CN1630666A - 因子ⅷc2结构域变体 - Google Patents

Abstract

血友病患者用因子VIII治疗后，人因子VIII的特定氨基酸座位与患者的抑制抗体相互作用。揭示的修饰因子VIII中的氨基酸序列通过在一个或多个特定氨基酸座位取代来改变。修饰因子VIII对血友病患者有效，它以避免或防止抑制抗体的作用。

Description

因子VIII C2结构域变体

                       参照相关专利申请

本申请要求提交于2001年11月30日的美国临时专利申请No.60/334,569的优先权。

                       联邦研究支持的说明

本发明，至少部分，是用国立卫生院的基金(合同号FO1-HL46215)完成的。因此，美国政府对本发明具有一定权利。

                          发明领域

本发明一般涉及包含氨基酸取代的修饰的哺乳动物因子VIII，与获得它们的蛋白质或其它因子VIII制品，如人因子VIII相比，所述氨基酸取代降低了其免疫原性和/或抗原性。

                          发明背景

当血小板附于损伤位置的受损血管切口时，血液凝固开始。随后，在酶调节的级联反应中，可溶纤维蛋白原分子被凝血酶转化成纤维蛋白的不溶链，使血小板在血栓中保持一起。在级联反应各步，蛋白质前体转化成蛋白酶，裂解此系列中的下一个蛋白质。大部分步骤需要辅因子。

因子VIII作为血液中失活前体循环，紧密且非共价结合冯维勒因子。因子VIII由凝血酶或因子Xa蛋白分解活化，使它与冯维勒因子分离并活化它在级联中的促凝血功能。活性形式的蛋白因子VIII是一种辅因子，使因子IXa对因子X活化的催化效率增加几个数量级。

因子VIII或抗因子VIII抗体有缺陷的人不用因子VIII治疗不能控制内出血，内出血会引起多种严重症状，从关节炎症反应到早期死亡。美国约有10,000个严重血友病患者，他们可通过灌输人因子VIII来治疗，如果以足够频率和浓度施用人因子VIII能恢复血液正常的凝固能力。因子VIII的经典定义是正常血浆中存在的物质，修正血友病A个体血浆中的凝固缺陷。

抑制因子VIII活性的抗体(“抑制剂”或“抑制抗体”)的发展是治疗血友病患者中的一个严重并发症。约20％血友病A患者中自身抗体应答因子VIII的治疗灌输而发生。在前面发展抗体的未治疗血友病A患者中，抑制剂通常在治疗一年内发生。此外，使因子VIII失活的自身抗体偶尔在前面具正常因子VIII水平的个体中发展。因子VIII(fVIII)的抑制抗体(抑制剂)可在接受因子VIII灌输的血友病A患者中作为同种抗体发展，或在非血友病患者中作为自身抗体发展[Hoyer，L.W.和D.Scandella(1994)Semin.Hematol.31：1-5]。A1-A2-B-ap-A3-C1-C2 fVIII分子中的A2、ap-A3和C2结构域抗原表位的抗体在大部分抑制剂血浆中产生抗凝血作用[Prescott，R.等，(1997)Blood 89：3633-3671；Barrow，R.T.等，(2000)Blood 95：557-561]。18-kDa C2结构域定义为单链人因子VIII中的丝氨酸2173-酪氨酸2332残基，包含因子VIII正常促凝血功能必需的磷脂膜结合位点。特异于C2结构域的人抗因子VIII抗体抑制此相互作用[Arai，M.等，(1989)J.Clin.Invest.83：1978-1984]。与此一致的是，磷脂保护因子VIII不被因子VIII抑制剂失活[Arai，M.等，同上；Barrowcliffe，T.W.等，(1983)J.Lab.Clin.Med.101：34-43]。C2结构域也包含部分冯维勒因子(vWf)结合位点[Saenko，E.L.等，(1994)J.Biol.Chem.269：11601-11605；Saenko，E.L.和Scandella，D.(1997)J.Biol.Chem.272：18007-18014]。一些抑制剂可通过干扰此相互作用来见效[Shima，M.等，(1995)Br.J.Haematol.91：714-721；Saenko，E.L.等，(1994)J.Biol.Chem.271：27424-27431；Gilles，J.G.等，(1999)Thromb.Haemost.82：40-45]。

倘若抑制剂效价足够低，治疗血友病A患者可通过增加因子VIII的剂量。然而，通常抑制剂效价高到不能通过施用因子VIII克服。另一种策略是绕过正常止血中对因子VIII的需要，使用因子IX复合制品(例如KONYNE^，Proplex^)或重组人因子VIIIa。此外，由于猪因子VIII与抑制剂的反应性通常显著低于人因子VIII，使用部分纯化的猪因子VIII制品(HYATE：C^)。许多发展人因子VIII抑制抗体的病人成功地用猪因子VIII治疗且长时间耐受这种治疗。然而，施用猪因子VIII还不是完善的方法，因为一次或多次灌输后抑制剂可对猪因子VIII发展。

一些获自人血浆的因子VIII不同纯度制品可商业购买用于治疗血友病A。这些包括获自许多供体收集血液的部分纯化因子VIII，用热和去垢剂处理病毒但含显著水平的抗原性蛋白质；单克隆抗体-纯化因子VIII，具较低水平的抗原性杂质和病毒感染；以及正在进行临床试验的重组人因子VIII。不幸的是，人因子VIII在生理浓度和pH不稳定，在血液中存在浓度非常低(0.2μg/ml血浆)，特异凝固活性低。

血友病患者需要每天更新因子VIII以防止出血和导致变形性血友病关节病。然而，供给不足和治疗使用中出现的问题是由于分离和纯化中的困难、免疫原性和被病毒(如HIV、肝炎病毒等)感染的风险造成的。使用重组人因子VIII或部分纯化的猪因子VIII不能解决所有问题。

与普遍使用、商业购买、获自血浆的因子VIII相关的问题引起发展更好因子VIII产品的巨大兴趣。需要具更特异活性的因子VIII分子从而适当凝固活性可以较小剂量传送；在所选pH和生理浓度稳定的因子VIII分子；免疫原性较小的因子VIII分子；在已发展出人因子VIII抗体的病人中不被抑制的因子VIII分子。

Lollar的美国专利6,180,371描述了人因子VIII A2结构域中的氨基酸取代，取代改变所得因子VIII分子的抗原性。Lollar的美国专利5,859,204揭示了人因子VIII 484-509区域中的氨基酸位点特异取代。更具体的是，所述’204专利教授了修饰因子VIII相对人蛋白质在位置485、487、488、489、492、501或508发生氨基酸取代。Lollar等的美国专利5,888,974揭示了杂合促凝血因子VIII，通过分离和重组人与其它非人因子VIII亚基或结构域来产生。Lollar等的美国专利5,663,060描述了杂合因子VIII，具有非人和人的重及轻链亚基的组合。美国专利5,583,209描述了编码’060专利中杂合因子VIII分子的核酸。美国专利5,364,771描述了纯化的杂合因子VIII，由人和猪的重及轻链亚基组合形成。同样揭示了人因子VIII，其中猪A2结构域取代人A2结构域。

美国专利6,180,371；5,888,974；5,859,204；5,744,446；5,663,060；5,583,209和5,364,771(所有纳入本文供参考)没有揭示因子VIII C2结构域中的取代或提出特异氨基酸取代，取代会导致抗原性或免疫原性低于野生型因子VIII或相应重组因子VIII。

因此，本发明的一个目的是提供修正患者血友病的修饰因子VIII，患者缺乏因子VIII或具有因子VIII C2结构域的抑制抗体。

本发明的进一步目的是提供治疗血友病的方法。

本发明的另一个目的是提供在所选pH和生理浓度稳定的因子VIII。

本发明的又一个目的是提供凝血活性高于人因子VIII的因子VIII。

                         发明概述

本发明一般涉及重组修饰因子VIII。本发明的组合物提供分离、纯化的重组修饰因子VIII分子，分子具凝血活性，其中重组因子VIII在C2结构域有氨基酸取代使抗原性低于正常人因子VIII或其它具正常人因子VIII C2结构域的因子VIII。以提供编码本发明的组合物的DNA序列以及产生修饰因子VIII的方法。治疗需要因子VIII处理的病人的方法也在本发明范围内。

发明的第一个实施方案提供的组合物含C2结构域有氨基酸取代的哺乳动物因子VIII。修饰重组因子VIII C2结构域中的氨基酸取代使抑制抗体抗凝血活性低于正常人因子VIII或其它具正常人因子VIII C2结构域的因子VIII。此实施方案的组合物有凝血活性且减少与定向抗C2结构域的抑制抗体的结合。

在此实施方案的一个方面，组合物涉及C2结构域有至少一个氨基酸取代的重组哺乳动物因子VIII，取代位置对应于人因子VIII的R2215、W2313、R2220、R2320、Y2195、F2196和F2290。此实施方案的组合物可以是单突变、双突变、三突变或其它多突变。发明的氨基酸取代例子包括但不限于R2215A、R2215K、W2313A、W2313F、R2220A、R2220K、R2320A、R2320K、Y2195H、Y2195A、F2196L、F2196A、F2290S和F2290A，它们都涉及人因子VIII编号系统，其中氨基酸1号是成熟因子VIII的氨基末端丙氨酸。优选重组猪或人因子VIII中的取代。优选的氨基酸取代包括降低免疫反应性的取代。优选在位置2220、2196和2215取代。

发明的第二个实施方案提供新的杂合因子VIII组合物，含C2结构域有氨基酸取代的重组因子VIII。此实施方案的新组合物通过制备C2结构域有氨基酸取代的杂合因子VIII来构建。因子VIII的其它结构域可获自多种哺乳动物如人、小鼠、猪、大鼠和犬等。此实施方案的新组合物有凝血活性且减少与抑制抗体的结合。发明的氨基酸取代例子包括但不限于R2215A、R2215K、W2313A、W2313F、R2220A、R2220K、R2320A、R2320K、Y2195H、Y2195A、F2196L、F2196A、F2290S和F2290A，它们都涉及人因子VIII编号系统，其中氨基酸1号是成熟因子VIII的氨基末端丙氨酸。优选重组猪或人因子VIII中的取代。优选的氨基酸取代包括降低免疫反应性的取代。优选在位置2220、2196和2215取代。

发明的另一个实施方案提供DNA序列，包括本发明新组合物的编码序列。发明的又一个实施方案提供产生发明新组合物的方法。

发明也提供降低因子VIII分子免疫原性的方法以及通过此方法生成的免疫原性减少的重组因子VIII。具体的是，描述了修饰重组因子VIII分子和产生这些免疫原性减少的分子的方法，免疫原性减少的分子在C2结构域有取代。

还提供了了治疗因子VIII缺陷病人的药物组合物和方法，包括施用重组修饰因子VIII和其杂合物。

                             附图简述

图1A-1H一起提供了人、猪和小鼠因子VIII氨基酸序列的序列比对。

                             发明详述

本发明一般涉及重组修饰因子VIII。本发明的组合物提供了具有凝血活性的分离、纯化的重组修饰因子VIII分子。发现因子VIII C2结构域中的突变使突变体抑制抗体的结合低于正常人因子VIII或具有正常人因子VIII C2结构域的因子VIII，突变已用最近获得的x-射线结构鉴定。因此，本发明的组合物提供了在C2结构域有氨基酸取代的重组因子VIII，这种取代使其抗原性低于正常人因子VIII或具正常人因子VIII C2结构域的因子VIII。此外，本发明还提供了在C2结构域有氨基酸取代的重组因子VIII，这种取代使其抗原性低于其它可获得的因子VIII制品。本发明还提供了在C2结构域有降低免疫原性的氨基酸取代的重组因子VIII。发明的相关实施方案提供了治疗需要因子VIII处理的病人的方法、制造本发明的新重组因子VIII组合物的方法、编码新重组因子VIII蛋白质的DNA序列、以及包含新因子VIII蛋白质的药物组合物。

本发明进一步提供活性重组杂合因子VIII分子或其片断、编码这些杂合物的核酸序列、制备和分离它们的方法以及确定它们特征的方法。这些杂合物可以是人/动物、动物/动物、猪/人或其它这类杂合因子VIII分子，且进一步具有至少一个C2结构域的特异氨基酸序列，包括一类因子VIII的一个或多个独特氨基酸用于取代其它类因子VIII的对应氨基酸序列(或氨基酸)；或具有至少一种C2结构域的序列，包括与因子VIII没有已知序列同一性的一个或多个氨基酸，因子VIII取代人、动物、猪或杂合因子VIII中的特异氨基酸序列。所得重组杂合因子VIII与获得该因子的蛋白质相比，对因子VIII抑制抗体的免疫反应性降低或消失。

如本文所用，“对应的”核酸或氨基酸或两者的序列存在于因子VIII分子或其片断的位点中，结构和/或功能与其它种类因子VIII分子的位点相同，尽管核酸或氨基酸数量可能不同。“对应于”另一种类因子VIII序列的DNA序列完全对应此序列并在严紧条件下与指定的SEQ ID NO.序列杂合。“对应于”另一种因子VIII序列的DNA序列也包括一种序列，此序列使VIII或其片断表达，且如果不是因为遗传密码的简并性会与指定的SEQ ID NO.序列杂合。

“独特”氨基酸残基或序列在这里指一个种类因子VIII分子中的氨基酸序列或残基，它与另一种类因子VIII序列分子中的同源残基或序列不同。

“特异活性”在这里是指会修正人因子VIII缺乏血浆的凝固缺陷的活性。特异活性在标准测定中以凝固活性单位每毫克总因子VIII蛋白质测量，其中人因子VIII缺乏血浆的凝固时间与正常人血浆相比较。一个单位的因子VIII活性是一毫升正常人血浆中存在的活性。在测定中，凝固形成时间越短，所测因子VIII活性活性越高。猪因子VIII在人因子VIII测定中具有凝固活性。

“表达”指使用遗传信息生成产物时发生的一系列过程。编码猪因子VIII氨基酸序列的DNA可在哺乳动物宿主细胞中“表达”以产生猪因子VIII蛋白质。物质、遗传结构、宿主细胞和可表达特定DNA序列的条件在本领域熟知且可操作用于影响表达的时间和量以及表达蛋白质的胞内或胞外位置。例如，通过在编码猪因子VIII的DNA 5’末端(5’末端习惯指编码蛋白质NH₂末端的终端)包含编码信号肽的DNA，表达蛋白质从宿主细胞内部运输到培养基中。信号肽编码DNA结合猪因子VIII编码DNA具有优势，因为表达因子VIII输出到培养基中使纯化过程简化。优选信号肽是哺乳动物因子VIII信号肽。

因子VIII作为约300kDa的单链肽合成，内部序列同源定义“结构域”序列NH₂-A1-A2-B-A3-C1-C2-COOH。如本文所用，因子VIII分子中的“结构域”是连续氨基酸序列，由内部氨基酸序列同一性和凝血酶蛋白裂解位点定义。除非另有说明，当序列与人氨基酸残基序列排列时，因子VIII结构域包括下列氨基酸残基序列：A1，残基Ala1-Arg372；A2，残基Ser373-Arg740；B，残基Ser741-Arg1648；A3，残基Ser1690-Ile2032；C1，残基Arg2033-Asn2172；C2，残基Ser2173-Tyr2332。A3-C1-C2序列包括残基Ser1690-Tyr2332。剩余部分是残基谷氨酸1649-精氨酸1689，通常称为因子VIII轻链活化肽。因子VIII被凝血酶或因子Xa蛋白裂解活化，使它与冯维勒因子分离并形成具促凝血功能的因子VIIIa。因子VIIIa的生物功能是使因子IXa对因子X活化的催化效率增加几个数量级。凝血酶活化的因子VIIIa是160kDa A1/A2/A3-C1-C2异三聚物，在血小板或单核细胞表面与因子IXa和因子X形成复合体。如本文所用，“部分结构域”是形成部分结构域的连续氨基酸序列。

如本文所用，人或动物因子VIII的“亚基”是蛋白质的重和轻链。因子VIII的重链包含三个结构域A1、A2和B。因子VIII的轻链也包含三个结构域A3、C1和C2。

术语“抗原表位”、“抗原位置”和“抗原决定簇”在这里可同义使用，并定义为被抗体特异识别的人或动物因子VIII部分或其片断。它可由任意数量氨基酸残基组成，它可取决于蛋白质一级、二级或三级结构。

术语“免疫原性位置”在这里定义为人或动物因子VIII区域或其片断，特异引起人或动物中因子VIII或片断的生成，通过常规操作测量例如免疫测定，如本文所述的ELISA或Bethesda测定。它可由任意数量氨基酸残基组成，它可取决于蛋白质一级、二级或三级结构。在一些实施方案中，杂合或杂合等价的因子VIII或其片断在动物或人中没有免疫原性或免疫原性低于人或猪因子VIII。

如本文所用，“因子VIII缺乏”包括凝固活性缺乏，由缺陷因子VIII生成、不适当或没有生成因子VIII、抑制剂部分或完全抑制因子VIII来引起。血友病A是因子VIII缺乏类型，来自X-相连基因缺陷和其编码的因子VIII蛋白质缺失或不足。

“诊断测定”在这里包括以一些方式使用抗原-抗体相互作用来检测和/或定量测试样品中存在的具体分子量以选择医学治疗。本领域技术人员已知许多这类的测定。如本文所用，人、猪或修饰猪因子VIII DNA或其片断和其表达蛋白质可全部或部分取代其它已知测定中的相应试剂，其中修饰测定可用于检测和/或定量因子VIII抗体。使用这些试剂即因子VIII DNA或其片断和其表达蛋白质可修改已知测定用于检测人或动物因子VIII的抗体。这些测定包括但不限于ELISA、免疫扩散测定和免疫印迹。本领域技术人员已知使用这些测定的适当方法。如本文所用，包括至少一个蛋白质抗原表位的因子VIII或其片断可用作诊断试剂。其它可使用人、猪或修饰猪因子VIII或其片断的测定例子包括Bethesda测定和抗凝血测定。

术语“编码蛋白质如猪因子VIII的DNA”指一种聚脱氧核糖核酸，其核苷序列包含宿主细胞编码信息，根据已知遗传密码关系用于蛋白质氨基酸如猪因子VIII。

编码人或动物因子VIII或修饰因子VIII的DNA的“表达产物”获自适当宿主细胞中参考蛋白质的表达，包含特征如参考DNA编码蛋白质的翻译前或后修饰，包括但不限于糖基化、蛋白裂解等。在本领域中已知这些修饰可发生且取决于宿主细胞类型和其它因素而有所不同，可产生保持促凝血活性的产物分子同工型。参见例如Lind，P.等，Eur.J.Biochem，232：1927(1995)，纳入本文供参考。

“表达载体”是一种DNA元件，通常为环状结构，能在所需宿主细胞中自动复制或整合到宿主细胞基因组，且也具有一些熟知的特征可表达在适当位点和以适当方向插入载体序列的编码DNA。这些特征可包括但不限于一个或多个启动子序列，用于指导编码DNA和其它DNA元件的转录起始，如增强子、多腺苷酸位点等，所有这些在本领域熟知。因此，例如缺乏启动子的载体可通过插入结合编码DNA的启动子成为表达载体。

“免疫原性降低”在本文定义为促进抗体-抗原对结合能量的氨基酸。已知免疫原性降低的一些氨基酸非限制性例子包括丙氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、丝氨酸和甘氨酸。要理解的是通过特定抗体-抗原对中特定取代获得的免疫原性降低也可由除了上述所列之外的氨基酸取代产生，只要它们影响蛋白质构象、抗原表位可达性等。

减少抑制抗体结合的因子VIII突变的发现

因子VIII C2结构域由氨基酸残基2173-2332组成，包含血友病A或获得性血友病患者中主要的抗原位点或用于大部分抑制抗体的位点。这些抗体的抑制作用主要由于对因子VIII结合促凝血磷脂膜的抑制。人因子VIII C2结构域的X-射线结构显示一个假定的疏水性磷脂膜-结合位点，由含M2199/F2200和L2251/L2252的环组成[Barrow，R.T.等，(2000)Blood 97：169-174]。当这些环被同源猪、鼠或犬残基取代时观察到抗原性降低，由此判断它们参与结合抑制性抗C2抗体。鉴定另外的抗原残基是通过突变膜结合位点周围的7个表面暴露位点来产生下列构建：Y2195H、Y2195A、F2196L、F2196A、R2215K、R2215A、R2220K、R2220A、F2290S、F2290A、W2313F、W2313A、R2320K和R2320A。突变体在幼仓鼠肾细胞中表达。W2313A和R2320K产生低水平表达且没有进一步评估。为促进筛选这些突变体，用重组人/猪因子VIII分子HP20测试44种患者抑制剂血浆的C2特异性，HP20包含取代相应人结构域的猪C2结构域。11种血浆对HP20的交叉反应性与或几乎与无重组B结构域的猪因子VIII一样低，说明它们是C2-特异的。这些血浆中的8种关于C2突变体评估，使用Bethesda测定。对于2种抑制剂血浆(DR和JF)，R2215、R2220和F2196的突变产生的抗原性低于野生型因子VIII，但W2313、R2320、F2290或Y2195不是。剩余6种抑制剂血浆没有证明Bethesda滴读对任何突变体降低，表明它们不识别氨基酸R2215、R2220、F2196、W2313、R2320、F2290或Y2195。

总之，残基R2215、R2220和F2196有助于因子VIII结合抑制抗体。数据证明膜结合环外的氨基酸残基可促进抗体结合。本文所示数据说明通过特异于因子VIII C2结构域的抑制抗体，在这些残基中的免疫原性降低氨基酸取代可减少抑制。膜结合环外的免疫原性降低氨基酸取代如位置2199、2220、2251和2252可预期进一步减少抑制一些与C2结构域反应的抑制抗体，膜结合环中具有类似的取代。

通过上述剪接-重叠延伸突变[Lubin，I.M.，等(1997)J.Bio.chem.272：30191-30195]突变在名为HSQ的人因子VIII无B结构域形式中进行[Lind，P.K.等(1995)，Eur.J.Biochem，232：19-27]。进行下列具对应核苷变化的突变：

R2215A                AGG到GCC

R2215K                AGG到AAG

W2313A                TGG到GCC

W2313F                TGG到TTC

R2220A                AGA到GCC

R2220K                AGA到AAG

R2320A                AGG到GCC

R2320K                AGG到AAG

Y2195H                TAC到CAC

Y2195A                TAC到GCC

F2196L                TTT到CTG

F2196A                TTT到GCC

F2290S                TTC到TCT

F2290A                TTC到GCT

                          方法的概述

美国专利5,364,771描述了发现具凝血活性的杂合人/猪因子VIII分子，其中人或猪的因子VIII分子元件取代其它种类因子VIII分子的相应元件。美国专利5,663,060描述了促凝血杂合人/动物和杂合等价因子VIII分子，其中一个种类的因子VIII分子元件取代其它种类因子VIII分子的相应元件。

尽管目前的信息表明B结构域没有抑制抗原表位且对因子VIII功能没有已知效果，在一些实施方案中，B结构域在活性杂合或杂合等价因子VIII分子或其片断(“B(-)因子VIII”)中全部或部分缺失，VIII分子或其片段用本文所述的任何方法制备。

人因子VIII基因在哺乳动物细胞中分离和表达，如报导于Toole，J.J.等，(1984)Nature 312：342-347(Genetics Institute)；Gischier，J.等，(1984)Nature312：326-330(Genetech)；Wood，W.I.等，(1984)Nature 312：330-337(Genetech)；Vehar，G.A.等，(1984)Nature 312：337-342(Genetech)；WO 87/04187；WO 88/08035；WO 88/03558；美国专利号4,757,006，氨基酸序列推断自cDNA。Capon等的美国专利号4,965,199揭示了重组DNA方法，用于在哺乳动物细胞中生成因子VIII并纯化人因子VIII。报导了CHO(中国仓鼠卵巢)细胞和BHKC(幼仓鼠肾细胞)中表达的人因子VIII。人因子VIII被修饰以缺失部分或所有B结构域(美国专利号4,868,112)，并尝试用人因子V的B结构域取代人因子VIII的B结构域(美国专利号5,004,803)。

猪因子VIII从血浆中分离[Fass，D.N.等，(1982)Blood 59：594]。Church等(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6934描述了猪因子VIII的部分氨基酸序列对应于N-末端轻链序列部分，此序列与血浆铜蓝蛋白和凝固因子V同源。Toole，J.J.等(1984)Nature 312：342-347描述了4个猪因子VIII氨基酸片断的N-末端部分测序，但没有确定片断在因子VIII分子中位置的特征。猪因子VIII的B和部分A2结构域氨基酸序列报导于Ioole，J.J.等(1986)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：5939-5942。1994年11月15日出版的名为“杂合人/猪因子VIII”的美国专利5,364,771和1993年10月14日出版的WO 93/20093中所述cDNA序列编码猪因子VIII完整A2结构域和预测的氨基酸序列和杂合人/猪因子VIII，杂合人/猪因子VIII具有全部结构域、全部亚基和特异氨基酸序列的取代。编码猪因子VIII A2结构域的cDNA序列对应于成熟人因子VIII的残基373-740。更近的是，1994年5月26日出版的WO 94/11503报导了猪因子VIII部分A1结构域和A2结构域的核苷和对应氨基酸序列，A1结构域缺乏前198个氨基酸。编码猪因子VIII的完整核苷序列包括完整A1结构域、活化肽、A3、C1和C2结构域，以及编码的氨基酸序列最终由Lollar获得，如1999年1月12日出版的美国专利5,859,204和1997年12月31日出版的WO 97/49725所示，两者都纳入本文供参考。

猪和人因子VIII作为两个亚基蛋白质从血浆中分离。称为重链和轻链的亚基通过非共价键结合一起，需要钙或其它二价金属离子。因子VIII的重链包含三个共价连接的结构域A1、A2和B。因子VIII的轻链也包含三个结构域，名为A3、C1和C2。B结构域没有已知的生物功能，可通过蛋白裂解或重组DNA技术方法从分子中去除或部分去除，因子VIII任何可测量参数没有显著改变。人重组因子VIII的结构和功能类似来自血浆的因子VIII，尽管它没有糖基化，除非在哺乳动物中表达。

由于A1和A2结构域间的重链裂解，人和猪的活化因子VIII(“因子VIIIa”)具有三个亚基。此结构称为A1/A2/A3-C1-C2。人因子VIIIa在稳定猪因子VIIIa的条件下不稳定，大概是因为人因子VIIIa A2亚基的弱结合。人和猪因子VIIIa的A2亚基分离与因子VIIIa分子的活性损失相关。Yakhyaev，A.等(1982)Blood90：增补本1，摘要#126报导了通过低密度脂蛋白受体-相关蛋白来结合A2结构域，表明这种结合调节的A2细胞吸收用于下调因子VIII活性。

“无B结构域因子VIII”的表达通过包含B结构域部分来增加。包含名为“SQ”[lind，P.等(1995)]的B结构域部分被报导产生良好表达。“SQ”构建缺乏所有人B结构域，除了B结构域N-末端的5个氨基酸和B结构域C-末端的9个氨基酸。POL1212构建指编码猪因子VIII的cDNA，此猪因子VIII缺乏大部分B结构域但含编码A2和ap结构域间24个氨基酸接头的DNA序列，如2000年3月10日提交的USSN 09/523,656所示，它全部纳入本文供参考。

纯化的修饰因子VIII或其片断可通过标准分析测定免疫反应性和凝固活性，包括例如无血浆的因子VIII测定、一阶段的凝固测定、使用纯化重组人因子VIII作为标准的酶联免疫吸收测定。

其它载体包括质粒和真核病毒载体，可用于在真核细胞中表达重组基因构建，这取决于技术人员的偏向和判断[参见例如，《分子克隆》(Molecular Cloning)第16章，Sambrook等，Cold Spring Harbor Laboratory出版社，NY，NY]。其它载体和表达系统包括细菌、酵母和昆虫细胞系统，由于糖基化不同或缺乏，可使用但不优选。

重组因子VIII蛋白质可在多种细胞中表达，这些细胞常用于培养和重组哺乳动物蛋白质的表达。具体的是，发现一些啮齿动物细胞系是表达大蛋白的特别有用宿主。优选细胞系来自美国模式培养物保藏所，Rockville，MD，包括幼仓鼠肾细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，它们用常规过程和培养基培养。

更高的猪因子VIII凝固活性基础是人A2亚基与人因子VIIIa的自发分离快于猪A2亚基与猪因子VIIIa的分离。A2亚基解离导致活性损失[Lollar，P.等(1990)J.Bio.Chem. 265：1688-1692；Lollar，P.等(1992)J.Bio.Chem. 267：23652-23657；Fay，P.J.等(1992)J.Bio.Chem. 267：13246-13250]。

免疫反应性降低的因子VIII分子

与抑制因子VIII凝固活性的抗体(“抑制剂”或“抑制抗体”)免疫反应的抗原表位在因子VIII的已知结构-功能关系基础上确定特征。推测抑制剂作用可通过破坏与因子VIII结构域结构相关的任何大分子相互作用或它与冯维勒因子、凝血酶、因子Xa、因子Ixa或因子X的联合。然而，大部分人因子VIII的抑制抗体作用是通过结合位于因子VIII的40kDa A2结构域或20kDa C2结构域中的抗原表位、破坏与这些结构域相关的特异功能，描述于Fulcher等(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：7728-7732和Scandella等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：6152-6156。根据Scandella等(1993)Blood 82：1767-1775，除了A2和C2结构域，可能在因子VIII轻链的A3或C1结构域中有第三个抗原表位。此推定的第三个抗原表位意义未知，但它似乎说明了一小部分因子VIII的抗原表位反应性。

抗A2抗体阻碍因子X活化，如Lollar等(1994)J.Clin.Invest.93：2497-2504所示。前面Ware等(1992)Blood Coagul.Fibrinolysis 3：703-716描述通过缺失突变进行图谱研究，将A2抗原表位定位于40kDa A2结构域N-末端的20 kDa区域。竞争免疫辐射度测定表明A2抑制剂识别普通的抗原表位或精细成簇的抗原表位，描述于Scandella等(1992)Throm.Haemostas.67：665-671并证明于美国专利5,859,204。

可测试修饰因子VIII分子在人中的抗原性降低和/或临床试验中的免疫原性。一类设计用于确定因子VIII是否与抑制抗体免疫反应的试验中，施用因子VIII给约25个因子VIII缺乏的病人，优选通过静脉内灌输，病人的抗体抑制治疗性人因子VIII的凝固活性。动物或修饰动物因子VIII的剂量范围在每千克体重5-50单位之间，优选每千克体重10-50单位，最优选每千克体重40单位。各施用后约1小时，从血液样品中回收的因子VIII在一阶段凝固测定中测量。灌输后约5小时再次取样品，测量回收。来自样品的因子VIII总回收和消失速度预测抗体效价和抑制活性。如果抗体效价高，通常不能测量因子VIII回收。回收结果与其他病人的回收结果相比较，这些病人用获自血浆的人因子VIII、重组人因子VIII、获自血浆的猪因子VIII、其它普遍使用的因子VIII或因子VIII替代物治疗形式治疗。

鉴定临床重要的抗原表位后，可表达重组因子VIII分子，当体外测试抗广泛抑制血浆时，重组因子VIII分子的交叉反应性低于获自血浆的猪因子VIII或相当。可进行另外的抗原表位区域突变以降低交叉反应性。减少的交叉反应性尽管需要，但对于生成优于现存血浆-获得猪因子VIII浓缩物的产物不是必需的，由于感染的猪蛋白质或感染传染剂如病毒或朊病毒，此浓缩物可能产生副作用。重组朊病毒或修饰猪因子VIII分子不包含外源猪蛋白质。

诊断测定

因子VIII cDNA和/或其表达蛋白质可全部或部分用作测定的诊断试剂以检测底物中人或动物因子VIII或修饰动物因子VIII的抑制抗体，包括例如血清样品和因子VIII缺乏的人类患者的体液。这些抗体测定包括如ELISA测定、免疫印迹、放射性免疫测定、免疫扩散测定和因子VIII生物活性测定(如通过凝固测定)。制备这些试剂的技术和其使用方法对于本领域技术人员是已知的。例如，检测病人血清样品中抑制抗体的免疫测定可包括使测试样品与足够量因子VIII反应，从而在样品中与抑制抗体形成可检测复合体。

核酸和氨基酸探针可在修饰因子VIII cDNA或蛋白质分子或其片断基础上制备。在一些实施方案中，标记这些可用染料或酶、荧光、化学发光或可商业购买的放射性标记。氨基酸探针可用于例如筛选血清或其它体液，其中怀疑存在人、动物或杂合人/动物因子VIII的抑制剂。可定量病人的抑制剂水平并与健康对照相比，例如可用于确定因子VIII缺乏的病人是否能用动物或修饰动物因子VIII治疗。cDNA可用于例如筛选DNA文库的研究目的。

制备重组因子VIII

重组因子VIII可通过使用真核蛋白质表达系统来产生。通常，缺乏所需基因的真核细胞系用载体转化，该载体含有其缺乏的基因和希望表达的重组DNA。转化可通过电穿孔或病毒传递等技术来完成。所选生成蛋白质的细胞系与感兴趣蛋白质相容，能连续表达感兴趣蛋白质，能在培养基上生长，该培养基可促进感兴趣蛋白质以及精通此领域的技术人员已知的其它因子的纯化。这些技术的例子描述于欧洲专利申请0 302 968 A2和美国专利号5,149,637，全部纳入本文供参考。

测试重组因子VIII公子

可测试重组因子VIII分子在人中的抗原性降低和/或至少两类临床试验中的免疫原性。一类设计用于确定重组或重组杂合因子VIII是否与抑制抗体免疫反应的试验中，施用重组或重组杂合因子VIII给约25个因子VIII缺乏的病人，优选通过静脉内灌输，病人的抗体抑制治疗性人或猪因子VIII的凝固活性。重组或重组杂合因子VIII的剂量范围在5和50单位/kg体重间，优选10-50单位/kg体重，最优选40单位/kg体重。各施用后约1小时，从血液样品中回收的因子VIII在一阶段凝固测定中测量。灌输后约5小时再次取样品，测量回收。来自样品的因子VIII总回收和消失速度预测抗体效价和抑制活性。如果抗体效价高，通常不能测量因子VIII回收。回收结果与其他病人的回收结果相比较，这些病人用获自血浆的人因子VIII、重组人因子VIII、猪因子VIII、其它普遍使用的因子VIII或因子VIII替代物治疗形式治疗。

第二类临床试验设计用于确定重组或重组杂合因子VIII是否是免疫原性即病人是否发展抗体，其中重组或重组杂合因子VIII如前面段落所述施用给约100个以前未治疗的血友病患者，他们没有发展出因子VIII抗体。在6个月到1年的时间段中，大约每2周进行治疗。在此阶段中，以1到3个月间隔取血液样品并进行Bethesda测定或其它抗体测定以确定抑制抗体的存在。也可如上所述在各灌输后进行回收测定。结果与其他血友病患者比较，这些血友病患者用获自血浆的人因子VIII、重组人因子VIII、猪因子VIII、或其它普遍使用的因子VIII或因子VIII替代物治疗形式治疗。

药物组合物

药物组合物包括重组或重组杂合(或修饰)因子VIII，单独或结合适当药物稳定化合物、传递载体和/或运载体(carrier vehicle)，组合物根据已知方法制备，如E.W.Martin的《Remington药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Science)中所述的方法。

在一个优选的实施方案中，用于静脉内灌输的优选携带或传递载体是生理盐水或磷酸缓冲盐水。

在另一个优选的实施方案中，适当的稳定化合物、传递载体和运载体包括但不限于其它人或动物蛋白质如清蛋白。

磷脂泡或脂质体悬浮液也优选作为药学上可接受的携带或传递载体。这些可根据本领域技术人员已知方法制备，可包含例如磷脂酰丝氨酸/磷脂酰胆碱或其它磷脂或去垢剂组合物，它们赋予表面负电荷，因为因子VIII结合带负电的磷脂膜。制备脂质体可通过在无机溶液中溶解适当脂类(如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、花生酰磷脂酰胆碱(arachidoyl phosphatidyl choline)和胆固醇)，随后蒸发无机溶液，在容器表面留下干燥脂类的薄膜。然后将杂合因子VIII的水溶液导入容器。接着容器用手旋转以使脂类物质从容器侧面游离且分散脂类聚集物，从而形成脂质体悬浮液。

重组或重组杂合(修饰)因子VIII可结合适当药物稳定化合物、传递载体和/或运载体，包括依赖维生素K的凝固因子、组织因子、冯维勒因子(vWf)或含因子VIII结合位点的vWf片断、多糖如蔗糖。

重组或重组杂合(修饰)因子VIII也可通过基因治疗传递，与传递人因子VIII的方式相同，使用传递载体如逆转录病毒载体。此方法包括将因子VIII cDNA纳入人细胞中，人细胞直接移植到因子VIII缺乏的病人中或置于因子VIII能渗透但细胞不能渗透的可移植装置中，随后移植装置。优选方法是逆转录病毒-调节的基因转移。在此方法中，外源基因(如因子VIII cDNA)克隆到修饰逆转录病毒的基因组中。基因通过病毒机制插入宿主细胞基因组，在其中它被细胞表达。修饰逆转录病毒载体使它不产生病毒，防治病毒感染宿主。此类治疗的一般原则对本领域技术人员已知且在文献中综述[如Kohn，D.B.等，(1989)Transfusion 29：812-820]。

重组或重组杂合(修饰)因子VIII可结合vWf保存以提高杂合分子的半衰期和自身寿命。另外，vWf存在时冻干因子VIII能改进活性分子产量。目前商业供应商用于保存人和动物因子VIII的方法可用于保存杂合或修饰因子VIII。这些方法包括：(1)冻干部分纯化状态的因子VIII(作为没有进一步纯化灌输的因子VIII的“浓缩物”)；(2)通过Zimmerman方法免疫亲和纯化因子VIII且在清蛋白存在时冻干，清蛋白稳定因子VIII；(3)在清蛋白存在时冻干重组因子VIII。

此外，杂合因子VIII在4℃的0.6M NaCl、20mM MES、5mM CaCl₂，pH6.0中不一定稳定，它也可在这些缓冲液中冷冻保存并以最小活性损失来解冻。

治疗方法

重组或重组杂合(修饰)因子VIII用于治疗因子VIII缺乏引起的不受控出血(如关节内、头盖内或胃肠出血)，用于有和没有抑制抗体的血友病患者以及由于抑制抗体发展产生获得性因子VIII缺乏的病人。活性物质优选静脉内施用。

另外，如上所述，施用重组或重组杂合(修饰)因子VIII可通过移植遗传改造产生杂合物的细胞或移植含这些细胞的装置。

在一个优选的实施方案中，重组或重组杂合(修饰)因子VIII的药物组合物单独或结合稳定剂、传递载体和/或运载体，根据人或动物因子VIII灌输所用相同过程静脉灌输给病人。

必须施用给需要这些治疗的病人的重组或重组杂合(修饰)因子VIII组合物治疗剂量取决于因子VIII缺乏的严重性而变化。一般，调节剂量水平的频率、持续时间和单位与各病人出血事件的严重性和持续时间一致。因此，杂合因子VIII以足够量包括在药学上可接受运载体、传递载体或稳定剂中，用于将治疗有效量的杂合物传递给病人以停止出血，这通过标准凝固测定来测量。

因子VIII的经典定义是正常血浆中存在的物质，它修正来自血友病A个体血浆中的凝固缺陷。纯化或部分纯化形式的因子VIII的体外凝固活性用于计算灌输人类患者的因子VIII剂量且可靠指示回收自患者血浆的活性和体内出血缺陷的修正。根据Lusher，J.M.等，328 New Engl.J.Med.328：453-459；Pittman，D.D.等，(1992)Blood 79：389-397；Brinkhous等(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.82：8752-8755，新因子VIII分子的体外标准测定和它们在狗灌输模型或人类患者中的特性间没有报导差异。

通常，所需血浆因子VIII水平在正常的30-100％范围中，此水平通过施用重组或重组杂合因子VIII在病人中获得。在施用重组或重组杂合因子VIII的一个优选模式中，静脉内给予的组合物优选剂量范围是每千克体重约5-50单位，更优选每千克体重10-50单位，最优选每千克体重20-40单位；间隔频率范围从约8到24小时(在一些严重受影响的血友病患者中)；治疗持续时间的天数范围从1到10天或直到解决短暂出血。参见例如Roberts，H.R.和M.R.Jones《血友病和相关症状-先天性凝血素缺陷(因子II、因子V和因子VII-XII)(Hemophilia andRelated Conditions-Congenital Deficiencies of Prothrommbin(FactorII，Factor V，and Factors VII to XII))，第153章，1453-1474，1460，《血液学》(Hematology)，Williams，W.J.等编(1990)。有抑制剂的病人可能需要更多重组或重组杂合因子VIII，或由于其特异活性高于人因子VIII或者抗体反应性或免疫原性减少，病人可能需要更少的重组或重组杂合因子VIII。用人或猪因子VIII治疗，灌输的重组或重组杂合因子VIII的量通过一阶段因子VIII凝固测定确定，在一些选择情况中，体内回收通过测量灌输后病人血浆中的因子VIII来确定。要理解的是对于任何具体试验者，特异剂量方案应随着时间调节，调节是根据个体需要和施用或监控组合物施用的人的专业判断，本文所列浓度范围仅作为范例，不想限制权利要求的组合物的范围或实践。

根据需要，治疗可采用形式是单次静脉内施用组合物或定期或连续施用一段延长的时间。另外，重组或重组杂合因子VIII可皮下或用脂质体在不同时间间隔以一个或几个剂量施用。

因子VIII也可用于治疗血友病患者中因子VIII缺乏引起的不受控出血。在此情况中，高于单独人或动物因子VIII的凝固活性不是必需的。如果活性不被患者血浆中的抗体中和，低于人因子VIII的凝固活性(即小于3,000单位/mg)有用。

上面综述的重组或重组杂合(或修饰)因子VIII分子和其分离、特征确定、产生和使用方法通过参考下列非限制例子可进一步理解。

                              实施例

材料一柠檬酸化的血友病A血浆和正常收集的人血浆(FACT)购自George KingBiomedical公司(Overland Park，KS)。肝素-琼脂糖购自Sigma Chemical公司(St.Louis，MO)。胎牛血清、遗传霉素、青霉素、链霉素、DMEM/F12培养基和AIM-V培养基购自Life Technologies公司(Gaithersburg，MD)。HP20如上所述制备[Healey，J.F.，(1998)同上]，它是无B结构域的杂合人/猪因子VIII分子，含人A1、A2、ap-A3、C1结构域和猪C2结构域。

质粒DNA用Qiagen Plasmid Maxi试剂盒纯化(Qiagen公司，Valencia，CA)。PCR反应用Hybrid OmniGene热循环仪进行，使用pfu DNA聚合酶。PCR产物用胶纯化，乙醇沉淀并用T4 DNA连接酶连入质粒DNA(DNA快速连接试剂盒(Rapid DNALigation kit)，Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)。含插入的质粒用于转化大肠杆菌Epicurean XL1-Blue细胞。所有PCR产生的新因子VIII DNA序列通过双脱氧测序用Applied Biosystems(Foster City，CA)的373a自动DNA测序仪和PRISM终止子染色试剂盒(PRISM dye terminator kit)来确定。

实施例1：因子VIII突变cDNA的构建

转染细胞系维持于Dulbecco改进的Eagle培养基-F12，其中含有10％胎牛血清、50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素。胎牛血清使用前在56℃热失活1小时。ReNeo中的突变cDNA稳定转染到BHK细胞中，选择遗传霉素抗性，转入无血清的AIM V培养基用于表达，通过上述肝素-琼脂糖层析部分纯化[Healey，J.F.等，(1998)同上]。

实施例2：因子VIII和因子VIII抑制剂测定

重组因子VIII蛋白质的活性通过一阶段(one-stage)凝固测定来测量[Bowie，E.J.W.和Owen，C.A.(1984)，《止血紊乱》(Disorders of Hemostasis)，O.D.Ratnoff和C.D.Forbes编，Grune&Stratton公司，Orlando，FL 43-72]。1单位的因子VIII定义为1ml正常柠檬酸化人血浆中的活性。因子VIII抑制剂效价通过改进的Bethesda测定来测量[Kasper，C.K.等，(1975)Thromb.Diath.Haemorrh.34：869-872]。重组因子VIII加入血友病A血浆至最终浓度为每毫升0.8-1.2单位，并用不同浓度的抑制剂在37℃孵育2小时。为确定定义Bethesda单位的50％抑制点，稀释抑制剂以产生横跨至少35％-65％范围的剩余活性。在一些情况中，进行反复稀释，使用平均值。平均稀释10次以确定各Bethesda效价。数据通过非线性回归用Marquardt算法(SigmaPlot 5.0，SPSS公司)产生等式

                  剩余活性％＝m(logx-logx₅₀)+50

其中拟合参数(fitted parameter)x₅₀是产生50％抑制的对应稀释，合适参数m是半-log线斜率且独立变量x是抑制剂样品的对应稀释。

Bethesda效价相当于x₅₀ ^-1。Bethesda效价的标准误差(SD)估计通过Bethesda效价乘以变量x₅₀的系数来计算。因子VIII分子的Bethesda效价用Student t检验来比较。部分纯化制品中的因子VIII质量浓度通过三明治ELISA确定，如上所述使用ESH4作为捕捉抗体和生物素化的ESH8作为检测抗体[Lubin，I.M.等，(1994)269：8639-8641]。样品测定四次。

实施例3：抗C2突变体的C2特异性血浆的Bethesda效价

因子VIII抑制剂血浆称为DR、EE、EEE、JF、LK、NF、JM和WC，它们抗C2突变体Y2195H、Y2195A、F2196L、F2196A、R2215K、R2215A、R2220K、R2220A、F2290S、F2290A、W2313F、W2313A、R2320K和R2320A。测试并与HSQ相比较，参见表1。DR和JF血浆中发现抗原性降低，但其它6种血浆中没有发现。DR强烈识别R2215、R2220和F2196，而JF强烈识别R2215。

                              表1

患者C2特异血浆抗人无B结构域的fVIII C2突变体的Bethesda效价(HSQ效价％)

          DR      EE       EEE     JF       LK      NF      JM      WC

HSQ       100     100      100     100      100     100     100     100

R2215A    8       140      62      7        70      81      91      68

R2215K    91      152      68      102      68      95      85      112

R2220A    4       119      58      41       85      129     123     121

R2220K    4       130      54      107      79      75      113     78

W2313F    41      138      99      133      50      80      93      89

R2320A    87      117      80      90       89      185     139     118

F2290S    74      130      129     70       118     162     123     159

F2290A    64      131      103     73       57      97      99      119

Y2195H    69      93       60      63       65      71      86      105

Y2195A    37      131      116     112      74      113     125     92

F2196L    14      74       99      72       89      155     89      99

F2196A    8       143      84      172      68      99      122     69

序列表

<110>J.S.劳拉(LOLLAR，John，S.)

     埃默里大学(Emory University)

<120>因子VIII C2结构域变体

<130>130-01 WO

<140>待定

<141>2002-11-27

<150>US 60/334,569

<151>2001-11-30

<160>7

<170>PatentIn Ver.2.0

<210>1

<211>9009

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<400>1

cagtgggtaa gttccttaaa tgctctgcaa agaaattggg acttttcatt aaatcagaaa 60

ttttactttt ttcccctcct gggagctaaa gatattttag agaagaatta accttttgct 120

tctccagttg aacatttgta gcaataagtc atgcaaatag agctctccac ctgcttcttt 180

ctgtgccttt tgcgattctg ctttagtgcc accagaagat actacctggg tgcagtggaa 240

ctgtcatggg actatatgca aagtgatctc ggtgagctgc ctgtggacgc aagatttcct 300

cctagagtgc caaaatcttt tccattcaac acctcagtcg tgtacaaaaa gactctgttt 360

gtagaattca cggttcacct tttcaacatc gctaagccaa ggccaccctg gatgggtctg 420

ctaggtccta ccatccaggc tgaggtttat gatacagtgg tcattacact taagaacatg 480

gcttcccatc ctgtcagtct tcatgctgtt ggtgtatcct actggaaagc ttctgaggga 540

gctgaatatg atgatcagac cagtcaaagg gagaaagaag atgataaagt cttccctggt 600

ggaagccata catatgtctg gcaggtcctg aaagagaatg gtccaatggc ctctgaccca 660

ctgtgcctta cctactcata tctttctcat gtggacctgg taaaagactt gaattcaggc 720

ctcattggag ccctactagt atgtagagaa gggagtctgg ccaaggaaaa gacacagacc 780

ttgcacaaat ttatactact ttttgctgta tttgatgaag ggaaaagttg gcactcagaa 840

acaaagaact ccttgatgca ggatagggat gctgcatctg ctcgggcctg gcctaaaatg 900

cacacagtca atggttatgt aaacaggtct ctgccaggtc tgattggatg ccacaggaaa 960

tcagtctatt ggcatgtgat tggaatgggc accactcctg aagtgcactc aatattcctc 1020

gaaggtcaca catttcttgt gaggaaccat cgccaggcgt ccttggaaat ctcgccaata 1080

actttcctta ctgctcaaac actcttgatg gaccttggac agtttctact gttttgtcat 1140

atctcttccc accaacatga tggcatggaa gcttatgtca aagtagacag ctgtccagag 1200

gaaccccaac tacgaatgaa aaataatgaa gaagcggaag actatgatga tgatcttact 1260

gattctgaaa tggatgtggt caggtttgat gatgacaact ctccttcctt tatccaaatt 1320

cgctcagttg ccaagaagca tcctaaaact tgggtacatt acattgctgc tgaagaggag 1380

gactgggact atgctccctt agtcctcgcc cccgatgaca gaagttataa aagtcaatat 1440

ttgaacaatg gccctcagcg gattggtagg aagtacaaaa aagtccgatt tatggcatac 1500

acagatgaaa cctttaagac tcgtgaagct attcagcatg aatcaggaat cttgggacct 1560

ttactttatg gggaagttgg agacacactg ttgattatat ttaagaatca agcaagcaga 1620

ccatataaca tctaccctca cggaatcact gatgtccgtc ctttgtattc aaggagatta 1680

ccaaaaggtg taaaacattt gaaggatttt ccaattctgc caggagaaat attcaaatat 1740

aaatggacag tgactgtaga agatgggcca actaaatcag atcctcggtg cctgacccgc 1800

tattactcta gtttcgttaa tatggagaga gatctagctt caggactcat tggccctctc 1860

ctcatctgct acaaagaatc tgtagatcaa agaggaaacc agataatgtc agacaagagg 1920

aatgtcatcc tgttttctgt atttgatgag aaccgaagct ggtacctcac agagaatata 1980

caacgctttc tccccaatcc agctggagtg cagcttgagg atccagagtt ccaagcctcc 2040

aacatcatgc acagcatcaa tggctatgtt tttgatagtt tgcagttgtc agtttgtttg 2100

catgaggtgg catactggta cattctaagc attggagcac agactgactt cctttctgtc 2160

ttcttctctg gatatacctt caaacacaaa atggtctatg aagacacact caccctattc 2220

ccattctcag gagaaactgt cttcatgtcg atggaaaacc caggtctatg gattctgggg 2280

tgccacaact cagactttcg gaacagaggc atgaccgcct tactgaaggt ttctagttgt 2340

gacaagaaca ctggtgatta ttacgaggac agttatgaag atatttcagc atacttgctg 2400

agtaaaaaca atgccattga accaagaagc ttctcccaga attcaagaca ccctagcact 2460

aggcaaaagc aatttaatgc caccacaatt ccagaaaatg acatagagaa gactgaccct 2520

tggtttgcac acagaacacc tatgcctaaa atacaaaatg tctcctctag tgatttgttg 2580

atgctcttgc gacagagtcc tactccacat gggctatcct tatctgatct ccaagaagcc 2640

aaatatgaga ctttttctga tgatccatca cctggagcaa tagacagtaa taacagcctg 2700

tctgaaatga cacacttcag gccacagctc catcacagtg gggacatggt atttacccct 2760

gagtcaggcc tccaattaag attaaatgag aaactgggga caactgcagc aacagagttg 2820

aagaaacttg atttcaaagt ttctagtaca tcaaataatc tgatttcaac aattccatca 2880

gacaatttgg cagcaggtac tgataataca agttccttag gacccccaag tatgccagtt 2940

cattatgata gtcaattaga taccactcta tttggcaaaa agtcatctcc ccttactgag 3000

tctggtggac ctctgagctt gagtgaagaa aataatgatt caaagttgtt agaatcaggt 3060

ttaatgaata gccaagaaag ttcatgggga aaaaatgtat cgtcaacaga gagtggtagg 3120

ttatttaaag ggaaaagagc tcatggacct gctttgttga ctaaagataa tgccttattc 3180

aaagttagca tctctttgtt aaagacaaac aaaacttcca ataattcagc aactaataga 3240

aagactcaca ttgatggccc atcattatta attgagaata gtccatcagt ctggcaaaat 3300

atattagaaa gtgacactga gtttaaaaaa gtgacacctt tgattcatga cagaatgctt 3360

atggacaaaa atgctacagc tttgaggcta aatcatatgt caaataaaac tacttcatca 3420

aaaaacatgg aaatggtcca acagaaaaaa gagggcccca ttccaccaga tgcacaaaat 3480

ccagatatgt cgttctttaa gatgctattc ttgccagaat cagcaaggtg gatacaaagg 3540

actcatggaa agaactctct gaactctggg caaggcccca gtccaaagca attagtatcc 3600

ttaggaccag aaaaatctgt ggaaggtcag aatttcttgt ctgagaaaaa caaagtggta 3660

gtaggaaagg gtgaatttac aaaggacgta ggactcaaag agatggtttt tccaagcagc 3720

agaaacctat ttcttactaa cttggataat ttacatgaaa ataatacaca caatcaagaa 3780

aaaaaaattc aggaagaaat agaaaagaag gaaacattaa tccaagagaa tgtagttttg 3840

cctcagatac atacagtgac tggcactaag aatttcatga agaacctttt cttactgagc 3900

actaggcaaa atgtagaagg ttcatatgag ggggcatatg ctccagtact tcaagatttt 3960

aggtcattaa atgattcaac aaatagaaca aagaaacaca cagctcattt ctcaaaaaaa 4020

ggggaggaag aaaacttgga aggcttggga aatcaaacca agcaaattgt agagaaatat 4080

gcatgcacca caaggatatc tcctaataca agccagcaga attttgtcac gcaacgtagt 4140

aagagagctt tgaaacaatt cagactccca ctagaagaaa cagaacttga aaaaaggata 4200

attgtggatg acacctcaac ccagtggtcc aaaaacatga aacatttgac cccgagcacc 4260

ctcacacaga tagactacaa tgagaaggag aaaggggcca ttactcagtc tcccttatca 4320

gattgcctta cgaggagtca tagcatccct caagcaaata gatctccatt acccattgca 4380

aaggtatcat catttccatc tattagacct atatatctga ccagggtcct attccaagac 4440

aactcttctc atcttccagc agcatcttat agaaagaaag attctggggt ccaagaaagc 4500

agtcatttct tacaaggagc caaaaaaaat aacctttctt tagccattct aaccttggag 4560

atgactggtg atcaaagaga ggttggctcc ctggggacaa gtgccacaaa ttcagtcaca 4620

tacaagaaag ttgagaacac tgttctcccg aaaccagact tgcccaaaac atctggcaaa 4680

gttgaattgc ttccaaaagt tcacatttat cagaaggacc tattccctac ggaaactagc 4740

aatgggtctc ctggccatct ggatctcgtg gaagggagcc ttcttcaggg aacagaggga 4800

gcgattaagt ggaatgaagc aaacagacct ggaaaagttc cctttctgag agtagcaaca 4860

gaaagctctg caaagactcc ctccaagcta ttggatcctc ttgcttggga taaccactat 4920

ggtactcaga taccaaaaga agagtggaaa tcccaagaga agtcaccaga aaaaacagct 4980

tttaagaaaa aggataccat tttgtccctg aacgcttgtg aaagcaatca tgcaatagca 5040

gcaataaatg agggacaaaa taagcccgaa atagaagtca cctgggcaaa gcaaggtagg 5100

actgaaaggc tgtgctctca aaacccacca gtcttgaaac gccatcaacg ggaaataact 5160

cgtactactc ttcagtcaga tcaagaggaa attgactatg atgataccat atcagttgaa 5220

atgaagaagg aagattttga catttatgat gaggatgaaa atcagagccc ccgcagcttt 5280

caaaagaaaa cacgacacta ttttattgct gcagtggaga ggctctggga ttatgggatg 5340

agtagctccc cacatgttct aagaaacagg gctcagagtg gcagtgtccc tcagttcaag 5400

aaagttgttt tccaggaatt tactgatggc tcctttactc agcccttata ccgtggagaa 5460

ctaaatgaac atttgggact cctggggcca tatataagag cagaagttga agataatatc 5520

atggtaactt tcagaaatca ggcctctcgt ccctattcct tctattctag ccttatttct 5580

tatgaggaag atcagaggca aggagcagaa cctagaaaaa actttgtcaa gcctaatgaa 5640

accaaaactt acttttggaa agtgcaacat catatggcac ccactaaaga tgagtttgac 5700

tgcaaagcct gggcttattt ctctgatgtt gacctggaaa aagatgtgca ctcaggcctg 5760

attggacccc ttctggtctg ccacactaac acactgaacc ctgctcatgg gagacaagtg 5820

acagtacagg aatttgctct gtttttcacc atctttgatg agaccaaaag ctggtacttc 5880

actgaaaata tggaaagaaa ctgcagggct ccctgcaata tccagatgga agatcccact 5940

tttaaagaga attatcgctt ccatgcaatc aatggctaca taatggatac actacctggc 6000

ttagtaatgg ctcaggatca aaggattcga tggtatctgc tcagcatggg cagcaatgaa 6060

aacatccatt ctattcattt cagtggacat gtgttcactg tacgaaaaaa agaggagtat 6120

aaaatggcac tgtacaatct ctatccaggt gtttttgaga cagtggaaat gttaccatcc 6180

aaagctggaa tttggcgggt ggaatgcctt attggcgagc atctacatgc tgggatgagc 6240

acactttttc tggtgtacag caataagtgt cagactcccc tgggaatggc ttctggacac 6300

attagagatt ttcagattac agcttcagga caatatggac agtgggcccc aaagctggcc 6360

agacttcatt attccggatc aatcaatgcc tggagcacca aggagccctt ttcttggatc 6420

aaggtggatc tgttggcacc aatgattatt cacggcatca agacccaggg tgcccgtcag 6480

aagttctcca gcctctacat ctctcagttt atcatcatgt atagtcttga tgggaagaag 6540

tggcagactt atcgaggaaa ttccactgga accttaatgg tcttctttgg caatgtggat 6600

tcatctggga taaaacacaa tatttttaac cctccaatta ttgctcgata catccgtttg 6660

cacccaactc attatagcat tcgcagcact cttcgcatgg agttgatggg ctgtgattta 6720

aatagttgca gcatgccatt gggaatggag agtaaagcaa tatcagatgc acagattact 6780

gcttcatcct actttaccaa tatgtttgcc acctggtctc cttcaaaagc tcgacttcac 6840

ctccaaggga ggagtaatgc ctggagacct caggtgaata atccaaaaga gtggctgcaa 6900

gtggacttcc agaagacaat gaaagtcaca ggagtaacta ctcagggagt aaaatctctg 6960

cttaccagca tgtatgtgaa ggagttcctc atctccagca gtcaagatgg ccatcagtgg 7020

actctctttt ttcagaatgg caaagtaaag gtttttcagg gaaatcaaga ctccttcaca 7080

cctgtggtga actctctaga cccaccgtta ctgactcgct accttcgaat tcacccccag 7140

agttgggtgc accagattgc cctgaggatg gaggttctgg gctgcgaggc acaggacctc 7200

tactgagggt ggccactgca gcacctgcca ctgccgtcac ctctccctcc tcagctccag 7260

ggcagtgtcc ctccctggct tgccttctac ctttgtgcta aatcctagca gacactgcct 7320

tgaagcctcc tgaattaact atcatcagtc ctgcatttct ttggtggggg gccaggaggg 7380

tgcatccaat ttaacttaac tcttacctat tttctgcagc tgctcccaga ttactccttc 7440

cttccaatat aactaggcaa aaagaagtga ggagaaacct gcatgaaagc attcttccct 7500

gaaaagttag gcctctcaga gtcaccactt cctctgttgt agaaaaacta tgtgatgaaa 7560

ctttgaaaaa gatatttatg atgttaacat ttcaggttaa gcctcatacg tttaaaataa 7620

aactctcagt tgtttattat cctgatcaag catggaacaa agcatgtttc aggatcagat 7680

caatacaatc ttggagtcaa aaggcaaatc atttggacaa tctgcaaaat ggagagaata 7740

caataactac tacagtaaag tctgtttctg cttccttaca catagatata attatgttat 7800

ttagtcatta tgaggggcac attcttatct ccaaaactag cattcttaaa ctgagaatta 7860

tagatggggt tcaagaatcc ctaagtcccc tgaaattata taaggcattc tgtataaatg 7920

caaatgtgca tttttctgac gagtgtccat agatataaag ccattggtct taattctgac 7980

caataaaaaa ataagtcagg aggatgcaat tgttgaaagc tttgaaataa aataacatgt 8040

cttcttgaaa tttgtgatgg ccaagaaaga aaatgatgat gacattaggc ttctaaagga 8100

catacattta atatttctgt ggaaatatga ggaaaatcca tggttatctg agataggaga 8160

tacaaacttt gtaattctaa taatgcactc agtttactct ctccctctac taatttcctg 8220

ctgaaaataa cacaacaaaa atgtaacagg ggaaattata taccgtgact gaaaactaga 8280

gtcctactta catagttgaa atatcaagga ggtcagaaga aaattggact ggtgaaaaca 8340

gaaaaaacac tccagtctgc catatcacca cacaatagga tcccccttct tgccctccac 8400

ccccataaga ttgtgaaggg tttactgctc cttccatctg cctgcacccc ttcactatga 8460

ctacacagaa ctctcctgat agtaaagggg gctggaggca aggataagtt atagagcagt 8520

tggaggaagc atccaaagac tgcaacccag ggcaaatgga aaacaggaga tcctaatatg 8580

aaagaaaaat ggatcccaat ctgagaaaag gcaaaagaat ggctactttt ttctatgctg 8640

gagtattttc taataatcct gcttgaccct tatctgacct ctttggaaac tataacatag 8700

ctgtcacagt atagtcacaa tccacaaatg atgcaggtgc aaatggttta tagccctgtg 8760

aagttcttaa agtttagagg ctaacttaca gaaatgaata agttgttttg ttttatagcc 8820

cggtagagga gttaacccca aaggtgatat ggttttattt cctgttatgt ttaacttgat 8880

aatcttattt tggcattctt ttcccattga ctatatacat ctctatttct caaatgttca 8940

tggaactagc tcttttattt tcctgctggt ttcttcagta atgagttaaa taaaacattg 9000

acacataca                                                         9009

<210>2

<211>2351

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>2

Met Gln Ile Glu Leu Ser Thr Cys Phe Phe Leu Cys Leu Leu Arg Phe

  1               5                  10                  15

Cys Phe Ser Ala Thr Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser

             20                  25                  30

Trp Asp Tyr Met Gln Ser Asp Leu Gly Glu Leu Pro Val Asp Ala Arg

         35                  40                  45

Phe Pro Pro Arg Val Pro Lys Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Val Val

     50                  55                  60

Tyr Lys Lys Thr Leu Phe Val Glu Phe Thr Val His Leu Phe Asn Ile

 65                  70                  75                  80

Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile Gln

                 85                  90                  95

Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala Ser

            100                 105                 110

His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala Ser

        115                 120                 125

Glu Gly Ala Glu Tyr Asp Asp Gln Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu Asp

    130                 135                 140

Asp Lys Val Phe Pro Gly Gly Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val Leu

145                 150                 155                 160

Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Leu Cys Leu Thr Tyr Ser

                165                 170                 175

Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu Ile

            180                 185                 190

Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Ala Lys Glu Lys Thr

        195                 200                 205

Gln Thr Leu His Lys Phe Ile Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu Gly

    210                 215                 220

Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Lys Asn Ser Leu Met Gln Asp Arg Asp

225                 230                 235                 240

Ala Ala Ser Ala Arg Ala Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly Tyr

                245                 250                 255

Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser Val

            260                 265                 270

Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Val His Ser Ile

        275                 280                 285

Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg Asn His Arg Gln Ala Ser

    290                 295                 300

Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu Met

305                 310                 315                 320

Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Gln His

                325                 330                 335

Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu Pro

            340                 345                 350

Gln Leu Arg Met Lys Asn Asn Glu Glu Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Asp

        355                 360                 365

Leu Thr Asp Ser Glu Met Asp Val Val Arg Phe Asp Asp Asp Asn Ser

    370                 375                 380

Pro Ser Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr

385                 390                 395                 400

Trp Val His Tyr Ile Ala Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro

                405                 410                 415

Leu Val Leu Ala Pro Asp Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Asn

            420                 425                 430

Asn Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Met

        435                 440                 445

Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Ala Ile Gln His Glu

    450                 455                 460

Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu

465                 470                 475                 480

Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro

                485                 490                 495

His Gly Ile Thr Asp Val Arg Pro Leu Tyr Ser Arg Arg Leu Pro Lys

            500                 505                 510

Gly Val Lys His Leu Lys Asp Phe Pro Ile Leu Pro Gly Glu Ile Phe

        515                 520                 525

Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp

    530                 535                 540

Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Val Asn Met Glu Arg

545                 550                 555                 560

Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu

                565                 570                 575

Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Ile Met Ser Asp Lys Arg Asn Val

            580                 585                 590

Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Arg Ser Trp Tyr Leu Thr Glu

        595                 600                 605

Asn Ile GlnArg Phe Leu Pro Asn Pro Ala Gly Val Gln Leu Glu Asp

    610                615                 620

Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val

625                 630                 635                 640

Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp

                645                 650                 655

Tyr Ile Leu Ser Ile Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe

            660                 665                 670

Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr

        675                 680                 685

Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro

    690                 695                 700

Gly Leu Trp Ile Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Asn Arg Gly

705                 710                 715                 720

Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Asn Thr Gly Asp

                725                 730                 735

Tyr Tyr Glu Asp Ser Tyr Glu Asp Ile Ser Ala Tyr Leu Leu Ser Lys

            740                 745                 750

Asn Asn Ala Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ser Gln Asn Ser Arg His Pro

        755                 760                 765

Ser Thr Arg Gln Lys Gln Phe Asn Ala Thr Thr Ile Pro Glu Asn Asp

    770                 775                 780

Ile Glu Lys Thr Asp Pro Trp Phe Ala His Arg Thr Pro Met Pro Lys

785                 790                 795                 800

Ile Gln Asn Val Ser Ser Ser Asp Leu Leu Met Leu Leu Arg Gln Ser

                805                 810                 815

Pro Thr Pro His Gly Leu Ser Leu Ser Asp Leu Gln Glu Ala Lys Tyr

            820                 825                 830

Glu Thr Phe Ser Asp Asp Pro Ser Pro Gly Ala Ile Asp Ser Asn Asn

        835                 840                 845

Ser Leu Ser Glu Met Thr His Phe Arg Pro Gln Leu His His Ser Gly

    850                 855                 860

Asp Met Val Phe Thr Pro Glu Ser Gly Leu Gln Leu Arg Leu Asn Glu

865                 870                 875                 880

Lys Leu Gly Thr Thr Ala Ala Thr Glu Leu Lys Lys Leu Asp Phe Lys

                885                 890                 895

Val Ser Ser Thr Ser Asn Asn Leu Ile Ser Thr Ile Pro Ser Asp Asn

            900                 905                 910

Leu Ala Ala Gly Thr Asp Asn Thr Ser Ser Leu Gly Pro Pro Ser Met

        915                 920                 925

Pro Val His Tyr Asp Ser Gln Leu Asp Thr Thr Leu Phe Gly Lys Lys

    930                 935                 940

Ser Ser Pro Leu Thr Glu Ser Gly Gly Pro Leu Ser Leu Ser Glu Glu

945                 950                 955                 960

Asn Asn Asp Ser Lys Leu Leu Glu Ser Gly Leu Met Asn Ser Gln Glu

                965                 970                 975

Ser Ser Trp Gly Lys Asn Val Ser Ser Thr Glu Ser Gly Arg Leu Phe

            980                 985                 990

Lys Gly Lys Arg Ala His Gly Pro Ala Leu Leu Thr Lys Asp Asn Ala

        995                1000                1005

Leu Phe Lys Val Ser Ile Ser Leu Leu Lys Thr Asn Lys Thr Ser Asn

   1010                1015                1020

Asn Ser Ala Thr Asn Arg Lys Thr His Ile Asp Gly Pro Ser Leu Leu

1025               1030                1035                1040

Ile Glu Asn Ser Pro Ser Val Trp Gln Asn Ile Leu Glu Ser Asp Thr

               1045                1050                1055

Glu Phe Lys Lys Val Thr Pro Leu Ile His Asp Arg Met Leu Met Asp

           1060                1065                1070

Lys Asn Ala Thr Ala Leu Arg Leu Asn His Met Ser Asn Lys Thr Thr

       1075                1080                1085

Ser Ser Lys Asn Met Glu Met Val Gln Gln Lys Lys Glu Gly Pro Ile

   1090                1095                1100

Pro Pro Asp Ala Gln Asn Pro Asp Met Ser Phe Phe Lys Met Leu Phe

1105               1110                1115                1120

Leu Pro Glu Ser Ala Arg Trp Ile Gln Arg Thr His Gly Lys Asn Ser

               1125                1130                1135

Leu Asn Ser Gly Gln Gly Pro Ser Pro Lys G1n Leu Val Ser Leu Gly

           1140                1145                1150

Pro Glu Lys Ser Val Glu Gly Gln Asn Phe Leu Ser Glu Lys Asn Lys

       1155                1160                1165

Val Val Val Gly Lys Gly Glu Phe Thr Lys Asp Val Gly Leu Lys Glu

   1170                1175                1180

Met Val Phe Pro Ser Ser Arg Asn Leu Phe Leu Thr Asn Leu Asp Asn

1185               1190                1195                1200

Leu His Glu Asn Asn Thr His Asn Gln Glu Lys Lys Ile Gln Glu Glu

               1205                1210                1215

Ile Glu Lys Lys Glu Thr Leu Ile Gln Glu Asn Val Val Leu Pro Gln

           1220                1225                1230

Ile His Thr Val Thr Gly Thr Lys Asn Phe Met Lys Asn Leu Phe Leu

       1235                1240                1245

Leu Ser Thr Arg Gln Asn Val Glu Gly Ser Tyr Glu Gly Ala Tyr Ala

   1250                1255                1260

Pro Val Leu Gln Asp Phe Arg Ser Leu Asn Asp Ser Thr Asn Arg Thr

1265               1270                1275                1280

Lys Lys His Thr Ala His Phe Ser Lys Lys Gly Glu Glu Glu Asn Leu

               1285                1290                1295

Glu Gly Leu Gly Asn Gln Thr Lys Gln Ile Val Glu Lys Tyr Ala Cys

           1300                1305                1310

Thr Thr Arg Ile Ser Pro Asn Thr Ser Gln Gln Asn Phe Val Thr Gln

       1315                1320                1325

Arg Ser Lys Arg Ala Leu Lys Gln Phe Arg Leu Pro Leu Glu Glu Thr

   1330                1335                1340

Glu Leu Glu Lys Arg Ile Ile Val Asp Asp Thr Ser Thr Gln Trp Ser

1345               1350                1355                1360

Lys Asn Met Lys His Leu Thr Pro Ser Thr Leu Thr Gln Ile Asp Tyr

               1365                1370                1375

Asn Glu Lys Glu Lys Gly Ala Ile Thr Gln Ser Pro Leu Ser Asp Cys

           1380                1385                1390

Leu Thr Arg Ser His Ser Ile Pro Gln Ala Asn Arg Ser Pro Leu Pro

       1395                1400                1405

Ile Ala Lys Val Ser Ser Phe Pro Ser Ile Arg Pro Ile Tyr Leu Thr

   1410                1415                1420

Arg Val Leu Phe Gln Asp Asn Ser Ser His Leu Pro Ala Ala Ser Tyr

1425               1430                1435                1440

Arg Lys Lys Asp Ser Gly Val Gln Glu Ser Ser His Phe Leu Gln Gly

               1445                1450                1455

Ala Lys Lys Asn Asn Leu Ser Leu Ala Ile Leu Thr Leu Glu Met Thr

           1460                1465                1470

Gly Asp Gln Arg Glu Val Gly Ser Leu Gly Thr Ser Ala Thr Asn Ser

       1475                1480                1485

Val Thr Tyr Lys Lys Val Glu Asn Thr Val Leu Pro Lys Pro Asp Leu

   1490                1495                1500

Pro Lys Thr Ser Gly Lys Val Glu Leu Leu Pro Lys Val His Ile Tyr

1505               1510                1515                1520

Gln Lys Asp Leu Phe Pro Thr Glu Thr Ser Asn Gly Ser Pro Gly His

               1525                1530                1535

Leu Asp Leu Val Glu Gly Ser Leu Leu Gln Gly Thr Glu Gly Ala Ile

           1540                1545                1550

Lys Trp Asn Glu Ala Asn Arg Pro Gly Lys Val Pro Phe Leu Arg Val

       1555                1560                1565

Ala Thr Glu Ser Ser Ala Lys Thr Pro Ser Lys Leu Leu Asp Pro Leu

   1570                1575                1580

Ala Trp Asp Asn His Tyr Gly Thr Gln Ile Pro Lys Glu Glu Trp Lys

1585               1590                1595                1600

Ser Gln Glu Lys Ser Pro Glu Lys Thr Ala Phe Lys Lys Lys Asp Thr

               1605                1610                1615

Ile Leu Ser Leu Asn Ala Cys Glu Ser Asn His Ala Ile Ala Ala Ile

           1620                1625                1630

Asn Glu Gly Gln Asn Lys Pro Glu Ile Glu Val Thr Trp Ala Lys Gln

       1635                1640                1645

Gly Arg Thr Glu Arg Leu Cys Ser Gln Asn Pro Pro Val Leu Lys Arg

   1650                1655                1660

His Gln Arg Glu Ile Thr Arg Thr Thr Leu Gln Ser Asp Gln Glu Glu

1665               1670                1675                1680

Ile Asp Tyr Asp Asp Thr Ile Ser Val Glu Met Lys Lys Glu Asp Phe

               1685                1690                1695

Asp Ile Tyr Asp Glu Asp Glu Asn Gln Ser Pro Arg Ser Phe Gln Lys

           1700                1705                1710

Lys Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp Asp Tyr

       1715                1720                1725

Gly Met Ser Ser Ser Pro His Val Leu Arg Asn Arg Ala Gln Ser Gly

   1730                1735                1740

Ser Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr Asp Gly

1745               1750                1755                1760

Ser Phe Thr Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His Leu Gly

               1765                1770                1775

Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile Met Val

           1780                1785                1790

Thr Phe Arg Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser Ser Leu

       1795                1800                1805

Ile Ser Tyr Glu Glu Asp Gln Arg Gln Gly Ala Glu Pro Arg Lys Asn

   1810                1815                1820

Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Thr Tyr Phe Trp Lys Val Gln His

1825               1830                1835                1840

His Met Ala Pro Thr Lys Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr

               1845                1850                1855

Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val His Ser Gly Leu Ile Gly

           1860                1865                1870

Pro Leu Leu Val Cys His Thr Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly Arg

       1875                1880                1885

Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe Phe Thr Ile Phe Asp Glu

   1890                1895                1900

Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Met Glu Arg Asn Cys Arg Ala

1905               1910                1915                1920

Pro Cys Asn Ile Gln Met Glu Asp Pro Thr Phe Lys Glu Asn Tyr Arg

               1925                1930                1935

Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Ile Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val

           1940                1945                1950

Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Ser

       1955                1960                1965

Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr Val

   1970                1975                1980

Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Leu Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly

1985               1990                1995                2000

Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser Lys Ala Gly Ile Trp Arg

               2005                2010                2015

Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu His Ala Gly Met Ser Thr Leu

           2020                2025                2030

Phe Leu Val Tyr Ser Asn Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Met Ala Ser

       2035                2040                2045

Gly His Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly Gln Tyr Gly Gln

   2050                2055                2060

Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala

2065               2070                2075                2080

Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala

               2085                2090                2095

Pro Met Ile Ile His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe

           2100                2105                2110

Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly

       2115                2120                2125

Lys Lys Trp Gln Thr Tyr Arg Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val

   2130                2135                2140

Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ile Phe Asn

2145               2150                2155                2160

Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Tyr Ser

               2165                2170                2175

Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser

           2180                2185                2190

Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Ala Ile Ser Asp Ala Gln

       2195                2200                2205

Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro

   2210                2215                2220

Ser Lys Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Ser Asn Ala Trp Arg Pro

2225               2230                2235                2240

Gln Val Asn Asn Pro Lys Glu Trp Leu Gln Val Asp Phe Gln Lys Thr

               2245                2250                2255

Met Lys Val Thr Gly Val Thr Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Leu Thr

           2260                2265                2270

Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly His

       2275                2280                2285

Gln Trp Thr Leu Phe Phe Gln Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln Gly

   2290                2295                2300

Asn Gln Asp Ser Phe Thr Pro Val Val Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu

2305               2310                2315                2320

Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ser Trp Val His Gln Ile

               2325                2330                2335

Ala Leu Arg Met Glu Val Leu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Leu Tyr

           2340                2345                2350

<210>3

<211>6402

<212>DNA

<213>猪

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(6399)

<400>3

atg cag cta gag ctc tcc acc tgt gtc ttt ctg tgt ctc ttg cca ctc    48

Met Gln Leu Glu Leu Ser Thr Cys Val Phe Leu Cys Leu Leu Pro Leu

  1               5                  10                  15

ggc ttt agt gcc atc agg aga tac tac ctg ggc gca gtg gaa ctg tcc    96

Gly Phe Ser Ala Ile Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser

             20                  25                  30

tgg gac tac cgg caa agt gaa ctc ctc cgt gag ctg cac gtg gac acc    144

Trp Asp Tyr Arg Gln Ser Glu Leu Leu Arg Glu Leu His Val Asp Thr

         35                  40                  45

aga ttt cct gct aca gcg cca gga gct ctt ccg ttg ggc ccg tca gtc    192

Arg Phe Pro Ala Thr Ala Pro Gly Ala Leu Pro Leu Gly Pro Ser Val

     50                  55                  60

ctg tac aaa aag act gtg ttc gta gag ttc acg gat caa ctt ttc agc    240

Leu Tyr Lys Lys Thr Val Phe Val Glu Phe Thr Asp Gln Leu Phe Ser

 65                  70                  75                  80

gtt gcc agg ccc agg cca cca tgg atg ggt ctg ctg ggt cct acc atc    288

Val Ala Arg Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile

                 85                  90                  95

cag gct gag gtt tac gac acg gtg gtc gtt acc ctg aag aac atg gct    336

Gln Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Val Thr Leu Lys Asn Met Ala

            100                 105                 110

tct cat ccc gtt agt ctt cac gct gtc ggc gtc tcc ttc tgg aaa tct    384

Ser His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Phe Trp Lys Ser

        115                 120                 125

tcc gaa ggc gct gaa tat gag gat cac acc agc caa agg gag aag gaa    432

Ser Glu Gly Ala Glu Tyr Glu Asp His Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu

    130                 135                 140

gac gat aaa gtc ctt ccc ggt aaa agc caa acc tac gtc tgg cag gtc    480

Asp Asp Lys Val Leu Pro Gly Lys Ser Gln Thr Tyr Val Trp Gln Val

145                 150                 155                 160

ctg aaa gaa aat ggt cca aca gcc tct gac cca cca tgt ctc acc tac    528

Leu Lys Glu Asn Gly Pro Thr Ala Ser Asp Pro Pro Cys Leu Thr Tyr

                165                 170                 175

tca tac ctg tct cac gtg gac ctg gtg aaa gac ctg aat tcg ggc ctc    576

Ser Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu

            180                 185                 190

att gga gcc ctg ctg gtt tgt aga gaa ggg agt ctg acc aga gaa agg    624

Ile Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Thr Arg Glu Arg

        195                 200                 205

acc cag aac ctg cac gaa ttt gta cta ctt ttt gct gtc ttt gat gaa    672

Thr Gln Asn Leu His Glu Phe Val Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu

    210                 215                 220

ggg aaa agt tgg cac tca gca aga aat gac tcc tgg aca cgg gcc atg    720

Gly Lys Ser Trp His Ser Ala Arg Asn Asp Ser Trp Thr Arg Ala Met

225                 230                 235                 240

gat ccc gca cct gcc agg gcc cag cct gca atg cac aca gtc aat ggc    768

Asp Pro Ala Pro Ala Arg Ala Gln Pro Ala Met His Thr Val Asn Gly

                245                 250                 255

tat gtc aac agg tct ctg cca ggt ctg atc gga tgt cat aag aaa tca    816

Tyr Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Lys Lys Ser

            260                 265                 270

gtc tac tgg cac gtg att gga atg ggc acc agc ccg gaa gtg cac tcc    864

Val Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Ser Pro Glu Val His Ser

        275                 280                 285

att ttt ctt gaa ggc cac acg ttt ctc gtg agg cac cat cgc cag gct    912

Ile Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg His His Arg Gln Ala

    290                 295                 300

tcc ttg gag atc tcg cca cta act ttc ctc act gct cag aca ttc ctg    960

Ser Leu Glu Ile Ser Pro Leu Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Phe Leu

305                 310                 315                 320

atg gac ctt ggc cag ttc cta ctg ttt tgt cat atc tct tcc cac cac    1008

Met Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His His

                325                 330                 335

cat ggt ggc atg gag gct cac gtc aga gta gaa agc tgc gcc gag gag    1056

His Gly Gly Met Glu Ala His Val Arg Val Glu Ser Cys Ala Glu Glu

            340                 345                 350

ccc cag ctg cgg agg aaa gct gat gaa gag gaa gat tat gat gac aat    1104

Pro Gln Leu Arg Arg Lys Ala Asp Glu Glu Glu Asp Tyr Asp Asp Asn

        355                 360                 365

ttg tac gac tcg gac atg gac gtg gtc cgg ctc gat ggt gac gac gtg    1152

Leu Tyr Asp Ser Asp Met Asp Val Val Arg Leu Asp Gly Asp Asp Val

    370                 375                 380

tct ccc ttt atc caa atc cgc tcg gtt gcc aag aag cat ccc aaa acc    1200

Ser Pro Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr

385                 390                 395                 400

tgg gtg cac tac atc tct gca gag gag gag gac tgg gac tac gcc ccc    1248

Trp Val His Tyr Ile Ser Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro

                405                 410                 415

gcg gtc ccc agc ccc agt gac aga agt tat aaa agt ctc tac ttg aac    1296

Ala Val Pro Ser Pro Ser Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Leu Tyr Leu Asn

            420                 425                 430

agt ggt cct cag cga att ggt agg aaa tac aaa aaa gct cga ttc gtc    1344

Ser Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Ala Arg Phe Val

        435                 440                 445

gct tac acg gat gta aca ttt aag act cgt aaa gct att ccg tat gaa    1392

Ala Tyr Thr Asp Val Thr Phe Lys Thr Arg Lys Ala Ile Pro Tyr Glu

    450                 455                 460

tca gga atc ctg gga cct tta ctt tat gga gaa gtt gga gac aca ctt    1440

Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu

465                 470                 475                 480

ttg att ata ttt aag aat aaa gcg agc cga cca tat aac atc tac cct    1488

Leu Ile Ile Phe Lys Asn Lys Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro

                485                 490                 495

cat gga atc act gat gtc agc gct ttg cac cca ggg aga ctt cta aaa    1536

His Gly Ile Thr Asp Val Ser Ala Leu His Pro Gly Arg Leu Leu Lys

            500                 505                 510

ggt tgg aaa cat ttg aaa gac atg cca att ctg cca gga gag act ttc    1584

Gly Trp Lys His Leu Lys Asp Met Pro Ile Leu Pro Gly Glu Thr Phe

        515                 520                 525

aag tat aaa tgg aca gtg act gtg gaa gat ggg cca acc aag tcc gat    1632

Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp

    530                 535                 540

cct cgg tgc ctg acc cgc tac tac tcg agc tcc att aat cta gag aaa    1680

Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Ile Asn Leu Glu Lys

545                 550                 555                 560

gat ctg gct tcg gga ctc att ggc cct ctc ctc atc tgc tac aaa gaa    1728

Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu

                565                 570                 575

tct gta gac caa aga gga aac cag atg atg tca gac aag aga aac gtc    1776

Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Met Met Ser Asp Lys Arg Asn Val

            580                 585                 590

atc ctg ttt tct gta ttc gat gag aat caa agc tgg tac ctc gca gag    1824

Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Gln Ser Trp Tyr Leu Ala Glu

        595                 600                 605

aat att cag cgc ttc ctc ccc aat ccg gat gga tta cag ccc cag gat    1872

Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Asp Gly Leu Gln Pro Gln Asp

    610                 615                 620

cca gag ttc caa gct tct aac atc atg cac agc atc aat ggc tat gtt    1920

Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val

625                 630                 635                 640

ttt gat agc ttg cag ctg tcg gtt tgt ttg cac gag gtg gca tac tgg    1968

Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp

                645                 650                 655

tac att cta agt gtt gga gca cag acg gac ttc ctc tcc gtc ttc ttc    2016

Tyr Ile Leu Ser Val Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe

            660                 665                 670

tct ggc tac acc ttc aaa cac aaa atg gtc tat gaa gac aca ctc acc    2064

Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr

        675                 680                 685

ctg ttc ccc ttc tca gga gaa acg gtc ttc atg tca atg gaa aac cca    2112

Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro

    690                 695                 700

ggt ctc tgg gtc cta ggg tgc cac aac tca gac ttg cgg aac aga ggg    2160

Gly Leu Trp Val Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Leu Arg Asn Arg Gly

705                 710                 715                 720

atg aca gcc tta ctg aag gtg tat agt tgt gac agg gac att ggt gat    2208

Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Tyr Ser Cys Asp Arg Asp Ile Gly Asp

                725                 730                 735

tat tat gac aac act tat gaa gat att cca ggc ttc ttg ctg agt gga    2256

Tyr Tyr Asp Asn Thr Tyr Glu Asp Ile Pro Gly Phe Leu Leu Ser Gly

            740                 745                 750

aag aat gtc att gaa ccc aga agc ttt gcc cag aat tca aga ccc cct    2304

Lys Asn Val Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ala Gln Asn Ser Arg Pro Pro

        755                 760                 765

agt gcg agc caa aag caa ttc caa acc atc aca agt cca gaa gat gac    2352

Ser Ala Ser Gln Lys Gln Phe Gln Thr Ile Thr Ser Pro Glu Asp Asp

    770                 775                 780

gtg gag ctt gac ccg cag tct gga gag aga acc caa gca ctg gaa gaa    2400

Val Glu Leu Asp Pro Gln Ser Gly Glu Arg Thr Gln Ala Leu Glu Glu

785                 790                 795                 800

cta agt gtc ccc tct ggt gat ggg tcg atg ctc ttg gga cag aat cct    2448

Leu Ser Val Pro Ser Gly Asp Gly Ser Met Leu Leu Gly Gln Asn Pro

                805                 810                 815

gct cca cat ggc tca tcc tca tct gat ctt caa gaa gcc agg aat gag    2496

Ala Pro His Gly Ser Ser Ser Ser Asp Leu Gln Glu Ala Arg Asn Glu

            820                 825                 830

gct gat gat tat tta cct gga gca aga gaa aga aac acg gcc cca tcc    2544

Ala Asp Asp Tyr Leu Pro Gly Ala Arg Glu Arg Asn Thr Ala Pro Ser

        835                 840                 845

gca gcg gca cgt ctc aga cca gag ctg cat cac agt gcc gaa aga gta    2592

Ala Ala Ala Arg Leu Arg Pro Glu Leu His His Ser Ala Glu Arg Val

    850                 855                 860

ctt act cct gag cca gag aaa gag ttg aag aaa ctt gat tca aaa atg    2640

Leu Thr Pro Glu Pro Glu Lys Glu Leu Lys Lys Leu Asp Ser Lys Met

865                 870                 875                 880

tct agt tca tca gac ctt cta aag act tcg cca aca att cca tca gac    2688

Ser Ser Ser Ser Asp Leu Leu Lys Thr Ser Pro Thr Ile Pro Ser Asp

                885                 890                 895

acg ttg tca gcg gag act gaa agg aca cat tcc tta ggc ccc cca cac    2736

Thr Leu Ser Ala Glu Thr Glu Arg Thr His Ser Leu Gly Pro Pro His

            900                 905                 910

ccg cag gtt aat ttc agg agt caa tta ggt gcc att gta ctt ggc aaa    2784

Pro Gln Val Asn Phe Arg Ser Gln Leu Gly Ala Ile Val Leu Gly Lys

        915                 920                 925

aat tca tct cac ttt att ggg gct ggt gtc cct ttg ggc tcg act gag    2832

Asn Ser Ser His Phe Ile Gly Ala Gly Val Pro Leu Gly Ser Thr Glu

    930                 935                 940

gag gat cat gaa agc tcc ctg gga gaa aat gta tca cca gtg gag agt    2880

Glu Asp His Glu Ser Ser Leu Gly Glu Asn Val Ser Pro Val Glu Ser

945                 950                 955                 960

gac ggg ata ttt gaa aag gaa aga gct cat gga cct gct tca ctg acc    2928

Asp Gly Ile Phe Glu Lys Glu Arg Ala His Gly Pro Ala Ser Leu Thr

                965                 970                 975

aaa gac gat gtt tta ttt aaa gtt aat atc tct ttg gta aag aca aac    2976

Lys Asp Asp Val Leu Phe Lys Val Asn Ile Ser Leu Val Lys Thr Asn

            980                 985                 990

aag gca cga gtt tac tta aaa act aat aga aag att cac att gat gac    3024

Lys Ala Arg Val Tyr Leu Lys Thr Asn Arg Lys Ile His Ile Asp Asp

        995                1000                1005

gca gct tta tta act gag aat agg gca tct gca acg ttt atg gac aaa    3072

Ala Ala Leu Leu Thr Glu Asn Arg Ala Ser Ala Thr Phe Met Asp Lys

   1010                1015                1020

aat act aca gct tcg gga tta aat cat gtg tca aat tgg ata aaa ggg    3120

Asn Thr Thr Ala Ser Gly Leu Asn His Val Ser Asn Trp Ile Lys Gly

1025               1030                1035                1040

ccc ctt ggc aag aac ccc cta agc tcg gag cga ggc ccc agt cca gag    3168

Pro Leu Gly Lys Asn Pro Leu Ser Ser Glu Arg Gly Pro Ser Pro Glu

               1045                1050                1055

ctt ctg aca tct tca gga tca gga aaa tct gtg aaa ggt cag agt tct    3216

Leu Leu Thr Ser Ser Gly Ser Gly Lys Ser Val Lys Gly Gln Ser Ser

           1060                1065                1070

ggg cag ggg aga ata cgg gtg gca gtg gaa gag gaa gaa ctg agc aaa    3264

Gly Gln Gly Arg Ile Arg Val Ala Val Glu Glu Glu Glu Leu Ser Lys

       1075                1080                1085

ggc aaa gag atg atg ctt ccc aac agc gag ctc acc ttt ctc act aac    3312

Gly Lys Glu Met Met Leu Pro Asn Ser Glu Leu Thr Phe Leu Thr Asn

   1090                1095                1100

tcg gct gat gtc caa gga aac gat aca cac agt caa gga aaa aag tct    3360

Ser Ala Asp Val Gln Gly Asn Asp Thr His Ser Gln Gly Lys Lys Ser

1105               1110                1115                1120

cgg gaa gag atg gaa agg aga gaa aaa tta gtc caa gaa aaa gtc gac    3408

Arg Glu Glu Met Glu Arg Arg Glu Lys Leu Val Gln Glu Lys Val Asp

               1125                1130                1135

ttg cct cag gtg tat aca gcg act gga act aag aat ttc ctg aga aac    3456

Leu Pro Gln Val Tyr Thr Ala Thr Gly Thr Lys Asn Phe Leu Arg Asn

           1140                1145                1150

att ttt cac caa agc act gag ccc agt gta gaa ggg ttt gat ggg ggg    3504

Ile Phe His Gln Ser Thr Glu Pro Ser Val Glu Gly Phe Asp Gly Gly

       1155                1160                1165

tca cat gcg ccg gtg cct caa gac agc agg tca tta aat gat tcg gca    3552

Ser His Ala Pro Val Pro Gln Asp Ser Arg Ser Leu Asn Asp Ser Ala

   1170                1175                1180

gag aga gca gag act cac ata gcc cat ttc tca gca att agg gaa gag    3600

Glu Arg Ala Glu Thr His Ile Ala His Phe Ser Ala Ile Arg Glu Glu

1185               1190                1195                1200

gca ccc ttg gaa gcc ccg gga aat cga aca ggt cca ggt ccg agg agt    3648

Ala Pro Leu Glu Ala Pro Gly Asn Arg Thr Gly Pro Gly Pro Arg Ser

               1205                1210                1215

gcg gtt ccc cgc cgc gtt aag cag agc ttg aaa cag atc aga ctc ccg    3696

Ala Val Pro Arg Arg Val Lys Gln Ser Leu Lys Gln Ile Arg Leu Pro

           1220                1225                1230

cta gaa gaa ata aag cct gaa agg ggg gtg gtt ctg aat gcc acc tca    3744

Leu Glu Glu Ile Lys Pro Glu Arg Gly Val Val Leu Asn Ala Thr Ser

       1235                1240                1245

acc cgg tgg tct gaa agc agt cct atc tta caa gga gcc aaa aga aat    3792

Thr Arg Trp Ser Glu Ser Ser Pro Ile Leu Gln Gly Ala Lys Arg Asn

   1250                1255                1260

aac ctt tct tta cct ttc ctg acc ttg gaa atg gcc gga ggt caa gga    3840

Asn Leu Ser Leu Pro Phe Leu Thr Leu Glu Met Ala Gly Gly Gln Gly

1265               1270                1275                1280

aag atc agc gcc ctg ggg aaa agt gcc gca ggc ccg ctg gcg tcc ggg    3888

Lys Ile Ser Ala Leu Gly Lys Ser Ala Ala Gly Pro Leu Ala Ser Gly

               1285                1290                1295

aag ctg gag aag gct gtt ctc tct tca gca ggc ttg tct gaa gca tct    3936

Lys Leu Glu Lys Ala Val Leu Ser Ser Ala Gly Leu Ser Glu Ala Ser

           1300                1305                1310

ggc aaa gct gag ttt ctt cct aaa gtt cga gtt cat cgg gaa gac ctg    3984

Gly Lys Ala Glu Phe Leu Pro Lys Val Arg Val His Arg Glu Asp Leu

       1315                1320                1325

ttg cct caa aaa acc agc aat gtt tct tgc gca cac ggg gat ctc ggc    4032

Leu Pro Gln Lys Thr Ser Asn Val Ser Cys Ala His Gly Asp Leu Gly

   1330                1335                1340

cag gag atc ttc ctg cag aaa aca cgg gga cct gtt aac ctg aac aaa    4080

Gln Glu Ile Phe Leu Gln Lys Thr Arg Gly Pro Val Asn Leu Asn Lys

1345               1350                1355                1360

gta aat aga cct gga agg act ccc tcc aag ctt ctg ggt ccc ccg atg    4128

Val Asn Arg Pro Gly Arg Thr Pro Ser Lys Leu Leu Gly Pro Pro Met

               1365                1370                1375

ccc aaa gag tgg gaa tcc cta gag aag tca cca aaa agc aca gct ctc    4176

Pro Lys Glu Trp Glu Ser Leu Glu Lys Ser Pro Lys Ser Thr Ala Leu

           1380                1385                1390

agg acg aaa gac atc atc agt tta ccc ctg gac cgt cac gaa agc aat    4224

Arg Thr Lys Asp Ile Ile Ser Leu Pro Leu Asp Arg His Glu Ser Asn

       1395                1400                1405

cat tca ata gca gca aaa aat gaa gga caa gcc gag acc caa aga gaa    4272

His Ser Ile Ala Ala Lys Asn Glu Gly Gln Ala Glu Thr Gln Arg Glu

   1410                1415                1420

gcc gcc tgg acg aag cag gga ggg cct gga agg ctg tgc gct cca aag    4320

Ala Ala Trp Thr Lys Gln Gly Gly Pro Gly Arg Leu Cys Ala Pro Lys

1425               1430                1435                1440

cct ccg gtc ctg cga cgg cat cag agg gac ata agc ctt cct act ttt    4368

Pro Pro Val Leu Arg Arg His Gln Arg Asp Ile Ser Leu Pro Thr Phe

               1445                1450                1455

cag ccg gag gaa gac aaa atg gac tat gat gat atc ttc tca act gaa    4416

Gln Pro Glu Glu Asp Lys Met Asp Tyr Asp Asp Ile Phe Ser Thr Glu

           1460                1465                1470

acg aag gga gaa gat ttt gac att tac ggt gag gat gaa aat cag gac    4464

Thr Lys Gly Glu Asp Phe Asp Ile Tyr Gly Glu Asp Glu Asn Gln Asp

       1475                1480                1485

cct cgc agc ttt cag aag aga acc cga cac tat ttc att gct gcg gtg    4512

Pro Arg Ser Phe Gln Lys Arg Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val

   1490                1495                1500

gag cag ctc tgg gat tac ggg atg agc gaa tcc ccc cgg gcg cta aga    4560

Glu Gln Leu Trp Asp Tyr Gly Met Ser Glu Ser Pro Arg Ala Leu Arg

1505               1510                1515                1520

aac agg gct cag aac gga gag gtg cct cgg ttc aag aag gtg gtc ttc    4608

Asn Arg Ala Gln Asn Gly Glu Val Pro Arg Phe Lys Lys Val Val Phe

               1525                1530                1535

cgg gaa ttt gct gac ggc tcc ttc acg cag ccg tcg tac cgc ggg gaa    4656

Arg Glu Phe Ala Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Ser Tyr Arg Gly Glu

           1540                1545                1550

ctc aac aaa cac ttg ggg ctc ttg gga ccc tac atc aga gcg gaa gtt    4704

Leu Asn Lys His Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val

       1555                1560                1565

gaa gac aac atc atg gta act ttc aaa aac cag gcg tct cgt ccc tat    4752

Glu Asp Asn Ile Met Val Thr Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr

   1570                1575                1580

tcc ttc tac tcg agc ctt att tct tat ccg gat gat cag gag caa ggg    4800

Ser Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Pro Asp Asp Gln Glu Gln Gly

1585               1590                1595                1600

gca gaa cct cga cac aac ttc gtc cag cca aat gaa acc aga act tac    4848

Ala Glu Pro Arg His Asn Phe Val Gln Pro Asn Glu Thr Arg Thr Tyr

               1605                1610                1615

ttt tgg aaa gtg cag cat cac atg gca ccc aca gaa gac gag ttt gac    4896

Phe Trp Lys Val Gln His His Met Ala Pro Thr Glu Asp Glu Phe Asp

           1620                1625                1630

tgc aaa gcc tgg gcc tac ttt tct gat gtt gac ctg gaa aaa gat gtg    4944

Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val

       1635                1640                1645

cac tca ggc ttg atc ggc ccc ctt ctg atc tgc cgc gcc aac acc ctg    4992

His Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Arg Ala Asn Thr Leu

   1650                1655                1660

aac gct gct cac ggt aga caa gtg acc gtg caa gaa ttt gct ctg ttt    5040

Asn Ala Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe

1665               1670                1675                1680

ttc act att ttt gat gag aca aag agc tgg tac ttc act gaa aat gtg    5088

Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Val

               1685                1690                1695

gaa agg aac tgc cgg gcc ccc tgc cac ctg cag atg gag gac ccc act    5136

Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys His Leu Gln Met Glu Asp Pro Thr

           1700                1705                1710

ctg aaa gaa aac tat cgc ttc cat gca atc aat ggc tat gtg atg gat    5184

Leu Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Val Met Asp

       1715                1720                1725

aca ctc cct ggc tta gta atg gct cag aat caa agg atc cga tgg tat    5232

Thr Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln Asn Gln Arg Ile Arg Trp Tyr

   1730                1735                1740

ctg ctc agc atg ggc agc aat gaa aat atc cat tcg att cat ttt agc    5280

Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser

1745               1750            1755                    1760

gga cac gtg ttc agt gta cgg aaa aag gag gag tat aaa atg gcc gtg    5328

Gly His Val Phe Ser Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Val

               1765                1770                1775

tac aat ctc tat ccg ggt gtc ttt gag aca gtg gaa atg cta ccg tcc    5376

Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser

           1780                1785                1790

aaa gtt gga att tgg cga ata gaa tgc ctg att ggc gag cac ctg caa    5424

Lys Val Gly Ile Trp Arg Ile Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu Gln

       1795                1800                1805

gct ggg atg agc acg act ttc ctg gtg tac agc aag gag tgt cag gct    5472

Ala Gly Met Ser Thr Thr Phe Leu Val Tyr Ser Lys Glu Cys Gln Ala

   1810                1815                1820

cca ctg gga atg gct tct gga cgc att aga gat ttt cag atc aca gct    5520

Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly Arg Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala

1825               1830                1835                1840

tca gga cag tat gga cag tgg gcc cca aag ctg gcc aga ctt cat tat    5568

Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr

               1845                1850                1855

tcc gga tca atc aat gcc tgg agc acc aag gat ccc cac tcc tgg atc    5616

Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys Asp Pro His Ser Trp Ile

           1860                1865                1870

aag gtg gat ctg ttg gca cca atg atc att cac ggc atc atg acc cag    5664

Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile Met Thr Gln

       1875                1880                1885

ggt gcc cgt cag aag ttt tcc agc ctc tac atc tcc cag ttt atc atc    5712

Gly Ala Arg Gln Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile

   1890                1895                1900

atg tac agt ctt gac ggg agg aac tgg cag agt tac cga ggg aat tcc    5760

Met Tyr Ser Leu Asp Gly Arg Asn Trp Gln Ser Tyr Arg Gly Asn Ser

1905               1910                1915                1920

acg ggc acc tta atg gtc ttc ttt ggc aat gtg gac gca tct ggg att    5808

Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ala Ser Gly Ile

               1925                1930                1935

aaa cac aat att ttt aac cct ccg att gtg gct cgg tac atc cgt ttg    5856

Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile Val Ala Arg Tyr Ile Arg Leu

           1940                1945                1950

cac cca aca cat tac agc atc cgc agc act ctt cgc atg gag ttg atg    5904

His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met

       1955                1960                1965

ggc tgt gat tta aac agt tgc agc atg ccc ctg gga atg cag aat aaa    5952

Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Gln Asn Lys

   1970                1975                1980

gcg ata tca gac tca cag atc acg gcc tcc tcc cac cta agc aat ata    6000

Ala Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr Ala Ser Ser His Leu Ser Asn Ile

1985               1990                1995                2000

ttt gcc acc tgg tct cct tca caa gcc cga ctt cac ctc cag ggg cgg    6048

Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Gln Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg

               2005                2010                2015

acg aat gcc tgg cga ccc cgg gtg agc agc gca gag gag tgg ctg cag    6096

Thr Asn Ala Trp Arg Pro Arg Val Ser Ser Ala Glu Glu Trp Leu Gln

           2020                2025                2030

gtg gac ctg cag aag acg gtg aag gtc aca ggc atc acc acc cag ggc    6144

Val Asp Leu Gln Lys Thr Val Lys Val Thr Gly Ile Thr Thr Gln Gly

       2035                2040                2045

gtg aag tcc ctg ctc agc agc atg tat gtg aag gag ttc ctc gtg tcc    6192

Val Lys Ser Leu Leu Ser Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Val Ser

   2050                2055                2060

agt agt cag gac ggc cgc cgc tgg acc ctg ttt ctt cag gac ggc cac    6240

Ser Ser Gln Asp Gly Arg Arg Trp Thr Leu Phe Leu Gln Asp Gly His

2065               2070                2075                2080

acg aag gtt ttt cag ggc aat cag gac tcc tcc acc ccc gtg gtg aac    6288

Thr Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp Ser Ser Thr Pro Val Val Asn

               2085                2090                2095

gct ctg gac ccc ccg ctg ttc acg cgc tac ctg agg atc cac ccc acg    6336

Ala Leu Asp Pro Pro Leu Phe Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Thr

           2100                2105                2110

agc tgg gcg cag cac atc gcc ctg agg ctc gag gtt cta gga tgt gag    6384

Ser Trp Ala Gln His Ile Ala Leu Arg Leu Glu Val Leu Gly Cys Glu

       2115                2120                2125

gca cag gat ctc tac tga                                            6402

Ala Gln Asp Leu Tyr

   2130

<210>4

<211>2133

<212>PRT

<213>猪

<400>4

Met Gln Leu Glu Leu Ser Thr Cys Val Phe Leu Cys Leu Leu Pro Leu

  1               5                  10                  15

Gly Phe Ser Ala Ile Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser

             20                  25                  30

Trp Asp Tyr Arg Gln Ser Glu Leu Leu Arg Glu Leu His Val Asp Thr

         35                  40                  45

Arg Phe Pro Ala Thr Ala Pro Gly Ala Leu Pro Leu Gly Pro Ser Val

     50                  55                  60

Leu Tyr Lys Lys Thr Val Phe Val Glu Phe Thr Asp Gln Leu Phe Ser

 65                  70                  75                  80

Val Ala Arg Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile

                 85                  90                  95

Gln Ala Glu Val Tyr Asp Thr Val Val Val Thr Leu Lys Asn Met Ala

            100                 105                 110

Ser His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Phe Trp Lys Ser

        115                 120                 125

Ser Glu Gly Ala Glu Tyr Glu Asp His Thr Ser Gln Arg Glu Lys Glu

    130                 135                 140

Asp Asp Lys Val Leu Pro Gly Lys Ser Gln Thr Tyr Val Trp Gln Val

145                 150                 155                 160

Leu Lys Glu Asn Gly Pro Thr Ala Ser Asp Pro Pro Cys Leu Thr Tyr

                165                 170                 175

Ser Tyr Leu Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu

            180                 185                 190

Ile Gly Ala Leu Leu Val Cys Arg Glu Gly Ser Leu Thr Arg Glu Arg

        195                 200                 205

Thr Gln Asn Leu His Glu Phe Val Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu

    210                 215                 220

Gly Lys Ser Trp His Ser Ala Arg Asn Asp Ser Trp Thr Arg Ala Met

225                 230                 235                 240

Asp Pro Ala Pro Ala Arg Ala Gln Pro Ala Met His Thr Val Asn Gly

                245                 250                 255

Tyr Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Lys Lys Ser

            260                 265                 270

Val Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Ser Pro Glu Val His Ser

        275                 280                 285

Ile Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Leu Val Arg His His Arg Gln Ala

    290                 295                 300

Ser Leu Glu Ile Ser Pro Leu Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Phe Leu

305                 310                 315                 320

Met Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His His

                325                 330                 335

His Gly Gly Met Glu Ala His Val Arg Val Glu Ser Cys Ala Glu Glu

            340                 345                 350

Pro Gln Leu Arg Arg Lys Ala Asp Glu Glu Glu Asp Tyr Asp Asp Asn

        355                 360                 365

Leu Tyr Asp Ser Asp Met Asp Val Val Arg Leu Asp Gly Asp Asp Val

    370                 375                 380

Ser Pro Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys His Pro Lys Thr

385                 390                 395                 400

Trp Val His Tyr Ile Ser Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro

                405                 410                 415

Ala Val Pro Ser Pro Ser Asp Arg Ser Tyr Lys Ser Leu Tyr Leu Asn

            420                 425                 430

Ser Gly Pro Gln Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Ala Arg Phe Val

        435                 440                 445

Ala Tyr Thr Asp Val Thr Phe Lys Thr Arg Lys Ala Ile Pro Tyr Glu

    450                 455                 460

Ser Gly Ile Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu

465                 470                 475                 480

Leu Ile Ile Phe Lys Asn Lys Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro

                485                 490                 495

His Gly Ile Thr Asp Val Ser Ala Leu His Pro Gly Arg Leu Leu Lys

            500                 505                 510

Gly Trp Lys His Leu Lys Asp Met Pro Ile Leu Pro Gly Glu Thr Phe

        515                 520                 525

Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp

    530                 535                 540

Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Ser Ile Asn Leu Glu Lys

545                 550                 555                 560

Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu

                565                 570                 575

Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Met Met Ser Asp Lys Arg Asn Val

            580                 585                 590

Ile Leu Phe Ser Val Phe Asp Glu Asn Gln Ser Trp Tyr Leu Ala Glu

        595                 600                 605

Asn Ile Gln Arg Phe Leu Pro Asn Pro Asp Gly Leu Gln Pro Gln Asp

    610                 615                 620

Pro Glu Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val

625                 630                 635                 640

Phe Asp Ser Leu Gln Leu Ser Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp

                645                 650                 655

Tyr Ile Leu Ser Val Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Val Phe Phe

            660                 665                 670

Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr

        675                 680                 685

Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro

    690                 695                 700

Gly Leu Trp Val Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Leu Arg Asn Arg Gly

705                 710                 715                 720

Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Tyr Ser Cys Asp Arg Asp Ile Gly Asp

                725                 730                 735

Tyr Tyr Asp Asn Thr Tyr Glu Asp Ile Pro Gly Phe Leu Leu Ser Gly

            740                 745                 750

Lys Asn Val Ile Glu Pro Arg Ser Phe Ala Gln Asn Ser Arg Pro Pro

        755                 760                 765

Ser Ala Ser Gln Lys Gln Phe Gln Thr Ile Thr Ser Pro Glu Asp Asp

    770                 775                 780

Val Glu Leu Asp Pro Gln Ser Gly Glu Arg Thr Gln Ala Leu Glu Glu

785                 790                 795                 800

Leu Ser Val Pro Ser Gly Asp Gly Ser Met Leu Leu Gly Gln Asn Pro

                805                 810                 815

Ala Pro His Gly Ser Ser Ser Ser Asp Leu Gln Glu Ala Arg Asn Glu

            820                 825                 830

Ala Asp Asp Tyr Leu Pro Gly Ala Arg Glu Arg Asn Thr Ala Pro Ser

        835                 840                 845

Ala Ala Ala Arg Leu Arg Pro Glu Leu His His Ser Ala Glu Arg Val

    850                 855                 860

Leu Thr Pro Glu Pro Glu Lys Glu Leu Lys Lys Leu Asp Ser Lys Met

865                 870                 875                 880

Ser Ser Ser Ser Asp Leu Leu Lys Thr Ser Pro Thr Ile Pro Ser Asp

                885                 890                 895

Thr Leu Ser Ala Glu Thr Glu Arg Thr His Ser Leu Gly Pro Pro His

            900                 905                 910

Pro Gln Val Asn Phe Arg Ser Gln Leu Gly Ala Ile Val Leu Gly Lys

        915                 920                 925

Asn Ser Ser His Phe Ile Gly Ala Gly Val Pro Leu Gly Ser Thr Glu

    930                 935                 940

Glu Asp His Glu Ser Ser Leu Gly Glu Asn Val Ser Pro Val Glu Ser

945                 950                 955                 960

Asp Gly Ile Phe Glu Lys Glu Arg Ala His Gly Pro Ala Ser Leu Thr

                965                 970                 975

Lys Asp Asp Val Leu Phe Lys Val Asn Ile Ser Leu Val Lys Thr Asn

            980                 985                 990

Lys Ala Arg Val Tyr Leu Lys Thr Asn Arg Lys Ile His Ile Asp Asp

        995                1000                1005

Ala Ala Leu Leu Thr Glu Asn Arg Ala Ser Ala Thr Phe Met Asp Lys

   1010                1015                1020

Asn Thr Thr Ala Ser Gly Leu Asn His Val Ser Asn Trp Ile Lys Gly

1025               1030                1035                1040

Pro Leu Gly Lys Asn Pro Leu Ser Ser Glu Arg Gly Pro Ser Pro Glu

               1045                1050                1055

Leu Leu Thr Ser Ser Gly Ser Gly Lys Ser Val Lys Gly Gln Ser Ser

           1060                1065                1070

Gly Gln Gly Arg Ile Arg Val Ala Val Glu Glu Glu Glu Leu Ser Lys

       1075                1080                1085

Gly Lys Glu Met Met Leu Pro Asn Ser Glu Leu Thr Phe Leu Thr Asn

   1090                1095                1100

Ser Ala Asp Val Gln Gly Asn Asp Thr His Ser Gln Gly Lys Lys Ser

1105              1110                 1115                1120

Arg Glu Glu Met Glu Arg Arg Glu Lys Leu Val Gln Glu Lys Val Asp

               1125                1130                1135

Leu Pro Gln Val Tyr Thr Ala Thr Gly Thr Lys Asn Phe Leu Arg Asn

           1140                1145                1150

Ile Phe His Gln Ser Thr Glu Pro Ser Val Glu Gly Phe Asp Gly Gly

       1155                1160                1165

Ser His Ala Pro Val Pro Gln Asp Ser Arg Ser Leu Asn Asp Ser Ala

   1170                1175                1180

Glu Arg Ala Glu Thr His Ile Ala His Phe Ser Ala Ile Arg Glu Glu

1185               1190                1195                1200

Ala Pro Leu Glu Ala Pro Gly Asn Arg Thr Gly Pro Gly Pro Arg Ser

               1205                1210                1215

Ala Val Pro Arg Arg Val Lys Gln Ser Leu Lys Gln Ile Arg Leu Pro

           1220                1225                1230

Leu Glu Glu Ile Lys Pro Glu Arg Gly Val Val Leu Asn Ala Thr Ser

       1235                1240                1245

Thr Arg Trp Ser Glu Ser Ser Pro Ile Leu Gln Gly Ala Lys Arg Asn

   1250                1255                1260

Asn Leu Ser Leu Pro Phe Leu Thr Leu Glu Met Ala Gly Gly Gln Gly

1265               1270                1275                1280

Lys Ile Ser Ala Leu Gly Lys Ser Ala Ala Gly Pro Leu Ala Ser Gly

               1285                1290                1295

Lys Leu Glu Lys Ala Val Leu Ser Ser Ala Gly Leu Ser Glu Ala Ser

           1300                1305                1310

Gly Lys Ala Glu Phe Leu Pro Lys Val Arg Val His Arg Glu Asp Leu

       1315                1320                1325

Leu Pro Gln Lys Thr Ser Asn Val Ser Cys Ala His Gly Asp Leu Gly

   1330                1335                1340

Gln Glu Ile Phe Leu Gln Lys Thr Arg Gly Pro Val Asn Leu Asn Lys

1345               1350                1355                1360

Val Asn Arg Pro Gly Arg Thr Pro Ser Lys Leu Leu Gly Pro Pro Met

               1365                1370                1375

Pro Lys Glu Trp Glu Ser Leu Glu Lys Ser Pro Lys Ser Thr Ala Leu

           1380                1385                1390

Arg Thr Lys Asp Ile Ile Ser Leu Pro Leu Asp Arg His Glu Ser Asn

       1395                1400                1405

His Ser Ile Ala Ala Lys Asn Glu Gly Gln Ala Glu Thr Gln Arg Glu

   1410                1415                1420

Ala Ala Trp Thr Lys Gln Gly Gly Pro Gly Arg Leu Cys Ala Pro Lys

1425               1430                1435                1440

Pro Pro Val Leu Arg Arg His Gln Arg Asp Ile Ser Leu Pro Thr Phe

               1445                1450                1455

Gln Pro Glu Glu Asp Lys Met Asp Tyr Asp Asp Ile Phe Ser Thr Glu

           1460                1465                1470

Thr Lys Gly Glu Asp Phe Asp Ile Tyr Gly Glu Asp Glu Asn Gln Asp

       1475                1480                1485

Pro Arg Ser Phe Gln Lys Arg Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val

   1490                1495                1500

Glu Gln Leu Trp Asp Tyr Gly Met Ser Glu Ser Pro Arg Ala Leu Arg

1505               1510                1515                1520

Asn Arg Ala Gln Asn Gly Glu Val Pro Arg Phe Lys Lys Val Val Phe

               1525                1530                1535

Arg Glu Phe Ala Asp Gly Ser Phe Thr Gln Pro Ser Tyr Arg Gly Glu

           1540                1545                1550

Leu Asn Lys His Leu Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val

       1555                1560                1565

Glu Asp Asn Ile Met Val Thr Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr

   1570                1575                1580

Ser Phe Tyr Ser Ser Leu Ile Ser Tyr Pro Asp Asp Gln Glu Gln Gly

1585               1590                1595                1600

Ala Glu Pro Arg His Asn Phe Val Gln Pro Asn Glu Thr Arg Thr Tyr

               1605                1610                1615

Phe Trp Lys Val Gln His His Met Ala Pro Thr Glu Asp Glu Phe Asp

           1620                1625                1630

Cys Lys Ala Trp Ala Tyr Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Lys Asp Val

       1635                1640                1645

His Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Arg Ala Asn Thr Leu

   1650                1655                1660

Asn Ala Ala His Gly Arg Gln Val Thr Val Gln Glu Phe Ala Leu Phe

1665               1670                1675                1680

Phe Thr Ile Phe Asp Glu Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Val

               1685                1690                1695

Glu Arg Asn Cys Arg Ala Pro Cys His Leu Gln Met Glu Asp Pro Thr

           1700                1705                1710

Leu Lys Glu Asn Tyr Arg Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Val Met Asp

       1715                1720                1725

Thr Leu Pro Gly Leu Val Met Ala Gln Asn Gln Arg Ile Arg Trp Tyr

   1730                1735                1740

Leu Leu Ser Met Gly Ser Asn Glu Asn Ile His Ser Ile His Phe Ser

1745               1750                1755                1760

Gly His Val Phe Ser Val Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Val

               1765                1770                1775

Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly Val Phe Glu Thr Val Glu Met Leu Pro Ser

           1780                1785                1790

Lys Val Gly Ile Trp Arg Ile Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu Gln

       1795                1800                1805

Ala Gly Met Ser Thr Thr Phe Leu Val Tyr Ser Lys Glu Cys Gln Ala

   1810                1815                1820

Pro Leu Gly Met Ala Ser Gly Arg Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala

1825               1830                1835                1840

Ser Gly Gln Tyr Gly Gln Trp Ala Pro Lys Leu Ala Arg Leu His Tyr

               1845                1850                1855

Ser Gly Ser Ile Asn Ala Trp Ser Thr Lys Asp Pro His Ser Trp Ile

           1860                1865                1870

Lys Val Asp Leu Leu Ala Pro Met Ile Ile His Gly Ile Met Thr Gln

       1875                1880                1885

Gly Ala Arg Gln Lys Phe Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile

   1890                1895                1900

Met Tyr Ser Leu Asp Gly Arg Asn Trp Gln Ser Tyr Arg Gly Asn Ser

1905               1910                1915                1920

Thr Gly Thr Leu Met Val Phe Phe Gly Asn Val Asp Ala Ser Gly Ile

               1925                1930                1935

Lys His Asn Ile Phe Asn Pro Pro Ile Val Ala Arg Tyr Ile Arg Leu

           1940                1945                1950

His Pro Thr His Tyr Ser Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met

       1955                1960                1965

Gly Cys Asp Leu Asn Ser Cys Ser Met Pro Leu Gly Met Gln Asn Lys

   1970                1975                1980

Ala Ile Ser Asp Ser Gln Ile Thr Ala Ser Ser His Leu Ser Asn Ile

1985               1990                1995                2000

Phe Ala Thr Trp Ser Pro Ser Gln Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg

               2005                2010                2015

Thr Asn Ala Trp Arg Pro Arg Val Ser Ser Ala Glu Glu Trp Leu Gln

           2020                2025                2030

Val Asp Leu Gln Lys Thr Val Lys Val Thr Gly Ile Thr Thr Gln Gly

       2035                2040                2045

Val Lys Ser Leu Leu Ser Ser Met Tyr Val Lys Glu Phe Leu Val Ser

   2050                2055                2060

Ser Ser Gln Asp Gly Arg Arg Trp Thr Leu Phe Leu Gln Asp Gly His

2065               2070                2075                2080

Thr Lys Val Phe Gln Gly Asn Gln Asp Ser Ser Thr Pro Val Val Asn

               2085                2090                2095

Ala Leu Asp Pro Pro Leu Phe Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Thr

           2100                2105                2110

Ser Trp Ala Gln His Ile Ala Leu Arg Leu Glu Val Leu Gly Cys Glu

       2115                2120                2125

Ala Gln Asp Leu Tyr

   2130

<210>5

<211>7493

<212>DNA

<213>小鼠

<400>5

tctagagttt ctttgctaca ggtaccaagg aacagtcttt tagaataggc taggaattta 60

aatacacctg aacgcccctc ctcagtattc tgttcctttt cttaaggatt caaacttgtt 120

aggatgcacc cagcaggaaa tgggttaagc cttagctcag ccactcttcc tattccagtt 180

ttcctgtgcc tgcttcctac tacccaaaag gaagtaatcc ttcagatctg ttttgtgcta 240

atgctacttt cactcacagt agataaactt ccagaaaatc ctctgcaaaa tatttaggac 300

tttttactaa atcattacat ttctttttgt tcttaaaagc taaagttatt ttagagaaga 360

gttaaatttt catttcttta gttgaacatt ttctagtaat aaaagccatg caaatagcac 420

tcttcgcttg cttctttctg agccttttca atttctgctc tagtgccatc agaagatact 480

accttggtgc agtggaattg tcctggaact atattcagag tgatctgctc agtgtgctgc 540

atacagactc aagatttctt cctagaatgt caacatcttt tccattcaac acctccatca 600

tgtataaaaa gactgtgttt gtagagtaca aggaccagct tttcaacatt gccaagccca 660

ggccaccctg gatgggtttg ctaggtccta ccatttggac tgaggttcat gacacagtgg 720

tcattacact taaaaacatg gcttctcatc ctgtcagtct tcatgctgtt ggtgtgtcct 780

actggaaagc ttctgaggga gatgaatatg aagatcagac aagccaaatg gagaaggaag 840

atgataaagt tttccctggt gaaagtcata cttatgtttg gcaagtcctg aaagagaatg 900

gtccaatggc ctctgaccct ccatgtctca cttactcata tatgtctcat gtggatctgg 960

tgaaagattt gaattcaggc ctcattggag ctctgctagt atgtaaagaa ggcagtctct 1020

ccaaagaaag aacacagatg ttgtaccaat ttgtactgct ttttgctgta tttgatgaag 1080

ggaagagctg gcactcagaa acaaacgact cttatacaca gtctatggat tctgcatctg 1140

ctagagactg gcctaaaatg cacacagtca atggctatgt aaacaggtct cttccaggtc 1200

tgattggatg ccataggaaa tcagtctact ggcacgtgat tggaatgggc accactcctg 1260

aaatacactc aatattcctc gaaggtcaca cattttttgt gaggaaccac cgtcaagctt 1320

cattggagat atcaccaata actttcctta ctgctcaaac actcttgata gatcttgggc 1380

agttcctact attttgtcat atctcttccc ataaacatga tggcatggaa gcttatgtca 1440

aagtagatag ctgccctgag gaatcccaat ggcaaaagaa aaataataat gaggaaatgg 1500

aagattatga tgatgatctt tattcagaaa tggatatgtt cacattggat tatgacagct 1560

ctccttttat ccaaattcgc tcggttgcta aaaagtaccc taaaacttgg atacattata 1620

tttctgctga ggaggaagac tgggactatg caccttcagt tcctacctcg gataatggaa 1680

gttataaaag ccagtatctg agcaatggtc ctcatcggat tggtaggaaa tataaaaaag 1740

tcagatttat agcatacaca gatgaaacct ttaagactcg tgaaactatt cagcatgaat 1800

caggactctt gggaccttta ctttatggag aagttggaga cacactgttg attattttta 1860

agaatcaagc aagccgacca tataacattt accctcatgg aatcactgat gtcagtcctc 1920

tacatgcaag gagattgcca agaggtataa agcacgtgaa ggatttgcca attcatccag 1980

gagagatatt caagtacaag tggacagtta cagtagaaga tggaccaact aaatcagatc 2040

cacggtgcct gacccgctat tattcaagtt tcattaaccc tgagagagat ctagcttcag 2100

gactgattgg ccctcttctc atctgctaca aagaatctgt agatcaaagg ggaaaccaga 2160

tgatgtcaga caaaagaaat gtcatcctgt tttctatatt tgatgagaac caaagctggt 2220

acatcacaga gaacatgcaa cgcttcctcc ccaatgcagc taaaacacag ccccaggacc 2280

ctgggttcca ggcctccaac atcatgcaca gcatcaatgg ctatgttttt gatagcttgg 2340

agttgacagt ttgtttgcat gaggtggcat actggcacat tctcagtgtt ggagcacaga 2400

cagacttctt atctatcttc ttctctggat atactttcaa acacaaaatg gtctatgaag 2460

atacacttac cctgttccca ttctcaggag aaactgtctt tatgtcgatg gaaaacccag 2520

gtctatgggt cttggggtgt cataattcag actttcggaa gagaggtatg acagcattgc 2580

tgaaagtttc tagttgtgac aagagcacta gtgattatta tgaagaaata tatgaagata 2640

ttccaacaca gttggtgaat gagaacaatg tcattgatcc cagaagcttc ttccagaata 2700

caaatcatcc taatactagg aaaaagaaat tcaaagattc cacaattcca aaaaatgata 2760

tggagaagat tgagcctcag tttgaagaga tagcagagat gcttaaagta cagagtgtct 2820

cagttagtga catgttgatg ctcttgggac agagtcatcc tactccacat ggcttatttt 2880

tatcagatgg ccaagaagcc atctatgagg ctattcatga tgatcattca ccaaatgcaa 2940

tagacagcaa tgaaggccca tctaaagtga cccaactcag gccagaatcc catcacagtg 3000

agaaaatagt atttactcct cagcccggcc tccagttaag atccaataaa agtttggaga 3060

caactataga agtaaagtgg aagaaacttg gtttgcaagt ttctagtttg ccaagtaatc 3120

taatgactac aacaattctg tcagacaatt tgaaagcaac ttttgaaaag acagattctt 3180

caggatttcc agatatgcca gttcactcta gtagtaaatt aagtactact gcatttggta 3240

agaaagcata ttcccttgtt gggtctcatg tacctttaaa cgcgagtgaa gaaaatagtg 3300

attccaacat attggattca actttaatgt atagtcaaga aagtttacca agagataata 3360

tattatcaat agagaatgat agattactca gagagaagag gtttcatgga attgctttat 3420

tgaccaaaga taatacttta ttcaaagaca atgtctcctt aatgaaaaca aacaaaacat 3480

ataatcattc aacaactaat gaaaaactac acactgagag cccaacatca attgagaata 3540

gtacaacaga cttgcaagat gccatattaa aggtcaatag tgagattcaa gaagtaacag 3600

ctttgattca tgatggaaca cttttaggca aaaattctac atatttgaga ctaaaccata 3660

tgctaaatag aactacctca acaaaaaata aagacatatt tcatagaaaa gatgaagatc 3720

ctattccaca agatgaagag aatacaatca tgccattttc caagatgttg ttcttgtcag 3780

aatcttcaaa ttggtttaaa aagaccaatg gaaataattc cttgaactct gagcaagaac 3840

atagtccaaa gcaattagta tatttaatgt ttaaaaaata tgtaaaaaat caaagtttct 3900

tgtcagagaa aaataaagtc acagtagaac aggatggatt tacaaagaac ataggactta 3960

aagacatggc ttttccacat aatatgagca tatttcttac cactttgtct aacgtacatg 4020

aaaatggtag gcacaatcaa gaaaaaaata ttcaggaaga gatagagaag gaagcactaa 4080

ttgaagagaa agtagttttg ccccaggtgc acgaagcaac tggctctaag aatttcttga 4140

aagacatatt gatactaggc actaggcaaa atataagttt atatgaagta catgtaccag 4200

tacttcaaaa catcacatca ataaacaatt caacaaatac agtacagatt cacatggagc 4260

atttctttaa aagaaggaag gacaaggaaa caaattcaga aggcttggta aataaaacca 4320

gagaaatggt aaaaaactat ccaagccaga agaatattac tactcaacgt agtaaacggg 4380

ctttgggaca attcagactg tcaactcaat ggcttaaaac cataaactgt tcaacacagt 4440

gtatcattaa acagatagac cacagcaagg aaatgaaaaa gttcattact aaatcttcct 4500

tatcagattc ttctgtgatt aaaagcacca ctcagacaaa tagttctgac tcacacattg 4560

taaaaacatc agcatttcca ccaatagatc tcaaaaggag tccattccaa aacaaatttt 4620

ctcatgttca agcatcatcc tacatttatg actttaagac aaaaagttca agaattcaag 4680

aaagcaataa tttcttaaaa gaaaccaaaa taaataaccc ttctttagcc attctaccat 4740

ggaatatgtt catagatcaa ggaaaattta cctccccagg gaaaagtaac acaaactcag 4800

tcacatataa gaaacgtgag aacattattt tcttgaaacc aactttgcct gaagaatctg 4860

gcaaaattga attgcttcct caagtttcca ttcaagagga agaaatttta cctacagaaa 4920

ctagccatgg atctcctgga cacttgaatc tcatgaaaga ggtctttctt cagaaaatac 4980

aggggcctac taaatggaat aaagcaaaga ggcatggaga aagtataaaa ggtaaaacag 5040

agagctctaa aaatactcgc tcaaaactgc taaatcatca tgcttgggat tatcattatg 5100

ctgcacagat accaaaagat atgtggaaat ccaaagagaa gtcaccagaa attatatcca 5160

ttaagcaaga ggacaccatt ttgtctctga ggcctcatgg aaacagtcat tcaatagggg 5220

caaatgagaa acaaaattgg cctcaaagag aaaccacttg ggtaaagcaa ggccaaactc 5280

aaaggacatg ctctcaaatc ccaccagtgt tgaaacgaca tcaaagggaa cttagtgctt 5340

ttcaatcaga acaagaagca actgactatg atgatgccat caccattgaa acaatcgagg 5400

attttgacat ttacagtgag gacataaagc aaggtccccg cagctttcaa cagaaaacaa 5460

ggcactattt tattgcagct gtggaacgac tctgggacta tgggatgagt acatctcatg 5520

ttctacgaaa taggtatcaa agtgacaatg tacctcagtt caagaaagta gttttccagg 5580

aatttactga tggctccttt agtcagccct tatatcgtgg agaattaaat gaacacctgg 5640

ggttgttggg cccatatata agagcagaag ttgaagacaa cattatggta actttcaaaa 5700

accaggcctc ccgtccctac tccttctatt ctagcctcat ttcttataaa gaagatcaga 5760

gaggagaaga acctagaaga aactttgtca agcctaatga aaccaaaatt tatttttgga 5820

aagtacaaca tcatatggca cccacagaag atgagtttga ctgcaaggcc tgggcttatt 5880

tctctgatgt tgatcttgaa agagatatgc actcgggatt aattggaccc cttctgattt 5940

gccacgcgaa cacactgaat cctgctcatg ggagacaagt gtcagtacag gaatttgctc 6000

tgcttttcac tatctttgat gagaccaaga gctggtactt cactgaaaac gtgaaaagga 6060

actgcaagac accctgcaat ttccagatgg aagaccccac tttgaaagag aattatcgct 6120

tccatgcaat caatggttat gtaatggata ccctaccagg cttagtaatg gctcaagatc 6180

aaaggattcg atggtatctt ctcagcatgg gcaacaatga gaacatccaa tctattcatt 6240

tcagtggaca tgttttcact gtacggaaaa aagaggagta taaaatggca gtgtacaacc 6300

tctacccagg tgtttttgag actctggaaa tgataccatc cagagctgga atatggcgag 6360

tagaatgcct tattggcgag cacttacagg ctgggatgag cactcttttt ctggtgtaca 6420

gcaagcagtg tcagattcct cttggaatgg cttctggaag catccgtgat ttccagatta 6480

cagcttcagg acattatgga cagtgggccc caaacctggc aagacttcat tattccggat 6540

caatcaatgc ctggagtacc aaggagccct tttcttggat caaggtagat ctgttggcac 6600

caatgattgt tcatggcatc aagactcagg gtgctcgtca gaaattttcc agcctttata 6660

tctctcaatt tatcatcatg tatagcctgg atgggaagaa gtggctgagt tatcaaggaa 6720

attccactgg aaccttaatg gttttctttg gcaatgtgga ctcatctggg attaagcata 6780

atagttttaa tcctccaatt attgctcgat atatccgttt gcaccccact cattctagca 6840

tccgtagtac tcttcgcatg gagttgatgg gctgtgattt aaacagttgc agcataccat 6900

tgggaatgga aagtaaagta atatcagata cacaaatcac tgcctcatcc tacttcacca 6960

acatgtttgc tacttggtct ccttcacaag ctcgacttca cctccaggga aggactaatg 7020

cctggcgacc tcaggtgaat gatccaaaac aatggttgca agtggactta caaaagacaa 7080

tgaaagtcac tggaataata acccagggag tgaaatctct ctttaccagc atgtttgtga 7140

aagagttcct tatttccagc agtcaagatg gccatcactg gactcaaatt ttatacaatg 7200

gcaaggtaaa ggtttttcag gggaatcagg actcatccac acctatgatg aattctctag 7260

acccaccatt actcactcgc tatcttcgaa ttcaccccca gatctgggag caccaaattg 7320

ctctgaggct tgagattcta ggatgtgagg cccagcagca atactgaggt agcctctgca 7380

tcacctgctt attccccttc ctcagctcaa agattgtctt aatgttttat tgctgtgaag 7440

agacactatg accatggcaa ctctttataa aataaagcat ttaatcaggg ctt        7493

<210>6

<211>2319

<212>PRT

<213>小鼠

<400>6

Met Gln Ile Ala Leu Phe Ala Cys Phe Phe Leu Ser Leu Phe Asn Phe

  1               5                  10                  15

Cys Ser Ser Ala Ile Arg Arg Tyr Tyr Leu Gly Ala Val Glu Leu Ser

             20                  25                  30

Trp Asn Tyr Ile Gln Ser Asp Leu Leu Ser Val Leu His Thr Asp Ser

         35                  40                  45

Arg Phe Leu Pro Arg Met Ser Thr Ser Phe Pro Phe Asn Thr Ser Ile

     50                  55                  60

Met Tyr Lys Lys Thr Val Phe Val Glu Tyr Lys Asp Gln Leu Phe Asn

 65                  70                  75                  80

Ile Ala Lys Pro Arg Pro Pro Trp Met Gly Leu Leu Gly Pro Thr Ile

                 85                  90                  95

Trp Thr Glu Val His Asp Thr Val Val Ile Thr Leu Lys Asn Met Ala

            100                 105                 110

Ser His Pro Val Ser Leu His Ala Val Gly Val Ser Tyr Trp Lys Ala

        115                 120                 125

Ser Glu Gly Asp Glu Tyr Glu Asp Gln Thr Ser Gln Met Glu Lys Glu

    130                 135                 140

Asp Asp Lys Val Phe Pro Gly Glu Ser His Thr Tyr Val Trp Gln Val

145                 150                 155                 160

Leu Lys Glu Asn Gly Pro Met Ala Ser Asp Pro Pro Cys Leu Thr Tyr

                165                 170                 175

Ser Tyr Met Ser His Val Asp Leu Val Lys Asp Leu Asn Ser Gly Leu

            180                 185                 190

Ile Gly Ala Leu Leu Val Cys Lys Glu Gly Ser Leu Ser Lys Glu Arg

        195                 200                 205

Thr Gln Met Leu Tyr Gln Phe Val Leu Leu Phe Ala Val Phe Asp Glu

    210                 215                 220

Gly Lys Ser Trp His Ser Glu Thr Asn Asp Ser Tyr Thr Gln Ser Met

225                 230                 235                 240

Asp Ser Ala Ser Ala Arg Asp Trp Pro Lys Met His Thr Val Asn Gly

                245                 250                 255

Tyr Val Asn Arg Ser Leu Pro Gly Leu Ile Gly Cys His Arg Lys Ser

            260                 265                 270

Val Tyr Trp His Val Ile Gly Met Gly Thr Thr Pro Glu Ile His Ser

        275                 280                 285

Ile Phe Leu Glu Gly His Thr Phe Phe Val Arg Asn His Arg Gln Ala

    290                 295                 300

Ser Leu Glu Ile Ser Pro Ile Thr Phe Leu Thr Ala Gln Thr Leu Leu

305                 310                 315                 320

Ile Asp Leu Gly Gln Phe Leu Leu Phe Cys His Ile Ser Ser His Lys

                325                 330                 335

His Asp Gly Met Glu Ala Tyr Val Lys Val Asp Ser Cys Pro Glu Glu

            340                 345                 350

Ser Gln Trp Gln Lys Lys Asn Asn Asn Glu Glu Met Glu Asp Tyr Asp

        355                 360                 365

Asp Asp Leu Tyr Ser Glu Met Asp Met Phe Thr Leu Asp Tyr Asp Ser

    370                 375                 380

Ser Pro Phe Ile Gln Ile Arg Ser Val Ala Lys Lys Tyr Pro Lys Thr

385                 390                 395                 400

Trp Ile His Tyr Ile Ser Ala Glu Glu Glu Asp Trp Asp Tyr Ala Pro

                405                 410                 415

Ser Val Pro Thr Ser Asp Asn Gly Ser Tyr Lys Ser Gln Tyr Leu Ser

            420                 425                 430

Asn Gly Pro His Arg Ile Gly Arg Lys Tyr Lys Lys Val Arg Phe Ile

        435                 440                 445

Ala Tyr Thr Asp Glu Thr Phe Lys Thr Arg Glu Thr Ile Gln His Glu

    450                 455                 460

Ser Gly Leu Leu Gly Pro Leu Leu Tyr Gly Glu Val Gly Asp Thr Leu

465                 470                 475                 480

Leu Ile Ile Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Asn Ile Tyr Pro

                485                 490                 495

His Gly Ile Thr Asp Val Ser Pro Leu His Ala Arg Arg Leu Pro Arg

            500                 505                 510

Gly Ile Lys His Val Lys Asp Leu Pro Ile His Pro Gly Glu Ile Phe

        515                 520                 525

Lys Tyr Lys Trp Thr Val Thr Val Glu Asp Gly Pro Thr Lys Ser Asp

    530                 535                 540

Pro Arg Cys Leu Thr Arg Tyr Tyr Ser Ser Phe Ile Asn Pro Glu Arg

545                 550                 555                 560

Asp Leu Ala Ser Gly Leu Ile Gly Pro Leu Leu Ile Cys Tyr Lys Glu

                565                 570                 575

Ser Val Asp Gln Arg Gly Asn Gln Met Met Ser Asp Lys Arg Asn Val

            580                 585                 590

Ile Leu Phe Ser Ile Phe Asp Glu Asn Gln Ser Trp Tyr Ile Thr Glu

        595                 600                 605

Asn Met Gln Arg Phe Leu Pro Asn Ala Ala Lys Thr Gln Pro Gln Asp

    610                 615                 620

Pro Gly Phe Gln Ala Ser Asn Ile Met His Ser Ile Asn Gly Tyr Val

625                 630                 635                 640

Phe Asp Ser Leu Glu Leu Thr Val Cys Leu His Glu Val Ala Tyr Trp

                645                 650                 655

His Ile Leu Ser Val Gly Ala Gln Thr Asp Phe Leu Ser Ile Phe Phe

            660                 665                 670

Ser Gly Tyr Thr Phe Lys His Lys Met Val Tyr Glu Asp Thr Leu Thr

        675                 680                 685

Leu Phe Pro Phe Ser Gly Glu Thr Val Phe Met Ser Met Glu Asn Pro

    690                 695                 700

Gly Leu Trp Val Leu Gly Cys His Asn Ser Asp Phe Arg Lys Arg Gly

705                 710                 715                 720

Met Thr Ala Leu Leu Lys Val Ser Ser Cys Asp Lys Ser Thr Ser Asp

                725                 730                 735

Tyr Tyr Glu Glu Ile Tyr Glu Asp Ile Pro Thr Gln Leu Val Asn Glu

            740                 745                 750

Asn Asn Val Ile Asp Pro Arg Ser Phe Phe Gln Asn Thr Asn His Pro

        755                 760                 765

Asn Thr Arg Lys Lys Lys Phe Lys Asp Ser Thr Ile Pro Lys Asn Asp

    770                 775                 780

Met Glu Lys Ile Glu Pro Gln Phe Glu Glu Ile Ala Glu Met Leu Lys

785                 790                 795                 800

Val Gln Ser Val Ser Val Ser Asp Met Leu Met Leu Leu Gly Gln Ser

                805                 810                 815

His Pro Thr Pro His Gly Leu Phe Leu Ser Asp Gly Gln Glu Ala Ile

            820                 825                 830

Tyr Glu Ala Ile His Asp Asp His Ser Pro Asn Ala Ile Asp Ser Asn

        835                 840                 845

Glu Gly Pro Ser Lys Val Thr Gln Leu Arg Pro Glu Ser His His Ser

    850                 855                 860

Glu Lys Ile Val Phe Thr Pro Gln Pro Gly Leu Gln Leu Arg Ser Asn

865                 870                 875                 880

Lys Ser Leu Glu Thr Thr Ile Glu Val Lys Trp Lys Lys Leu Gly Leu

                885                 890                 895

Gln Val Ser Ser Leu Pro Ser Asn Leu Met Thr Thr Thr Ile Leu Ser

            900                 905                 9l0

Asp Asn Leu Lys Ala Thr Phe Glu Lys Thr Asp Ser Ser Gly Phe Pro

        915                 920                 925

Asp Met Pro Val His Ser Ser Ser Lys Leu Ser Thr Thr Ala Phe Gly

    930                 935                 940

Lys Lys Ala Tyr Ser Leu Val Gly Ser His Val Pro Leu Asn Ala Ser

945                 950                 955                 960

Glu Glu Asn Ser Asp Ser Asn Ile Leu Asp Ser Thr Leu Met Tyr Ser

                965                 970                 975

Gln Glu Ser Leu Pro Arg Asp Asn Ile Leu Ser Ile Glu Asn Asp Arg

            980                 985                 990

Leu Leu Arg Glu Lys Arg Phe His Gly Ile Ala Leu Leu Thr Lys Asp

        995                1000                1005

Asn Thr Leu Phe Lys Asp Asn Val Ser Leu Met Lys Thr Asn Lys Thr

   1010                1015                1020

Tyr Asn His Ser Thr Thr Asn Glu Lys Leu His Thr Glu Ser Pro Thr

1025               1030                1035                1040

Ser Ile Glu Asn Ser Thr Thr Asp Leu Gln Asp Ala Ile Leu Lys Val

               1045                1050                1055

Asn Ser Glu Ile Gln Glu Val Thr Ala Leu Ile His Asp Gly Thr Leu

           1060                1065                1070

Leu Gly Lys Asn Ser Thr Tyr Leu Arg Leu Asn His Met Leu Asn Arg

       1075                1080                1085

Thr Thr Ser Thr Lys Asn Lys Asp Ile Phe His Arg Lys Asp Glu Asp

   1090                1095                1100

Pro Ile Pro Gln Asp Glu Glu Asn Thr Ile Met Pro Phe Ser Lys Met

1105               1110                1115                1120

Leu Phe Leu Ser Glu Ser Ser Asn Trp Phe Lys Lys Thr Asn Gly Asn

               1125                1130                1135

Asn Ser Leu Asn Ser Glu Gln Glu His Ser Pro Lys Gln Leu Val Tyr

           1140                1145                1150

Leu Met Phe Lys Lys Tyr Val Lys Asn Gln Ser Phe Leu Ser Glu Lys

       1155                1160                1165

Asn Lys Val Thr Val Glu Gln Asp Gly Phe Thr Lys Asn Ile Gly Leu

   1170                1175                1180

Lys Asp Met Ala Phe Pro His Asn Met Ser Ile Phe Leu Thr Thr Leu

1185               1190                1195                1200

Ser Asn Val His Glu Asn Gly Arg His Asn Gln Glu Lys Asn Ile Gln

               1205                1210                1215

Glu Glu Ile Glu Lys Glu Ala Leu Ile Glu Glu Lys Val Val Leu Pro

           1220                1225                1230

Gln Val His Glu Ala Thr Gly Ser Lys Asn Phe Leu Lys Asp Ile Leu

       1235                1240                1245

Ile Leu Gly Thr Arg Gln Asn Ile Ser Leu Tyr Glu Val His Val Pro

   1250                1255                1260

Val Leu Gln Asn Ile Thr Ser Ile Asn Asn Ser Thr Asn Thr Val Gln

1265               1270                1275                1280

Ile His Met Glu His Phe Phe Lys Arg Arg Lys Asp Lys Glu Thr Asn

               1285                1290                1295

Ser Glu Gly Leu Val Asn Lys Thr Arg Glu Met Val Lys Asn Tyr Pro

           1300                1305                1310

Ser Gln Lys Asn Ile Thr Thr Gln Arg Ser Lys Arg Ala Leu Gly Gln

       1315                1320                1325

Phe Arg Leu Ser Thr Gln Trp Leu Lys Thr Ile Asn Cys Ser Thr Gln

   1330                1335                1340

Cys Ile Ile Lys Gln Ile Asp His Ser Lys Glu Met Lys Lys Phe Ile

1345               1350                1355                1360

Thr Lys Ser Ser Leu Ser Asp Ser Ser Val Ile Lys Ser Thr Thr Gln

               1365                1370                1375

Thr Asn Ser Ser Asp Ser His Ile Val Lys Thr Ser Ala Phe Pro Pro

           1380                1385                1390

Ile Asp Leu Lys Arg Ser Pro Phe Gln Asn Lys Phe Ser His Val Gln

       1395                1400                1405

Ala Ser Ser Tyr Ile Tyr Asp Phe Lys Thr Lys Ser Ser Arg Ile Gln

   1410                1415                1420

Glu Ser Asn Asn Phe Leu Lys Glu Thr Lys Ile Asn Asn Pro Ser Leu

1425               1430                1435                1440

Ala Ile Leu Pro Trp Asn Met Phe Ile Asp Gln Gly Lys Phe Thr Ser

               1445                1450                1455

Pro Gly Lys Ser Asn Thr Asn Ser Val Thr Tyr Lys Lys Arg Glu Asn

           1460                1465                1470

Ile Ile Phe Leu Lys Pro Thr Leu Pro Glu Glu Ser Gly Lys Ile Glu

       1475                1480                1485

Leu Leu Pro Gln Val Ser Ile Gln Glu Glu Glu Ile Leu Pro Thr Glu

   1490                1495                1500

Thr Ser His Gly Ser Pro Gly His Leu Asn Leu Met Lys Glu Val Phe

1505               1510                1515                1520

Leu Gln Lys Ile Gln Gly Pro Thr Lys Trp Asn Lys Ala Lys Arg His

               1525                1530                1535

Gly Glu Ser Ile Lys Gly Lys Thr Glu Ser Ser Lys Asn Thr Arg Ser

           1540                1545                1550

Lys Leu Leu Asn His His Ala Trp Asp Tyr His Tyr Ala Ala Gln Ile

       1555                1560                1565

Pro Lys Asp Met Trp Lys Ser Lys Glu Lys Ser Pro Glu Ile Ile Ser

   1570                1575                1580

Ile Lys Gln Glu Asp Thr Ile Leu Ser Leu Arg Pro His Gly Asn Ser

1585               1590                1595                1600

His Ser Ile Gly Ala Asn Glu Lys Gln Asn Trp Pro Gln Arg Glu Thr

               1605                1610                1615

Thr Trp Val Lys Gln Gly Gln Thr Gln Arg Thr Cys Ser Gln Ile Pro

           1620                1625                1630

Pro Val Leu Lys Arg His Gln Arg Glu Leu Ser Ala Phe Gln Ser Glu

       1635                1640                1645

Gln Glu Ala Thr Asp Tyr Asp Asp Ala Ile Thr Ile Glu Thr Ile Glu

   1650                1655                1660

Asp Phe Asp Ile Tyr Ser Glu Asp Ile Lys Gln Gly Pro Arg Ser Phe

1665               1670                1675                1680

Gln Gln Lys Thr Arg His Tyr Phe Ile Ala Ala Val Glu Arg Leu Trp

               1685                1690                1695

Asp Tyr Gly Met Ser Thr Ser His Val Leu Arg Asn Arg Tyr Gln Ser

           1700                1705                1710

Asp Asn Val Pro Gln Phe Lys Lys Val Val Phe Gln Glu Phe Thr Asp

       1715                1720                1725

Gly Ser Phe Ser Gln Pro Leu Tyr Arg Gly Glu Leu Asn Glu His Leu

   1730                1735                1740

Gly Leu Leu Gly Pro Tyr Ile Arg Ala Glu Val Glu Asp Asn Ile Met

1745               1750                1755                1760

Val Thr Phe Lys Asn Gln Ala Ser Arg Pro Tyr Ser Phe Tyr Ser Ser

               1765                1770                1775

Leu Ile Ser Tyr Lys Glu Asp Gln Arg Gly Glu Glu Pro Arg Arg Asn

           1780                1785                1790

Phe Val Lys Pro Asn Glu Thr Lys Ile Tyr Phe Trp Lys Val Gln His

       1795                1800                1805

His Met Ala Pro Thr Glu Asp Glu Phe Asp Cys Lys Ala Trp Ala Tyr

   1810                1815                1820

Phe Ser Asp Val Asp Leu Glu Arg Asp Met His Ser Gly Leu Ile Gly

1825               1830                1835                1840

Pro Leu Leu Ile Cys His Ala Asn Thr Leu Asn Pro Ala His Gly Arg

               1845                1850                1855

Gln Val Ser Val Gln Glu Phe Ala Leu Leu Phe Thr Ile Phe Asp Glu

           1860                1865                1870

Thr Lys Ser Trp Tyr Phe Thr Glu Asn Val Lys Arg Asn Cys Lys Thr

       1875                1880                1885

Pro Cys Asn Phe Gln Met Glu Asp Pro Thr Leu Lys Glu Asn Tyr Arg

   1890                1895                1900

Phe His Ala Ile Asn Gly Tyr Val Met Asp Thr Leu Pro Gly Leu Val

1905               1910                1915                1920

Met Ala Gln Asp Gln Arg Ile Arg Trp Tyr Leu Leu Ser Met Gly Asn

               1925                1930                1935

Asn Glu Asn Ile Gln Ser Ile His Phe Ser Gly His Val Phe Thr Val

           1940                1945                1950

Arg Lys Lys Glu Glu Tyr Lys Met Ala Val Tyr Asn Leu Tyr Pro Gly

       1955                1960                1965

Val Phe Glu Thr Leu Glu Met Ile Pro Ser Arg Ala Gly Ile Trp Arg

   1970                1975                1980

Val Glu Cys Leu Ile Gly Glu His Leu Gln Ala Gly Met Ser Thr Leu

1985               1990                1995                2000

Phe Leu Val Tyr Ser Lys Gln Cys Gln Ile Pro Leu Gly Met Ala Ser

               2005                2010                2015

Gly Ser Ile Arg Asp Phe Gln Ile Thr Ala Ser Gly His Tyr Gly Gln

           2020                2025                2030

Trp Ala Pro Asn Leu Ala Arg Leu His Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Ala

       2035                2040                2045

Trp Ser Thr Lys Glu Pro Phe Ser Trp Ile Lys Val Asp Leu Leu Ala

   2050                2055                2060

Pro Met Ile Val His Gly Ile Lys Thr Gln Gly Ala Arg Gln Lys Phe

2065               2070                2075                2080

Ser Ser Leu Tyr Ile Ser Gln Phe Ile Ile Met Tyr Ser Leu Asp Gly

               2085                2090                2095

Lys Lys Trp Leu Ser Tyr Gln Gly Asn Ser Thr Gly Thr Leu Met Val

           2100                2105                2110

Phe Phe Gly Asn Val Asp Ser Ser Gly Ile Lys His Asn Ser Phe Asn

       2115                2120                2125

Pro Pro Ile Ile Ala Arg Tyr Ile Arg Leu His Pro Thr His Ser Ser

   2130                2135                2140

Ile Arg Ser Thr Leu Arg Met Glu Leu Met Gly Cys Asp Leu Asn Ser

2145               2150                2155                2160

Cys Ser Ile Pro Leu Gly Met Glu Ser Lys Val Ile Ser Asp Thr Gln

               2165                2170                2175

Ile Thr Ala Ser Ser Tyr Phe Thr Asn Met Phe Ala Thr Trp Ser Pro

           2180                2185                2190

Ser Gln Ala Arg Leu His Leu Gln Gly Arg Thr Asn Ala Trp Arg Pro

       2195                2200                2205

Gln Val Asn Asp Pro Lys Gln Trp Leu Gln Val Asp Leu Gln Lys Thr

   2210                2215                2220

Met Lys Val Thr Gly Ile Ile Thr Gln Gly Val Lys Ser Leu Phe Thr

2225               2230                2235                2240

Ser Met Phe Val Lys Glu Phe Leu Ile Ser Ser Ser Gln Asp Gly His

               2245                2250                2255

His Trp Thr Gln Ile Leu Tyr Asn Gly Lys Val Lys Val Phe Gln Gly

           2260                2265                2270

Asn Gln Asp Ser Ser Thr Pro Met Met Asn Ser Leu Asp Pro Pro Leu

       2275                2280                2285

Leu Thr Arg Tyr Leu Arg Ile His Pro Gln Ile Trp Glu His Gln Ile

   2290                2295                2300

Ala Leu Arg Leu Glu Ile Leu Gly Cys Glu Ala Gln Gln Gln Tyr

2305               2310                2315

Claims (67)

1.一种修饰因子VIII，其特征在于，所述因子包括对应于人因子VIII的C2结构域中一个或多个位置的氨基酸取代，所述位置选自2215、2313、2220、2320、2195、2196和2290。

2.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，所述因子缺乏B结构域。

3.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，包括丙氨酸或赖氨酸取代精氨酸2215。

4.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，包括丙氨酸或赖氨酸取代精氨酸2220。

5.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，包括苯丙氨酸取代色氨酸2313。

6.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，包括丙氨酸取代精氨酸2320。

7.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，包括丙氨酸或丝氨酸取代苯丙氨酸2290。

8.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，包括组氨酸或丙氨酸取代酪氨酸2195。

9.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，包括亮氨酸或丙氨酸取代苯丙氨酸2196。

10.一种修饰人因子VIII，其特征在于，所述因子包括C2结构域中对应于一个或多个位置的氨基酸取代，所述位置选自2215、2313、2220、2320、2195、2196和2290。

11.如权利要求10所述的修饰人因子VIII，其特征在于，所述因子缺乏B结构域。

12.如权利要求10或11所述的修饰人因子VIII，其特征在于，氨基酸取代在位置2215。

13.如权利要求10或11所述的修饰人因子VIII，其特征在于，氨基酸取代在位置2220。

14.如权利要求10或11所述的修饰人因子VIII，其特征在于，氨基酸取代在位置2196。

15.如权利要求12所述的修饰人因子VIII，其特征在于，包括丙氨酸或赖氨酸取代精氨酸2215。

16.如权利要求13所述的修饰人因子VIII，其特征在于，包括丙氨酸或赖氨酸取代精氨酸2220。

17.如权利要求14所述的修饰人因子VIII，其特征在于，包括丙氨酸或亮氨酸取代苯丙氨酸2196。

18.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，与相应的人蛋白质相比抗原性降低。

19.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，与相应的人蛋白质相比免疫原性降低。

20.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，与相应的人蛋白质相比免疫原性和抗原性降低。

21.如权利要求1所述的修饰因子VIII，其特征在于，特异活性大于每毫克约2,000单位。

22.如权利要求21所述的修饰因子VIII，其特征在于，特异活性大于每毫克约3,000单位。

23.如权利要求22所述的修饰因子VIII，其特征在于，特异活性大于每毫克约5,000单位。

24.如权利要求23所述的修饰因子VIII，其特征在于，特异活性大于每毫克约10,000单位。

25.如权利要求1或10所述的修饰因子VIII，其特征在于，它是单突变体。

26.如权利要求1或10所述的修饰因子VIII，其特征在于，它是双突变体。

27.如权利要求1或10所述的修饰因子VIII，其特征在于，它是三突变体。

28.如权利要求1或10所述的修饰因子VIII，其特征在于，它是四突变体。

29.如权利要求1或10所述的修饰因子VIII，其特征在于，与相应的人因子VIII相比，它对至少一种C2特异性抑制抗体的抗原性降低。

30.如权利要求1或10所述的修饰因子VIII，其特征在于，与相应的人因子VIII或重组人因子VIII相比，对至少一种抑制抗体制品的Bethesda效价增加或减少。

31.一种修饰因子VIII，其特征在于，所述因子包括至少一个非人因子VIII氨基酸取代相应的人因子VIII氨基酸。

32.如权利要求31所述的修饰因子VIII，其特征在于，至少一个非人因子VIII氨基酸取代来自非人的哺乳动物。

33.如权利要求32所述的修饰因子VIII，其特征在于，所述非人的哺乳动物是猪、犬或鼠。

34.如权利要求32所述的修饰因子VIII，其特征在于，与获得所述修饰因子的因子VIII分子或其它因子VIII制品相比，所述修饰因子VIII具有凝固活性且抗原性降低。

35.如权利要求32所述的修饰因子VIII，其特征在于，所述氨基酸取代不是丙氨酸。

36.如权利要求32所述的修饰因子VIII，其特征在于，与获得所述修饰因子的因子VIII分子或其它因子VIII分子相比，修饰因子VIII免疫原性降低。

37.一种修饰因子VIII，以使对抑制抗体的反应性降低并保持促凝血活性的方法，其特征在于，所述方法包括用免疫反应性降低的氨基酸在一个或多个位置取代对应于人因子VIII的C2结构域中天然产生的氨基酸，所述位置选自2215、2313、2220、2320、2195、2196和2290。

38.如权利要求37所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2215。

39.如权利要求37所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2313。

40.如权利要求37所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2220。

41.如权利要求37所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2320。

42.如权利要求37所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2195。

43.如权利要求37所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2196。

44.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述修饰因子VIII是单突变体。

45.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述修饰因子VIII是双突变体。

46.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述修饰因子VIII是三突变体。

47.如权利要求37所述的方法，其特征在于，所述修饰因子VIII是四突变体。

48.一种修饰因子VIII，以使抗原性降低并保持促凝血活性的方法，其特征在于，所述方法包括用免疫反应性降低的氨基酸在一个或多个位置取代对应于人因子VIII的C2结构域中天然产生的氨基酸，所述位置选自2215、2313、2220、2320、2195、2196和2290。

49.如权利要求48所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2215。

50.如权利要求48所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2313。

51.如权利要求48所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2220。

52.如权利要求48所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2320。

53.如权利要求48所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2195。

54.如权利要求48所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2196。

55.如权利要求48所述的方法，其特征在于，取代发生在氨基酸位置2290。

56.如权利要求48所述的方法，其特征在于，所述修饰因子VIII是单突变体。

57.如权利要求48所述的方法，其特征在于，所述修饰因子VIII是双突变体。

58.如权利要求48所述的方法，其特征在于，所述修饰因子VIII是三突变体。

59.如权利要求48所述的方法，其特征在于，所述修饰因子VIII是四突变体。

60.一种编码修饰因子VIII的分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含对应于人因子VIII的C2结构域中一个或多个位置的氨基酸取代，所述位置选自2215、2313、2220、2320、2195、2196和2290。

61.一种编码修饰人因子VIII的分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含C2结构域中对应于一个或多个位置的氨基酸取代，所述位置选自2215、2313、2220、2320、2195、2196和2290。

62.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包含权利要求60或61所述的核酸分子。

63.如权利要求60或61所述的核酸分子，其特征在于，所述因子VIII缺乏B结构域。

64.如权利要求60或61所述的核酸分子，其特征在于，所述因子VIII包含位置2220的氨基酸取代。

65.如权利要求60或61所述的核酸分子，其特征在于，所述因子VIII包含位置2215的氨基酸取代。

66.如权利要求60或61所述的核酸分子，其特征在于，所述因子VIII包含位置2196的氨基酸取代。

67.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞被权利要求62所述的表达载体转染。

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