CN1181836C - 一种治疗糖尿病的中药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药新药研究开发领域，涉及一种运用现代科技对我国传统中药黄连进行有效成分提取及精制的方法，本发明还提供了该中药的制剂剂型，尤其是口服胶囊剂。提取的有效成分(黄连总生物碱，且其中的主要成分为盐酸小檗碱)首次用于糖尿病的治疗，尤其对于胃热型糖尿病有良好的疗效。

Description

一种治疗糖尿病的中药组合物

本发明涉及一种治疗糖尿病的中药药物组合物，尤其涉及以中药黄连中所含有的黄连总生物碱为其药物有效成分的中药制剂，该药物对糖尿病的治疗有效果，本发明还提供了该药物的一种制备方法。

糖尿病是一种常见的内分泌---代谢病，其分布遍于全世界，并呈逐渐增多的趋势，我国糖尿病的患病率已达10.15％，与国外发达国家比虽然并不高，但由于人口众多，已拥有世界上第二大糖尿病患者人群，仅次于美国，且正以每15年增加一倍的速度增长，我国糖尿病患者以II型为主，但其发病多隐匿，并发症往往较严重，在糖代谢紊乱的同时往往伴有脂肪代谢的紊乱及血液流变学的异常，故患者容易发生动脉粥样硬化及微血管病变，早期失治或治疗效果不好，病变可累及身体多系统器官，严重影响患者的寿命及生存质量，因此控制糖、脂肪代谢紊乱，防治并发症的发生是糖尿病治疗的重点。因此，寻找有效的降糖、降脂、改善血液流变学的药物已成为当今迫切的研究课题。

本品为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch的干燥根茎。秋季采挖，除去须根及泥沙，干燥，撞去残留须根。中国药典2000版收载的黄连有三个品种：黄连(Coptis chinensis Franch)、三角叶连(Coptis deltoidea C.Y.cheng et Hsiao)和云连(Coptisteeta wall)。他们都具有清热燥湿，泻火解毒的作用。通过大量药理试验，确定黄连为该糖尿病治疗药物的原料药。

黄连为毛茛科黄连属植物Coptis chinensis Franch的根茎。本种为多年生草本，主要形态特征为多分枝集聚成簇，形似鸡爪，或单枝弯曲，单枝长3～9cm，直径3～8mm。表面黄褐色至灰黄色，粗糙，有不规则的结节状隆起，可见须根或残迹，形如连珠，部分节间平滑。上部有棕色鳞叶残基。质坚硬，断面不整齐，皮部暗棕色或橙红色，有菊花状纹理，中央可见红褐色小形的髓有的中空^[1]，气微，味极苦。采制习用的本药材为地下根茎，洗净粉碎。

黄连味苦，性寒。归心、脾、胃、肝、胆、大肠经。功能清热燥湿、泻火解毒。可清胃热、泻心火。如《百药效用奇观》所说“黄连治消渴……能泻上中下三焦之火，火去则津液无煎，消渴自止。”。黄连始载于《神奴本草经》：“黄连味苦无毒，主治热气。”。《名医别录)》曰：“主五脏冷热，久下泄辟脓血，止消渴。”《医学启源·卷之下·用药备旨》则明确指出：“去中焦湿与痛，用黄连，泻心火故也……”。《本草纲目》言“治消渴，用酒蒸黄连。”主治“热气……，止消渴大惊”。《经证证药录·卷十三》曰“黄连入胃，苦先走心，上泻心而下固肾，中燥而旁清木，五脏湿热之邪，非此不能内泄也”

据文献记载，黄连药材根茎中主含小檗碱(berberine)5％～8％，还含黄连碱(coptisine)、甲基黄连碱(worenine)、掌叶防己碱(palmatine)、药根碱(jatrorrhizine)、表黄连碱(epiberberine)、groenlandicine和5-羟基小檗碱(berberastine)等；由于他们有相似结构，常统称黄连生物碱。此外，尚含木兰碱(magnoflorine)及阿魏酸(ferulicacid)、绿原酸等。

其它，还含3-(3′，4′-二羟基苯基)-(2R)-乳酸、3-(3′，4′-二羟基苯基)-(2R)-乳酸-4′-O-葡萄糖甙、3′，4′-二羟基苯乙基醇-1-O-β-D-葡萄糖甙(3′，4′-dihydroxyphenethyl alcohol-1-O-β-D-glucopyranoside)、龙胆酸-5-O-β-D-葡萄糖甙(gentisic acide-5-O-β-D-glucpyranoside)、4-O-阿魏酰-D-奎宁酸(4-O-feruloyl-D-quinic acid)、5-O-阿魏酰-D-奎宁酸等^[1]。

而用于糖尿病治疗的有效部位为从黄连中提取精致而成的黄连总生物碱，通过对该有效部位中成分的分离鉴定，获得了3个化合物。见下表：

           表一黄连总生物碱中的化学成分

序号	中文名称	英文名称
			1	小檗碱	Berberine
2	盐酸药根碱	Jatrorrhizine Hydrochloride
			3	巴马丁	Palmatine

据药典记载，黄连的提取物有清热燥湿、泻火解毒的作用，对高血压、糖尿病、高血脂症等疾病有一定的疗效。在传统的中医疗法中，只能是水煎后服用，这种传统方法一是难以最大程度发挥药效，从另一方面讲，中药的服用不方便已是公知的。通过对中药中有效成分的药效研究，进而实现对该天然成分的提取和利用，制造出在药效上等同甚至优于合成药，而在毒性上低于合成药的纯中药制剂，这是对传统医学的发展。

本发明的目的在于提供一种可治疗糖尿病的中药药物组合物，其中的有效成分是来自中药黄连的生物碱类化合物，亦称黄连提取物。

本发明进一步提供了以所述黄连生物碱提取物为活性成分，用于治疗糖尿病的纯中药药物制剂和相应的药物剂型。

本发明的另一个目的在于提供用于治疗糖尿病的该纯中药药物的制备方法，特别是黄连提取物的制备方法。

本发明提供的药物组合物，其含有从黄连原料药得到的乙醇提取物，该提取物的组成中包括了黄连总生物碱，其中的主要活性成分是黄连总生物碱，从药效学角度出发，作为本发明用于治疗糖尿病的药物组合物，所述黄连提取物中的黄连总生物碱的含量在65％以上，最好不低于55％。

在此基础上，本发明还研究提出了一种治疗糖尿病的纯中药药物制剂，该中药药物以上述黄连提取物为有效活性成分，并包括了药剂学上可接受的辅料组分。

本发明的药物制剂包括针剂和口服剂，其中口服剂包括胶囊剂、口服液、片剂、颗粒剂等，针剂，特别是胶囊剂要求其有效成分中黄连总生物碱的含有量不低于65％，最好是不低于55％。

本发明还提供了该纯中药药物制剂的一种制备方法，其包括：以黄连为原料，用乙醇提取，并经纯化分离制取黄连提取物，使该提取物中黄连总生物碱的含量在65％以上；以该黄连提取物为有效成分，按照药剂学方法制备成要求的药物制剂。

黄连原料药一般是秋季采挖，除去须根及泥沙，干燥，撞去残留须根。在用于提取前应先粉碎，通常要求通过20-40目筛，以利于其中有效成分被充分提取。从生产角度考虑，本发明选用的黄连药材中，包括了上述各种黄连总生物碱化合物的总生物碱含量以盐酸小檗碱(C₂₀H₁₈NO₄.HCl)计，应该不低于7％。

根据本发明的比较优选的实施方案，提取黄连总生物碱提取物的方法包括如下步聚：

(1)用80％浓度以上的乙醇加热回流提取黄连原料药3次；

(2)60℃以下减压浓缩该乙醇提取液至相对密度为1.05(25℃测定)的浓缩液；

(3)将上述浓缩液过滤，将滤液用浓盐酸调节PH值为2～3之间，静置6小时，过滤。

(4)将滤后沉淀减压干燥(70℃)，粉碎成细粉得生物碱I。

(5)再将滤液过724型弱酸性阳离子交换树脂柱，水洗。

(6)以6％的氨醇溶液洗树脂柱，洗脱液经减压浓缩，真空干燥得生物碱II。

(7)将生物碱I与生物碱II混合均匀得黄连总生物碱。

上述提取步骤中，乙醇的浓度不能小于80％，从提高提取率的角度考虑，乙醇的浓度越高越好，从生产和成本角度考虑，优选使用约80％浓度的乙醇进行原料的提取，提取方法为加热回流，或其它可行的操作方式，乙醇与原料药之间应保持比较大的比例，以保证提取的完全，可以使用原料重量的约8-10倍的乙醇溶液加热回流(一般回流提取3次)，可用渗漉法及回流法，优选采用回流，取黄连药材粉末，用10倍量80％乙醇加热回流提取3次，每次1小时。过滤，将乙醇提取液减压回收乙醇，将提取液浓缩至相对密度为1.05(25℃测定)，过滤，将滤液用浓盐酸调节PH值为2～3之间，静置6小时，过滤，将沉淀减压干燥(70℃)，粉碎成细粉得生物碱I。再将滤液过724型弱酸性阳离子交换树脂柱，水洗，除去中性及酸性杂质，被吸附的生物碱阳离子，以6％的氨醇溶液解吸，洗脱液经减压浓缩，真空干燥得生物碱II，将生物碱I与生物碱II混合均匀得黄连总生物碱。

为有利于有效成分的分离，浓缩后的提取液需要达到一定的体积和酸碱度，根据本发明优选的技术方案，应将提取液体积浓缩至药材重量的1倍，PH值用盐酸调至2～3之间，在此PH值下小檗碱的含量及转移率较高，可以将乙醇提取液中的小檗碱充分沉淀出来；而上清液中的能溶于水的生物碱盐酸盐可以利用阳离子交换树脂的吸附特性得以分离。生物碱盐酸盐先吸附在724阳离子交换树脂上，与杂质分离后，再以6％的氨醇解吸附，得到盐酸药根碱及巴马丁。而724阳离子交换树脂的吸附容量是有一定限度的。以本发明优选的技术方案中，我们选择724阳离子交换树脂吸附黄连生物碱II的载量为：2.20g黄连生物碱II/100g树脂。液体的解吸附流速也对生物碱的得率有一定影响，我们选择的液体的流速为：0.6ml/cm².min，以避免有效成分的流失，保证工艺的稳定性；另外，从成本及效率方面考虑，我们还进行了洗脱剂用量的考察，以本发明优选的7倍体积的6％氨醇以0.6ml/cm².min速度洗脱。

根据本发明的技术方案，该中药制剂剂型可以是注射针剂或口服制剂，其中口服制剂包括胶囊剂、口服液、片剂、颗粒剂等。在制备口服制剂时，选用的辅型剂可以是淀粉、糊精或环糊精、蔗糖、硬脂酸盐等常规充填剂，制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。

[实施例一]

本发明优选的剂型是胶囊剂：

按处方，称取黄连总生物碱100g，碾磨粉碎，过80目筛。加过80目筛的药用淀粉100g，混合均匀，用65％的乙醇适量制成软材，过35目筛制颗粒，烘干，使水分小于5％，过40目筛整粒，过60目筛除去细颗粒，细颗粒用于下一批胶囊的制备，取40～60目颗粒，分装于1号胶囊。每粒胶囊含黄连总生物碱0.1g，用铝塑复合包装，Co⁶⁰照射灭菌，即得。

本发明的创造性在于通过科学可行的方法从黄连中药中提取分离出了黄连提取物，并进一步将该提取物作为有效成分制备成用于治疗糖尿病的中药制剂。如前面所述，本发明提供的药物的有效成分是包括黄连总生物碱的黄连提取物，为达到发明目的，对原料药中黄连总生物碱的提取率应在65％以上，同时该提取物中黄连甙的含量也应不低于35％。

为保证药物的质量，在生产过程中需要对最终提取物中的有效成分含量随时进行检测。用于检测所述生物碱类化合物的方法可以借助任何可行的检测手段和公知的方法，本发明在此提出了一套可行的检测方法。

首先，通过高效液相色谱分析，与盐酸小檗碱标准品谱图对照，证明了在总生物碱提取物中含有以盐酸小檗碱为主要成分的黄连生物碱混合物(从谱图中计算主要成分的峰面积，盐酸小檗碱约占到50％左右)。从紫外吸收光谱中可看到，盐酸小檗碱标准品和黄连提取物在345nm均有最大吸收峰，所以应该认为黄连提取物同盐酸小檗碱的紫外吸收图谱基本相一致，据此本发明采用了紫外—可见光分光光度法标准曲线粗略检测总生物碱的含量；同时，采用高效液相外标法，通过标准曲线检测和控制黄连提取物中的盐酸小檗碱含量，经实际生产中使用证明，检测结果的重现性好。应该说明的是，该方法仅作为本发明产品的质量控制手段之一，不应排除其它任何可满足要求的方法和操作。特别是总生物碱混合物的提取率含量测定对于本领域的技术人员是很容易实现的，也可以如上述以盐酸小檗碱为标示通过对比提取物与原料药在345nm的吸光值得到总提取物中有效成分的提取率，而其中盐酸小檗碱的含量则可通过HPLC外标法测得。

附图1是盐酸小檗碱标准品的HPLC谱图。

附图2是本发明制备的黄连提取物的HPLC谱图。

提取物中盐酸小檗碱的HPLC测定

HPLC条件：

流动相：乙腈∶0.05mol/L磷酸二氢钠＝30∶70

检测波长：277nm

流速：1ml/分钟

1、标准曲线

精密称取盐酸小檗碱10.70mg，置10ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。精密吸取溶液0.2、0.6、1.0、1.4、1.8ml，移入10ml容量瓶中，甲醇稀释至10ml，配制成浓度为0.02、0.06、0.10、0.14、0.18mg/ml的甲醇溶液，各取10ul注入高效液相色谱仪，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

回归方程：Y＝3E+06X-47430

线性范围：0.214～1.926ug

决定系数：r＝0.9999

2、黄连提取物中盐酸小檗碱的测定

对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱10mg，置10ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备精密称取黄连总生物碱10mg，甲醇溶解并定容至50ml，即得。

测定法精密吸取供试品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

本品含盐酸小檗碱(C₂₀H₁₈NO₄.HCl)，不得少于35％

为便于理解本发明组合物在治疗和预防糖尿病方面的药用价值，发明人使用以上所述方法或实施例的胶囊药剂及注射针剂完成了以下药理和药效试验：

一、急性毒性试验

用Wistar健康小鼠，采用口服和腹腔注射两种给药方式，测定黄连胶囊的半致死量(LD₆₅)：口服为15.64±1.28g/kg，腹腔为8.35±0.98g/kg。口服半致死量为临床用量的约165倍(临床使用剂量为100-200mg/kg)。

二、长期毒性试验

1.Wistar种大鼠“黄连总生物碱”口服长期毒性试验

用Wistar种大鼠180只，体重70-90克，雌雄各半，随机分成4组(对照组及三个剂量组)，对照组和大剂量组65只，中剂量组和小剂量组40只，每组雌雄各半。试验用药为实施例1的黄连胶囊。

Wistar大鼠以80mg/kg、160mg/kg、320mg/kg三种剂量给予灌胃，正常对照组灌等量的蒸馏水。每天1次，每周6次，连续给药26周。三个剂量组动物一般情况、摄食量、体重变化、尿常规分析、各项血液学及血液生化指标、脏器重量、脏器系数、系统尸解及病理组织学检查，与对照组比较无显著差异(经t检验结果统计，p＞0.05)，且均在正常生理范围内。病理学检查表明对照组及各给药组动物各脏器组织均为正常组织结构，未见药物中毒性病理形态改变。停药后4周的恢复期，观察各项检测指标均未见迟缓毒性。根据以上长期毒性试验的结果，初步认为大鼠“黄连总生物碱”320mg/kg/d灌胃是安全的。

2.Beagle犬“黄连总生物碱”口服长期毒性试验

以“黄连总生物碱”三种剂量25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg给予Beagle犬灌胃，每天1次，每周6次，连续给药6个月。三个剂量组动物的一般表现、进食量、体重增长、心电图检测、各项血液学及血液生化指标、尿常规分析、系统尸解、脏器系数、病理组织学检查，与对照组比较均无统计学意义，未见明显毒性反应。停药后1个月的恢复期，观察以上所有检测指标均未见迟缓毒性。根据长期毒性试验的结果，初步认为Beagle犬100mg/kg口服是安全的。

三、药效学试验

1.黄连总生物碱对高血脂大鼠模型的血脂的影响

取Wistar大鼠72只，给药0d先采血1次，根据血清T-CHO水平分为正常对照、模型对照、脂必妥(576mg/kg)、黄连小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)三个剂量6组，每组12只动物。除正常对照组进食普通饲料外，其余大鼠均喂饲高脂饲料6d，同时ig给药，正常对照组模型对照组ig蒸馏水，每天1次，连续给药14d。分别于7、10、14d灌胃给药后1h眼眶取血测血脂。

结果表明：黄连总生物碱能够明显降低高血脂大鼠模型的血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)，明显提高其血清高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)。

2.黄连总生物碱对链脲佐菌素所致糖尿病大鼠血糖的影响

取Wistar大鼠120只，禁食不禁水24h，ip链脲佐菌素80mg/kg(其中12只为正常对照组ip 0.05mol/L柠檬酸溶液，pH＝4.5)，72h后(禁食不禁水8h)，尾尖取血测血糖(0d)，将血糖＞180mg/dl的链脲佐菌素大鼠56只按血糖值分为：模型对照、苯乙双胍(100mg/kg)、黄连总碱小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)剂量5组，正常对照组、模型对照组各12只动物，其余各组11只。均ig给药，正常对照组及模型对照组ig蒸馏水，每天1次，连续12d，给药后3、7、12d尾尖取血测血糖。

结果表明：给药后3、7、12d黄连总碱三剂量能明显降低链脲佐素所致糖尿病大鼠血糖，与模型对照组比较有显著性差异，黄连总碱三剂量组能够明显降低链脲佐素所致糖尿病大鼠的血糖。

3.黄连总生物碱对链脲佐菌素所致糖尿病小鼠血糖的影响

取昆明种小鼠120只，禁食不禁水24h，取12只为正常对照组，其余动物灌胃链脲佐菌素100mg/kg(正常对照组灌胃0.05mol/L柠檬酸溶液，pH＝4.5)，72h后(禁食不禁水8h)，尾尖取血测血糖，将血糖＞200mg/dl的链脲佐菌素小鼠56只按血糖分为：模型对照、苯乙双胍(100mg/kg)、黄连总碱小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)剂量5组。均ig给药，正常对照组及模型对照组ig蒸馏水，每天1次，连续12d，给药后3、7、12d尾尖取血测血糖。

结果表明：黄连总碱各剂量组能够明显降低链脲佐菌素所致糖尿病小鼠的血糖水平，经统计学处理有显著性差异。

4.黄连总生物碱对四氧嘧啶糖尿病大鼠血糖的影响

取Wistar大鼠100只，雌雄各半，禁食不禁水24h，取10只为正常对照组，其余动物尾静脉注射60mg/kg四氧嘧啶NS溶液，(正常对照组尾静脉注射NS 0.2ml/100g)。72h后(禁食不禁水8h)，尾尖取血测血糖(0d)，将血糖值低于180mg/dl者剔除，造模成功62只，按血糖分为：模型对照、苯乙双胍(100mg/kg)、黄连总碱小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)剂量5组。均ig给药，正常对照组、模型对照组ig蒸馏水，每天1次，连续12天，分别于给药后3、7、12d尾尖取血测血糖。

结果表明：黄连总碱各剂量组能够明显降低四氧嘧啶所致糖尿病大鼠的血糖水平。

5.黄连总生物碱对四氧嘧啶小鼠血糖和胰岛素水平的影响

取昆明种雄性小鼠100只，体重22±2g，禁食24h后，取12只为正常对照组灌胃NS外，其余动物灌胃四氧嘧啶200mg/kg，72h后测血糖，血糖值大于180mg/dl为糖尿病动物模型(60只)视为0d血糖，按血糖值分为：模型对照、降糖灵(100mg/)、黄连总碱小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)剂量5组，每组12只动物。各组均ig给药，正常对照组和模型对照组ig蒸馏水，每天1次，连续12天分别于给药后3、7、12d尾尖取血测血糖(禁食8h)，12d眼眶取血，离心，提取血清测胰岛素水平。

结果表明：黄连总生物碱三剂量能明显增加四氧嘧啶糖尿病小鼠血清胰岛素水平，明显降低小鼠血糖。

6.黄连总生物碱对小鼠糖耐量的影响

取昆明种小鼠50只，禁食12h后尾尖取血测定小鼠血糖(为0h血糖)，按血糖值随机分为模型对照、降糖灵(100mg/kg)、黄连总碱小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)剂量5组，每组10只动物。均ig给药1次模型对照组ig蒸馏水，给药后1.0hig50％葡萄糖2.5g/kg，于给糖后0.5h、1.0h、2.0h分别测定各组血糖，结果进行t检验。

结果表明：黄连总生物碱能明显降低葡萄糖所致小鼠血糖升高，小鼠的糖耐量明显增强。

本发明药用组合物具有如下突出特点：

1.高效低毒

2.有效成分明确，质量可控

3.工艺简便，易于产业化

4.植物原料廉价易得

5.适应症广，市场容量大

Claims (8)

1、一种治疗糖尿病的中药组合物，它是以乙醇作溶剂，从黄连原料药中采用渗漉、回流方法提取得到的黄连提取物，其特征在于该提取物可通过下列方法得到：

(1)用80％浓度以上的乙醇加热回流提取黄连原料药3次；

(2)60℃以下减压浓缩该乙醇提取液至相对密度为1.05的浓缩液；

(3)将上述浓缩液过滤，将滤液用浓盐酸调节PH值为2-3之间，静置6小时，过滤；

(4)将滤后沉淀减压干燥，粉碎成细粉得生物碱I；

(5)再将滤液过724型弱酸性阳离子交换树脂，水洗；

(6)以6％的氨醇溶液洗脱树脂，洗脱液经减压浓缩，真空干燥得生物碱II；

(7)将生物碱I与生物碱II混合均匀得黄连提取物。

2、权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该提取物中黄连总生物碱的含量在65％以上，盐酸小檗碱的含量在15％以上。

3、权利要求1所述的中药组合物，其特征在于724阳离子交换树脂吸附黄连生物碱II的载量为：2.20g黄连生物碱II/100g树脂。

4、权利要求1所述的中药组合物，其特征在于上样时液体的流速为：0.6ml/cm².min。

5、权利要求1所述的中药组合物，其特征在于用7倍体积6％的氨醇以0.6ml/cm².min速度洗脱。

6、一种治疗糖尿病的中药制剂，其特征在于它是由权利要求1所述的组合物和药剂学可接受的辅料制成的。

7、权利要求6所述的中药制剂，其剂型包括注射针剂和口服制剂。

8、权利要求7所述的中药制剂，其剂型为口服胶囊剂，且所述黄连提取物中黄连总生物碱的含量在65％以上，盐酸小檗碱的含量在15％以上。

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