CN1769286B

CN1769286B - 一种治疗鼻腔分泌过度和慢阻肺的化合物以及药物组合物

Info

Publication number: CN1769286B
Application number: CN2005101092923A
Authority: CN
Inventors: 陈小平; 赵书强; 曹霞; 张洁清; 齐涛
Original assignee: BEIJING SHIQIAO BIOPHARMACEUTICAL Co Ltd; Cachet Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: YinGu Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2005-10-20
Filing date: 2005-10-20
Publication date: 2010-10-06
Anticipated expiration: 2025-10-20
Also published as: WO2007045151A1; CN1769286A

Abstract

本发明公开了一类治疗鼻腔分泌过多和慢阻肺的药物，同时提供治疗鼻分泌过度和慢阻肺的药物组合物，分别为气雾剂、粉雾剂、滴鼻剂和喷鼻剂。本发明的化合物在盐酸戊乙奎醚基础上引入季铵基团，难以透过粘膜进入循环系统，更不能进入中枢，这样局部给药后，没有中枢作用，不影响纤毛的清除功能，可用于慢阻肺的治疗；并且该类新化合物由于从粘膜部位吸收率很低，因此在局部的滞留时间延长，可产生较长的支气管扩张和腺体分泌抑制功能，从而使本发明的新化合物以及含有这些化合物的组合物可以作为抗慢阻肺和治疗鼻炎的药物。

Description

一种治疗鼻腔分泌过度和慢阻肺的化合物以及药物组合物

技术领域：

本发明涉及药物化合物，具体涉及一种新的治疗鼻腔分泌过度和慢阻肺的新的药物化合物以及药物组合物。

背景技术：

对于鼻腔分泌过度(俗称流鼻涕)和慢阻肺，治疗时现在使用多种活性成分，但结果不尽如人意。例如用血管收缩剂氨基乙醇或咪唑啉类，但是不得不面对强烈的口干和反跳现象。

另外，甘氨酸二钠(DSCG)或甾类可的松如倍氯米松双丙酸酯也在应用，但它们只能缓解常年性过敏性鼻炎的症状-枯草热。更有甚者，长期使用这些制剂，不得不面对一些特殊的毒副作用如真菌病、骨矿丢失、血糖升高和粘膜萎缩等。

治疗各种类型的鼻腔分泌过多和慢阻肺可以通过局部给以季铵莨菪烷类衍生物来达到，这些化合物具有阿托品样(迷走神经吉抗)的作用(在粘膜局部给药)。例如异丙基阿托品的喷鼻剂和气雾剂是目前治疗各种类型的鼻腔分泌过多和慢阻肺的首选药物，但半衰期短(仅仅1.6h)是该化合物的不足之处。

发明内容：

本发明的目的在于提供一些兼具异丙基阿托品的优点又具有较长半衰期的化合物，同时，这类化合物在溶液中十分稳定，可制成各种剂型，作为治疗鼻腔分泌过多和慢阻肺的药物。

本发明的另一目的，是提供一种治疗鼻腔分泌过多和慢阻肺的药物组合物。

本发明提供的治疗鼻分泌过度和慢阻肺的化合物，用式(I)结构表示：

式中：

R₁为环戊基；

R₂为甲基时，X^-为甲磺酸根；

R₂为乙基时，X^-为溴离子或甲磺酸根；

R₂为异丙基，X^-为溴离子或甲磺酸根。

具体的化合物为：

3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、

3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-甲基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、

3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、或3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷。

本发明提供的治疗鼻分泌过度和慢阻肺的药物组合物，其含有3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-甲基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-甲基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、和3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷中的一种化合物和惰性载体。

这些药物组合物，具体为气雾剂，含0.01～0.03wt％所述化合物，每喷含所述化合物10-100μg，所述惰性载体包括抛射剂，还包括溶酶或表面活性剂，所述抛射剂为选自三氯一氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯一氟甲烷、一氯二氟甲烷、二氯四氟甲烷、一氯五氟甲烷、一氯二氟乙烷、二氟乙烷、和八氟环丁烷中的一种或几种的混合，所述溶酶为选自乙醇、丙二醇、小分子聚乙二醇中的一种或几种的混合，所述表活剂为豆磷脂或吐温。

这些药物组合物，具体为粉雾剂，含0.01～0.10wt％的所述化合物，每喷含所述化合物10-100μg，所述惰性载体包含稀释剂和润滑剂，所述稀释剂为葡聚糖、阿拉伯糖、乳糖、甘露糖醇、甘露醇、木糖醇、蔗糖、果糖、山梨醇、麦芽糖、氨基酸和葡萄糖中的一种或几种的混合，所述润滑剂为硬脂酸镁或苯甲酸钠。

这些药物组合物，具体为滴鼻剂或喷鼻剂，其中含有所述化合物2～80mg/10ml，所述惰性载体为选自苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯甲醇、苯甲酸、三氯叔丁醇、对羟基苯甲酸酯类、山梨酸、苯酚、麝香草酚和挥发油中的一种或几种的混合。

这些药物组合物，还包含其它有效剂量的活性组分。所述其它活性组分是指非诺特罗、倍氯米松双丙酸酯、扑尔敏、奈甲唑啉中的一种，加入比例为相对所述化合物10～400重量份：100重量份。

本发明同时提供所述药物组合物粉雾剂和气雾剂的应用，可将其用于制备预防和治疗哺乳动物和人的各种急慢性气道阻塞性疾病，如慢性阻塞性肺病、支气管哮喘的药物。

附图说明：

本发明还提供所述药物组合物滴鼻剂或喷鼻剂的应用，可将其用于制备预防和治疗哺乳动物和人的各种急慢性鼻炎的药物。

本发明提供的化合物和组合物，能够作为药物治疗各种类型的鼻腔分泌过多和慢阻肺，而且无毒副作用；同时这些化合物的半衰期很长，10h以上，用药次数比同类药物异丙基阿托品大为减少，而溶解度等理化性质又与异丙基阿托品一致，而且半衰期长，十分稳定，很容易做成水溶液和小分子醇类溶液，易于做成喷鼻剂治疗鼻炎和二相溶液型气雾剂治疗慢阻肺。

具体实施方式：

图1为不同化合物狗鼻腔给药后的半衰期(异丙阿托品为人的数据)测定数据图；

图2为不同化合物小鼠肌注后的半衰期(异丙阿托品为人的数据)测定数据图。

本发明确认，可以实现本发明目的化合物是一组含有季铵基团的奎宁类化合物，具体是下列化合物I-V：

3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷(化合物I)、

3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷(化合物II)、

3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-甲基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷(化合物III)、

3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷(化合物IV)、或

3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷(化合物V)。

这些化合物均具有阿托品样(迷走神经拮抗)的作用(在鼻粘膜局部给药)。

这些化合物可用式(I)结构表示：

式中：

R₁为环戊基；

R₂为乙基，X^-为溴离子(化合物I)；

R₂为异丙基，X^-为溴离子(化合物II)；

R₂为甲基，X^-为甲磺酸根(化合物III)；

R₂为乙基，X^-为甲磺酸根(化合物IV)；

R₂为异丙基，X^-为甲磺酸根(化合物V)；

上面化合物是在已有的抗胆碱能药物化合物盐酸戊乙奎醚的基础上经过改造而获得。原有的化合物盐酸戊乙奎有强大的中枢和外周抗胆碱能作用，能抑制纤毛的清除功能，对支气管哮喘等病人而言，将使呼吸道分泌物难以清除，甚至可引起继发感染。原有化合物因其能快速吸收进入血液和循环系统与广泛的抗胆碱能作用使它不能用于慢阻肺等疾病。

本发明的化合物是在盐酸戊乙奎醚基础上引入季铵基团后形成的一类化合物，本发明实验验证，该类化合物难以透过粘膜进入循环系统，更不能进入中枢，这样局部给药后，没有中枢作用，不影响纤毛的清除功能，可用于慢阻肺的治疗；并且该类新化合物由于从粘膜部位吸收率很低，因此在局部的滞留时间延长，可产生较长的支气管扩张和腺体分泌抑制功能。以上两点为本发明的新化合物作为抗慢阻肺和治疗鼻炎药奠定了基础。

用上述本发明化合物组成的新的药物组合物，也是本发明的重要组成部分。含有上述化合物作为活性组分适合于鼻和呼吸道粘膜局部用药的药物组合物为滴鼻剂、喷鼻剂、气雾剂和粉雾剂。喷鼻剂中可含有抛射剂或无抛射剂，对鼻腔而言后者更优，因为它们对鼻粘膜没有刺激；对呼吸道而言，可做成气雾剂和粉雾剂，气雾剂的生产和使用较为方便，价格也更便宜一些。

把上述化合物与其它治疗鼻炎的活性成分(如倍氯米松双丙酸酯beclomethasonedipropionate、扑尔敏、奈甲唑啉或非诺特罗fenoterol)做成复方，尤其与非诺特罗组合会产生很好的作用，可被用于过敏性鼻炎的治疗。

为迅速有效地治疗鼻炎初步症状、治疗常年性非过敏性和常年性过敏性鼻炎，且保证使用中无毒副作用，建议使用本发明化合物每天剂量为40-480μg，最佳80-240μg。对于每次喷出20μg的装置，每鼻孔每天1-2次，每天2-3次。所以每次每鼻孔20-40μg，每天2-3次，总剂量为80-240μg。

以下实施例更详尽描述本发明的内容。需说明的是，本发明不限于如下实施例。实施例中组分如无特殊说明均是以重量表示组分比例的。

实施例一：化合物的制备

以3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-甲基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷(化合物α，在中国发明专利03121031.7中对其用度已有详细说明)为例详细说明：

1、中间产物的制备：将1-苯基-1-环戊基环氧乙烷9.3g溶于DMSO中。取奎宁醇6.35g，溶于64ml DMSO中，加氢化钠2.5g，搅拌1小时，冷至室温，滴加苯基环戊基环氧乙烷-DMSO溶液，再搅拌3小时。冷至室温，乙醚提取，将醚层用6N HCl提取，酸水层用20％NaOH碱化，再用乙醚提取，无水硫酸钠干燥过夜。蒸除溶剂，产物经蒸馏纯化后得到中间产物3-奎宁环基-(2′-苯基-2′-环戊基-2′-羟基)乙基醚(收率54％)；

2、化合物α的制取：将中间产物用无水乙醇溶解，通入过量溴甲烷，反应过夜。蒸除溶剂后，用丙酮重结晶，得白色固体即为化合物α(收率75％)。

¹HNMR(CDCl₃)：7.42(d，2H)，7.29(g，2H)，7.20(t，1H)，4.29(m，1H)，3.96(br，1H)，3.85(m，1H)，3.70(m，4H)，3.30(d，1H)，3.22(s，3H)，3.11(m，2H)，2.25(m，2H)，1.96(m，2H)，1.63(m，4H)，1.44(m，4H)，1.26(m，2H)。MS(m/z)：410(M⁺)；175，726(B)。

3、用同样方法，将中间产物用无水乙醇溶解后通入过量溴乙烷继续反应蒸除溶剂后，用丙酮重结晶，得白色固体即为化合物I(收率75.5％)。

¹HNMR(CDCl₃)：7.45(d，2H)，7.27(g，2H)，7.20(t，1H)，4.28(m，1H)，3.98(br，1H)，3.85(m，1H)，3.71(m，4H)，3.35(q，2H)，3.30(d，1H)，3.14(m，2H)，2.26(m，2H)，1.96(m，2H)，1.90(t，3H)，1.63(m，4H)，1.454(m，4H)，1.27(m，2H)。MS(m/z)：424(M⁺)；

4、用同样方法，将中间产物用无水乙醇溶解后通入过量溴异丙烷继续反应蒸除溶剂后，用丙酮重结晶，得白色固体即为化合物II(收率76.0)。

¹HNMR(CDCl₃)：7.41(d，2H)，7.28(g，2H)，7.21(t，1H)，4.29(m，1H)，3.95(br，1H)，3.90(m，1H)，3.84(m，1H)，3.71(m，4H)，3.30(d，1H)，3.12(m，2H)，2.25(m，2H)，1.98(m，2H)，1.85(d，6H)，1.65(m，4H)，1.44(m，4H)，1.27(m，2H)。MS(m/z)：438(M⁺)；

5、化合物α用强碱性阴离子交换树脂(Dow化学公司所生产的Dowex50×8)交换处理后可将化合物α的溴离子置换成氢氧根离子，即得3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-甲基-氢氧化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷，该化合物属强碱，在水溶液中与甲磺酸反应可得化合物III，旋蒸除去水分，即得化合物III的白色固体(总收率81％)。

¹HNMR(CDCl₃)：7.42(d，2H)，7.26(g，2H)，7.23(t，1H)，4.28(m，1H)，3.98(br，1H)，3.88(m，1H)，3.73(m，4H)，3.32(d，1H)，3.22(s，3H)，3.12(m，2H)，2.96(s，3H)，2.25(m，2H)，1.96(m，2H)，1.65(m，4H)，1.44(m，4H)，1.26(m，2H)。MS(m/z)：425(M⁺)；

6、化合物I用强碱性阴离子交换树脂(Dow化学公司所生产的Dowex50×8)交换处理后可将化合物I的溴离子置换成氢氧根离子，即得3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-氢氧化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷，该化合物属强碱，在水溶液中与甲磺酸反应可得化合物IV，旋蒸除去水分，即得化合物IV的白色固体(总收率83％)。

¹HNMR(CDCl₃)：7.43(d，2H)，7.30(g，2H)，7.22(t，1H)，4.30(m，1H)，3.97(br，1H)，3.875(m，1H)，3.72(m，4H)，3.37(q，2H)，3.32(d，1H)，3.11(m，2H)，2.95(s，3H)，2.27(m，2H)，1.96(m，2H)，1.90(t，3H)，1.66(m，4H)，1.44(m，4H)，1.27(m，2H)。MS(m/z)：439(M⁺)；

7、化合物II用强碱性阴离子交换树脂(Dow化学公司所生产的Dowex50×8)交换处理后可将化合物II的溴离子置换成氢氧根离子，即得3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-氢氧化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷，该化合物属强碱，在水溶液中与甲磺酸反应可得化合物V，旋蒸除去水分，即得化合物V的白色固体(总收率82.5％)。

¹HNMR(CDCl₃)：7.42(d，2H)，7.30(g，2H)，7.20(t，1H)，4.31(m，1H)，3.96(br，1H)，3.91(m，1H)，3.88(m，1H)，3.72(m，4H)，3.31(d，1H)，.11(m，2H)，2.96(s，3H)，2.25(m，2H)，1.98(m，2H)，1.87(d，6H)，1.66(m，4H)，1.44(m，4H)，1.25(m，2H)。MS(m/z)：453(M⁺)；

实施例二：组合物及其制备

滴鼻剂、喷鼻剂、气雾剂、粉雾剂的制备和用度。

1、单方滴鼻剂

滴鼻剂组成由下列要素组成

化合物V	12mg
化合物V	12mg	苯扎氯铵	3mg
H<sub>2</sub>O	10ml	苯扎氯铵	3mg

在10万级的生产条件下，将活性成分(化合物V)及抑菌剂(苯扎氯铵)溶于H₂O中，灌装于小棕色瓶中，并有纺锤型盖帽，该盖帽可用于滴鼻。

该单方滴鼻剂，每10ml水中可溶解化合物V2.0-25mg，配制成不同浓度的滴鼻剂；抑菌剂苯扎氯铵用量可在1-5mg范围内变化。

单方滴鼻剂每次2-3滴(0.1ml-0.15ml)/鼻孔，约20-300μg/鼻孔剂量。

2、复方滴鼻剂

滴鼻剂组成由下列要素组成

化合物II	2.5mg
化合物II	2.5mg	非诺特罗	10mg
苯扎氯铵	5mg	非诺特罗	10mg
苯扎氯铵	5mg	H<sub>2</sub>O	10ml

在10万级的生产条件下，活性成分(化合物II和非诺特罗)及抑菌剂(苯扎氯铵)溶于H₂O中，灌装于小棕色瓶中，并有纺锤型盖帽，该盖帽可用于滴鼻。抑菌剂苯扎氯铵用量可在1-5mg范围内变化。该复方滴鼻剂每次2-3滴(0.1ml-0.15m1)/鼻孔，约25μg/鼻孔剂量。

3、定量泵喷鼻剂

喷鼻剂组分由下列要素组成

化合物I	3.33mg
化合物I	3.33mg	苯扎氯铵	5.00mg
1N HCl(pH 4-6)	0.018mg	苯扎氯铵	5.00mg
1N HCl(pH 4-6)	0.018mg	纯H<sub>2</sub>O	2.0ml

在10万级的生产条件下，将上述组分溶于纯H₂O中，装于瓶中，安装适于鼻腔喷雾的定量泵，该泵每喷为70-90μl。每1-2喷/鼻孔，约21-60μg/鼻孔剂量。

为了在治疗严重病人时获得更大的剂量，化合物I的量可增加，如用16.67mg替代3.33mg。

上述1～3制备的滴鼻剂或喷鼻剂中，其中所含化合物可以在2～80mg/10ml变化，可以根据实际需要选择，在此不一一列举。

4、含有抛射剂的定量气雾剂

含有抛射剂的定量气雾剂(混悬型)

在10万级的生产条件下，将活性成分(化合物I)经微粉化处理，然后与表面活性剂和抛射剂1-氟-3氯甲烷，2-氟-2氯甲烷和4-氟-2氯乙烷按比例混合，然后通过压装机灌封于定量压力容器中即可。每瓶10g，每喷100mg，含化合物I为20μg。

5、含有抛射剂的定量气雾剂

含有抛射剂的定量气雾剂(溶液型)

化合物IV	0.28g
化合物IV	0.28g	丙二醇	42g
无水乙醇	210g	丙二醇	42g
无水乙醇	210g	2-氟-2氯甲烷 4-氟-2氯乙烷	231g 971g

在10万级的生产条件下，将活性成分(化合物IV)溶解于丙二醇与无水乙醇的混合溶酶中，在室温条件下分装入容器中，装上阀门，扎紧风帽，然后通过压装机将液化抛射剂2-氟-2氯甲烷和4-氟-2氯乙烷等沿着阀杆外侧或经过阀门而定量压入容器内，即可。每瓶10g，每喷100mg，含化合物IV为20μg。

6、含有抛射剂的定量气雾剂

含有抛射剂的定量气雾剂(溶液型)

化合物V	0.28g
化合物V	0.28g	丙二醇	35g
无水乙醇	382g	丙二醇	35g
无水乙醇	382g	2-氟-2氯甲烷和4-氟-2氯乙烷)	540g 443g

在10万级的生产条件下，将活性成分(化合物V)溶解于丙二醇与无水乙醇的混合溶酶中，在室温条件下分装入容器中，装上阀门，扎紧风帽，然后通过压装机将液化抛射剂沿着阀杆外侧或经过阀门而定量压入容器内，即可。每瓶10g，每喷100mg，含本发明化合物(化合物V)20μg。

在4、5、6制备的剂型中，所用的抛射剂不限于表中所列的几种以及其组合，可以从三氯一氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯一氟甲烷、一氯二氟甲烷、二氯四氟甲烷、一氯五氟甲烷、一氯二氟乙烷、二氟乙烷或八氟环丁烷进行任意选择或形成混合物。

在4、5、6制备的气雾剂中，其中所含化合物可以在2～80mg/10ml，每喷含所述化合物10～100μg，可以根据实际需要选择，在此不一一列举。

7、胶囊型粉雾剂

胶囊型粉雾剂由下列要素组成

化合物III	0.05 g
化合物III	0.05 g	乳糖	98.95g
苯甲酸钠	1.0g	乳糖	98.95g

在10万级的生产条件下，将活性成分(化合物III)与乳糖、苯甲酸钠经微粉化处理，粒径应在10μm以下，然后充分混合均匀，灌封于胶囊中即可。每胶囊40mg，吸入一次含本发明化合物20μg。本例治疗呼吸系统疾病的药物组合物，乳糖为稀释剂，稀释剂还可已选用阿拉伯糖、葡聚糖、甘露糖醇、甘露醇、木糖醇、蔗糖、果糖、山梨醇、麦芽糖、氨基酸或葡萄糖等；苯甲酸钠为润滑剂，也可以硬脂酸镁作为润滑剂。

8、定量阀门容器型粉雾剂的制备

定量阀门容器型粉雾剂由下列要素组成

化合物V	0.05g
化合物V	0.05g	葡聚糖	99.45g
硬脂酸镁	0.5g	葡聚糖	99.45g

在10万级的生产条件下，将活性成分(化合物V)与乳糖、苯甲酸钠经微粉化处理，粒径应在10μm以下，然后充分混合均匀，灌封于定量阀门容器中即可。每喷给药物组合物40mg，吸入一次含本发明化合物20μg。本例治疗呼吸系统疾病的药物组合物，葡聚糖为稀释剂，其它可作为稀释剂的材料有、阿拉伯糖、乳糖、甘露糖醇、甘露醇、木糖醇、蔗糖、果糖、山梨醇、麦芽糖、氨基酸或葡萄糖等，硬脂酸镁为润滑剂，也可以苯甲酸钠作为润滑剂。

用7、8方法制备的粉雾剂中，其中所含化合物可以在0.01～0.10wt％变化，每喷含所述化合物10～100μg，可以根据实际需要选择，在此不一一列举。

需要说明的是：实施例二全部制剂中，活性组分(本发明化合物)的剂量可被改变，每个处方中的活性成分可以更换成另外五种的任意一种或者是几种化合物的混合物。辅料组分也可改变以满足不同需要，如苯扎氯铵可以用苯扎溴铵、苯甲醇、苯甲酸、三氯叔丁醇、对羟基苯甲酸酯类、山梨酸、苯酚、麝香草酚和挥发油类来替代。小分子醇除了无水乙醇和丙二醇外，小分子聚乙二醇也是常用的溶酶。

实施例三：狗喷鼻给药与小鼠肌注给药后的检测与生物半衰期的测定

1、狗的喷鼻给药

试验采用比格犬，喷鼻给以化合物α、I、II、III、IV、V各1mg，进行药代动力学试验，采用GC-MS/SIM分析方法测定血药浓度。对血中药-时曲线进行分析并计算相应的药代动力学参数，结果表明，六种化合物喷鼻后吸收率分别为19.8±1.2％、20.5±3.2％、22.1±3.3％、20.7±4.3％、19.5±2.7％、21.6±3.4％，给药后15min，所有犬血中都可以检出所给的化合物，30min血药浓度达到较高水平，30-40min达到高峰。2h后血药浓度缓慢下降，血药浓度维持相当浓度至少达48h以上。各化合物在喷鼻给药后在血中的药-时拟合曲线，均符合一级吸收二室模型，基本动力学参数t_1/2β和Tmax分别为11.403±1.314h、10.345±1.216h、12.146±1.265h、11.232±1.366h、12.341±1.073h、11.657±1.272h和0.546±0.113h、0.498±0.087h、0.502±0.114h、0.469±0.164h、0.513±0.065h、0.560±0.205h；六种化合物的半衰期均达10小时以上(参见图1，异丙阿托为对照品，直接对人给药)，它们相互之间都很接近。Cmax分别为13.203±2.113μg.L^-1、15.178±2.663μg.L^-1、14.122±2.516μg.L^-1、13.635±2.506μg.L^-1、12.913±3.003μg.L^-1、13.368±2.435μg.L^-1。

2、小鼠肌注给药

小鼠分别单次肌注六种化合物(0.15mg/kg)后，药-时拟合曲线均符合一级吸收二室模型。t_1/2β和Tmax分别为12.35±1.073h、11.36±1.256h、12.60±1.529h、10.98±2.075h、11.56±1.354h、12.23±1.713h和0.228±0.163h、0.203±0.098h、0.249±0.103h、0.231±0.036h、0.197±0.118h、0.225±0.123h，相互之间没有明显差别，P＞0.05。六种化合物以及对照品异丙阿托(直接对人注射)的半衰期表示在图2，可以看出本发明所提供的六种化合物的半衰期均达10小时以上，而对照品异丙阿托的半衰期在2小时以下。

实施例四：药物组合物对大鼠鼻粘膜炎症的防治疗作用

为了了解组合物滴鼻剂和喷鼻剂对变应性鼻炎是否有治疗作用，特选定同类已上市制剂盐酸左卡巴斯汀(比利时杨森)和伯克纳(葛蓝素)作为阳性对照药，以判定其治疗效果。为此，建立了大鼠变应性鼻炎模型，并观察所述制剂对其的治疗效果。

1、模型的建立

选取健康合格大鼠，随机分为试验组、盐酸左卡巴斯汀组、伯克纳组(商品制剂)、模型组和阴性对照组，每组15只动物，雌雄各半。各用药组以及模型组动物给予20mg卵清白蛋白，30mgAl(OH)₃溶于1ml生理盐水中，进行腹腔注射，隔日一次，连续8次(15天)，自第16天开始，以5％卵清白蛋白生理盐水溶液滴鼻激发，每次100ul，连续7天。阴性对照组10只大鼠，以1ml生理盐水加30mgAl(OH)₃进行腹腔注射，以生理盐水滴鼻，时间同其余各组。末次鼻腔致敏后30min内，采用叠加量化记分法对大鼠进行行为学指标评分，评分标准如下。

(1)喷嚏：连续3-9个为1分，10-14个为2分，≥15个为3分

(2)鼻痒：轻搔鼻2-3次为1分，3-5次为2分，5次以上为3分

(3)流涕：流至鼻孔为1分，超过前鼻孔为2分，涕流满面为3分

叠加总分≥5分表示造模成功

造模结束，大约有70％的成功率，调整每组大鼠数为10只。

2、治疗阶段

模型成功的动物按前述剂量治疗2周，每天给药一次，给药容量为5ul/100g，并间天给一次5％的卵清白蛋白生理盐水溶液维持，阴性对照组以溶媒给药，生理盐水维持。在给药的最后一天(14天)给药后半小时给予5％卵清白蛋白生理盐水溶液再次激发，观察症状打分，并于半小时后处死，取血、鼻分泌物以及完整鼻道。血离心取血清用ELISA测卵白蛋白特异性IgE；鼻分泌物用滤纸吸取打匀浆，并离心取上清用ELISA测卵白蛋白特异性IgE；完整的半边鼻腔送病检，进行鼻粘膜的组织学观察；血清还可做被动过敏实验(PCA)；各组检测值间行t检验。

3、指标检测

a)血清中OVA特异性IgE的检测方法

i.以20ug/ml的OVA包被酶标板，每孔100ul，4℃湿盒过夜，OVA用碳酸盐缓冲液稀释。

ii.洗涤：PBS-Tween0.05％洗板5次。

iii.封闭：1％的牛血清白蛋白(以洗液配制)，100ul/孔，37℃孵育1小时，以封闭未被OVA占据的微孔表面。

iv.洗涤：PBS-Tween0.05％洗板5次。

v.加样：血清样品用PBS稀释2倍后加入酶标板中，100ul/孔，并作复孔，37℃孵育2小时。

vi.洗涤：PBS-Tween0.05％洗板5次。

vii. 结合反应：生物素化的小鼠抗大鼠IgE以PBS1：2000稀释后，加入酶标板中，100ul/孔，37℃孵育2小时。

viii.洗涤：PBS-Tween0.05％洗板5次。

ix.辣根酶标记的链霉亲合素以PBS1：2000稀释后加入酶标板中，100ul/孔，37℃孵育0.5小时。

x.洗涤：PBS-Tween0.05％洗板5次。

xi.显色反应：加入TMB底物显色液，100ul/孔，37℃孵育20分钟。

xii.终止反应：加入50ul/孔终止液以终止反应。

xiii.测在全自动酶标仪450nm波长下的0D值。

xiv.以各OD值行t检验。

b)鼻分泌物中的OVA特异性IgE的检测方法

试剂及方法同测血清中的OVA特异性IgE，包被浓度也为20ug/ml，鼻粘膜分泌物的稀释比也为1∶2，其余工作浓度也一致。

c)被动皮肤过敏试验(PCA)

于末次给药激发后半小时，取血分离血清。每组动物的血清取部分混合。将14只去卵清白蛋白喂养的大鼠随机分为7组，减去背毛，分别皮内注射1∶10稀释的不同组别的混合血清0.1ml，每只背部注射2个点，48小时后进行抗原攻击，尾静脉注射1ml含2mg的卵清白蛋白和10mg伊文思兰的生理盐水溶液，30分钟后处死大鼠，剥离背部皮肤，将蓝斑皮片剪下，经丙酮-生理盐水(7∶3)浸泡过夜，3000r/min离心10分钟，取上清液，用紫外分光光度计610nm处测吸光度值，各组取2只大鼠共4个点皮片浸液的OD均值，行t检验。

d)鼻粘膜病理学评分

取大鼠鼻鼻腔于10％中性甲醛溶液中固定，一周后切取部分鼻腔，石蜡包埋切片；剩余部分剥离粘膜，石蜡包埋，切片，两者都行HE染色，光镜观察。鼻粘膜组织病理学评分标准：±，1分；+，2分；++，3分。评分项目包括：血管增生情况，炎症情况，腺体增生情况和上皮脱落情况，共计4项，分别评分，累计4项分值进行统计学检验。

4、试验结果

实验开始时每组动物数为15只，造模结束时模型成功率大约70％，调整每组大鼠数为10只，每组检测结果值也就只有10例。

(1)血清中OVA特异性IgE的检测结果

各组与模型组比较，均有显著差异(P＜0.01)；与阴性对照组比较，实验组、盐酸左卡巴斯汀组和伯克纳组均无差异，具体结果如表1所示。

表1组合物喷鼻剂与滴鼻剂对大鼠血清IgE水平的影响(X±SD，N＝10)

与模型组比，*P＜0.05，**P＜0.01；与阴性对照组比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

由上表可知，实施例组合物有降低血清OVA特异性IgE水平的作用。

(2)鼻分泌物中的OVA特异性IgE的检测结果

各组与模型组比较，各组均为有显著性差异(P＜0.01)；与阴性对照组比较，实施例二之1组无差异，其余各组均有差异；具体结果如表2所示。

表2组合物喷鼻剂与滴鼻剂对大鼠鼻分泌物中IgE水平的影响(X±SD，N=10)

由上表可知，实施例组合物喷鼻剂与滴鼻剂均有降低大鼠鼻分泌物中特异性IgE的作用。

(3)被动皮肤过敏试验(PCA)结果

各组与模型组比较，各组均为有显著性差异(P＜0.01)；与阴性对照组比较，实施例组、盐酸左卡巴斯汀组、伯克纳组无差异；具体结果如表3所示。

表3组合物喷鼻剂与滴鼻剂的皮肤被动过敏实验结果(X±SD，N＝4)

由表3可知，实施例组合物喷鼻剂与滴鼻剂均有降低大鼠血清OVA特异性IgE的作用，可降低皮肤色斑的吸光度值。

(4)大鼠的行为学打分结果

末次激发后，按照前述打分标准对大鼠进行打分。各组相对与模型组均有显著性差别；与阴性对照组比较，实施例组合物和伯克纳组为有差异，盐酸左卡巴斯汀组为有显著性差异，具体结果如表4所示。

表4组合物喷鼻剂与滴鼻剂对大鼠行为学打分的影响(X±SD，N＝10)

由上表可知，实施例组合物喷鼻剂与滴鼻剂均能减轻大鼠的喷嚏、流涕、鼻痒等鼻炎症状。

(5)大鼠的一侧鼻孔分泌物称重(mg)

于末次给药后活杀大鼠，取一侧鼻孔分泌物称重。与模型组比较，实施例组合物组和伯克纳组与其有差异(P＜0.05)，盐酸左卡巴斯汀组有显著性差异；与阴性溶媒组比较，实施例二之1组和阿托品组无差异，其余各组均有显著性差异，具体结果如表5所示。

表5组合物喷鼻剂与滴鼻剂对大鼠一侧鼻分泌物的影响(X±SD，N=10)

由表5可知，苯环喹溴铵喷鼻剂有减少鼻炎大鼠鼻分泌物的作用。

(6)大鼠鼻粘膜病理学评分

取大鼠鼻粘膜切片于光镜下100倍放大观察评分。结果显示，各组评分明显低于模型组(P＜0.01)；与阴性对照组比较，实施例组、盐酸左卡巴斯汀组、伯克纳组均无差异，评分明显高于阴性对照组，具体结果如表6所示。

表6组合物喷鼻剂与滴鼻剂对大鼠鼻粘膜病理学评分的影响(X±SD，N＝10)

由上表可知，实施例喷鼻剂与滴鼻剂均有减轻鼻炎大鼠鼻粘膜病理学改变的作用。

5、试验结论

实施例组合物喷鼻剂及滴鼻剂对变应性鼻炎大鼠的各项指标均有一定的影响，其能有效缓解变应性鼻炎的症状，降低血和鼻分泌物中的IgE水平，减少鼻分泌物，并能减少鼻粘膜中的慢性炎症细胞，减少血管扩张和腺体增生，对大鼠变应性鼻炎有治疗作用。

实施例五、药物组合物对特异性过敏性哮喘的治疗效果。

建立豚鼠特异性过敏性哮喘模型，验证粉雾剂、混悬型气雾剂和溶液型气雾剂对豚鼠的治疗作用。选用体重在200-220g的健康豚鼠，雌雄各半。给每只豚鼠腹腔注射10％的卵清白蛋白生理盐水溶液1.0ml(卵清白蛋白100mg)，随机分为空白对照组、阳性对照组[爱全乐(异丙托溴铵气雾剂)，10ml/瓶，20μg/喷，德国勃林格林格翰(Boehringer IngeIheim)公司生产]、本发明组合物气雾剂组(实施例二之4、5、6，本发明组合物气雾剂组(实施例二之7、8)，每组10只。于注射后第6天开始每日经呼吸道喷雾给药一次，连续给药5天后，将动物单独置密闭的钟罩内，用超声雾化器将0.5％的卵清白蛋白生理盐水溶液均匀地喷入钟罩内30s，观察并记录自喷入卵清白蛋白生理盐水溶液至产生腹肌收缩之间的时间，即为哮喘潜伏期。所测数据经t检验比较组间差异。

结果：当给豚鼠腹腔注射卵清白蛋白10天后，再次接触同一抗原时，便出现了以呼吸道的水肿和痉挛为主的抗原抗体反应，称之为特异性过敏性哮喘。试验证明，本发明气雾剂对此特异性反应具有明显的抑制作用，哮喘潜伏期较空白对照组显著延长，P＜0.01。结果见表7。

表7：本发明组合物气雾剂和粉雾剂对豚鼠过敏性哮喘的影响(sX±SD)

经过上述试验结果，本领域技术人员熟知，本发明气雾剂对哺乳动物包括人呼吸系统疾病、尤其是气道阻塞性疾病有良好的治疗作用。

Claims

1.一种治疗鼻分泌过度和慢阻肺的药物组合物，其含有：

3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-甲基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-甲基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、和3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷中的一种化合物；

非诺特罗，加入比例为相对所述化合物10～400∶100重量份；和

惰性载体。

2.根据权利要求1所述药物组合物，其特征在于，所述化合物为3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷或3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-甲磺酸化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷。

3.根据权利要求1所述药物组合物，其特征在于，所述化合物为3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷。

4.根据权利要求1或2或3所述药物组合物，其特征在于，为滴鼻剂或喷鼻剂，其中含有所述化合物2～80mg/10ml，所述惰性载体为选自苯扎氯铵、苯扎溴铵、苯甲醇、苯甲酸、三氯叔丁醇、对羟基苯甲酸酯类、山梨酸、苯酚、麝香草酚和挥发油中的一种或几种的混合。

5.根据权利要求4所述药物组合物，其特征在于，为滴鼻剂，由3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-异丙基-溴化-1-氮杂双环{2，2，2，}辛烷、非诺特罗和苯扎氯铵按重量比2.5∶10∶5混合溶于水中制成。

6.权利要求1至5任一所述药物组合物的应用，其特征在于可将其用于制备预防和治疗哺乳动物和人的各种急慢性鼻炎的药物。