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CN1274249C - 牡蛎生物活性物质的制备方法及其产品 - Google Patents

牡蛎生物活性物质的制备方法及其产品 Download PDF

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Abstract

牡蛎生物活性物质的制备方法及其产品，包括以下步骤：(1)、将牡蛎洗净、去壳、加水打浆，过滤、超滤得到滤液和残余物，滤液直接冷冻干燥或添加乳糖等物质喷雾干燥制得干粉；(2)、在(1)中的残余物中加入水制成溶液，再加入酶进行酶解，制得酶解液；(3)、将步骤(2)制得的酶解液过滤、冷冻干燥或添加剂乳糖后喷雾干燥得粉剂。其优点在于：(1)从牡蛎中制得的纯天然营养物质能保持原有的生物功能。(2)操作简便、生产成本低。制得的牡蛎酶水解液中含有更多的功能肽、游离氨基酸和多糖，营养成分更高、具有更好的抗肿瘤、抗衰老、提高机体免疫力等生理功能。(3)牡蛎复合酶水解液可进一步加工成口服液、胶囊、冲剂、片剂等，使用更方便，保健功能更明显。

Description

牡蛎生物活性物质的制备方法及其产品
技术领域
本发明涉及一种海产保健营养品及其加工方法，具体地说是一种以牡蛎为原料进行提取、酶水解制取其中的营养物质的牡蛎生物活性物质的制备方法及其产品。
背景技术
牡蛎属于软体动物门，在北方称为海蛎子，南方叫蚝，为沿海习见且大量生长的一种贝类，其肉嫩味鲜，是一种营养价值极高的名贵海产品。
牡蛎既是食品又能当作药品，现已证明：牡蛎具有降血脂、抑制血小板聚集，提高机体免疫力，促进新陈代谢等功能，因此在动脉硬化、冠心病、高血脂、糖尿病、慢性肝炎、免疫力降低等疾病的辅助治疗中取得了良好的疗效，同时在抗癌及防止癌细胞扩散方面也有一定的效果，已经分离出了抗癌的多肽物质。
由于直接食用牡蛎受地理条件所限，加之有些人对直接食用不适应，直接食用人群不广，因此人们开始研究从牡蛎中提取营养物质的方法，相应的也有许多牡蛎制成品。
如中国专利申请CN1302561A公开了牡蛎营养素及其制作方法，将牡蛎清洗、干燥、粉碎、包装，并将牡蛎粉置于胶囊内制成片或颗粒。
又如中国专利CN1067553C公开的牡蛎提取物及其制剂的制备方法，制备方法包括水提、过滤、真空浓缩、喷雾干燥等步骤，可用该方法得到牡蛎提取物。
又如中国专利申请CN1486634A公开的一种牡蛎提取物及其制备方法，是以牡蛎的可食部分为原料制成固体粉末，制备方法依次包括食用乙醇处理、水提取、固液分离、调节pH值沉淀分离出蛋白质、脱除电解质、脱色、真空浓缩、喷雾干燥等几个步骤。
这些方法虽能较好的保留或提取牡蛎现有的营养成分，具有食用方便、食用量可人为控制、营养成分不损失、吸收充分等优点，但这些方法不能有效转化和提高牡蛎中的有效成分，活性物质的浓度不够高。
因此也采用了牡蛎酶解方法来转化和提高牡蛎中的有效成分，如中国专利申请CN1370451A公开的一种牡蛎口服液的制备方法，其包括下列主要步骤：a.取新鲜牡蛎软体加水匀浆，并以适量的木瓜蛋白酶水解，木瓜蛋白酶能有效地清除腥味蛋白的腥味；b.牡蛎匀浆经过酶解后，进行加糖及加热处理，以减少碱性物质腥臭味；c.进行加酸及加热处理，以进一步清除碱性物质的腥臭味，经过上述步骤可获得用于配制牡蛎口服液的牡蛎匀浆液。
又如中国专利申请CN1478420A公开的一种牡蛎胶囊食品及其制备方法，以牡蛎肉为原料，打浆后经常温、低温及紫外线照射自溶后，再用胃蛋白酶酶解；还可用牡蛎的自溶酶作外源酶酶解；还可用枯草杆菌中性蛋白酶单酶酶解；还可用枯草杆菌中性蛋白酶和胃蛋白酶双外源酶酶解。脱除酶解液异味可用葡萄糖处理，也可用柠檬酸与苹果酸的混酸处理，也可用β-环糊精和酵母粉处理，还可用复合风味蛋白酶处理，将上述酶解液澄清后，经浓缩、冷冻干燥后即可装入胶囊。
这类方法中采用的酶一般用胃蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单酶或这些单酶的简单组合，这些牡蛎酶水解方法存在以下缺点：
(1)由于直接将牡蛎制成浆料酶解，牡蛎中的许多原始活性物质就会被破坏，因此从牡蛎中制得的营养物质就会失去特有的生理功能。(2)由于采用的酶的特性强，因此酶解时的pH值范围窄，且需要用酸、碱或缓冲液来调节，其制备复杂，而且其功能肽、游离氨基酸和多糖的产量低，既增加了产品的生产成本，又不能有效转化和利用牡蛎的营养物质，因此牡蛎的营养和药理功能也没有得到有效的发挥。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的上述缺陷而提供牡蛎生物活性物质的制备方法，以保留牡蛎原有的活性物质，利用复合蛋白酶充分转化牡蛎的营养物质，提高牡蛎中的人体易吸收、有功效的活性成分，达到高效、低成本制备牡蛎生物活性物质的目的。
本发明的另一目的在于利用牡蛎的原有天然活性成分，如低聚功能肽、游离氨基酸和寡糖，以及牡蛎酶解产物，制备具有一定特殊生理功能的牡蛎酶解液的口服液、胶囊、片剂和冲剂，以提高产物的营养成分，方便食用，并充分提高牡蛎的利用价值。
本发明解决上述技术问题所采用的方案为：
牡蛎生物活性物质的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将牡蛎洗净、去壳、加水打浆，过滤、膜超滤得到分子量在一定范围的滤液和沉淀物，滤液可直接冷冻干燥或添加乳糖等物质喷雾干燥；
(2)、在(1)的沉淀物中加入水制成溶液，再加入酶进行酶解，制得酶解液；
(3)将步骤(2)制得的酶解液过滤冷冻干燥或添加乳糖等物质喷雾干燥得成品。
为了保证牡蛎原有生物活性物质特性，发挥一些特殊物质的生理功能，如降血脂、抑制血小板聚集，提高机体免疫力，促进新陈代谢等，本发明的步骤(1)利用磷酸缓冲液或去离子水同去壳后的牡蛎混合、粉碎、搅拌、提取、过滤、膜超滤，截留分子量∠10,000Da的牡蛎纯天然的生物活性物质，冷冻或喷雾干燥后再制成胶囊。
步骤(2)将牡蛎的大分子物质充分酶解，得到富含功能肽、游离氨基酸和多糖等营养物质的酶解液。
为了方便上述牡蛎酶水解液的使用，还可制成口服液、胶囊、片剂或冲剂等。由于牡蛎酶水解液和其他相似海产品的酶解液体做成各种制剂的方法相似，因此只要在上述牡蛎酶解液中加入相应的物质，就可制成口服液、胶囊、片剂和冲剂，这些制剂的制备方法已经公知，不做详细论述，但其组成和功能却比较独特。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
(1)由于先将牡蛎中的许多原始活性物质提取出来，因此从牡蛎中制得的生物活性物质就能保持原有的生物活性和营养。
(2)选用不用酸或碱调节pH值、水解效果好的复合蛋白酶，因此操作简便、生产成本低。制得的牡蛎酶水解液中含有更多的低聚功能肽、游离氨基酸和多糖，营养成分更高、具有更好的抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、消炎、提高机体免疫力等生理功能。
(3)利用制得的牡蛎复合酶水解液可进一步加工成口服液、胶囊、冲剂、片剂等，这样使用更方便。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1：
牡蛎生物活性物质的制备方法：
(1)、新鲜牡蛎清洗干净后去壳，然后加2-4倍的磷酸缓冲液或去离子水，匀浆提取30min左右，离心、超滤后直接冷冻干燥或添加乳糖等物质喷雾干燥制得纯天然产物；
(2)、取步骤(1)中离心后的沉淀物质按一定比例加水稀释后制得的牡蛎水溶液加入蛋白酶进行酶解；
(3)将步骤(1)(2)制得的纯天然提取物和经过滤的酶解液冷冻干燥或添加乳糖等喷雾干燥。
酶解的条件：
所使用的酶：1389中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶。
浓度：5％ 10％ 15％ 20％，浓度为牡蛎占整个牡蛎水溶液的百分比；
温度：中性蛋白酶：50℃；胰蛋白酶：45℃；木瓜蛋白酶：65℃；复合蛋白酶：从35℃开始逐渐升温到70℃。
时间：4小时。
酶解的条件和结果见表1-表8。
酶解程度随酶解时间的变化结果见表9和表10。
从表1至表8中可以看出，牡蛎液可采用常用的酶酶解，但更好的是用复合蛋白酶水解。
从表9和表10可以看出，酶解时间越长越好，最少至2小时就可以得到很好的酶解结果。
从表1至表10可知，复合蛋白酶解条件为：
牡蛎的浓度为5-20％(重量)，浓度为牡蛎占整个牡蛎水溶液的百分比。
酶的加入量为2×104IU/kg-8×104IU/kg(牡蛎)，根据常理推断可以扩大范围到1×104IU/kg-10×104IU/kg(牡蛎)；
温度选用复合酶的使用温度，一般为35-70℃，温度为逐渐升温；
时间为：2-6h。
实施例2：
由实施例1步骤(3)中得到的牡蛎酶解液加入β环糊精去腥，酶解液过滤、添加蜂蜜、柠檬酸、维生素C、山梨酸钾后灭菌灌装。蜂蜜用于掩盖腥味和调节口感，山梨酸钾为防腐剂，加入量均为常用量。
实施例3
由实施例1步骤(3)中得到的牡蛎酶解液直接或加入乳糖后喷雾干燥制成粉剂装胶囊，制成胶囊的乳糖的具体比例可由所需产品的最终多糖和氨基酸的含量而定。
实施例4
将由实施例1步骤(3)中得到的牡蛎酶解液浓缩，用淀粉作为添充料压片包糖衣，打光，制成片剂。
实施例5
在由实施例1步骤(3)中得到的牡蛎酶解液中加入乳糖或β环糊精造粒制成冲剂。
以下是实验条件和结果。
              表1牡蛎复合蛋白酶水解后多糖含量(mg/ml)
  底物酶浓度   2×104IU/kg   4×104IU/kg   6×104IU/kg   8×104IU/kg
  5％10％15％20％   158.85259.63263.99257.48   272.48324.43280.28265.74   372.48453.13299.36256.32   390.52425.12279.32253.12
             表2牡蛎复合蛋白酶水解后氨基酸含量(mg/ml)
  底物酶浓度   2×104IU/kg   4×104IU/kg   6×104IU/kg   8×104IU/kg
  5％10％15％20％   14.7113.0415.8512.52   15.4019.7118.1116.62   23.1228.5620.3517.23   24.0329.0321.5715.26
              表3牡蛎中性蛋白酶水解后氨基酸含量(mg/ml)
  底物酶浓度   1.3×104IU/kg   1.1×105IU/kg   2.0×105IU/kg   3.0×105IU/kg
  5％10％15％20％   5.7635.1815.2896.236   6.3035.9585.8625.631   6.6055.5555.7215.665   6.9946.4055.8835.942
            表4牡蛎中性蛋白酶水解后多糖的含量(mg/ml)
  底物酶浓度   1.3×104IU/kg   1.1×105IU/kg   2.0×105IU/kg   3.0×105IU/kg
  5％10％15％20％   124.75141.75121.84151.39   201.40161.57145.63147.95   263.50170.38191.88162.49   316.36258.98214.67186.80
                表5牡蛎胰蛋白酶水解后氨基酸含量(mg/ml)
  底物酶浓度   1.3×105IU/kg   3.8×105IU/kg   6.3×105IU/kg   8.8×105IU/kg
  5％10％15％20％   6.7135.6565.6785.398   6.4756.4516.0885.558   7.5776.9236.4236.063   8.8517.4567.4386.495
              表6牡蛎胰蛋白酶水解后多糖的含量(mg/ml)
  底物酶浓度   1.3×105IU/kg   3.8×105IU/kg   6.3×105IU/kg   8.8×105IU/kg
  5％10％15％20％   138.63167.74154.55142.67   181.57154.53150.25162.22   178.27187.1263.8059.58   172.32165.10167.76148.74
           表7牡蛎木瓜蛋白酶水解后氨基酸含量(mg/ml)
  底物酶浓度   9.5×103IU/kg   7.6×104IU/kg   1.5×105IU/kg
  5％10％15％20％   3.1062.7762.8062.659   3.8173.6693.4863.402   4.3164.1443.7783.739
           表8牡蛎木瓜蛋白酶水解后多糖含量(mg/ml)
  底物酶浓度   9.5×103IU/kg   7.6×104IU/kg   1.5×105IU/kg
  5％10％15％20％   147.88141.75119.86118.35   133.34148.36153.22139.49   165.72161.13162.81151.39
        表9牡蛎酶解液中氨基酸含量(mg/ml)与酶解时间的关系：
                  酶加入量为：5×104IU/kg，温度为逐渐升温
  温度/时间底物浓度   5％   10％   15％   20％
  35-70℃/2h35-70℃/4h35-70℃/6h   15.2118.0419.34   17.4029.7120.01   22.3428.5620.93   25.2529.0321.76
         表10牡蛎酶水解液中多糖含量(mg/ml)与酶解时间的关系：
                酶加入量为：5×104IU/kg，温度为逐渐升温
  温度/时间底物浓度   5％   10％   15％   20％
  35-70℃/2h35-70℃/4h35-70℃/6h   168.85258.53268.45   282.45424.67273.26   312.69451.59289.56   360.78423.78269.09

Claims (8)

1、牡蛎生物活性物质的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将牡蛎洗净、去壳、加水打浆，过滤、膜超滤得到滤液和残余物，滤液直接冷冻干燥或添加乳糖喷雾干燥制得牡蛎活性物质干粉；
(2)在(1)中的残余物中加入水制成溶液，再加入酶进行酶解，制得酶解液；
(3)将步骤(2)制得的酶解液过滤、冷冻干燥或加乳糖喷雾干燥后制得成品。
2、如权利要求1所述的牡蛎生物活性物质的制备方法，其特征在于：所述的酶为复合蛋白酶。
3、如权利要求2所述的牡蛎生物活性物质的制备方法，其特征在于：所述的牡蛎液酶解条件为：牡蛎液中牡蛎的含量为5-20重量％，复合蛋白酶的加入量为1×104IU-10×104IU/kg固体牡蛎；酶解温度为35-70℃；酶解时间为2-6h。
4、牡蛎天然产物干粉，其特征在于：由权利要求1或2或3得到的过滤牡蛎酶解液加乳糖喷雾干燥或冷冻干燥制成。
5、牡蛎口服液，其特征在于：由权利要求1或2或3得到的过滤牡蛎酶解液添加β环糊精、调味剂和防腐剂后经灭菌灌装而成。
6、牡蛎胶囊，其特征在于：由权利要求4的牡蛎干粉制成。
7、牡蛎片剂，其特征在于：由权利要求4的牡蛎干粉添加淀粉而成。
8、牡蛎冲剂，其特征在于：由权利要求4的牡蛎干粉加入乳糖或β环糊精造粒而成。
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PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Assignee: Zhoushan Jingzhou Aquatic Foods Co., Ltd.

Assignor: Ningbo University

Contract fulfillment period: 2009.1.1 to 2015.12.31 contract change

Contract record no.: 2009330002104

Denomination of invention: Method for producing oyster biological active substance and its product

Granted publication date: 20060913

License type: Exclusive license

Record date: 2009.8.21

LIC Patent licence contract for exploitation submitted for record

Free format text: EXCLUSIVE LICENSE; TIME LIMIT OF IMPLEMENTING CONTACT: 2009.1.1 TO 2015.12.31; CHANGE OF CONTRACT

Name of requester: ZHOUSHAN JINGZHOU AQUATIC FOODS CO., LTD.

Effective date: 20090821

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20060913

Termination date: 20150827

EXPY Termination of patent right or utility model