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CN119264065A - 一类细胞程序性坏死抑制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

一类细胞程序性坏死抑制剂及其制备方法和用途 Download PDF

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CN119264065A CN202310819087.4A CN202310819087A CN119264065A CN 119264065 A CN119264065 A CN 119264065A CN 202310819087 A CN202310819087 A CN 202310819087A CN 119264065 A CN119264065 A CN 119264065A
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compound
alkyl
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CN202310819087.4A
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谭立
袁钧瑛
李盈
秦嬴
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Shanghai Institute of Organic Chemistry of CAS
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Abstract

本发明提供了一类细胞程序性坏死抑制剂及其制备方法和用途。具体地，本发明提供了一种化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其中，所述的化合物如式I所示。本发明还提供了该化合物的制备方法以及含其的药物组合物或其在治疗或预防与细胞程序性坏死和/或人受体相互作用蛋白1激酶(RIPK1)相关的疾病或病症中的用途。

Description

一类细胞程序性坏死抑制剂及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于小分子化合物领域，具体涉及一类细胞程序性坏死抑制剂及其制备方法和用途。
背景技术
在发育与衰老的过程中，人体内总是伴随着细胞增殖与死亡的动态调节。细胞的主动性死亡在正常发育、抵抗病原微生物入侵、维持内环境稳态等生理活动中不可或缺，其失调往往导致发育畸形、免疫系统疾病、神经退行性疾病及癌症等多种疾病，乃至个体的死亡。因此，对细胞程序性死亡进行进行干预，对于疾病治疗研究有着重要的意义。凋亡是首个被阐明的细胞程序性死亡机制，近年来，细胞程序性坏死成为细胞死亡领域的新热点。已有多项研究报道，在多种退行性疾病(如阿尔茨海默氏症(AD)、多发性硬化症(MS)、肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)、视网膜退行性疾病等)、缺血再灌注损伤(脑梗、心肌梗死等)以及病原体感染等多种疾病中，都伴随有细胞程序性坏死这一重要病理特征。
另一方面，细胞程序性坏死通路的激活往往伴随着炎症的发生。持续性的炎症可能会对人体组织或器官造成不可逆转的损害，同时还促进心血管疾病、糖尿病、癌症、非酒精性脂肪肝、退行性疾病或代谢综合征等多种疾病的进展，被形容为万病之源。多种慢性炎症性疾病，如类风湿性关节炎(RA)、炎症性肠病(IBD)、银屑病或肝炎，不但严重影响患者的健康与生活质量，还可能促发致命性的心梗或癌症；而感染引起的急性炎症风暴，如脓毒症或重症肺炎，则可能直接危及生命；利用CAR-T细胞或PD-1/PD-L1抗体进行的肿瘤免疫疗法，往往也具有不同程度的急性炎症副作用，严重影响患者的生活质量或生命安全。此外，细胞程序性坏死和炎症还参与肿瘤微环境的调控：肺癌细胞能诱导血管壁特定细胞发生程序性坏死，以便通过循环系统并发生转移；坏死小体(Necrosome)的主要成分在胰腺癌中的高表达，能诱导趋化因子CXCL1的表达进而抑制机体的免疫响应。因此，抑制细胞程序性坏死的发生，被公认有助于多种疾病的治疗与缓解。
研究表明，肿瘤坏死因子α(TNF-α)是刺激体内细胞发生程序性坏死和炎症的主要途径之一，其下游信号通路也是当前机制最为明确的坏死信号通路。在该通路中，RIPK1扮演着关键的调控角色：通过与TNFα受体蛋白TNFR1以及其他调控因子(TRADD、TRAF2、cIAP1/2等)形成信号复合物I(Complex I)，进而激活IKK复合物和NF-κB炎症通路；激酶活性激活后进入胞质与凋亡因子(FADD、Caspase-3等)形成Complex IIa并介导细胞凋亡的发生；或是激活RIPK3并与之多聚为坏死小体Complex IIb，最终诱导程序性细胞坏死(Necroptosis)的发生。在程序性坏死过程中，细胞膜结构会被破坏并释放出大量的炎症因子，进而诱导炎症和细胞死亡的连锁反应。研究表明，RIPK1基因的遗传突变(D324V、D324H)致使RIPK1蛋白异常累积和激活，会导致自身免疫性疾病的发生；衰老过程中，上游的抑制调控因子(如OPTN、TBK1、TAK1、A20、CYLD等)突变失活也会导致RIPK1活化，进而加重退行性疾病和炎症病情；在多种真菌或病毒感染、器官缺血性再灌注损伤中，RIPK1也被异常激活进而诱导炎症性细胞死亡的发生。在中枢神经系统疾病的治疗中，抗体药物具有不易穿透血脑屏障和免疫原性的缺点，而很多现有的靶向型小分子药物则可能影响神经元细胞的正常功能；同时，某些关键免疫通路的抑制不可避免会影响人体的正常免疫功能，进而带来严重感染的风险。因此，RIPK1激酶被公认是针对多种退行性或炎症性疾病的颇具潜质的治疗靶标。
首创型RIPK1抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)及其类似物在临床前研究中，已经对多种退行性疾病、炎症、癌症等疾病展示出明确的疗效。例如，对AD、ALS、MS、帕金森氏症(PD)、亨廷顿氏症(PD)炎性肠病、老年性黄斑变性等具有缓解作用；对银屑病、色素性视网膜炎、炎症性肠病、自身免疫性疾病、蛙皮素诱导的急性胰腺炎和败血症/全身炎症反应综合症(SIRS)具有保护作用；能有效缓解缺血性脑损伤、缺血性心肌损伤、视网膜缺血/再灌注损伤、视网膜脱离诱导的感光细胞坏死、青光眼、肾缺血再灌注损伤、顺铂诱导的肾损伤和创伤性脑损伤；至少部分缓解由RIPK1依赖性细胞凋亡、坏死或细胞因子生成所相关的其他疾病，包括血液和实体器官恶性肿瘤、细菌感染和病毒感染(包括结核病、流感等)和溶酶体贮积症(尤其是戈谢病)。当前，多个RIPK1抑制剂也正处于治疗多种自身退行性或免疫性疾病的临床试验当中。如赛诺菲公司正处于ALS和MS临床二期试验的SAR443820，及其正处于红斑狼疮和溃疡性肠病临床二期试验的SAR443122。
然而，现有的RIPK1抑制剂均存在着不同程度的不足。一方面，细胞程序性坏死相关的慢性病，尤其是中枢神经系统相关的退行性疾病，对药物的安全要求很高。如赛诺菲公司原本进入临床一期的SAR443060，在达到一期终点后仍被发现在灵长类动物体内具有慢性毒副作用，而不得不被替换为SAR443820进行临床试验。另一方面，大多数处于临床试验的RIPK1抑制剂均为GSK2982772的类似物，它们共有的结构骨架限制了成药性的优化空间。这类抑制剂往往不能高效抑制非灵长类动物的RIPK1，这也限制了它们在临床前疾病模型上的验证，进而不利于临床适应症的挑选。最后，兼具高活性与透脑性的RIPK1抑制剂非常有限，其长期用药安全性也均有待被进一步验证。因此，与GSK2982772化学骨架不同、同时兼具高活性、高特异性和高血脑屏障穿透性的小分子RIPK1激酶活性抑制剂，仍是目前细胞程序性坏死相关疾病临床治疗新药创制的难点与热点。综上所述，本领域迫切需要具有新颖化学结构、药代药效性质更突出的新型RIPK1抑制剂和/或细胞程序性坏死抑制剂，以作为预防和治疗涉及细胞死亡和/或炎症疾病的候选药物。
发明内容
本发明的目的是提供一类细胞程序性坏死抑制剂，以作为预防和治疗与细胞程序性坏死和/或人受体相互作用蛋白1激酶(RIPK1)相关的疾病或病症的候选药物。
本发明的第一方面，提供了一种如下式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，
式中：
X1选自下组：CH、N或化学键；
X2、X3、X4和X5各自独立地选自下组：CH、N；
条件是X1、X2、X3、X4和X5形成的环是芳香环；
M选自下组：O、S、NR3、CHR3或C(R3)2；
W和U各自独立地选自下组：O、S、NR4、CHR4或C(R4)2；
A环和B环各自独立地选自下组：取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
R1和R2各自独立地选自下组：无、H、取代或未被取代的C1-C6烷基、卤素；
且当M为NR3、CHR3或C(R3)2时，R2、R3可以与其相连的C原子或N原子，以及-C-C(O)-共同形成取代或未取代的5-7元环；
R3和R4选自下组：H、取代或未取代的C1-C6烷基、卤素；
R6选自下组：H、卤素、CN、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6烯烃、取代或未取代的C2-C6炔烃、或-CH≡CR5；其中，R5选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的4-12元杂环基；
R7选自下组：H、卤素、CN、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6烯烃、取代或未取代的C2-C6炔烃、或-CH≡CR8；其中，R8选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的4-12元杂环基；
其中，所述的取代指基团上的氢原子被一个或者多个(例如2个、3个、4个等)选自下组的取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代的C1-C6烷基、C3-C8环烷基、卤代的C3-C8环烷基、C1-C6烷氧基、卤代的C1-C6烷氧基、甲基砜基、-S(＝O)2NH2、氧代(＝O)、-CN、羟基、-NH2、羧基、C2-C6酰胺基(-C(＝O)-N(Rc)2或-NH-C(＝O)(Rc)，Rc为H或C1-C5的烷基)、C1-C6烷基-(C2-C6酰胺基)、C1-C6胺基、C6-C10芳基、具有1-3个选自N、S和O的杂原子的5-7元杂芳基、具有1-3个选自N、S和O的杂原子的4-7元杂环基。
在另一优选例中，所述式I具有下式II所示的结构：
M、W、U、A、B、R1、R6、R7的定义如上所述。
在另一优选例中，所述A环和B环各自独立地选自下组：取代或未取代的苯基、取代或未取代的5-7元杂芳基；
取代的定义如上所述。
在另一优选例中，所述A环和B环各自独立地选自下组：
在另一优选例中，所述A环为未取代的苯基。
在另一优选例中，所述B环为未取代的苯基。
在另一优选例中，所述M为NR3，和/或
W为CHR4；
R6选自下组：H、卤素、CN、取代或未取代的C1-C6烷基；
R7选自下组：H、卤素、CN、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6炔烃、或-CH≡CR8；其中，R8选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的4-12元杂环基；
R3、R4、取代的定义如上所述。
在另一优选例中，所述R7选自下组：H、卤素、CN、-CH≡CR8；其中，R8选自下组：取代或未取代的5-12元含氮杂芳基、取代或未取代的4-8元含氮杂环基。
在另一优选例中，所述式I具有下式III所示的结构：
M、W、U、A、B、X5、R1、R2、R3、R6、R8的定义如上所述。
另一优选例中，所述式I具有下式II所示的结构：
M、W、U、A、B、R1、R6、R8的定义如上所述。
在另一优选例中，如式I所示的化合物选自下表：
本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括(a)治疗有效量的如本发明第一方面中所述的化合物、或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物；和(b)药学上可接受的载体。
在本发明的第四方面中，提供了一种如第一方面所述的化合物或如第三方面所述的药物组合物在制备用于治疗或预防与细胞程序性坏死和/或人受体相互作用蛋白1激酶(RIPK1)相关的疾病或病症的药物中的用途。
在另一优选例中，所述的化合物或药物组合物通过抑制人受体相互作用蛋白1激酶(RIPK1)来治疗或预防所述的疾病或病症。
在另一优选例中，所述的人受体相互作用蛋白1激酶(RIPK1)包括失活(或未激活)状态的RIPK1和激活状态的RIPK1。
在另一优选例中，所述的化合物或药物组合物还可通过抑制激活状态的人受体相互作用蛋白1激酶(RIPK1)来治疗或预防(尤其是治疗)所述的疾病或病症。
在另一优选例中，所述的抑制人受体相互作用蛋白1激酶(RIPK1)包括下述的一种或多种：抑制RIPK1的活性、或抑制RIPK1的的磷酸化。
在另一优选例中，所述的化合物或药物组合物通过抑制细胞程序性坏死号通路来治疗或预防所述的疾病或病症。
在另一优选例中，所述的抑制细胞程序性坏死号通路包括下述的一种或多种：抑制RIPK1的活性、抑制RIPK1的的磷酸化、或抑制MLKL的磷酸化。
在另一优选例中，所述的疾病或病症选自下组中的一种或多种：退行性疾病、炎症、缺血再灌注损伤、病原体感染、帕金森氏症(PD)、亨老年性黄斑变性、自身免疫性疾病、视网膜脱离诱导的感光细胞坏死、青光眼、顺铂诱导的肾损伤和创伤性脑损伤、高血脂所致动脉粥样硬化、由RIPK1依赖性细胞凋亡、坏死或细胞因子生成相关的其他疾病、细菌感染、病毒感染和溶酶体贮积症。
在另一优选例中，所述的退行性疾病包括：如阿尔茨海默氏症(AD)、多发性硬化症(MS)、肌萎缩脊髓侧索硬化症(ALS)、视网膜退行性疾病。
在另一优选例中，所述的炎症包括以下的一种或多种：肠炎、风湿性关节炎、银屑病、色素性视网膜炎、炎症性肠病、廷顿氏症(PD)炎性肠病、蛙皮素诱导的急性胰腺炎、败血症/全身炎症反应综合症(SIRS)。
在另一优选例中，所述的缺血再灌注损伤包括以下的一种或多种：脑梗、心肌梗死等、缺血性脑损伤、缺血性心肌损伤、视网膜缺血/再灌注损伤、肾缺血再灌注损伤。
在另一优选例中，所述由RIPK1依赖性细胞凋亡、坏死或细胞因子生成相关的其他疾病包括以下的一种或多种：血液和实体器官恶性肿瘤。
在另一优选例中，所述病毒感染包括以下的一种或多种疾病或病症：结核病、流感、冠状病毒感染及其所致肺炎。
在另一优选例中，所述溶酶体贮积症包括戈谢病。
在本发明的第四方面，提供了一种治疗或预防与细胞程序性坏死和/或人受体相互作用蛋白1激酶(RIPK1)相关的疾病或病症的方法，所述的方法包括：向需要的对象施用治疗有效量的如第一方面所述的化合物或如第二方面所述的药物组合物。
在本发明的第五方面中，提供了一种抑制细胞程序性坏死的方法，包括步骤：在如第一方面的所述的化合物的存在下，培养细胞，从而抑制抑制细胞程序性坏死。
在另一优选例中，所述的方法是体外非治疗性的。
在本发明的第六方面中，提供了一种抑制RIPK1蛋白激酶活性的方法，包括步骤：使RIPK1蛋白激酶与如第一方面的所述的化合物接触，从而抑制RIPK1蛋白激酶活性。
在另一优选例中，所述的方法是体外非治疗性的。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了代表性化合物QY-18-26对RIPK1激酶活性的影响。
图2显示了代表性化合物QY-18-26的药代动力学性质。
图3显示了代表性化合物QY-18-26的透脑性质。
图4显示了代表性化合物QY-18-26对TNFα引起的系统性炎症反应综合征的影响。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现一类结构新颖的细胞程序性坏死抑制剂。所述的细胞程序性坏死抑制剂具有优异的RIPK1抑制活性。因此可以用于制备预防和/或治疗涉及细胞死亡、RIPK1和/或炎症的疾病的药物组合物。特别地，本发明提供的优选化合物对已激活的RIPK1也具有优异的抑制活性，因此相比仅抑制失活的RIPK1的现有的RIPK1抑制剂而言，本发明提供的化合物具有更快速改善或治疗涉及细胞死亡和/或RIPK1炎症的疾病或病症(如炎症)。基于上述发现，发明人完成了本发明。
术语
除非明确另外指出，根据本发明和本文所用的术语具有以下含义：
术语“烷基”指具有指定碳原子数的直链或支链烷基。例如C1-C6烷基是指具有1到6个碳原子的直链或支链烷基。烷基的实例包括但不限于：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等，或类似基团。
术语“环烷基”指具有指定碳原子数的环状烷基。例如，“C3-C8环烷基”指具有1～8个碳原子的环状烷基。环烷基的实例包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基。
术语“烷氧基”指上文定义的烷基，其通过氧原子连接至分子的剩余部分。例如，C1-C6烷氧基是指C1-C6烷基-O-。
术语“卤素”指F、Cl、Br和I。
术语“卤代烷基”指被卤素取代的烷基(烷基的定义如前所述)。
术语“芳基”指具有指定环原子数的多不饱和的(通常芳香性)的烃基，其可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(如二环)。芳基的实例包括但不限于：苯基、萘基。
术语"杂芳基"是指具有指定环原子数且含有1至5个(如1、2、3、4或5个)选自N、O、和S的杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选被氧化，氮原子任选被季铵化；例如，5-10元杂芳基(或环)是指含5、6、7、8、9或10个环原子的杂芳基(或环)。如本文所用含氮杂芳基是指所含的杂原子中至少一个为氮杂原子。杂芳基可通过杂原子连接于分子的其余部分。杂芳基的实例包括但不限于：吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、苯并三嗪基(benzotriazinyl)、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基(isobenzofuryl)、异吲哚基、中氮茚基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基。
术语“药学上可接受的”成分是指适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。
术语“有效量”指治疗剂治疗、缓解或预防目标疾病或状况的量，或是表现出可检测的治疗或预防效果的量。对于某一对象的精确有效量取决于该对象的体型和健康状况、病症的性质和程度、以及选择给予的治疗剂和/或治疗剂的组合。因此，预先指定准确的有效量是没用的。然而，对于某给定的状况而言，可以用常规实验来确定该有效量，临床医师是能够判断出来的。
除非特别说明，本发明中，所有出现的化合物均意在包括所有可能的光学异构体，如单一手性的化合物，或各种不同手性化合物的混合物(即外消旋体)。本发明的所有化合物之中，各手性碳原子可以任选地为R构型或S构型，或R构型和S构型的混合物。
术语“本发明化合物”指式I所示的化合物。该术语还包括及式I化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
术语“溶剂合物”指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
合成实施例1
方法1：
化合物QY-12-88的合成：
1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(QY-12-88)：在100mL圆底烧瓶中将1,2,3-三氮唑-4-甲酸甲酯(1.27g，10.0mmol)溶解于20mL N,N-二甲基甲酰胺中，室温加入碳酸钾(0.83g，6.0mmol)，冰浴条件下滴加碘甲烷(1.50g，10.5mmol)至反应液中，搅拌1h后逐渐回至室温继续搅拌16h。LC-MS实时监测底物消耗完全，停止反应。旋蒸除去有机溶剂后加二氯甲烷稀释反应液，转移至分液漏斗，蒸馏水洗(10mL×3)，二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，饱和氯化钠洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥有机相，过滤并旋蒸除去二氯甲烷，硅胶柱层析分离纯化(PE：EA＝10–90％)得305mg白色粉末状固体，产率22％。ESI-MS m/z 142.1(M+H)+.
化合物QY-12-95的合成：
5-苄基-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸甲酯(QY-12-95)：15mL耐压瓶中，加入5mL甲苯，QY-12-88(305mg，2.16mmol)，搅拌均匀后加入醋酸钯(24mg，0.11mmol)，三苯基膦(113mg，0.43mmol)，碳酸钾(746mg，5.40mmol)，特戊酸(66mg，0.65mmol)，滴入氯化苄(274mg，2.16mmol)，氮气保护后加热至100℃反应过夜。待反应原料消耗完毕，旋蒸除去甲苯，乙酸乙酯稀释反应液，硅藻土抽滤后旋蒸除去有机溶剂，硅胶柱层析分离纯化(PE：EA＝0–80％)得173mg淡黄色透明油状液体，产率35％。ESI-MS m/z 232.1(M+H)+.
化合物QY-13-15的合成：
5-苄基-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(QY-13-15)：将QY-12-95(173mg，0.75mmol)溶解于3mL四氢呋喃中，转移至8mL耐压瓶，氢氧化锂一水合物(63mg，1.50mmol)溶解于0.8mL蒸馏水中，室温下滴加至反应液中，LC-MS实时监测反应进程，8h后原料消耗完毕，旋转蒸发除去反应体系所有溶剂，粗产品可不经纯化直接进行后续合成。ESI-MS m/z218.0(M+H)+.
化合物QY-13-17的合成：
(S)-5-苄基-N-(1-(4-碘苯基)乙基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(QY-13-17)：QY-13-15(0.75mmol)在15mL耐压瓶内溶解于5mL N,N二甲基甲酰胺中，加入HATU(341mg，0.90mmol)与4-碘苄胺(174mg，0.75mmol)，室温下滴加N,N-二异丙基乙胺(289mg，2.24mmol)，室温条件下持续搅拌。LC-MS实时监测，待反应完成后，加入15mL二氯甲烷稀释反应液，转移至分液漏斗中，10mL蒸馏水洗，二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，饱和氯化钠洗(10mL×2)，后处理得有机相经无水硫酸钠干燥，过滤并旋干除去二氯甲烷，硅胶柱层析分离纯化(PE：EA＝0–100％)得153mg白色泡沫固体，产率47％。ESI-MS m/z 447.0(M+H)+.
化合物QY-18-26的合成：
(S)-5-苄基-1-甲基-N-(1-(4-(吡啶-2-基乙炔基)苯基)乙基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(QY-18-26)：8mL耐压瓶中，依次加入1mL四氢呋喃，QY-13-15(32mg，0.072mmol)，搅拌溶解均匀后加入2-乙炔基吡啶(11mg，0.11mmol)，碘化亚铜(2.7mg，0.014mmol)，N,N-二异丙基乙胺(37mg，0.288mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯(5mg，0.007mmol)，氮气保护室温搅拌反应。待反应物消耗完毕，硅藻土抽滤后旋蒸除去有机溶剂，硅胶柱层析分离纯化(PE：EA＝10–80％)得10mg黄褐色油状液体，产率33％。ESI-MS m/z 422.2(M+H)+.
方法2：
化合物QY-16-97的合成：
3-(叔丁氧基甲基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(QY-16-97):将4-(叔丁氧基)-3-氧代丁酸乙酯(2.98g，14.7mmol)，二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(2.45g，20.6mmol)混合均匀溶解于25mL甲苯中，加热至65℃搅拌反应过夜后直接旋转蒸发除去有机溶剂；加入9mL冰醋酸溶解反应体系，室温搅拌下缓慢滴加水合肼(1.03g，20.6mmol)至反应液，室温搅拌反应过夜。加入250mL乙酸乙酯稀释反应体系，转移至分液漏斗，饱和碳酸氢钠溶液洗涤(50mL×2)，蒸馏水洗涤(10mL×2)，饱和氯化钠洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤并旋蒸除去有机溶剂，经硅胶柱层析分离纯化(PE：EA＝0–60％)得1.76g橙黄色油状液体，产率53％。ESI-MSm/z 227.1(M+H)+.
化合物QY-16-98的合成：
3-(叔丁氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(QY-16-98)：在100mL圆底烧瓶中将QY-16-97(1.76g，7.8mmol)溶解于35mL乙腈中，室温加入碳酸铯(6.34g，19.5mmol)，冰浴条件下滴加碘甲烷(1.32g，9.3mmol)至反应液中，逐渐回至室温继续搅拌10h。LC-MS实时监测底物消耗完全，停止反应。旋蒸除去有机溶剂后加乙酸乙酯稀释反应液，转移至分液漏斗，蒸馏水洗(10mL×2)，饱和氯化钠洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥有机相，过滤并旋蒸除去二氯甲烷，硅胶柱层析分离纯化(PE：EA＝0–80％)得624mg淡黄色透明油状液体，产率33％。ESI-MS m/z 241.2(M+H)+.
化合物QY-17-11的合成：
5-苄基-3-(叔丁氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(QY-17-11)：30mL耐压瓶中，加入10mL甲苯，QY-16-98(603mg，2.51mmol)，搅拌均匀后加入醋酸钯(56mg，0.25mmol)，三苯基膦(262mg，1.0mmol)，碳酸钾(1214mg，8.79mmol)，特戊酸(77mg，0.75mmol)，滴入氯化苄(413mg，3.26mmol)，氮气保护后加热至110℃反应过夜。待反应原料消耗完毕，旋蒸除去甲苯，乙酸乙酯稀释反应液，硅藻土抽滤后旋蒸除去有机溶剂，硅胶柱层析分离纯化(PE：EA＝0–50％)得108mg淡黄色透明油状液体，产率13％。ESI-MS m/z331.1(M+H)+.
化合物QY-17-54的合成：
5-苄基-3-(羟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(QY-17-54)：QY-17-11(108mg，0.33mmol)直接溶解于2mL氯化氢的二氧六环溶液中，室温搅拌4h后反应完全，经C18反相色谱柱分离纯化(CH3CN:H2O＝10-90％)得60mg淡黄色透明油状液体，产率66％。ESI-MS m/z275.1(M+H)+.
化合物QY-17-69的合成：
5-苄基-3-甲酰基-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(QY-17-69)：将QY-17-54(86mg，0.31mmol)直接溶解于4mL二氯甲烷中，加入二氧化锰粉末(136mg，1.57mmol)后加热至回流搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完毕，滤膜过滤除去固体后旋转蒸发除去二氯甲烷，得淡黄色油状液体产物可不经分离纯化直接进行下一步反应。ESI-MS m/z 273.1(M+H)+.
化合物QY-18-57的合成：
(S)-5-苄基-3-(((1-(4-碘苯基)乙基)氨基)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(QY-18-57)：将QY-17-69(0.169mmol)混匀至3mL 1,2-二氯乙烷中，加至15mL耐压瓶搅拌；加入(S)-1-(4-碘苯基)乙-1-胺盐酸盐(62mg，0.22mmol)，冰醋酸(3滴)，三乙酰氧基硼氢化钠(90mg，0.42mmol)，室温搅拌过夜，LC-MS监测反应完全，停止反应。旋蒸除去有机溶剂，二甲基亚砜溶混匀反应体系后滤膜过滤，C18反相色谱柱分离纯化(CH3CN:H2O＝10-90％)得73mg无色透明油状液体，产率86％。ESI-MS m/z 504.1(M+H)+.
化合物QY-18-59的合成：
(S)-5-苄基-3-(((1-(4-碘苯基)乙基)氨基)甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(QY-18-59)：将QY-18-57(73mg，0.145mmol)溶解于2mL乙醇和2mL四氢呋喃中，转移至15mL耐压瓶，氢氧化钠(58mg，1.45mmol)溶解于1.0mL蒸馏水中，室温下滴加至反应液中，加热至40℃后搅拌反应过夜，LC-MS监测反应完全，停止反应。加2N盐酸酸化反应体系至弱酸性，滤膜过滤后经C18反相色谱柱分离纯化(CH3CN：H2O＝0-80％)得46mg无色透明油状液体，产率67％。ESI-MS m/z 476.0(M+H)+.
化合物QY-18-62的合成：
(S)-3-benzyl-5-(1-(4-iodophenyl)ethyl)-2-methyl-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]py razol-4(2H)-one(QY-18-62)：QY-18-59(46mg，0.097mmol)在15mL耐压瓶内溶解于2.5mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入HATU(44mg，0.116mmol)，室温下滴加N,N-二异丙基乙胺(50mg，0.388mmol)，室温条件下持续搅拌。LC-MS实时监测，待反应完成后，向反应液中加入三氟乙酸调整至弱酸性，滤膜过滤后经C18反相色谱柱分离纯化(CH3CN：H2O＝10-80％)得27mg无色透明油状液体，产率61％。ESI-MS m/z 457.9(M+H)+.
化合物QY-18-63的合成：
(S)-3-benzyl-2-methyl-5-(1-(4-(pyridin-2-ylethynyl)phenyl)ethyl)-5,6-dih ydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-4(2H)-one(QY-18-63)：15mL耐压瓶中，依次加入1mL四氢呋喃，QY-18-62(46mg，0.097mmol)，搅拌溶解均匀后加入2-乙炔基吡啶(9.1mg，0.089mmol)，碘化亚铜(2.2mg，0.012mmol)，N,N-二异丙基乙胺(50mg，0.388mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯(4.1mg，0.006mmol)，氮气保护室温搅拌反应。待反应物消耗完毕，硅藻土抽滤后旋蒸除去有机溶剂，硅胶柱层析分离纯化(PE：EA＝10–100％)得21mg黄褐色油状液体，产率82％。ESI-MS m/z 433.2(M+H)+.
按照上述方法通过替换不同的合成底物，得到如表1中所示的化合物：
表1
表1中所示化合物的NMR数据如下：
QY-17-24:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.65
(t,J＝1.8Hz,1H),7.42(dt,J＝7.9,1.8Hz,2H),7.32–7.25(m,3H),7.24–7.15(m,3H),5.16(p,J＝7.3Hz,1H),4.41(q,J＝15.3Hz,2H),3.89(s,3H),1.49(d,J＝7.1Hz,3H).ESI-MS m/z 399.0(M+H)+.
QY-17-25:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(d,J＝8.5Hz,1H),7.42
(d,J＝7.1Hz,2H),7.37–7.09(m,8H),5.18(p,J＝7.3Hz,1H),4.42(q,J＝15.3Hz,2H),3.88(s,3H),1.50(d,J＝7.1Hz,3H).ESI-MS m/z 321.1(M+H)+.
QY-18-15:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(d,J＝8.3Hz,1H),7.73
–7.61(m,2H),7.33–7.13(m,7H),5.12(p,J＝7.3Hz,1H),4.40(q,J＝15.3Hz,2H),3.88(s,3H),1.48(d,J＝7.1Hz,3H).ESI-MS m/z 446.9(M+H)+.
QY-18-25:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.02(d,J＝8.4Hz,1H),8.75
(d,J＝2.1Hz,1H),8.59(dd,J＝4.9,1.7Hz,1H),7.98(dt,J＝8.0,2.0Hz,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,2H),7.52–7.44(m,3H),7.28(t,J＝7.3Hz,2H),7.24–7.15(m,3H),5.21(q,J＝7.4 Hz,1H),4.42(q,J＝15.3 Hz,2H),3.89(s,3H),1.52(d,J＝7.1 Hz,3H).ESI-MSm/z 422.2(M+H)+.
QY-18-26:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.03(d,J＝8.4 Hz,1H),8.61
(d,J＝4.8 Hz,1H),7.86(td,J＝7.8,1.9 Hz,1H),7.64(d,J＝7.8 Hz,1H),7.58(d,J＝7.9 Hz,2H),7.50(d,J＝7.9 Hz,2H),7.42(dd,J＝7.6,4.9 Hz,1H),7.28(t,J＝7.3Hz,2H),7.24–7.15(m,3H),5.22(p,J＝7.1 Hz,1H),4.42(q,J＝15.3 Hz,2H),3.89(s,3H),1.52(d,J＝7.0 Hz,3H).ESI-MS m/z 422.2(M+H)+.
QY-18-27:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.04(d,J＝8.3 Hz,1H),8.69
(s,2H),7.65(d,J＝5.1 Hz,2H),7.60(d,J＝8.1 Hz,2H),7.52(d,J＝8.0 Hz,2H),7.28(t,J＝7.3 Hz,2H),7.24–7.16(m,3H),5.22(p,J＝7.2 Hz,1H),4.42(q,J＝15.3Hz,2H),3.89(s,3H),1.52(d,J＝7.1 Hz,3H).ESI-MS m/z 422.2(M+H)+.
QY-18-28:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.01(d,J＝8.4 Hz,1H),7.89
(d,J＝8.6 Hz,4H),7.64(dd,J＝8.4,1.8 Hz,1H),7.48(pd,J＝7.1,1.7 Hz,2H),7.28–7.22(m,2H),7.22–7.14(m,3H),5.35(p,J＝7.2 Hz,1H),4.52–4.21(m,2H),3.88(s,3H),1.60(d,J＝7.0 Hz,3H).ESI-MS m/z 371.2(M+H)+.
QY-18-41:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.12(d,J＝8.2 Hz,1H),7.80
(d,J＝8.0 Hz,2H),7.61(d,J＝8.0 Hz,2H),7.30–7.24(m,2H),7.24–7.12(m,3H),5.22(p,J＝7.3 Hz,1H),4.40(q,J＝15.3 Hz,2H),3.88(s,3H),1.51(d,J＝7.1 Hz,3H).ESI-MS m/z 346.1(M+H)+.
QY-18-42:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.95(d,J＝8.4 Hz,1H),7.40
(d,J＝8.0 Hz,2H),7.34(d,J＝7.9 Hz,2H),7.27(d,J＝7.2 Hz,2H),7.20(dd,J＝14.8,7.1 Hz,3H),5.18(p,J＝7.1 Hz,1H),4.41(q,J＝15.3 Hz,2H),3.88(s,3H),1.49(d,J＝7.0 Hz,3H),1.45(s,6H).ESI-MS m/z 403.2(M+H)+.
QY-18-43:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.97(d,J＝8.3 Hz,1H),8.05
(s,1H),7.67(s,1H),7.43(s,4H),7.28(t,J＝7.3 Hz,2H),7.24–7.16(m,3H),5.19(p,J＝7.2 Hz,1H),4.42(q,J＝15.3 Hz,2H),3.88(s,3H),3.85(s,3H),1.50(d,J＝7.0 Hz,3H).ESI-MS m/z 425.2(M+H)+.
QY-18-44:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.95(d,J＝8.4 Hz,1H),7.37
(q,J＝8.4 Hz,4H),7.28(dd,J＝7.9,6.3 Hz,2H),7.24–7.13(m,3H),5.17(p,J＝6.9 Hz,1H),4.41(q,J＝15.3 Hz,2H),3.88(s,3H),3.83–3.76(m,2H),3.48–3.40(m,2H),2.87(tt,J＝9.0,4.1 Hz,1H),1.90–1.76(m,2H),1.64–1.54(m,2H),1.49(d,J＝7.0 Hz,3H).ESI-MS m/z 429.2(M+H)+.
QY-18-47:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.93(d,J＝8.6 Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,2H),7.33–7.24(m,4H),7.24–7.15(m,3H),5.16(p,J＝7.4 Hz,1H),4.41(q,J＝15.3Hz,2H),3.88(s,3H),1.57–1.50(m,1H),1.49(s,3H),0.92–0.82(m,2H),0.75–0.66(m,2H).ESI-MS m/z 385.1(M+H)+.
QY-18-49:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.98(d,J＝8.4 Hz,1H),7.54–7.37(m,4H),7.31–7.24(m,2H),7.24–7.14(m,3H),5.18(p,J＝7.2 Hz,1H),4.41(q,J＝15.3 Hz,2H),4.12(s,1H),3.88(s,3H),1.49(d,J＝7.1 Hz,3H).ESI-MS m/z 345.2(M+H)+.
QY-18-63:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.61(d,J＝4.8 Hz,1H),7.86(td,J＝7.7,1.8 Hz,1H),7.65(d,J＝7.8 Hz,1H),7.60(d,J＝8.0 Hz,2H),7.42(dd,J＝7.6,5.0 Hz,1H),7.38(d,J＝8.0 Hz,2H),7.32(d,J＝5.8 Hz,4H),7.23(dt,J＝5.8,2.8 Hz,1H),5.46(q,J＝7.2 Hz,1H),4.40(d,J＝16.3 Hz,1H),4.19(s,2H),4.00(d,J＝16.3 Hz,1H),3.78(s,3H),1.61(d,J＝7.2 Hz,3H).ESI-MS m/z 433.2(M+H)+.
QY-18-77:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.43(s,1H),9.01(d,J＝8.4Hz,1H),8.95(s,1H),7.49(q,J＝8.2 Hz,4H),7.28(t,J＝7.3 Hz,2H),7.24–7.14(m,3H),5.21(p,J＝7.3 Hz,1H),4.42(q,J＝15.4 Hz,2H),3.89(s,3H),1.51(d,J＝7.1 Hz,4H).ESI-MS m/z412.1(M+H)+.
QY-18-102:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.62(d,J＝4.8 Hz,1H),7.87
(td,J＝7.7,1.8 Hz,1H),7.64(dd,J＝17.6,7.9 Hz,3H),7.43(d,J＝7.9 Hz,3H),7.36–7.26(m,4H),7.25–7.18(m,1H),5.97(q,J＝7.1 Hz,1H),4.39(d,J＝4.9 Hz,2H),3.64(s,3H),3.50–3.42(m,1H),3.12–3.04(m,1H),2.80–2.62(m,2H),1.54(d,J＝7.1Hz,3H).ESI-MS m/z 447.2(M+H)+.
QY-19-53:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.98(d,J＝8.4 Hz,1H),7.43
–7.34(m,4H),7.28(t,J＝7.3 Hz,2H),7.24–7.15(m,3H),5.17(p,J＝7.3 Hz,1H),4.53–4.29(m,2H),3.88(s,3H),3.45–3.39(m,2H),3.26–3.18(m,2H),3.15–3.09(m,1H),3.04–3.00(m,1H),2.29–2.19(m,1H),1.96–1.86(m,1H),1.49(d,J＝7.1 Hz,3H).ESI-MS m/z 414.2(M+H)+.
QY-19-54:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.00(d,J＝8.4 Hz,1H),8.77
(s,1H),7.50–7.36(m,4H),7.28(dd,J＝8.0,6.4 Hz,2H),7.24–7.12(m,3H),5.18(p,J＝7.1 Hz,1H),4.41(q,J＝15.3 Hz,2H),4.15(t,J＝8.8 Hz,2H),4.01–3.90(m,3H),3.88(s,3H),1.49(d,J＝7.0 Hz,3H).ESI-MS m/z 400.2(M+H)+.
QY-19-55:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.98(d,J＝8.4 Hz,1H),7.39
(q,J＝8.4 Hz,4H),7.28(dd,J＝8.0,6.4 Hz,2H),7.24–7.13(m,3H),5.17(p,J＝7.2 Hz,1H),4.50–4.29(m,2H),3.88(s,3H),3.46–3.38(m,2H),3.20–3.00(m,3H),2.69(s,3H),2.42–2.32(m,1H),2.06–1.96(m,1H),1.49(d,J＝7.0Hz,3H).ESI-MS m/z 428.2(M+H)+.
QY-19-56:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.99(d,J＝8.4 Hz,1H),7.48
–7.35(m,4H),7.28(t,J＝7.3 Hz,2H),7.24–7.13(m,3H),5.18(p,J＝7.2 Hz,1H),4.41(q,J＝15.3 Hz,2H),4.10–4.00(m,2H),3.88(s,3H),3.82–3.66(m,3H),2.64(s,3H),1.49(d,J＝7.0 Hz,3H).ESI-MS m/z 414.2(M+H)+.
QY-19-60:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.98(d,J＝8.4 Hz,1H),7.39
(q,J＝8.0 Hz,4H),7.28(t,J＝7.4 Hz,2H),7.23–7.15(m,3H),5.18(p,J＝7.2Hz,1H),4.41(q,J＝15.3 Hz,2H),4.10(t,J＝6.6 Hz,1H),3.88(s,3H),3.06–2.98(m,1H),2.92–2.84(m,1H),2.16–2.04(m,1H),1.90–1.67(m,3H),1.49(d,J＝7.1 Hz,3H).ESI-MS m/z 414.2(M+H)+.
QY-19-62:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.98(d,J＝8.4 Hz,1H),7.45
–7.34(m,4H),7.28(dd,J＝8.1,6.6 Hz,2H),7.24–7.13(m,3H),5.17(p,J＝7.3Hz,1H),4.41(q,J＝15.3 Hz,2H),3.88(s,3H),3.39(s,1H),2.80(s,1H),2.41(s,0H),2.37(s,3H),2.13(q,J＝7.3 Hz,1H),1.81(ddt,J＝24.7,18.6,8.0Hz,3H),1.49(d,J＝7.1 Hz,3H).ESI-MS m/z 428.2(M+H)+.
SYL-30-52:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.08–8.98(m,1H),7.82(d,J＝3.0 Hz,1H),7.59(d,J＝7.6 Hz,1H),7.43(d,J＝7.4 Hz,1H),7.28(dt,J＝7.2,3.5 Hz,2H),7.24–7.10(m,4H),5.28–4.90(m,1H),4.56–4.27(m,2H),3.89(d,J＝2.7 Hz,3H),1.48(dd,J＝6.8,2.8 Hz,3H).ESI-MS m/z 447.1(M+H)+.
SYL-30-56:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.01(d,J＝8.4 Hz,1H),7.47
(s,1H),7.40(d,J＝7.7 Hz,1H),7.35–7.13(m,7H),5.15(t,J＝7.6 Hz,1H),4.41(q,J＝15.3 Hz,2H),3.88(s,3H),1.49(d,J＝7.0 Hz,3H),1.45(s,6H).ESI-MS m/z 403.2(M+H)+.
SYL-30-58:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.04(d,J＝8.4 Hz,1H),8.78
(d,J＝2.2 Hz,1H),8.61(dd,J＝4.9,1.7 Hz,1H),8.02(dt,J＝8.0,2.0 Hz,1H),7.67(d,J＝1.9 Hz,1H),7.54–7.45(m,3H),7.41(t,J＝7.6 Hz,1H),7.30–7.24(m,2H),7.22–7.13(m,3H),5.20(p,J＝7.1 Hz,1H),4.42(q,J＝15.3 Hz,2H),3.89(s,3H),1.53(d,J＝7.1 Hz,3H).ESI-MS m/z 422.2(M+H)+.
SYL-30-62:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ9.03(d,J＝8.4 Hz,1H),7.66
(s,1H),7.53(d,J＝7.7 Hz,1H),7.48(d,J＝7.7 Hz,1H),7.40(t,J＝7.7 Hz,1H),7.27(t,J＝7.4 Hz,2H),7.23–7.14(m,3H),5.18(p,J＝7.3 Hz,1H),4.51–4.32(m,2H),3.89(s,3H),1.51(d,J＝7.0 Hz,3H).ESI-MS m/z 345.1(M+H)+.
SYL-30-65:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.99(d,J＝8.4 Hz,1H),8.52
(s,1H),8.39(s,1H),7.48(s,1H),7.42(d,J＝7.6 Hz,1H),7.35–7.24(m,4H),7.23–7.15(m,3H),5.15(p,J＝7.2 Hz,1H),4.50–4.26(m,2H),3.88(s,3H),3.29–3.21(m,2H),3.10–2.93(m,3H),2.08–1.98(m,2H),1.81–1.70(m,2H),1.49(d,J＝7.0 Hz,3H).ESI-MS m/z 428.2(M+H)+.
QY-20-1:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.91(d,J＝8.0 Hz,1H),8.71–
8.53(m,1H),7.87(td,J＝7.8,1.9 Hz,1H),7.66(d,J＝7.8 Hz,1H),7.61–7.52(m,3H),7.42(td,J＝7.9,5.7 Hz,3H),7.33–7.21(m,3H),7.10(dd,J＝7.4,2.0Hz,2H),7.01(d,J＝2.1 Hz,1H),5.68(s,2H),5.14(p,J＝7.2 Hz,1H),1.46(d,J＝7.1 Hz,3H).ESI-MS m/z 407.1(M+H)+.
QY-20-2:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.62(d,J＝5.0 Hz,1H),8.44(d,
J＝7.9 Hz,1H),8.07(s,1H),7.88(td,J＝7.7,2.0 Hz,1H),7.66(d,J＝7.8 Hz,1H),7.59(dd,J＝8.2,1.9 Hz,2H),7.51–7.38(m,3H),7.29–7.23(m,2H),7.21–7.11(m,3H),5.17(p,J＝7.1 Hz,1H),4.46–4.35(m,2H),3.65(s,3H),1.47(d,J＝7.0 Hz,3H).ESI-MS m/z 421.2(M+H)+.
QY-20-5:1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ8.89(d,J＝7.9 Hz,1H),8.70–
8.56(m,1H),7.87(td,J＝7.7,1.8 Hz,1H),7.66(dd,J＝6.1,4.3 Hz,2H),7.56(d,J＝7.9Hz,2H),7.48–7.35(m,3H),7.33–7.25(m,3H),7.09(dd,J＝6.6,2.9Hz,2H),5.59–5.36(m,2H),5.12(p,J＝7.2Hz,1H),1.42(d,J＝7.0Hz,3H).ESI-MS m/z 425.2(M+H)+.
QY-20-18:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.12(d,J＝8.3Hz,1H),8.80
(d,J＝5.7Hz,1H),8.66–8.56(m,1H),7.88(td,J＝7.8,1.8Hz,1H),7.66(d,J＝7.9Hz,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,2H),7.54–7.41(m,5H),7.34(t,J＝7.4Hz,1H),7.29(d,J＝7.9Hz,2H),7.17(d,J＝5.7Hz,1H),5.12(p,J＝7.2Hz,1H),1.48(d,J＝7.0Hz,3H).ESI-MSm/z 420.1(M+H)+.
QY-20-53:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(d,J＝8.3Hz,1H),8.70
–8.53(m,1H),7.86(td,J＝7.7,1.8Hz,1H),7.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.58(d,J＝8.2Hz,2H),7.50(d,J＝8.1Hz,2H),7.42(ddd,J＝7.6,4.9,1.3Hz,1H),7.29–7.21(m,2H),7.16–7.07(m,2H),5.22(p,J＝7.3Hz,1H),4.40(q,J＝15.3Hz,2H),3.90(s,3H),1.52(d,J＝7.1Hz,3H).ESI-MS m/z 440.2(M+H)+.
QY-20-54:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.08(d,J＝8.3Hz,1H),8.72
–8.55(m,1H),7.87(td,J＝7.8,1.9Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.58(d,J＝8.1Hz,2H),7.50(d,J＝8.1Hz,2H),7.46–7.40(m,1H),7.33(q,J＝7.4Hz,1H),7.11–7.00(m,3H),5.22(p,J＝7.2Hz,1H),4.50–4.37(m,2H),3.92(s,3H),1.52(d,J＝7.1Hz,3H).ESI-MS m/z 440.2(M+H)+.
QY-20-55:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(d,J＝8.3Hz,1H),8.90
(s,1H),7.96(d,J＝1.4Hz,1H),7.60(d,J＝8.1Hz,2H),7.52(d,J＝8.1Hz,2H),7.28(dd,J＝8.0,6.5Hz,2H),7.24–7.16(m,3H),5.21(p,J＝7.2Hz,1H),4.51–4.33(m,2H),3.89(s,3H),3.86(s,3H),1.52(d,J＝7.1Hz,3H).ESI-MS m/z 425.2(M+H)+.
生物测试例1：RIPK1抑制剂对细胞程序性坏死的抑制活性测试
所采用的的生物测试方案为：化合物对TNF诱导的FADD(Fas相关死亡结构域)缺失的Jurkat细胞和L929细胞程序性坏死的影响。
为了在细胞水平上验证本发明中的化合物对细胞程序性坏死的抑制作用，选取与RIP1通路有紧密相关性的细胞类型，即FADD缺陷Jurkat细胞(人源外周血白血病T细胞株)和L929细胞，分别采用两种不同的刺激方式：单独使用肿瘤坏死因子(TNFα)，或者将TNFα与线粒体衍生的半胱氨酸天冬氨酸激活剂(SMAC)SM164联用，通过检测化学发光值来计算细胞活力，从而得出化合物抑制细胞程序性坏死的生物活性。
方法：FADD缺陷Jurkat细胞：体外培养FADD缺陷Jurkat细胞(人源外周血白血病T细胞株)，生长至对数生长期后，收集细胞，1000rpm离心5min，弃上清，调整细胞浓度至2.5×105/mL，将细胞接种至384孔板中，每孔40μl。在相应的孔中加入使用细胞培养基稀释的SM164(50nM)和化合物各5μL，37℃预处理1h后，刺激组每孔加入细胞培养基稀释的TNFα(50ng/mL)5μL，对照组加入培养基5μL。放置细胞培养箱(37℃，5％ CO2)中培养14h后，每孔加入15μl Cell Titer-Glo溶液，室温孵育30min，检测化学发光值(luminescence)以衡量细胞内ATP水平。以未刺激DMSO对照孔为100％细胞活力。L929细胞：体外培养L929细胞(小鼠成纤维细胞)消化后稀释至6.25×104/ml，将细胞接种到384孔板中，每孔40μl。放置细胞培养箱(37℃，5％CO2)中培养12h。在相应的孔中加入使用细胞培养基稀释的SM164(500nM)和化合物各5μL，37℃预处理1h后，刺激组每孔加入细胞培养基稀释的TNFα(500ng/mL)5μL，对照组加入培养基5μL，放置细胞培养箱(37℃，5％CO2)中培养14h后，每孔加入15μl CellTiter-Glo溶液，室温孵育30min，检测化学发光值(luminescence)以衡量细胞内ATP水平。以未刺激DMSO对照孔为100％细胞活力。运用Prism Graphpad统计软件计算化合物EC50值。结果如表2所示。
表2.RIPK1抑制剂对细胞程序性坏死的抑制活性测试结果
表2的实验结果表明：无论是在TNFα单独刺激还是联用SM164刺激的情况下，本发明的优选化合物如QY-18-26、QY-18-27、QY-20-53和QY-20-54等多个化合物均在人源的FADD缺陷Jurkat细胞上，展现出比临床抑制剂SAR443122更强的程序性坏死抑制活性；而在SAR443122几乎失活的鼠源L929细胞上，本发明的优选化合物依然能够很好地抑制程序性坏死发生。
生物测试例2：测试代表性化合物QY-18-26对RIPK1激酶活性的影响。
所采用的的生物测试方案：测试化合物QY-18-26对RIPK1(1-330)蛋白的激酶活性的影响。体外纯化的RIPK1(1-330)蛋白保留完的激酶活性域，并且保持着良好的激酶活性。使用已知的RIPK1临床抑制剂SAR443122作为对照。
方法：在384孔板中分别加入终浓度为2μM的RIPK1(1-330)蛋白和相应浓度的ATP(1X kinase buffer)，终浓度5μL，每组至少设置3个副孔，37℃反应2h。加入5μL ADP-Glo试剂，该试剂用于停止激酶反应并且去除反应体系中残留的ATP。室温静置40min。加入10μL激酶检测试剂(Kinase Detection Reagent)，该试剂用于将ADP转变为ATP并且在体系中引入检测ATP的荧光素酶(luciferase)和萤光素(luciferin)。室温反应1h。使用7500快速实时PCR系统(Fast Real-Time PCR System)检测发光。运用Prism Graphpad统计软件计算化合物抑制激酶反应的IC50。实验结果请见图1。
实验结果表明：代表化合物QY-18-26对RIPK1激酶展示出浓度依赖性的有效抑制，其有效半抑制浓度为6.4nM，优于对照的SAR443122(有效半抑制浓度为9.6nM)。
生物测试例3：代表性化合物QY-18-26的药代动力学性质
所采用的的生物测试方案为：化合物在小鼠活体上的药物代谢测试。
为了在活体上验证本发明中的化合物的药代动力学性质，选取代表化合物QY-18-26，利用灌胃(PO，10mg/kg)或静脉注射(IV，1mg/kg)的单次给药方式，测试化合物在小鼠(n＝3)上的药代动力学性质。实验结果如图2所示。
结果表明，QY-18-26单次用药后，在小鼠体内迅速达到峰值，并展示出很高的最高血药浓度(Cmax)、暴露量(AUC)和生物利用度(F)，在灌胃用药10mg/kg后24h中，大部分时间血药浓度能稳定保持在有效抑制浓度(5ng/mL)之上。
生物测试例4：代表性化合物QY-18-26的透脑性质
所采用的的生物测试方案为：化合物在小鼠和大鼠活体上的脑/血药物浓度测试。
为了在活体上验证本发明中化合物的透脑性质，选取代表化合物QY-18-26，利用灌胃(PO，10mg/kg)或静脉注射(IV，2mg/kg)的单次给药方式，测试化合物在小鼠(n＝3)体内不同时间点的脑/血药物浓度；同时利用利用灌胃(PO，5mg/kg)的单次给药方式，测试化合物在大鼠(n＝3)体内的不同时间点的脑/血药物浓度。实验结果如图3所示。
QY-18-26单次用药后，在大、小鼠脑内浓度约为血浆中浓度的40％，并在4h时仍保持稳定的脑血分布，其脑药浓度远在有效抑制浓度(5ng/g)之上，表明该化合物具有理想的透脑性质。
生物测试例5：代表性化合物QY-18-26对TNFα引起的系统性炎症反应综合征的影响
所采用的的生物测试方案：系统性炎症反应综合征也称为炎症风暴，是指严重感染、多发性创伤、烧伤、缺血再灌注、急性胰腺炎等感染性或非感染性伤害导致的全身非特异性炎症反应。该条件下会有大量的炎症因子释放，严重情况导致机体对炎症反应失控，造成多器官功能衰竭、甚至死亡。尾静脉注射肿瘤坏死因子TNF会导致小鼠系统性炎症反应综合征的发生，导致小鼠体温下降并死亡。测试代表性化合物QY-18-26对TNFα引发的系统性炎症反应综合征的影响，监测小鼠体温变化和死亡情况。使用已知的RIPK1抑制剂Nec-1s作为对照，临床抑制剂SAR443122对鼠源RIPK1抑制活性很差，故不使用。
方法：待测化合物提前一天根据所需浓度溶解于0.5％羧甲基纤维素，超声过夜。每只小鼠灌胃200μl，20min后，通过尾静脉注射10mg TNFα(溶解于125μl PBS中)。注射后用红外体温仪监测小鼠体温变化。运用Prism Graphpad统计软件计算化合物的影响。实验结果如图4所示。
实验结果表明，在没有抑制剂参与的情况下，小鼠注射TNFα小时以内即全部死亡；化合物QY-18-26能够在低剂量下(1mg/kg)即可有效抵抗TNFα引起的体温降低、炎症反应及死亡。

Claims (10)

1.一种化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于，所述化合物如式I所示：
式中：
X1选自下组：CH、N或化学键；
X2、X3、X4和X5各自独立地选自下组：CH、N；
条件是X1、X2、X3、X4和X5形成的环是芳香环；
M选自下组：O、S、NR3、CHR3或C(R3)2；
W和U各自独立地选自下组：O、S、NR4、CHR4或C(R4)2；
A环和B环各自独立地选自下组：取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基；
R1和R2各自独立地选自下组：无、H、取代或未被取代的C1-C6烷基、卤素；
且当M为NR3、CHR3或C(R3)2时，R2、R3可以与其相连的C原子或N原子，以及-C-C(O)-共同形成取代或未取代的5-7元环；
R3和R4选自下组：H、取代或未取代的C1-C6烷基、卤素；
R6选自下组：H、卤素、CN、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6烯烃、取代或未取代的C2-C6炔烃、或-CH≡CR5；其中，R5选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的4-12元杂环基；
R7选自下组：H、卤素、CN、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6烯烃、取代或未取代的C2-C6炔烃、或-CH≡CR8；其中，R8选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的4-12元杂环基；
其中，所述的取代指基团上的氢原子被一个或者多个(例如2个、3个、4个等)选自下组的取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代的C1-C6烷基、C3-C8环烷基、卤代的C3-C8环烷基、C1-C6烷氧基、卤代的C1-C6烷氧基、甲基砜基、-S(＝O)2NH2、氧代(＝O)、-CN、羟基、-NH2、羧基、C2-C6酰胺基(-C(＝O)-N(Rc)2或-NH-C(＝O)(Rc)，Rc为H或C1-C5的烷基)、C1-C6烷基-(C2-C6酰胺基)、C1-C6胺基、C6-C10芳基、具有1-3个选自N、S和O的杂原子的5-7元杂芳基、具有1-3个选自N、S和O的杂原子的4-7元杂环基。
2.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于，所述化合如式II所示：
M、W、U、A、B、R1、R6、R7的定义如权利要求1所述。
3.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于，所述A环和B环各自独立地选自下组：取代或未取代的苯基、取代或未取代的5-7元杂芳基；
取代的定义如权利要求1所述。
4.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于，所述A环和B环各自独立地选自下组：
5.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于，所述的式I中，M为NR3，和/或
W为CHR4；
R6选自下组：H、卤素、CN、取代或未取代的C1-C6烷基；
R7选自下组：H、卤素、CN、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C2-C6炔烃、或-CH≡CR8；其中，R8选自下组：取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的5-12元杂芳基、取代或未取代的C3-C8环烷基、取代或未取代的4-12元杂环基；
R3、R4、取代的定义如权利要求1所述。
6.如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其特征在于，所述化合如式III所示：
M、W、U、A、B、X5、R1、R2、R3、R6、R8的定义如权利要求1所述。
7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自下表：
8.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括(a)治疗有效量的如权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物；和(b)药学上可接受的载体。
9.如权利要求1所述的化合物或如权利要求8所述的药物组合物在制备用于治疗或预防与细胞程序性坏死和/或人受体相互作用蛋白1激酶(RIPK1)相关的疾病或病症的药物中的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的疾病或病症选自下组中的一种或多种：退行性疾病、炎症、缺血再灌注损伤、病原体感染、帕金森氏症(PD)、亨老年性黄斑变性、自身免疫性疾病、视网膜脱离诱导的感光细胞坏死、青光眼、顺铂诱导的肾损伤和创伤性脑损伤、高血脂所致动脉粥样硬化、由RIPK1依赖性细胞凋亡、坏死或细胞因子生成相关的其他疾病、细菌感染、病毒感染和溶酶体贮积症。
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