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CN1583170A - 用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物及其制法 - Google Patents

用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物及其制法 Download PDF

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CN1583170A CNA2004100207380A CN200410020738A CN1583170A CN 1583170 A CN1583170 A CN 1583170A CN A2004100207380 A CNA2004100207380 A CN A2004100207380A CN 200410020738 A CN200410020738 A CN 200410020738A CN 1583170 A CN1583170 A CN 1583170A
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Abstract

本发明涉及基因生物医药，尤其是含有人溶菌酶药物及其制法。用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，剂型为气雾吸入剂。可作为制备治疗由病毒、细菌、耐药菌引起的咽炎、气管炎、肺炎等疾病的治疗制药中的应用。做成重组人溶菌酶气雾吸入剂直接吸入气管、肺部给药治疗，具有安全无毒副作用，制备工艺简单，使用方便，有很好的药用前景。

Description

用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物及其制法
技术领域：
本发明涉及基因生物医药，尤其是含有人溶菌酶药物及其制法。
背景技术：
21世纪的今天，耐药菌的发展令人触目惊心。所谓耐药菌就是细菌对药物产生抗性，是细菌多次与药物接触后，对药物的敏感性减小甚至消失，致使药物对细菌的敏感性降低甚至无效。其中耐药菌包括金黄色葡萄球菌MRSA、表皮葡萄球菌MRSE、肺炎链球菌、溶血性链球菌、肠球菌属、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、丙酸杆菌、不动杆菌、枸橼酸杆菌、沙雷氏菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单孢菌、白色念珠菌等。主要是对下列药品产生耐药性：克拉霉素、罗红霉素、阿莫西林、万古霉素、德可霉素、广谱青霉素、甲氧西啉类、头孢类、青霉素钠、青霉素钾、磺胺类。
具体的耐药标准是：(抑菌圈直径mm)
金黄色葡萄球菌MRSA 表皮葡萄球  菌MRSE  肺炎链球菌 溶血性链球菌 肠球菌属 大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌 丙酸杆菌 不动杆菌 枸缘酸杆菌 沙雷氏菌 阴沟肠杆菌 铜绿假单孢菌 白色念珠菌
克拉霉素 ≤12   ≤07  ≤12  ≤15 ≤14 ≤10   ≤12 ≤17 ≤17 ≤18 ≤12 ≤10 ≤12 ≤12
罗红霉素 ≤12   ≤08  ≤17  ≤17 ≤14 ≤12   ≤12 ≤17 ≤17 ≤16 ≤17 ≤12 ≤12 ≤17
阿莫西林 ≤15   ≤10  ≤19  ≤19 ≤16 ≤15   ≤15 ≤22 ≤22 ≤21 ≤19 ≤15 ≤15 ≤19
万古霉素 ≤32   ≤27  ≤32  ≤34 ≤37 ≤30   ≤32 ≤35 ≤35 ≤33 ≤32 ≤30 ≤32 ≤32
德可霉素 ≤30  ≤2.5  ≤3.2  ≤33 ≤32 ≤28   ≤28 ≤27 ≤33 ≤34 ≤32 ≤28 ≤30 ≤32
青霉素钠 ≤27 ≤22 ≤23 ≤27 ≤26 ≤18 ≤25 ≤32 ≤28 ≤27 ≤23 ≤18 ≤27 ≤23
青霉素钾 ≤2.7 ≤22 ≤23 ≤27 ≤26 ≤25 ≤25 ≤32 ≤28 ≤27 ≤23 ≤25 ≤27 ≤23
广谱青霉素 ≤25 ≤20 ≤25 ≤24 ≤26 ≤25 ≤25 ≤32 ≤28 ≤27 ≤25 ≤25 ≤25 ≤25
头孢类 ≤27 ≤22 ≤22 ≤27 ≤24 ≤25 ≤23 ≤24 ≤26 ≤26 ≤22 ≤25 ≤27 ≤22
甲氧西啉类 ≤28 ≤23 ≤23 ≤22 ≤30 ≤05 ≤26 ≤32 ≤27 ≤27 ≤23 ≤05 ≤28 ≤23
磺胺类 ≤9 ≤10 ≤9 ≤10 ≤12 ≤15 ≤9 ≤11 ≤18 ≤15 ≤16 ≤18 ≤18 ≤13
从细菌的耐药发展史可以看出，在某种新的抗生素出现以后，就有一批耐药菌株出现。开发一种新的抗生素一般需要10年左右的时间，而一代耐药菌的产生只要2年的时间，抗生素的研制速度远远赶不上耐药菌的发展速度。目前急需开发一种针对不同耐药菌株均有效的“超级抗生素”用于临床治疗。
重组人溶菌酶它是一种有效的抗菌剂，全称为：1，4-β-N-溶菌酶或者称：粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶。它能切断细菌细胞壁的肽聚糖中N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1，4糖苷键的联结，破坏肽聚糖支架，细菌在内部渗透压的作用下细胞胀裂开，引起细菌裂解。人和动物细胞无细胞壁结构亦无肽聚糖，故溶菌酶对人体细胞无毒性作用。重组人溶菌酶除可以直接裂解细菌外，还有抗病毒、抗肿瘤、抗炎和免疫调节作用。中国专利03110824.5国已记载基因重组人溶菌酶制药对抗耐药菌有明显疗效，对抗病毒有明显疗效。但其剂型一般为现有的普通剂型，对于用药途径和药物的吸收可以进一步提高。
发明内容：
本发明的目的是提供一种用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，剂型合理，使用方便快捷，释药速度快，作用迅速，疗效显著。
本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，剂型为气雾吸入剂。
所述药物含有活性1500U～30000U/ml人溶菌酶。
所述人溶菌酶药物为治疗由病毒、细菌、耐药菌引起的肺炎或预防肺炎的药物；为治疗由病毒、细菌、耐药菌引起的气管炎或预防气管炎的药物；为治疗由病毒、细菌、耐药菌引起的咽喉炎或预防咽喉炎疾病的药物；为治疗由病毒(RNA、DNA病毒)或非典型肺炎(SAES)、细菌、耐药菌引起的气管炎、肺炎及肺脓肿的药物。
所述人溶菌酶为基因工程表达的重组人溶菌酶、基因工程表达人溶菌酶的氨基端带有(谷氨酸-丙氨酸)2或(谷氨酸-丙氨酸)3修饰的人溶菌酶或基因工程表达或化学合成突变体重组人溶菌酶。
气雾剂应在避菌环境下配置，各种用具、容器等须用适应的方法清洁、灭菌，在整个操作过程中应注意防止微生物的污染。(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)制备工艺流程如下：容器与阀门系统的处理和装配→药物的配制和分装→填充抛射剂→质量检查→成品(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)。
具体制法：
气雾吸入剂疗法的作用大致可以分为三种；其一，微小水滴为吸入气流及气道内膜上水蒸气的充分来源，因而可使气道充分湿化，从而维持气道内粘液纤毛系统的正常清楚功能；其二，液滴在气道内膜的沉积可以刺激咳嗽而促进气道的净化；期三，治疗药物以雾滴形式进入气道则成为其直接而有效的投药途径。现代气雾疗法的目的，都不外乎希望从这些方面入手来收到净化气道的临床治疗效果。
重组人溶菌酶气雾吸入剂剂型与其它途径给药具有更突出的特点。1、肺部具有较大的吸收表面积和较薄的吸收层。肺部的肺泡表面积之和约为100m2，而且肺泡上皮很薄，布满毛细血管。这不仅可以使小分子气体快速交换，而且可以吸收很多大分子药物。2、肺部的代谢酶活性较低，没有各种消化酶的存在和干扰，使得多肽和蛋白质类药物可以稳定存在，药物吸收后不先经过肝脏，降低首过效应。3、肺部环境比较稳定，药物停留时间较长，吸收很慢的药物也可以有很好的生物利用度。4、肺部雾化吸入剂的使用不受环境影响，设备技术简单，使用方便快捷。肺部给药通常被认为具有释药速度快，作用迅速等特点。压缩雾化吸入机的气体雾化颗粒直径在1～5微米是固定的，雾化颗粒直径1～3微米之间的占70％，所以，70％的药物能够达到下呼吸道和肺部病灶，能够达到理想的临床治疗效果。本发明涉及一种重组人溶菌酶气雾吸入剂的新用途，特别是涉及制药领域中重组人溶菌酶气雾吸入剂针对呼吸道由病毒、细菌和耐药菌引起的疾病在制药中的新用途。
为了更好地理解本发明的实质，下面将用重组人溶菌酶气雾吸入剂的药效试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。
基因重组人溶菌酶菌种发酵液以配制220毫升培养基为准，用磷酸8毫升、硫酸镁4克，硫酸钾5克，氢氧化钾1.5克，硫酸钙1.5克，加蒸馏水至200毫升，高压灭菌后接种甘油管种子，摇床转数为每分钟250转，培养温度为20-35℃，在恒温床上培养30-45小时。进行种子罐培养，最后进行生产罐培养。将发酵表达完成的培养液进行提取纯化，对提取纯化的蛋白浓缩液，测蛋白纯度、测活性保存。将纯度95％以上的合格的基因重组人溶菌酶蛋白浓缩液制得气雾吸入剂、1500U～30000U/ml备用。
一对小鼠的模型试验：
A、耐药肺炎球菌上呼吸道感染所致小鼠肺炎模型的制备：
选用健康昆明种小鼠10只，雌雄各半，体重为18-22克，挑取一定量的耐药肺炎球菌用滴鼻方式感染小鼠上呼吸道致小鼠肺炎10只，感染后即用重组人溶菌酶气雾吸入剂30000U/ml/20g鼠给药，观察一周，每日三次给药，记录小鼠有效率。实验结果表明重组人溶菌酶气雾剂对耐药肺炎球菌上呼吸道感染所致小鼠肺炎有明显疗效。结果如下表：
  病种  受试动物(只)   痊愈   显效   无效   有效率％
  肺炎      10     6     4     0     100
B、耐药金葡球菌上呼吸道感染所致小鼠气管炎、支气管炎模型的制备：
选用健康昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重为18-22克，分两组，每组10只，选取一定量的耐药金葡球菌用滴鼻方式感染小鼠上呼吸道致小鼠气管炎10只、支气管炎10只，感染后即用重组人溶菌酶气雾吸入剂3000U/ml/20g鼠给药，观察一周，每日三次给药，记录小鼠有效率。实验结果表明重组人溶菌酶气雾剂对耐药金葡球菌上呼吸道感染所致小鼠气管炎、支气管炎有明显疗效。结果如下表：
   病种  受试动物(只)   痊愈   显效   无效   有效率％
  气管炎      10     7     3     0     100
 支气管炎      10     7     3     0     100
C、耐药化脓性链球菌上呼吸道感染所致小鼠急慢性化脓性咽喉炎模型的制备：
选用健康昆明种小鼠10只，雌雄各半，体重为18-22克，挑取一定量的耐药化脓性链球菌用滴鼻方式感染小鼠上呼吸道感染所致小鼠急慢性咽喉炎10只，感染后即用重组人溶菌酶气雾吸入剂30000U/ml/20g鼠给药，观察一周，每日三次给药，记录小鼠有效率。实验结果表明重组人溶菌酶气雾吸入剂对耐药化脓性链球菌上呼吸道感染所致小鼠急慢性化脓性咽喉炎有明显疗效。结果如下表：
        病种  受试动物(只)  痊愈  显效  无效  有效率％
 急慢性化脓性咽喉炎       10   8   2    0     100
D、耐药化脓性链球菌上呼吸道感染所致小鼠扁条体炎模型的制备：
选用健康昆明种小鼠10只，雌雄各半，体重为18-22克，挑取一定量的化脓性链球菌用滴鼻方式感染小鼠上呼吸道致扁条体炎小鼠10只，感染后即用重组人溶菌酶气雾吸入剂30000U/ml/20g鼠给药，观察一周，每日三次给药，记录小鼠有效率。实验结果表明重组人溶菌酶气雾吸入剂对化脓性链球菌感染所致扁条体炎有明显疗效。结果如下表：
    病种  受试动物(只)   痊愈   显效   无效   有效率％
  扁桃体炎      10    8     2     0      100
E、厌氧性球菌上呼吸道感染所致小鼠口腔炎模型的制备：
选用健康昆明种小鼠10只，雌雄各半，体重为18-22克，挑取一定量的厌氧性球菌用滴鼻方式感染小鼠上呼吸道致小鼠口腔炎10只，感染后即用重组人溶菌酶气雾吸入剂3000U/ml/20g鼠给药，观察一周，每日六次给药，记录小鼠有效率。实验结果表明重组人溶菌酶气雾吸入剂对厌氧性球菌上呼吸道感染所致小鼠口腔炎有明显疗效。结果如下表：
   病种  受试动物(只)   痊愈   显效   无效   有效率％
  口腔炎       10    8    2    0      100
F、基因重组人溶菌酶气雾吸入剂对金黄色葡萄球菌MRSA BAA-42肺部感染小鼠的治疗作用
药物和对照药
受试药：基因重组人溶菌酶(Human Lysozyme，HLZ)：活性单位30000u/mg，由大连奇龙生物技术研究所提供，实验前用PBS配成所需浓度。
对照药：克拉霉素：效价948U/mg，中国药品生物制品检定所标准品。
实验菌株
2002年于临床分离的耐药金黄色葡萄球菌MRSA BAA-42，为四川大学华西医学中心赠送。
仪器
<1>治疗用雾化器：德国白瑞公司生产的压缩喷雾器(PAR1.BOY)，该设备用于喷雾人溶菌酶治疗用。
<2>BL 3100型，BS 200S-WE1型电子天平，北京赛多利斯天平公司生产。
小鼠细菌性肺炎治疗实验
(1)菌液制备及模型建立：
挑取受试菌菌苔，用生理盐水冲洗后，用麦氏比浊管校正菌液浓度为2#MCF，约2.7×1011CFU/ml的浊度，再分别用生理盐水稀释至10-1，10-2，10-3菌液浓度，分别给小鼠滴鼻感染(先将小鼠用戊巴比妥麻醉，30mg/kg，ip)，每只小鼠0.05ml。观察小鼠体症变化，并于感染后48h活杀部分小鼠，取全肺组织匀浆，用生理盐水10倍稀释，吸取0.1ml至盛有MH琼脂平皿表面，35℃隔夜培养，革兰氏染色，镜检，并做活菌计数。同时观察记录小鼠死亡个数，并抽取部分小鼠肺组织作病理组织观察。
细菌培养阳性，肺中细菌数≥100CFU/ml，病理组织学观察肺组织出现明显充血，水肿，炎性细胞浸润等病理组织学变化。同时小鼠死亡率在50％以上则表明模型成功。
取致小鼠出现肺部病理变化并50％致死的菌量做为最低致死菌量(LD50)用该菌量作为治疗实验感染菌量。
(2)感染小鼠及分组：
选取健康昆明种小鼠，体重17-20克，以戊巴比妥麻醉(30mg/kg，ip)，吸取相当于10倍LD50的菌液对小鼠进行滴鼻感染(0.05ml/只鼠)，具体方法同上，共感染300只。取感染成功小鼠，按体重随机分为10组，每组30只。
(3)药物治疗：
剂量设计：重组人溶菌酶临床雾化治疗时药液的浓度为15000u/ml，初步拟定剂量为15000u/次，每日一次，即0.5mg/次/日。按体表面积推算至小鼠剂量为1.3×10-3mg/只(20g体重计)，由于人通气量9000ml/分相当于小鼠通气量24ml/分的375倍，人用单次剂量0.5mg/70kg相当于小鼠剂量1.3×10-3mg/20g的384倍，上二者较为接近。所以设定用临床人用浓度0.5mg/ml对小鼠进行雾化治疗，另考虑到临床人用气雾剂吸入溶菌酶气体利用率较高，而小鼠在雾化缸内只能靠自身呼吸吸入含药气体，故只有延长吸入时间才能确保吸入药量，设定为0.5小时。在0.5mg/ml浓度基础上再配制0.25mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml共四个浓度剂量组作为治疗时的药液浓度。(见下表)
             重组人溶菌酶气雾吸入剂实验分组
                        给药剂量           每    组
组    别
                             (mg/ml)            动物数(只)
1.正常组                    等体积NS               30
2.感染对照组                等体积NS               30
3.克拉霉素组                10                     30
4.克拉霉素组                5                      30
5.克拉霉素组                2.5                    30
6.克拉霉素组                1.25                   30
7.人溶菌酶组                2                      30
8.人溶菌酶组                1                      30
9.人溶菌酶组                0.5                    30
10.人溶菌酶组               0.25                   30
将同一组动物同时放入超声雾化器内，用PAR1.BOY压缩雾化吸入不同浓度的人溶菌酶液对小鼠进行雾化治疗(见下图)，每日两次，连续5天。
(4)检测方法：
各组以感染当日计算，连续观察14天，逐日记录动物发病情况和死亡数，并于感染后第14天，各组抽取2-3只小鼠活杀，取全肺匀浆后做细菌学检测，剩余动物活杀后取全肺，称重后固定于10％甲醛溶液中，送病理检查。
细菌培养：接种细菌后24h，每组取部分小鼠活杀，取出全肺称重，加入2ml灭菌PBS液匀浆10倍稀释，吸取0.1ml于空白MH琼脂平板，35℃培养24h，取每个平板上菌落数在30～300CF的培养平板计数，若相邻两个级别浓度组织液接种平板的菌落数均为30～300 CFU，则取低浓度的菌落数计数(每份组织液同时做3个平板，计算其平均值)。于给药后5，7，14天同法各组随机抽取2只小鼠做细菌培养。
病理检测：解剖小鼠后，先肉眼观察肺与胸壁，隔胸膜的粘连情况，肺体积及肺病灶大小，肺表面充血，水肿，实变及不张情况。取出全肺组织用10％的甲醛溶液固定，取材。脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，在光镜下观察肺组织的病理变化。
死亡率及半数有效剂量ED50的计算  自感染日起，连续观察记录14天内死亡动物数及其存活率，平均存活天数，与感染对照组进行比较。按Bliss法，运用NDST软件计算半数有效剂量ED50值及其95％可行限。
实验结果
细菌培养结果：细菌检测结果见表1。重组人溶菌酶气雾吸入剂2，1，0.5mg/ml第1天，第3天和第5天小鼠全肺中细菌数明显低于感染模型组，且具有显著性差异(P＜0.05)，至第14天，人溶菌酶给药组细菌基本转阴，≤10CFU/ml。
病理检测结果：各组动物肺组织的病理检测结果见表2。病理检测结果表明雾化吸入基因重组人溶菌酶(HLZ)(2，1，0.5mg/ml)对小鼠肺组织病理变化程度均显著较感染模型组轻，至给药后第7、14天，治疗组小鼠肺组织基本恢复正常。
存活率及ED50值：重组人溶菌酶气雾吸入剂(HLZ)2、1、0.5mg/ml对金葡菌MRSA BAA-42感染小鼠肺炎治疗的存活率依次为76.7％、56.7％、46.7％和40％，平均存活天数分别为12.93±2.05天、11.23±3.36天、10.3±3.77天、9.30±4.08天，其存活率及存活天数均显著高于感染对照组(较感染模型组提高30-60％，P＜0.05)。其半数有效剂量ED50为0.53mg/ml(0.20-0.90mg/ml)，见表3、表4。
结果表明重组人溶菌酶气雾吸入剂对金葡菌MRSA BAA-42致小鼠肺部感染具有较好的治疗作用，其半数有效剂量ED50为0.53mg/ml。雾化吸入2，1，0.5，0.25mg(ml次)-1，其小鼠14天存活率分别为76.7，56.7，46.7和40％。平均存活天数分别为12.93±2.05天、11.23±3.36天、10.3±3.77天、9.30±4.08天，与感染对照组比较有显著性的差异(P＜0.05)。以上实验结果表明，重组人溶菌酶气雾吸入剂对小鼠细菌性感染肺炎有较好保护治疗作用。
表1重组人溶菌酶气雾吸入剂对小鼠肺部感染金葡菌MRSA BAA-42的细菌检测结果
                       雾化吸入     动物                       给药后活菌数(CFU/ml)(n＝3)
感染细菌   药物
                      (mg/ml.次)    只数
                                              第0天         第1天               第3天               第5天                第14天
金葡菌
                      2(60000u/只)    5    350±21.5    253.80±22.88     165.80±16.0△△            76.70±11.60***△△          2.50±1.46***
MRSAB
AA-42
5.0×106
         人溶菌酶     1(30000u/只)    5    350±21.5    254.20±25.42*** 172.70±17.62**△△         78.30±17.86**△△        3.5±0.20***
                    0.5(15000u/只)    5    350±21.5    350.60±21.5      241.90±16.62          134.60±13.58         57.60±15.37**
                          6.0         5    350±21.5    241.9±16.62      134.60±13.58          57.60±15.37**       10.0±8.00***
克拉霉素                  3.0         5    350±21.5    246.30±19.03     141.10±18.54          60.70±13.98          24.0±2.00***
                          1.5         5    350±21.5    247.10±21.31     146.90±13.55          64.40±15.69          28.0±2.60***
感染对照组                --          5    350±21.5    275.60±21.60     194.30±17.60          86.70±12.88          130.1±193.4
与感染对照组比：*P＜0.05，**p＜0.01与克拉霉素组(0.75mg/ml)相比：△P＜0.05，△△P＜0.01
             表2：重组人溶菌酶气雾吸入剂各给药组小鼠肺组织病理检测结果
     组别    气雾剂吸入(mg/ml)     时间 病理检测结果     图例
正常组 肺脏各级支气管管腔内及肺泡内未见渗出水肿、出血及炎细胞浸润，肺泡壁未见增厚，支气管黏膜假复曾纤毛柱状上皮无增生、萎缩、坏死脱落。 图1
    感染模型组 等体积NS   第3天 肺泡壁部分增厚，伴有单核、淋巴细胞浸润。    图2-1
第7天 弥散性肺泡壁增厚，伴有单核、淋巴细胞浸润。 图2-2
第14天 局灶性肺泡壁组织增厚，散在分布单核、淋巴细胞浸润，局部出血、水肿。 图2-3
人溶菌酶    高剂量(2)   第3天 局限部分肺泡壁增厚，伴有少许单核细胞浸润。    图3-1
  第7天 基本正常。    图3-2
  第14天 基本正常。    图3-3
   中剂量(1)   第3天 细支气管周肺泡壁增厚，见少许单核细胞浸润。    图4-1
第7天 伴有少许单核细胞浸润。 图4-2
  第14天 基本正常。    图4-3
   低剂量(0.5)   第3天 弥散性肺泡壁轻度增厚伴有少许单核细胞浸润。    图5-1
  第7天 局限或弥散性肺泡壁增厚，少许单核细胞浸润。    图5-2
  第14天 细支气管周肺泡壁轻度增厚，伴有少许单核细胞浸润。    图5-3
               表3重组人溶菌酶气雾吸入剂对小鼠金葡菌MRSA BAA-42所致细菌性肺炎的小鼠死亡分布
      气雾剂                给药后死亡数(只)                    累计
组                                                                    存活率    平均存活期      较模型组存活
       吸入                                                     存活
别
                                                                       (％)     (天，X±s)        提高率(％)
                1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14
     (mg/ml)                                                   数(只)
正常
        -       0  0  0  0  0  0  0  0  0   0   0   0   0   0    30     100           -              83.3
对照
感染
        -       0  0  6  3  2  8  2  3  1   0   0   0   0   0    5      16.7          -                -
模型
      0.75      0  0  4  4  3  4  4  2  3   1   0   0   0   0    5      16.7      7.67±4.01          0.00
      1.5       0  0  4  4  3  4  0  2  0   1   0   0   0   0    12     40.0      8.70±4.65          23.3
克拉
霉素
       3        0  0  0  0  0  4  4  4  0   0   0   0   0   0    18     60.0    11.20±3.53***       43.3
       6        0  0  0  0  0  4  4  2  0   0   0   0   0   0    20     66.7    11.60±3.48***       50.0
     0.25       0  0  1  2  3  3  5  4  0   0   0   0   0   0    12     40.0    9.30±4.08*          23.3
     0.5        0  0  0  2  2  3  4  5  0   0   0   0   0   0    14     46.7    10.3±3.77***△      30.0
人溶
菌酶
                                                                                11.23±3.36***△
      1         0  0  0  0  1  2  3  4  1   2   0   0   0   0    17     56.7                          40.0
                                                                                      △△
                                                                                12.93±2.05***△
      2         0  0  0  0  0  0  0  2  2   1   2   0   0   0    23     76.7                          60.0
                                                                                      △△
注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***p＜0.001与克拉霉素组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001
G、重组人溶菌酶药物体外预防、抑制冠状病毒的试验：
1、验证药物：重组人溶菌酶蛋白含量：4.3mg，30000U/mg，由大连奇龙生物技术研究所提供
2、阳性对照药物：注射用更昔洛韦  批号：020802  由湖北科益药业股份有限公司提供。
3、细胞：人宫颈癌传代细胞(HELA)由本室提供。
4、病毒：冠状病毒04号分离株(SARS病人血清04号标本)由佑安医院提供。
5、CO2培养箱NUAIR US AUTO FLOW提供
6、(XSZ-D2)由重庆光学仪器厂生产
7、其它试剂、器材等均由本室提供。
试验方法
1.重组人溶菌酶对HELA细胞的毒性测定
HELA细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃、5％CO2培养2小时，加入验证药物，重组人溶菌酶倍比稀释为6000ug/ml～11.7ug/ml，阳性对照药物更昔洛韦稀释为6000ug/ml～11.7ug/ml，每浓度接种3孔，每孔100μl，同时设正常细胞对照，37℃ 5％CO2孵箱培养6天，每天在倒置显微镜下观察细胞形态变化(CPE)，以25％以下形态变化为“+”，26％～50％形态变化为“++”，51％～75％形态变化为“+++”，76％～100％形态变化为“++++”，用Reed-Muench法，计算药物半数中毒浓度(TD50)和最大无毒浓度(TD0)。
2.在HELA细胞培养内对冠状病毒04号的毒力的测定冠状病毒04号的分离(SARS病人血清分离)：
HELA细胞以每毫升40万浓度接种试管，37℃ 5％CO2培养24小时，弃掉培养液，每管加入SARS病人血清0.2ml，33℃转鼓培养5小时后，加入维持液1ml，同时设正常细胞对照，33℃转鼓培养5～7天。细胞出现CPE变化后，采用PCR的方法检测冠状病毒，04号标本PCR阳性，确定为冠状病毒分离株。用终末稀释法纯化病毒2次，PCR检测冠状病毒仍为阳性，经免疫荧光测定双份SARS病人血清，IgM阳性，IgG4倍升高，确定为冠状病毒。采用病毒CPE法测定其效价。
病毒CPE法：
HELA细胞以每毫升40万浓度接种96孔培养板，37℃5％CO2培养24小时，加入病毒液，病毒稀释10-1～10-5，5个浓度，每浓度3孔，每孔100μl，设正常细胞对照，37℃5％CO2培养5～7天，每24小时在倒置显微镜下观察记录细胞形态变化(CPE)：以25％以下变化为“+”，26％～50％变化为“++”，51％～75％为“+++”，76％～100％变化为“++++”，用Reed-Muench法，计算病毒半数感染浓度TCID50。3、重组人溶菌酶在HELA细胞培养内对冠状病毒04号的抑制作用
HELA细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃5％CO2孵箱培养24小时，细胞培养至单层，弃掉培养液，加入100 TCID50的冠状病毒液，置37℃5％CO2吸附2小时后，弃掉病毒液，加入不同浓度的重组人溶菌酶药液，药物选用对细胞的最大无毒浓度(TD0)2倍稀释10个浓度即750μg/ml～1.46μg/ml，阳性对照药物更昔洛韦为2倍稀释10个浓度即6000μg/ml～1.46μg/ml，将稀释的药物分别加入细胞孔内，每浓度3孔，同时设正常细胞对照和病毒对照，置37℃5％CO2培养箱培养5～7天，逐日在倒置显微镜下观察病毒CPE，以病毒对照出现+++—++++时结束试验，用Reed-Muench法，计算药物的半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)判断药效，试验重复三次。
4、重组人溶菌酶对冠状病毒04号的预防作用
HELA细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃ 5％CO2孵箱培养24小时，细胞培养至单层，弃掉培养液，加入不同浓度的重组人溶菌酶药液，药物选用对细胞的最大无毒浓度(TD0)2倍稀释10个浓度即750μg/ml～1.46μg/ml，阳性对照药物更昔洛韦为2倍稀释13个浓度即6000μg/ml～1.46μg/ml，将稀释的药物分别加入细胞孔内，每浓度3孔，置37℃ 5％CO2吸附2.5小时后，加入100 TCID50的冠状病毒液，同时设正常细胞对照和病毒对照，置37℃ 5％CO2培养箱培养5～7天，逐日在倒置显微镜下观察病毒CPE，以病毒对照出现+++—++++时结束试验，用Reed-Muench法计算药物的半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)判断药效，试验重复三次。
试验结果
1.重组人溶菌酶对HELA细胞的毒性试验结果重组人溶菌酶：最大无毒浓度(TD0)为750±0μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为1500±0μg/ml阳性对照药物注射用更昔洛韦：最大无毒浓度(TD0)为＞6000±0μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为＞6000±0μg/ml。
2.在HELA细胞培养内对冠状病毒04号毒力测定结果(TCID50)冠状病毒04号：半数感染量(TCID50)为10-3
3、重组人溶菌酶在HELA细胞培养内对冠状病毒04号的抑制作用(以下试验数据为三次试验结果的均值)：
重组人溶菌酶：CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为23.4±0μg/ml，最小有效浓度(MIC)为46.8±0μg/ml，治疗指数(TI)为16。
阳性对照药物注射用更昔洛韦：CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为11.7μg/ml±0，最小有效浓度(MIC)为23.44μg/ml±0，治疗指数(TI)为256。
4、重组人溶菌酶在HELA细胞培养内对冠状病毒04号的预防作用(以下试验数据为三次试验结果的均值)：
重组人溶菌酶：CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为5.9±0μg/ml，最小有效浓度(MIC)为11.7±0μg/ml，治疗指数(TI)为64。
阳性对照药物注射用更昔洛韦：CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为11.7μg/ml±0，最小有效浓度(MIC)为23.44μg/ml±0，治疗指数(TI)为256。
以上试验结果表明重组人溶菌酶药物有预防和抑制冠状病毒的作用，预防冠状病毒的效果优于抑制试验结果。
本发明对重组人溶菌酶气雾吸入剂发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域，其安全无毒副作用，有很好的药用前景；制备工艺简单，使用更方便。
具体实施方式：
下面结合实施例对本发明做进一步的描述：
实施例1：
基因重组人溶菌酶的制备：
1、摇瓶种子制备：以配制200毫升培养基为基准，用H3PO4(磷酸)4-8毫升、MgSO4(硫酸镁)1-5克，K2SO4(硫酸钾)2-6克，KOH(氢氧化钾)1-3克，CaSO42H2O(硫酸钙)1-3.5克，加蒸馏水至200毫升，高压灭菌后接种甘油管种子，摇床转数为每分钟250转，培养温度为20-35℃，在恒温床上培养36-48小时。
2、种子罐培养：以种子罐最大体积1升为基准，配制培养基用H3PO4(磷酸)25-19毫升，MgSO4(硫酸镁)13-17克，CaSO42H2O(硫酸钙)0.4-0.8克，K2SO4(硫酸钾)16-20克，KOH(氢氧化钾)2.12-6.12克，加蒸馏水至500毫升，高压灭菌后接种摇床种子；发酵反应器操作参数温度为20-32℃，PH值为2.0-8.0；溶解氧浓度为10-60％，当培养液中的细胞密度提高至OD200左右，种子培养结束。
3、生产罐培养：以10升为生产罐配制培养基，用H3PO4(磷酸)93-97毫升，MgSO4(硫酸镁)51-55克，CaSO42H2O(硫酸钙)19-23克，K2SO4(硫酸钾)61-65克，KOH(氢氧化钾)13-17克加蒸馏水至7升，高压灭菌后接种种子罐种子，发酵反应器操作参数温度控制在25-32℃，PH值为4.0-8.0，溶解氧浓度为10-60％；当培养液中细胞达到一定密度后，向培养液中流加甲醇诱导，此阶段的持续时间50-60小时，然后放罐培养结束。
纯化工艺：将含有基因工程表达的人溶菌酶的毕赤酵母菌培养液用10-50万截流分子量膜超滤，收集滤液；用3000-8000截流分子量超滤，收集浓液；浓液上羧甲基纤维素，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液，过G-50柱除盐，测定蛋白量、纯度、和溶菌酶活性。(纯度99.8％活性8万单位/ml)。
气雾吸入剂的制备：
气雾剂应在避菌环境下配置，各种用具、容器等须用适应的方法清洁、灭菌，在整个操作过程中应注意防止微生物的污染。(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)
制备工艺流程如下：容器与阀门系统的处理和装配→药物的配制和分装→填充抛射剂→质量检查→成品(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)
1、容器的处理：在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成洗净、灭菌、烘干气雾剂罐备用。采用德国菲弗公司生产的气雾剂泵，用三氯甲烷熏蒸灭菌备用。
2、药物的配制和分装：取重组人溶菌酶纯度95％以上、活性15000u～300万U/ml重组人溶菌酶溶液，司盘85 0.28g，油酸乙酸0.28g，134A 10g，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、5～25％丙二醇、在常温下混合均质，(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)配制成100万U/ml重组人溶菌酶气雾吸入剂成品。按分散体系配置后，分别经过质量检查，定量分装在已准备好的容器内，安装阀门，扎紧封帽。
3、抛射剂的填充：
抛射剂的充填方法分为压罐法，将已分装药物的容器装上阀门，扎紧封帽，先抽去容器内的空气，以免影响容器内的压力，然后通过压力灌装机将定量的抛射剂压灌入内。进入成品检定。
实施例2：
在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成洗净、灭菌、烘干气雾剂罐备用。采用德国菲弗公司生产的气雾剂泵，用三氯甲烷熏蒸灭菌备用。取重组人溶菌酶纯度95％以上、活性15000u～300万U/ml重组人溶菌酶溶液，司盘85 0.28g，油酸乙酸0.28g，134A 10g，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、5～25％丙二醇、在常温下混合均质，(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)配制成15000u U/ml重组人溶菌酶气雾吸入剂成品。按分散体系配置后，分别经过质量检查，定量分装在已准备好的容器内，安装阀门，扎紧封帽。先抽去容器内的空气，以免影响容器内的压力，然后通过压力灌装机将定量的抛射剂压灌入内。进入成品检定。
实施例3：
取重组人溶菌酶纯度95％以上、活性30000U/ml重组人溶菌酶溶液，司盘85 0.28g，油酸乙酸0.28g，134A 10g，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、5～25％丙二醇、在常温下混合均质，(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)配制成30000U/ml重组人溶菌酶气雾吸入剂成品。按分散体系配置后，分别经过质量检查，定量分装在已准备好的容器内，安装阀门，扎紧封帽。

Claims (9)

1、用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，其特征是：剂型为气雾吸入剂。
2、根据权利要求1所述的用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，其特征是：人溶菌酶药物为治疗由病毒、细菌、耐药菌引起的肺炎或预防肺炎的药物。
3、根据权利要求1所述的用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，其特征是：为治疗由病毒、细菌、耐药菌引起的气管炎或预防气管炎的药物。
4、根据权利要求1所述的用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，其特征是：为治疗由病毒、细菌、耐药菌引起的咽喉炎或预防咽喉炎疾病的药物。
5、根据权利要求1所述的用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，其特征是：为治疗由病毒(RNA、DNA病毒)或非典型肺炎(SAES)、细菌、耐药菌引起的气管炎、肺炎及肺脓肿的药物。
6、根据权利要求1、2、3、4或5所述的用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，其特征是：药物含有活性1500U～30000U/ml人溶菌酶。
7、根据权利要求1、2、3、4或5所述的用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，其特征是：采用德国菲弗公司出品的每次100ul气雾泵，每次750U～30000U。
8、根据权利要求1、2、3、4或5所述的用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物，其特征是：人溶菌酶为基因工程表达的重组人溶菌酶、基因工程表达人溶菌酶的氨基端带有(谷氨酸-丙氨酸)2或(谷氨酸-丙氨酸)3修饰的人溶菌酶或基因工程表达或化学合成突变体重组人溶菌酶。
9、根据权利要求1、2、3、4或5所述的用于抗病毒抗耐药菌的人溶菌酶药物制法，其特征是：取重组人溶菌酶纯度95％以上、活性15000u～300万U/ml重组人溶菌酶溶液，司盘85 0.28g，油酸乙酸0.28g，134A 10g，磷酸盐缓冲液10～20mM(pH6.5～7.5)80％、5～25％丙二醇、在常温下混合均质，(在符合GMP要求的制药工厂，按制药规程完成)配制成15000u～300万U/ml重组人溶菌酶气雾吸入剂成品。按分散体系配置后，分别经过质量检查，定量分装在已准备好的容器内，安装阀门，扎紧封帽，进入成品检定。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106822880A (zh) * 2016-12-30 2017-06-13 江阴市本特塞缪森生命科学研究院有限公司 一种抗微生物组合物及其应用
CN113521262A (zh) * 2021-07-30 2021-10-22 浙江莱康生物工程有限公司 一种具有抗炎效果的溶菌酶制剂

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5675096B2 (ja) * 2006-05-10 2015-02-25 ラクレード，インコーポレーテッド 肺の疾患の酵素的処置のための組成物及び方法
US20110059062A1 (en) * 2007-07-06 2011-03-10 Michael A Pellico Use of hydrolytic and oxidative enzymes to dissolve biofilm in airway passages
JP7399976B2 (ja) * 2020-04-27 2023-12-18 広州新創憶薬物臨床研究有限公司 Ｃｏｖｉｄ－１９新型コロナ肺炎を予防又は治療する医薬品、食品及びその使用
IT202000016663A1 (it) * 2020-07-09 2022-01-09 Bioseutica Bv Nuovo processo di purificazione delle proteine dall’albume di uovo ed uso delle stesse come agenti antivirali contro sars-cov-2
BR112022022967A2 (pt) * 2020-05-11 2023-01-17 Bioseutica Bv Processo de purificação de proteínas provenientes da clara do ovo de galinha e seu uso como agente antiviral contra sars-cov-2

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3540075A1 (de) * 1985-11-12 1987-05-14 Boehringer Ingelheim Int Human-lysozym
IT1303788B1 (it) * 1998-11-25 2001-02-23 Chiesi Farma Spa Formulazioni di aerosol medicinali.
US6776989B2 (en) * 2000-04-10 2004-08-17 Jerome Owen Cantor Intratracheal administration of lysozyme
CN1227028C (zh) * 2003-01-09 2005-11-16 长春奇龙生物技术研究所 基因重组人溶菌酶针对抗耐药菌在制药中的新用途
CN1449822A (zh) * 2003-05-04 2003-10-22 长春奇龙生物技术研究所 基因重组人溶菌酶针对冠状病毒sars在制药中的新用途
CN1546170A (zh) * 2003-12-05 2004-11-17 长春奇龙生物技术研究所 重组人溶菌酶雾化溶液及吸入剂对抗耐药菌在制药中的新用途

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106822880A (zh) * 2016-12-30 2017-06-13 江阴市本特塞缪森生命科学研究院有限公司 一种抗微生物组合物及其应用
CN113521262A (zh) * 2021-07-30 2021-10-22 浙江莱康生物工程有限公司 一种具有抗炎效果的溶菌酶制剂
CN113521262B (zh) * 2021-07-30 2023-10-13 浙江莱康生物工程有限公司 一种具有抗炎效果的溶菌酶制剂

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