CN1569886A

CN1569886A - 天冬总甾体皂苷提取物及其制备方法与应用

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Publication number: CN1569886A
Application number: CN 200410018180
Authority: CN
Inventors: 陈海生; 刘建国; 徐从立
Original assignee: SHANGHAI ZHENGXIANG NAUTRAL DRUG TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SHANGHAI ZHENGXIANG NAUTRAL DRUG TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2004-05-09
Filing date: 2004-05-09
Publication date: 2005-01-26
Anticipated expiration: 2024-05-09
Also published as: CN1315866C

Abstract

本发明提供一种天冬总甾体皂苷提取物及其制备方法与应用。制得的总甾体皂苷提取物中分离得到6种化合物，经鉴定其中4种是新化合物。制备方法包括正丁醇萃取法和大孔树脂吸附法。制得的总甾体皂苷提取物，经药理活性研究证明，天冬总甾体皂苷提取物具有心脑血管活性，即该提取物可显著增加麻醉犬脑血流量；能显著降低麻醉犬脑血管阻力；而对麻醉犬平均动脉压和心率无明显影响。因此，天冬总甾体皂苷提取物可用于制备防治心脑血管病药物或食品。

Description

天冬总甾体皂苷提取物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及从天然药物中得到的有效成分提取物及其制备方法与应用，具体说是关于由中药天冬获得的总甾体皂苷提取物，其制备方法及在制备心脑血管药物或食品中的应用。

背景技术

中药天冬系百合科植物天门冬[Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.]的块根，具有滋阴润燥，清肺降火之功效，主治燥热咳嗽，热病伤阴，内热消渴，肠燥便秘，咽喉肿痛等[国家中医药管理局《中华本草》编委会，编.《中华本草》；上海科学技术出版社，1999.8(22)：63～69]。天冬为一常用中药，且资源丰富。TenjiK等[Tenji K，et al.Chem Pharm Bull，1979，27(12)：3086]从天冬中分离鉴定了4个天冬呋甾醇寡糖苷(ASPIV；ASPV；ASPVI；ASPVII)；Liang Z Z等[Liang Z Z，et al.Planta Med，1988，54(4)：344]从天冬中分离鉴定了甲基原薯蓣皂苷(Methylprotodiosin)，伪原薯蓣皂苷(Pseudoprotodiosin)及3-O-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基]-26-O-(-β-D-吡喃葡萄糖基)-(25R)-5，20-呋甾二烯-3β-，26-二醇{3-O-[α-L-rhamanopyranosyl(1→4)-β-D-glucopyranosyl]-26-O-(β-D-glucopyranosyl)-(25R)-furosta-5，20-dien-3，20-diol}；Masashi T.等[Masashi T，etal.Chem Pharm Bull，1974，22(10)：2306]从天冬中分离出了7个寡糖和蔗糖；小林正等[小林正，等.药学研究(日)，1958，30：477]从天冬中分得了葡萄糖、果糖、5-甲氧基甲基糠醛、β-谷甾醇；Masashi T.等[Masashi T，et al.CA，1976，85：30677y]及倪京满等[倪京满，等.中草药，1992，23(4)：182]报道了19种氨基酸成分；杜旭华等[杜旭华等.沈阳药学院学报，1990，7(3)：197]从天冬中分出了4种天冬多糖；张部昌等[张部昌等.天门冬糖蛋白的分离纯化及糖肽键的研究安徽大学学报(自然科学版)，1996，20(4)：51～54]报道了天冬糖蛋白的分离纯化及结构研究。至今未见上述分离得到的化合物具有心脑血管活性的报道。

发明内容

本发明提供一种天冬总甾体皂苷提取物及其制备方法与应用，从总甾体皂苷提取物中分离得到6种化合物，他们的化学结构鉴定如下：

化合物(1)：(25S)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖苷{(25S)-26-O-β-D-glucopyranosyl-5β-furosta-20(22)-en-3β，26-diol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl(1→4)]-β-D-glucopyranoside}。理化性质和光谱数据如下：白色无定形粉末(MeOH)。mp：189-191℃。[α]_D ²⁰-33.06°(C＝4.84，MeOH)。Liebermann-Burchard反应呈阳性，Ehrlich试剂反应呈红色，说明该化合物为F环开环的甾体皂苷。ESI-MS显示：909[M+Na]⁺，提示该化合物分子量应为886；分子式为C₄₅H₇₄O₁₇。¹H-NMR和¹³C-NMR见表1和表2。

表1 化合物(1)的¹H-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_H/ppm NO. δ_H/ppm

17-H 2.49(1H，d，J＝10.1) 26-Glu 1 4.81(1H，d，J＝7.7)

CH₃-18 0.69(3H，s) 6 4.39(1H，br d，J＝12.4)

4.57(1H，br d，J＝12.4)

CH₃-19 0.85(3H，s) 3-Glu 1 4.83(1H，d，J＝7.8)

CH₃-21 1.63(3H，s，) 6 4.12(1H，br d，J＝10.3)

4.26(1H，br d，J＝10.3)

CH₃-27 1.05(3H，d，J＝6.0) 4’-Rha 1 5.9(1H，brs)

6 1.7(3H，d，J＝6.2)

表2化合物(1)的¹³C-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_C/ppm NO. δ_C/ppm

1 30.6 26-Glu

2 26.5 1 104.8

3 74.2 2 75.2

4 30.2 3 78.2

5 36.6 4 72.5

6 26.6 5 78.1

7 26.6 6 62.5

8 34.9 3-Glu

9 39.8 1 102.7

10 34.9 2 74.9

11 21.0 3 76.4

12 39.8 4 78.01

13 43.5 5 76.8

14 54.4 6 61.8

15 31.1 4’-Rha

16 84.2 1 102.3

17 64.3 2 72.3

18 14.1 3 72.5

19 23.5 4 73.7

20 103.2 5 69.8

21 11.5 6 18.2

22 152.1

23 34.1

24 23.3

25 33.4

26 74.9

27 16.8

化合物(2)：菝葜皂苷元-3-O-[α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖苷{3-O-[α-L-rhamnopyranosyl(1→4)]-β-D-glucopyranoside-(25S)-5β-spirostan-3β-ol}。理化性质和光谱数据如下：无色针状结晶(CHCl₃)。Liebermann-Burchard反应呈阳性。mp：252-254℃。[α]_D ²⁰-61.5°[C＝0.80，CHCl₃/MeOH(1∶1)]。ESI-MS给出[M+Na]⁺峰747，推断化合物分子量为724；分子式为C₃₉H₆₄O₁₂。NMR见表3。与文献[黑柳正典等，国外医学，中医中药分册，1988；10(1)：56]一致。

表3 化合物(2)的¹H-NMR(DMSO-D6，400MHz)

NO. δ_H(J_Hz)δ_C NO. δ_H(J_Hz) δ_C

1 29.3 22 108.8

2 26.1 23 25.5

3 73.7 24 25.4

4 30.0 25 26.4

5 35.8 26 3.35(1H，d，J＝9.3)， 64.9

4.09(1H，dd，J＝5.3，

10.6)

6 26.3 27 0.92(3H，d，J＝6.9) 15.9

7 25.9 3-Glu

8 34.8 1 4.19(1H，d，J＝7.8) 100.5

9 39.6 2 72.6

10 34.6 3 75.3

11 20.4 4 76.8

12 39.6 5 75.3

13 40.1 6 60.0

14 55.6 Rha

15 31.4 1 4.71(1H，brs) 100.8

16 80.3 2 70.6

17 61.8 3 70.7

18 0.9(3H，s) 16.1 4 71.9

19 0.7(3H，s) 23.5 5 68.6

20 41.5 6 1.11(3H，d，J＝6.16) 17.7

21 1.02(3H， 14.4

d，J＝7.06)

化合物(3)：(25R)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-呋甾-5，20-二烯-3β，26-二醇-3-O-[α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)]-[(β-D-葡萄吡喃糖-(1→4))-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖苷{(25R)-26-O-β-D-glucopyranosyl-furosta-5，20-diene-3β，26-diol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-[(β-D-glucopyranoside-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4))-β-D-glucopyranoside]。理化性质和光谱数据如下：白色无定形粉末(MeOH)。mp：190-192℃。Liebermann-Burchard反应呈阳性，Ehrlich试剂反应呈红色，说明该化合物为F环开环的甾体皂苷。ESI-MS显示：1215[M+Na]⁺，提示该化合物分子量应为1192。分子式为C₅₇H₉₂O₂₆。¹H-NMR和¹³C-NMR见表4和表5。

表4化合物(3)的¹H-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_H/ppm NO. δ_H/ppm

17-H 2.45(1H，d，J＝10.1) 3-Glu 1 4.92(1H，d，J＝7.0)

CH₃-18 0.72(3H，s) 6 4.05(1H，br d，J＝10.5)

4.20(1H，br d，J＝10.5)

CH₃-19 1.04(3H，s) 2’-Rha 1 5.83(1H，brs)

CH₃-21 1.61(3H，s，) 6 1.75(3H，d，J＝6.2)

CH₃-27 1.02(3H，d，J＝6.7) 4’-Rha 1 6.35(1H，brs)

26-Glu 1 4.82(1H，d，J＝7.7) 6 1.65(3H，d，J＝6.2)

6 4.34(1H，br d，J＝12.4) 4”-Glu 1 5.21(1H，d，J＝7.7)

4.41(1H，br d，J＝12.4)

6 4.32(1H，br d，J＝12.4)

4.41(1H，br d，J＝12.4)

表5 化合物(3)的¹³C-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_C/ppm NO. δ_C/ppm

1 37.2 26-Glu 1 104.8

2 29.8 2 78.24

3 77.73 3 74.86

4 38.6 4 72.13

5 142.1 5 78.2

6 121.5 6 62.15

7 32.1 3-Glu 1 100.1

8 31.1 2 77.45

9 50.0 3 73.78

10 36.8 4 77.59

11 20.9 5 76.64

12 39.3 6 60.93

13 43.1 2’-Rha 1 101.64

14 54.6 2 71.40

15 31.1 3 72.48

16 84.1 4 73.78

17 64.1 5 69.15

18 13.8 6 18.26

19 19.1 4’-Rha 1 101.69

20 103.2 2 71.59

21 11.4 3 72.17

22 152.1 4 84.97

23 34.1 5 68.25

24 23.3 6 17.98

25 33.4 4”-Glu 1 106.45

26 74.2 2 76.2

27 16.8 3 78.12

4 71.01

5 76.6

6 62.53

化合物(4)：(25S)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β，15，26-三醇-3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖苷{(25S)-26-O-β-D-glucopyranosyl-5β-furosta-20(22)-en-3β，15，26-triol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl(1→4)]-β-D-glucopyranoside}。理化性质和光谱数据如下：白色无定形粉末(MeOH)。mp：210-212℃。Liebermann-Burchard反应呈阳性，Ehrlich试剂反应呈红色，说明该化合物为F环开环的甾体皂苷。ESI-MS显示：925[M+Na]⁺，提示该化合物分子量应为：902。分子式为C₄₅H₇₄O₁₈。¹H-NMR和¹³C-NMR见表6和表7。

表6化合物(4)的¹H-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_H/ppm NO. δ_H/ppm

17-H 2.5(1H，d，J＝10.3) 26-Glu 1 4.82(1H，d，J＝7.8Hz)

CH₃-18 0.7(3H，s) 6 4.38(1H，br d，J＝12.3)

4.56(1H，br d，J＝12.3)

CH₃-19 0.85(3H，s) 3-Glu 1 4.82(1H，d，J＝7.8)

CH₃-21 1.72(3H，s，) 6 4.14(1H，br d，J＝10.5)

4.27(1H，br d，J＝10.5)

CH₃-27 1.18(3H，d，J＝6.7) 4’-Rha 1 5.9(1H，brs)

6 1.7(3H，d，J＝6.2)

表7化合物(4)的¹³C-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_C/ppm NO. δ_C/ppm

1 30.601 26-Glu

2 26.642 1 104.86

3 74.894 2 74.948

4 29.292 3 78.130

5 36.647 4 71.384

6 25.516 5 76.473

7 26.642 6 62.515

8 34.808 3-Glu

9 39.845 1 102.69

10 34.884 2 75.210

11 20.984 3 78.227

12 39.736 4 78.084

13 43.567 5 76.825

14 54.42 6 61.272

15 84.37 4’-Rha

16 90.094 1 102.36

17 64.64 2 72.297

18 14.182 3 72.489

19 23.538 4 73.696

20 104.96 5 70.003

21 11.36 6 18.188

22 153.79

23 34.109

24 39.421

25 30.713

26 75.368

27 17.697

化合物(5)：(25R)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-[β-D-葡萄吡喃糖基-(1→2)]-β-D-葡萄吡喃糖苷{(25R)-26-O-β-D-glucopyranosyl-5β-furost-20(22)-en-3β，26-diol-3-O-[β-D-glucopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside}。理化性质和光谱数据如下：白色无定形粉末(MeOH)。mp：188-190℃。Liebermann-Burchard反应呈阳性，Ehrlich试剂反应呈红色，说明该化合物为F环开环的甾体皂苷。ESI-MS显示：925[M+Na]⁺，提示该化合物分子量应为：902。分子式为C₄₅H₇₄O₁₈。¹H-NMR和¹³C-NMR见表8和表9。

表8 化合物(5)的¹H-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_H/ppm NO. δ_H/ppm

17-H 2.45(1H，d，J＝10.0) 26-Glu 1 4.80(1H，d，J＝7.0)

CH₃-18 0.72(3H，s) 6 4.34(1H，br d，J＝12.5)

4.42(1H，br d，J＝12.5)

CH₃-19 1.02(3H，s) 3-Glu 1 4.95(1H，d，J＝7.0)

CH₃-21 1.65(3H，s，) 6 4.36(1H，br d，J＝10.6)

4.49(1H，br d，J＝10.6)

CH₃-27 1.05(3H，d，J＝5) 2’-Glu 1 5.4(1H，d，J＝7.0)

6 4.37(1H，br d，J＝12.3)

4.5(1H，br d，J＝12.3)

表9 化合物(5)的¹³C-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_C/ppm NO. δ_C/ppm

1 30.656 26-Glu

2 26.557 1 104.75

3 74.90 2 76.60

4 30.488 3 78.07

5 36.575 4 71.46

6 26.595 5 78.24

7 26.690 6 62.42

8 34.944 3-Glu

9 39.940 1 101.56

10 34.944 2 82.76

11 21.04 3 75.01

12 39.835 4 71.34

13 43.58 5 77.89

14 54.50 6 62.58

15 31.116 2’-Glu

16 84.29 1 105.52

17 64.43 2 74.86

18 14.10 3 77.62

19 23.17 4 71.59

20 103.25 5 78.12

21 11.48 6 62.67

22 152.12

23 34.124

24 23.337

25 33.396

26 74.90

27 16.87

化合物(6)：(25R)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-呋甾-5，20-二烯-3β，26-二醇-3-O-[α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)]-[α-L-鼠李吡喃糖基-(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖苷{(25R)-26-O-β-D-glucopyranosyl-furost-5，20-diene-3β，26-diol-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl(1→2)]-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)]-β-D-glucopyranoside}。理化性质和光谱数据如下：白色无定形粉末(MeOH)。mp：175-177℃。Liebermann-Burchard反应呈阳性，Ehrlich试剂反应呈红色，说明该化合物为F环开环的甾体皂苷。ESI-MS显示：1053[M+Na]⁺，提示该化合物分子量应为：1030。分子式为C₅₁H₈₂O₂₁。¹H-NMR和¹³C-NMR见表10和表11。与文献[Liang Z Z etal，Planta Med.1988；54(4)：344]一致。

表10 化合物(6)的¹H-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_H/ppm NO. δ_H/ppm

17-H 2.45(1H，d，J＝10.0) 26-Glu 1 4.80(1H，d，J＝7.0)

CH₃-18 0.72(3H，s) 6 4.34(1H，br d，J＝12.5)

4.42(1H，br d，J＝12.5)

CH₃-19 1.04(3H，s) 3-Glu 1 4.95(1H，d，J＝7.0)

CH₃-21 1.61(3H，s，) 6 4.05(1H，br d，J＝10.4)

4.10(1H，br d，J＝10.4)

CH₃-27 1.02(3H，d，J＝6.0) 2’-Rha 1 5.85(1H，brs)

6 1.64(3H，d，J＝6.0)

4’-Rha 1 6.4(1H，brs)

6 1.75(3H，d，J＝6.0)

表11 化合物(6)的¹³C-NMR(C₅D₅N，400MHz)

NO. δ_C/ppm NO. δ_C/ppm

1 37.2 26-Glu

2 29.8 1 104.82

3 77.67 2 77.37

4 38.6 3 74.85

5 140.4 4 72.18

6 121.4 5 78.15

7 32.04 6 62.49

8 31.02 3-Glu

9 49.95 1 99.89

10 39.92 2 78.27

11 20.89 3 76.56

12 39.27 4 77.59

13 43.04 5 78.24

14 54.58 6 60.92

15 31.02 2’-Rha

16 84.11 1 102.54

17 64.17 2 71.36

18 13.74 3 70.04

19 19.04 4 72.36

20 103.2 5 73.55

21 11.4 6 18.11

22 153.2 4’-Rha 1 101.63

23 43.14 2 72.15

24 23.29 3 69.13

25 33.37 4 72.45

26 74.57 5 73.77

27 16.8 6 18.27

上述化合物中，化合物(2)和(6)为已知化合物；化合物(1)，(3)，(4)和(5)为新化合物。

本发明天冬总甾体皂苷提取物的制备方法有下列正丁醇萃取法和大孔树脂吸附法两种。具体制备步骤为：

一、正丁醇萃取法：

天冬粗粉，用20倍量70～80％乙醇渗漉提取，减压回收乙醇得浸膏。将浸膏用适量水稀释，以氯仿萃取，去除脂溶性成分。水溶液以正丁醇萃取3-5次，减压回收正丁醇至干，残留物以少量甲醇溶解，搅拌下加入丙酮至沉淀不再产生，减压过滤，真空干燥得天冬总甾体皂苷提取物，得率约为4-5％，其中呋甾皂苷含量约为70-80％。

二、大孔树脂吸附法：

取天冬粗粉，以7-15倍量70～80％乙醇回流提取3次，提取液减压蒸发回收乙醇至无醇味，加水稀释后以大孔树脂柱(例如D101大孔树脂柱，ZTC-1大孔树脂柱，AB-8大孔树脂柱等)进行层析分离，依次以水，20％乙醇，70％-80％乙醇洗脱，将70％-80％乙醇洗脱部分减压回收乙醇蒸干后得天冬总甾体皂苷提取物，得率约为4～5％，其中呋甾皂苷含量为80～85％。

本发明用天冬的块根制得的天冬总甾体皂苷提取物，经药理活性研究，发现天冬总甾体皂苷提取物具有显著心脑血管活性作用。总甾体皂苷提取物给麻醉犬静脉滴注(5mg/Kg)试验，发现该总甾体皂苷提取物可显著增加麻醉犬脑血流量；能显著降低麻醉犬脑血管阻力；对麻醉犬平均动脉压和心率无明显影响；分得的新化合物(1)、(3)给犬静滴(2.5mg/Kg)，活性比总甾体皂苷提取物更好。因此，天冬总甾体皂苷提取物可用于制备防治心脑血管病药物或食品。

具体实施方式

下面通过实施例，对本发明作进一步说明。

实施例1 正丁醇萃取法：

天冬粗粉1kg，用20倍量70～80％乙醇渗漉提取，渗漉液减压回收乙醇得浸膏。将浸膏用适量水稀释，以氯仿萃取2次(每次用氯仿500ml)。氯仿萃取过的水溶液再用正丁醇萃取4-5次(每次用正丁醇400～500ml)，合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇至干，残留物以少量甲醇溶解，搅拌下加入丙酮至沉淀不再产生，减压过滤沉淀，沉淀经真空干燥得总甾体皂苷提取物，得率约为4％，其中呋甾皂苷含量约为75％。

实施例2 大孔树脂吸附法：

天冬粗粉1kg，以70～80％乙醇回流提取3次(每次用乙醇1000ml)，醇提取液减压回收至无醇味，加水稀释后，上D101大孔树脂柱进行层析分离，依次以水，20％乙醇，70-80％乙醇洗脱，将70％-80％乙醇洗脱部分减压回收溶剂至干，残留物经真空干燥即得总甾体皂苷提取物，得率约为5％，其中呋甾皂苷含量约为83％。

实施例3 天冬总甾体皂苷提取物的脑血管活性试验

3.1试验目的：观察天冬总甾体皂苷提取物、化合物(1)、化合物(3)对麻醉犬脑血管影响。

3.2受试药物：见表12。

3.3动物：健康杂种犬27只，由第二军医大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(沪)2003-0002，体重13～15kg，雌雄兼用，随机分为5组如下，见表12：

表12

分组动物数(只) 剂量给药途径

阴性对照组 6 生理盐水5ml/kg 静脉滴注

尼莫地平组 6 尼莫地平300ug/kg 静脉滴注

天冬总甾体皂苷组 6 5mg/kg 静脉滴注

化合物(1)组 5 2.5mg/kg 静脉滴注

化合物(3)组 4 2.5mg/kg 静脉滴注

3.4试验方法：动物用戊巴比妥钠静脉麻醉(30mg·kg^-1)；分离右颈总动脉及颈外动脉，结扎颈外动脉和其他小动脉分支后，在颈总动脉上安放直径为3mm的电磁流量计探头，用MFV-3200型电磁流量仪(日本光电株式会社)记录血流量，表示颈内动脉血流量。分离股动脉，并行插管，用针状电极刺入四肢和胸前皮下，股动脉压力传感器和心电导联线连接生物电信号放大器(上海奥尔科特公司生产)并通过电脑显示，记录动脉血压；分离股静脉，并行插管(静脉给药用)。分离气管，插气管套管。手术结束后，稳定30分钟，记录一次各项指标作为给药前对照值；给药体积均为5ml/kg，静注时间为30min。静注后5、15、30、60、90、120分钟分别记录各项指标值。120分钟后处死犬，取大脑称重。以右颈总动脉血流量乘以2代表全脑血流量(CBF)。脑血管阻力可用公式计算：R＝MBP(kPa)/[CBF(ml/min)·100g脑]。

3.5给药途径：静脉滴注。

3.6给药次数：均单次给药。

3.7观察指标及观察时间：观察记录颈内动脉血流量、血压，观察时间为给药后5、15、30、60、90、120分钟。

3.8数据及统计学处理：

实验结果以X± s表示，采用t检验配对值的成队二样本分析作给药前后统计分析，双样本等方差t检验作组间比较分析，P＜0.05判断为具有显著性的统计学差异。

3.9观察内容：

1、对脑血流量的影响：用药前后对脑血流量的影响，其变化率与生理盐水对照组同时间点比较有无显著性差异。

2、对脑血管阻力的影响：用药前后脑血管阻力的变化，其变化率与生理盐水对照组同时间点比较有无显著性差异。

3、对平均血压的影响：用药前后对平均血压的影响，给药前后的变化率与生理盐水对照组同时间点比较差异有无统计学意义。

4、对心率的影响：用药前后对心率的影响，其变化率与生理盐水对照组同时间点比较有无显著性差异。

3.10实验结果：

1、天冬总甾体皂苷提取物静脉滴注对麻醉犬脑血流量的影响：生理盐水对照组用药前与用药后各时间点比较脑血流量略有降低，而天冬总甾体皂苷提取物、化合物(1)、化合物(3)组用药前后比较脑血流量在30分钟内升高(P＜0.05)。与生理盐水组比较组间变化率，天冬总甾体皂苷提取物、化合物(1)、化合物(3)组在30分钟内升高明显，(P＜0.05-0.01)。见表13。

2、对麻醉犬脑血管阻力的影响

生理盐水组用药前比较脑血管阻力无明显变化，天冬总甾体皂苷提取物、化合物(1)、化合物(3)组用药后与用药前比较脑血管阻力在60min内降低。其变化率与生理盐水组比较在30分钟内明显降低(P＜0.05～0.01)见表14。

3、对麻醉犬平均血压和心率的影响

生理盐水组和天冬总甾体皂苷提取物、化合物(1)、化合物(3)组对麻醉犬血压和心率均无明显影响。见表15和16。

表13对麻醉犬脑血流量的影响(ml/min.100g， x±SD，n＝6)

给药前给药后

组别 5min 15min 30min 60min 90min 120min

生理盐水组 428.45.52±122.81 405.07±140.47 409.08±126.98 399.31±119.82 387.87±70.28 321.49±54.86 290.010±80.64

变化率％ -5.97±16.14 -4.89±9.95 -20.10±35.43 -6.51±17.06 -22.30±14.05 -30.00±19.18

尼莫地平组 299.46±35.85 334.82±61.90 339.06±44.57 331.95±20.42 355.02±29.94^* 332.65±60.56 322.23±69.21

变化率％ 13.11±24.56 14.37±18.84^* 12.04±13.87^** 19.96±17.22^* 10.98±14.23^** 6.91±14.60^**

天冬总甾体皂

苷提取物组 265.15±79.96 338.10±98.70^△△ 310.40±103.29^△ 280.21±101.48 227.66±114.58 206.69±122.78 195.48±113.01

变化率％ 28.32±16.29^** 16.70±12.67^* 4.58±13.27^* -17.30±23.00 -26.41±48 -30.00±24.83

化合物(1)组 371.75±30.96 445.96±70.72 419.41±58.72 357.89±35.38 329.25±44.23 280.63±41.13 217.55±43.17

变化率％ 21.44±26.67 14.12±23.59 -2.74±16.16 -10.39±17.85 -24.08±13.15 -41.77±8.00

化合物(3)组 381.54±37.43 450.03±40.45 427.36±49.06 404.01±38.84 327.17±30.63 285.15±33.37 224.26±60.59

变化率％ 18.14±642 12.06±8.03 6.15±8.77 -13.20±15.09 -24.10±15.95 -39.65±21.72

变化率与生理盐水对照组同时间点比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；^△p＜0.05，^△△p＜0.01组内用药前后比较

表14对麻醉犬脑血管阻力的影响(kPa·min/ml·100g脑， x±SD，n＝6)

给药前给药后

组别 5min 15min 30min 60min 90min 120min

生理盐水组 4.01±1.67 4.22±1.36 4.17±1.35 4.17±1.15 4.27±0.73 5.72±1.35 6.92±1.94

变化率％ 7.00±18.07 7.59±20.80 8.52±19.94 18.96±35.10 55.05±47.32 85.79±66.48

尼莫地平组 5.09±1.92 2.60±0.77^△ 2.65±0.66^△ 3.11±0.65^△ 3.36±0.92^△ 4.32±2.08 4.45±2.25

变化率％ -57.98±10.92^* -38.62±36.63^* -28.66±39.56^* -22.65±46.17^* -10.31±33.84^* -9.18±33.21^*

天冬总甾体皂

苷提取物组 5.26±1.13 4.12±0.76 4.37±1.08 4.40±1.74 5.25±2.44 7.17±3.86 8.62±4.63

变化率％ -20.67±12.49^* -16.42±17.51^* -17.38±23.84^* 4.80±37.35 36.78±75.32 62.45±87.00

化合物(1)组 7.11±0.91 5.87±0.92 5.92±0.65 7.40±0.69 7.42±0.56 8.23±0.90 11.77±2.94

变化率％ -17.19±9.89^* -16.04±11.57^* 4.74±9.89 5.31±12.15 17.58±20.77 66.03±40.80

化合物(3)组 6.77±1.57 5.66±1.49 5.77±1.07 6.14±2.15 7.76±2.25 9.02±2.50 11.29±3.87

变化率％ -16.78±3.71^* -14.02±4.79^* -10.99±11.82^* 14.33±25.67 33.12±26.52 66.74±51.48

变化率与溶剂对照组同时间点比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

表15对麻醉犬平均血压的影响(kPa， x±SD，n＝6)

给药前给药后时间

组别 5min 15min 30min 60min 90min 120min

生理盐水组 15.43±3.76 14.78±2.07 15.15±1.83 15.12±1.31 15.93±1.58 17.50±2.95 18.18±2.53

变化率％ -0.68±21.12 2.53±24.23 2.65±23.53 7.73±24.22 17.79±31.02 21.88±26.46

尼莫地平组 14.85±4.69 8.63±2.59^△ 8.87±2.05^△ 10.28±1.98 12.12±2.27 13.53±3.75 13.22±3.61

变化率％ -34.15±41.15 -33.05±34.37 -22.09±37.22 -8.96±39.59 -2.69±29.46 -4.28±31.73

天冬总皂体皂

苷提取物组 13.55±3.10 13.57±3.24 12.95±3.18 11.40±3.26 10.18±3.19 11.40±2.99 12.73±3.70

变化率％ 0.49±10.34 -3.80±13.55 -16.20±12.02 -23.64±19.14 -14.38±19.41 -3.75±28.92

化合物(1)组 17.44±1.36 18.12±1.52 16.96±1.28 18.56±1.36 17.08±1.44 16.18±2.25 17.34±1.23

变化率％ 0.04±0.05 -0.02±0.10 0.07±0.11 -0.02±0.07 -0.07±0.15 0.00±0.12

化合物(3)组 17.40±4.44 17.00±4.14 16.50±3.43 16.30±4.37 16.85±4.59 16.98±4.14 15.90±3.44

变化率％ -1.78±5.42 -3.52±11.16 -5.92±10.05 -3.64±3.58 -2.06±3.11 -7.49±7.35

△P＜0.05，用药前后比较。

表16 对麻醉犬心率的影响(次/分)

给药前给药后

组别 5min 15min 30min 60min 90min 120min

生理盐水组 202±37 178±26 184±19 188±18 184±30 179±53 203±35

变化率％ -9±23 -6±20 -5±17 -7±16 -11±25 2±15

尼莫地平组 182±32 157±38 166±34 155±45 166±40 172±38 180±34

变化率％ -12.96±19.31 -7.94±18.72 13.78±25.46 -7.21±21.94 -3.35±24.78 1.25±23.31

天冬总甾体皂

苷提取物组 173±36 163±31 158±29 153±23 148±23 152±28 146±38

变化率％ -5±5 -8±10 -10±13 -13±10 -11±10 -15±12

化合物(1)组 205±36 190±18 186±13 184±13 170±21 175±30 174±34

变化率％ -0.06±0.10 -0.08±0.12 -0.09±0.12 -0.16±0.12 -0.14±0.17 -0.14±0.21

化合物(3)组 199±27 179±36 185±48 168±37 170±55 166±43 153±46

变化率％ -11±11 -8±16 -16±10 -16±17 -18±11 -24±15

结论

以上实施例3的试验结果表明：

1.天冬总甾体皂苷提取物、化合物(1)和化合物(3)静脉滴注可明显增加麻醉犬脑血流量。

2.天冬总甾体皂苷提取物、化合物(1)和化合物(3)静脉滴注有明显降低麻醉犬脑血管阻力作用。

3.天冬总甾体皂苷提取物、化合物(1)和化合物(3)静脉注射对麻醉犬平均动脉压和心率无明显影响。

试验结果显示，天冬总甾体皂苷提取物、化合物(1)和化合物(3)具有作为有效防治心脑血管疾病的药物的基本条件。因此，本发明中药天冬制备的总甾体皂苷提取物、化合物(1)和化合物(3)可用于制备防治心脑血管病药物或食品。

Claims

1、一种天冬总甾体皂苷提取物，其特征在于所述提取物中呋甾皂苷含量为70-85％，从所述提取物中分离得6种化合物，其中4种化合物是：

化合物(1)：(25S)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖苷；

化合物(3)：(25R)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-呋甾-5，20-二烯-3β，26-二醇-3-O-[α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)]-[(β-D-葡萄吡喃糖-(1→4))-α-L-鼠李吡喃糖基-(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖苷；

化合物(4)：(25S)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β，15，26-三醇-3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→4)]-β-D-葡萄吡喃糖苷；

化合物(5)：(25S)-26-O-β-D-葡萄吡喃糖基-5β-呋甾-20(22)-烯-3β，26-二醇-3-O-[β-D-葡萄吡喃糖基-(1→2)]-β-D-葡萄吡喃糖苷。

2、权利要求1所述天冬总甾体皂苷提取物的制备方法，其特征在于用正丁醇萃取法制备，制备步骤为：天冬粗粉用20-30倍量70-80％乙醇渗漉提取，得浸膏；浸膏用适量水稀释，以氯仿萃取后，水溶液以正丁醇萃取，蒸干，残留物用甲醇溶解，加入丙酮至沉淀不再产生，过滤，干燥得天冬总甾体皂苷提取物。

3、权利要求1所述天冬总甾体皂苷提取物的制备方法，其特征在于用大孔树脂吸附法制备，制备步骤为：取天冬粗粉，以7-15倍量的70-80％乙醇回流提取，蒸去乙醇，以大孔树脂柱进行层析分离，依次以水，20％乙醇，70％-80％乙醇洗脱，将70-80乙醇洗脱部分蒸干得天冬总甾体皂苷提取物。

4、权利要求1所述天冬总甾体皂苷提取物的应用，其特征在于所述天冬甾体皂苷提取物在制备防治心脑血管病药物或食品中的应用。