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CN1262199C - 一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂及其制备方法和用途 - Google Patents

一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂及其制备方法和用途 Download PDF

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CN1262199C
CN1262199C CNB2004100427198A CN200410042719A CN1262199C CN 1262199 C CN1262199 C CN 1262199C CN B2004100427198 A CNB2004100427198 A CN B2004100427198A CN 200410042719 A CN200410042719 A CN 200410042719A CN 1262199 C CN1262199 C CN 1262199C
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Abstract

本发明涉及一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂，其主要成分为灵芝或/和云芝的发酵液。该发酵液是将灵芝或/和云芝的菌丝体接种于改良马铃薯葡萄糖琼脂的斜面培养基上；然后接入液体培养基A制备摇瓶种子液；再接入液体培养基B制备一级发酵种子液；最后接入液体培养基C深层发酵而得。将该发酵液经过进一步加工，分别得到本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1(结晶精制品)、PSPc-2(吸附粉剂)、PSPc-3(液剂)和PSPc-4(菌丝体粉剂)。该饲料添加剂不会造成抗生素残留，可促进动物生长或提高生产效率，刺激免疫系统发育，增强免疫力和抗病力，且热稳定性好，不容易失活，是一种无毒害、无残留、安全、高效、低成本的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂。

Description

一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种饲料添加剂及其制备方法，具体地说是涉及一种用灵芝和云芝发酵生产的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂及其制备方法和用途。
背景技术
饲料添加剂在畜禽养殖的促生长、防病和提高生产效率等方面起着不可或缺的作用。早期的饲料添加剂主要是抗生素，其在动物疾病的预防以及促生长方面发挥了重要作用，但科学研究也发现，抗生素的药物残留危害公众的健康，并对我国畜产品的出口都带来很大的负面影响。随着人们食品安全意识的提高，迫切需要使用绿色饲料添加剂来生产绿色畜产品、无公害食品、无抗食品或安全食品。
关于绿色饲料添加剂的研究和开发，国外早在30多年前已着手，而国内只在近些年才启动。在开发抗生素类饲料添加剂替代品的过程中，我国科学工作者先后开发成功了微生物添加剂(益生素)、酶制剂、益生元或化学益生素(寡聚糖)、酸化剂及中药草(或植物提取物)饲料添加剂等，它们各有优缺点。酶制剂及益生素的弱点是热稳定性差，容易失活，无论是在制粒、膨化等热处理条件下还是长期存放都会引起失活。酸化剂的添加比例大(1％～3％)、成本高，制作复合预混料时易破坏维生素活性，且功能有限(主要调整肠道pH值，抑制某些有害微生物的生长繁殖)。益生元或化学益生素多为选择性地刺激动物肠道有益菌增加的聚糖类，如甘露寡聚糖、蔗糖寡籽寡聚糖、果寡聚糖等，与微生态制剂有异曲同工之处，其优势在于：制作配方时无任何配伍禁忌，能耐受高压、高温等所有贮运、饲料极端加工条件等不利因素，所以粉料、颗粒料、膨化料均可使用。但是益生元或化学益生素存在成本高，功效较弱的弊端。中草药制剂多为粗制品，效果不稳定，某些制剂尚存在毒副作用，还存在加工成本高、大量应用时资源有限等缺点。
发明内容
本发明的目的在于克服已有技术的饲料添加剂易造成抗生素残留、热稳定性差、容易失活、添加比例大、成本高、某些制剂尚存在毒副作用的缺陷，特别是克服某些抗生素引起动物免疫功能明显抑制，抗病力下降，容易引起继发感染的缺点，从而提供一种无毒、无害、无残留、安全、高效、低成本、能明显促进动物免疫系统发育，增强动物免疫力，提高抗病力的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂。
本发明的另一目的在于提供一种所述糖肽复合物免疫强化饲料添加剂的制备方法。
本发明的再一目的在于提供一种所述糖肽复合物免疫强化饲料添加剂的用途。
本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：
本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂，其主要成分为灵芝或/和云芝的发酵液，经过进一步后加工，分别得到PSPc-1(结晶精制品)、PSPc-2(吸附粉剂)、PSPc-3(液剂)和PSPc4(菌丝体粉剂)。
本发明提供的灵芝或/和云芝的发酵液，由如下的步骤制得：
1)斜面培养活化：将灵芝或/和云芝的菌丝体接种于改良马铃薯葡萄糖琼脂(PGA)的斜面培养基上，在25～32℃下培养4～10天，直至菌丝体长满斜面；所述的改良马铃薯葡萄糖琼脂(PGA)的斜面培养基由下述方法制得：马铃薯200～300克去皮切小片状或小块状，加入500ml沸水中煮沸30分钟后用4层纱布过滤，在滤汁中加入20克葡萄糖、2克酵母粉，然后加水定容至1000ml，分装，灭菌，备用；
2)制备摇瓶种子液：将步骤1)得到的长满菌丝体的琼脂斜面培养基接入液体培养基A中，在25～35℃、转速80～200转/分钟的摇床上培养2～5天，得到灵芝或/和云芝的摇瓶种子液；所述液体培养基A为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：葡萄糖4.0％，蛋白胨0.2％，KH2PO4 0.1～0.2％，MgSO4·7H2O 0.05～0.1％，VB1 0.002～0.005％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用；
3)制备一级发酵种子液：将步骤2)制备的摇瓶种子液按5～20％的体积比接入液体培养基B，在25～35℃、转速80～200转/分钟的摇床上培养2～7天，得到灵芝或/和云芝的一级发酵种子液；所述液体培养基B为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：葡萄糖0.5～1.0％，豆粕2.0～4.0％，玉米5.0～10.0％，饲料级酵母粉0.5～1.5％，KH2PO4 0.1～0.2％，MgSO4·7H2O 0.05～0.1％；或者是豆粕1.0～2.0％，玉米5.0～10.0％，麦麸0.5～1.5％，饲料级酵母粉0.5～1.5％，KH2PO4 0.1～0.2％，MgSO4.7H2O 0.05～0.1％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用；
4)深层发酵：将步骤3)制备的一级发酵种子液按5～20％的体积比接入液体培养基C，在25～35℃发酵2～7天，得到灵芝或/和云芝的发酵液；所述液体培养基C为按下述比例料水重量体积比(W/V)配制的混合液：豆粕1.0～2.5％或/和鱼粉0.5～1.0％，玉米5.0～10.0％，麦麸0.5～2.0％，饲料级酵母粉0.5～1.5％，KH2PO4 0.1～0.2％，MgSO4·7H2O 0.05～0.1％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用。
用常规的苯酚—硫酸法测定该灵芝或/和云芝的发酵液中的糖肽复合物(polysaccharide-peptide complex，PSPc)的含量，达到2.0g/L以上。
对此PSPc进行鉴别：该糖肽复合物无臭、无甜味，有吸水性，冷水中溶解度较小，能溶于热水中，溶液呈弱酸性，不溶于乙醇等有机溶剂中；与百酮试剂作用后溶液呈蓝绿色，与苯酚—硫酸反应呈桔红色，与冰醋酸—浓硫酸反应呈紫红色，与硫酸—酸酐反应呈红色；在浓硫酸作用下与α-萘酚反应，在多糖溶液与硫酸界面出现紫色环，搅拌后溶液呈紫色。
本发明提供一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1(结晶精制品)，其为将灵芝或/和云芝的发酵液进一步浓缩及提取，具体步骤如下：
将上述灵芝或/和云芝的发酵液离心弃渣，取上清液在50～80℃减压浓缩至原体积的40～60％，然后再加入1～3倍体积的95％以上的酒精，搅拌后静置沉淀，离心分离，回收酒精上清液(可反复利用)，将乳白色纤维状沉淀物干燥后，即制得糖肽复合物(polysaccharide-peptide complex，PSPc)的提取物，其纯度达95％以上，即为糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1(结晶精制品)。
本发明提供另一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-2(吸附粉剂)，其为将灵芝或/和云芝的发酵液进一步浓缩后与载体混合，具体步骤如下：
将上述灵芝或/和云芝的发酵液在均质机中均质后，在50℃减压浓缩至原体积的50％，按发酵液体积与混合载体的重量比＝0.5～0.8∶1的比例混合均匀，于60～80℃下干燥(如流化干燥床)，粉碎到80目，即得到糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-2(吸附粉剂)；所述的混合载体(吸附剂)为按下述重量比例配制的混合物：轻质CaCO340～60wt％、玉米芯粉20～50wt％、玉米蛋白粉10～30wt％；该添加剂中PSPc的有效含量不低于4.0g/kg(吸附粉剂)。
本发明提供再一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-3(液剂)，其为将灵芝或/和云芝的发酵液添加辅料制得，具体步骤如下：
将上述灵芝或/和云芝的发酵液加入0.1～0.5v％的稳定剂，所述的稳定剂为选自醋酸、丙酸、柠檬酸中的一种或几种的混合物，制得糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-3(液剂)；该添加剂中PSPc的有效含量不低于3.5g/L。
本发明提供还一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-4(菌丝体粉剂)，由如下的步骤制得：
1)制备灵芝或/和云芝菌摇瓶种子液：同于上述灵芝或/和云芝的发酵液中的第1)步和第2)步；
2)制备固体发酵培养灵芝或/和云芝菌丝体：将菌丝体固态培养基和水按1∶1.2的重量比混合后放入不锈钢蒸饭盘内，于100℃蒸30分钟，移入无菌室，之后分摊于40cm×50cm的不锈钢曲盘内，料层厚度2～3cm，内冷却到25～28℃，将步骤1)所述的灵芝或/和云芝菌摇瓶种子液均匀地洒于固体发酵培养基料上接种，接种量为5～10％，然后分层放置于曲盘发酵托架上，控制室温为25～29℃，相对湿度80～90％，每2～3天翻动一次，培养4～10天，即得固体发酵培养的灵芝或/和云芝菌丝体；所述的菌丝体固态培养基的配比为：菜粕20～40％或/和棉粕20～40％或/和豆粕粉0.5～2％，木屑20～75％，麦麸20～40％或/和玉米粉0.5～5％，蔗糖0.5～2.0％，石膏粉0.5～1.0％；
3)灵芝或/和云芝菌丝体的后加工：将步骤2)制得的灵芝或/和云芝菌丝体干燥，并粉碎到80目以上，即得到糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-4(菌丝体粉剂)。
测定菌丝体中的PSPc：取适量上述固体发酵培养的灵芝或/和云芝菌丝体的湿菌体，用捣碎机将菌丝体破壁(经镜检证实)，按1∶20的量加入蒸馏水，95℃下浸提3次，每次浸提时间为3h，合并3次浸提液，经减压浓缩10倍后，加入三倍浓缩液体积的95％乙醇，静置一昼夜后离心，并用75％的乙醇反复洗涤沉淀物，至无还原糖洗出，此沉淀物即为粗多糖。用苯酚—硫酸法测定该粗多糖中PSPc的含量，结果为上述固体发酵培养的灵芝或/和云芝菌丝体的湿菌丝体中，PSPc含量不低于2.0g/kg，含水量为50％，其干菌丝体的PSPc的含量不低于4.0g/kg。
本发明提供一种上述糖肽复合物免疫强化饲料添加剂的用途，在畜禽水产等动物饲料中按每千克饲料5.0～10.0mg的量添加本发明产品，即可达到促进动物生长或提高生产效率，刺激免疫系统发育，增强免疫力和抗病力的效果。且在5.0～10.0mg(PSPc)/kg(饲料)的添加范围内添加使用，使用效果随添加量的增加而增加。
与现有的微生物添加剂(益生素)、酶制剂、益生元或化学益生素(寡聚糖)、酸化剂及中药草(或植物提取物)等替代抗生素的饲料添加剂相比，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂的优益之处在于：
1)本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂是利用灵芝或/和云芝混合发酵而得，含有丰富的糖肽复合物。现已知，作为有效成分的糖肽复合物具有广泛的生理功能，即能诱导免疫系统产生多种细胞因子，促进干扰素、白细胞介素等的生成；激活巨噬细胞、天然杀伤(NK)细胞和T、B淋巴细胞；激活补体系统；促进抗体产生等作用；糖肽复合物还具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、抗辐射以及改善动物生产性能等一系列作用。因而，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂可以提高动物的免疫抗病力和生产效率。
2)灵芝和云芝都是我国传统的名贵中草药，含有灵芝酸和纤维素酶，其中灵芝酸可以抑制7种致病菌(如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓假单胞菌、肺炎克雷伯菌、痢疾志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌)的生长，维持动物肠道的健康，纤维素酶可以提高动物对饲料的利用效率；除此之外，云芝和灵芝还富含氨基酸、维生素、矿物质和核苷等物质，具有保健功能，可以提高动物生产性能。
3)本发明提供的利用液体深层发酵法制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂，与以往采用的植物提取法不同，不受原料少的限制，可以进行大规模，且成分较稳定，从而大大降低糖肽复合物的生产成本和使用成本。
4)本发明利用真菌分泌的糖肽复合物等活性物质作为有效成分，经过浓缩、提取而得，不存在酶制剂及益生素的热稳定性差的弱点。
综上所述，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂无毒、无害、无残留、安全、高效，而且易于产业化、成本低廉，特别是克服抗生素引起的动物免疫功能抑制，抗病力下降，容易引起继发感染的缺点，并能明显促进动物免疫系统发育，增强动物的免疫力和抗病力。能广泛适用于预混料、粉料、颗粒料、膨化料。
具体实施方式
实施例1、制备灵芝的发酵液L-I
1)斜面培养活化：在15ml试管中，将灵芝的菌丝体接种于改良马铃薯葡萄糖琼脂(PGA)的斜面培养基上，在25℃下培养4天，直至菌丝体长满斜面；所述的改良马铃薯葡萄糖琼脂(PGA)的斜面培养基的具体制法为：马铃薯200克去皮切小片状或小块状，加入500ml沸水中煮沸30分钟后用4层纱布过滤，在滤汁中加入20克葡萄糖、2克酵母粉，然后加水定容至1000ml，分装，灭菌，备用；
2)制备摇瓶种子液：将步骤1)得到的长满菌丝体的琼脂斜面培养基接入约100ml液体培养基A中，在25℃、转速80转/分钟的摇床上培养2天，得到灵芝的摇瓶种子液；所述液体培养基A为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：葡萄糖4.0％，蛋白胨0.2％，KH2PO4 0.1％，MgSO4·7H2O 0.05％，VB1 0.002％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用；
3)制备一级发酵种子液：将步骤2)制备的摇瓶种子液按5％的体积比接入装有液体培养基B的种子发酵罐，在25℃、转速80转/分钟的摇床上培养2天，得到灵芝的一级发酵种子液；所述液体培养基B为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：葡萄糖0.5％，豆粕2.0％，玉米5.0％，饲料级酵母粉0.5％，KH2PO4 0.1％，MgSO4·7H2O 0.05％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用；
4)深层发酵：将步骤3)制备的一级发酵种子液按5％的体积比接入装有液体培养基C的发酵罐，在25℃发酵，用苯酚—硫酸法测定发酵液中的PSPc的含量，直到PSPc含量达到2.0g/L以上时，停罐，得到灵芝的发酵液L-I；所述液体培养基C为按下述比例料水重量体积比(W/V)配制的混合液：豆粕1.0％，鱼粉0.5％，玉米5.0％，麦麸0.5％，饲料级酵母粉0.5％，KH2PO4 0.1％，MgSO4·7H2O 0.05％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用。
用常规的苯酚—硫酸法测定该灵芝或/和云芝的发酵液中的糖肽复合物(polysaccharide-peptide complex，PSPc)的含量，达到2.0g/L以上。
对此PSPc进行鉴别：该糖肽复合物无臭、无甜味，有吸水性，冷水中溶解度较小，能溶于热水中，溶液呈弱酸性，不溶于乙醇等有机溶剂中；与百酮试剂作用后溶液呈蓝绿色，与苯酚—硫酸反应呈桔红色，与冰醋酸—浓硫酸反应呈紫红色，与硫酸—酸酐反应呈红色；在浓硫酸作用下与α-萘酚反应，在多糖溶液与硫酸界面出现紫色环，搅拌后溶液呈紫色。
实施例2、制备灵芝的发酵液L-II
1)斜面培养活化：在15ml试管中，将灵芝的菌丝体接种于改良马铃薯葡萄糖琼脂(PGA)的斜面培养基上，在27℃下培养7天，直至菌丝体长满斜面；所述的改良马铃薯葡萄糖琼脂(PGA)的斜面培养基的具体制法为：马铃薯250克去皮切小片状或小块状，加入500ml沸水中煮沸30分钟后用4层纱布过滤，在滤汁中加入20克葡萄糖、2克酵母粉，然后加水定容至1000ml，分装，灭菌，备用；
2)制备摇瓶种子液：将步骤1)得到的长满菌丝体的琼脂斜面培养基接入约100ml液体培养基A中，在27℃、转速120转/分钟的摇床上培养3天，得到灵芝的摇瓶种子液；所述液体培养基A为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：葡萄糖4.0％，蛋白胨0.2％，KH2PO4 0.15％，MgSO4·7H2O 0.075％，VB1 0.003％，121℃灭菌30分钟，冷却到27℃，备用；
3)制备一级发酵种子液：将步骤2)制备的摇瓶种子液按10％的体积比接入装有液体培养基B的种子发酵罐，在29℃、转速150转/分钟的摇床上培养4天，得到灵芝的一级发酵种子液；所述液体培养基B为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：葡萄糖0.9％，豆粕3.2％，玉米7.0％，饲料级酵母粉1.0％，KH2PO40.15％，MgSO47H2O 0.075％，121℃灭菌30分钟，冷却到29℃，备用；
4)深层发酵：将步骤3)制备的一级发酵种子液按10％的体积比接入装有液体培养基C的发酵罐，在29℃发酵，用苯酚—硫酸法测定发酵液中的PSPc的含量，直到PSPc含量达到2.0g/L以上时，停罐，得到灵芝的发酵液L-II；所述液体培养基C为按下述比例料水重量体积比(W/V)配制的混合液：豆粕1.5％，玉米8.0％，麦麸1.5％，饲料级酵母粉1.0％，KH2PO4 0.15％，MgSO4·7H2O 0.075％，121℃灭菌30分钟，冷却到29℃，备用。
使用实施例1的方法对此PSPc进行鉴别，得到相同的结果。
实施例3、制备灵芝的发酵液L-III
1)斜面培养活化：在15ml试管中，将灵芝的菌丝体接种于改良马铃薯葡萄糖琼脂(PGA)的斜面培养基上，在32℃下培养10天，直至菌丝体长满斜面；所述的改良马铃薯葡萄糖琼脂(PGA)的斜面培养基的具体制法为：马铃薯300克去皮切小片状或小块状，加入500ml沸水中煮沸30分钟后用4层纱布过滤，在滤汁中加入20克葡萄糖、2克酵母粉，然后加水定容至1000ml，分装，灭菌，备用；
2)制备摇瓶种子液：将步骤1)得到的长满菌丝体的琼脂斜面培养基接入约100ml液体培养基A中，在35℃、转速200转/分钟的摇床上培养5天，得到灵芝的摇瓶种子液；所述液体培养基A为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：葡萄糖4.0％，蛋白胨0.2％，KH2PO4 0.2％，MgSO4·7H2O 0.1％，VB1 0.005％，121℃灭菌30分钟，冷却到35℃，备用；
3)制备一级发酵种子液：将步骤2)制备的摇瓶种子液按20％的体积比接入装有液体培养基B的种子发酵罐，在35℃、转速200转/分钟的摇床上培养7天，得到灵芝的一级发酵种子液；所述液体培养基B为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：葡萄糖1.0％，豆粕4.0％，玉米10.0％，饲料级酵母粉1.5％，KH2PO40.2％，MgSO4·7H2O 0.1％，121℃灭菌30分钟，冷却到29℃，备用；
4)深层发酵：将步骤3)制备的一级发酵种子液按20％的体积比接入装有液体培养基C的发酵罐，在35℃发酵，用苯酚一硫酸法测定发酵液中的PSPc的含量，直到PSPc含量达到2.0g/L以上时，停罐，得到灵芝的发酵液L-III；所述液体培养基C为按下述比例料水重量体积比(W/V)配制的混合液：豆粕2.5％，玉米10.0％，麦麸2.0％，饲料级酵母粉1.5％，KH2PO4 0.2％，MgSO4·7H2O 0.1％，121℃灭菌30分钟，冷却到35℃，备用。
使用实施例1的方法对此PSPc进行鉴别，得到相同的结果。
实施例4、制备灵芝的发酵液L-IV
使用与实施例1相似的方法，将灵芝的菌丝体经斜面培养活化、制备摇瓶种子液、制备一级发酵种子液和深层发酵，制备灵芝的发酵液L-IV。
在步骤3)制备一级发酵种子液时的液体培养基B为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：豆粕1.0％，玉米5.0％，麦麸0.5％，饲料级酵母粉0.5％，KH2PO4 0.1％，MgSO4·7H2O 0.05％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用。
实施例5、制备灵芝的发酵液L-V
使用与实施例1相似的方法，将灵芝的菌丝体经斜面培养活化、制备摇瓶种子液、制备一级发酵种子液和深层发酵，制备灵芝的发酵液L-V。
在步骤3)制备一级发酵种子液时的液体培养基B为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：豆粕1.5％，玉米8.0％，麦麸1.0％，饲料级酵母粉1.0％，KH2PO4 0.13％，MgSO4·7H2O 0.09％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用。
实施例6、制备灵芝的发酵液L-VI
使用与实施例1相同的方法，将灵芝的菌丝体经斜面培养活化；
再使用与实施例3相似的方法，制备摇瓶种子液、制备一级发酵种子液和深层发酵，制备灵芝的发酵液L-VI。
在步骤3)制备一级发酵种子液时的液体培养基B为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：豆粕2.0％，玉米10.0％，麦麸1.5％，饲料级酵母粉1.5％，KH2PO4 0.2％，MgSO4·7H2O 0.1％，121℃灭菌30分钟，冷却到35℃，备用。
实施例7、制备灵芝的发酵液L-VII
使用与实施例1相似的方法，将灵芝的菌丝体经斜面培养活化、制备摇瓶种子液、制备一级发酵种子液和深层发酵，制备灵芝的发酵液L-VII。
在步骤3)制备一级发酵种子液时的液体培养基B为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：豆粕1.0％，玉米5.0％，麦麸0.5％，饲料级酵母粉0.5％，KH2PO4 0.1％，MgSO4·7H2O 0.05％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用。
在步骤4)深层发酵时的液体培养基C为按下述物料与水的重量体积比(W/V)配制的混合液：豆粕1.0％，鱼粉0.8％，玉米5.0％，麦麸0.5％，饲料级酵母粉0.5％，KH2PO4 0.1％％，MgSO4·7H2O 0.05％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用。
实施例8～13、制备云芝的发酵液Y-I～Y-VI
实施例8使用与实施例1相同的方法，由云芝的菌丝体制备云芝的发酵液Y-I。
实施例9使用与实施例2相同的方法，由云芝的菌丝体制备云芝的发酵液Y-II。
实施例10使用与实施例3相同的方法，由云芝的菌丝体制备云芝的发酵液Y-III。
实施例11使用与实施例4相同的方法，由云芝的菌丝体制备云芝的发酵液Y-IV。
实施例12使用与实施例5相同的方法，由云芝的菌丝体制备云芝的发酵液Y-V。
实施例13使用与实施例6相同的方法，由云芝的菌丝体制备云芝的发酵液Y-VI。
实施例14～24、制备灵芝和云芝的发酵液LY-I～LY-XI
按前述方法，将灵芝和云芝的菌丝体经斜面培养活化、制备摇瓶种子液、并按一定比例制备一级发酵种子液和深层发酵，制备灵芝和云芝的发酵液LY，制备条件列于表1。
实施例25、制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1-1(结晶精制品)
将实施例1制备的灵芝的发酵液L-I离心弃渣，取上清液在50℃减压浓缩至原体积的40％，然后再加入1倍体积的95％以上的工业酒精，搅拌后静置沉淀，离心分离，回收酒精上清液(可反复利用)，将乳白色纤维状沉淀物干燥后，即制得糖肽复合物(polysaccharide-peptide complex，PSPc)的提取物，其纯度达95％以上，即为糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1-1(结晶精制品)。
                             表1、灵芝和云芝的发酵液LY的制备
  实施例 发酵液 步骤1) 步骤2)               步骤3) 步骤4)
  灵芝和云芝种子液的比例 液体培养基B
  14   LY-I  同实施例4  同实施例4   2∶1   同实施例4  同实施例4
  15   LY-II  同实施例5  同实施例5   3∶2   同实施例5  同实施例5
  16   LY-III  同实施例3  同实施例3   1.5∶1   同实施例3  同实施例3
  17   LY-IV  同实施例3  同实施例3   2∶1   豆粕2.0％，玉米10.0％，麦麸1.5％，饲料级酵母粉1.5％，KH2PO4 0.2％，MgSO4·7H2O 0.1％，121℃灭菌30分钟，冷却到35℃，备用  同实施例3
  18   LY-V  同实施例1  同实施例1   1∶1   同实施例1  同实施例1
  19   LY-VI  同实施例1  同实施例1   1∶1   同实施例1  同实施例1
  20   LY-VII  同实施例2  同实施例2   1∶1   同实施例2  同实施例2
  21   LY-VIII  同实施例3  同实施例3   1∶1   同实施例3  同实施例3
  22   LY-IX  同实施例1  同实施例1   1∶1   同实施例3  同实施例2
  23   LY-X  同实施例2  同实施例2   1∶1   同实施例2  同实施例3
  24   LY-XI  同实施例3  同实施例3   1∶1   同实施例1  同实施例1
实施例26、制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1-3(结晶精制品)
将实施例2制备的灵芝的发酵液L-II离心弃渣，取上清液在65℃减压浓缩至原体积的50％，然后再加入2倍体积的95％以上的工业酒精，搅拌后静置沉淀，离心分离，回收酒精上清液(可反复利用)，将乳白色纤维状沉淀物干燥后，即制得糖肽复合物(PSPc)的提取物，其纯度达95％以上，即为糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1-3(结晶精制品)。
实施例27、制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1-5(结晶精制品)
将实施例3制备的灵芝的发酵液L-III离心弃渣，取上清液在80℃减压浓缩至原体积的60％，然后再加入3倍体积的95％以上的工业酒精，搅拌后静置沉淀，离心分离，回收酒精上清液(可反复利用)，将乳白色纤维状沉淀物干燥后，即制得糖肽复合物(PSPc)的提取物，其纯度达95％以上，即为糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1-5(结晶精制品)。
实施例28、制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1-2、PSPc-1-4、PSPc-1-6～PSPc-1-24(结晶精制品)
按照实施例25～27的方法制备制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1-2、PSPc-1-4、PSPc-1-6～PSPc-1-24(结晶精制品)，制备条件列于表2。
          表2、糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-1的制备
  实施例   使用的发酵液   制备方法   得到的饲料添加剂
  28   云芝发酵液Y-I   同实施例25   PSPc-1-2
  29   云芝发酵液Y-II   同实施例26   PSPc-1-4
  30   云芝发酵液Y-III   同实施例27   PSPc-1-6
  31   灵芝发酵液L-IV   同实施例25   PSPc-1-7
  32   云芝发酵液Y-IV   同实施例25   PSPc-1-8
  33   灵芝和云芝的发酵液LY-I   同实施例25   PSPc-1-9
  34   灵芝发酵液L-V   同实施例25   PSPc-1-10
  35   云芝发酵液Y-V   同实施例25   PSPc-1-11
  36   灵芝和云芝的发酵液LY-II   同实施例25   PSPc-1-12
  37   灵芝发酵液L-VI   同实施例27   PSPc-1-13
  38   云芝的发酵液L-VI   同实施例27   PSPc-1-14
  39   灵芝和云芝的发酵液LY-III   同实施例27   PSPc-1-15
  40   灵芝和云芝的发酵液LY-IV   同实施例27   PSPc-1-16
  41   灵芝发酵液L-VII   同实施例25   PSPc-1-17
  42   灵芝和云芝的发酵液LY-V   同实施例25   PSPc-1-18
  43   灵芝和云芝的发酵液LY-VI   同实施例25   PSPc-1-19
  44   灵芝和云芝的发酵液LY-VII   同实施例26   PSPc-1-20
  45   灵芝和云芝的发酵液LY-VIII   同实施例27   PSPc-1-21
  46   灵芝和云芝的发酵液LY-IX   同实施例25   PSPc-1-22
  47   灵芝和云芝的发酵液LY-X   同实施例26   PSPc-1-23
  48   灵芝和云芝的发酵液LY-XI   同实施例27   PSPc-1-24
实施例49～72、制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-2-1～PSPc-2-24(吸附粉剂)
将上述灵芝或/和云芝的发酵液在均质机中均质后，在50℃减压浓缩至原体积的50％，按发酵液体积与混合载体的体积/重量比＝0.5～0.8∶1的比例混合均匀，于60～80℃下干燥(如流化干燥床)，粉碎到80目，即得到糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-2(吸附粉剂)；所述的混合载体(吸附剂)为按下述重量比例配制的混合物：轻质CaCO3 40～60wt％、玉米芯粉20～50wt％、玉米蛋白粉10～30wt％；该添加剂中PSPc的有效含量不低于4.0g/kg(吸附粉剂)。
具体的制备条件如表3所列，利用载体吸附灵芝和/或云芝发酵液制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-2-1～PSPc-2-24(吸附粉剂)，该添加剂中PSPc的有效含量不低于4.0g/kg。
            表3、糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-2的制备
  实施例 使用的发酵液 载体的组成及配比(wt％)   发酵液与混合载体的体积/重量比   干燥温度(℃) 得到的饲料添加剂
49 灵芝发酵液L-I   轻质CaCO340％玉米芯粉30％玉米蛋白粉30％ 0.5∶1 60 PSPc-2-1
50 云芝发酵液Y-I   轻质CaCO350％玉米芯粉30％玉米蛋白粉20％ 0.6∶1 65 PSPc-2-2
51 灵芝发酵液L-II   轻质CaCO360％玉米芯粉30％玉米蛋白粉10％ 0.7∶1 70 PSPc-2-3
52 云芝发酵液Y-II   轻质CaCO360％玉米芯粉20％玉米蛋白粉20％ 0.8∶1 75 PSPc-2-4
53 灵芝发酵液L-III   轻质CaCO350％玉米芯粉40％玉米蛋白粉20％ 0.5∶1 80 PSPc-2-5
54 云芝发酵液Y-III   轻质CaCO340％玉米芯粉50％玉米蛋白粉10％ 0.6∶1 60 PSPc-2-6
  55   灵芝发酵液L-IV   同实施例49   0.7∶1   65   PSPc-2-7
  56   云芝发酵液Y-IV   同实施例50   0.8∶1   70   PSPc-2-8
  57   灵芝和云芝的发酵液LY-I   同实施例51   0.5∶1   75   PSPc-2-9
  58   灵芝发酵液L-V   同实施例52   0.6∶1   80   PSPc-2-10
  59   云芝发酵液Y-V   同实施例53   0.7∶1   60   PSPc-2-11
  60   灵芝和云芝的发酵液LY-II   同实施例54   0.8∶1   65   PSPc-2-12
  61   灵芝发酵液L-VI   同实施例49   0.5∶1   70   PSPc-2-13
  62   云芝发酵液Y-VI   同实施例50   0.6∶1   75   PSPc-2-14
  63   灵芝和云芝的发酵液LY-III   同实施例51   0.7∶1   80   PSPc-2-15
  64   灵芝和云芝的发酵液LY-IV   同实施例52   0.8∶1   60   PSPc-2-16
  65   灵芝发酵液L-VII   同实施例53   0.5∶1   65   PSPc-2-17
  66   灵芝和云芝的发酵液LY-V   同实施例54   0.6∶1   70   PSPc-2-18
  67   灵芝和云芝的发酵液LY-VI   同实施例49   0.7∶1   75   PSPc-2-19
  68   灵芝和云芝的发酵液LY-VII   同实施例50   0.8∶1   60   PSPc-2-20
  69   灵芝和云芝的发酵液LY-VIII   同实施例51   0.5∶1   65   PSPc-2-21
  70   灵芝和云芝的发酵液LY-IX   同实施例52   0.6∶1   70   PSPc-2-22
  71   灵芝和云芝的发酵液LY-X   同实施例53   0.7∶1   75   PSPc-2-23
  72   灵芝和云芝的发酵液LY-XI   同实施例54   0.8∶1   80   PSPc-2-24
实施例73～96、制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-3-1～PSPc-3-24(液剂)
将上述灵芝或/和云芝的发酵液加入0.1～0.5v％的稳定剂—醋酸0.2％～0.5％和/或丙酸0.1％～0.5％和/或柠檬酸0.1％～0.5％，制得糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-3(液剂)。
具体的制备条件如表4所列，制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-3-1～PSPc-3-24(液剂)，该添加剂中PSPc的有效含量不低于3.5g/L。
           表4、糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-3的制备
实施例 使用的发酵液   稳定剂的组成及添加量(V％)   得到的饲料添加剂
73 灵芝发酵液L-I   丙酸0.1％柠檬酸0.2％醋酸0.3％ PSPc-3-1
74 云芝发酵液Y-I   丙酸0.3％柠檬酸0.1％醋酸0.5％ PSPc-3-2
75 灵芝发酵液L-II   丙酸0.5％柠檬酸0.1％ PSPc-3-3
  醋酸0.1％
76 云芝发酵液Y-II   丙酸0.1％柠檬酸0.5％醋酸0.2％ PSPc-3-4
77 灵芝发酵液L-III   丙酸0.1％柠檬酸0.5％ PSPc-3-5
78 云芝发酵液Y-III   丙酸0.5％柠檬酸0.1％ PSPc-3-6
79 灵芝发酵液L-IV   醋酸0.1％柠檬酸0.5％ PSPc-3-7
80 云芝发酵液Y-IV   醋酸0.5％柠檬酸0.1％ PSPc-3-8
81 灵芝和云芝的发酵液LY-I   丙酸0.1％醋酸0.5％ PSPc-3-9
82 灵芝发酵液L-V   丙酸0.5％醋酸0.1％ PSPc-3-10
  83   云芝发酵液Y-V   醋酸0.1％   PSPc-3-11
  84   灵芝和云芝的发酵液LY-II   醋酸0.3％   PSPc-3-12
  85   灵芝发酵液L-VI   醋酸0.5％   PSPc-3-13
  86   云芝发酵液Y-VI   丙酸0.1％   PSPc-3-14
  87   灵芝和云芝的发酵液LY-III   丙酸0.3％   PSPc-3-15
  88   灵芝和云芝的发酵液LY-IV   丙酸0.5％   PSPc-3-16
  89   灵芝发酵液L-VII   柠檬酸0.1％   PSPc-3-17
  90   灵芝和云芝的发酵液LY-V   柠檬酸0.3％   PSPc-3-18
  91   灵芝和云芝的发酵液LY-VI   柠檬酸0.5％   PSPc-3-19
92 灵芝和云芝的发酵液LY-VII   丙酸0.3％柠檬酸0.2％醋酸0.3％ PSPc-3-20
93 灵芝和云芝的发酵液LY-VIII   丙酸0.1％柠檬酸0.4％醋酸0.5％ PSPc-3-21
94 灵芝和云芝的发酵液LY-IX   柠檬酸0.2％醋酸0.4％ PSPc-3-22
95 灵芝和云芝的发酵液LY-X   丙酸0.1％醋酸0.3％ PSPc-3-23
96 灵芝和云芝的发酵液LY-XI   柠檬酸0.2％醋酸0.3％ PSPc-3-24
实施例97～120、制备糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-4-1～PSPc-4-24(菌丝体粉剂)
1)制备灵芝或/和云芝菌摇瓶种子液：按照实施例1～24的方法制备灵芝或/和云芝菌摇瓶种子液；
2)制备固体发酵培养灵芝或/和云芝菌丝体：将菌丝体固态培养基和水按1∶1.2的重量比混合后放入不锈钢蒸饭盘内，于100℃蒸30分钟，移入无菌室，之后分摊于40cm×50cm的不锈钢曲盘内，料层厚度2～3cm，内冷却到25～28℃，将步骤1)所述的灵芝或/和云芝菌摇瓶种子液均匀地洒于固体发酵培养基料上接种，接种量为5～10％，然后分层放置于曲盘发酵托架上，控制室温为25～29℃，相对湿度80～90％，每2～3天翻动一次，培养4～10天，即得固体发酵培养的灵芝或/和云芝菌丝体；所述的菌丝体固态培养基的配比为：菜粕20～40％或/和棉粕20～40％或/和豆粕粉0.5～2％，木屑20～75％，麦麸20～40％或/和玉米粉0.5～5％，蔗糖0.5～2.0％，石膏粉0.5～1.0％；
3)灵芝或/和云芝菌丝体的后加工：将步骤2)制得的灵芝或/和云芝菌丝体干燥，并粉碎到80目以上，即得到糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-4(菌丝体粉剂)。
具体的制备条件如表5所列，制得糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-4-1～PSPc-4-24(菌丝体粉剂)，该添加剂中PSPc的有效含量不低于4.0g/kg。
              表5、糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-4的制备
  实施例 使用的种子液 固体培养基组成(wt％)   种子液接种量(V/wt％)   培养温度(℃)   培养时间(天) 得到的饲料添加剂
97 实施例1的灵芝菌种子液   菜粕20     麦麸20棉粕20     蔗糖0.5豆粕粉0.5  石膏粉0.5木屑38     玉米粉0.5 5 25 4 PSPc-4-1
98 实施例8的云芝菌种子液   菜粕20     麦麸20棉粕20     蔗糖0.5豆粕粉0.5  石膏粉0.5木屑38     玉米粉0.5 5 25 4 PSPc-4-2
99 实施例2的灵芝菌种子液   棉粕20     麦麸20豆粕粉1.0  蔗糖0.5木屑58     石膏粉0.5 7 27 5 PSPc-4-3
100 实施例9的云芝菌种子液   棉粕20     麦麸20豆粕粉1.0  蔗糖0.5木屑58     石膏粉0.5 7 27 5 PSPc-4-4
101 实施例3的灵芝菌种子液   菜粕20     麦麸20豆粕粉1.0  蔗糖0.5木屑58     石膏粉0.5 8 28 6 PSPc-4-5
102 实施例10的云芝菌种子液   菜粕20     麦麸20豆粕粉1.0  蔗糖0.5木屑58     石膏粉0.5 8 28 6 PSPc-4-6
103 实施例4的灵芝菌种子液   豆粕粉1.0  麦麸20木屑75     蔗糖0.5玉米面3    石膏粉0.5 10 26 7 PSPc-4-7
104 实施例11的云芝菌种子液   豆粕粉1.0  麦麸20木屑75     蔗糖0.5玉米面3    石膏粉0.5 10 26 7 PSPc-4-8
105   实施例14的灵芝菌和云芝菌种子液   豆粕粉1.0  麦麸20木屑75     蔗糖0.5玉米面3    石膏粉0.5 9 26 8 PSPc-4-9
106 实施例5的灵芝菌种子液   豆粕粉1.0  麦麸20木屑75     蔗糖0.5玉米面3    石膏粉0.5 9 26 8 PSPc-4-10
107 实施例12的云芝菌种子液   豆粕粉1.0  麦麸33木屑60     蔗糖0.5玉米面5    石膏粉0.5 6 28 9 PSPc-4-11
108   实施例15的灵芝菌和云芝菌种子液   豆粕粉1.0  麦麸33术屑60     蔗糖0.5玉米面5    石膏粉0.5 6 28 9 PSPc-4-12
109 实施例6的灵芝菌种子液   豆粕粉2.0  麦麸40木屑51     蔗糖1.2玉米面5    石膏粉0.8 6 28 9 PSPc-4-13
110 实施例13的云芝菌种子液   豆粕粉2.0  麦麸40木屑51     蔗糖1.2玉米面5    石膏粉0.8 6 28 9 PSPc-4-14
111   实施例16的灵芝菌和云芝菌种子液   豆粕粉1.5  麦麸35木屑60     蔗糖1.5玉米面2    石膏粉1.0 10 27 10 PSPc-4-15
112   实施例17的灵芝菌和云芝菌种子液   豆粕粉1.5  麦麸35木屑57     蔗糖1.5玉米面5    石膏粉1.0 10 27 10 PSPc-4-16
113 实施例7的灵芝菌种子液   棉粕30     麦麸15豆粕粉1.5  蔗糖2.0木屑51     石膏粉0.5 7 27 5 PSPc-4-17
114   实施例18的灵芝菌和云芝菌种子液   棉粕30     麦麸15豆粕粉1.5  蔗糖2.0木屑51     石膏粉0.5 7 27 5 PSPc-4-18
115   实施例19的灵芝菌和云芝菌种子液   棉粕40     麦麸15豆粕粉1.3  蔗糖2.0木屑41     石膏粉0.8 8 29 8 PSPc-4-19
116   实施例20的灵芝菌和云芝菌种子液   棉粕40     麦麸15豆粕粉1.3  蔗糖2.0木屑41     石膏粉0.8 8 29 8 PSPc-4-20
117   实施例21的灵芝菌和云芝菌种子液   菜粕30     麦麸15豆粕粉1.5  蔗糖20木屑       石膏粉1.050.5 5 27 7 PSPc-4-21
118   实施例22的灵芝菌和云芝菌种子液   菜粕30     麦麸15豆粕粉1.5  蔗糖2.0木屑       石膏粉1050.5 5 27 7 PSPc4-22
119   实施例23的灵芝菌和云芝菌种子液   菜粕40    麦麸15豆粕粉1.5 蔗糖2.0木屑41   石膏粉0.5 8 29 8 PSPc-4-23
120   实施例24的灵芝菌和云芝菌种子液   菜粕40    麦麸15豆粕粉1.5 蔗糖2.0木屑41   石膏粉0.5 8 29 8 PSPc-4-24
实施例121、本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂对蛋鸡抗病力、生产性能和蛋品质的影响
在配方如表6所示的蛋鸡基础日粮中加入本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂，不同的PSPc产品均添加于蛋约预混料(由微量元素、维生素等组成)中，PSPc的含量均达表7中所标示的水平。
将2500只海南灰试验蛋鸡(60周龄，产蛋鸡后期)随机分成10个组(空白对照组和添加PSPc类组)，每组5个重复，每个重复50只鸡。试验期4周。将各组的产蛋率、蛋重、死亡鸡数、以及蛋黄色度、蛋壳厚度、浓蛋白高度列于表7。
                      表6、基础日粮的饲料配方及营养水平
饲料原料 玉米 豆粕 麦麸 石粉   磷酸氢钙 食盐 植物油 1％预混料*
  配比％   58.72   26.0   2.0   84   1.5   0.34   2.0   1.0
营养指标   代谢能(Mcal/kg) 粗蛋白质(％)   钙(％)   总磷(％)
  营养水平   2.71   17.26   3.50   0.56
                             表7、试验组与对照组间的生产性能和蛋品质比较
  分组   1   2   3   4   5   6   7   8   9   10
性能指标   空白对照0mg/kg   添加PSPc-1-15mg/kg   添加PSPc-1-28mg/kg   添加PSPc-1-910mg/kg   添加PSPc-2-35mg/kg   添加PSPc-2-47mg/kg   添加PSPc-2-1610m/kg   添加PSPc-4-75mg/kg   添加PSPc-4-88mg/kg 添加PSPc-4-1810mg/kg
  蛋重(g)   61.60   63.08   64.19   64.23   63.89   64.12   64.45   63.58   64.17   64.88
  浓蛋白高度   5.55   5.78   5.58   5.98   5.87   5.89   5.90   5.68   5.75   5.98
  蛋黄色度   5.55   7.46   7.68   8.01   7.32   7.58   8.21   7.16   7.76   8.23
  蛋壳强度   3.22   3.59   3.67   3.71   3.61   3.69   3.73   3.57   3.65   3.72
  蛋壳厚度   364.12   377.04   379.87   380.13   379.45   383.55   386.63   378.44   381.43   386.87
  产蛋率   82.3   85.5   86.3   86.5   85.3   85.9   86.1   85.6   86.4   86.7
  平均蛋重   63.5   64.3   64.6   64.8   64.4   64.7   64.8   63.8   64.5   64.9
  料蛋比   2.51   2.25   2.23   2.24   2.21   2.26   2.31   2.33   2.28   2.26
  抗城疫抗体   0.76   1.12   1.23   1.31   1.22   1.19   1.25   1.12   1.32   1.38
从表7所列结果可以看出，饲喂本发明的不同产品(PSPc-1类、PSPc-2类、PSPc-4类)的各项指标均明显好于普通配合饲料，特别是蛋黄色度和新城疫疫苗的抗体水平显著高于对照组，说明本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂在提高蛋鸡的生产性能和蛋品质、以及提高蛋鸡的抗体水平和抗病力方面均有明显的良好作用。
实施例122、本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂对肉鸡在生产性能和免疫系统发育(抗病力)上的影响
在不同周龄的肉仔鸡中添加不同剂的PSPc产品(见表9)，而对照组不添加，检测其对免疫器官生长发育、抗体水平(抗病力)和生产性能等指标的影响。试验日粮配方及达到的营养水平见表8。试验结果列于表9。
                 表8、肉仔鸡日粮配方及达到的营养水平
原料名称      配比(％) 营养素         营养水平
  0～3周   4～6周   0～3周   4～6周
  玉米   55.05   62.50   代谢能(KCal/kg)   3.10   3.10
  豆粕   32.00   25.35   粗蛋白(％)   21.80   20.00
  小麦麸   2.30   3.00   钙(％)   1.05   1.00
  鱼粉(进口)   3.00   2.50   有效磷(％)   0.51   0.45
  石粉   0.80   0.82   赖氨酸(％)   1.20   1.05
  植物油   3.40   3.12   蛋氨酸(％)   0.54   0.47
  蛋氨酸   0.16   0.07   蛋+胱(％)   0.90   0.75
  骨粉   1.47   1.32   食盐(％)   0.38   0.36
  食盐   0.25   0.25
  复合预混料   1.00   1.00
注：每公斤日粮含铜11mg，碘0.44mg，铁110mg，锰100mg，硒0.25mg，锌120mg，钴0.40mg，VA8800IU，VD33000IU，VE22.5IU，VK31.8mg，生物素0.2mg，叶酸1.0mg，尼克酸50mg，泛酸11mg，核黄素6.6mg，硫胺素3.0mg，吡哆醇4.4mg，VB120.02mg，胆碱1300mg。
            表9、对6周龄肉仔鸡生产性能和免疫器官发育水平的影响
  分组   PSPc种类及添加量(％)   体重(g)   料重比(F/G) 胸腺重(g/kg体重)   脾脏重(g/kg体重)   法氏囊重(g/kg体重)
  1   对照组(0mg/kg)   1302.2   2.29 1.66   1.96   2.18
  2   PSPc-3-5(10mg/kg)   1418.0   2.13 1.99   2.67   2.65
  3   PSPc-3-6(8mg/kg)   1415.7   2.15 1.96   2.52   2.62
  4   PSPc-3-12(5mg/kg)   1408.4   2.19 1.93   2.47   2.60
  5   PSPc-3-24(9mg/kg)   1413.1   2.13 1.98   2.64   2.64
  6   PSPc-1-10(5mg/kg)   1410.2   2.16 1.93   2.43   2.61
  7   PSPc-1-14(10mg/kg)   1419.6   2.12 1.98   2.63   2.63
  8   PSPc-2-13(5mg/kg)   1411.2   2.14 1.97   2.55   2.55
  9   PSPc-2-15(10mg/kg)   1421.3   2.12 2.01   2.64   2.67
  10   PSPc-4-17(5mg/kg)   1415.5   2.15 1.94   2.51   2.62
  11   PSPc-4-19(10mg/kg)   1417.4   2.13 1.99   2.76   2.66
从表9可看出，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂的不同产品均可显著提高肉仔鸡的生长速度、饲料的利用率，并能显著促进胸腺、脾脏和法氏囊的发育，提高其相对重量即免疫器官指数，说明本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂可刺激免疫器官的发育。而免疫器官是发挥免疫细胞免疫和体液免疫的重要器官和物质基础，免疫器官重量的增即可说明本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂可提高动物的抗病力。综上所述，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂促进肉鸡生长和提高抗病力是本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂作为抗生素替代品的2个非常重要的指标。
实施例123、本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂对草鱼育成期的生产性能和成活率的影响
草鱼育成期的配方：试验组为鱼粉15％，大豆粕25％，棉籽饼15％，米糠20％，菜籽饼10％，混麸11.5％，混合维生素1.0％，混合矿物盐2.2％，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂PSPc-4-20，10mg/kg；对照组为不添加本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂。配方中的粗蛋白含量3为2.58％。
试验结果表明，添加本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂的试验组的饲料系数为1.83，而对照组的饲料系数为1.94，有明显改善；试验组的日增重比对照组提高12.3％，成活率提高5.7％，且试验组的整齐度好，死亡率低，抗病能力强，说明本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂对草鱼育成期的生产性能和成活率均有良好的影响。
实施例124、本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂在奶牛产奶期对产奶量和乳房炎发生率的影响
根据奶牛的营养需要，配制饲料，配方见表10，日粮的营养成分和营养浓度见表11。将体重650公斤左右的60头3胎奶牛，分成2组，即试验组和对照组，每组30头，每组分为3个重复，每个重复10头，饲养于标准奶牛场中，在试验组日粮中添加了10mg/kg的不同的本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂，而对照组不添加。连续30天，每天检测其产奶量和乳房炎发生率，然后进行对比分析，结果列于表12。
                  表10、产奶期日粮组成
  日粮组成类型   饲料名称   对照组配比％   试验组配比％
精饲料组成   玉米麸皮豆粕骨粉石粉食盐1％奶牛复合预混料   5219.8243.00.50.51.0   5220243.00.50.51.0
  合计   100％   100％
粗饲料组成   上述混饲料玉米青贮羊草啤酒糟   11kg25kg3kg10kg   11kg25kg3kg10kg
                   表11、日粮配方的营养成分及营养浓度
项目 干物质(kg)   奶牛能量单位(个)   产奶净能(MJ)   粗蛋白质(g)   钙(g)   磷(g)   粗纤维(g)
  营养成分营养浓度   20.5   43.312.10   135.916.6   3244.5015.77％   180.20.88％   125.20.61％   2900.314.90％
                 表12、产奶量和乳房炎发生率
分组和处理 平均产奶量(kg)   乳房炎发生率(％)
  1组(对照组，0mg/kg)   32.86   5.73
  2组(PSPc-1-3，10mg/kg)   34.76   1.19
  3组(PSPc-1-22，10mg/kg)   34.13   1.31
  4组(PSPc-1-23，10mg/kg)   35.03   1.50
  5组(PSPc-2-10，10mg/kg)   34.88   1.32
  6组(PSPc-2-11，10mg/kg)   34.35   1.33
  7组(PSPc-2-12，10mg/kg)   35.12   1.45
  8组(PSPc-3-7，10mg/kg)   35.08   1.52
  9组(PSPc-3-8，10mg/kg)   34.75   1.22
  10组(PSPc-3-21，10mg/kg)   34.82   1.43
  11组(PSPc-4-1，10mg/kg)   35.18   1.39
  12组(PSPc-4-2，10mg/kg)   34.54   1.32
  13组(PSPc-4-23，10mg/kg)   35.23   1.47
从表12的数据可以看出，在奶牛日粮中添加不同类型的本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂产品，可显著提高奶牛的日平均产奶量，并明显降低奶牛的乳房炎发生率。试验表明，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂可显著提高奶牛的日平均产奶量和抗病力(免疫力)。
实施例125、本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂对断奶仔猪的生产性能和死淘率的影响
(1)试验动物与设计：选取体重接近健康的35日龄断奶仔猪(公母各半)180头分为五个处理，每个处理6个重复，每个重复6头猪。试验期5周，试验设计见表13。
                      表13、试验方案
Figure C20041004271900261
注：试验日粮采用试验场现行日粮为基础日粮，PSPc添加于预混料中。
(2)饲养管理与检测指标：第一阶段(43-49天)为预饲期，每日观测腹泻情况及发病情况，35天称每头猪的最初体重并分圈，记录每个重复的初始体重、平均体重及初始料重，42天称量每个重复的总体重、平均体重及剩余料量(空腹8小时)，计算第一周的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)及ADG/ADFI；在第二周(50-56天)始(49天)称量每个重复的总体重、平均体重及剩余料量(空腹8小时)；同理，在56天、63天分别称量每个重复的总体重、平均体重及剩余料量(空腹8小时)，计算各周的ADG、ADFI及ADG/ADFI。然后计算第一阶段的平均日增重、平均日采食量、饲料转化效率(料重比)和发病死亡情况。结果列于表14。
              表14、第一阶段平均日增重、日采量饲料转化效率及死淘率
  组别/添加量(mg/kg)   初始平均体重(Kg)   平均体重(kg)   ADG(g) 料重比   平均日采食量(g) 死淘头数
  空白对照组   9.15±0.15   15.92±0.34   271±8   2.23±0.10   603±24   3
  金霉素对照组   8.89±0.09   17.05±0.55   326±20   1.68±0.08   547±16   1
  PSPc-1-6   8.91±0.13   16.54±0.42   305±11   1.76±0.08   538±5   1
  PSPc-1-7   8.99±0.15   17.40±0.61   336±21*   1.68±0.07   566±12*   0
  PSPc-1-18   9.00±0.12   16.92±0.25   317±10   1.84±0.17   583±36   0
注：初始分组时每个重复中有8头猪，试验中如有猪只死淘者，则根据淘汰前平均采食量将此猪数据剔除。整个试验期第一阶段空白组共死淘3头；抗生素组共死淘1头；PSPc-1-6组(C组)共死淘0头；其它组没有死亡。
从表14可看出，添加本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂可显著提高断奶仔猪的平均日增重、日采食量，二者均高于抗生素组对照组，差异显著(p＜0.05)，且死淘率显著低于对照组(p＜0.01)，与抗生素对照组同效。试验表明，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂具有明显的促生长效果和防病效果，具有替代抗生素的效果。
实施例126、本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂对肉鸡免疫的影响
为检验本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂在肉鸡上的免疫增强效果和在畜牧业上的应用前景，试验选用爱维因肉鸡1日龄500羽，分5组，每组100只肉鸡，分5个重复，每个重复20只鸡，喂以5种不同的日粮，即A组为空白对照组，B组为抗生素组，C组每吨饲料添加糖肽复合物2.35mg/kg，D组每吨饲料添加本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂7.05mg/kg，E组每吨饲料添加本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂11.75mg/kg。试验期7周。检测指标为血淋巴细胞增值活力、牛血清白蛋白抗体滴度试验，结果列于表15、表16和表17。
                    表15、对鸡血淋巴细胞增殖活力的影响
 添加物及浓度(mg/kg)   空白对照(不添加)   抗生素对照(安来霉素，3.2)   PSPc-3-10(2.35)   PSPc-3-10(7.05)   PSPc-3-10(11.75)
 T细胞活力(OD值)   2.362   2.412   2.320   2.654   2.872
由表15可知，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂在饲料中的添加可以明显增强T细胞活力，但T细胞活力与活性肽添加量呈正相关，活性肽浓度在11.75mg/kg时T细胞活力最高，说明活性肽增强免疫功能的最适添加量是11.75mg/kg。
                   表16、对鸡血牛血清白蛋白抗体滴度的影响
  添加物及浓度(mg/kg)   空白(不添加)   抗生素(安来霉素，3.2)   PSPc-3-10(2.35)   PSPc-3-10(7.05)   PSPc-3-10(11.75)
  抗体滴度(OD值)   1.112   1.235   1.725   3.546   6.555
由表16可知，本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂在饲料中的添加可以明显增强抗体滴度水平，且抗体滴度水平与糖肽复合物添加量呈正相关。
                  表17、肉鸡生产性能试验结果
  添加物及浓度(mg/kg)   空白对照(不添加)   抗生素对照(安来霉素，3.2)   PSPc-3-10(2.35)   PSPc-3-10(7.05)   PSPc-3-10(11.75)
  初重(g)   39.1   39.1   39.1   39.1   39.1
                                                   1-4周
  末重(g)   935.7   939.0   954.4   977.1   981.0
  日增重(g)   32.02±4.13ABb   32.14±2.47ABab   32.72±3.98Aa   35.72±4.24Aa   37.13±5.34ABab
  日采食量(g)   63.89±37.07   64.36±43.52   63.45±32.91   65.02±36.05   67.43±10.13
  料肉比   2.00±0.05   2.00±0.30   1.92±0.07   1.91±0.07   1.94±0.03
  死亡只数   4   4   1   2   1
                                                      5-7周
  末重(g)   2352   2370   2350   2370   2374
  日增重(g)   67.44±7.42   68.14±5.76   67.43±4.11   68.14±5.76   69.38±7.16
  日采食量(g)   162.52±18.32   162.76±37.39   159.48±41.76   162.76±37.39   162.88±43.52
  料肉比   2.41±0.06   2.39±0.04   2.35±0.03   2.39±0.04   2.28±0.03
  死亡只数   6   5   4   3   3
注：A，B，C间p＜0.01，a，b，c间p＜0.05。
从表17可看出，在肉仔鸡饲料中添加本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂的可以明显提高肉仔鸡的日增重、终体重和饲料利用率，且提高的程度与本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂的添加量呈正相关，并可明显降低肉仔鸡的死亡率。
综合以上实例，说明本发明提供的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂是一种既能提高畜禽和水产动物生产性能，又能增强免疫力或抗病力的免疫增强型绿色饲料添加剂。

Claims (7)

1、一种灵芝或/和云芝的发酵液，由如下的步骤制得：
1)斜面培养活化：将灵芝或/和云芝的菌丝体接种于改良马铃薯葡萄糖琼脂的斜面培养基上，在25～32℃下培养4～10天，直至菌丝体长满斜面；
2)制备摇瓶种子液：将步骤1)得到的长满菌丝体的琼脂斜面培养基接入液体培养基A中，在25～35℃、转速80～200转/分钟的摇床上培养2～5天，得到灵芝或/和云芝的摇瓶种子液；
所述的液体培养基A为按下述物料与水的重量体积比配制的混合液：葡萄糖4.0％，蛋白胨0.2％，KH2PO4 0.1～0.2％，MgSO4·7H2O 0.05～0.1％，VB1 0.002～0.005％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用；
3)制备一级发酵种子液：将步骤2)制备的摇瓶种子液按5～20％的体积比接入液体培养基B，在25～35℃、转速80～200转/分钟的摇床上培养2～7天，得到灵芝或/和云芝的一级发酵种子液；
所述的液体培养基B为按下述物料与水的重量体积比配制的混合液：葡萄糖0.5～1.0％，豆粕2.0～4.0％，玉米5.0～10.0％，饲料级酵母粉0.5～1.5％，KH2PO4 0.1～0.2％，MgSO4·7H2O 0.05～0.1％；或者是豆粕1.0～2.0％，玉米5.0～10.0％，麦麸0.5～1.5％，饲料级酵母粉0.5～1.5％，KH2PO4 0.1～0.2％，MgSO4.7H2O 0.05～0.1％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用；
4)深层发酵：将步骤3)制备的一级发酵种子液按5～20％的体积比接入液体培养基C，在25～35℃发酵2～7天，得到灵芝或/和云芝的发酵液；
所述的液体培养基C为按下述比例料水重量体积比配制的混合液：豆粕1.0～2.5％或/和鱼粉0.5～1.0％，玉米5.0～10.0％，麦麸0.5～2.0％，饲料级酵母粉0.5～1.5％，KH2PO4 0.1～0.2％，MgSO4·7H2O 0.05～0.1％，121℃灭菌30分钟，冷却到25℃，备用。
2、如权利要求1所述的灵芝或/和云芝的发酵液，其特征在于，所述步骤1)的改良马铃薯葡萄糖琼脂的斜面培养基由下述方法制得：马铃薯200～300克去皮切小片状或小块状，加入500ml沸水中煮沸30分钟后用4层纱布过滤，在滤汁中加入20克葡萄糖、2克酵母粉，然后加水定容至1000ml，分装，灭菌，备用。
3、一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂，其为将权利要求1所述的灵芝或/和云芝的发酵液进一步浓缩及提取的制得的糖肽复合物的有效含量不低于2.0g/L的结晶精制品添加剂，具体步骤如下：
将权利要求1所述的灵芝或/和云芝的发酵液离心弃渣，取上清液在50～80℃减压浓缩至原体积的40～60％，然后再加入1～3倍体积的95％以上的酒精，搅拌后静置沉淀，离心分离，将乳白色纤维状沉淀物干燥后，制得糖肽复合物免疫强化饲料添加剂。
4、一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂，其为将权利要求1所述的灵芝或/和云芝的发酵液进一步浓缩后与载体混合制得的糖肽复合物的有效含量不低于4.0g/L的吸附粉剂，具体步骤如下：
将权利要求1所述的灵芝或/和云芝的发酵液在均质机中均质后，在50℃减压浓缩至原体积的50％，按发酵液体积与混合载体的重量比＝0.5～0.8∶1的比例混合均匀，于60～80℃下干燥后，粉碎到80目，得到糖肽复合物免疫强化饲料添加剂；所述的混合载体为按下述重量比例配制的混合物：轻质CaCO3 40～60wt％、玉米芯粉20～50wt％、玉米蛋白粉10～30wt％。
5、一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂，其为将权利要求1所述的灵芝或/和云芝的发酵液添加辅料制得的糖肽复合物的有效含量不低于3.5g/L的液剂添加剂，具体步骤如下：
将权利要求1所述的灵芝或/和云芝的发酵液加入体积百分比为0.1～0.5％的稳定剂，所述的稳定剂为选自醋酸、丙酸、柠檬酸中的一种或几种的混合物，制得糖肽复合物免疫强化饲料添加剂。
6、一种糖肽复合物免疫强化饲料添加剂，其为干菌丝体的糖肽复合物的有效含量不低于4.0g/L的菌丝体粉剂，由如下的步骤制得：
1)制备灵芝或/和云芝菌摇瓶种子液：同于权利要求1所述的灵芝或/和云芝的发酵液中的第1)步和第2)步；
2)制备固体发酵培养灵芝或/和云芝菌丝体：将菌丝体固态培养基和水按1∶1.2的重量比混合后放入不锈钢蒸饭盘内，于100℃蒸30分钟，移入无菌室，之后分摊于40cm×50cm的不锈钢曲盘内，料层厚度2～3cm，内冷却到25～28℃，将步骤1)所述的灵芝或/和云芝菌摇瓶种子液均匀地洒于固体发酵培养基料上接种，接种量为5～10％，然后分层放置于曲盘发酵托架上，控制室温为25～29℃，相对湿度80～90％，每2～3天翻动一次，培养4～10天，即得固体发酵培养的灵芝或/和云芝菌丝体；所述的菌丝体固态培养基的配比为：菜粕20～40％或/和棉粕20～40％或/和豆粕粉0.5～2％，木屑20～75％，麦麸20～40％或/和玉米粉0.5～5％，蔗糖0.5～2.0％，石膏粉0.5～1.0％；
3)灵芝或/和云芝菌丝体的后加工：将步骤2)制得的灵芝或/和云芝菌丝体干燥，并粉碎到80目以上，即得到糖肽复合物免疫强化饲料添加剂。
7、一种权利要求3、4、5或6所述的糖肽复合物免疫强化饲料添加剂作为畜禽水产动物饲料的添加剂的用途。
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