏达莫组合物10g，放入搅拌器中，加入3000ml氯化钠注射用水，再加入3g吐温-80，充分搅拌，待溶液完全溶解后，用葡甲胺调节pH值为6，加热回流0.5小时，补足氯化钠注射用水至4000ml，再重调节pH值为4.5，用0.2mm滤膜过滤，滤液再经100000道尔顿以下的超滤 膜超滤，滤液高温高压灭菌，放冷，分装入5ml安瓿瓶中，即得到银杏达莫注射液。 

实施例6：银杏达莫组合物注射液（注射液2） 

取实施例1-4任一方法制得的银杏达莫组合物10g，放入搅拌器中，加入2800ml氯化钠注射用水，再加入2g吐温-80，充分搅拌，待溶液完全溶解后，用葡甲胺调节pH值为4，加热回流0.5小时，补足氯化钠注射用水至4000ml，再重调节pH值为3，用0.2mm滤膜过滤，滤液再经100000道尔顿以下的超滤膜超滤，滤液高温高压灭菌，放冷，分装入5ml安瓿瓶中，即得到银杏达莫注射液。 

实施例7：银杏达莫组合物注射液（注射液3） 

取实施例1-4任一方法制得的的银杏达莫组合物10g，放入搅拌器中，加入3200ml氯化钠注射用水，再加入4g吐温-80，充分搅拌，待溶液完全溶解后，用葡甲胺调节pH值为6，加热回流1小时，补足氯化钠注射用水至4000ml，再重调节pH值为5，用0.2mm滤膜过滤，滤液再经100000道尔顿以下的超滤膜超滤，滤液高温高压灭菌，放冷，分装入5ml安瓿瓶中，即得到银杏达莫注射液。 

实施例8：银杏达莫组合物低组分注射剂（注射剂4）： 

处方：槲皮素4.8g；山奈素3.0g；异鼠李素0.8g；银杏内酯A1.2g；银杏内酯B0.9g、银杏内酯C0.8g；银杏内酯M0.4g；白果内酯1.8g；双嘧达莫2.8g。 

本实施例银杏达莫组合物按上述实施例1-4任一方法制备，再按实施例5-7任一制备方法制成注射剂。 

实施例9：银杏达莫组合物高组分注射剂（注射剂5）： 

处方：槲皮素6.6g；山奈素5.4g；异鼠李素2.0g；银杏内酯A2.5g；银杏内酯B1.9g、银杏内酯C2.3g；银杏内酯M1.7g；白果内酯3.1g；双嘧达莫4.5g。 

本实施例银杏达莫组合物按上述实施例1-4任一方法制备，再按实施例5-7任一制备方法制成注射剂。 

本发明实施例5-7制得的注射液1-3质量检测结果如下表1： 

表1本发明注射液各成分含量的检测结果 

成分或检查项

注射液1

注射液3

注射剂5

 

总黄酮醇苷（mg/ml）	1.27	1.23	1.19
				双嘧达莫（mg/ml）	0.42	0.39	0.41
银杏总内酯（mg/ml）	0.81	0.89	0.93
				蛋白质检查	不混浊	不混浊	不混浊
鞣质检查	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀	不混浊、不沉淀
				银杏酚检查	相应位置无斑点	相应位置无斑点	相应位置无斑点
重金属（ppm）	4.2	4.0	4.6

实验例1：稳定性与毒性试验 

1、将本发明实施例5-7制得的注射液进行稳定性考察，结果经过一年后，本发明产品有效成分未降低，各种检查均符合国家药品标准要求。 

2、本发明实施例5-9制得的注射液1-5进行毒理实验研究，经过动物实验，证明注射液1-4对动物血管无刺激性，也未出现过敏反应，各组动物体重均增加，饮食及活动正常，证明毒性小，非常有利于临床使用。但施用实施例9制得的注射液5的动物有轻微刺激性反应，少数动物皮毛蓬乱，出现萎靡少动等毒性反应，但此后逐渐恢复正常。由此可知，采用本发明所述的高组分制得的药物，具有一定毒性。 

实验例2：本发明银杏达莫组合物注射液的药效学试验 

1、供试样品：按照本发明实施例5-9制备得到注射液1-5 

对照样品：市售银杏达莫注射液（本公司生产） 

2、试验内容： 

2.1、银杏达莫注射液治疗脑缺血损伤评价试验： 

方法：选取健康的大鼠30只，随机分成6组，对6组大鼠进行麻醉，颈部套一止血带，加压80-93千帕，减少脑血流量，使之造成大脑缺血症状，注射供试样品注射液1-5和对照样品进行治疗，然后分别对脑电波进行定量分析。 

结果：注射液1-3能显著增强大脑缺血大鼠脑电图各波恢复，说明本发明制剂对减轻大脑缺血造成的损伤有显著作用。另外，注射液4组即低组分用量组治疗作用低于市售银杏达莫组，注射液5组即高组分用量组作用无明显增加，表明采用本发明所述的用量范围，作用良好。（结果见表2）。 

2.2、银杏达莫注射液治疗动脉粥样硬化评价试验： 

方法：将30只健康大鼠随机分为6组，每组5只。喂食添加胆固醇的饲料以造膜。造膜成功后分别用供试样品注射液1-5和对照样品进行治疗，10周后取主动脉行组织形态学和电镜检查，用酶联免疫吸附试验测量可溶性血栓调节蛋白（sTM）水平。 

结果：采用注射液1-3治疗的大鼠甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平明显低于用对照样品组；对照样品组和注射液4、5组的血管内皮细胞存在明显的崩解现象，而供试样品1-3组损伤轻微；注射液1-3组sTM小于对照样品组。说明本发明制剂可以有效降低血脂水平，减轻动脉粥样斑块局部的炎症反应、保护血管内皮细胞而发挥防治动脉粥样硬化的作用。另外，采用本发明所述单体的低组分制得的注射液4，其作用效果不理想，高组分作用没有明显增加，表明采用本发明所述的用量范围，作用良好。（结果见表2）。 

2.3、银杏达莫注射液治疗急性肺损伤评价试验： 

方法：选取健康的大鼠30只，随机分成6组，均以D-半乳糖人工催老，通过静脉注射脂多糖使其诱发急性肺损伤，并分别用供试样品注射液1-5和对照样品进行治疗。 

结果：D-半乳糖致衰老大鼠较正常大鼠血中超氧化物歧化酶（S0D）及肺组织活性均显著降低，而血中乳酸脱氢酶（LDH）活性升高。衰老大鼠注射脂多糖后两个小时便形成急性肺损伤，光镜下观察肺间质及肺泡中有较多炎性细胞，肺泡灌洗液中蛋白含量及肺通透指数增加，血中乳酸、丙二醛、一氧化氮、内皮素-1、肿瘤坏死因子-α含量和LDH活性以及肺组织中髓过氧化物酶活性均显著升高，而血中SOD活性剂肺组织活性均下降。除SOD外,预先给予注射液1-3治疗的衰老大鼠的上述其它指标较用对照样品组治疗，有显著缓解。充分说明，本发明银杏达莫组合物制剂能清除自由基，保护血管内皮细胞，改善肺的其他交换，抑制炎症介质的释放，最终能够有较缓解急性肺损伤。另外，采用本发明所述单体的低组分制得的注射液4，其作用效果不理想，高组分注射液5作用没有明显增加，表明采用本发明所述的用量范围，作用良好。（结果见表2）。 

表2银杏达莫组合物注射液含槲皮素、山奈素、异鼠李素、银杏内酯A、B、C、M以及白果内酯不同比例的动物试验对比 

上述试验表明，采用本发明范围内的银杏达莫组合物及其注射剂，在预防和治疗心脑血管疾病等方面，尤其是预防和治疗冠心病、血栓栓塞性疾病、缺血性损伤优于对照样品和低组分注射剂，另外，本发明所述单体的高组分用量会导致一定毒性，因此，临床上不建议采用本发明单体的高组分用量。因此，采用本发明所述范围的银杏达莫组合物及其制剂，疗效更为确切，疗效较佳。 

实验例3：临床试验 

将本发明银杏达莫注射液与市售银杏达莫注射液的治疗冠心病、血栓栓塞性等疾病进行了对比分析，其结果见下表3： 

表3：本发明银杏达莫组合物注射液与对照样品（市售银杏达莫注射液）疗效试验结果对比 

试验结果说明：本发明银杏达莫组合物注射液的总体疗效要明显高于市售的银杏达莫注射液的总体疗效，且未发现明显不良反应，其安全性也明显优于市售银杏叶注射液。 

Claims (10)

1.一种银杏达莫组合物，由银杏黄酮类成分、银杏内酯类成分、双嘧达莫制成；其特征在于，按重量份计：由51-62份槲皮素、36-50份山奈素、10-17份异鼠李素、14-22份银杏内酯A、11-16份银杏内酯B、10-20份银杏内酯C、7-15份银杏内酯M以及20-28份白果内酯、32-42份双嘧达莫制成。

2.根据权利要求1所述的银杏达莫组合物，其特征在于，按重量份计：由55-58份槲皮素、42-45份山奈素、13-15份异鼠李素、17-19份银杏内酯A、12-14份银杏内酯B、14-17份银杏内酯C、10-12份银杏内酯M、23-25份白果内酯、36-38份双嘧达莫制成。

3.根据权利要求1所述的银杏达莫组合物，按重量份计：由56份槲皮素、43份山奈素、14份异鼠李素、18份银杏内酯A、13份银杏内酯B、15份银杏内酯C、11份银杏内酯M、24份白果内酯、37份双嘧达莫制成。

4.一种银杏达莫组合物的制备方法，其特征在于，将权利要求1-3任一所述的组合物中的各原料按重量配比称取，然后分别进行粉碎、过100目筛，混匀，加入80-95%乙醇均匀湿润，再装入渗漉器中，加乙醇至高出药物面，放置10-15个小时后进行渗漉，收集渗漉液，低温减压回收乙醇，药液浓缩至膏稠状，放入真空干燥箱中干燥2-4小时，放入遮光容器中密闭储存，即得到银杏达莫组合物。

5.一种银杏达莫组合物制剂，由权利要求1-3任一所述的银杏达莫组合物与药用载体或稀释剂制成。

6.根据权利要求5所述的银杏达莫组合物制剂，其特征在于制剂中的药用载体或稀释剂为吐温-20、吐温-80、聚乙二醇、蓖麻油、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟甲基纤维素、泊洛沙姆、滑石粉、淀粉、β-环糊精中的一种或多种混合物。

7.根据权利要求5所述的银杏达莫组合物制剂，其特征在于按照制剂学常规方法制成注射剂、冻干粉针剂、大输液、片剂、胶囊、颗粒剂或口服液。

8.根据权利要求6所述的制剂，其特征在于所述的制剂为注射剂。

9.一种银杏达莫组合物制剂的制备方法，其特征在于，取权利要求4所述的银杏达莫组合物1份，加入总配制量70%-80%的氯化钠注射用水，总配制量为400份，再加入0.2-0.4份赋形剂，充分搅拌，待完全溶解后，调节pH值至3-6，加热回流0.5-1小时，冷却至室温，补加余量的氯化钠注射用水至配制量，重调pH值至3-6，用0.2mm滤膜过滤，滤液再经100000道尔顿以下的超滤膜超滤，滤液高温高压灭菌，放冷，分装入安瓿瓶中，即得到银杏达莫注射液。

10.权利要求1-3任一所述的银杏达莫组合物或权利要求5-8所述的组合物制剂在制备预防和治疗心脑血管疾病药物方面的用途，所述心脑血管疾病为冠心病、血栓栓塞性疾病、缺血性损伤。