CN1349500A

CN1349500A - 3,3－取代的二氢吲哚衍生物

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Publication number: CN1349500A
Application number: CN00807138A
Authority: CN
Inventors: J·W·乌尔里克; A·芬森; J·E·弗罗贝尔; J·P·爱德华兹; T·K·琼斯; C·M·特格利; 智林
Original assignee: Ligand Pharmaceuticals Inc; American Home Products Corp
Current assignee: Wyeth LLC; Ligand Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1999-05-04
Filing date: 2000-05-01
Publication date: 2002-05-15
Also published as: PT1175397E; AU4806200A; DE60013114D1; EP1175397B1; JP2002543181A; EP1175397A1; DE60013114T2; HK1043986B; CA2371629A1; ES2226838T3; ATE273951T1; HK1043986A1; MXPA01011299A

Abstract

用作黄体酮受体拮抗剂的式(I)的化合物及其药物组合物,其中R₁和R₂是H、OH、OAc、烷芳基、烷杂芳基、1－丙炔基、可任选取代的烷基、O(烷基)、芳基、杂芳基;或R₁和R₂合起来形成环,与CMe₂、C(环烷基)、O、C(环乙醚)的双键;R₃=H、OH、NH₂、COR^A或可任选取代的链烯基或炔基;R^A=H,可任选取代的烷基、烷氧基、氨烷基;R₄=H、卤素、CN、NH₂、可任选取代的烷基、烷氧基、或氨烷基;R₅=可任选取代的苯基、5－或6－元杂环;4－或7－取代的吲哚或取代的苯并噻吩。`

Description

3，3-取代的二氢吲哚衍生物

发明领域

本发明涉及黄体酮受体的拮抗剂、它们的制备和用途。

发明背景

细胞内受体(IR)形成一类结构相关的基因调节剂，称为“配体依赖性转录因子”(R.M.Evans，Science，240，889，1988)。类固醇受体家族是IR家族的一个亚类，包括黄体酮受体(PR)、雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)、糖皮质激素受体(GR)和盐皮质激素受体(MR)。

对PR而言天然激素或配体是类固醇黄体酮，但也合成了化合物如甲羟孕酮醋酸酯或左炔诺孕酮作为配体。一旦细胞周围的液体中存在配体，配体就通过被动扩散穿过膜，并与IR结合产生受体/配体复合物。这种复合物与细胞DNA中存在的特异性基因启动子结合。一旦结合于DNA，该复合物就调节mRNA和该基因编码的蛋白质的产生。

将结合于IR且模拟天然激素作用的化合物称为促效剂，而抑制激素作用的化合物称为拮抗剂。

PR拮抗剂可用于避孕。在这种情况下它们可以单独给予(Ulmann等人，Ann.N.Y.Acad.Sci.，261，248，1995)，也可与PR促效剂联用(Kekkonen等人，Fertilityand Sterility，60，610，1993)或与部分ER拮抗剂(如他莫昔芬)联用(WO 96/19997A1 1996年7月4日)。

PR拮抗剂可以用于治疗激素依赖性乳腺癌(Horwitz等人，Horm.Cancer，283，出版商：Birkhaeuser，Boston，Mass编著Vedeckis)和子宫和卵巢癌。PR拮抗剂还可用于治疗非恶性慢性病如纤维瘤(Murphy等人，J.Clin.Endo.Metab.，76，513，1993)和子宫内膜异位(Kettel等人，Fertility and Sterility，56，402，1991)。PR拮抗剂还可用于激素替代治疗，与部分ER拮抗剂(如他莫昔芬)联用治疗绝经后的患者(US5719136)。已显示在激素依赖性前列腺癌模型中，PR拮抗剂(如米非司酮和奥那司酮)是有效的，表明它们可用于治疗男性的这类疾病(Michna等人，Ann.N.Y.Aead.Sci.，761，224，1995)。

Jones等人(美国专利号5,688,810)描述的化合物是PR拮抗剂二氢喹啉A。Jones等描述了作为PR配体的烯醇醚B(美国专利号5,693,646)。

Jones等人描述了作为PR配体的化合物C(美国专利No.5,696,127)。

Zhi等人描述了作为PR拮抗剂的内酯D、E和F(J.Med.Chem.，41，291，1998)。Zhi等人描述了作为PR拮抗剂的醚G(J.Med.Chem.，41，291，1998)。

Combs等人公开了作为PR配体的酰胺H(J.Med.Chem.，38，4880，1995)。

Perlman等人描述了作为PR配体的维生素D类似物I(Tet.Letters，35，2295，1994)。

Hamann等人描述了PR拮抗剂J(Ann.N.Y.Acad.Sci.，761，383，1995)。

Chen等人描述了PR拮抗剂K(Chen等人POI-37，16^th Int.Cong.Het.Chem.，Montana，1997)。

Kurihari等人描述了PR配体L(J.Antibiotics，50，360，1997)。

Elliott(Smith Kline Beecham)公开了通用的二氢吲哚M作为可能的内皮素受体拮抗剂(WO 94/14434)。该专利未公开二氢吲哚，并缺少合适的5-芳基取代，如CN和NO₂。

R₁，R₁₀，P₁和P₂＝H，1-8 C烷基Phn＝OR₃＝HR₂＝HR₄＝Ar(取代的)

其中：R₄＝H，Ar，R₁₁，OH，1-5C烷氧基(最佳被OH、OMe或卤素取代)，-S(O)qR₁₁，N(R₆)₂，XR₁₁，卤素或NHCOR₆；X＝(CH₂)_n，O，NR₆或S(O)q；n＝0-6q＝0-2；R₆＝H或1-4C烷基；R₁₁＝1-8C烷基，2-8C链烯基或2-8C炔基(全部最佳取代)；Ar＝(i)被苯基或(a)或(b)苯并稠合基团；或(ii)萘基，吲哚基，吡啶基，噻吩基，噁唑啉基，噁唑基，噻唑基，异噻唑基，吡唑基，三唑基，四唑基，咪唑基，咪唑烷基，噻唑烷基，异噁唑基，噁二唑基，噻二唑基、吗啉基，哌啶基，吡咯基或嘧啶基，它们都优选被一个或多个R₁或R₂基团取代。A＝CO或(C(R₆)₂)_m B＝CH₂或O

发明详述

已显示本发明的化合物作为与PR结合的黄体酮的竞争性抑制剂，还在功能模型中，同时/分别在体外和体内作为拮抗剂。可用这些化合物避孕，治疗和/预防纤维瘤，包括子宫纤维瘤、子宫内膜异位、乳腺、子宫、卵巢和前列腺癌，和绝经期后激素代替治疗中。本发明还具体涉及用这些化合物引起避孕与治疗和/或预防良性和恶性肿瘤病。这些疾病可包括但不限于良性前列腺肥大、子宫粘膜、卵巢、乳腺、结肠、前列腺、垂体癌和腺癌，脑膜瘤和其他激素依赖性肿瘤。

本发明的化合物包括式(I)的化合物：

其中：

R₁和R₂各是选自以下的取代基：H、烷基、取代的烷基；OH；O(烷基)；O(取代的烷基)；OAc芳基；可任选取代的芳基；杂芳基；可任选取代的杂芳基；烷芳基；烷基杂芳基；1-丙炔基；或3-丙炔基；

或R₁和R₂合起来形成环，包括下列：-CH₂(CH₂)_nCH₂-；

-CH₂CH₂CMe₂CH₂CH₂-；-O(CH₂)_mCH₂-；O(CH₂)_pO-；-CH₂CH₂OCH₂CH₂-；

-CH₂CH₂N(H或烷基)CH₂CH₂-；

n是0-5的整数；

m是1-4的整数；

p是1-4的整数；

或R₁和R₂一起构成与＝C(CH₃)₂；＝C(C₃-C₆环烷基)、＝O或＝C(环醚)连接的双键，其中环醚选自四氢呋喃基或六氢吡喃基；

R₃是H，OH，NH₂，C₁-C₆烷基，取代的C₁-C₆烷基，C₃-C₆链烯基，炔基或取代的炔基，或COR^A；

R^A是H、C₁-C₃烷基、取代的C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、取代的C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃氨烷基、或取代的C₁-C₃氨烷基；

R₄是H、卤素、CN、NH₂、C₁-C₆烷基、取代的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、取代的C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆氨烷基、或取代的C₁-C₆氨烷基；

R₅选自a)、b)或c)：

a)R₅是如下所示的含有取代基X、Y和Z的三取代苯环：

X选自：卤素、OH、CN、C₁-C₃烷基、取代的C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、取代的C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃烷硫基、取代的C₁-C₃烷硫基、S(O)烷基、S(O)₂烷基、C₁-C₃氨烷基、取代的C₁-C₃氨烷基、NO₂、C₁-C₃全氟烷基、含有1-3个杂原子的5或6元杂环、COR^B、OCOR^B、或NR^CCOR^B；

R^B是H、C₁-C₃烷基、取代的C₁-C₃烷基、芳基、取代的芳基、C₁-C₃烷氧基、取代的C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃氨烷基、或取代的C₁-C₃氨烷基；

R^C是H、C₁-C₃烷基、或取代的C₁-C₃烷基；

Y和Z分别选自以下的取代基包括：H、卤素、CN、NO₂、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃烷基、或C₁-C₃烷硫基；或

b)R₅是5或6元环，含有1、2、或3个选自包括O、S、SO、SO₂或NR₆的杂原子，且含有1或2个各选自以下的独立的取代基包括：H、卤素、CN、NO₂、和C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃氨烷基、COR^D、或NR^ECOR^D；

R^D是H、C₁-C₃烷基、取代的C₁-C₃烷基、芳基、取代的芳基、C₁-C₃烷氧基、取代的C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃氨烷基、或取代的C₁-C₃氨烷基；

R^E是H、C₁-C₃烷基、或取代的C₁-C₃烷基；

R₆是H或C₁-C₃烷基；

或

c)R₅是吲哚-4-基、吲哚-7-基或苯并2-噻吩基，该基团可被1-3个取代基任选取代，这些取代基选自卤素、低级烷基、CN、NO₂、低级烷氧基或CF₃；其中R₆和R₇分别选自H、甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、环己基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基；

或其药物学上可接受的盐。

式II描述了一组优选的本发明化合物：

其中：R₅是如下所示的含有取代基X和Y的二取代苯环：

X选自卤素、CN、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃烷基、NO₂、C₁-C₃全氟烷基、含有1-3个杂原子的5元杂环或C₁-C₃硫代烷氧基；

Y是4′或5′位上的取代基，选自H、卤素、CN、NO₂、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₄烷基或C₁-C₃烷硫基；

或

R₅是具有如下结构的5元环：

U是O、S、或NR₆，R₆是H、或C₁-C₃烷基、或C₁-C₄CO₂烷基；X’选自卤素、CN、NO₂、C₁-C₃烷基或C₁-C₃烷氧基；Y’选自H、F、CN、NO₂或C₁-C₄烷基；或R₅是具有如下结构的6元环：

X¹是N或CX²；

X²是卤素、CN或NO₂

或其药物学上可接受的盐。

本发明的化合物可含有不对称碳原子，且本发明的一些化合物可含有一个或多个不对称中心，并因此可以有光学异构体和非对映体。虽然式I和II并未以立体化学显示，但本发明包括此类光学异构体和非对映体；以及消旋的和拆解的对映体纯R和S立体异构体；以及R和S立体异构体的其他混合物和它们药学上可接受的盐。

本文所用的术语“烷基”指直链或支链饱和的含有1-8个碳原子的脂族烃类基团，优选地为含有1-6个碳原子；“链烯基”包括含有至少一个碳碳双键和2-8个碳原子的直链和支链烃基，较佳地含有2-6个碳原子；“炔基”包括含有至少一个碳碳三键和2-8个碳原子的直链和支链烃基，较佳地含有2-6个碳原子。

术语“取代的烷基”、“取代的链烯基”和“取代的炔基”指被一个或多个选自以下的取代基取代的上述烷基、链烯基和炔基：卤素、CN、OH、NO₂、氨基、芳基、杂环、取代的芳基、取代的杂环、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、芳硫基。这些取代基可连接于烷基、链烯基或炔基基团的任何碳原子上，但条件是这种连接构成稳定的化学部分。

本文的术语“芳基”指芳族体系，可以是单环或稠合的或连接在一起的单或多芳环，从而稠合或连接环的至少一个部分形成共轭的芳系。芳基基团可包括(但不限制于)：苯基、萘基、联苯基、蒽基、四氢萘基、菲基。

术语“取代的芳基”指被1-4个选自以下的基团取代的上述芳基：卤素、CN、OH、NO₂、氨基、烷基、环烷基、链烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基或芳硫基。

本文所用的术语“杂环”指稳定的4-到7-元单环或稳定的多环杂环，可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的，且由碳原子和选自以下的1-4个杂原子构成：N、O和S原子。N和S原子可以被氧化。杂环还可包括任何多环，其中任一上述杂环可稠合于芳环。该杂环可连接于任何杂原子或碳原子，但所生成的结构必须是化学稳定的。这些杂环包括如四氢呋喃、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌啶基、吖庚因基、吡咯烷基、咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、噁唑基、异噁唑基、吗啉基、吲哚基、喹啉基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜和异喹啉基。

本文所用的术语“取代的杂环”指被以下1-4个取代的取代基上述杂环：卤素、CN、OH、NO₂、氨基、烷基、取代的烷基、环烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基、或芳基硫。本文所用的术语“烷硫基”指SR基团，其中R是含有1-8个碳原子的烷基或取代的烷基。本文所用的术语“烷氧基”指OR基团，其中R是含有1-8个碳原子的烷基或取代的烷基。本文的术语“芳氧基”指OR基团，其中R是如上定义的芳基或取代的芳基。本文的术语“烷基羰基”指RCO基团，其中R是烷基或取代的烷基，含有1-8个碳原子，优选1-6个碳原子。本文的术语“烷基羧基”指COOR基团，其中R是烷基或取代的烷基，含有1-8个碳原子，优选1-6个碳原子。术语“氨烷基”指仲胺或叔胺，其中烷基或取代的烷基含有1-8个碳原子，可以是相同的或不同的，且连接点是在氮原子上。术语“卤素”指Cl、Br、F或I。

本发明的化合物可以由药学上或生理学可接受的酸或碱衍生的盐形式使用。这些盐包括(但不限制于)与如下无机酸形成的盐：如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸，有机酸则指乙酸、草酸、丁二酸和顺丁烯二酸。其他盐包括与碱金属或碱土金属的盐，如钠、钾、钙或镁，乙酯、氨基甲酸酯或其他常规的“前体药物”的形式(当给予这种形式时，在体内可转化成活性部分)。

本发明包括含有本发明的一种或多种化合物和药物学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。本发明还包括治疗方法，包括施给哺乳动物药物有效量的如上所述的一种或多种化合物，作为黄体酮受体的拮抗剂。

单用或联用本发明的黄体酮受体拮抗剂，可用于避孕和治疗和/或预防良性和恶性肿瘤的方法中。本发明的化合物和组合物的特别用途包括治疗和/或预防子宫肌层纤维瘤、子宫内膜异位、良性前列腺肥大；子宫粘膜、卵巢、乳腺、结肠、前列腺、垂体癌和恶性腺癌，脑膜瘤和其他激素依赖性肿瘤。本发明黄体酮受体拮抗剂的其他用途包括家畜发情的同步化。

当本发明的化合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合，如溶剂、稀释剂等，而且可以如下形式口服给药：片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬液(含有如约0.05-5％悬浮剂)、糖浆(含有如10-50％糖)、和酏剂(含有约20-50％乙醇)等，或以无菌可注射溶液或悬液形式(在等渗介质中含有约0.05-5％悬浮剂)肠胃外给药。这些药物制剂可含有如与载体混合的约25-90％活性成分，更通常约为5％-60％(重量)间。

所用的活性成分的有效剂量可按所用的化合物、给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而不同。但通常当本发明的化合物每天以约0.5-500mg/kg动物体重的剂量给予时能得到令人满意的效果，较佳地每天以2-4次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为1-100mg，较佳地约为2-80mg。适用于内服的剂量形式包括约0.5-500mg的活性化合物，与固态或液态药学上可接受的载体精细混合。可调节此剂量以得到最佳治疗应答。例如，由治疗状况的需要可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。

可通过口服以及静脉内、肌内或皮下途径给予这些活性化合物。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适应于活性成分的特性和所需的给药形式。可以有利地包含在制备药物组合物中通常使用的佐剂包括如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。

从易于制备和给药来看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和硬填充的或充液的胶囊。化合物的口服给药是优选的。

这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性化合物(游离碱或药学上可接受的盐)的溶液或悬液。还可在甘油、液体聚乙二醇和它们在油中的混合物中制备分散液。在普通储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物生长。

适应于注射的药物形式包括无菌水溶液或分散液和无菌粉(用于临时制备无菌注射溶液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器的使用。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能抵抗微生物(如细菌和真菌)的污染影响。载体可以是溶剂或分散介质，含有如水、乙醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、它们的适当混合物和植物油。

可按如下流程制备本发明的化合物：

如流程I所示，通常本发明的化合物可用适当的偶联反应以趋同方式制备。例如，使芳基卤与芳基硼酸在钯介导下偶联得到所要的二-芳基取代的目标。芳基卤-芳基硼酸组合的选择是通过实验建立的。

流程1

如流程2中所述，本发明化合物“右侧”可通过Letcher，R.M.等，J.Chem.Soc.Perkin TR^Ans，1：939-944，1993中所述的方法制备。

流程2

例如，右侧模板2是通过使合适取代的苯肼和合适的酮缩合，得到相应的腙。将该物质在回流的乙酸中环化成亚胺，然后还原成所需的二氢吲哚模板2。通过该途径用合适的酮制备了实施例1-7和10-20。

如流程3中所述制备了其他右侧模板。用合适的碱和相应的烷基卤在C-3二烷基化商品购得的羟吲哚，得到3，3-二烷基-羟吲哚、8、或螺环羟吲哚9。然后在标准条件下溴化这些羟吲哚，用氢化物介导的还原将羰基还原成所需的亚甲基。芳基偶联和2-位羰基的还原时间通过实验建立。流程3

用合适的钯(0)催化剂，流程4偶联右侧的模板和合适的芳基硼酸。例如，在标准Suzuki条件下偶联化合物10和合适的取代的芳基硼酸得到化合物11。

流程4

本发明的化合物是稳定的半固体，可通过用酸处理方便的转化成其相应的盐。当用HCl在二噁烷中处理实施例1，化合物11(R₁＝R₂＝R₃＝Me)时得到白色固态的HCl盐(实施例2)。可将旋光性二氢吲哚用手性HPLC分离成对映体，得到各对映体＞98％EE。

本发明可用下列非限制性实施例进一步理解。

实施例1

2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚-5-溴-2，3，3-三甲基-2，3-二氢-

1H-吲哚

用Leteher，R.M.等，J.Chem.Soc.Perkin TRAns，1：939-944，1993的方法制备了该化合物。

在4-溴-苯肼盐酸盐(2.59克，11.6毫摩尔)和3-甲基-2-丁酮(1.0克，11.6毫摩尔)的20毫升苯的溶液中加入乙酸(催化量)，共沸回流得到的溶液14小时，除去H₂O。将得到的混合物冷却至室温并浓缩。用乙酸抽提得到的半固体，回流12小时。将反应混合物冷却至室温并浓缩。用乙醚抽提半固体剩余物，用K₂CO₃中和。干燥乙醚层并浓缩。将得到的固体亚胺溶于THF-MeOH(6∶1)，冷却至0℃，加入硼氢化钠(0.5克，13.2毫摩尔)。使溶液温至室温，搅拌0.5小时。将反应混合物倒入15％盐酸水溶液中，用K₂CO₃碱化。分离有机层，用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)并浓缩。用柱层析(SiO₂，己烷-乙酸乙酯9∶1)纯化粗产物。分离出橙色液态产物(2.1克，75％)：¹H-NMR(CDCl₃)δ1.03(s，3H)，1.15(d，J＝6.6Hz，3H)，1.25(s，3H)，3.50(q，J＝6.6Hz，1H)，3.70(br.s，1H)，6.45(d，J＝8.7Hz，1H)，7.09(m，2H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ15.10，22.25，26.11(q)，43.72(s)，65.47(d)，110.32(s)，110.70，125.47，129.75(d)，141.48，148.33(s)；MS(EI)m/z 240，242(M+H)⁺。

5-溴-2，3，3-三甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(0.5克，2.1毫摩尔)和四-(三苯膦)合钯(0.14克，0.12毫摩尔)的二甲氧基乙烷(10毫升)在N₂-真空下循环(4x)，然后在N₂下搅拌0.5小时。然后在该混合物中加入3-硝基苯基硼酸(0.42克，2.5毫摩尔)，然后是Na₂CO₃(0.36克，3.4毫摩尔)的5毫升水溶液，在N₂-真空中循环(3x)。回流溶液6小时，然后冷却至室温，倒入水中，用EtOAc抽提。用水、盐水洗涤合并的有机抽提物，干燥(Na₂SO₄)并蒸发。用柱层析(SiO₂，二氯甲烷∶己烷1∶3)纯化残余物得到橙色半固体标题化合物(0.48克，82％)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.12(s，3H)，1.21(d，J＝6.6Hz，3H)，1.35(s，3H)，3.60(q，J＝6.6Hz，1H)，3.9(br s，1H)，6.69(d，J＝7.9Hz，1H)，7.28-7.29(m，2H)，7.32(d，J＝1.9Hz，1H)，7.53(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，7.85(ddd，J＝7.9，2.0，2.0Hz，1H)，8.07(ddd，J＝7.9，2.0，2.0Hz，1H)，8.08(d，J＝7.9Hz，1H)，8.39(dd，J＝2.0，2.0Hz，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ15.27，22.54，26.39(q)，43.53(s)，65.57(d)，109.48，120.67，121.04，121.10，126.58(d)，129.15(s)，129.53，132.35(d)，140.18，143.64，148.78，150.11(s)；MS(EI)m/z 283(M+H)⁺。

实施例2

2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚盐酸盐

用1.5毫升4M HCl/二噁烷溶液在室温下处理2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚(0.8克，2.79毫摩尔)的20毫升1∶1乙醚∶二噁烷溶液。过滤分离得到的固体并用己烷洗涤，得到褐色固态标题化合物(0.81克，90％)：熔点240-241℃；¹H-NMR(CDCl₃)δ1.37(s，3H)，1.51(s，3H)，4.01(d，J＝6.5Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.59(d，J＝7.3Hz，1H)，7.7(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，7.8(d，J＝7.9，Hz，1H)，7.89(d，J＝7.7Hz，1H)，8.3(dd，J＝7.9，1.8Hz，1H)，8.42(s，1H)，11.9 (br s.2H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ；MS(EI)m/z 283(M+H)⁺。

实施例3

(2-R或S)-2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚和

实施例4

(2-S或R)-2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚

用手性制备级HPLC[柱：Chiralcel OD，4.6×250毫米，isocratic，5∶95 IPA∶己烷，流速＝1毫升/分钟；注射体积＝5微升；保持时间：3，9.2分钟和4，10.39分钟]分离实施例2中制备的旋光2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚(25毫克)，得到橙色半固态的对映体3和4。手性分析HPLC确定对映体具有＞99％的EE。实施例3和4具有与旋光物质实施例1相同的光谱数据：¹H-NMR(CDCl₃)δ1.12(s，3H)，1.21(d，J＝6.6Hz，3H)，1.35(s，3H)，3.60(q，J＝6.6Hz，1H)，3.9(br s，1H)，6.69(d，J＝7.9Hz，1H)，7.28-7.29(m，2H)，7.32(d，J＝1.9Hz，1H)，7.53(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，7.85(ddd，J＝7.9，2.0，2.0Hz，1H)，8.07(ddd，J＝7.9，2.0，2.0Hz，1H)，8.08(d，J＝7.9Hz，1H)，8.39(dd，J＝2.0，2.0Hz，1H)；MS(EI)m/z 283(M+H)⁺。

实施例5

2，3，3-二乙基-2-甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚-5-溴-3，3-二乙基-2-甲基-2，3-二氢-1H-吲哚

根据实施例1的方法，用4-溴-苯肼盐酸盐(5.9克，26.3毫摩尔)和3-乙基-2-戊酮(3.0克，26.3毫摩尔)制备了化合物。获得了产率为65％的浅黄色油状副标题化合物(4.5克)：¹H-NMR(CDCl₃)δ0.81(t，J＝7.4Hz，3H)，0.83(t，J＝7.4Hz，3H)，1.18(d，J＝6.5Hz，3H)，1.42(dq，J＝14.0，7.4Hz，1H)，1.66(dq，J＝14.0，7.4Hz，3H)，3.73(q，J＝6.5Hz，1H)，6.47(d，J＝8.2Hz，1H)，7.02(d，J＝2Hz，1H)，7.09(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ10.46，10.66，17.70(q)，26.5，29.67(t)，52.25(s)，64.80(d)，111.64(s)，112.41，129.07，131.58(d)，139.57，151.04(s)；MS(EI)m/z268，270(M+H)⁺。

用实施例1中提供的标准偶联条件，从5-溴-3，3-二乙基-2-甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(0.13克，0.45毫摩尔)、四-(三苯膦)合钯(0.05克，0.04毫摩尔)的二甲氧基乙烷(4毫升)溶液和3-硝基苯基硼酸(0.09克，0.54毫摩尔)和碳酸钠(0.15克，4.95毫摩尔)的2毫升水溶液反应制备了标题化合物。获得红棕色玻璃状标题化合物：¹HNMR(CDCl₃)δ0.86(dt，J＝4.0，4.0Hz，3H)，0.88(dt，J＝4.0，4.0Hz，3H)，1.24(d，J＝6.6Hz，3H)，1.5(dq，J＝14.1，7.3Hz，1H)，1.66-1.84(m，3H)，3.81(q，J＝6.6Hz，1H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H)，7.20(d，J＝1.9Hz，1H)，7.32(dd，J＝8.0，1.9Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.85(dd，J＝7.9，1.1Hz，1H)，8.09(dd，J＝7.9，1.1Hz，1H)，8.4(dd，J＝1.9Hz，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ8.99，9.14，16.24(q)，24.87，28.14(t)，50.30(s)，63.31(d)，109.56，120.80，121.22，123.19，126.76(d)，128.64(s)，129.67，132.55(d)，136.5，143.92，148.95，151.07(s)；MS(EI) m/z 310(M)⁺。

实施例6

4a-甲基-6-(3-硝基-苯基)-2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-咔唑

6-溴-4a-甲基-2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-咔唑

用实施例1的方法，用4-溴-苯肼乙酸乙酯(2.0克，8.95毫摩尔)和2-甲基环己酮(1.0克，8.95毫摩尔)制备了该化合物。获得黄色油状的亚标题化合物(1.5克，65％)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.26(s，3H)，1.38-1.46(m，4H)，1.56-1.68(m，4H)，3.4(t，J＝4.4Hz，1H)，3.6(br s，1H)，6.53(d，J＝8Hz，1H)，7.08(d，J＝2.0Hz，1H)，7.09(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ21.45，21.87(t)，23.96(q)，27.92，35.32(t)，43.56(s)，66.65(d)，110.73(s)，111.88，125.25，129.99(d)，142.17，149.03(s)；MS(EI) m/z268，270(M+H)⁺。

用实施例1中给出的标准偶联条件，用6-溴-4a-甲基-2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-咔唑(1.6克，6.0毫摩尔)、四(三苯膦)合钯(0.4克，0.35毫摩尔)的二甲氧基乙烷(30毫升)溶液与3-硝基苯基硼酸(1.2克，7.2毫摩尔)和碳酸钠(1.9克，18毫摩尔)在10毫升水中制备了标题化合物。获得了橙色泡沫状纯产物(1.2克，70％)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.36(s，3H)，1.44-1.74(m，8H)，3.49(t，J＝4.4Hz，1H)，3.83(br s，1H)，6.75(d，J＝8.0Hz，1H)，7.26(d，J＝1.9Hz，1H)，7.32(dd，J＝8.0，1.9Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.86(d，J＝7.8Hz，1H)，8.08(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，8.39(dd，J＝2.0，2.0Hz，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ 21.27，21.71(t)，23.87(q)，27.76，35.29(t)，43.06(s)，66.46(d)，110.41，120.57，120.83，121.24，126.55(d)，129.26(s)，129.68，132.55(d)，140.66，143.86，148.95，150.51(s)；MS(EI) m/z 309 (M+H)⁺。

实施例7

1，2-二氢-2-甲基-5-(3-硝基-苯基)螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]

5-溴-1，2-二氢-2-甲基螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]

用实施例1中的条件，用4-溴-苯肼HCl(3.5克，15.7毫摩尔)和环己基甲基酮(2.0克，15.7毫摩尔)制备了亚标题化合物。获得了油状纯物质(3.0克，68％)：¹HNMR(CDCl₃)δ1.09(d，J＝6.5Hz，3H)，1.25-1.73(m，10H)，3.45(br s，1H)，3.71(q，J＝6.5Hz，1H)，6.47(d，J＝8.2Hz，1H)，7.09，dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，7.19(d，J＝2.0Hz，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ17.22(q)23.19，23.44，26.16，30.17，36.70(t)47.99(s)，62.34(d)，110.08(s)，111.07，126.83，130.08(d)，139.98，148.49(s)；MS(EI)m/z 280，282(M+H)⁺。

用实施例1中给出的标准偶联条件，用5-溴-1，2-二氢-2-甲基螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚](0.5克，1.65毫摩尔)、四(三苯膦)合钯(0.08克，0.07毫摩尔)的二甲氧基乙烷(5毫升)溶液与3-硝基苯基硼酸(0.33克，1.98毫摩尔)和碳酸钠(0.53克，4.95毫摩尔)在5毫升水中制备了标题化合物。获得了橙棕色半固态纯产物(0.35克，55％)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.16(d，J＝6.4Hz，3H)，1.38-1.83(m，10H)，3.7(br s，1H)，3.8(q，J＝6.4Hz，1H)，6.69(d，J＝8.0Hz，1H)，7.31(dd，J＝8.0，1.8Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.86(d，J＝7.3Hz，1H)，8.09(d，J＝8.0Hz，1H)，8.39(dd，J＝1.9，1.9Hz，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ17.45(q)，23.32，23.70，26.21，30.31，37.07(t)，47.77(s)，62.11(d)，109.81，120.78，121.23，122.40，126.92(d)，128.96(s)，129.66，132.51(d)，138.63，143.92，148.94，150.1(s)；MS(EI)m/z 322 (M)⁺。

实施例8

3，3-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚(WAY-160655)

3，3-二甲基-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮

用A.Kende，Synth.Commun.，1：12(1982)所述的通用方法制备了该化合物。柱层析(SiO₂，二氯甲烷∶己烷1∶3)纯化粗物质得到副标题化合物，与报道的光谱数据一致。

在乙酸(5.0毫升)中搅拌上述羟吲哚(0.65克，4.03毫摩尔)和乙酸钠(0.334克，4.07毫摩尔)。在反应混合物中滴加溴(0.66克，0.00413摩尔)的乙酸(5.0毫升)溶液。搅拌反应物50分钟，然后倒入水(10毫升)中。用碳酸钠碱化混合物，用乙酸乙酯抽提，干燥(MgSO₄)，过滤，并蒸发得到5-溴-1，3-二氢-3，3-二甲基-2H-吲哚-2-酮(0.89克，92％)：¹H NMR(DMSO-d₆)1.21(s，6H)，6.76(d，J＝8.22Hz，1H)，7.29(dd，J＝2.1，8.2Hz，1H)，7.49(d，J＝2.0Hz，1H)，10.4(s，1H)。

在5-溴-1，3-二氢-3，3-二甲基-2H-吲哚-2-酮(0.9克，3.7毫摩尔)的20毫升THF溶液中，在0℃加入硼烷-甲基硫复合物(2M的THF溶液，38毫升，75毫摩尔)。反应混合物温至室温后使之回流4小时。冷却混合物至室温，倒入H₂O/CH₂Cl₂中，用5％NaHCO₃洗涤。用盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)并浓缩。用MeOH抽提粗产物，加入三甲胺N-氧化物(2.0克，26.6毫摩尔)，溶液回流2小时。冷却反应混合物，浓缩并柱层析(SiO₂，二氯甲烷)纯化粗剩余物，得到黄色油状的5-溴-3，3-二甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(0.074克，87％)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.29(s，6H)，3.30(s，2H)，3.5(br s，1H)，6.49(d，J＝8.8Hz，1H)，7.08-7.12(m，2H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ27.69(q)，42.21(s)，62.01(d)，110.38(s)，111.09，125.46，130.09(d)，141.03，149.52(s)；MS(EI)m/z 225，227(M)⁺。

用实施例1中给出的标准偶联条件，用5-溴-3，3-二甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(0.25克，1.1毫摩尔)、四(三苯膦)合钯(0.08克，0.07毫摩尔)的二甲氧基乙烷(5毫升)溶液与3-硝基苯基硼酸(0.22克，1.3毫摩尔)和碳酸钠(0.35克，3.3毫摩尔)在5毫升水中制备了标题化合物。获得了棕色半固态标题化合物(0.17克，60％)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.38(s，3H)，3.40(s，2H)，6.72(d，J＝8.0Hz，1H)，7.29-7.34(m，2H)，7.54(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.86(d，J＝7.8Hz，1H)，8.09(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，8.40(dd，J＝2.0，2.0Hz，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ27.89(q)，41.93(s)，62.05(d)，109.78，120.87，121.02，121.23，126.87(d)，129.19(s)，129.69，132.52(d)，139.64，143.75，148.94，151.17(s)；MS(EI)m/z 268 (M)⁺。

实施例9

5′-(3-氯苯基)-1′，2′-二氢螺[环己烷-1，3′-[3H]吲哚]

螺[环己烷-1，3′-[3H]吲哚-2′-(1′H)酮]

将羟吲哚(25克，190毫摩尔)的800毫升无水THF溶液冷却至-20℃，缓慢加入正丁基锂(2.5M的己烷溶液，152毫升，0.38摩尔)，然后加入N，N，N′，N′-四亚甲基二胺(51毫升，0.38摩尔)。15分钟后，缓慢加入1，5-二碘戊烷(174克，0.54摩尔)，将混合物温至室温。搅拌16小时后，加入饱和氯化胺水溶液(1升)和乙酸乙酯(1升)。15分钟后，分离各层，用乙酸乙酯抽提水相。用盐酸(1N，500毫升)抽提合并的有机层，用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，浓缩获得油。用己烷(200毫升)和苯(20毫升)研磨油。收集沉淀，真空干燥得到无色晶状螺[环己烷-1，3′-[3H]吲哚]-2′-(1′H)酮(26.3克，69.6％)：熔点110-114℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.67(m，10H)，6.84(d，1H，J＝8Hz)，6.94(t，1H，J＝8Hz)，7.17(t，1H，J＝8Hz)，7.44(d，1H，J＝8Hz)，10.3(s，1H)。

在上述羟吲哚(17.6克，90.0毫摩尔)的乙酸(300毫升)溶液中一边搅拌一边加入乙酸钠(8.0克，100.0毫摩尔)和溴(14.6克，91.0毫摩尔)。室温下30分钟后，在水和乙酸乙酯之间分配反应混合物。用乙酸乙酯抽提水相。用水洗涤合并的有机层，干燥(MgSO₄)并蒸发。用己烷研磨剩余物。收集沉淀，真空干燥得到米色晶状5-溴-螺[环己烷-1，3’-[3H]吲哚]-2’(1’H)-酮(16.5克，67％)：熔点196-199℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.62(m，10H)，6.8(d，1H，J＝6.8Hz)，7.36(d，1H，J＝8.2，1.8Hz)，7.58(dd，1H，J＝8.2，1.8Hz)，10.44(s，1H)。

用实施例1中给出的标准偶联条件，用上述溴-羟吲哚(0.32克，1.14毫摩尔)、四(三苯膦)合钯(0.08克，0.07毫摩尔)和3-氯苯基硼酸(0.21克，1.37毫摩尔)和碳酸钠(0.36克，3.4毫摩尔)的水溶液(3毫升)制备了标题化合物。获得了黄色固态的5-(3-氯苯基)-螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]-2(1H)-酮(0.28克，80％)：熔点164-165℃；¹H NMR(CDCl₃)δ1.60-1.78(m，6H)，1.81-1.99(m，4H)，7.04(d，J＝8.1Hz，1H)，7.22-7.47(m，4H)，7.53(s，1H)，7.61(s，1H)，9.28(br s，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ20.17，24.12，31.92(t)，47.22(s)，109.21，121.94，124.06，125.50，125.79，125.97，126.38，128.96(d)，132.88，133.59，135.60，139.14，142.17，182.89(s)；MS(EI)m/z 310，312(M-H)⁺。

在5-(3-氯苯基)-螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]-2(1H)-酮(0.42克，1.4毫摩尔)的20毫升THF溶液中，在0℃加入硼烷-二甲基硫复合物(2M的THF溶液，14毫升，28毫摩尔)。将反应混合物温至室温，然后回流4小时。将混合物冷至室温，与CH₂Cl₂一起倒入H₂O中，用5％NaHCO₃洗涤。用盐水洗涤有机层，干燥(Na₂SO₄)并浓缩。用MeOH抽提粗产物，加入三甲胺N-氧化物(1.0克，9.0毫摩尔)。回流溶液2小时，冷却混合物，浓缩并用柱层析(SiO₂，二氯甲烷)纯化粗剩余物，得到黄色油状标题化合物(0.25克，63％)：¹H NMR(CDCl₃)δ1.3-1.55(m，3H)，1.6-1.85(m，7H)，3.1(br s，1H).3.5(s，2H)，6.6(d，J＝8.0Hz，1H)，7.18-7.32(m，4H)，7.4(dd，J＝7.7，1.5Hz，1H)，7.5(s，1H)；¹³C-NMR(CDCl₃)δ23.65，26.24，37.00(t)，46.58(s)，57.49(t)，109.95，121.82，125.07，126.36，126.98，127.08，130.29(d)，130.64，134.91，139.65，144.29，151.09(s)；MS(EI)m/z 298，300(M+H)⁺。

实施例10

3-(2′，3′，3′-三甲基-2′，3′-二氢-1H-吲哚-5′-基)苄腈

在5-溴-2，3，3-三甲基-2，3-二氢-1H-吲哚(2.03克，8.45毫摩尔)的二甲氧基乙烷(50毫升)溶液中，在氮气下加入四(三苯膦)合钯(0.47克，0.4毫摩尔)。室温20分钟后，加入3-甲酰基苯基硼酸(2.36克，16.4毫摩尔)和碳酸钾(6.80克，55毫摩尔)的水(25毫升)溶液，回流加热混合物。2小时后，冷却混合物，倒入盐水并用EtOAc(x2)抽提。用盐水洗涤合并的有机抽提物。干燥(MgSO₄)并蒸发。然后柱层析剩余物(SiO₂，EtOAc∶己烷，1∶8)得到3-(2′，3，3′-三甲基-2′-3-二氢-1H-吲哚-5′-基)苯甲醛(0.96克，3.62毫摩尔，43％)的稍有杂质的固体，不经进一步纯化使用：¹HNMR(CDCl₃)δ1.11(s，3H)，1.22(d，3H，J＝6.5Hz)，1.35(s，3H)，3.59(dd，1H，J＝13，7Hz)，6.69(d，1H，J＝1Hz)，7.25(s，1H)，7.32(s，1H)，7.55(t，1H，J＝7.6Hz)，7.80(d，1H，J＝1Hz)，7.82(d，1H，J＝1Hz)，8.05(s，1H)，10.07(s，1H)。

在上述化合物(0.96克，3.62毫摩尔)的MeCN/H₂O(20毫升，95∶5)的溶液中加入羟胺盐酸盐(0.82克，7.25毫摩尔)。1小时后，将混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液中，用EtOAc抽提(x2)。用水洗涤合并的有机抽提物，干燥(MgSO₄)并蒸发。然后将剩余物溶于二氯甲烷(20毫升)中，用亚硫酰氯(0.53毫升，7.25毫摩尔)处理。16小时后，用饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应并浓缩，在水和EtOAc之间分配，并用EtOAc重新抽提。用盐水洗涤合并的有机抽提物，干燥(MgSO₄)并蒸发。用柱层析(EtOAc∶己烷，1∶8)纯化得到黄色油(0.31克)，将其溶于甲醇(5毫升)并用醚氯化氢(1M，1.3毫升，1.3毫摩尔)处理并蒸发。用MeOH/Et₂O重结晶得到标题化合物(0.20克，0.60毫摩尔，18％)：熔点＞235℃(分解)，¹H NMR(CDCl₃)δ1.57(s，3H)，1.36(d，3H，J＝6.7Hz)，1.40(s，3H)，3.72-3.76(m，1H)，7.30(d，1H，J＝8Hz)，7.67(t，2H，J＝7Hz)，7.79-7.84(m，2H)，8.03(d，1H，J＝8Hz)，(8.2，s，1H)；MS(EI)m/z 262(M)⁺。

实施例11-药理学

如下在体外和体内试验中评估了本发明化合物的生物活性。体外效能在0.01nM-10,000nM之间，体内效能在1微克/公斤-100毫克/公斤范围内。

A.体外生物学

通过以下方法测定体外生物学：(1)竞争性放射性配体结合：用带有黄体酮作为放射性配体的A型人黄体酮受体；(2)共转染试验，可提供以促效剂EC₅₀和拮抗剂IC₅₀值表达的功能性活力；(3)T47D细胞增殖，这是提供促效剂和拮抗剂数据的另一种功能性试验。

1.hPR结合试验：参考Pathirana，C.；Stein，R.B.；Berger，T.S.；Fenical，W.；Ianiro，T.；Mais，D.E.；Torres，A.；Glodman，M.E.，“来自海藻cymoplia barbata的非甾类人黄体酮受体调制剂”，J.Steroid Biochem.Mol.Biol.，1992，41，733-738进行。

2.CV-1细胞中的PRE-荧光素酶试验

本试验的目的是基于化合物在用人PR和PRE-荧光素酶质粒共转染的CV-1细胞中对PRE-荧光素酶报道分子活性的影响，确定化合物的促孕或抗孕效果。本试验中所用的材料如下：

a.培养基：生长培养基如下：含有10％(v/v)胎牛血清(热灭活)、0.1mM MEM非必需氨基酸、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的DMEM(Bio Whittaker)。试验培养基如下：含有10％(v/v)活性炭解吸的胎牛血清(热灭活)、0.1mM MEM非必需氨基酸、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的无酚红DMEM(Bio Whittaker)。

b.细胞的培养、转染、处理和荧光素酶试验

将CV-1细胞原液维持在生长培养基中。用1.2×10⁷个细胞、5mg pLEM质粒(在Sph1和BamH1位点插入hPR-B)、10mg pGL3质粒(在荧光素酶序列上游有两个PRE)，和50mg超声处理过的小牛胸腺DNA作为载体DNA(250ml)，进行共转染。

用Biorad Gene Pulser II在260V和1,000mF进行电穿孔。电穿孔后，将细胞重悬浮于生长培养基，并在96孔板上以40,000个细胞/孔(200μl)接种。培养过夜后，将培养基换成试验培养基。然后在试验培养基中用对照或测试化合物处理这些细胞。在3nM黄体酮的存在下测定化合物的抗孕活性。处理24小时后，弃去培养基，用D-PBS(GIBCO，BRL)洗涤这些细胞3次。各孔加入50μl细胞裂解缓冲液(Promega，Madison，WI)，平板在滴定平板振荡器(LabLine Instrument，Inc)上振荡15分钟。用Promega的荧光素酶试剂测定荧光素酶的活性。

c.结果分析

各种处理重复至少4次。用对数换算的数据分析匹配于促效剂和拮抗剂模式的方差和非线性剂量应答曲线。用Huber加权法降低非正常值(outlier)的影响。用重新换算的数值计算EC₅₀或IC₅₀。在方差和非线性应答分析的两个单向分析中，使用JMP软件(SAS Institute，Inc.)。

d.对照化合物

黄体酮和曲美孕酮(trimegestone)作为对照孕激素，RU486作为对照抗孕激素。所有对照化合物都在全剂量应答曲线中进行试验，并计算EC₅₀或IC₅₀值。

表1.三个独立研究中对照孕激素的预计EC₅₀、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)

EC50 95％CI

化合物实验 (nM) SE 下限上限

黄体酮 1 0.616 0.026 0.509 0.746

2 0.402 0.019 0.323 0.501

3 0.486 0.028 0.371 0.637

曲美孕 1 0.0075 0.0002 0.0066 0.0085

酮

2 0.008 10.0003 0.0070 0.0094

3 0.0067 0.0003 0.0055 0.0082

表2.三个独立研究中抗孕激素RU486的预计IC₅₀、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)

IC50 95％CI

化合物实验 (nM) SE 下限上限

RU486 1 0.028 0.002 0.019 0.042

2 0.037 0.002 0.029 0.048

3 0.019 0.001 0.013 0.027

促孕活性：与对照载体相比，使PRE-荧光素酶活性显著增加(p＜0.05)的化合物认为是有活性的。

抗孕活性：显著降低3nM黄体酮诱导的PRE-荧光素酶的活性(p＜0.05)的化合物。

EC₅₀：能增加PRE-荧光素酶活性最大值的一半活性时，化合物的浓度(默认为“nM”)及标准偏差。

IC₅₀：能降低3nM黄体酮诱导的PRE-荧光素酶活性最大值的一半活性时，化合物的浓度(默认为“nM”)及标准偏差。

3.T47D细胞的增殖实验

本实验的目的是用T47D细胞的细胞增殖实验来测定促孕和抗孕的效力。测定化合物对T47D细胞中DNA合成的作用。以下为本实验所用的材料和方法：

a.生长培养基：补充有10％(v/v)胎牛血清(未加热灭活)、100U/ml青霉素、100mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的DEME∶F12(1∶1)(GIBCO，BRL)。

b.处理培养基：补充有0.5％活性炭解吸的胎牛血清、100U/ml青霉素、200mg/ml链霉素和2mM GlutaMax(GIBCO，BRL)的无酚红的极限必需培养基(MEM)(#51200-038 GIBCO，BRL)。

c.细胞培养

将T47D细胞原液维持在生长培养基中。对BrdU掺入实验而言，将细胞以10,000个细胞/孔的量(在生长培养基中)将细胞置于96孔板(Falcon，BectonDickinson Labware)中。培养过夜后，将培养基换成处理培养基，在处理前再培养这些细胞24小时。将化合物原液溶解于适当的载体(100％乙醇或50％乙醇/50％DMSO)中，然后用处理培养基稀释，加给细胞。孕激素和抗孕激素对照化合物均以全剂量-响应曲线方式进行试验。载体的终浓度为0.1％。在对照孔中，细胞仅接受载体。在0.03nM曲美孕酮(对照孕激素促效剂)存在下测定抗孕激素。处理24小时后，弃去培养基，用10mM BrdU(Amersham Life Science，Arlington Heights，IL)在处理培养基中标记细胞4小时。

d.细胞增殖实验

当BrdU标记结束时，弃去培养基，按供应商的说明，用细胞增殖ELISA试剂盒(#RPN 250，Amersham Life Science)测定BrdU的掺入。简而言之，将细胞在含有固定剂的乙醇中固定30分钟，然后在封阻缓冲液中培养30分钟以降低背景。将过氧化物酶标记的抗BrdU抗体加到孔中，培养60分钟。用PBS漂洗细胞3次，用3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)底物培养10-20分钟(取决于所测试的化合物的效力)。然后在各孔中加入25μl 1M硫酸以终止此显色反应，5分钟内在450nm处用平板读数仪读取光密度。

e.结果分析

平方根换算的数据，用于分析匹配于促效剂和拮抗剂模式的方差和非线性剂量应答曲线。用Huber加权法降低非正常值的影响。由重新换算的数值计算EC₅₀或IC₅₀。在方差和非线性剂量应答分析的单剂量和剂量应答分析中，使用JMP软件(SAS Institute，Inc.)。

f.对照化合物

曲美孕酮和甲羟孕酮醋酸酯(MPA)作为对照孕激素，RU486作为对照抗孕激素。所有对照化合物以全剂量应答曲线方式进行试验，并计算EC₅₀或IC₅₀值。

表3.各研究中的预计EC₅₀、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)

EC₅₀ 95％CI

化合物实验 (nM) SE 下限上限

曲美孕酮 1 0.01 0.00 0.00 0.04

7 3 7 0

2 0.014 0.001 0.01 10.017

3 0.019 0.001 0.016 0.024

MPA 1 0.019 0.001 0.013 0.027

2 0.017 0.001 0.011 0.024

表4.抗孕激素RU486的预计IC₅₀、标准偏差(SE)和95％置信区间(CI)

IC50 95％CI

化合物实验 (nM) SE 下限上限

RU486 1 0.011 0.001 0.008 0.014

2 0.016 0.001 0.014 0.020

3 0.018 0.001 0.014 0.022

EC₅₀：能增加BrdU掺入量最大值一半时化合物的浓度和标准偏差；

IC₅₀：能使0.1曲美孕酮诱导的BrdU掺入量减少最大值一半时化合物的浓度和标准偏差。

本发明将上述所有应用的出版物都纳入作为参考。预期本发明中包含于上述说明书的许多改良及变化对于本领域技术人员来说是明显的。更相信本发明中的这些方法、溶液和仪器的改变和变化是属于本发明所附的范围内的。

Claims

1.一种化合物，其特征在于，该化合物具有式：

其中：

R₁和R₂各是选自以下的取代基：H、烷基、取代的烷基；OH；O(烷基)；O(取代的烷基)；OAc；芳基；可任选取代的芳基；杂芳基；可任选取代的杂芳基；烷芳基；烷基杂芳基；1-丙炔基；或3-丙炔基；

或R₁和R₂合起来形成环，包括：-CH₂(CH₂)_nCH₂-；-CH₂CH₂CMe₂CH₂CH₂-；-O(CH₂)_mCH₂-；O(CH₂)_pO-；-CH₂CH₂OCH₂CH₂-；-CH₂CH₂N(H或烷基)CH₂CH₂-，或-CH₂CH₂NHCH₂CH₂-；

n是0-5的整数；

m是1-4的整数；

p是1-4的整数；

或R₁和R₂一起构成与＝C(CH₃)₂；＝C(C₃-C₆环烷基)、＝O或＝C(环醚)相连的双键，其中环醚选自四氢呋喃基或六氢吡喃基；

R₃是H，OH，NH₂，C₁-C₆烷基，取代的C₁-C₆烷基，C₃-C₆链烯基，炔基或取代的炔基，或COR^A

R^A＝H、C₁-C₃烷基、取代的C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、取代的C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃氨烷基、或取代的C₁-C₃氨烷基；

R₄＝H、卤素、CN、NH₂、C₁-C₆烷基、取代的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、取代的C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆氨烷基、或取代的C₁-C₆氨烷基；

R₅选自a)、b)或c)：

a)R₅是苯环，具有式：

R^C是H、C₁-C₃烷基、或取代的C₁-C₃烷基；

Y和Z分别选自：H、卤素、CN、NO₂、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃烷基、或C₁-C₃烷硫基；

或

b)R₅是5或6元环，含有1、2、或3个选自O、S、SO、SO₂或NR₆的杂原子，且含有1或2个选自H、卤素、CN、NO₂、和C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃氨烷基、COR^D、或NR^ECOR^D的独立取代基；

R^E是H、C₁-C₃烷基、或取代的C₁-C₃烷基；

R₆是H或C₁-C₃烷基；

或

c)R₅是吲哚-4-基、吲哚-7-基或苯并2-噻吩基，该基团可被1-3个取代基任选取代，所述取代基选自卤素、低级烷基、CN、NO₂、低级烷氧基或CF₃其中R₆和R₇分别选自H、甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、环己基、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基；

或其药物学上可接受的盐。

2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物具有式：

其中：

或其药物学上可接受的盐。

3.如权利要求2所述的化合物，其特征在于，X是CN或NO₂，Y是5’-氟；或其药物学上可接受的盐。

4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物具有式：

其中：U是O、S、或NR₆，R₆是H、或C₁-C₃烷基、或C₁-C₄CO₂烷基；X’选自卤素、CN、NO₂、C₁-C₃烷基或C₁-C₃烷氧基；Y’选自H、F、CN、NO₂或C₁-C₄烷基；或其药物学上可接受的盐。

5.如权利要求4所述的化合物，其特征在于，该化合物具有式：

其中是H或烷基；或其药物学上可接受的盐。

6.如权利要求4所述的化合物，其特征在于，该化合物具有式：或其药物学上可接受的盐。

7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物具有式：

其中：

X¹是N或CX²；

X²是卤素、CN或NO₂。

或其药物学上可接受的盐。

8.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚或其药物学上可接受的盐。

9.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚盐酸盐或其药物学上可接受的盐。

10.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是(2-R)-2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚或其药物学上可接受的盐。

11.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是(2-S)-2，3，3-三甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚或其药物学上可接受的盐。

12.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是2，3，3-二乙基-2-甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚或其药物学上可接受的盐。

13.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是4a-甲基-6-(3-硝基-苯基)-2，3，4，4a，9，9a-六氢-1H-咔唑或其药物学上可接受的盐。

14.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是1，2-二氢-2-甲基-5-(3-硝基-苯基)螺[环己烷-1，3-[3H]吲哚]或其药物学上可接受的盐。

15.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是3，3-二甲基-5-(3-硝基-苯基)-2，3-二氢-1H-吲哚或其药物学上可接受的盐。

16.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是5′-(3-氯苯基)-1′，2′-二氢螺[环己烷-1，3′-[3H]吲哚]或其药物学上可接受的盐。

17.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，该化合物是3-(2′，3′，3′-三甲基-2′，3′-二氢-1H-吲哚-5′-基)苄腈或其药物学上可接受的盐。

18.一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物含有药物学有效量的权利要求1所述的化合物和药物学上可接受的载体或赋形剂。

19.一种在哺乳动物中引起避孕的方法，其特征在于，该方法包括施给哺乳动物药物有效量的权利要求1所述的化合物，或其药物学上可接受的盐。

20.一种在哺乳动物中治疗或预防良性或恶性肿瘤病的方法，其特征在于，该方法包括施给需要的哺乳动物药物有效量的权利要求1所述的化合物，或其药物学上可接受的盐。

21.如权利要求19所述的方法，其特征在于，良性或恶性肿瘤病选自子宫肌层纤维瘤、子宫内膜异位、良性前列腺肥大；子宫粘膜、卵巢、乳腺、结肠、前列腺、垂体的癌和腺癌，脑膜瘤和其他激素依赖性肿瘤。