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CN118984837A - 作为pd-1激动剂的程序性细胞死亡蛋白1的抗体 - Google Patents

作为pd-1激动剂的程序性细胞死亡蛋白1的抗体 Download PDF

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CN118984837A
CN118984837A CN202380029518.5A CN202380029518A CN118984837A CN 118984837 A CN118984837 A CN 118984837A CN 202380029518 A CN202380029518 A CN 202380029518A CN 118984837 A CN118984837 A CN 118984837A
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S·哈利夫
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George Munet Co
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Abstract

提供了抗体及其抗原结合片段，其免疫特异性结合至PD‑1，诸如人或小鼠PD‑1，并且是PD‑1的激动剂并能够诱导或促进激活免疫细胞增殖或活性的免疫应答。不同于大多数已知的抗PD‑1和抗PD‑L1抗体，所述大多数已知的抗PD‑1和抗PD‑L1抗体通过物理阻断PD‑1和灭活配体之间的相互作用来降低例如PD‑L1对PD‑1功能的阻抑，尽管不受理论的束缚，但所公开的抗体及其抗原结合片段目前被最好地理解为免疫特异性结合至PD‑1的表位，从而直接激活PD‑1。提供了用于治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用所述抗体或抗原结合片段。提供了编码所述抗体或抗原结合片段的多核苷酸。提供了包含所述多核苷酸的宿主细胞。

Description

作为PD-1激动剂的程序性细胞死亡蛋白1的抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求2022年1月28日提交的美国临时申请第63/304,365号的权益，所述申请的全部内容以引用的方式并入本文。
技术领域
本发明总体上涉及特异性结合至PD-1的抗体及其使用方法。
背景技术
程序性细胞死亡受体蛋白1(PD-1)/程序性细胞死亡受体蛋白配体1(PD-L1)途径作为癌症免疫治疗靶标已显示出有希望的临床成功。通过物理抑制PD-1和PD-L1之间的相互作用来破坏这一途径的抗体可以增强患者对癌细胞的免疫应答。例如，帕博利珠单抗(pembrolizumab)(Merck&Co.,Inc.,Kenilworth,NJ)结合至人PD-1中64-89范围内的氨基酸，这与PD-L1结合的PD-1的部分重叠。(Zak等人,Cell Structure 25(8):1163-1174(2017))。PD-1单克隆抗体和其他免疫检查点抑制剂的成功临床试验为癌症免疫学开辟了新的途径。然而，大部分癌症患者对新免疫疗法(包括阻断抗PD1疗法)未能做出应答，导致对联合疗法和预测性生物标志物的深入研究(Iwai,Y.等人Journal ofBiomedical Science,
因此，希望提供用于调节PD-1信号转导的组合物和方法。特别希望提供作为PD-1激动剂，即独立于破坏PD-1/PD-L1相互作用而激活PD-1的组合物和方法。
还希望提供特异性结合至PD-1并调节PD-1信号转导的抗体及其抗原结合片段。特别希望提供作为PD-1激动剂，即独立于破坏PD-1/PD-L1相互作用而激活PD-1的抗体和抗原结合片段。
还希望提供用于治疗癌症的组合物和方法。
还希望提供用于治疗感染的组合物和方法。
发明内容
本公开涉及免疫特异性结合至PD-1(理想的是人或小鼠PD-1)并且是PD-1激动剂的抗体及其抗原结合片段。此类抗体可用于诱导或促进激活免疫细胞增殖或活性的免疫应答。在实施方案中，所公开的抗体及其抗原结合片段特异性结合至免疫细胞上表达的PD-1。在一个具体的实施方案中，所公开的抗体及其抗原结合片段特异性结合至远离PD-1和PD-L1之间的相互作用的位点(例如，不位于人PD-1中64-89范围内的氨基酸残基处)的PD-1表位。在一个具体的实施方案中，抗体或抗原结合片段不与PD-L1竞争结合至PD-1。所公开的抗体及其抗原结合片段与免疫细胞上的PD-1的结合可以导致激活信号被传递到免疫细胞中，例如增强或促进细胞因子产生和/或免疫细胞增殖激活的信号。表达PD-1的免疫细胞包括但不限于B和T细胞以及髓源性细胞(Riley,J.,Immunol Rev..229(1)；114-125-(2009))。在实施方案中，免疫细胞是T细胞，理想的是CD8+T细胞。
本公开还涉及一种刺激、促进或增强有需要的受试者的免疫应答(例如，适应性免疫应答)的方法，该方法通过向受试者施用有效量的如本文公开的抗PD-1抗体或其抗原结合片段以诱导、增强或促进受试者的免疫应答(例如，适应性免疫应答)来进行。
对程序性细胞死亡受体蛋白1(PD-1)具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段可包含轻链可变区和重链可变区，其中轻链可变区包含来自表2或表4的CDR L1、CDR L2和CDRL3，并且重链可变区包含来自表1或表3的CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在实施方案中，对程序性细胞死亡受体蛋白1(PD-1)具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段可包含轻链可变区和重链可变区，其中a)轻链可变区包含含有QX8X9X10X11X12的CDR L1、含有X13X14S的CDR L2和含有X15QX16X17X18X19PX20X21的CDR L3，并且重链可变区包含含有GYTFTTYG(SEQ ID NO:394)的CDR H1、含有INTYSGVP(SEQ ID NO:395)的CDR H2和含有ARX1X2X3X4X5 X6X7的CDR H3，其中X1选自由G和V组成的组；X2选自由G、S、L、V、I和E组成的组；X3选自由R、G、P、W、S、H和K组成的组；X4选自由G、E、S、V、W和K组成的组；X5选自由I、F、S、G、D和V组成的组；X6选自由A、G、Y和S组成的组；X7选自由Y、H和D组成的组；X8选自由G、S和D组成的组；X9选自由I和L组成的组；X10选自由S、V、G和R组成的组；X11选自由N、Y、T、S和R组成的组；X12选自由S、Y、D和W组成的组；X13选自由A、K、Y和D组成的组；X14选自由A和V组成的组；X15选自由Q、M和L组成的组；X16选自由S、G和D组成的组；X17选自由Y、T、N和S组成的组；X18选自由S、H和D组成的组；X19选自由T、W和F组成的组；X20选自由Y、P、R和W组成的组；并且X21选自由T和F组成的组；或者b)轻链可变区包含含有QX42X43X44X45X46的CDR L1、含有X47AS的CDRL2和含有X48X49X50X51X52X53X54的CDR L3，并且重链可变区包含含有GX22TFX23X24YX25(SEQ IDNO:163)的CDR H1、含有IX26X27X28X29X30X31T的CDR H2和含有AX32X33X34X35X36X37X38X39FX40X41的CDR H3，其中X22选自由Y和Q组成的组；X23选自由N、T和G组成的组；X24选自由S、I和N组成的组；X25选自由W和L组成的组；X26选自由H、L、R和P组成的组；X27选自由P和L组成的组；X28选自由R、S、I和N组成的组；X29选自由G、D、N和Y组成的组；X30选自由I、S、G和R组成的组；X31选自由H、D和Y组成的组；X32选自由P和S组成的组；X33选自由S、R、N和Y组成的组；X34选自由S、D、G、V和F组成的组；X35选自由S、N、G、I、D和R组成的组；X36选自由Y、N、C、L、S和H组成的组；X37选自由A、G、T和E组成的组；X38选自由W、C、S、R、D和G组成的组；X39选自A、S、G和D组成的组；X40选自由A、S和L组成的组；X41选自由H、Y和S组成的组；X42选自由D、S和G组成的组；X43选自V和I组成的组；X44选自由S和G组成的组；X45选自由T和S组成的组；X46选自由A、S、D和W组成的组；X47选自由W、G和D组成的组；X48选自由Q和H组成的组；X49选自由Q、K和H组成的组；X50选自由H、Y、F、R、D和G组成的组；X51选自由Y、N、Y、D、S和G组成的组；X52选自由R、S、V、T和I组成的组；X53选自由S、A、F、T、Y和W组成的组；并且X54选自由P、L、S和T组成的组。
在实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含4G9-12的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；4G9-1的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-2的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-3的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；4G9-4的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-5的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-6的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；4G9-7的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-8的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-9的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；4G9-10的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-11的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-13的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；4G9-14的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-15的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-16的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；4G9-17的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-18的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-19的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；4G9-20的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；5C2-1的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；5C2-2的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；5C2-3的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；5C2-4的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；5C2-5的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；5C2-6的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；5C2-7的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；5C2-8的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；5C2-9的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；或者5C2-10的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。在一个具体的实施方案中，抗体或抗原结合片段包含4G9-12的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；或者4G9-2的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。本文描述了抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10。在一个优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含4G9-12的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在实施方案中，抗体或抗原结合片段包含4G9-12的轻链可变区和重链可变区；4G9-1的轻链可变区和重链可变区；4G9-2的轻链可变区和重链可变区；4G9-3的轻链可变区和重链可变区；4G9-4的轻链可变区和重链可变区；4G9-5的轻链可变区和重链可变区；4G9-6的轻链可变区和重链可变区；4G9-7的轻链可变区和重链可变区；4G9-8的轻链可变区和重链可变区；4G9-9的轻链可变区和重链可变区；4G9-10的轻链可变区和重链可变区；4G9-11的轻链可变区和重链可变区；4G9-13的轻链可变区和重链可变区；4G9-14的轻链可变区和重链可变区；4G9-15的轻链可变区和重链可变区；4G9-16的轻链可变区和重链可变区；4G9-17的轻链可变区和重链可变区；4G9-18的轻链可变区和重链可变区；4G9-19的轻链可变区和重链可变区；4G9-20的轻链可变区和重链可变区；5C2-1的轻链可变区和重链可变区；5C2-2的轻链可变区和重链可变区；5C2-3的轻链可变区和重链可变区；5C2-4的轻链可变区和重链可变区；5C2-5的轻链可变区和重链可变区；5C2-6的轻链可变区和重链可变区；5C2-7的轻链可变区和重链可变区；5C2-8的轻链可变区和重链可变区；5C2-9的轻链可变区和重链可变区；或者5C2-10的轻链可变区和重链可变区。在一个具体的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含4G9-12的轻链可变区和重链可变区。在一个具体的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含4G9-2的轻链可变区和重链可变区。
一个实施方案提供了一种抗体或其抗原结合片段，其中CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3各自独立地与抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的对应的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3具有至少75％的同一性，诸如至少85％的同一性或至少90％的同一性。在一个优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3，它们各自独立地与4G9-12的对应的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3具有至少75％的同一性，诸如至少85％的同一性或至少90％的同一性。
一个实施方案提供了一种抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和重链可变区各自独立地与抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的对应的轻链可变区和重链可变区具有至少75％的同一性，诸如至少85％的同一性、至少90％的同一性或至少95％的同一性。在一个优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区和重链可变区各自独立地与4G9-12的对应的轻链可变区和重链可变区具有至少75％的同一性，诸如至少85％的同一性、至少90％的同一性或至少95％的同一性。
一个实施方案提供了一种抗体或其抗原结合片段，其中相对于抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的对应的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3，CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3各自独立地具有三个或更少的氨基酸取代，诸如两个氨基酸取代或一个氨基酸取代。
本公开的抗体或其抗原结合片段还可包含轻链恒定区或其部分和/或重链恒定区或其部分，例如，重链恒定区可以是IgG恒定区。
本公开的抗体或其抗原结合片段在结合至细胞上的PD-1时可以提高细胞中的磷酸化的白介素-2诱导型T细胞激酶(pITK)水平、ITK/SHP2比率或pITK水平和ITK/SHP2比率两者。通过激活T细胞，本文公开的抗体或其抗原结合片段可以诱导T细胞记忆和/或抑制T细胞耗竭。在一个实施方案中，一种抗体或其抗原结合片段诱导中枢记忆T细胞(Tcm)。在一个实施方案中，一种抗体或其抗原结合片段抑制T细胞耗竭。
本公开还涉及编码上述抗体或其抗原结合片段的重链、轻链或两者的多核苷酸。
本公开涉及一种包含多核苷酸的宿主细胞。在实施方案中，宿主细胞是哺乳动物细胞(例如，人细胞、CHO细胞、永生化人细胞、NS0细胞)。在一个具体的实施方案中，宿主细胞可以是转基因动物的细胞。在实施方案中，转基因动物是小鼠。
本公开还涉及一种包含上述抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载剂的药物组合物。
一个实施方案提供了一种免疫特异性结合至包含人PD-1(hPD-1)的氨基酸96-110的PD-1表位的抗体或其表位结合片段或融合蛋白。在某些优选的实施方案中，抗体或抗原结合片段结合至包含在免疫细胞的表面上表达的hPD-1的氨基酸96-110的PD-1表位。不受任何特定理论或机制的约束，据信抗体或抗原结合片段与PD-1的该表位的结合诱导或促进通过PD-1的信号，该信号激活或刺激免疫细胞而不破坏PD-1/PD-L1相互作用。在实施方案中，被激活或刺激的免疫细胞是T细胞，例如CD4 T细胞。
在实施方案中，抗体或其抗原结合片段可以是人的、小鼠的、嵌合的、人源化的、单克隆的、双特异性的、三特异性的或多特异性的。
本公开还涉及一种包含所公开的抗体或其抗原结合片段中的一者或多者的药物组合物。药物组合物可以包括第二治疗剂和/或药学上可接受的赋形剂。在实施方案中，第二治疗剂可以是降低PD-L1对PD-1的阻抑的第二抗体或其抗原结合片段。
本公开还涉及一种用于治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的如本文所述的抗体、抗原结合片段或药物组合物。本公开还涉及本文公开的用作药物(例如，特别是癌症疗法)和用于治疗癌症和/或用于制造用于治疗癌症的药物的抗体、抗原结合片段或药物组合物。
所公开的治疗方法还可以包括向受试者施用一种或多种另外的治疗剂。一种或多种另外的治疗剂可以是免疫调节剂。免疫调节剂可以是检查点抑制剂(例如，检查点抑制剂，前提条件是检查点抑制剂不抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的相互作用)。例如，检查点抑制剂可以是抗LAG-3抗体或其抗原结合片段。作为另一个实例，检测点抑制剂可以是抗CTLA4抗体或其抗原结合片段。免疫调节剂可以是T细胞接合物，包括双特异性T细胞接合物(BiTE)、双功能检查点抑制性T细胞接合物(CiTE)、同步多重相互作用T细胞接合物(SMITE)、三特异性杀伤细胞接合物(TriKE)、表达BiTE的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(CART.BiTE细胞)以及它们的组合。
一种或多种另外的治疗剂可以是细胞疗法。例如，细胞疗法可以是T细胞疗法。细胞疗法可以是肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)。细胞疗法可以是工程化的细胞疗法，诸如工程化的TCR疗法、嵌合抗原受体(CAR)疗法或它们的组合。在一个实施方案中，细胞疗法是嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)。在一个实施方案中，细胞疗法是工程化的TCR T细胞(TCR-T细胞)。例如，该方法可以包括向受试者施用有效组合，该有效组合包含治疗有效量的(i)作为本文所述的PD-1激动剂的抗体或抗原结合片段和(ii)降低PD-L1对PD-1的阻抑的第二抗体或其抗原结合片段。尽管不受理论的束缚，但第二抗体或抗原结合片段可以在物理干扰PD-1和PD-L1之间相互作用的位置处结合至PD-1或PD-L1。在另一个实例中，该方法可以包括向受试者施用有效组合，该有效组合包含治疗有效量的(i)作为本文所述的PD-1激动剂的抗体或抗原结合片段和(ii)不结合至PD-1或PD-L1的免疫检测点抑制剂，例如抗CTLA4或抗LAG-3。
本公开还涉及一种用于诱导或增强中枢记忆T细胞的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文公开的抗体或抗原结合片段。
本公开进一步涉及一种用于抑制T细胞耗竭的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文公开的抗体或抗原结合片段。
附图说明
图1A和图1B是显示根据实施例3的抗体4G9-2和4G9-12通过干扰素γ(IFNγ)水平确定的来自两名供体的人T细胞激活的图。图1A是显示来自不含激动剂抗PD-1抗体(‘对照’)、含有4G9-2或含有浓度为0和10μg/mL抗体的4G9-12的供体1的人T细胞激活后的IFNγ水平的图。图1B是显示来自不含激动剂抗PD-1抗体(‘对照’)、含有4G9-2抗体或含有浓度为0、10、20和50μg/mL抗体的4G9-12抗体的供体2的人T细胞激活后的IFNγ水平的图。不含激动剂抗PD-1抗体处理的IFNγ水平显示为虚线以供比较。
图2是显示根据实施例4的抗体4G9-1至4G9-10通过干扰素γ(IFNγ)水平确定的人CD4+T细胞激活并且还显示与未亲和力成熟的抗体(‘4G9 HC4-LC1’)相比，4G9-2处理显著增加了IFNγ(*p<0.05)的图。下面的虚线表示未用4G9谱系抗体处理的细胞中的平均IFNγ水平(“未处理”)。上面的虚线表示用未亲和力成熟的抗体处理的细胞中的平均IFNγ水平(“4G9 HC4-LC1”)。
图3A-图3C是显示表征响应于人CD4+T细胞的激动剂抗体(4G9-12)处理的记忆T细胞和末端效应T细胞群的实验的设计和结果的示意图和图表。图3A是实施例5中所述的实验的示意图。图3B是显示4G9-12处理后中枢记忆T细胞(CD45RO高/CD62L高/CD45RA低)占CD4+T细胞的百分比的图。图3C是显示4G9-12处理后末端效应T细胞(CD45RO低/CD62L低/CD45RA高)占CD4+T细胞的百分比的图。
图4A-图4C是显示在实施例6所述的研究中，抗PD1激动剂抗体而非同种型对照或PD-1阻断抗体对CD4+T细胞的刺激的图。图4A是显示用增加浓度的4G9-2抗体或4G9-12抗体而非阻断抗PD-1抗体(PROMEGA Co.，克隆J1201，“阻断-1”)处理供体CD4+T细胞，激活T细胞并诱导IFNγ产生的图。图4B是显示用增加浓度的4G9-2抗体或4G9-12抗体而非阻断抗PD-1抗体(PROMEGA Co.，克隆J1201，“阻断-1”)处理第二供体CD4+T细胞，激活T细胞并诱导IFNγ产生的图。图4C是显示用增加浓度的4G9-12抗体而非同种型对照抗体(“Iso Ctrl”)、阻断抗PD-1抗体(PROMEGA Co.，克隆J1201，“阻断-1”)或帕博利珠单抗(阻断抗PD-1抗体，“阻断-2”)处理第三供体CD4+T细胞，激活T细胞并诱导IFNγ产生的图。
图5是显示与未经抗体或配体处理的细胞(“未处理”)相比，如通过IFNγ释放测量的，用抗PD-1激动剂抗体(4G9-2)和PD-L1(例如，PD-L1-IgG)和4G9-2两者而非PD-L1(例如，PD-L1-IgG)或阻断抗PD-1抗体处理人CD4+T细胞增加了T细胞激活的图。结果显示，即使在PD-L1的存在下，抗PD-1激动剂抗体也显著增加了T细胞激活，如通过IFNγ释放所评定的。实施例7中描述了进一步的实验细节。
图6A-图6C是显示如实施例8中所述的PD-L1和激动剂抗PD-1抗体(4G9-12)之间的竞争性结合实验的流式细胞术结果的直方图。图6A示出了在1μg/mL、2μg/mL和5μg/mL PD-L1下，PD-L1与细胞表面上的PD-1(PD-L1荧光通道)的剂量依赖性结合。图6B示出了4G9-12(5μg/ml)与细胞PD-1的结合不受不同PD-L1浓度的影响。图6C示出了PD-L1与细胞表面上的PD1的剂量依赖性结合不受4G9-12(5μg/mL)存在的影响。
图7是显示在用4G9-12(0.5mg/kg或1.0mg/kg)和较小程度的阻断抗PD-1抗体(1.0mg/kg，RMP1-14克隆)进行腹膜内(i.p.)治疗后，结肠直肠癌的同基因小鼠模型中的平均肿瘤体积与实施例9中所述的研究中的未治疗小鼠(“未治疗”)相比减小的图。
图8A-图8D是显示图7且如实施例9中进一步描述的结肠直肠癌的同基因小鼠模型中每只小鼠的肿瘤体积的图。图8A是显示未治疗组中每只小鼠的肿瘤体积的图。图8B是显示4G9-12抗体(1mg/kg)组中每只小鼠的肿瘤体积的图。图8C是显示4G9-12抗体(0.5mg/kg)组中每只小鼠的肿瘤体积的图。图8D是显示阻断抗PD-1抗体(1mg/kg，RMP1-14克隆)组中每只小鼠的肿瘤体积的图。
图9是显示如实施例10中进一步描述的在用4G9-12(0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg或0.25mg/kg)或阻断抗PD-1抗体(1.0mg/kg，RMP1-14克隆)进行静脉内(i.v.)治疗后，结肠直肠癌的CT26小鼠模型中的平均肿瘤体积与未治疗的小鼠(“未治疗”)相比减小的图。
图10A-图10F是显示图9中且如实施例10中进一步描述的结肠直肠癌的CT26小鼠模型中每只小鼠的肿瘤体积的图。图10A是显示未治疗组中每只小鼠的肿瘤体积的图。图10B是显示4G9-12抗体(0.01mg/kg)组中每只小鼠的肿瘤体积的图。图10C是显示4G9-12抗体(0.05mg/kg)组中每只小鼠的肿瘤体积的图。图10D是显示4G9-12抗体(0.1mg/kg)组中每只小鼠的肿瘤体积的图。图10E是显示4G9-12抗体(0.25mg/kg)组中每只小鼠的肿瘤体积的图。图10F是显示阻断抗PD-1抗体(1mg/kg，RMP1-14克隆)组中每只小鼠的肿瘤体积的图。
图11A和图11B是显示与未用抗体治疗的小鼠(“未治疗”)相比，用4G9-12(抗PD1激动剂抗体)而非阻断抗PD-1抗体(RMP1-14)进行的体内处理通过离体分析显著增加CD4+T细胞和CD8+T细胞激活状态的图，如实施例11中进一步描述的。图11A是显示用4G9-12(抗PD1激动剂抗体)而非阻断抗PD-1抗体(RMP1-14)进行处理显著增加CD4+T细胞激活状态(使用CD40L作为激活状态的标记物)的图。图11B是显示用4G9-12(抗PD1激动剂抗体)而非阻断抗PD-1抗体(RMP1-14)进行处理显著增加CD8+T细胞激活状态(使用CD25作为激活状态的标记物)的图。统计分析包括单因素ANOVA和多重比较事后检验(multiple comparison post-test)。
图12A-图12C是蛋白质印迹和条形图，显示用激动剂抗PD-1抗体4G9-12而非阻断抗PD-1抗体(PROMEGA Co.，“对照”)或PD-L1(例如PD-L1-IgG)处理人CD4+T细胞后，ITK与SHP2的细胞内比率增加，如实施例12中进一步描述的。图12A是SHP2和PD-1的蛋白质印迹的图像。图12B是PD-1和ITK(白介素-2诱导的T细胞激酶)的蛋白质印迹染色的图像。图12C是定量的ITK/SHP2蛋白比率的条形图。将数值归一化为PD-1蛋白水平。
图13是通过流式细胞术获得的归一化平均荧光强度(MFI)显示与仅经刺激而未经额外处理(“Stim”)的细胞相比，用激动剂抗PD-1抗体4G9-12(25μg/mL)处理，而不用PD-L1(例如，PD-L1-IgG)、帕博利珠单抗(“Pembro”)或纳武利尤单抗(“Nivo”)处理，增加了CD4+T细胞中磷酸化的白介素-2-诱导型T细胞激酶(pITK)的图，如实施例13中进一步描述的。将数据归一化为仅受刺激的“Stim”组。受刺激组的平均值用虚线表示。统计分析包括单因素ANOVA和多重比较事后检验(multiple comparison post-test)。
具体实施方式
I.定义
如本文所用，如果此类结合涉及抗体或抗原结合片段的抗原识别位点，则称抗体或其抗原结合片段“免疫特异性结合”至抗原的靶区域或构象(“表位”)。如果其他抗原具有被抗原识别位点识别的一些序列或构象相似性，如通过例如免疫测定、测定或本领域已知的其他测定所确定的，但不会结合至完全不相关的抗原，则免疫特异性结合至特定抗原的特定表位的抗体可以较低的亲和力结合至其他表位和/或抗原。然而，理想的是，抗体(及其抗原结合片段)将不会与其他抗原和/或表位发生交叉反应。抗体和抗原结合片段也可以借助于不涉及抗原识别位点的分子的其他区域/结构域(诸如Fc区)中的结合结构域，以非免疫特异性的方式结合至其他分子，诸如结合至FcR受体。
如本文所用，术语“抗体”意在表示具有至少一个包含重链可变区和轻链可变区的“可变区”抗原识别位点的免疫球蛋白分子。抗体还具有至少一个不包括抗原识别位点的恒定结构域。
可变区包括“高变区”，其残基负责抗原结合。高变区包括来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(即，通常在轻链可变区的大约残基24-34(CDR L1)、50-56(CDR L2)和89-97(CDR L3)以及重链可变区的大约残基27-35(CDR H1)、50-65(CDR H2)和95-102(CDRH3)处；Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版.PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))和/或来自“高变环”的那些残基(即，轻链可变区中的残基26-32(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)以及重链可变区中的26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia and Lesk；1987,J.Mol.Biol.196:901-917)。“框架区”或“FR”残基是除本文所定义的高变区残基以外的那些可变区残基。其他众所周知的氨基酸编号惯例可用于定义CDR和FR区，诸如AHo方案和Chothia方案。
术语抗体包括来自任何期望物种的所有类型或抗体，诸如单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、骆驼化抗体(参见例如Muyldermans等人,2001,Trends Biochem.Sci.26:230；Nuttall等人,2000；Cur.Plum,Biotech.1:253；Reichmann和Muyldermans,1999,J.Immunol.Meth,231:25；国际公布第WO 94/04678号和第WO 94/25591号；美国专利第0305,079号)、单链Fv(scFv)(参见例如，参见Pluckthun inThe Pharmacology of Monoclonal.Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994))、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)、胞内抗体和抗独特型(抗Id)抗体(包括例如针对抗体的抗Id抗体和抗-抗-Id抗体)。具体而言，此类抗体包括任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，1gG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和1gA2)或亚类的免疫球蛋白分子。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合片段”是指抗体的一个或多个部分，其含有抗体的互补决定区(“CDR”)和包含抗体的“可变区”抗原识别位点的任选的框架残基并表现出免疫特异性结合抗原的能力。此类片段包括Fab'、F(ab')2、Fv、单链(ScFv)、单可变结构域(dAb)等，及其突变体、天然存在的变体以及融合蛋白，包括抗体的“可变区”抗原识别位点和异源蛋白(例如，毒素、不同抗原的抗原识别位点、酶、受体或受体配体等)。
如本文所用，术语“片段”是指包括至少5个连续氨基酸残基的氨基酸序列的肽或多肽，诸如至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个连续氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少1.25个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、至少200个连续氨基酸残基或至少250个连续氨基酸残基。
如本文所用，术语“调节”涉及改变效果、结果或活性(例如，信号转导)的能力。这种调节可以是激动性的或拮抗性的。拮抗性调节可以是部分的(即，减弱但不消除)，或者它可以完全消除这种活性(例如，中和)。调节可以包括结合抗体后受体的内在化或靶细胞上受体表达的降低。激动性调节可以增强或以其他方式增加或增强活性(例如，信号转导)。在另一个实施方案中，这种调节可以改变配体与其同源受体之间相互作用的性质，从而改变引发的信号转导的性质。例如，分子可以通过结合至配体或受体来改变此类分子结合至其他配体或受体的能力，从而改变它们的总体活性。理想地，这种调节将提供可测量的免疫系统活性的至少10％的变化；更理想地，这种活性的至少50％的变化，或至少2倍、5倍、10倍的变化，或者更理想地，这种活性的至少100倍的变化。
在结合或显示效果的上下文中使用的术语“基本上”旨在表示观察到的效果是生理上或治疗上相关的。因此，例如，如果阻断的程度是生理上或治疗上相关的(例如，如果这种程度大于60％完全、大于70％完全、大于75％完全、大于80％完全、大于85％完全、大于90％完全、大于95％完全或大于97％完全，则分子能够基本上阻断配体或受体的活性。类似地，如果此类免疫特异性和特征大于60％相同、大于70％相同、大于75％相同、大于80％相同、大于85％相同、大于90％相同、大于95％相同、大于97％相同、大于98％相同或大于99％相同，则分子具有与另一种分子基本相同的免疫特异性和/或特征。
如本文所用，术语“衍生物”是指抗体或其抗原结合片段，其免疫特异性结合至亲本或参考抗体的相同靶标，但通过相对于亲本或参考抗体或其抗原结合片段包括一个、两个、三个、四个、五个或更多个氨基酸取代、添加、缺失或修饰而在氨基酸序列上不同于亲本或参考抗体或其抗原结合片段。理想地，此类衍生物将具有与亲本或参考抗体或其抗原结合片段基本上相同的免疫特异性和/或特征，或相同的免疫特异性和特征。此类衍生物的氨基酸取代或添加可以包括天然存在的(即DNA编码的)或非天然存在的氨基酸残基。术语“衍生物”包括例如嵌合或人源化变体，以及具有改变的CH1、铰链、CH2、CH3或CH4区的变体，从而形成例如具有表现出增强或减弱的效应子或结合特征的变体Fc区的抗体等。
如本文所用，“嵌合抗体”是一种分子，其中抗体的不同部分来源于不同的免疫球蛋白分子，诸如具有来源于非人抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的抗体。
如本文所用，术语“人源化抗体”是指包括人框架区和一个或多个来自非人(例如小鼠或大鼠)免疫球蛋白的CDR的免疫球蛋白。提供CDR的非人免疫球蛋白被称为“供体”，而提供框架的人免疫球蛋白被称为“受体”不需要存在恒定区，但如果存在，则它们应该与人免疫球蛋白恒定区基本相同，即至少约85-99％，理想地约95％或更多相同。因此，人源化免疫球蛋白的所有部分，除了可能的CDR之外，与天然人免疫球蛋白序列的对应部分基本上相同。人源化抗体是包括人源化轻链和人源化重链免疫球蛋白的抗体。例如，人源化抗体将不包括典型的嵌合抗体，因为例如嵌合抗体的整个可变区是非人的。
如本文所用，“治疗有效量”是指在施用条件下足以介导这些症状的临床相关消除、减轻或改善的治疗剂的量。如果效应的大小足以影响受体受试者的健康或预后，则该效应是临床相关的。治疗有效量可以指足以延迟或最小化疾病的进展或发作，例如延迟或最小化癌症的扩散或进展的治疗剂的量。治疗有效量还可以指在疾病的治疗或控制中提供治疗益处的治疗剂的量。
如本文所用，“免疫细胞”是指任何造血来源的细胞，包括但不限于T细胞、B细胞、单核细胞、树突细胞和巨噬细胞。
术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指哺乳动物，包括但不限于人、宠物(例如猫、狗)、家畜和运动动物(例如牛、羊、马、骆驼)、啮齿动物(诸如小鼠和大鼠)以及其他实验动物等。
如本文所用，术语“变体”是指与参考多肽或多核苷酸不同但保留基本特性的多肽或多核苷酸。多肽的典型变体在氨基酸序列上与另一种参考多肽不同。通常，差异是有限的，因此参考多肽和变体的序列总体上是非常相似的，并且在许多区域是相同的。变体和参考多肽可以通过一个或多个修饰(例如，取代、添加和/或缺失)而在氨基酸序列不同。取代或插入的氨基酸残基可以是或可以不是由遗传密码编码的氨基酸残基。多肽的变体可以是天然存在的，诸如等位基因变体，或者它可以是未知天然存在的变体。
可以在本公开的多肽的结构中进行修饰和改变，并且仍然获得具有与多肽相似特征(例如，保守氨基酸取代)的分子。例如，某些氨基酸可以取代序列中的其他氨基酸，而不会明显损失活性。因为多肽的相互作用能力和性质限定了多肽的生物功能活性，所以可以在多肽序列中进行某些氨基酸序列取代，但仍然获得具有相似特性的多肽。
在进行此类改变时，可以考虑氨基酸的亲水指数。亲水性氨基酸指数在赋予多肽相互作用的生物学功能中的重要性是本领域通常所理解的。已知某些氨基酸可以取代具有相似亲水指数或得分的其他氨基酸，并且仍然产生具有相似生物活性的多肽。每种氨基酸都根据其疏水性和电荷特性指定了亲水指数。那些指数是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；蛋氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8.)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3,2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3,5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(4.5)。
尽管不受理论的束缚，但氨基酸的相对亲水性决定了所得多肽的二级结构，而二级结构又决定了多肽与其他分子(诸如酶、底物、受体、抗体、抗原和辅因子)相互作用。本领域已知，氨基酸通常可以被具有相似亲水指数的另一种氨基酸取代，并且仍然获得功能等同的多肽。在此类变化中，亲水指数在+2以内的氨基酸的取代是期望的，在±1以内的那些亲水指数是特别期望的，并且在±0.5以内的那些亲水指数甚至是更特别期望的。
相似氨基酸的取代也可以基于亲水性进行，特别是在由此产生的生物学功能等同多肽或肽打算用于免疫学实施方案中的情况下。已赋予氨基酸残基以下亲水性值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸-(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；脯氨酸(-0.5.±1)；苏氨酸(-0.4)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(4.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。应当理解，一个氨基酸可以取代另一个具有相似亲水性值的氨基酸，并且仍然获得生物学上等同的，特别是免疫学上等同的多肽。在此类变化中，亲水性值在±2以内的氨基酸的取代是期望的，在±1以内的那些亲水性值是特别期望的，并且在±0.5以内的那些亲水性值甚至是更特别期望的。
如上所述，氨基酸取代通常基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如，它们的疏水性、亲水性、电荷、大小等。考虑到各种前述特征的示例性取代是本领域技术人员熟知的并且包括(原始残基→示例性取代)：(Ala→Gly,Ser)、(Arg→Lys)、(Asn→Gln,His)、(Asp→Gln,Cys,Ser)、(Gln→Asn)、(Glu→Asp)、(Gly→Ala)、(His→Asn,Gln)、(Ile→Leu,Val)、(Leu→Ile,Val)、(Lys→Arg)、(Met→Leu,Tyr)、(Ser→Thr)、(Thr→Ser)、(Trp→Tyr)；(Tyr→Trp,Phe)和(Val→Ile,Leu)。因此，本公开的实施方案考虑了如上所述的多肽的功能或生物等同物。具体而言，多肽的实施方案可以包括与感兴趣的多肽具有约75％或更多，诸如80％、90％或95％或更多序列同一性的变体。
术语“序列同一性百分比(％)”被定义为在比对序列并在必要时引入缺口以获得最大序列同一性百分比之后，候选序列中与参考核酸序列中的核苷酸或氨基酸相同的核苷酸或氨基酸的百分比。为了确定序列同一性百分比而进行的比对可以本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2、SIM或Megalign(DNASTAR)软件。可以通过已知方法来确定用于测量比对的适当参数，包括用于在所比较的序列的全长上实现最大比对而设计的任何算法。
出于本文的目的，给定的核苷酸或氨基酸序列C与给定的核酸序列D(其可以另选地表述为与给定的序列D具有或包含一定序列同一性％的给定的序列C)的序列同一性百分比计算如下：
100*W/Z，
其中W是在C和D的程序比对中被序列比对程序评分为相同匹配的核苷酸或氨基酸的数目，并且其中Z是D中核苷酸或氨基酸的总数。应当理解，当序列C的长度不等于序列D的长度时，C与D的序列同一性％将不等于D与C的序列同一性％。
如本文所用，术语“药学上可接受的载剂”包括任何标准的药物载剂，诸如磷酸盐缓冲盐水溶液、水和乳液(诸如油/水或水/油乳液)，以及各种类型的湿润剂。
II.组合物
提供了免疫特异性结合至PD-1的抗体及其抗原结合片段。与撰写本文时抗PD-1抗体用作降低PD-L1对PD-1活性的阻抑的“检查点抑制剂”的主要范例相反(Riley,J.,Immunol Rev.229(1):114-125(2009))，所公开的抗体及其抗原结合片段免疫特异性结合至PD-1的远离PD-L1相互作用位点的表位，并且是PD-1激动剂，并导致激活信号被递送至免疫细胞。本文公开的抗PD-1激动剂抗体和抗原结合片段不仅抑制T细胞阻抑，而且激活T细胞。如本文所示和举例说明的，本公开的PD-1激动剂除了抑制T细胞阻抑之外，还可以激活T细胞、抑制T细胞耗竭并增强T细胞记忆。相比之下，阻断PD-L1结合的抗PD-1抗体(例如，非激动剂PD-1抗体)充当检查点抑制剂，并且检查点抑制剂的公认缺点是它们可能导致T细胞耗竭并且可能降低T细胞记忆。
A.程序性死亡受体蛋白1(PD-1)
所公开的抗体及其抗原结合片段免疫特异性结合至PD-1。抗体及其抗原结合片段可以结合至具有例如下文提供的氨基酸序列的PD-1。
人PD-1(UniProtKB Q15116)
MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL(SEQ IDNO:396)
小鼠PD-1(UniProtKB Q02242)
MWVRQVPWSFTWAVLQLSWQSGWLLEVPNGPWRSLTFYPAWLTVSEGANATFTCSLSNWSEDLMLNWNRLSPSNQTEKQAAFCNGLSQPVQDARFQIIQLPNRHDFHMNILDTRRNDSGIYLCGAISLHPKAKIEESPGAELVVTERILETSTRYPSPSPKPEGRFQGMVIGIMSALVGIPVLLLLAWALAVFCSTSMSEARGAGSKDDTLKEEPSAAPVPSVAYEELDFQGREKTPELPTACVHTEYATIVFTEGLGASAMGRRGSADGLQGPRPPRHEDGHCSWPL(SEQ IDNO:397)
优选地，抗体或其抗原结合片段结合PD-1，并且是PD-1的激动剂。在一个具体的实施方案中，本公开的抗体和抗原结合片段结合至PD-1的表位，该表位不是与PD-L1相互作用的PD-1结构的一部分。在一个具体的实施方案中，抗体和抗原结合片段免疫特异性结合至包含hPD-1的氨基酸96-110的PD-1表位，其具有氨基酸序列TYLCGAISLAPKAQI(SEQ ID NO:398)。该表位在US11,021,540中有更详细的描述，该专利在此以全文引入的方式并入。尽管不受理论的束缚，但据信本公开的抗体或抗原结合片段与包含hPD-1的氨基酸96-110的PD-1表位的免疫特异性结合激活了PD-1介导的信号转导。
B.抗体组合物
所公开的抗PD-1抗体或其抗原结合片段包括任何类别的全免疫球蛋白(即，包含两条重链和两条轻链的抗体)、其片段和至少含有抗体的抗原结合可变区的蛋白质。在一些实施方案中，所公开的抗体含有抗体轻链可变区和抗体重链可变区两者。在其他实施方案中，此类分子还可以包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区中的一者或多者。抗体可以选自任何类别的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一些实施方案中，恒定结构域是补体结合恒定结构域，其中期望抗体表现出细胞毒性活性，并且该类别通常是IgG1。在不需要这种细胞毒性活性的其他实施方案中，恒定结构域可以属于IgG2或IgG4类。抗体可以包括来自一个以上类别或同种型的序列，并且选择特定的恒定结构域来优化所需的效应子功能在本领域普通技术人员的范围内。
天然重链和轻链的可变区各自包含四个FW区，主要采用β-折叠构型，由三个CDR连接，形成连接β-折叠结构的环，并且在某些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的CDR通过FW区以剂量接近的方式结合在一起，并且与来自另一条链的CDR一起有助于形成抗体的抗原结合位点。
一些实施方案提供了抗PD-1抗体的抗原结合片段。这些片段，无论是否与其他序列附接，都可以包括特定区域或特定氨基酸残基的插入、缺失、取代或其他选定的修饰，前提是该片段的活性与未修饰的抗体或抗体片段(例如，抗原结合片段)相比没有显著改变或受损。
另一个实施方案提供了对PD-1具有特异性的单链抗体。用于产生单链抗体的方法是本领域技术人员众所周知的。单链抗体可以通过使用短肽接头将重链和轻链的可变区融合在一起而产生，从而在单个分子上重建抗原结合位点。已经开发了单链抗体可变区片段(scFv)，其中一个可变区的C末端经由15至25个氨基酸的肽或接头连接到另一个可变区的N末端，而不会显著破坏抗原结合或结合的特异性。选择接头以允许重链和轻链以其适当的构象取向结合在一起。
另一个实施方案提供了二价单链可变片段(di-ScFv)，其可以通过连接两个scFv进行工程化。这可以通过产生具有两个VH和两个VL区的单肽链来实现，从而产生串联的scFv。ScFv也可以设计成具有接头肽，这些接头肽太短以至于两个可变区不能折叠在一起(约五个氨基酸)，迫使scFv二聚化。这种类型被称为双抗体。已显示双抗体的解离常数比对应的scFv低至多40倍，这意味着它们对其靶标具有高得多的亲和力。更短的接头(一个或两个氨基酸)导致三聚体(三抗体(triabodies/tribodies))的形成。也产生了四抗体。与双抗体相比，它们对靶标表现出更高的亲和力。
另一个实施方案提供了一种对PD-1具有特异性的单克隆抗体，其诱导针对免疫细胞的激活信号。单克隆抗体可以从基本上同质的抗体群体中获得，即除了可能存在于抗体分子的小子集中的可能天然发生的突变之外，群体中的单个抗体是相同的。单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定的抗体类别或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而链的剩余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的对应序列相同或同源，只要它们表现出所需的活性。
C.嵌合和人源化抗体
另一个实施方案提供了嵌合抗PD-1抗体及其抗原结合片段，其包括一个或多个所公开的序列，并且还提供了其功能变体，其结合至PD-1并优选地导致激活信号被传递到表达PD-1的免疫细胞中。
用于产生嵌合抗体的方法是本领域已知的。参见例如Morrison,1985,Science229:1202；Oi等人,1986,BioTechniques 4:214；Gillies等人,1989,J.Immunol.Methods125:191-202；以及美国专利第6,311,415号、第5,807,715号、第4,816,567号和第4,816,397号。包括一个或多个来自非人物种的CDR和来自人免疫球蛋白分子的框架区的嵌合抗体可以使用本领域已知的多种技术来产生，包括例如CDR移植(EP 239,400；国际公布第WO91109967号；以及美国专利第5,225,539号、第5,530,101号和第5,585,089号)、镶饰(veneering)或重塑(resurfacing)(EP 592,106；EP 519,596；Padlan,1991,MolecularImmunology 28(4/5):489-498；Studnicka等人,1.994,Protein Engineering 7；805；以及Roguska等人,1994,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:969)和链改组(美国专利5,565,332)。
所公开的抗PD-1抗体或其抗原结合片段可以是人或人源化抗体，或其抗原结合片段。许多非人抗体(例如，来源于小鼠、大鼠或兔的那些抗体)在人中天然具有抗原性，因此当施用于人时会引起不期望的免疫应答。因此，在该方法中使用人或人源化抗体减少了施用于人的抗体引起不希望的免疫应答的机会。
可以使用在免疫接种时能够在没有内源性免疫球蛋白产生的情况下产生全部的人抗体的转基因动物(例如，小鼠)。例如，已经描述了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(J(H))基因的纯合缺失导致内源性抗体产生的完全抑制。在这种种系突变小鼠中转移人种系免疫球蛋白基因阵列将导致在抗原攻击时产生人抗体。也可以使用合适的表达或展示文库，诸如噬菌体展示来产生此类抗体。
任选地，抗体在其他物种中生成并被“人源化”用于人施用。非人(例如，鼠)抗体的人源化形式是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗体的其他抗原结合子序列)，其包含来源于非人免疫球蛋白的最少序列。人源化抗体包括人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体抗体的互补决定区(CDR)的残基被来自具有所需特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)(诸如小鼠、大鼠或兔)的CDR的残基取代。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架残基被对应的非人残基替代。人源化抗体还可以含有既不存在于受体抗体中也不存在于输入的CDR或框架序列中的残基。一般来讲，人源化抗体将含有基本上所有的至少一个以及通常两个可变区，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的CDR区，并且所有或基本上所有的FW区是人免疫球蛋白共有序列的FW区。人源化抗体最佳地还可以含有至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。
用于将非人抗体人源化的方法在本领域中是众所周知的，参见例如欧洲专利：第EP 239,400号、第EP 592,106号和第EP 519,596号；国际公布第WO 91/09967号和第WO 93/17105号；美国专利第5,225,539号、第5,530,101号、第5,565,332号、第5,585,089号、第5,766,886号和第6,407,213号；以及Padlan,1991,Molecular immunology 28(4/5):489-498:Studnicka等人,1994,Protein Engineering 7(6):805-8.1:4；Roguska等人,1994,PNAS 91:969,973；Tan等人,2002,J.Immunol.169:1119-1125；Caldas等人,2000,ProteinEng.13:353-360；Motet等人,2000,Methods20:267-79；Baca等人,1997,J.Mot Chem.272:1067840684；Roguska等人,1996,Protein Eng.9:895-904；Couto等人,1995,CancerRes.55(23增刊):5973s-5977s；Couto Oat,1995,Cancer.Res.55:1717-22；Sandhu,1994,Gene 150:409-10；Pedersen等人,1994,1Mat Riot 235:959-973；Jones等人,.1986,Nature321:522,525；Reichmann等人,1988,Nature 332:323.329；以及Presta,1992(Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596)。
通常，人源化抗体具有一个或多个从非人来源引入的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为“输入”残基，其通常取自“输入”可变区。抗体人源化技术通常涉及使用重组DNA技术来操作编码抗体分子的一条或多条多肽链的DNA序列。人源化本质上可以通过用啮齿动物CDR或CDR序列取代人抗体的对应序列来实现。因此，非人抗体(或其片段)的人源化形式是嵌合抗体或片段，其中基本上少于完整的人可变区被来自非人物种的对应序列取代。在实践中，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能的一些FW残基被来自啮齿动物抗体中类似位点的残基取代。
为了降低抗原性，用于制备人源化抗体的人轻链可变区和重链可变区的选择非常重要。根据“最佳拟合”方法，针对已知人可变区序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的可变区序列。然后最接近啮齿动物序列的人序列被接受为人源化抗体的人框架(FW)。另一种方法使用来源于轻链或重链的特定亚组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可用于几种不同的人源化抗体。
更重要的是，将抗体人源化并保留对抗原的高亲和力和其他有利的生物学特性。为了实现该目标，可以通过使用亲本序列和人源化序列的三维模型来分析亲本序列和各种概念性人源化产物的方法来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的，并且是本领域技术人员所熟悉的。计算机程序是可获得的，其说明并显示所选的候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构。对这些显示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可以从共有序列和输入序列中选择并组合FW残基，从而获得所需的抗体特征，诸如对靶抗原的亲和力增加。
本公开还涉及一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含本文公开的任何抗体或抗原结合片段的轻链可变区和重链可变区。CAR是众所周知的跨膜受体，其可以在T细胞上表达，以MHC非依赖性方式通过所需抗原提供T细胞激活。通常，CAR包括具有所需结合特异性的scFv，其融合到铰链区铰链(例如，以及来自IgG1、IgG2或IgG4的具有或不具有CH结构域的IgG铰链、CD28铰链、CD8α铰链)、跨膜结构域(例如，CD28跨膜结构域和胞质尾区)、CD3ζ胞质结构域和任选的一个或多个共刺激结构域(例如，4-1BB、OX40、CD28)。在实施方案中，CAR包含抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的轻链可变区和抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的重链可变区。
人、人源化或嵌合抗体衍生物可以包括基本上所有的至少一个以及通常两个可变区，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白(即供体抗体)的CDR区，并且所有或基本上所有的框架区是人免疫球蛋白共有序列的框架区。此类抗体还可以包括至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。此类抗体的恒定结构域可以根据抗体的预期功能，特别是可能需要的效应子功能来选择。在一些实施方案中，此类抗体的恒定结构域是或可以包括人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM结构域。在一个具体的实施方案中，当人源化抗体衍生物打算用于治疗用途并且需要抗体效应子功能(诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)活性)时，使用人IgG恒定结构域，尤其是IgG1和IgG3同种型的恒定结构域。在替代的实施方案中，当抗体打算用于治疗目的并且不需要抗体效应子功能时，使用IgG2和IgG4同种型。Fc恒定结构域包括改变抗体效应子功能的一个或多个氨基酸修饰，诸如在美国专利申请公布第2005/0037000号和第200510004514号中公开的那些。
人源化抗体的框架区和CDR区不需要精确对应于亲本序列，例如，供体CDR或共有框架可以通过至少一个残基(例如，至少两个残基、至少三个残基、至少四个残基、至少五个残基、至少六个残基、至少七个残基、至少八个残基)的取代、插入或缺失而诱变，使得该位点处的CDR或框架残基既不对应于共有抗体也不对应于供体抗体。在一些实施方案中，CDR与亲本序列的不同之处在于一个残基、两个残基、三个残基或四个残基的取代、插入或缺失。在一些实施方案中，框架区与亲本序列的不同之处在于一个残基、两个残基、三个残基、四个残基、五个残基、六个残基、七个残基或八个残基的取代、插入或缺失。在一些实施方案中，此类突变不是广泛的。通常，至少75％的人源化抗体残基将对应于亲本框架区(FW)和CDR序列的残基，诸如至少80％、至少90％或至少95％。通常，框架区中的框架残基将被来自CDR供体抗体的对应残基取代，以改变(例如改善)抗原结合。这些框架取代通过本领域众所周知的方法来鉴定，例如通过模拟CDR和框架残基的相互作用来鉴定对于抗原结合重要的框架残基，以及通过序列比较来鉴定特定位置处的不寻常框架残基。(参见例如Queen等人,美国专利第5,585,089号；美国公布第2004/0049014号和2003/0229208；美国专利第6,350,861号；第6,180,370号；第5,693,762号；第5；693,761号；第5,585,089号和第5,530,101号以及Riechmann.等人,1988,Nature 332:323)。
在实施方案中，抗体或抗原结合片段是人抗体或片段，即仅包含人源序列。此类人抗体或抗原结合片段对于人受试者的治疗性疗法可能是特别理想的。人抗体可以通过本领域已知的多种方法制备，包括使用来源于人免疫球蛋白序列的抗体文库的噬菌体展示方法(参见美国专利第4,444,887号和第4,716,111号；以及国际公布第WO 98/46645号、第WO94/50433号、第WO 98/24893号、第WO 98/16654号、第WO 96/34096号、第WO 96/33735号和第WO 91/10741号)。可以使用不能表达功能性内源性免疫球蛋白但可以表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠来产生此类人抗体。
例如，人重链和轻链免疫球蛋白基因复合物可以随机或通过同源重组引入小鼠胚胎干细胞中。另选地，除了人重链和轻链基因之外，还可以将人可变区、恒定区和多样性区引入小鼠胚胎干细胞中。小鼠重链和轻链免疫球蛋白基因可以分别或同时通过同源重组引入人免疫球蛋白基因座而变得无功能。具体而言，JH区的纯合缺失阻止内源性抗体的产生。将修饰的胚胎干细胞扩增并显微注射到胚泡中，以产生嵌合小鼠。然后培育嵌合小鼠以产生表达人抗体的纯合后代。可以使用常规方法用选定的抗原(例如多肽的全部或部分)使转基因小鼠免疫。可以使用常规杂交瘤技术从免疫的转基因小鼠中获得针对该抗原的单克隆抗体。转基因小鼠所携带的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间发生重排；并且sulue4yettly经历类别转换和体细胞突变。因此，使用这种技术，有可能产生治疗上有用的IgG、IgA、IgM和IgE抗体。关于这种产生人抗体的技术的概述，参见Lonberg和Huszar 1995,Int.Rev.Immunol.13:65-93，该文献以全文引用的方式并入本文)。关于这种产生人抗体和人单克隆抗体的技术和产生此类抗体的方案的详细讨论，参见例如国际公布第WO 98/24893号；第WO 96/34096号和第WO 96433735号；以及美国专利第5,413,923号、第5,625,126号、第5,633,425号、第5,569,825号、第5,661,016号、第5,545,806号、第5,814,318号和第5,939,598号，这些专利以全文引用的方式并本文。
编码人受体框架序列的DNA序列包括但不限于来自人种系VH区段VH1-18和JH6以及人种系VL区段VK-A26和JK4的FW区段。在一个具体的实施方案中，可以使用常规重组DNA技术将一个或多个CDR插入框架区中。框架区可以是天然存在的或共有框架区，以及人框架区。关于人框架区域的列表，参见例如Chothia等人,1998,“Structural Determinants InThe Sequences Of Immunoglobulin Variable Domain,”J.Mol.Biol.278:457-479。
D.融合蛋白
在实施方案中，抗体或抗原结合片段可以是融合蛋白或融合多肽的组分，其中抗体或抗原结合片段可以偶联到另一种多肽，诸如嵌合抗原受体(CAR)。融合多肽具有直接或经由共价结合至第二多肽的连接肽序列共价结合至第二多肽的第一融合配偶体，该第一融合配偶体包括一个或多个所公开的抗体或抗原结合片段的全部或部分。融合蛋白可以但不是必须含有起到使两种或多种融合蛋白二聚化或多聚化的作用的结构域。肽/多肽接头结构域可以是单独的结构域，或者另选地可以包含在融合蛋白的其他结构域(抗体/抗原结合片段或第二多肽)之一中。类似地，起到使融合蛋白二聚化或多聚化的作用的结构域(如果有的话)可以是单独的结构域，或者可以包含在融合蛋白的其他结构域(抗体/抗原结合片段、第二多肽或接头结构域)之一中。在实施方案中，二聚化/多聚化结构域和肽/多肽接头结构域是相同的。
本文公开的融合蛋白可以例如具有式I：
N-R1-R2-R3-C (I)
其中N表示融合蛋白的N-末端，C表示融合蛋白的C-末端，R1可以是所公开的抗体、抗原结合片段或其功能变体或片段之一的全部或部分，R2是任选的肽/多肽接头结构域，并且R3可以是第二多肽。另选地，R3可以是所公开的抗体、抗原结合片段或其功能变体或片段之一的全部或部分，并且R1可以是第二多肽。
二聚化或多聚化可以通过二聚化或多聚化结构域在两个或多个融合蛋白之间发生。另选地，融合蛋白的二聚化或多聚化可以通过化学交联发生。所形成的二聚体或多聚体可以是同二聚体/同多聚体或异二聚体/异多聚体。
E.抗体序列
1.4G9和5C2序列
本公开的一个实施方案涉及亲和力成熟的抗体或其抗原结合片段，其来源于从杂交瘤4G9中分离的人源化抗体。具体而言，该实施方案提供了抗体和抗原结合片段，其包含在命名为4G9-1至4G9-20的二十种抗体的序列中发现或与其相关的序列。这些抗体中的每一者的重链可变区(VH)、CDR H1、CDR H2和CDR H3序列在表1中给出。
抗体4G9-1、4G9-2、4G9-3、4G9-4、4G9-5、4G9-6、4G9-7、4G9-8、4G9-9和4G9-10分别含有与抗体4G9-11、4G9-12、4G9-13、4G9-14、4G9-15、4G9-16、4G9-17、4G9-18、4G9-19和4G9-20相同的重链和轻链CDR。此外，4G9-1、4G9-2、4G9-3、4G9-4、4G9-5、4G9-6、4G9-7、4G9-8、4G9-9和4G9-10的轻链可变区分别与4G9-11、4G9-12、4G9-13、4G9-14、4G9-15、4G9-16、4G9-17、4G9-18、4G9-19和4G9-20的轻链可变区相同。然而，4G9-1、4G9-2、4G9-3、4G9-4、4G9-5、4G9-6、4G9-7、4G9-8、4G9-9和4G9-10的重链可变区分别与4G9-11、4G9-12、4G9-13、4G9-14、4G9-15、4G9-16、4G9-17、4G9-18、4G9-19和4G9-20的重链可变区不同，并且4G9-11、4G9-12、4G9-13、4G9-14、4G9-15、4G9-16、4G9-17、4G9-18、4G9-19和4G9-20中的每一者包括N73D取代。
表1.抗体4G9-1至4G9-20的VH、CDR H1、CDR H2和CDR H3序列
在ARX1X2X3X4X5 X6X7中，X1选自由G和V组成的组；X2选自由G、S、L、V、I和E组成的组；X3选自由R、G、P、W、S、H和K组成的组；X4选自由G、E、S、V、W和K组成的组；X5选自由I、F、S、G、D和V组成的组；X6选自由A、G、Y和S组成的组；并且X7选自由Y、H和D组成的组。
这些抗体中的每一者的轻链可变区(VK)、CDR L1、CDR L2和CDR L3序列在表2中给出。
表2.抗体4G9-1至4G9-20的VK、CDR L1、CDR L2和CDR L3序列
在QX8X9X10X11X12、X13X14S和X15QX16X17X18X19PX20X21中，X8选自由G、S和D组成的组；X9选自由I和L组成的组；X10选自由S、V、G和R组成的组；X11选自由N、Y、T、S和R组成的组；X12选自由S、Y、D和W组成的组；X13选自由A、K、Y和D组成的组；X14选自由A和V组成的组；X15选自由Q、M和L组成的组；X16选自由S、G和D组成的组；X17选自由Y、T、N和S组成的组；X18选自由S、H和D组成的组；X19选自由T、W和F组成的组；X20选自由Y、P、R和W组成的组；并且X21选自由T和F组成的组。
本公开的一个实施方案涉及亲和力成熟的抗体或其抗原结合片段，其来源于从杂交瘤5C2中分离的人源化抗体。具体而言，该实施方案提供了抗体和抗原结合片段，其包含在命名为5C2-1至5C2-10的二十种抗体的序列中发现或与其相关的序列。这些抗体中的每一者的重链可变区(VH)、CDR H1、CDR H2和CDR H3序列在表3中给出。
表3.抗体5C2-1至5C2-10的VH、CDR H1、CDR H2和CDR H3序列
在GX22TFX23X24YX25(SEQ ID NO:163)、IX26X27X28X29X30X31T和AX32X33X34X35X36X37X38X3 9FX40X41中，X22选自由Y和Q组成的组；X23选自由N、T和G组成的组；X24选自由S、I和N组成的组；X25选自由W和L组成的组；X26选自由H、L、R和P组成的组；X27选自由P和L组成的组；X28选自由R、S、I和N组成的组；X29选自由G、D、N和Y组成的组；X30选自由I、S、G和R组成的组；X31选自由H、D和Y组成的组；X32选自由P和S组成的组；X33选自由S、R、N和Y组成的组；X34选自由S、D、G、V和F组成的组；X35选自由S、N、G、I、D和R组成的组；X36选自由Y、N、C、L、S和H组成的组；X37选自由A、G、T和E组成的组；X38选自由W、C、S、R、D和G组成的组；X39选自由A、S、G和D组成的组；X40选自由A、S和L组成的组；X41选自由H、Y和S组成的组。
这些抗体中的每一者的轻链可变区(VK)、CDR L1、CDR L2和CDR L3序列在表4中给出。
表4.抗体5C2-1至5C2-10的VK、CDR L1、CDR L2和CDR L3序列
在QX42X43X44X45X46、X47AS和X48X49X50X51X52X53X54中，X42选自由D、S和G组成的组；X43选自由V和I组成的组；X44选自由S和G组成的组；X45选自由T和S组成的组；X46选自由A、S、D和W组成的组；X47选自由W、G和D组成的组；X48选自由Q和H组成的组；X49选自由Q、K和H组成的组；X50选自由H、Y、F、R、D和G组成的组；X51选自由Y、N、Y、D、S和G组成的组；X52选自由R、S、V、T和I组成的组；X53选自由S、A、F、T、Y和W组成的组；并且X54选自由P、L、S和T组成的组。
在实施方案中，对程序性细胞死亡受体蛋白1(PD-1)具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，其中轻链可变区含有表2或表4的任何CDR L1和表2或表4的任何CDR L2和表2或表4的任何CDR L3，并且重链可变区含有表1或表3的任何CDR H1、表1或表3的任何CDR H2和表1或表3的任何CDR H3。
在实施方案中，对程序性细胞死亡受体蛋白1(PD-1)具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区和重链可变区，其中轻链可变区含有抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的CDR L1、CDR L2和CDR L3，并且重链可变区含有抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含各自具有与4G9-1的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-2的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDRH3；各自具有与4G9-3的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-4的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDRL1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-5的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-6的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-7的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-8的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-9的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-10的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；4G9-11的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-12的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-13的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-14的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-15的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDRL1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-16的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-17的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-18的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-19的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDRL1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与4G9-20的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与5C2-1的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与5C2-2的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；各自具有与5C2-3的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDRL1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与5C2-4的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与5C2-5的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与5C2-6的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与5C2-7的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDRL2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与5C2-8的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自具有与5C2-9的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；或各自具有与5C2-10的对应CDR的氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％或至少约95％的同一性的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在实施方案中，抗体或其抗原结合片段由CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3定义，它们各自独立地与抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的对应CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3具有至少75％的同一性，诸如至少85％的同一性或至少90％的同一性。
在实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含各自独立地具有与4G9-1的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDRL1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-2的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDRL2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-3的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-4的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDRL3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-5的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-6的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-7的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-8的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDRH3；各自独立地具有与4G9-9的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-10的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-11的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-12的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-13的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-14的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-15的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-16的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-17的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-18的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-19的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDRL1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与4G9-20的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与5C2-1的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDRL2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与5C2-2的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与5C2-3的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDRL3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与5C2-4的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDRH1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与5C2-5的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与5C2-6的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与5C2-7的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDRH3；各自独立地具有与5C2-8的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；各自独立地具有与5C2-9的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；或各自独立地具有与5C2-10的对应CDR的序列相同或者与该序列相比含有一个或两个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。在前述实施方案中，优选每个CDR独立地具有与参考CDR相同的氨基酸序列，或者相对于参考CDR含有一个氨基酸取代、插入或缺失。在前述实施方案中，优选一个或两个取代、插入或缺失中的每一者都是作为保守取代的取代。
在一个具体的实施方案中，抗体或抗原结合片段包含4G9-2的CDR L1、CDR L2、CDRL3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。在另一个具体的实施方案中，抗体或抗原结合片段包含4G9-12的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3，它们与包含抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的CDR L1、CDRL2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3相比各自独立地具有至多一个缺失、插入或取代。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3，它们与包含抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的CDR L1、CDRL2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3相比各自独立地具有至多两个缺失、插入或取代。
实施方案提供了一种抗体或其抗原结合片段，其中相对于抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的对应的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3，CDRL1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3各自独立地具有三个或更少的氨基酸取代，诸如两个氨基酸取代或一个氨基酸取代。
在实施方案中，抗体或抗原结合片段包含各自与4G9-1的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-2的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-3的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-4的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-5的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-6的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-7的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-8的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-9的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-10的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-11的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-12的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-13的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-14的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-15的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-16的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-17的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-18的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-19的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-20的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-1的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-2的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-3的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-4的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-5的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-6的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-7的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-8的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-9的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；或各自与5C2-10的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区。
例如，优选的抗体或抗原结合片段可以包含各自与4G9-2的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-4的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-8的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-9的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-12的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-14的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-18的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-19的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区；或各自与5C2-8的对应的轻链和重链可变区序列具有至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的轻链可变区和重链可变区。尽管不受理论的束缚，本段的示例性抗体或抗原结合片段具有期望的PD-1激动剂活性。
在一个具体的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含4G9-2的轻链可变区和重链可变区。在一个具体的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含4G9-12的轻链可变区和重链可变区。
在实施方案中，抗体或抗原结合片段包含各自与4G9-1的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-2的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-3的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-4的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-5的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-6的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-7的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-8的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-9的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-10的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-11的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-12的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-13的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-14的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-15的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-16的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-17的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-18的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-19的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与4G9-20的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-1的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-2的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-3的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-4的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-5的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-6的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-7的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-8的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；各自与5C2-9的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；或各自与5C2-10的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个、最多18个、最多19个、最多20个、最多21个、最多22个、最多23个或最多24个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区。
例如，优选的抗体或抗原结合片段可以包含各自与4G9-2的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个或最多18个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区；或各自与4G9-12的对应的轻链和重链可变区序列相比具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个或最多18个缺失、插入或取代的轻链可变区和重链可变区。
实施方案提供了一种抗体或其抗原结合片段，其中轻链可变区和重链可变区各自独立地与抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的对应的轻链可变区和重链可变区具有至少75％的同一性，诸如至少85％的同一性、至少90％的同一性或至少95％的同一性。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段由轻链可变区和重链可变区定义，所述轻链可变区和重链可变区各自与抗体4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10中任一者的对应的轻链和重链可变区相比独立地具有最多一个、最多两个、最多三个、最多四个、最多五个、最多六个、最多七个、最多八个、最多九个、最多十个、最多11个、最多12个、最多13个、最多14个、最多15个、最多16个、最多17个或最多18个缺失、插入或取代。
在实施方案中，抗体或抗原结合片段包含含有表5或表6中公开的序列的抗体4G9-1、4G9-2、4G9-3、4G9-4、4G9-5、4G9-6、4G9-7、4G9-8、4G9-10、5C2-1、5C2-2、5C2-3、5C2-4、5C2-5、5C2-6、5C2-7、5C2-8、5C2-9或5C2-10的重链氨基酸序列和轻链氨基酸序列或任一序列的抗原结合部分。表5和6公开了具有和不具有末端赖氨酸(“-K”，仅重链)以及具有和不具有信号肽(“-SP”)的4G9-1至4G9-20和5C2-1至5C2-10的重链和轻链序列。
表5：4G9序列
表6：5C2序列
2.编码4G9和5C2序列的多核苷酸
在另一方面，本发明涉及一种分离的核酸分子(例如，多核苷酸)，其编码本文公开的抗PD1激动剂抗体的抗体或抗原结合片段。本公开提供了编码包含抗体4G9-1至4G9-20或5C2-1至5C2-10的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:1-393，表1-6)的抗体或抗原结合片段的多核苷酸。多核苷酸可以编码完整抗体或其抗原结合片段或轻链、重链、其组合或其CDR。在实施方案中，多核苷酸可以编码选自表5和6(例如，SEQ ID NO:214-393)中所示的抗体或抗原结合片段的重链和/或轻链。在实施方案中，多核苷酸可以编码选自表1-4(例如，SEQ IDNO:1-20、83-102、143-152和184-193)中所示的重链可变区(例如，VH)和/或轻链可变区(例如，VK)。在实施方案中，多核苷酸可以编码包含选自表1-4(例如，SEQ ID NO:21-82、103-142、153-183、194-213)中所示的CDR序列的抗体或抗原结合片段(例如，轻链和/或重链可变区/结构域)。在实施方案中，多核苷酸编码4G9-12的重链和/或轻链可变区，例如，SEQ IDNO:12和94。在此类实施方案中，多核苷酸任选地进一步编码重链恒定区和/或轻链恒定区。在实施方案中，多核苷酸编码4G9-2的重链和/或轻链可变区，例如，SEQ ID NO:2和84。在实施方案中，多核苷酸编码包含4G9-12的CDR序列(例如，SEQ ID NO:32、53和74，和/或114、KVS和134)的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，多核苷酸编码包含4G9-12的重链和轻链可变区(例如，SEQ ID NO:12和94)的抗体或抗原结合片段。
分离的多核苷酸分子可以通过标准技术产生，包括但不限于普通的分子克隆和化学多核苷酸合成技术。例如，聚合酶链式反应(PCR)技术可用于获得编码变体多肽的分离的多核苷酸。例如在PCR Primer:ALaboratory Manual,Dieffenbach and Dveksler编辑,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1995中描述了一般的PCR技术。当使用RNA作为模板来源时，逆转录酶可用于合成互补DNA(CDNA)链。连接酶链式反应、链置换扩增、自主序列复制(self-sustained sequence replication)或基于多核苷酸序列的扩增也可用于获得分离的多核苷酸。参见例如Lewis(.1992)Genetic Engineering News 12:1；Guatelli等人.(1990)Proc.Natl.Acad Sci.USA 87:1874-1878；以及Weiss(1991)Science 254:1292-1293。
分离的多核苷酸可以作为单个多核苷酸分子或作为一系列寡核苷酸(例如，使用用于在3'至5'方向进行自动DNA合成的亚磷酰胺技术)进行化学合成，例如，可以合成一对或多对含有所需序列的长寡核苷酸(例如，>100个核苷酸)，每对含有互补性的短区段(例如，约15个核苷酸)，使得当寡核苷酸对退火时形成双链体。DNA聚合酶可用于延伸寡核苷酸，使每个寡核苷酸对产生单个双链多核苷酸分子，然后可将其加热到载体中。分离的多核苷酸也可以通过诱变获得。编码蛋白质的多核苷酸可以使用标准技术进行突变，包括通过PER的寡核苷酸定向诱变和/或定点诱变。参见Short Protocols in Molecular Biology,第8章,Green Publishing Associates and John Wiley&Sons,Ausubel等人编辑,1992。
本领域普通技术人员将意识到，遗传密码的冗余性允许任何氨基酸序列被大量多核苷酸编码。本领域普通技术人员还将意识到，取决于多核苷酸将在其中被保持、复制和/或转录的生物体，可以根据生物体的密码子偏倚来选择编码特定氨基酸序列的多核苷酸序列。
多核苷酸可以位于载体(例如，表达载体)中。可以将多核苷酸引入合适的宿主细胞中进行表达，例如，可以在染色体外或插入染色体中，例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或NS0细胞。优选地，宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，诸如CHO或NS0细胞，但是也可以使用细菌、酵母、植物和其他类型的合适细胞。
在实施方案中，宿主细胞可以是转基因动物的一部分。制造产生抗体的转基因动物的方法是本领域已知的。参见例如A.Jakobovits,Curt Opin Biotechnol.,6(5):5.61-6(1995)和Brüggemann,M.等人.,Arch Immunol Ther Exp(Warsz).,63(2)101-108(2015)；Jakobovits,A.等人,“From XenoMouse technology to panitumumab,the first fullyhuman antibody product from transgenic mice.”Nat Biotechnol.25(10):113.4-43(2007)；Lonberg N.(2005)“Human antibodies from transgenic animals.”NatBiotechnol.23(9):1117-25和美国专利第9,708,635号；第9,686,970号；第9,499,838号；第9,445,581号；第9；388,446号；第8,835,712号；第8,703,485号；第8,232,449号；第7,795,494号；以及第5,939,598号。
用于处理多核苷酸、载体、表达载体、宿主细胞和转基因动物的技术是本领域已知的并无需详细描述。
F.药物组合物
提供了包含所公开的抗体及其抗原结合片段的药物组合物。药物组合物通常包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
本文公开的药物组合物以治疗有效量施用于受试者。“有效量”或“治疗有效量”通常是指足以治疗、抑制或减轻所治疗病症的一种或多种症状或以其他方式提供所需药理和/或生理作用的量或剂量。精确的剂量将根据各种因素而变化，诸如受试者相关变量(例如，年龄、免疫系统健康状况等)、疾病和受影响的治疗。
对于所公开的抗体及其抗原结合片段，本领域普通技术人员考虑到接受者的治疗背景、年龄和总体健康状况，将能够确定适当的剂量。所选择的剂量取决于所需治疗效果、施用途径和所需治疗持续时间。对于所公开的抗体及其抗原结合片段，通常可以将0.001至20mg/kg体重的剂量水平每天施用于哺乳动物。通常，对于静脉注射或输注，剂量可能较低。
在某些实施方案中，抗体及其抗原结合片段可以局部施用，例如通过直接注射到待治疗的部位。通常，注射可导致抗体和/或其抗原结合片段的局部浓度增加，该浓度可能大于通过全身施用可达到的浓度。本文公开的抗体及其抗原结合片段可以与如上所述的基质组合，以通过减少多肽被动扩散出待治疗部位来帮助产生增加的多肽组合物的局部浓度。
1.用于肠胃外施用的制剂
在一些实施方案中，含有所公开的抗体和抗原结合片段的组合物通过肠胃外注射在水溶液中施用。制剂也可以是悬浮液或乳液的形式。一般来讲，提供了包含治疗有效量的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，并任选地包含药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂和/或载剂。此类组合物任选地包含以下物质中的一者或多者：稀释剂；无菌水；各种缓冲液内含物(例如，Tris-HO、醋酸盐、磷酸盐)、pH和离子强度的缓冲盐水；以及添加剂，诸如去污剂和增溶剂(例如，TWEEN 20(聚山梨醇酯-20)、TWEEN 80(聚山梨醇酯-80)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸、焦亚硫酸钠)以及防腐剂(例如，硫柳汞、苯甲醇)和填充物质(例如，乳糖、甘露醇)。非水性溶剂或媒介物的实例包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、植物油(诸如橄榄油和玉米油)、明胶和可注射的有机酯(诸如油酸乙酯)。可以将制剂在使用前立即冻干并再溶解/再悬浮。可以通过例如过滤、通过将消毒剂掺入组合物中、通过照射组合物或通过加热组合物来对制剂进行灭菌。
2.用于口服的制剂
在一些实施方案中，抗体组合物被配制用于口服递送。抗体的口服剂型可以抵抗蛋白水解，并在胃肠道中局部递送更大比例的免疫反应性抗体用于治疗感染，或者允许吸收抗体以治疗或预防全身性病状(Reilly,RM等人.Clin Pharmacokinet.,32(4):313.M(1997)；Victoria.S Jasion and Bruce:P Burnett,Nutr J.；14:22(2015)；和Philippart,M.等人,Drug.Res(Stuttg)66(03):11.120(2016))。
口服固体剂型在Remington’s Pharmaceutical Sciences,第18版.1990(MackPublishing Co.Easton Pa.18042)第89章中有一般性描述。固体剂型包括片剂、胶囊、丸剂、锭剂或糖锭、扁囊剂、小药丸、粉剂或颗粒剂；或将该材料掺入聚合物化合物(诸如聚乳酸、聚乙醇酸等)的颗粒制剂中或者掺入脂质体中。此类组合物可以影响抗体或抗原结合片段的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。参见例如Remington’sPharmaceutical Sciences,第18版.(1990,Mack Publishing.Co.,Easton,Pa.18042)第1435-1712页，该文献以引入方式并入本文。
该组合物可以液体形式制备，或者可以是干粉(例如，冻干)形式。脂质体或类蛋白包封可用于配制组合物。可以使用脂质体包封并且脂质体可以用各种聚合物衍生(例如，美国专利第5,013,556号)。还参见Marshall,K.In:Modern Pharmaceutics,G.S.Banker和C.T.Rhodes编辑,第10章,1979。一般来讲，该制剂将包括抗体或抗原结合片段(或其化学修饰形式)和在胃环境中保护抗体或抗原结合片段并在肠中释放生物活性物质的惰性成分。
可以对抗体及其抗原结合片段进行化学修饰，从而使衍生物的口服递送有效。通常，所考虑的化学修饰是将至少一个部分附接到组分分子本身，其中该部分允许从胃或肠摄取到血流中，或直接摄取到肠粘膜中。还希望提高组分的整体稳定性并增加体内循环时间。PEG化是用于药物用途的示例性化学修饰。可以使用的其他部分包括丙二醇、乙二醇和丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚脯氨酸、聚-1,3-二氧戊环和聚-1,3,6-三氧杂环辛烷[参见例如Abuchowski和Davis.(1981)“SolublePolymer-Enzyme Adducts,”in Enzymes as Drugs.Hocenberg and Roberts,OS.(Wiley-Interscience:New York,N.Y.)第367383页；以及Newmark等人(1982)J.App,Biochem.4:185-189。
另一个实施方案提供了用于口服施用的液体剂型，该液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液、混悬剂和糖浆剂，其可以含有其他组分，包括惰性稀释剂；佐剂，诸如湿润剂、乳化剂和悬浮剂；以及甜味剂、调味剂和芳香剂。
对于口服制剂，释放位置可以是胃、小肠(十二指肠、空肠或回肠)或大肠。在一些实施方案中，通过保护药剂(或衍生物)或通过将药剂(或衍生物)释放到胃环境之外(诸如在肠中)，该释放将避免胃环境的有害影响。为了确保完全的胃抗性，对至少pH 5.0不可渗透的包衣是所需的。用作肠溶包衣的更常见的惰性成分的实例是醋酸纤维素偏苯三酸酯(CAT)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、HPMCP 50、HPMCP-55、聚醋酸乙烯-邻苯二甲酸酯(PVAP)、Eudragit L30DTM、AquatericTM醋酸纤维素邻苯二甲酸酯(CAP)、EudragitLTM、Eudragit STM和ShellacTM。这些包衣可以用作混合膜。
3.受控递送聚合物基质
本文公开的抗体及其抗原结合片段也可以控释制剂的形式施用。可以将抗体及其抗原结合片段掺入惰性基质中，该惰性基质允许通过扩散或浸出机制释放，例如树胶。缓慢降解的基质也可以掺入制剂中。控释的另一种形式是基于Oros治疗系统(Alza Corp.)，即将抗体或其抗原结合片段包封在半透膜中，该半透膜允许水进入并由于渗透作用而将药物通过单个小开口推出。
可以制成控释聚合物装置用于在植入聚合物装置(棒、圆筒、膜盘)或注射(微粒)后进行长期全身释放。该基质可以是微粒的形式，诸如微球，其中药剂分散在固体聚合物基质或微胶囊中，其中核是与聚合物壳不同的材料，并且肽分散或悬浮在核中，该核本质上可以是液体或固体。除非本文特别定义，否则微粒、微球和微胶囊可互换使用。另选地，聚合物可以浇铸成纳米到厘米范围内的薄片或薄膜、通过研磨或其他标准技术生产的粉末，或凝胶如水凝胶。
不可生物降解或可生物降解的基质可用于递送激动剂抗PD-1抗体、抗原结合片段或编码激动剂抗PD-1抗体或抗原结合片段的核酸，但是在一些实施方案中需要可生物降解的基质。这些可以是天然的或合成的聚合物，但是在一些实施方案中由于更好的降解和释放曲线的表征，需要合成的聚合物。基于需要释放的时间来选择聚合物。在某些情况下，线性释放可能是最有用的，但是在其他情况下，脉冲释放或“大量释放”可能提供更有效的结果。聚合物可以在水凝胶的底部(通常吸收高达约90重量％的水)，并且可以任选地与多价离子或聚合物交联。
基质可以通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取和本领域技术人员已知的其他方法形成。生物可溶蚀的微球可以使用为制备用于药物递送的微球而开发的任何方法来制备，例如由Mathiowitz和Langer,J.Controlled Release,5:13.22(1987)；Mathiowitz等人,Reclaim Polymers,6:275-283(1987)；以及Mathiowitz等人,J.Appl.Polymer Sci.,35:755-774(1988)所述。
该装置可以被配制成用于局部释放以治疗植入或注射区域(通常递送的剂量将远小于治疗全身的剂量)或全身递送。这些可以植入或皮下注射到肌肉、脂肪中，或者吞咽。
G.制造方法
1.制备抗体的方法
所公开的抗体可以在细胞培养物、噬菌体或各种动物中产生，包括但不限于牛、兔、山羊、小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、绵羊、狗、猫、猴子、黑猩猩和猿。在实施方案中，各种动物可以是经基因工程化以产生人或人源化抗体的转基因动物。在实施方案中，抗体是哺乳动物抗体。噬菌体技术可用于分离初始抗体或生成具有改变的特异性或亲和力特征的变体。这种技术在本领域是常规的且众所周知的。在实施方案中，通过本领域已知的重组方法来产生抗体。例如，可以通过用包含编码抗体的DNA序列的载体转染宿主细胞来产生重组抗体。一个或多个载体可用于转染在宿主细胞中表达至少一个VL和一个VH区的DNA序列。抗体生成和产生的重组方法的示例性描述包括Delves,Antibody Production:EssentialTechniques(Wiley,1997).；Shephard等人,Monoclonal Antibodies(Oxford UniversityPress,2000)；Goding,Monoclonal Antibodies:Principles And Practice(AcademicPress,1993)Current Protocols In Immunology(John Wiley&Sons,最新版)。
所公开的抗体和抗原结合片段可以通过重组手段进行修饰，以增加抗体在介导所需功能方面的更大功效。换句话说，抗体和抗原结合片段可以通过使用重组手段的取代来修饰。通常，取代将是保守取代。例如，抗体或抗原结合片段的恒定区中的至少一个氨基酸可以被不同的残基替代。参见例如美国专利第5,624,821号、美国专利第6,194,551号、申请第WO 9958572号；Angal等人,Mol Immunol.30:105-08(1993)。氨基酸的修饰包括氨基酸的缺失、添加和取代。在一些情况下，进行此类改变以减少不希望的活性，例如补体依赖性细胞毒性。通常，通过共价或非共价连接提供可检测信号的物质来标记抗体。各种标记和缀合技术是已知的，并且在科学和专利文献中被广泛报道。可以筛选这些抗体与蛋白质或多肽的结合。参见例如Antibody Engineering:APractical Approach(Oxford UniversityPress,1996)。
例如，具有所需生物活性的合适抗体可以使用体外测定来鉴定，包括但不限于增殖、迁移、粘附、软琼脂生长、血管生成、细胞间通讯、凋亡、转运、信号转导和体内测定如抑制肿瘤生长。本文提供的抗体也可用于诊断应用。作为捕获或非中和抗体，可以筛选它们与特异性抗原的结合能力，而不会抑制抗原的受体结合或生物活性。作为中和抗体，抗体可用于竞争性结合测定。
另一个实施方案提供了一种从基本上同源的抗体群体，即单个抗体中获得的单克隆抗体。除了可能存在于一小部分抗体分子中的自然发生的突变外，群体内都是相同的。单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来源于特定物种或属于特定的抗体类别或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而链的剩余部分与来源于另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的对应序列相同或同源，只要它们表现出所需的拮抗活性。
可以使用产生单克隆抗体的任何方法来制备单克隆抗体。在杂交瘤方法中，通常用免疫剂使小鼠或其他合适的宿主动物免疫，以诱导产生或能够产生将特异性结合至免疫剂的抗体的淋巴细胞。另选地，可以在体外使淋巴细胞免疫。
所公开的抗体也可以通过重组DNA方法制备。使用常规方法(例如，通过使用能够特异性结合至编码微型抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)，可以容易地分离并测序编码所公开的抗体的DNA。也可以使用噬菌体展示技术生成并筛选抗体或活性抗体片段(例如，抗原结合片段)的文库。
使用蛋白质化学制备抗体的方法在本领域中也是已知的。生产包含抗体的蛋白质的一种方法是通过蛋白质化学技术将两种或多种肽或多肽连接在一起。例如，可以使用目前可用的实验室设备，使用Fmoc(9-芴基甲氧基羰基)或Boc(叔丁氧基羰基)化学来化学合成肽或多肽。(Applied Biosystems,Inc.,Foster City,CA)。本领域技术人员可以容易地理解，例如，可以通过标准化学反应来合成对应于抗体的肽或多肽。例如，可以合成肽或多肽，并且不从其合成树脂上切割，而可以合成抗体的其他片段，随后从树脂上切割，从而暴露在其他片段上被功能性阻断的末端基团。通过肽缩合反应，这两个片段可以分别在其羧基和氨基末端经由肽键共价连接，以形成抗体或其片段。另选地，如上所述，在体内独立合成肽或多肽。一旦分离，则这些独立的肽或多肽可以经由类似的肽缩合反应连接以形成抗体或其抗原结合片段。
例如，克隆的或合成的肽区段的酶促连接允许将相对短的肽片段连接以产生更大的肽片段、多肽或整个蛋白质结构域。另选地，合成肽的天然化学连接可用于从较短的肽片段合成构建大肽或多肽。该方法由两步化学反应组成。第一步是未保护的合成肽-α-硫酯与另一个含有氨基末端Cys残基的未保护的肽区段的化学选择性反应，得到硫酯连接的中间体作为初始共价产物。在不改变反应条件的情况下，该中间体经历自发的、快速的分子内反应，在连接位点形成天然肽键。
H.使用方法
所公开的抗体及其抗原结合片段可用于调节有需要的受试者的免疫应答。一个实施方案提供了一种激活表达PD-1的免疫细胞(例如，T细胞)以增殖或增强表达PD-1的免疫细胞的生物活性的方法，其通过施用所公开的抗体及其抗原片段(任选地包括第二治疗剂)来进行。
1.免疫应答刺激
a.治疗策略
提供了在受试者中诱导或增强免疫应答的方法。通常，该方法包括向受试者施用治疗有效量的一种或多种所公开的抗体及其抗原结合片段，以免疫特异性结合至PD-1，并通过PD-1诱导、促进或增强刺激或激活信号以激活免疫细胞。免疫应答可以是例如诱导、促进或增强T细胞激活、免疫细胞分泌细胞因子、T细胞增殖。所公开的抗体或其抗原结合片段可以治疗有效量施用于有需要的受试者，以克服T细胞耗竭和/或T细胞能量。通过使用已知技术测量T细胞功能，可以确定克服I细胞耗竭或T细胞无能。
该方法可在体内或离体使用以诱导、促进或增强刺激性免疫应答。
在一些实施方案中，将抗体或其抗原结合片段直接施用于受试者。也可以向受试者施用编码抗体或其抗原结合片段的核酸。优选地，核酸一旦施用就可以表达，以产生结合PD-1的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，将抗体或其抗原结合片段与细胞(例如，免疫细胞)离体接触，并将处理的细胞施用于受试者(例如，过继转移)。抗体或其抗原结合片段可以使更强的免疫应答成为可能。所公开的组合物可用于刺激或增强涉及T细胞的免疫应答，从而通过免疫细胞上的PD-1引起激活信号。
2.待治疗的受试者
a.癌症治疗
所公开的抗体及其组合物和方法可用于治疗癌症。通常，药剂用于通过向受试者施用一定量的所公开的抗体或其抗原结合片段来刺激或增强受试者对癌症的免疫应答，所公开的抗体或其抗原结合片段通过PD-1诱导、促进或增强激活信号。该方法可以减轻癌症的一种或多种症状。该方法可用于减少或抑制肿瘤生长或引起肿瘤消退。例如，如本文所公开和举例说明的，本公开的抗体或抗原结合片段具有抗肿瘤活性，并且还可以诱导中枢记忆T细胞(Tcm)和/或抑制T细胞耗竭。
由所公开的抗体或其片段激活的免疫细胞可以杀死癌细胞并降低受试者的肿瘤负荷。肿瘤可以是良性的或恶性的，并且如果是恶性的，则在疾病进展的任何阶段。在其他实施方案中，癌症与特定癌症抗原(例如，泛癌抗原(KS1/4)、卵巢癌抗原(CA125)、前列腺特异性抗原(PSA)、癌胚抗原(CEA)、CD19、CD20、HER2/neu等)相关。
本文公开的方法和抗体组合物可用于治疗或预防多种癌症或其他异常增殖性疾病，包括(但不限于)癌症，包括膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌和皮肤癌；包括鳞状细胞癌；淋巴系造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞性白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤；髓系造血肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病和早幼粒细胞性白血病；间叶源性肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；其他肿瘤，包括黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、成神经细胞瘤和神经胶质瘤；中枢和外周神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间叶源性肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎瘤。
由细胞凋亡异常引起的癌症也可以通过所公开的方法和组合物来治疗。此类癌症可以包括但不限于滤泡性淋巴瘤、p53突变癌、乳腺、前列腺和卵巢的激素依赖性肿瘤以及癌前病变，诸如家族性腺瘤性息肉病和骨髓增生异常综合征。在具体实施方案中，可以通过所述方法和组合物治疗或预防卵巢、膀胱、乳腺、结肠、肺、皮肤、胰腺或子宫中的恶性肿瘤或增殖异常变化(诸如化生和发育异常)或过度增殖性病症。在其他具体实施方案中，通过所述方法和组合物治疗或预防肉瘤、黑色素瘤或白血病。
可以通过本文公开的方法和组合物治疗或预防的特定癌症和相关病症包括但不限于白血病，包括但不限于急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病如成髓细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、骨髓单核细胞性白血病、单核细胞性白血病、红白血病和骨髓增生异常综合征、慢性白血病，诸如如但不限于慢性髓细胞(粒细胞)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病；真性红细胞增多症；淋巴瘤，诸如但不限于霍奇金病或非霍奇金病淋巴瘤(例如，弥漫性间变性淋巴瘤激酶(ALK)阴性、大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；弥漫性间变性淋巴瘤激酶(ALX)阳性、大B细胞淋巴瘤(DLBCL)；间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性、ALK+间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、急性髓系淋巴瘤(AML))；多发性骨髓瘤，诸如但不限于冒烟型多发性骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞白血病、孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤；华氏巨球蛋白血症(macroglobulinemia)；意义未明的单克隆丙种球蛋白病；良性单克隆丙种球蛋白病；重链病；骨和结缔组织肉瘤，诸如但不限于骨肉瘤(bone sarcoma)、骨肉瘤(osteosarcoma)、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性巨细胞瘤、骨纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤(angiosarcoma)(血管肉瘤(hemangiosarcoma))、纤维肉瘤、卡波西肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤；脑肿瘤，包括但不限于神经胶质瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、非神经胶质肿瘤、听神经瘤、颅咽管瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、松果体细胞瘤、松果体母细胞瘤、原发性脑淋巴瘤；乳腺癌，包括但不限于腺癌、小叶(小细胞)癌、导管内癌、髓样乳腺癌、粘液性乳腺癌、管状乳腺癌；乳头状乳腺癌、佩吉特病和炎性乳腺癌；肾上腺癌，包括但不限于嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌；甲状腺癌，诸如但不限于乳头状或滤泡状甲状腺癌、髓样甲状腺癌和甲状腺未分化癌；胰腺癌，包括但不限于胰岛素瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、舒血管肠肽瘤、生长抑素分泌肿瘤和类癌或胰岛细胞肿瘤；垂体癌，包括但不限于库欣病、催乳素分泌肿瘤、肢端肥大症和尿崩症；眼癌，包括但不限于眼部黑色素瘤，诸如虹膜黑色素瘤、脉络膜黑色素瘤和睫状体黑色素瘤，以及视网膜母细胞瘤；阴道癌，包括但不限于鳞状细胞癌、腺癌和黑色素瘤；外阴癌，包括但不限于鳞状细胞癌、黑色素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤和佩吉特病；宫颈癌，包括但不限于鳞状细胞癌和腺癌；子宫癌，包括但不限于子宫内膜癌和子宫肉瘤；卵巢癌，包括但不限于卵巢上皮癌、交界性肿瘤、生殖细胞肿瘤和间质肿瘤；食管癌，包括但不限于鳞状癌、腺癌、腺样囊性癌、粘液表皮样癌、腺鳞癌、肉瘤、黑色素瘤、浆细胞瘤、疣状癌和燕麦细胞(小细胞)癌；胃癌，包括但不限于腺癌、蕈状(息肉样)溃疡癌、浅表扩散性癌、弥漫性扩散性癌、恶性淋巴瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤和癌肉瘤；结肠癌；直肠癌；肝癌，包括但不限于肝细胞癌和肝母细胞瘤；胆囊癌，包括但不限于腺癌；胆管癌，包括但不限于乳头状、结节状和弥漫性；肺癌，包括但不限于非小细胞肺癌、鳞状细胞癌(表皮样癌)、腺癌、大细胞癌和小细胞肺癌；睾丸癌，包括但不限于生殖肿瘤精原细胞瘤、间变性、经典(典型)的精母细胞瘤、非精原细胞瘤、胚胎癌、畸胎瘤癌、绒毛膜癌(卵黄囊瘤)；前列腺癌，包括但不限于腺癌、平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤；阴茎癌；口腔癌，包括但不限于鳞状细胞癌；基底癌；唾液腺癌，包括但不限于腺癌、粘液表皮样癌和腺样囊性癌；咽癌，包括但不限于基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、小痣恶性黑色素瘤、肢端雀斑样黑色素瘤；肾癌，包括但不限于肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或子宫)；维尔姆斯瘤(Wilms’tumor)；膀胱癌，包括但不限于移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、癌肉瘤。此外，癌症包括肌肉瘤、成骨肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、血管母细胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支气管癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌和乳头状腺癌(关于这些疾病的综述，参见Fishman等人,1985,Medicine,第2版,J.B.Lippincott Co.,Philadelphia和Murphy等人,1997,Informed Decisions:The Complete Book of Cancer Diagnosis,Treatment andRecovery,Viking Penguin,Penguin Books U.S.A.,Inc.,United States of America)。在一个具体实例中，使用激动剂抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如，具有4G9-12的重链和轻链CDR的抗体)来治疗有需要的患者的非小细胞肺癌。例如，本发明涉及一种用于治疗非小细胞肺癌的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的激动剂抗PD-1抗体或抗原结合片段(例如，具有4G9-12的重链和轻链CDR的抗体)。
本文公开的激动剂抗PD-1抗体和抗原结合片段可用于治疗对检查点抑制疗法具有抗性或产生抗性的癌症。对检查点抑制疗法的抗性可以是原发性抗性(例如，癌症使用检查点抑制疗法的首次和后续治疗难治)，或者可以是继发性抗性(例如，癌症对首次或初始治疗有应答，但使用检查点抑制疗法的后续治疗难治)。例如，通过下调或缺乏肿瘤(例如，PD-L1阴性癌症)中PD-L1的表达，可以产生对检查点抑制疗法的抗性。
在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和抗原结合片段可用于治疗对检查点抑制疗法(诸如PD-1检查点抑制疗法)具有继发性抗性的癌症受试者。因此，本公开涉及一种治疗对检查点抑制疗法(例如，PD-1检查点抑制疗法)具有继发性抗性的癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段。
在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和抗原结合片段可用于治疗对PD-1检查点抑制具有原发性抗性的癌症受试者。因此，本公开涉及一种治疗对检查点抑制疗法(例如，PD-1检查点抑制疗法)具有原发性抗性的癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段。
在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和抗原结合片段可用于治疗患有PD-L1阴性肿瘤(例如，PD-L1下调的癌症)的受试者。因此，本公开涉及一种治疗呈PD-L1阴性的癌症(例如，PD-L1下调的癌症)的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段。
b.感染治疗
所公开的抗体组合物和方法可用于治疗感染和传染性疾病。药剂用于通过向受试者施用一定量的一种或多种所公开的抗体或其抗原结合片段来刺激或增强受试者对感染的免疫应答，所述抗体或其抗原结合片段通过PD-1发送激活或刺激信号。该方法可以减轻感染的一种或多种症状。
感染或疾病可以由细菌、病毒、原生动物、蠕虫或其他进入细胞内并受到细胞毒性T淋巴细胞攻击的微生物病原体引起。
感染或疾病可以是急性或慢性的。急性感染通常是持续时间较短的感染。在急性微生物感染期间，免疫细胞开始表达免疫调节受体。因此，在一些实施方案中，该方法包括增加针对急性感染的免疫刺激应答。
感染可以由例如但不限于白色念珠菌、单核细胞增多性李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、化脓性链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、金黄色葡萄球菌；大肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌或分枝杆菌引起。
在一些实施方案中，所公开的抗体组合物用于治疗慢性感染，例如，其中已经发生T细胞耗竭，从而导致感染在宿主体内持续较长时间的感染。
待治疗的示例性感染包括由肝炎病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、人嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)、疱疹病毒、艾司坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)或人乳头瘤病毒引起^的慢性感染。
因为病毒感染主要由T细胞清除，所以在更快或更彻底地清除感染性病毒剂对动物或人受试者有益的情况下，T细胞活性的增加将是治疗上有用的。因此，所公开的组合物可用于治疗局部或全身性病毒感染，包括但不限于免疫缺陷(例如，HIV、乳头状瘤(例如，HPV)、疱疹(例如，HSV)、脑炎、流感(例如，人流感病毒A)和普通感冒(例如，人鼻病毒)以及由例如HTLV、肝炎病毒、呼吸道合胞病毒、痘苗病毒、狂犬病病毒和SARS-CoV2病毒引起的其他病毒感染。这些分子可以局部施用以治疗病毒性皮肤病，诸如疱疹病变、带状疱疹或生殖器疣。这些分子也可以全身性施用以治疗全身性病毒性疾病，包括但不限于AIDS、流感、普通感冒、covid-19或脑炎。
可以治疗的代表性感染包括但不限于由微生物引起的感染，所述微生物包括但不限于放线菌、鱼腥藻、芽孢杆菌、拟杆菌、蛭弧菌(B.dellovibrio)、博代氏杆菌(Bordetella)、疏螺旋体、弯曲杆菌、柄杆菌、衣原体、绿硫细菌、着色菌、梭状芽孢杆菌、棒状杆菌、噬细胞菌、异常球菌(Deinococcus)、埃希氏菌、弗朗西斯菌、嗜盐杆菌(Halobacterium)；螺杆菌、嗜血杆菌、流感嗜血杆菌II型-(HIB)、生丝微菌(Hyphomicrobium)、军团菌、钩端螺旋体病、李斯特菌、脑膜炎球菌A、B和C、甲烷杆菌、微球菌、分支杆菌(Myobacterium)、支原体、粘球菌、奈瑟球菌、硝化杆菌、颤藻、原绿藻、变形杆菌、假单胞菌、红螺菌、立克次氏体(Rickettsia)、沙门氏菌、志贺氏菌、螺菌、螺旋体、葡萄球菌、链球菌、链霉菌、硫化叶菌、热原体、硫杆菌和密螺旋体、弧菌、耶尔森氏菌(Yersinia)、新型隐球菌、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、白色念珠菌、热带念珠菌、星形诺卡菌(Nocardia asteroides)、立氏立克次体(Rickettsia ricketsii)、斑疹伤寒立克次氏体(Rickettsia typhi)、肺炎支原体、鹦鹉热衣原体(Chlamydialpsittaci)、沙眼衣原体(Chlamydial trachomatis)、恶性疟原虫、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、阴道毛滴虫和曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)。
可以使用所公开的组合物和方法治疗的其他微生物包括细菌，如克雷伯氏菌、沙雷氏菌、巴斯德氏菌；与霍乱、破伤风、肉毒中毒、炭疽、鼠疫和莱姆病有关的病原体；或真菌或寄生虫病原体，诸如念珠菌(白色念珠菌、克鲁斯念珠菌(krusei)、光滑念珠菌、热带念珠菌等)、隐球菌、曲霉(烟曲霉、黑曲霉等)、毛霉菌目属(Genus Mucorales)(毛霉菌、犁头霉、根霉)、孢子丝菌(申克氏孢子丝菌)、芽生菌(皮炎芽生菌)、副球孢子菌(巴西副球孢子菌)、球孢子菌(粗球孢子菌)和组织胞浆菌(荚膜组织胞浆菌)、溶组织内阿米巴、结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)、福氏耐格里变形虫(Naegleria fowleri)、棘阿米巴属(Acanthamoeba sp.)、蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lambia)、隐孢子虫属(Cryptosporidiumsp.)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、微小巴贝虫(Babesia microti)、布氏锥虫、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、刚地弓形虫等)、孢子丝菌、芽生菌、副球孢子菌、球孢子菌、组织胞浆菌、溶组织内阿米巴、巴拉那属(Balanadium)、耐格里属(Naegleria)、棘阿米巴属(Acanthamoeba)、贾第鞭毛虫、隐孢子虫、肺孢子虫、疟原虫、巴贝虫(Babesia)或锥虫等。
c.用于增强免疫应答的联合疗法
所公开的抗体和其抗原结合片段及其组合物可以单独或与一种或多种另外的治疗剂联合施用于有需要的受试者。在一些实施方案中，抗体及其抗原结合片段和另外的治疗剂分开但同时施用。抗体及其抗原结合片段和另外的治疗剂也可以作为同一组合物的一部分施用。在其他实施方案中，抗体及其抗原结合片段和第二治疗剂在不同时间分开施用，但作为同一治疗方案的一部分施用。另外的治疗剂可以在施用所公开的抗体及其抗原结合片段之前、之后或与其交替施用。
可以在施用第二治疗剂之前1、2、3、4、5、6或更多个小时，或1、2、3、4、5、6、7或更多天向受试者施用第一治疗剂。在实施方案中，可以在第一次施用第二药剂之前每1、2、3、4、5、6-7、14、21、28、35或48天向受试者施用一种或多种剂量的第一药剂。抗体及其抗原结合片段可以是第一或第二治疗剂。
抗体及其抗原结合片段和另外的治疗剂可以作为治疗方案的一部分施用。例如，如果第一治疗剂可以每四天施用于受试者，则第二治疗剂可以在第一天、第二天、第三天或第四天或其组合施用。第一治疗剂或第二治疗剂可以在整个治疗方案中重复施用。
示例性的另外的治疗剂包括但不限于细胞因子(例如，IL-2、IL-12)、化疗剂、放射性核素、其他免疫治疗剂、酶、抗生素、抗病毒剂(尤其是单独的蛋白酶抑制剂或与核苷联合用于治疗HIV或乙型或丙型肝炎的蛋白酶抑制剂)、抗寄生虫剂、生长因子、生长抑制剂、激素、激素拮抗剂、抗体及其生物活性片段(包括人源化、单链和嵌合抗体)、抗原和疫苗制剂(包括佐剂)、肽药物、抗炎剂、结合至Toll样受体(包括但不限于CpG寡核苷酸)以激活先天免疫系统的配体、动员并优化适应性免疫系统的分子(例如，双特异性T细胞接合物)、激活或上调细胞毒性T淋巴细胞、自然杀伤细胞和辅助T细胞的作用的其他分子，以及使阻抑性或调节性T细胞失活或下调的其他分子。
可以基于待治疗的病状、病症或疾病来选择另外的治疗剂。例如，本文公开的抗体或抗原结合片段可以与一种或多种另外的药剂共同施用，所述药剂起到增强或促进免疫应答或者降低或抑制免疫应答的作用。除了本文公开的抗体或抗原结合片段之外的另外的治疗剂的选择是受益于本公开的本领域普通技术人员的日常事务。
适用于与本文所述的抗PD-1激动剂抗体或抗原结合片段联合的另外的治疗剂包括细胞疗法。合适的细胞疗法可以包括例如树突细胞、B细胞、T细胞(例如，αβT细胞、CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、γδT细胞等)、巨噬细胞、NK细胞、NKT细胞以及它们的组合。合适的细胞疗法包括但不限于干细胞疗法、T细胞疗法(例如，肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL))或工程化的细胞疗法(例如，嵌合抗原受体(CAR)疗法、工程化的TCR疗法)。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和/或抗原结合片段与细胞疗法的组合可用于治疗患有癌症的受试者。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段以及细胞疗法。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和/或抗原结合片段与T细胞疗法的组合可用于治疗患有癌症的受试者。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段以及T细胞疗法。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和/或抗原结合片段与肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的组合可用于治疗患有癌症的受试者。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和/或抗原结合片段与工程化的细胞疗法(例如，工程化的TCR疗法、嵌合抗原受体(CAR)疗法或它们的组合)的组合可用于治疗患有癌症的受试者。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段以及工程化的细胞疗法(例如，工程化的TCR疗法、嵌合抗原受体(CAR)疗法或它们的组合)。
合适的工程化的细胞疗法的一个实例是嵌合抗原受体疗法。嵌合抗原受体疗法可以是CAR-T细胞(例如，阿基仑赛注射液(axicabtagene ciloleucel)、布瑞基奥仑赛(brexucabtagene autoleucel)、西达基奥仑赛(ciltacabtagene autoleucel)、艾基维仑赛(idecabtagene vicleucel)、利基迈仑赛(lisocabtagene maraleucel)、替沙仑赛(tisagenlecleucel))、CAR-NK细胞、CAR-巨噬细胞以及它们的组合。在一些方面，本公开涉及将激动剂抗PD-1抗体与CAR-T细胞一起施用于有需要的受试者。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和抗原结合片段与CAR-T细胞的组合可用于治疗有需要的受试者的癌症。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的激动剂抗PD-1抗体和抗原结合片段与CAR-T细胞的组合。
合适的工程化的细胞疗法的另一个实例是工程化的T细胞受体疗法。工程化的T细胞受体疗法可以包含工程化TCR、TCR亚基、TCR片段以及它们的组合。合适的工程化的T细胞受体疗法包括但不限于工程化的TCR T细胞(TCR-T细胞)、工程化的TCR自然杀伤细胞(TCR-NK)、工程化的TCR巨噬细胞(TCR-巨噬细胞)以及它们的组合。例如，激动剂抗PD-1抗体或其抗原结合片段可以与表达工程化的TCR(例如，用其进行转导)的CD8+T细胞组合。作为另一个实例，激动剂抗PD-1抗体或其抗原结合片段可以与表达工程化的TCR(例如，用其进行转导)的CD4+T细胞组合。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和抗原结合片段与工程化的TCR T细胞(TCR-T细胞)的组合可用于治疗有需要的受试者的癌症。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的激动剂抗PD-1抗体或抗原结合片段以及工程化的TCR T细胞(TCR-T细胞)。
当如本文所公开的激动剂抗PD-1抗体或抗原结合片段与细胞疗法组合时，可以将两种疗法基本上同时(例如，同时)施用于有需要的受试者，或者可以在PD-1抗体或其抗原结合片段之前或之后施用细胞疗法。虽然每种治疗剂的施用时间可以不同，但通常它们的施用使得它们各自在受试者中的药理活性重叠。
工程化的TCR或嵌合抗原受体可以被设计成结合至任何抗原。例如，TCR或嵌合抗原受体可以特异性结合至以下抗原中的一者：CD19、CD123、CD22、CD30、CD171、CS-1、CLL-1(CLECL1)、CD33、EGFRvIII、GD2、GD3、BCMA、Tn Ag、PSMA、ROR1、FLT3、TAG72、CD38、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL-13Ra2、间皮素、IL-11Ra、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、CD24、PDGFR-β、SSEA-4、CD20、叶酸受体α、ERBB2(Her2/neu)、MUC1、EGFR、NCAM、前列腺酶、PAP、ELF2M、Ephrin B2、FAP、IGF-I受体、CAIX、LMP2、gp100、bcr-abl、酪氨酸酶、EphA2、岩藻糖基GM1、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、邻乙酰基-GD2、叶酸受体β、TEM1/CD248、TEM7R、CLDN6、TSHR、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD179a、ALK、聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY-BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-1a、MAGE-A1、MAGE A1、ETV6-AML、精子蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、prostein、存活素和端粒酶、PCTA-1/半乳糖凝集素8、MelanA/MART1、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)、NA17、PAX3、雄激素受体、细胞周期蛋白Bl、MYCN、RhoC、TRP-2、CYP1B1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、豆荚蛋白、HPV E6、E7、肠道羧酸酯酶、mut hsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、纤连蛋白EDB(EDB-FN)、5T4癌胚抗原和IGLL1。
适用于与抗PD-1激动剂抗体组合的另外的治疗剂包括免疫调节剂，其靶向并改变患者的免疫应答，例如提供针对肿瘤的增强的免疫效应子应答。合适的免疫调节剂的实例包括免疫刺激性分子，诸如细胞因子(例如，IL-2、IL-12等)、佐剂、T细胞接合物和免疫刺激性抗体(例如，抗CD3)以及阻断抑制性免疫途径的药剂，诸如免疫检查点抑制剂(例如，结合免疫检查点蛋白的抗体)。免疫检查点抑制剂包括结合至免疫检查点蛋白的抗体和抗原结合片段，诸如PD-L1(B7-H1、CD274)和PD-L2(B7-DC、CD273)、结合B7-1(CD80)和B7-2(CD86)的CTLA-4(CD152)、结合半乳糖凝集素3、LSECtin和FGL1的LAG 3(CD223)；结合配体Ceacam1和半乳糖凝集素9的TIM3(HAVCR2)；结合CD112和CD155的TIGIT(VSTM3、WUCAM)；结合HVEM(TNFRSF14)的BTLA(CD272)；结合HVEM的B7-H3(CD276)、B7-H4(VTCN1)、VISTA(B7-H5)、KIR、CD44(2B4)、CD160(BY55)；结合CD252(OX-40L)的CD134(TNRFSR4、OX40)等。许多结合免疫检查点蛋白并抑制其免疫阻抑活性的治疗剂如抗体已被开发为抗肿瘤剂。几种此类药剂现在可商业上用于癌症治疗，包括抗PD1抗体帕博利珠单抗、多塔利单抗(dostarlimab)、西米普利单抗(cemiplimab-rwlc)、纳武利尤单抗(nivolumab)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)、替雷利珠单抗(tislelizumab)、特瑞普利单抗(toripalimab)和信迪利单抗(sintilimab)；抗PD-L1抗体阿维单抗(avelumab)、度伐利尤单抗(durvalumab)和阿替利珠单抗(atezolizumab)；抗CTLA-4抗体伊匹单抗(ipilimumab)；以及抗LAG-3抗体瑞拉利单抗(relatlimab)。在一些方面，本公开涉及激动剂抗PD-1抗体与抗CTLA4抗体(例如，伊匹单抗)的组合。在一些方面，本公开涉及激动剂抗PD-1抗体与抗LAG-3抗体(例如，瑞拉利单抗)的组合。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和/或抗原结合片段与免疫调节剂的组合可用于治疗患有癌症的受试者。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段以及免疫调节剂。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和/或抗原结合片段与抗CTLA4抗体或其抗原结合片段的组合可用于治疗患有癌症的受试者。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段以及抗CTLA4抗体或其抗原结合片段。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和/或抗原结合片段与抗LAG-3抗体或其抗原结合片段的组合可用于治疗患有癌症的受试者。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段以及抗LAG-3抗体或其抗原结合片段。
在优选的实施方案中，激动剂抗PD1抗体或抗原结合片段与不结合至PD-L1、PD-L2和/或PD-1的检查点抑制剂一起施用。例如，将激动剂抗PD1抗体或抗原结合片段与结合以下中的任一者的抗体一起施用：结合B7-1(CD80)和B7-2(CD86)的CTLA-4(CD152)、结合半乳凝素3、LSECtin和FGL1的LAG 3(CD223)；结合配体Ceacam1和半乳凝素9的TIM3(HAVCR2)；结合CD112和CD155的TIGIT(VSTM3、WUCAM)；结合HVEM(TNFRSF14)的BTLA(CD272)、结合HVEM的B7-H3(CD276)、B7-H4(VTCN1)、VISTA(B7-H5)、KIR、CD44(2B4)、CD160(BY55)；结合CD252(OX-40L)的CD134(TNRFSR4、OX40)。在更具体的实例中，检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体如伊匹单抗和/或抗LAG-3抗体如瑞拉利单抗。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和/或抗原结合片段与检查点抑制剂(例如，不抑制PD-1与PD-L1或PD-L2相互作用的检查点抑制剂)的组合可用于治疗患有癌症的受试者。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段和检查点抑制剂(例如，不抑制PD-1与PD-L1或PD-L2相互作用的检查点抑制剂)。
在一个具体的实施方案中，抗体及其抗原结合片段可以与PD-1拮抗剂共同施用，所述拮抗剂是指抑制PD-L1对PD-1的阻抑的分子。在一些实施方案中，PD-1拮抗剂直接结合至PD-1受体而不触发抑制性信号转导，并且还结合至PD-1受体的配体以减少或抑制配体触发通过PD-1受体的信号转导。通过减少结合至PD-1受体并触发抑制性信号转导的配体的数量和/或量，更少的细胞被PD-1信号转导传递的负信号削弱，并且可以实现更强的免疫应答。
据信，PD-1信号传导是通过结合至PD-1配体(诸如87-H1或Er-DC)来驱动的，该配体与主要组织相容性复合体(MHC)呈递的肽抗原非常接近(参见例如Freeman,Proc.Nail.Acad.Sci；KA,105:10275-10276(2008))。因此，阻止PD-1和TCR在细胞膜上共连接的蛋白质、抗体或小分子也是有用的PD-1拮抗剂。
在一些实施方案中，PD-1受体拮抗剂是小分子拮抗剂或抗体，其通过结合至PD-1的配体或PD-1本身来减少或干扰PD-1受体信号转导，尤其是在PD-1与TCR的共连接不遵循这种结合的情况下，从而不触发通过PD-1受体的抑制性信号转导。本发明的方法考虑的其他PD-1拮抗剂包括结合至PD-1或PD-1的配体的抗体，以及其他抗体。
合适的抗PD-1抗体包括但不限于以下美国专利中描述的那些：第7332582号、第7488802号、第7521051号、第7524498号、第7563869号、第7981416号、第8088905号、第8287856号、第8580247号、第8728474号、第8779105号、第9067999号、第9073994号、第9084776号、第9205148号、第9358289号、第9387247号、第9492539号、第9492540号，所有美国专利都以全文引用的方式并入。也参见Berger等人,Clin,Cancer Res.,14:30443051(2008)。
示例性的抗PD-L1抗体包括但不限于在美国专利第8383796号、第9102725号、第9273135号、第9393301号和第9580507号中描述的那些，所有这些专利以全文引用的方式具体并入本文中。
示例性的抗PD-L2抗体包括但不限于美国专利第7,411,051号、第7,052,694号、第7,390,888号、第8188238号和第9255147号中描述的那些，所有这些专利以全文引用的方式具体并入本文中。
用于与本文所述的激动剂抗PD-1抗体或抗原结合片段组合的合适的免疫调节剂的其他实例包括T细胞接合疗法(例如，T细胞接合物)。T细胞接合物是将T细胞细胞毒性活性导向靶肿瘤的药剂。合适的T细胞接合物包括但不限于双特异性T细胞接合物(BiTE)、双功能检查点抑制性T细胞接合物(CiTE)、同步多重相互作用T细胞接合物(SMITE)、三特异性杀伤细胞接合物(TriKE)、表达BiTE的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(CART.BiTE细胞)或它们的组合。本公开涉及包含激动剂抗PD-1抗体和双特异性T细胞接合物的组合物及其使用方法。在一些优选的实施方案中，本文公开的激动剂抗PD-1抗体和/或抗原结合片段与T细胞接合物(例如，双特异性T细胞接合物(BiTE)、双功能检查点抑制性T细胞接合物(CiTE)、同步多重相互作用T细胞接合物(SMITE)、三特异性杀伤细胞接合物(TriKE)、表达BiTE的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(CART.BiTE细胞)以及它们的组合)的组合可用于治疗患有癌症的受试者。因此，本公开涉及一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如本文所公开的PD-1激动剂抗体或抗原结合片段和T细胞接合物(例如，双特异性T细胞接合物(BiTE)、双功能检查点抑制性T细胞接合物(CiTE)、同步多重相互作用T细胞接合物(SMITE)、三特异性杀伤细胞接合物(TriKE)、表达BiTE的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(CART.BiTE细胞)以及它们的组合)。
可以在实施方案中使用的另外的治疗剂包括在美国专利第11,021,540号中公开的那些。
III.等同物
对于本领域技术人员显而易见的是，在不脱离本公开或实施方案的范围的情况下，本文所述的本发明的方法的其他合适的修改和改编是显而易见的，并且可以使用合适的等同物来进行。现在已经详细描述了某些组合物和方法，通过参考下面的实施例将会更清楚地理解这些组合物和方法，这些实施例仅仅是为了说明而不是为了限制。
IV实施例
实施例1：4G9-1至4G9-10的hPD-1-HIS结合
对表1-2和5中列出的抗体4G9-1至4G9-10进行与人PD-1(hPd-1)的HIS结合测定。该测定包括以下程序：
在4℃下，将100μl的10μg/ml PD1-蛋白(Acro Biosystems目录号HM5221)包被到Maxisorpplate上过夜。第二天早上，将孔用PBST冲洗1X，然后用200μl/孔Superblock/4％BSA封闭2小时。将孔用1X PBST洗涤3X。然后，添加100μl含1-100μg/ml 4G9-12的Superblock/4％ BSA，在室温或4℃下保持2小时过夜。将孔用1X PBST洗涤3X。将100μl生物素化的抗人IgG(ThermoFisher目录号A18827)添加到孔中，并根据制造商的建议在室温下结合1小时。在一些实验中，直接使用抗人IgG-HRP(仍检测到信号)。
将孔用1X PBST洗涤3X。将100μl的1:5000SA HRP添加到孔中并在室温下结合1小时。将孔用1X PBST洗涤3X，然后用1X PBS洗涤3X。将100μl TMB添加到孔中，并用2N硫酸终止显影。确定450nm处的光密度(OD 450)。
结果列于表7中。
表7：4G9系列抗体的hPD-1-HIS结合
抗体 hPD-1-HIS结合(OD 450)
4G9-1 0.874
4G9-2 0.453
4G9-3 0.451
4G9-4 0.386
4G9-5 0.383
4G9-6 0.377
4G9-7 0.361
4G9-8 0.346
4G9-9 0.31
4G9-10 0.287
实施例2：5C2-1至5C2-10的hPD-1-HIS结合
对表3-4和6中列出的抗体5C2-1至5C2-10进行与人PD-1(hPd-1)的HIS结合测定。根据实施例1中给出的方案确定450nm处的光密度(OD 450)。
结果列于表8中。
表8：5C2系列抗体的hPD-1-HIS结合
实施例3：通过4G9-2和4G9-12进行的人T细胞激活
根据以下体外程序测定抗体4G9-2和4G9-12的PD-1激动剂活性。总之，上清液中的IFNγ水平归因于T细胞激活，而T细胞激活归因于抗体的PD-1激动剂活性。使用抗人免疫球蛋白G1(hIgG1)的抗体作为对照。
使用的材料是人CD4+/CD45+/CD25-初始T细胞(BioVit,Hicksville,NY)；人IFNγELISA试剂盒(Invitrogen，目录号KHC4021)；LymphoOne T细胞扩增无异种培养基(Takara，目录号WK552S)；经认证的性能增强的胎牛血清(Gibco，目录号16000-044)；Dynabeads人T-激活因子CD3/CD28(Gibco，目录号11132D)、白介素-2(IL-2；PeproTech，目录号200-02)；圆底无菌96孔板；以及用于ELISA的板读取器。
遵循以下程序，直到IFNγ浓度的ELISA测定的所有程序都在无菌条件下进行。
将人初始CD4 T细胞解冻。该程序进行两次，每次都使用来自不同供体的T细胞。用PBS洗涤细胞两次，并添加LymphoOne细胞培养基。对细胞进行计数，并将其在LymphoOne培养基中的浓度调节至150万/mL。根据制造商的建议添加IL-2和抗CD3/抗CD28包被的Dynabeads。将细胞(每孔100μL细胞)添加到圆底96孔板中，然后在5％CO2、37℃下温育48小时。添加最终浓度为10-50μg/mL的抗体。将等体积(20μL)的培养基添加到未处理的(0μg/mL抗体)孔中，并使用相同量和浓度的对照抗体。然后将细胞在5％ CO2、37℃下温育24小时，之后离心并收集上清液。
根据制造商的方案，对收集的上清液进行ELISA以检测IFNγ，其中上清液的预先稀释度为1:1至1:50。通过ELISA确定的IFNγ浓度示于图1A和1B中。
图1A和图1B示出，在不存在抗体的情况下或在任何测试浓度的对照抗hIgG1抗体下，T细胞产生的IFNγ对于每个供体基本上是相同的。将细胞与浓度为10-50μg/mL的4G9-2或4G9-12一起温育，导致供体1的IFNγ产量增加约75-125％，并且供体2的IFNγ产量增加约25-65％。供体2的IFNγ产量的增加显示出对两种抗体的剂量依赖性应答。结果显示，4G9-2和4G9-12起PD-1激动剂的作用，与未用激动剂抗PD-1抗体处理的细胞中的T细胞激活相比，导致T细胞激活增加(图1A和图1B中的虚线)。
实施例4：通过亲和力成熟的抗体4G9-1至4G9-10进行的人T细胞激活
基本上如实施例3中所述，测定亲和力成熟的抗体4G9-1至4G9-10的PD-1激动剂活性。简而言之，将人CD4+T细胞从供体中分离并用抗CD3/抗CD28包被的珠粒和IL-2刺激24小时。24小时后，用选自4G9-1至4G9-10的抗体、未亲和力成熟的原始4G9 CDR的对照抗体(4G9HC4-LC1)处理细胞，或者不处理细胞。再培养48小时后，收集上清液并通过ELISA检测IFNγ的产生。对于每个处理，用复孔(duplicate well)进行该实验。一个代表性实验的数据示于图2中。与未亲和力成熟的4G9对照抗体(4G9 HC4-LC1，参见图2，上部虚线)和未用抗体处理的细胞(“未处理”，下部虚线)相比，4G9-2抗体的IFNγ产量显著(*p<0.05)更高。与实验中测试的所有其他抗PD1激动剂抗体相比，用4G9-2抗体处理导致最高的IFNγ产量。
实施例5：对4G9-12抗体对人T细胞中T记忆细胞诱导和T细胞耗竭的评估
基本上如实施例3中所述，用包被有抗CD3和抗CD28抗体的珠粒(DYNABEADSTMGIBCO(THERMO FISHER SCIENTIFIC INC.)和IL-2(100U/mL-R&D SYSTEMS,INC.)刺激人CD4+T细胞(BIOIVT LLC)。刺激72小时后，用4G9-12抗PD-1激动剂抗体(25μg/mL)处理细胞或不处理细胞(对照)。抗PD-1激动剂抗体处理48小时后，收集细胞，洗涤，并用荧光团标记的抗体染色。通过流式细胞术分析染色的细胞。图3A示出了实验的示意图。将中枢记忆T细胞(Tcm)定义为CD45RO高/CD62L高/CD45RA低。将耗竭的T细胞(例如，末端效应T细胞(Tte))定义为CD45RO低/CD62L低/CD45RA高。相对于总CD4+T细胞，用4G9-12进行处理导致Tcm群体的显著增加(*p<0.05)和Tte群体的显著减少(*p<0.05)(分别参见图3B和图3C)。
实施例6：人T细胞中4G9-12和阻断抗PD-1抗体的比较
该研究的目的是在用不同浓度的4G9-12和阻断抗PD-1抗体处理后，测试原代人CD4+T细胞的激活。在来自健康供体的纯化的人CD4+T细胞中评定4G9-12介导的T细胞刺激。基本上如实施例3中所述，用人抗CD3/抗CD28 Dynabeads和IL-2在37℃下预刺激T细胞24小时。在引发步骤后，将细胞暴露于不同浓度的4G9-12、4G9-2、同种型对照(Iso Ctrl)或不是PD-1激动剂的阻断抗PD-1(PROMEGA Co.，克隆J1201(“阻断-1,”，图4A、图4B和图4C)或帕博利珠单抗(“阻断-2”，图4C)抗体)48小时，并使用ELISA确定IFN-γ的水平(参见图4A-图4C)。虽然与在未处理的细胞上清液中观察到的水平相比，阻断抗PD-1抗体不会增加来自纯化的CD4 T细胞的上清液中的IFN-γ水平(图4A-图4C中的虚线)，但是4G9-12和4G9-2处理导致IFN-γ的类似的浓度依赖性增加。结果显示，通过IFN-γ的产生评定的T细胞刺激由本文公开的激动剂抗PD-1抗体诱导，而不是由结合PD-1并抑制与PD-L1相互作用的抗体(诸如J1201和帕博利珠单抗)诱导。
实施例7：对在PD-L1或PD-1-阻断抗体的存在下激动剂抗体活性的功能评估
基本上如实施例3中所述，但在不存在或存在Fc融合蛋白形式的板结合的PD-L1(PD-L1-IgG)的情况下，测试4G9-2抗体激活用CD3/CD28包被的Dynabeads和IL-2预刺激(24小时)的人CD4 T细胞的能力。如图5所示，在暴露于25μg/mL的4G9-2 72小时后，与未处理的T细胞或暴露于阻断抗PD-1抗体(PROMEGA Co.，克隆J1201“阻断Ab”，25μg/mL)的T细胞相比，上清液中的IFN-γ水平增加>3倍(使用THERMO FISHER SCIENTIFIC Inc.的ELISA测量)，这证实了4G9-2激活T细胞。虽然用板结合的PD-L1(PD-L1-IgG)预处理细胞抑制了IFN-γ产生，但在板结合的PD-L1(PD-L1-IgG)的存在下，添加4G9-2处理导致T细胞激活与单独的4G9-2相当，这表明激动剂抗体(如4G9-2)即使在天然配体(PD-L1)的存在下也可以激活T细胞。
实施例8：对潜在的抗PD-1激动剂抗体与PD-L1的竞争的评估
为了评估抗PD-1激动剂抗体是否与PD-L1竞争结合至PD-1，或者是否可以与PD-L1同时结合至PD-1，使用流式细胞术评估5μg/mL的APC标记的4G9-12与Raji PD-1+细胞中V450标记的人PD-L1-IgG(1、2或5μg/mL)的潜在竞争性结合。PD-L1单独结合至PD-1，在PD-L1浓度增加时观察到更高的结合，如图6A所示(PDL1荧光)。如图6B(4G9-12荧光)和图6C(PD-L1荧光)所示，4G9-12和PD-L1-IgG都能够同时结合靶标，并且PD-L1-IgG的浓度增加不影响4G9-12的结合。这些数据也表明PD-L1-IgG在4G9-12的存在下保持相同的结合水平。这些数据证实，PD-1激动剂抗体(如4G9-12)不与PD-L1竞争结合至PD-1，因此它们的激动剂活性不归因于抑制PD-L1的结合。
实施例9：对同基因结肠直肠癌小鼠肿瘤模型中腹膜内施用4G9-12抗体的评估
使用BALB/c小鼠中的同基因结肠直肠癌(CRC)肿瘤模型在体内评估4G9-12的抗肿瘤活性。在第0天，向小鼠皮下(SC)注射CT26肿瘤细胞(1x105个细胞/小鼠)，并在肿瘤植入后10、13、16和20天(给药后0、3、6和10天)经由腹膜内(IP)注射给药4G9-12(0.5或1mg/kg)或可商购获得的不是PD-1激动剂的基准PD-1阻断抗体(克隆RMP1-14(BioXCell，1mg/kg))。一组未给药抗体的肿瘤移植小鼠被用作阴性对照组。监测肿瘤体积。与未处理的对照组和1mg/kg PD-1阻断抗体组相比，两种剂量的4G9-12均产生显著的抗肿瘤活性。0.5和1mg/kg剂量的4G9-12之间没有显著差异，这表明在这些剂量下，抗肿瘤活性达到平台期应答(参见图7)。每只小鼠的单个肿瘤体积示于图8A-图8D中。该研究证明了4G9-12在结肠直肠癌小鼠模型中的抗肿瘤活性，并且与PD-1阻断抗体相比，激动剂抗体具有更好的抗肿瘤活性。
实施例10：对同基因结肠直肠癌小鼠肿瘤模型中静脉内施用4G9-12抗体的评估
使用BALB/c小鼠中的同基因结肠直肠癌(CRC)肿瘤模型在体内评估4G9-12的抗肿瘤活性。在第0天，向小鼠皮下注射CT26肿瘤细胞(1x105个细胞/小鼠)，并在肿瘤植入后14、18、22和25天(给药后第0、4、8和11天)经由静脉内(IV)注射给药4G9-12(0.01、0.05、0.1或0.25mg/kg)或可商购获得的基准PD-1阻断抗体(克隆RMP1-14，BioXCell；1mg/kg，非激动剂抗体)。一组未给药抗体的肿瘤移植小鼠被用作阴性对照组。监测所有小鼠的肿瘤体积。与未处理的对照相比，所有剂量的4G9-12均导致统计学上显著的肿瘤生长抑制，其中剂量≤0.1mg/kg的4G9-12彼此之间以及对1mg/kg抗PD-1阻断抗体具有相似的应答(参见图9)。每只小鼠的单个肿瘤体积示于图10A-图10F中。与0.25mg/kg 4G9-12相比，基准PD-1阻断抗体(高4倍浓度)具有较低的活性。该研究证明了在CRC的小鼠模型中IV施用的激动剂抗PD-1抗体如4G9-12的抗肿瘤活性。这些数据显示，与PD-1阻断(例如，非激动剂)抗体相比，激动剂抗PD-1抗体4G9-12具有增强的肿瘤生长抑制。
实施例11：对CT 26肿瘤模型中抗PD-1激动剂抗体对T细胞激活的离体评估
使用BALB/c小鼠中的CT26肿瘤模型在体内评估4G9-12的抗肿瘤活性。将CT26细胞(1x105)植入BALB/c小鼠的右侧腹。肿瘤植入后十天，当肿瘤直径达到4-6mm时，用单剂量的4G9-12(1mg/kg)、PD-1阻断抗体(RMP1-14克隆，1mg/kg，非激动剂抗体)治疗小鼠，或者不进行治疗。治疗后三天，对小鼠实施安乐死，并分离肿瘤。处理肿瘤并使用流式细胞术评定肿瘤中CD4+和CD8+T细胞的激活状态。CD40L用作CD4+T细胞的激活标记物，并且CD25用作CD8+T细胞的激活标记物。这些数据显示，激动剂抗PD-1抗体(诸如4G9-12)而非阻断抗PD-1抗体诱导肿瘤浸润性CD4+和CD8+T细胞的激活。与阻断抗PD-1抗体相反，4G9-12在单剂量处理后诱导肿瘤浸润性CD4+和CD8+T细胞的激活(参见图11A和图11B)。
实施例12：细胞信号传导和T细胞激活的评定
为了确定当PD-1结合激动剂抗体(诸如4G9-12、PD-L1配体和抗PD-1阻断抗体)时，经由PD-1转导的细胞内信号是否不同，基本上如实施例3中所述，用抗CD3/抗CD28Dynabeads和IL-2刺激人CD4+T细胞。刺激后，用25μg/ml的4G9-12、PD-L1-IgG(R&DSYSTEMS,INC.)或抗人PD-1(克隆J1201，PROMEGA Co.，非激动剂抗体)处理细胞30分钟。处理30分钟后，洗涤并裂解细胞，并且将蛋白A用于免疫沉淀，随后进行ITK、SHP2和PD-1的蛋白质印迹分析(参见图12A和图12B)。确定ITK/SHP2的比率(归一化为PD-1的水平)，并显示与抗PD-1阻断抗体相比，4G9-12导致ITK/SHP2比率增加3倍。如所预期的，PD-L1-IgG处理导致ITK/SHP2比率降低(参见图12C)。特别值得注意的是，与对照抗人PD-1阻断抗体相比，4G9-12处理增加了ITK/SHP2比率，表明激动剂抗体(如4G9-12)通过PD-1诱导信号传导，这与PD-L1诱导的信号传导不同。
实施例13：通过人CD4+T细胞中的阻断抗体和激动剂抗PD-1抗体的细胞信号传导的流式细胞术分析
由于ITK是激动剂PD-1抗体作用机制中的重要分子，当与阻断抗PD-1抗体(例如，非激动剂抗体)帕博利珠单抗(“Pembro”)和纳武利尤单抗(“Nivo”)比较时，使用流式细胞术来评估4G9-12对ITK磷酸化的影响。基本上如实施例3中所述，用抗CD3/抗CD28Dynabeads和IL-2刺激人CD4+T细胞24小时，然后用25μg/mL的4G9-12、PD-L1-IgG(R&DSYSTEMS,INC.)、帕博利珠单抗、纳武利尤单抗处理，或者不进行处理(“Stim”)24小时。在处理结束时，将细胞洗涤、固定、透化，并通过用Live/Dead染色剂和PE标记的抗磷酸-ITK抗体染色为流式细胞术做准备。PD-L1-IgG处理降低了ITK的磷酸化。与阻断PD-1抗体帕博利珠单抗和纳武利尤单抗相反，与未处理的(“Stim”)细胞相比，4G9-12显著增加了磷酸-ITK的水平(参见图13)。这些结果为用激动剂抗体(诸如4G9-12)处理如何导致T细胞激活提供了基础，因为ITK是T细胞受体信号传导途径中的激活分子。

Claims (39)

1.一种对程序性细胞死亡受体蛋白1(PD-1)具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区和重链可变区，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
4G9-12的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-1的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-3的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-4的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-5的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-6的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-7的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-8的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-9的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-10的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
5C2-1的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
5C2-2的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
5C2-3的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
5C2-4的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
5C2-5的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
5C2-6的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
5C2-7的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
5C2-8的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
5C2-9的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；或者
5C2-10的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
4G9-12的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-4的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-8的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；
4G9-9的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3；或者
5C2-8的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。
3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
4G9-12的CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3。
4.一种对程序性细胞死亡受体蛋白1(PD-1)具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区和重链可变区，其中
a)所述轻链可变区包含含有QX8X9X10X11X12的CDR L1、含有X13X14S的CDR L2和含有X15QX16X17X18X19PX20X21的CDR L3，并且所述重链可变区包含含有GYTFTTYG(SEQ ID NO:394)的CDR H1、含有INTYSGVP(SEQ ID NO:395)的CDR H2和含有ARX1X2X3X4X5 X6X7的CDR H3，其中X1选自由G和V组成的组；X2选自由G、S、L、V、I和E组成的组；X3选自由R、G、P、W、S、H和K组成的组；X4选自由G、E、S、V、W和K组成的组；X5选自由I、F、S、G、D和V组成的组；X6选自由A、G、Y和S组成的组；X7选自由Y、H和D组成的组；X8选自由G、S和D组成的组；X9选自由I和L组成的组；X10选自由S、V、G和R组成的组；X11选自由N、Y、T、S和R组成的组；X12选自由S、Y、D和W组成的组；X13选自由A、K、Y和D组成的组；X14选自由A和V组成的组；X15选自由Q、M和L组成的组；X16选自由S、G和D组成的组；X17选自由Y、T、N和S组成的组；X18选自由S、H和D组成的组；X19选自由T、W和F组成的组；X20选自由Y、P、R和W组成的组；并且X21选自由T和F组成的组；或者
b)所述轻链可变区包含含有QX42X43X44X45X46的CDR L1、含有X47AS的CDR L2和含有X48X49X50X51X52X53X54的CDR L3，并且所述重链可变区包含含有GX22TFX23X24YX25(SEQ ID NO:163)的CDR H1、含有IX26X27X28X29X30X31T的CDR H2和含有AX32X33X34X35X36X37X38X39FX40X41的CDRH3，其中X22选自由Y和Q组成的组；X23选自由N、T和G组成的组；X24选自由S、I和N组成的组；X25选自由W和L组成的组；X26选自由H、L、R和P组成的组；X27选自由P和L组成的组；X28选自由R、S、I和N组成的组；X29选自由G、D、N和Y组成的组；X30选自由I、S、G和R组成的组；X31选自由H、D和Y组成的组；X32选自由P和S组成的组；X33选自由S、R、N和Y组成的组；X34选自由S、D、G、V和F组成的组；X35选自由S、N、G、I、D和R组成的组；X36选自由Y、N、C、L、S和H组成的组；X37选自由A、G、T和E组成的组；X38选自由W、C、S、R、D和G组成的组；X39选自由A、S、G和D组成的组；X40选自由A、S和L组成的组；X41选自由H、Y和S组成的组；X42选自由D、S和G组成的组；X43选自由V和I组成的组；X44选自由S和G组成的组；X45选自由T和S组成的组；X46选自由A、S、D和W组成的组；X47选自由W、G和D组成的组；X48选自由Q和H组成的组；X49选自由Q、K和H组成的组；X50选自由H、Y、F、R、D和G组成的组；X51选自由Y、N、Y、D、S和G组成的组；X52选自由R、S、V、T和I组成的组；X53选自由S、A、F、T、Y和W组成的组；并且X54选自由P、L、S和T组成的组。
5.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
4G9-12的轻链可变区和重链可变区；
4G9-1的轻链可变区和重链可变区；
4G9-2的轻链可变区和重链可变区；
4G9-3的轻链可变区和重链可变区；
4G9-4的轻链可变区和重链可变区；
4G9-5的轻链可变区和重链可变区；
4G9-6的轻链可变区和重链可变区；
4G9-7的轻链可变区和重链可变区；
4G9-8的轻链可变区和重链可变区；
4G9-9的轻链可变区和重链可变区；
4G9-10的轻链可变区和重链可变区；
4G9-11的轻链可变区和重链可变区；
4G9-13的轻链可变区和重链可变区；
4G9-14的轻链可变区和重链可变区；
4G9-15的轻链可变区和重链可变区；
4G9-16的轻链可变区和重链可变区；
4G9-17的轻链可变区和重链可变区；
4G9-18的轻链可变区和重链可变区；
4G9-19的轻链可变区和重链可变区；
4G9-20的轻链可变区和重链可变区；
5C2-1的轻链可变区和重链可变区；
5C2-2的轻链可变区和重链可变区；
5C2-3的轻链可变区和重链可变区；
5C2-4的轻链可变区和重链可变区；
5C2-5的轻链可变区和重链可变区；
5C2-6的轻链可变区和重链可变区；
5C2-7的轻链可变区和重链可变区；
5C2-8的轻链可变区和重链可变区；
5C2-9的轻链可变区和重链可变区；或者
5C2-10的轻链可变区和重链可变区。
6.如权利要求1或4所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
4G9-12的轻链可变区和重链可变区；
4G9-2的轻链可变区和重链可变区；
4G9-4的轻链可变区和重链可变区；
4G9-8的轻链可变区和重链可变区；
4G9-9的轻链可变区和重链可变区；
4G9-14的轻链可变区和重链可变区；
4G9-18的轻链可变区和重链可变区；
4G9-19的轻链可变区和重链可变区；或者
5C2-8的轻链可变区和重链可变区。
7.如权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
4G9-12的轻链可变区和重链可变区；或者
4G9-2的轻链可变区和重链可变区。
8.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其还包含轻链恒定区和重链恒定区。
9.如权利要求8所述的抗体或抗原结合片段，其中所述重链恒定区是IgG恒定区。
10.如权利要求1至9中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是PD-1激动剂。
11.如权利要求1至10中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段不与PD-L1竞争结合至PD-1。
12.如权利要求1至11中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段在结合至所述细胞上的PD-1时提高细胞中的pITK水平、ITK/SHP2比率或pITK水平和ITK/SHP2比率两者。
13.如权利要求1至12中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其诱导中枢记忆T细胞(Tcm)。
14.如权利要求1至13中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其抑制T细胞耗竭。
15.一种药物组合物，其包含如权利要求1至14中任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载剂。
16.一种用于治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1至14中任一项所述的抗体或抗原结合片段，或如权利要求15所述的药物组合物。
17.如权利要求16所述的方法，其还包括向所述受试者施用一种或多种另外的治疗剂。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是免疫调节剂。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述免疫调节剂是检查点抑制剂，前提条件是所述检查点抑制剂不抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的相互作用。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述检查点抑制剂是抗CTLA4抗体或其抗原结合片段。
21.如权利要求19所述的方法，其中所述检查点抑制剂是抗LAG-3抗体或其抗原结合片段。
22.如权利要求18所述的方法，其中所述免疫调节剂是T细胞接合物。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述T细胞接合物选自由以下组成的组：双特异性T细胞接合物(BiTE)、双功能检查点抑制性T细胞接合物(CiTE)、同步多重相互作用T细胞接合物(SMITE)、三特异性杀伤细胞接合物(TriKE)、表达BiTE的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(CART.BiTE细胞)以及它们的组合。
24.如权利要求17所述的方法，其中所述一种或多种另外的治疗剂是细胞疗法。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述细胞疗法是T细胞疗法。
26.如权利要求24所述的方法，其中所述细胞疗法是肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)。
27.如权利要求24所述的方法，其中所述细胞疗法是选自由工程化的TCR疗法、嵌合抗原受体(CAR)疗法或它们的组合组成的组的工程化的细胞疗法。
28.如权利要求24所述的方法，其中所述细胞疗法是嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)。
29.如权利要求24所述的方法，其中所述细胞疗法是工程化的TCR T细胞(TCR-T细胞)。
30.如权利要求1至14中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其用于治疗癌症。
31.如权利要求1至14中任一项所述的抗原结合片段的抗体，其用于制造用于治疗癌症的药物。
32.一种用于治疗癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用有效组合，所述有效组合包含治疗有效量的(i)如权利要求1至14中任一项所述的抗体或抗原结合片段或如权利要求15所述的药物组合物，以及(ii)降低PD-L1对PD-1的阻抑的第二抗体或其抗原结合片段。
33.一种如权利要求1至14中任一项所述的抗体或抗原结合片段与降低PD-L1对PD-1的阻抑的第二抗体或其抗原结合片段的组合，其用于治疗癌症。
34.一种如权利要求1至14中任一项所述的抗原结合片段的抗体与降低PD-L1对PD-1的阻抑的第二抗体或其抗原结合片段的组合，其用于制造用于治疗癌症的药物。
35.一种用于诱导或增强中枢记忆T细胞的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1至14中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
36.一种用于抑制T细胞耗竭的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1至14中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
37.一种分离的多核苷酸，其编码如权利要求1至14中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
38.一种宿主细胞，其包含如权利要求37所述的多核苷酸。
39.如权利要求38所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Family Cites Families (90)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US20040049014A1 (en) 1988-12-28 2004-03-11 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
DK0463151T3 (da) 1990-01-12 1996-07-01 Cell Genesys Inc Frembringelse af xenogene antistoffer
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
JP2938569B2 (ja) 1990-08-29 1999-08-23 ジェンファーム インターナショナル，インコーポレイティド 異種免疫グロブリンを作る方法及びトランスジェニックマウス
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
CA2507749C (en) 1991-12-13 2010-08-24 Xoma Corporation Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
ATE420178T1 (de) 1992-08-21 2009-01-15 Univ Bruxelles Immunoglobuline ohne leichtkette
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US6838254B1 (en) 1993-04-29 2005-01-04 Conopco, Inc. Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of camelidae
DE69637481T2 (de) 1995-04-27 2009-04-09 Amgen Fremont Inc. Aus immunisierten Xenomäusen stammende menschliche Antikörper gegen IL-8
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
CA2273194C (en) 1996-12-03 2011-02-01 Abgenix, Inc. Transgenic mammals having human ig loci including plural vh and vk regions and antibodies produced therefrom
US7411051B2 (en) 1997-03-07 2008-08-12 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to HDPPA04 polypeptide
PT970126E (pt) 1997-04-14 2001-10-30 Micromet Ag Novo metodo para a producao de receptores de antigenios anti-humanos e suas utilizacoes
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
EP1916303B1 (en) 2000-11-30 2013-02-27 Medarex, Inc. Nucleic acids encoding rearranged human immunoglobulin sequences from transgenic transchromosomal mice
EP2294917A1 (en) 2001-03-22 2011-03-16 Abbott GmbH & Co. KG Transgenic animals expressing antibodies specific for genes of interest and uses thereof
EP1970448A1 (en) 2001-05-11 2008-09-17 Kirin Pharma Kabushiki Kaisha Human artificial chromosome containting human antibody lambda light chain and non-human animal containting the human artificial chromosome capable of genetic transmission
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
EP2206517B1 (en) 2002-07-03 2023-08-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Immunopotentiating compositions comprising anti-PD-L1 antibodies
US7052694B2 (en) 2002-07-16 2006-05-30 Mayo Foundation For Medical Education And Research Dendritic cell potentiation
CA2501581A1 (en) * 2002-10-09 2004-04-22 Integrigen, Inc. Recombinant catalytic polypeptides and their uses
JP4511943B2 (ja) 2002-12-23 2010-07-28 ワイス エルエルシー Ｐｄ−１に対する抗体およびその使用
AU2004204494B2 (en) 2003-01-09 2011-09-29 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP2270051B1 (en) 2003-01-23 2019-05-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Antibody specific for human PD-1 and CD3
US20060099203A1 (en) 2004-11-05 2006-05-11 Pease Larry R B7-DC binding antibody
PL2161336T5 (pl) 2005-05-09 2017-10-31 Ono Pharmaceutical Co Ludzkie przeciwciała monoklonalne przeciwko białku Programmed Death 1 (PD-1) oraz sposoby leczenia raka z zastosowaniem samych przeciwciał anty-PD-1 lub w połączeniu z innymi środkami immunoterapeutycznymi
CN104356236B (zh) 2005-07-01 2020-07-03 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
US20070243184A1 (en) 2005-11-08 2007-10-18 Steven Fischkoff Prophylaxis and treatment of enterocolitis associated with anti-ctla-4 antibody therapy
AU2007235496B2 (en) 2006-03-31 2013-11-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies
US20100074916A1 (en) 2006-10-10 2010-03-25 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Avian influenza vaccine
EP3382022A1 (en) 2007-06-01 2018-10-03 Open Monoclonal Technology, Inc. Compositions and methods for inhibiting endogenous immunoglobulin genes and producing transgenic human idiotype antibodies
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
KR20100099193A (ko) 2007-11-21 2010-09-10 암젠 인크 Ｗｉｓｅ 결합 항체 및 에피토프
PL2350129T3 (pl) 2008-08-25 2015-12-31 Amplimmune Inc Kompozycje antagonistów PD-1 i sposoby stosowania
CA2998281C (en) 2008-09-26 2022-08-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human anti-pd-1 antobodies and uses therefor
US9445581B2 (en) 2012-03-28 2016-09-20 Kymab Limited Animal models and therapeutic molecules
CN102740887B (zh) 2009-09-30 2015-04-15 斯隆凯特林防癌纪念中心 用于治疗癌症的组合免疫疗法
HRP20180952T1 (hr) 2010-01-29 2018-07-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-dll3 antitijelo
TW201134488A (en) * 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
ES2566602T3 (es) 2010-04-09 2016-04-14 Aveo Pharmaceuticals, Inc. Anticuerpos anti-ErbB3
NZ707327A (en) 2010-08-02 2017-01-27 Regeneron Pharma Mice that make binding proteins comprising vl domains
PT2699264T (pt) 2011-04-20 2018-05-23 Medimmune Llc Anticorpos e outras moléculas que ligam b7-h1 e pd-1
CA2841745A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Rspo binding agents and uses thereof
US20130273089A1 (en) 2011-11-03 2013-10-17 Tolera Therapeutics, Inc. Antibody and methods for selective inhibition of t-cell responses
SG10201700698WA (en) 2012-05-15 2017-02-27 Bristol Myers Squibb Co Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
WO2014159764A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Amgen Inc. Chrdl-1 antigen binding proteins and methods of treatment
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
US10253109B2 (en) 2014-07-21 2019-04-09 Bloodworks Antibodies that recognize red blood cell antigens
SG10201900571YA (en) 2014-07-22 2019-02-27 Cb Therapeutics Inc Anti-pd-1 antibodies
AR101669A1 (es) * 2014-07-31 2017-01-04 Amgen Res Munich Gmbh Constructos de anticuerpos para cdh19 y cd3
SG11201700672YA (en) 2014-08-05 2017-02-27 MabQuest SA Immunological reagents binding to pd-1
US20170239351A1 (en) 2014-08-11 2017-08-24 Acerta Pharma B.V. Therapeutic Combinations of a BTK Inhibitor, a PI3K Inhibitor, a JAK-2 Inhibitor, a PD-1 Inhibitor, and/or a PD-L1 Inhibitor
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
DK3283107T3 (da) 2015-04-17 2020-08-31 Bristol Myers Squibb Co Sammensætninger omfattende en kombination af ipilimumab og nivolumab
CN105061597B (zh) 2015-06-09 2016-04-27 北京东方百泰生物科技有限公司 一种抗pd-1的单克隆抗体及其获得方法
MX2019002946A (es) * 2016-09-14 2019-09-26 Abbvie Biotherapeutics Inc Anticuerpos anti-pd-1 y sus usos.
CR20190550A (es) * 2017-06-05 2020-04-05 Janssen Biotech Inc Anticuerpos que se unen específicamente a pd-1 y métodos de uso
AU2018330180B2 (en) 2017-09-07 2025-07-17 Augusta University Research Institute, Inc. Antibodies to programmed cell death protein 1
AR114127A1 (es) * 2018-03-02 2020-07-22 Lilly Co Eli Anticuerpos agonistas contra pd-1 y usos de estos
TW202124437A (zh) * 2019-08-19 2021-07-01 美商潘迪恩營運公司 以ｐｄ－１促效劑進行之標靶免疫耐受性
EP4159235A4 (en) * 2020-05-25 2024-07-10 Foundation for Biomedical Research and Innovation at Kobe PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING PD-1 AGONIST FOR TREATING OR PREVENTING TH2-MEDIATED DISEASE
PL4157876T3 (pl) * 2020-05-26 2025-02-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Przeciwciała anty-pd-1
CN118984837A (zh) 2022-01-28 2024-11-19 乔治穆内公司 作为pd-1激动剂的程序性细胞死亡蛋白1的抗体

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