CN1204238C

CN1204238C - 从核桃仁中提取的核桃仁油组合物及其药物制剂

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Publication number: CN1204238C
Application number: CN 01135911
Authority: CN
Inventors: 李大鹏
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2000-10-18
Filing date: 2001-10-17
Publication date: 2005-06-01
Anticipated expiration: 2021-10-17
Also published as: CN1348983A

Abstract

本发明涉及一种从核桃仁中提取的核桃仁油组合物及其药物制剂。本发明的每100ml乳剂中，注射用核桃仁油组合物5～30g；乳化剂0.5～3.0g；等渗剂0.5～3.5g；余为注射用水。除了能补充机体营养能量，抗疲劳、耐缺氧，显著提高人体免疫功能，具有升高血清总蛋白作用外，它还对动物移植性肿瘤Lewis肺癌、小鼠肝癌HAC有一定的抑制作用，并兼有原料药补肾、温肺和润肠的功能，且价格低廉，是又一种具有多功效的能量型乳剂。

Description

从核桃仁中提取的核桃仁油组合物及其药物制剂

技术领域

本发明涉及从植物(酸枣、花椒或核桃)果仁中提取的果仁油组合物，提取方法及其应用。由其中任一种果仁油组合物制备的静脉乳剂或其它剂型，适用于营养缺乏，免疫功能低下，血清蛋白较低的各类患者，如肿瘤、烧伤、艾滋病、小儿营养不良、外科术后及需补充脂肪要素的患者等。

背景技术

酸枣仁或花椒都是药食两用传统中药，分别具有补肝、宁心、敛汗、生津和温中止痛，杀虫止痒等功效。

核桃仁是一种药食两用传统中药，具有补肾、温肺和润肠等功能。但长期以来普通核桃油只是食用油的一种，未见制成肠胃道外营养剂的报道。由于普通核桃油剂型不利于人体吸收，而要想制成对人临床使用的静脉乳，又因提取与分离工艺落后致使其中杂质多，酸价等理化值不符合注射用要求，使核桃油医药上的使用受到了限制。

现有技术中，以脂肪乳用来补充人体营养能量，常见的有大豆油、棉子油、红花油等制成的脂肪乳。其中，使用较为广泛的是大豆油制成的脂肪乳。但大豆油脂肪乳剂主要起补充人体营养能量的作用，其作用比较单一，有关提高机体免疫功能，升高血清总蛋白，对动物移植性肿瘤Lewis肺癌、小鼠肝癌HAC的抑制作用和补肾、温肺、润肠的功能未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从植物(酸枣或花椒或核桃)果仁中提取的可以制备提供人体营养能量、提高机体免疫功能、具有升高血清蛋白等作用的新一代静脉乳的果仁油组合物。

本发明要解决的另一个技术问题是提供两种提取上述植物果仁油组合物的特定工艺方法。

本发明要解决的又一个技术问题是上述果仁油组合物在制备静脉乳剂中的应用。该乳剂能补充人体营养能量，提高机体免疫功能，具有升高血清蛋白作用，兼有原料药补肾、温肺和润肠的功能，且价格低廉。

具体实施方式

本发明的果仁油组合物第一种提取方法如下，以核桃仁为例。

初提。核桃仁粉通过压榨或超临界提取方法得到核桃粗油。

脱色。粗油中先加入适量石油醚，搅拌均匀，再加入适量注射用活性碳，保温，过滤，回收石油醚，得脱色油。

碱炼。将脱色油和适量石油醚投入反应釜，根据酸值及脱色油的数量，计算出2％NaOH溶液量，搅拌中加入，搅拌均匀，静置，除去下层废液。搅拌中加入2倍量的温蒸馏水，搅拌，静止，除去下层废液。再用同样的方法、时间和水温进行第二次洗涤，充分静置，除去下层废液，得上层乳液。

破乳。将乳液层计量移入分离釜，按乳层量一定比例，搅拌中注入所需丙酮，静置分层，除去下层废水得上层油相。

水洗。按油量所需比例加入经保温活化的中性氧化铝进行吸附，充分搅拌，静置，过滤得澄明油；计量后投入反应釜预热，搅拌中加入所需量的经过保温活化的白陶土(高岭土)，搅拌中保温，真空过滤，滤液导入水洗釜加热，在充氮保护下脱除有机溶剂，按油量的适当比例注入温蒸馏水，搅拌，静置，弃下层废水，在充氮保护下，加热油层，脱水干燥，至油层澄明清亮，加入所需量经活化的中性氧化铝，搅拌均匀，静置，无菌过滤，得精炼油。充氮保护主要是为了防止油脂的氧化，控制油脂的过氧化值，以保持油的质量。

分装灭菌。分别注入规定容器内，消毒灭菌，得注射用核桃仁油组合物。

用本发明方法提取的核桃仁油组合物，具有质量好收率高且疗效确定的优点，特别是引入了充氮保护工艺，大大降低了油脂的氧化，有效地提高了组合物的质量。

上述方法的一个实施例子。取1000g核桃粉通过压榨法提取得到450g核桃粗油。

粗油中加入粗油量40％的石油醚，搅拌均匀，再加入粗油量1％的注射用活性碳，45℃保温30分钟后，过滤、滤液回收石油醚，得428g脱色油。

碱炼。将脱色油和油量50％的石油醚投入反应釜，根据酸值及脱色油的数量，加入2％浓度的NaOH溶液量307ml，在搅拌下细流注入乳层中，继续搅拌10分钟，静置24小时，除去下层废液。搅拌中加入2倍量的45℃蒸馏水，搅拌，静止24小时，除去下层废液。再用同样的方法、时间和水温进行第二次洗涤，水量为乳层量的1.5倍，然后静置48小时。

破乳。除去下层废液，得上层乳液342g移入分离釜，在搅拌下快速注入丙酮342ml，静置3小时，除去下层废水得上层油相。

水洗。在油中，按油量的5％加入经过160℃、2小时保温活化的中性氧化铝进行吸附，并充分搅拌后静置30分钟，过滤得澄明油，计量后投入反应釜预热至40℃，边搅拌边加入油量3％的经过160℃、2小时保温活化的白陶土(高岭土)，并继续搅拌，在50℃保温30分钟，真空过滤，滤液导入水洗釜加热至60℃，在充氮保护下脱除有机溶剂，按油量1倍的比例快速注入45℃的蒸馏水，并继续搅拌15分钟，然后静置30分钟，分去下层废水，在真空再充氮状态下，对油层加热至80℃脱水干燥，至油层澄明清亮，加入所需量经活化的中性氧化铝，搅拌均匀，静置，无菌过滤，得精炼油。

分装灭菌。分别注入规定容器内，消毒灭菌，得328g注射用核桃仁油组合物。

本发明的第二种果仁油组合物提取方法如下：

1)粗提：果仁通过冷榨或超临界提取得到粗油，过滤，得澄清毛油；

2)脱胶：将毛油置反应锅内，充氮，搅拌，加热，加入适量磷酸，快速搅拌使充分反应；

3)碱炼：在充氮保护下脱胶油混合液中直接加入配制好的同温NaOH溶液，快速搅拌使游离脂肪酸充分反应，然后在加热、充氮、保温下静置分层，除去下层皂脚，得碱炼油；

4)水洗：取碱炼油，在搅拌下加入适量氯化钠溶液，保温下静置分层，弃去下层废液；再用同样的方法、时间和水温，改用纯化水洗涤2遍，静置分层，除去下层废液，即得水洗油；

5)脱水：水洗油中加入适量活化氧化铝，充分搅拌，静置、过滤，得澄清脱水油；

6)脱色：将脱水油置反应锅内，抽真空、搅拌，加热、加适量活性炭和活化高岭土混合物，继续抽真空，80～90℃下充分搅拌，冷却，过滤，得脱色油；

7)脱臭：将脱色油置不锈钢反应锅内，在抽真空和氮气搅拌下，加热使油温升至140℃，停止通氮并改通纯水蒸汽，继续加热至190℃并保持恒温，再通蒸汽1.5小时，关闭蒸汽，再用氮气搅拌、冷却，得脱臭油；

8)灭菌：将脱臭油置于不锈钢灭菌罐中，抽真空、搅拌，加热至160℃并保持恒温2小时，冷却，无菌过滤，充氮分装于密闭容器，即得注射用果仁油组合物。

上述方法的一个实施例子，也以核桃仁为例。

1、粗提：取30kg核桃仁通过冷榨法提取得到核桃仁粗油，过滤，得澄清毛油13.1kg。

2、脱胶：将毛油置反应锅内，充氮，搅拌，加热，使油温升至30～35℃，加入13.1g浓度为85％的磷酸，快速搅拌半小时。

3、碱炼：在充氮保护下脱胶油混合液中直接加入717g配制好的同温5％NaOH溶液，快速搅拌30分钟，然后在慢速搅拌下快速升温至60～65℃，继续慢速搅拌15分钟，停止搅拌，在充氮、保温下静置分层，除去下层皂脚，得碱炼油12.8kg。

4、水洗：取上述碱炼油，在搅拌下加入1.9kg同温0.2％氯化钠溶液，保温下静置分层，弃去下层废液。再用同样的方法、时间和水温，改用蒸馏水洗涤2遍，静置分层，除去下层废液，即得水洗油12.6kg。

5、脱水：上述水洗油中加入经160℃活化2小时的氧化铝1.3kg，充分搅拌，静置半小时以上，过滤，得澄清脱水油12.0kg。

6、脱色：将上述脱水油置反应锅内，抽真空减压至0.082Mpa，搅拌，加热至80～90℃，停止抽真空，加入22.5g活性炭和经160℃活化2小时的337.5g高岭土混合物，继续抽真空减压至0.082Mpa，80～90℃下继续搅拌20分钟，冷却至40℃，过滤，得脱色油11.0kg。

7、脱臭：将上述脱色油置不锈钢反应锅内，抽真空减压至0.082Mpa，同时通氮气搅拌，加热使油温升至140℃，停止通氮并改通纯水蒸汽，继续加热至190℃并保持恒温，再通蒸汽1.5小时，关闭蒸汽，再用氮气搅拌、冷却，得脱臭油10.6kg。

8、灭菌分装：将脱臭油置于不锈钢灭菌罐中，抽真空减压至0.082Mpa、搅拌，加热至160℃并保持恒温2小时，冷却，无菌过滤，充氮分装于密闭容器，得注射用核桃仁油组合物9.6kg。

本发明所述的酸枣仁或花椒仁或核桃仁油组合物是一种淡黄色透明油状液体，其理化常数为：相对密度0.920～0.930；折光率1.470～1.480；酸值＜0.80(mgKOH·g^-1)；碘值120.0～155.0；皂化值180.0.～200.0；过氧化值＜30.0(meq·kg^-1)炽灼残渣0.01～0.04％；砷盐＜0.4ppm；重金属＜2ppm；平均分子量873.969。核桃仁油组合物的组分包括甘油三酯95.915±0.794％，1，3甘油二酯1.328±0.516％，1，2甘油二酯0.899±0.276％，谷甾醇0.313±0.069％。酯解后的脂肪酸组分为十六烷酸6.26±0.62％、十八烷酸2.31±0.35％、十八碳一烯酸21.88±1.93％、十八碳二烯酸59.98±1.52％、十八碳三烯酸9.50±1.43％。

用第二种方法的最大优点是不使用有机溶剂，从而避免了污染。该方法提取的果仁油组合物中的过氧化值可以＜6.0(meq·kg^-1)。

核桃仁油组合物在制备静脉脂肪乳剂中的应用。将适量乳化剂和适量等渗剂加入水相中，在一定速度下搅拌溶解后，加入有效量的注射用核桃仁油组合物，加注射用水至100ml制成初乳，并用NaOH溶液调节初乳PH值至8.5。然后将初乳转移到匀化桶中，用匀质机进行匀化，匀化压力：低压10～20Mpa，高压45～60Mpa；匀化温度为50～80℃，按上述匀化条件匀化6次，乳剂经过过滤、灌装、灭菌即得核桃仁油脂肪乳。各组份用量为注射用核桃仁油组合物5～30g；注射用磷脂1.0～3.0g；注射用甘油1.5～3.0g；注射用水加至100ml。

本发明所述的乳化剂可以是磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂)，普鲁朗立克(Pluronic)，聚甘油棕榈酸二醇等；等渗剂可以是甘油、山梨醇、木糖醇、葡萄糖等。

通常注射用核桃仁油组合物取10～30g；制成静脉乳剂时，用天然乳化剂如大豆(或蛋黄)卵磷脂较安全可靠，用量为1.0～2.0g；等渗剂采用甘油，用量为1.5～3.0g；注射用水加至100ml。

本发明的口服胶囊剂型工艺如下。一配料，称取维生素E0.675g(抗氧化剂)，在室温下投于900g酸枣仁油或花椒仁油或核桃仁油中，搅拌溶解成一种澄清、透明溶液。二溶胶，按明胶∶水∶甘油∶防腐剂＝1∶1∶0.4∶0.001的比例，称好一定量的胶皮原料，其中明胶质量符合中国药典(95版)二部P388项下，甘油质量符合中国药典(95版)二部P78项下，防腐剂采用尼泊金乙酯，属酯类防腐剂；将大部分蒸馏水投入反应锅内，加热至50～60℃，开启搅拌，投入明胶、甘油及防腐剂等，容器用剩余蒸馏水荡洗，倒入锅内，逐渐升温，使物料全部溶化，均匀；关闭反应锅，开启真空泵，使锅内真空度维持在表压0.065～0.080Mpa之间，保持30～60分钟，解除真空，料液经120目筛过滤至料桶内，于50～60℃保温待用。三压制，在室内温度21～24℃、相对湿度＜40％、胶盒温度50～60℃、分割器电压110～150V、胶带温度10～15℃、胶皮厚度0.8～1.0mm的工艺条件下，用8号模具压制出1000粒软胶丸，定时检测内容物的装量。胶丸在压制定型4小时后，揩丸去油，转入初烘8小时，用石油醚(30～50℃)洗涤后，烘干，经整理拣去废丸后包装。

本发明所述的核桃仁油静脉乳剂，乳化剂安全可靠、配方合理。除了能补充机体营养能量，抗疲劳、耐缺氧，显著提高人体免疫功能，具有升高血清总蛋白作用外，它还对动物移植性肿瘤Lewis肺癌、小鼠肝癌HAC有一定的抑制作用，并兼有原料药补肾、温肺和润肠的功能，且价格低廉，是又一种具有多功效的能量型乳剂。

本发明的乳剂经动物急性毒性实验表明，小鼠静脉给药的最大耐受量为75ml/kg/日，实验期间小鼠未出现不良反应和死亡情况；解剖后动物内脏器官未见异常。

按常规药物溶血方法试验，结果无溶血作用。通过对豚鼠全身过敏试验显示，本发明的乳剂对豚鼠无明显的过敏反应。

家兔耳缘静脉(血管)连续7天分别缓慢注射本发明的乳剂15ml/kg和5ml/kg剂量，结果显示对家兔耳缘静脉无明显的刺激作用。

按GB384-81测得能量热值，本发明核桃仁油组合物为37599kj/kg和大豆油37243kj/kg相当，核桃仁油乳剂为6303kj/kg。

核桃仁油乳剂对小鼠耐缺氧、抗疲劳试验的方法和结果。选健康雄性小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只。核桃仁油乳剂的三个剂量组分别为25ml/kg、12.5ml/kg、6.25ml/kg，另设生理盐水组给予同体积的生理盐水。每天静脉注射一次，连续给药7天，末次给药后2小时进行试验。

耐缺氧试验：将各受试小鼠分别放入250ml无色透明密闭的广口瓶内，每个瓶内放入10克钠石灰，自放入瓶内开始计时，直至小鼠停止呼吸。计算平均存活时间(min)，比较各给药组和生理盐水组之间差异的显著性。

抗疲劳试验：小鼠分别称体重，按体重的5％在鼠尾根部负重，放入水温25℃，水深40cm的大水缸中，强迫小鼠持续游泳直至沉入水底而死亡，记录各鼠持续游泳时间(min)，进行t检验，比较各给药组和生理盐水组之间差异的显著性。

表1，核桃仁油乳剂不同剂量静脉给药对小鼠耐缺氧、抗疲劳的影响

负重游泳试验常压下耐缺氧

分组剂量持续时间(min) 延长率存活时间(min) 延长率

(ml/kg) ( x±SD) (％) ( x±SD) (％)

生理盐水 9.18±5.0 30.46±5.33

6.25 18.13±16.64 97.58 34.91±7.59 14.61

核桃仁油

乳剂 12.5 19.96±9.65^** 17.56 41.77±9.38^** 37.13

25 22.88±7.89^** 149.31 43.73±5.37^** 43.56

与生理盐水组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

两项试验数据见上表1。耐缺氧试验统计处理表明，核桃仁油乳剂中、高剂量组的小鼠平均存活时间与生理盐水组的小鼠平均存活时间差异非常显著(P＜0.01)。试验结果提示，样品核桃仁油乳剂对小鼠有一定的耐缺氧作用，能增强机体非特异性抵抗能力，量效关系明显。

负重游泳试验统计分析表明，核桃仁油乳剂中、高剂量组的小鼠持续游泳时间与生理盐水组比较差异非常显著(P＜0.01)。上述两项试验结果证明，核桃仁油乳剂在25ml/kg剂量作用下能明显延长小鼠的游泳时间，增强小鼠抗疲劳作用，量效关系明显。

核桃仁油乳剂对小鼠免疫功能影响的试验方法。C57BL/6 30只，随机分为4组，每组6只，即核桃仁油乳剂25ml/kg、12.5ml/kg、6.25ml/kg，生理盐水组(0.5ml/只)，均vi×7。给药结束后处死动物，无菌条件下取脾。

淋巴细胞增值影响试验：计数脾细胞，并调整细胞浓度为1×10⁷个/ml，在96孔培养板上每孔加细胞悬液100ul，ConA 50ul和培养液，各组均设三复孔，37℃，5％CO₂条件下培养48小时，加入³H-TdR 0.5μci/孔，继续培养18小时。用多头细胞收集器收集细胞，在液闪仪上测CPM值，并与对照组比较。

表2，核桃仁油乳剂不同剂量静脉给药对小鼠免疫功能的影响

组别剂量淋巴细胞增值 IL-2 NK活性

(ml/kg) (x±SD) (x±SD) Pi(％)

生理盐水 25 6049±459 750±112

Intralipid 12.5 6248±209 751±96^* 1.2

6.25 8913±911^** 941±103^** 27.9

核桃仁油乳剂 12.5 8988±1374^** 875±160^** 43.8

25.0 8480±1283^** 917±30^** 31.9

^*P＞0.5，Intralipid(大豆油脂肪乳)与生理盐水比较。

^**P＜0.01，核桃仁油乳剂与生理盐水组及Intralipid静脉乳剂组比较。

上述核桃仁油乳剂药效实验显示：在25，12.5，6.25ml/kg剂量时，均有明显促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用；连续静脉注射7天后能激活自然杀伤细胞(NK)活性；各剂量组静脉注射7天均有促进白介素-2(IL-2)生成的作用。上述实验表明，本发明的乳剂在提高机体免疫功能，如机体脾淋巴细胞增殖、提高NK活性和促进IL-2的生成等方面，具有比大豆油脂肪乳更好的效果。

表3，核桃仁油乳剂对小鼠血清总蛋白的影响

组别剂量血清总蛋白(g/L)

(ml/kg) (x±SD)

生理盐水 10 69.8±8.7

2.5 85.4±14.0^**

核桃仁油乳剂 5 86.1±10.4^**

10 79.8±7.4^*

与生理盐水组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表4，核桃仁油乳剂不同剂量静脉连续给药7天对小鼠肝癌HAC的抑制作用

组别剂量动物数动物体重(g) 瘤重(g) 抑瘤率

(ml/kg) 始终始终 (x±SD) (％)

生理盐水 10 10 10 19.2 26.5 2.48±0.31

6.25 10 10 19.1 25.5 1.92±0.35^** 22.58

核桃仁油乳剂 12.5 10 10 19.4 24.9 1.83±0.39^** 26.21

25 10 10 19.4 24.5 1.45±0.22^** 41.53

与生理盐水组比较，^**P＜0.01。

表5，核桃仁油乳剂不同剂量静脉连续给药7天对小鼠Lewis肺癌抑制作用

组别剂量动物数动物体重(g) 瘤重(g) 抑瘤率

(ml/kg) 始终始终 (x±SD) (％)

生理盐水 25 6 6 18.5 24.4 2.25±0.30

6.25 6 6 18.1 23.5 1.87±0.39 17.04

核桃仁油乳剂 12.5 6 6 18.6 22.9 1.63±0.40^* 27.41

25 6 6 18.4 22.5 1.27±0.18^** 43.70

与生理盐水组比较，^**P＜0.01。

从表4表5可见，核桃仁油乳剂在上述剂量时，有一定的抑制小鼠肝癌HAC和Lewis肺癌生长的作用。

进一步研究发现，由于核桃仁具有补肾、温肺和润肠的作用，使用从核桃仁中提取的核桃仁油组合物所制成的乳剂在作为能量乳的同时，也发现有上述相似的功能。

实施例1，将大豆卵磷脂1.2g和甘油2.5g加水25ml，在5000转/分速度下搅拌溶解后，加入注射用核桃仁油组合物20g，加水至100ml制成初乳，并用NaOH溶液调节初乳PH值至6-9。然后将初乳转移到匀化桶中，用匀质机进行匀化，匀化压力：低压10～20Mpa，高压40-～60Mpa；匀化温度为60～80℃，按上述匀化条件匀化6次，乳剂经过过滤、灌装、灭菌即得20％供静脉用核桃仁油脂肪乳。

实施例2，将蛋黄卵磷脂1.0g和甘油1.5g加水20ml，在同上速度下搅拌溶解后，加入注射用核桃仁油组合物10g，加水至100ml制成初乳。再经过调PH值、匀化、过滤、灌装、灭菌即制得10％核桃仁油脂肪乳。

实施例3，将大豆磷脂2.0g和甘油3.0g加水30ml，在同上速度下搅拌溶解后，加入注射用核桃仁油组合物30g，加水至100ml制成初乳。再经过调PH值、匀化、过滤、灌装、灭菌即制得30％核桃仁油脂肪乳。

用本发明提取的核桃仁油组合物除了作提供人体营养能量等的静脉乳主药外，也可制备成其它剂型如口服乳、软胶丸、碘油剂等。

Claims

1、一种通过压榨或者超临界萃取从核桃仁中提取的核桃仁油组合物，其特征在于该组合物含有甘油三酯95.915±0.794％，1，3甘油二酯1.328±0.516％，1，2甘油二酯0.899±0.276％和谷甾醇0.313±0.069％，该组合物酯解后的脂肪酸组成为十六烷酸6.26±0.62％、十八烷酸2.31±0.35％、十八碳一烯酸21.88±1.93％、十八碳二烯酸59.98±1.52％和十八碳三烯酸9.50±1.43％。

2、根据权利要求1所述的从核桃仁中提取的核桃仁油组合物，其特征在于：该组合物按脂肪油检测，其理化常数为：相对密度0.920～0.930；折光率1.470～1.480；酸值＜0.80mgKOH·g^-1；碘值120.0～155.0；皂化值180.0.～200.0；过氧化值＜30.0meq·kg^-1；炽灼残渣0.01～0.04％；砷盐＜0.4ppm；重金属＜2ppm；平均分子量873.969。

3、一种具有抗疲劳或耐缺氧或抗肿瘤作用的药物制剂，其特征在于含有有效量的权利要求1或2所述的核桃仁油组合物。

4、根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于该制剂为脂肪乳剂或胶囊剂。

5、根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于还含有乳化剂、等渗剂及注射用水。

6、根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于各组份用量为：

注射用核桃仁油组合物 5～30g；

注射用磷脂 1.0～3.0g；

注射用甘油 1.5～3.0g；

注射用水加至100ml。

7、根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于各组份用量为：

注射用核桃仁油组合物 20g；

注射用大豆卵磷脂 1.2g；

注射用甘油 2.5g；

注射用水加至100ml。