CN1297278C - 一种含丹酚酸b、三七总皂苷和冰片的药物组合组及其制备和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含丹酚酸B、三七总皂苷和冰片的药物组合组及其制备和应用。它是由以丹酚酸B为主要有效成分的丹参提取物、以三七总皂苷为主要有效部位的三七提取物和冰片的羟丙基β-环糊精包合物以及药用辅料组成的复方丹参冻干粉针剂。本发明采用超声提取，超滤，醋酸乙酯萃取，旋转刮膜浓缩技术相结合的方法得到丹参提取物；采用水提醇沉、大孔吸附树脂法从三七中提取三七总皂苷类有效成分；利用羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)对处方中的冰片进行包合，解决了其在注射液水溶液中溶解难的问题，提高了制剂的质量和临床疗效。本发明用于预防和治疗心脑血管疾病。含量测定和药理实验表明，本发明复方丹参冻干粉针剂具有有效成分含量高，疗效显著的特点。

Description

一种含丹酚酸B、三七总皂苷和冰片的药物组合组及其制备和应用

所属技术领域

本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种含丹酚酸B、三七总皂苷和冰片的药物组合组及其制备和应用。这种药物组合物我们又称之为复方丹参冻干粉针剂

背景技术

冠心病、心绞痛在临床上是常见病、多发病，近年来，随着人们生活水平的提高，冠心病发病年龄有所提前，加上人口结构的老龄化，其发病率呈逐年上升的趋势，开发治疗心脑血管疾病的药物渐成研究的热点。越来越多的临床报道显示，中药在治疗冠心病、心绞痛方面具有良好的应用前景，特别是中药的副作用少，日益受到人们的喜爱。由丹参、三七和冰片组成的复方丹参制剂，临床上主要用于心血管疾病方面的治疗，具有较好的效果，如复方丹参滴丸在市场上销量一直很好。最新的文献报道：由天津中医学院院长张伯礼教授领衔的“复方丹参方的药效物质及作用机制研究”，证实了复方丹参方多组分、多靶点治疗心血管病科学性。研究人员在保持中药原方配伍特点的同时，借鉴西药的分析方法，从该方剂的配伍配比、作用机制、药效物质等方面进行了系统研究。最终证实：复方丹参方不仅具有抗心肌缺血作用，而且有增强缺血预适应效果，作用机制可能是扩张冠状动脉和激活内源性保护物质的释放；丹参的作用靶点侧重于血管，三七的作用靶点侧重于心肌，丹参与三七配伍后存在协同互补效应；丹参所含的丹酚酸B与丹参酮均有抗心肌缺血的作用[复方丹参方作用机制已探明。现代中西医结合杂志2004，13(8)：999]；丹参药理作用强的是其水溶性有效成分，水溶性成分中主要是酚酸类化合物，其中丹酚酸B含量最高，达5％以上，作用也最强[张启伟等。高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B。中国中药杂志，2001，26(12)：848]。因此，药物中丹酚酸B含量的高低，直接影响着制剂的临床治疗效果。

由丹参、三七、冰片三味药组成的复方丹参制剂在临床上有多种剂型，但只限于口服制剂[专利文献 CN02158104.5]。对于复方丹参制剂的专利，对其固体剂型报道的较多，专利CN01136155.7和专利CN02158104.5分别公开了该复方制剂的固体剂型及其制备方法；专利CN01133333.2则公开了该复方制剂的缓释和控释剂型和制备方法；专利CN02157383、CN02157377、CN02157379、CN02157380、CN02157382则公开了包括复方丹参的整个固体剂型。申请号为CN98103032、CN02133724、CN02144600、CN031112650的专利文献中有复方丹参注射液的报道，但原料是由丹参和降香两味药组成。

由三七或丹参单味药有效部位制成的注射制剂有较多报道。专利CN99106223公开了由三七总皂苷制成的注射剂。专利CN01142288和专利CN02117923分别公开了丹参中总丹酚酸的制备方法。但是丹酚酸类化合物很不稳定，即使长时间在60-70℃加热，也会分解变质为活性较弱或无效的其它成分，使药理作用明显降低或丧失。申请号为CN01142288和CN02117923的专利均采用60-100℃的热水提取丹参药材中的水溶性有效成分，虽然注意到了丹酚酸类成分的长时间受热不稳定性，但在提取工艺中却没有从根本上采取措施弥补现有技术的缺陷和不足。

丹参中的酚酸类有效成分与鞣质结构相似，性质相近。所以申请号为02144600、03112650、03132383、90107488、98103032的专利文献所用除去丹参提取物中的鞣质的方法会对酚酸类有效成分损失很大，使得其含量降低，无法达到预期的质量效果。

在专利检索中未见有丹参、三七、冰片三味药组方的注射液，特别是冻干粉针剂的报道。冻干粉针剂具有起效迅速，稳定便于运输、贮存等优点，对于稳定性不好的丹参提取物更为适合。因此，进一步开发复方丹参制剂特别是其冻干粉针剂型，将会具有广阔的市场前景。

超声提取技术是利用超声波产生强烈振动，高速度，强烈的空化效应，搅拌作用，能破坏植物药材的细胞，使溶剂能渗透到药材细胞中，从而加速药材中的有效成分溶解于溶剂中。超声技术提出率高、提取时间短、提取温度低，特别适合对于热不稳定物质的提取。旋转刮膜法适合于对热不稳定物质的浓缩、分离。

超滤技术是指常温下以一定压力和流量，利用不对称微孔结构和半透膜分离介质、以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，高分子物质和微粒子如蛋白质、水溶性高聚物、细菌等被滤膜阻留，从而达到分离、纯化、浓缩的发展最快的新型膜分离技术，能够分离分子量为1000～1000000道尔顿的物质。与传统分离方法相比，具有分离过程无相变、分离效率高、无需添加化学试剂无污染、无需加热、能耗低、条件温和不破坏成分、操作方便、流程短的特点。另外，超滤膜还可以用来去除注射液中的鞣质、蛋白质和大分子的糖类等杂质，改善注射液的澄明度等。利用超滤技术制备注射液，还能够用来有效去除细菌和热原。所以，本发明在制剂工艺中采用超滤技术后，注射液的质量得到了明显的改善与提高。

发明内容

本发明是对复方丹参片(见《药典》2000年版一部，国家药典委员会编)的剂型改进，目的在于提供一种起效迅速、剂型先进、制剂稳定的注射用复方丹参冻干粉针剂及其制备方法。本发明采用超声提取，超滤，醋酸乙酯萃取，旋转刮膜浓缩技术相结合的方法从丹参中提取以丹酚酸B为主的有效成分；采用水提醇沉法、大孔树脂吸附法从三七中提取和纯化三七总皂苷类有效成分；利用羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)对处方中的冰片进行包合，解决了其在注射液水溶液中溶解难的问题，提高了制剂的质量和临床疗效。本发明的制备方法中还采用超滤法，保证了注射液的澄明度和热原合格，使注射剂的质量和疗效得到显著提高。

本发明通过以下技术方案实现：

一、工艺制法

(1)原料药的处方为：丹参400-500重量份，三七120-160重量份，冰片6-10重量份；

(2)取丹参药材饮片，粉碎，加6-10倍的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为20-50分钟，振荡频率为20-100kHz，控制温度为室温，提取2-4次，合并提取液过滤，滤液高速离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪浓缩至相对密度为1.10-1.15后用有机酸或无机酸调节pH值为1-3，用0.5～3倍的醋酸乙酯萃取3～9次，合并醋酸乙酯液，用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪进行浓缩，浓缩得到的浸膏40℃以下真空干燥，得到以丹酚酸B为主要成分的丹参提取物；

(3)取三七药材饮片粉碎，用6-12倍量水煎煮提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.15-1.16，加乙醇使含醇量达60％-80％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，高速离心，上清液过已处理好的大孔吸附树脂柱，先用4-6倍柱体积的水洗脱，再用6-8倍柱体积的50％-80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物；

(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取羟丙基-β-环糊精加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到羟丙基-β-环糊精饱和液中，并不停搅拌，加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，去沉淀，得冰片羟丙基-β-环糊精包合物；

(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入冻干赋型剂，加注射用水，调节pH值至5.0-6.8，灌装，冷冻干燥，即得。

优选地，在上述工艺制法中，所述的大孔吸附树脂为非极性或弱极性的大孔吸附树脂；所述的高速离心速度为12000-18000转/分；所述的无机酸和有机酸选自盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、冰醋酸；所述的冻干赋形剂是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一种、两种或几种的混合物。

在丹参提取物的制备过程中，用高速离心和截留分子量为5000的超滤膜除去了丹参中的以鞣质为主的分子量较大的杂质，而分子量较小的酚酸类有效成分顺利通过。鞣质的除去，减轻了注射时患者的痛苦；用低沸点的醋酸乙酯萃取水溶液中的有效成分，不但萃取效率高、用时短、温度低，而且萃取的醋酸乙酯液浓缩的过程中加热的温度较低，再配合旋转刮膜浓缩技术，防止丹酚酸类有效成分长时间受热而分解。本发明的制备工艺完全在较低的温度下进行，能有效的保留有效成分。使得最终得到的提取物中丹酚酸类有效成分绝对含量和相对含量均较高。

二、不同方法制备的丹参提取物，丹酚酸B，总酚酸的含量比较

1.仪器与试药  高效液相色谱仪包括LC-10ATvp型溶剂输送泵，SPD-10ATvp型紫外可见检测器(日本岛津公司)；N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；KQ3200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。色谱纯甲醇(北京化学试剂有效公司)；水为三蒸水(自制)；其它试剂均为分析纯。丹酚酸B(北京乾露春科技有限公司实验室提供，纯度为98.2％)。

1号丹参提取物，5kg丹参药材按专利CN02117923.9的方法制备；2号丹参提取物，5kg丹参药材按专利CN01142288.2的方法制备；3号丹参提取物，5kg丹参药材按本发明丹参提取物的制备方法制备(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；

2.色谱条件与系统适用性试验  色谱柱：迪马公司C₁₈柱(5μm，150mm×4.6mm，I.D)；流动相：甲醇-5％乙酸(45∶55)；流速：1.0ml/min；检测波长：288nm。理论板数按丹酚酸B峰记算应不低于3000。

3.对照品溶液制备  精密称取丹酚酸B对照品5.0mg，置入10ml量瓶中，加入甲醇，超声使溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，即得。

4.标准曲线制备分别精密吸取上述对照品溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl，在上述测定条件下进样测定，结果丹酚酸B在0.5μg～6.0μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y＝1000843X-4989，r＝0.9998。

5.供试品溶液的制备  精密称定各丹参提取物约10mg，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液离心(12000rpm)10min，上清液作为供试品溶液。

6.测定法  精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，用标准曲线计算含量。结果见表1。

丹参总酚酸参照申请号为01142288的专利申请文献中的方法进行测定。

               表1  不同方法制备的丹参提取物比较

编号	丹酚酸B含量(％)	总酚酸含量(％)	提取物重量(g)
				123	54.1153.4658.26	82.6984.5288.37	221.3115.6225.6

由以上测定结果可以看出，本发明的丹参提取物中总酚酸含量、丹酚酸B含量，提取物得率明显高于其它两种丹参提取物的含量，说明本发明的制备工艺更加合理，更加科学，更具有实际意义。

三、不同方法制备的丹参提取物中的鞣质检查

1.样品制备  1号丹参提取物，500g丹参药材按专利CN02144600的方法制备；2号丹参提取物，500g丹参药材按专利CN95115854的方法制备；3号丹参提取物，500g丹参药材按本发明丹参提取物的制备方法制备(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；

2.检查方法  取各丹参提取物适量，加入注射用水溶解并稀释至200ml，精密量取各溶液1ml，按照参考文献[江波，等。含丹参中药注射液鞣质检查新方法。中成药，2000，22(3)：192]的实验方法进行，观察浑浊或沉淀的情况。结果见表2。

表2  不同方法制备的丹参提取物中鞣质检查

编号	现象
		123	++-

注：-表示无浑浊现象；+表示有浑浊现象；

由以上检查结果可以看出，本发明的丹参提取物中的鞣质含量，明显低于其它两种丹参提取物的含量，说明本发明的制备工艺更加合理，更加科学，更具有实际意义，完全符合注射制剂的要求。

四、本发明的丹参提取物中总酚酸、丹酚酸B和三七提取物中三七总皂苷的含量测定

五批丹参提取物和三七提取物由北京乾露春科技有限公司提供。总酚酸和丹酚酸B的含量测定方法按照上述方法测定；三七总皂苷的含量测定方法按照参考文献[魏凤玲，等。三七总皂苷提取工艺优选。中国中药杂志，2000，25(12)：722]中的三七总皂苷含量测定方法测定；结果见表3

        表3  五批提取物中的成分含量测定结果

批号	含量(w/w，％)
				总酚酸	丹酚酸B	三七总皂苷
	12345	88.3785.8688.1387.4290.58	58.2656.7559.7357.2858.37				67.5856.3463.5257.6360.08

由以上测定结果可以看出，本发明的丹参提取物中总酚酸重量百分含量大于85％、丹参提取物中丹酚酸B重量百分含量大于55％，三七提取物中三七总皂苷重量百分含量大于55％。

五、药理实施例

1.对小鼠缺氧耐力的影响实验

实验方法：取健康昆明种小鼠30只，体重20～24g。随机分成对照组，复方丹参注射液组、本发明复方丹参冻干粉针组。每组10只，雌雄各半，分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为：待测动物试用剂量＝已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给生理盐水，1次/d，连续7d。于末次给药后1h，将小鼠分别置于体积为150ml磨口瓶中，内放15g钠石灰，密闭观察其存活时间。结果见表4。

              表4  对小鼠常压缺氧的影响(X±SD)

组别	鼠数(只)	平均存活时间(min)
			对照组复方丹参注射液组本发明复方丹参冻干粉针剂组	101010	17.55±2.6427.48±2.86*32.22±3.17*#

注：与对照组比较：^*P＜0.001；

与复方丹参注射液组比较：#P＜0.05

复方丹参注射液、本发明复方丹参冻干粉针剂均能提高小鼠常压缺氧耐力，平均存活时间比对照组显著延长(P＜0.01)；本发明复方丹参冻干粉针剂和复方丹参注射液相比，平均存活时间也有差异(P＜0.05)。说明：复方丹参冻干粉针剂的作用强于复方丹参注射液。

2.对小鼠心肌缺氧的保护作用实验

实验方法：取健康昆明种小鼠30只，体重18～22g，随机分成3组，对照组，复方丹参注射液组、本发明复方丹参冻干粉针剂组。每组雌雄各半，分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为：待测动物试用剂量＝已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给生理盐水。给药方法：1次/d，连续6d。于末次给药后1h用乌拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分离气管，以动脉夹夹闭气管，用心电仪观察心电，并用秒表记下小鼠夹闭气管后至心电消失的时间。结果见表5。

          表5  对小鼠心肌缺氧的影响(X±SD)

组别	鼠数(只)	平均存活时间(min)
			对照组复方丹参注射液组本发明复方丹参冻干粉针剂组	101010	6.42±0.8811.76±0.54*13.84±0.63*#

注：与对照组比较：^*P＜0.001；

与复方丹参注射液组比较：#P＜0.05

复方丹参注射液、本发明复方丹参冻干粉针剂均能对小鼠心肌缺氧起保护作用，平均存活时间比对照组显著延长(P＜0.01)；本发明复方丹参冻干粉针剂和复方丹参注射液相比，平均存活时间也有差异(P＜0.05)。说明：本发明复方丹参冻干粉针剂的药理作用强于复方丹参注射液。

3.对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响

取体重250～300g Wistar大鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，连续ip.给药7d。各组动物于末次给药30min后，腹腔注射25％乌拉坦0.4ml/100g麻醉，仰卧固定，标准电压1mv＝15mm，走纸速度50mm/s，记录II导联心电图。舌下静脉注射垂体后叶素0.75u/kg于5s内注射完。每30s记录一次心电图。大鼠静脉注射垂体后叶素1min内，大多数表现为心率减慢，T波高耸，ST段抬高等变化。分别观察用药前后30s、1min及50min上T波增殖的变化。结果见表6。

表6  对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响。

组别	鼠数(只)	T波增值(m V)
					30s	1min	5min

生理盐水组复方丹参注射液组本发明复方丹参冻干粉针剂组

101010

0.36±0.140.24±0.07*0.18±0.06*#

0.25±0.190.16±0.04*0.10±0.03*#

0.18±0.0240.086±0.016*0.053±0.013*#

注：与对照组比较：^*P＜0.01；

与复方丹参注射液组比较：#P＜0.05

本发明复方丹参冻干粉针剂和复方丹参注射液均能显著降低30s、1min及5min时的T波增殖(P＜0.01)；本发明复方丹参冻干粉针剂和复方丹参注射液相比，降低的程度也有差异(P＜0.05)。说明：本发明复方丹参冻干粉针剂的药理作用强于复方丹参注射液。

六、制备实施例

实施例1

(1)原料药的处方为：丹参500g，冰片10g，三七160g；

(2)取丹参药材饮片，粉碎，加10倍的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为50分钟，振荡频率为100kHz，控制温度为室温，提取4次，合并提取液过滤，滤液13000rpm离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪浓缩至相对密度为1.15后用盐酸调节pH值为1，用3倍的醋酸乙酯萃取9次，合并醋酸乙酯液，用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪进行浓缩，浓缩得到的浸膏40℃以下真空干燥，得到以丹酚酸B为主要成分的丹参提取物。

(3)取三七药材饮片粉碎，用12倍量水煎煮提取3次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.15，加乙醇使含醇量达60％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积的水洗脱，再用8倍柱体积的80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物。

(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。

(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入甘露醇，加注射用水至1000ml，调节pH值至5.0，灌装500瓶，冷冻干燥，即得。

含量测定结果为：丹参提取物中总酚酸重量百分含量为88.37％、丹参提取物中丹酚酸B重量百分含量为58.26％，三七提取物中三七总皂苷重量百分含量为67.58％。

实施例2

(1)原料药的处方为：丹参400g，冰片6g，三七120g；

(2)取丹参药材饮片，粉碎，加6倍的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为20分钟，振荡频率为20kHz，控制温度为室温，提取2次，合并提取液过滤，滤液12000rpm离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪浓缩至相对密度为1.10后用硫酸调节pH值为3，用0.5倍的醋酸乙酯萃取3次，合并醋酸乙酯液，用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪进行浓缩，浓缩得到的浸膏40℃以下真空干燥，得到以丹酚酸B为主要成分的丹参提取物。

(3)取三七药材饮片粉碎，用6倍量水煎煮提取1次，每次1小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.16，加乙醇使含醇量达80％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，先用6倍柱体积的水洗脱，再用6倍柱体积的50％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物。

(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。

(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入乳糖和葡聚糖，加注射用水至1000ml，调节pH值至6.8，灌装500瓶，冷冻干燥，即得。

含量测定结果为：丹参提取物中总酚酸重量百分含量为85.86％、丹参提取物中丹酚酸B重量百分含量为56.75％，三七提取物中三七总皂苷重量百分含量为56.34％。

实施例3

(1)原料药的处方为：丹参450g，冰片8g，三七141g；

(2)取丹参药材饮片，粉碎，加8倍的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为40分钟，振荡频率为50kHz，控制温度为室温，提取3次，合并提取液过滤，滤液18000rpm离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪浓缩至相对密度为1.13后用磷酸调节pH值为2，用2倍的醋酸乙酯萃取5次，合并醋酸乙酯液，用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪进行浓缩，浓缩得到的浸膏40℃以下真空干燥，得到以丹酚酸B为主要成分的丹参提取物。

(3)取三七药材饮片粉碎，用8倍量水煎煮提取2次，每次1小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.15，加乙醇使含醇量达70％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的NKA型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积的水洗脱，再用6倍柱体积的70％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物。

(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。

(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖和果糖，加注射用水至1000ml，调节pH值至6.0，灌装500瓶，冷冻干燥，即得。

含量测定结果为：丹参提取物中总酚酸重量百分含量为88.13％、丹参提取物中丹酚酸B重量百分含量为59.73％，三七提取物中三七总皂苷重量百分含量为63.52％。

实施例4

(1)原料药的处方为：丹参430g，冰片9g，三七130g；

(2)取丹参药材饮片，粉碎，加9倍的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为30分钟，振荡频率为40kHz，控制温度为室温，提取2次，合并提取液过滤，滤液14000rpm离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪浓缩至相对密度为1.12后用乙酸调节pH值为3，用1倍的醋酸乙酯萃取7次，合并醋酸乙酯液，用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪进行浓缩，浓缩得到的浸膏40℃以下真空干燥，得到以丹酚酸B为主要成分的丹参提取物。

(3)取三七药材饮片粉碎，用10倍量水煎煮提取2次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.16，加乙醇使含醇量达65％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的D101大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积的水洗脱，再用8倍柱体积的80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物。

(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。

(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入乳糖和右旋果糖和葡聚糖，加注射用水至1000ml，调节pH值至5.5，灌装500瓶，冷冻干燥，即得。

含量测定结果为：丹参提取物中总酚酸重量百分含量为87.42％、丹参提取物中丹酚酸B重量百分含量为57.28％，三七提取物中三七总皂苷重量百分含量为57.63％。

实施例5

(1)原料药的处方为：丹参480g，冰片7g，三七150g；

(2)取丹参药材饮片，粉碎，加7倍的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为45分钟，振荡频率为80kHz，控制温度为室温，提取3次，合并提取液过滤，滤液16000rpm离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪浓缩至相对密度为1.14后用冰醋酸调节pH值为2，用2.5倍的醋酸乙酯萃取4次，合并醋酸乙酯液，用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪进行浓缩，浓缩得到的浸膏40℃以下真空干燥，得到以丹酚酸B为主要成分的丹参提取物。

(3)取三七药材饮片粉碎，用9倍量水煎煮提取3次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.16，加乙醇使含醇量达75％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积的水洗脱，再用6倍柱体积的65％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物。

(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。

(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入甘露醇和乳糖，加注射用水至1000ml，调节pH值至5.8，灌装500瓶，冷冻干燥，即得。

含量测定结果为：丹参提取物中总酚酸重量百分含量为90.58％、丹参提取物中丹酚酸B重量百分含量为58.37％，三七提取物中三七总皂苷重量百分含量为60.08％。

Claims (6)

1、一种含丹酚酸B、三七总皂苷和冰片的冻干粉针剂，由400-500重量份丹参制备的丹参提取物、120-160重量份三七制备的三七提取物和6-10重量份冰片的羟丙基-β-环糊精包合物及药用辅料制成，其特征在于，丹参提取物中总酚酸重量百分含量大于或等于85％，丹酚酸B重量百分含量大于或等于55％，三七提取物中三七总皂苷重量百分含量大于或等于55％。

2、权利要求1所述的冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)原料药的处方为：丹参400-500重量份，三七120-160重量份，冰片6-10重量份；

(2)取丹参药材饮片，粉碎，加6-10倍的水，放入超声提取罐中，进行超声振荡提取，时间为20-50分钟，振荡频率为20-100kHz，控制温度为室温，提取2-4次，合并提取液过滤，滤液高速离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪浓缩至相对密度为1.10-1.15后用有机酸或无机酸调节pH值为1-3，用0.5～3倍的醋酸乙酯萃取3～9次，合并醋酸乙酯液，用控制温度为40℃的旋转刮膜浓缩仪进行浓缩，浓缩得到的浸膏40℃以下真空干燥，得到以丹酚酸B为主要成分的丹参提取物；

(3)取三七药材饮片粉碎，用6-12倍量水煎煮提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.15-1.16，加乙醇使含醇量达60％-80％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，高速离心，上清液过已处理好的大孔吸附树脂柱，先用4-6倍柱体积的水洗脱，再用6-8倍柱体积的50％-80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物；

(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取羟丙基-β-环糊精加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到羟丙基-β-环糊精饱和液中，并不停搅拌，加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，去沉淀，得冰片羟丙基-β-环糊精包合物；

(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片羟丙基-β-环糊精液混合，加入冻干赋型剂，加注射用水，调节pH值至5.0-6.8，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉针制剂。

3、根据权利要求2所述的冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的高速离心的速度为12000-18000转/分。

4、根据权利要求2所述的冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的无机酸和有机酸选自盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、冰醋酸。

5、根据权利要求2所述的冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述的大孔吸附树脂是非极性、弱极性的大孔吸附树脂。

6、根据权利要求2所述的冻干粉针剂的制备方法，其特征在在于，步骤(5)中所述的冻干赋形剂是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一种、两种或几种的混合物。