CN117323294B

CN117323294B - 一种载药栓塞微球及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN117323294B
Application number: CN202311244201.1A
Authority: CN
Inventors: 李林静; 何嘉辉
Original assignee: Zhiwei Shenzhen Medical Technology Co ltd
Current assignee: Zhiwei Shenzhen Medical Technology Co ltd
Priority date: 2023-09-25
Filing date: 2023-09-25
Publication date: 2024-05-31
Anticipated expiration: 2043-09-25
Also published as: CN117323294A

Abstract

本发明属于生物医用材料技术领域，提供了一种载药栓塞微球及其制备方法和应用，本发明采用氨基缩醛类化合物交联剂将阴离子型聚合物和多羟基聚合物两种聚合物交联成球，不涉及单体的使用，因此不涉及复杂且难以控制的聚合反应，反应过程简单，反应条件温和可控，所制得的栓塞微球的弹性好，可压缩程度高，载药速度快，载药率高，释药持久，生物相容性好。另外，本发明采用的方法步骤少，简便易操作，所采用的原料试剂毒性低，生物安全性高。本发明所制得的栓塞微球能够进一步用于肿瘤血管栓塞及持续给药，实现优异的肿瘤治疗效果。

Description

一种载药栓塞微球及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物医用材料技术领域，更具体地，涉及一种载药栓塞微球及其制备方法和应用。

背景技术

肝癌被称为“癌中之王”，因其高发病率和高死亡率令人谈之色变。经动脉化疗栓塞(TACE)是一种广泛应用于不可切除的肝细胞癌(HCC)的治疗方法，它是将化疗药物和栓塞剂混合后注射，通过动脉穿刺，栓塞肿瘤的供血动脉，造成肿瘤组织的缺血缺氧坏死。

现有技术中，一般采用聚合物微球作为栓塞剂，大多采用单体聚合反应来制备。该过程中，一方面需要用到自由基聚合单体(如丙烯酸单体、丙烯酸酯单体等)，但这类单体稳定性差、气味难闻、可能存在易燃易爆的危险；另一方面聚合反应难以控制，副产物较多；这些都对生产和应用带来诸多不利影响。如中国专利CN103977458A公开了一种多羟基聚合体栓塞微球及其制备工艺，先制得功能化大分子水凝胶，再加入引发剂，通过反相悬浮聚合将阴离子单体与功能性大分子连接，微球内部含有以有机酸根为负电荷载体的官能团，但该发明通过反相悬浮聚合将阴离子单体与功能性大分子连接，反应过程相对复杂，副产物多，反应进程难以控制，微球的压缩变形率仅在50％左右。又如中国专利CN113975453A公开了一种水凝胶栓塞微球的制备方法，利用丙烯酸酯类单体、乙烯醇羧酸衍生物类单体、交联剂发生交联，并通过正相悬浮聚合反应来合成微球，但该方法采用丙烯酸酯类单体、乙烯醇羧酸衍生物类单体的化学稳定性差，易被温度、空气等影响而发生变质或自聚合，不易保存和使用，且这两类单体易挥发、味道难闻、具备一定毒性和刺激性，丙烯酸酯类单体易燃易爆，对生产人员危害大，也增加了生产的难度；而且正相悬浮聚合反应过程较为剧烈(正相悬浮聚合反应快，放出热量多，如控制不得当，易导致超压，引发爆炸，安全性低，且需配备冷却装置、压力容器等，对设备的要求高)且反应程度可控性低(产物粒子大小、分散度、聚合度等参数难以有效控制和调节，容易导致合成产物的品质不稳定，甚至可能合成较大的颗粒聚集体)，所制得的微球的压缩变形率仅在50％左右，载药率仅在90％左右。

因此，亟需开发一种栓塞微球的制备方法，反应过程易控制，步骤少，副产物少，操作简便，所制得的栓塞微球的可压缩程度高，载药速度快，载药率高，释放药物的时间长，能够很好地实现持续给药。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种载药栓塞微球及其制备方法和应用。本发明的制备方法仅涉及交联反应，不涉及可控制程度较低的聚合反应，反应过程较为温和可控，操作更为简单，本发明所制得的栓塞微球可压缩程度高(压缩形变距离达到栓塞微球直径的80％后仍可回弹至原状)，载药速度快，载药率高(载药5min载药量不低于90.63％，15min载药率不低于97.19％，30min载药量不低于98.14％)，释药持久(载药栓塞微球的药物释放时间可长达30天左右)，能够很好地实现持续给药，生物相容性好。

本发明的第一方面提供一种栓塞微球的制备方法。

具体地，一种栓塞微球的制备方法，包括如下步骤：

(1)先将阴离子型聚合物溶于水中，得到阴离子型聚合物溶液；

(2)向阴离子型聚合物溶液中加入交联剂，然后加入酰胺缩合剂和碱性物质发生反应，中和，得到交联中间体；

(3)将油溶性分散剂溶于有机溶剂中，得到油相；将交联中间体、多羟基聚合物、催化剂混合得到水相；将水相加入到油相中，发生交联反应，制得所述栓塞微球；

所述交联剂为氨基缩醛类化合物。

本发明利用多羟基聚合物、阴离子型聚合物两种聚合物原料，并选用氨基缩醛类化合物(具有伯胺或带保护基团的胺类化合物，同时具有缩醛结构)作为交联剂，通过交联反应制得栓塞微球。由于氨基缩醛类化合物中含有氨基和缩醛结构，氨基能够与阴离子型聚合物中的阴离子基团发生交联反应，而缩醛结构能够与多羟基聚合物中的羟基基团发生交联反应，从而得到聚合物栓塞微球。由于本发明采用两种聚合物作为原料，不涉及使用化学稳定性差、易挥发、或易被温度、空气等影响而发生变质或自聚合、可能存在易燃易爆风险的单体，与单体化合物相比，聚合物不易挥发，化学稳定性和生物安全性较好，较易保存，使用方便，因此，本发明的方法既可以降低对人员、设备的损害，降低对设备的要求，又可以避免聚合过程带来的不确定性，减少副产物的生成。另外，本发明的合成过程仅涉及简单的交联反应，反应过程较为温和可控，操作更为简便。

优选地，步骤(1)中，所述阴离子型聚合物的重均分子量为300000-1500000。

进一步优选地，步骤(1)中，所述阴离子型聚合物的重均分子量为450000-1200000。

优选地，步骤(1)中，所述阴离子型聚合物为含有机酸根的阴离子型聚合物或其盐类。

进一步优选地，步骤(1)中，所述阴离子型聚合物包括聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、含酸根多糖聚合物中的至少一种。以上阴离子型聚合物(尤其是聚丙烯酸)均为良好的生物材料。

优选地，所述含酸根多糖聚合物包括透明质酸和/或羧甲基纤维素。

优选地，步骤(3)中，所述多羟基聚合物的相邻碳上均连接有羟基或每两个连接有羟基的碳之间仅间隔一个不含羟基的碳原子。

优选地，步骤(3)中，所述多羟基聚合物的聚合度为1000-2000，和/或所述多羟基聚合物的醇解度70％-99％。

进一步优选地，步骤(3)中，所述多羟基聚合物的聚合度为1400-1700，和/或所述多羟基聚合物的醇解度88％-99％。

优选地，步骤(3)中，所述多羟基聚合物为聚乙烯醇和/或多糖类大分子化合物。以上多羟基聚合物(尤其是聚乙烯醇)是具有良好生物相容性的生物材料。

优选地，所述多糖类大分子化合物包括明胶和/或纤维素。

优选地，所述多羟基聚合物为聚乙烯醇，所述阴离子型聚合物为聚丙烯酸。聚乙烯醇类多羟基聚合物可以提供良好的骨架作用，而聚丙烯酸类阴离子型聚合物具有良好的亲水性和载药性能。

进一步优选地，所述氨基缩醛类化合物包括氨基乙醛缩二乙醇、氨基乙醛缩二甲醇、4-氨基丁醛缩二乙醇、5,5-二乙氧基-1-戊胺、3-(二甲氧基甲基)苯胺中的至少一种。

优选地，步骤(2)中，所述反应的温度为30-60℃，所述反应的时间为1-10h。

优选地，步骤(2)中，所述酰胺缩合剂为水溶性碳二亚胺类缩合剂和/或季铵盐类缩合剂。

进一步优选地，步骤(2)中，所述酰胺缩合剂为N-琥珀酰亚胺(NHS)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、二环己基碳二亚胺(DCC)、4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐中的至少一种。

优选地，步骤(2)中，所述碱性物质为水溶性有机碱和/或无机碱。

进一步优选地，步骤(2)中，所述碱性物质为三乙胺、1,8-二氮基-4,5-二羟基-9,10-蒽醌二烯、4-二甲氨基吡啶、氢氧化钠、氢氧化钾中的至少一种。

优选地，步骤(2)中，所述中和为加入盐酸、硫酸、硝酸中的至少一种进行中和。中和的作用是：(1)为后续的反应营造合适的条件，(2)提高中间产品的稳定性，方便其储存。

优选地，按照重量份计，所述栓塞微球包括如下原料组分：

优选地，步骤(3)中，所述催化剂为酸性物质。

优选地，所述酸性物质包括盐酸、硫酸、硝酸、甲磺酸中的至少一种。

优选地，步骤(3)中，所述油溶性分散剂包括司盘80、司盘20、吐温20中的至少一种。

优选地，步骤(3)中，所述有机溶剂包括液体石蜡、石油醚、玉米油中的至少一种。

优选地，步骤(3)中，所述交联反应的温度为40-70℃，所述交联反应的时间为5-10h。

进一步优选地，步骤(3)中，所述交联反应的温度为50-60℃，所述交联反应的时间为6-8h。

优选地，步骤(3)中，所述交联反应后，经洗涤、筛分，再将栓塞微球用盐溶液浸泡保存，制得湿态的栓塞微球(湿球)，或者所述交联反应后，进行干燥，制得粉末状干态的栓塞微球(干球)。利用本发明的方法可制得湿球或干球，可选择以干态或湿态保存和使用，可满足不同使用场景和医生使用的要求；干球以固体粉末保存，保存时间长，药物吸附能力强，载药种类广泛，血管贴合性好；湿球弹性好，导管输送性能强，使用方便(由于干球需经较繁琐的干燥步骤才能获得干球，因此湿球相对于干球更为方便)。

优选地，所述盐溶液包括生理盐水和/或磷酸盐(PBS)缓冲液。

优选地，所述干燥为冷冻干燥。

优选地，所述干燥之前，还包括用短链醇或含电解质水溶液浸泡微球，然后进行程序梯度预冻。

优选地，所述短链醇包括甲醇、乙醇、丙醇中的至少一种。

优选地，所述含电解质水溶液包括酸溶液、碱溶液、盐溶液中的至少一种。

优选地，所述酸溶液为盐酸、硫酸、醋酸、磷酸中的至少一种。

优选地，所述碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵溶液中的至少一种

优选地，所述盐溶液为氯化钠、醋酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠中的至少一种。

优选地，所述程序梯度预冻为：从25-30℃降至-20-0℃，保温1-2h，再降低至-80--40℃，保温1-2h。

本发明的第二方面提供一种栓塞微球。

一种栓塞微球，由上述制备方法制得，所述栓塞微球的粒径为100-1200μm。

优选地，所述栓塞微球具有如下式(Ⅰ)或式(Ⅱ)所示分子结构：

本发明的第三方面提供一种载药栓塞微球。

一种载药栓塞微球，包括栓塞微球和药物，所述栓塞微球由上述制备方法制得，所述栓塞微球的粒径为100-1200μm。

优选地，所述药物为化疗药物。

进一步优选地，所述药物为阿霉素(DOX)。

本发明的第四方面提供一种载药栓塞微球的制备方法。

一种载药栓塞微球的制备方法，包括如下步骤：

将所述栓塞微球浸泡于含有药物的溶液中，取出，制得所述载药栓塞微球。

本发明的第五方面提供一种载药栓塞微球的应用。

一种栓塞微球在制备治疗癌症栓塞剂中的应用。

一种栓塞微球在制备治疗肝细胞癌栓塞剂中的应用。

相对于现有技术，本发明的有益效果如下：

本发明采用氨基缩醛类化合物交联剂将阴离子型聚合物和多羟基聚合物两种聚合物交联成球，不涉及单体的使用，因此不涉及复杂且难以控制的聚合反应，反应过程简单，反应条件温和可控，所制得的栓塞微球的弹性好，可压缩程度高(压缩形变距离达到栓塞微球直径的80％后仍可回弹至原状)，载药速度快，载药率高(载药5min载药量不低于90.63％，15min载药率不低于97.19％，30min载药量不低于98.14％)，释药持久(载药栓塞微球的药物释放时间可长达30天左右)，生物相容性好。另外，本发明采用的方法步骤少，简便易操作，所采用的原料试剂毒性低，生物安全性高。本发明所制得的栓塞微球载药后得到的载药栓塞微球能够进一步用于肿瘤血管栓塞及持续给药，实现优异的肿瘤治疗效果。

附图说明

图1为实施例1的栓塞微球形貌图(扫描电子显微镜图)；

图2为实施例1的栓塞微球的红外图谱；

图3为实施例1和对比例1的载药栓塞微球的释放药物情况图。

具体实施方式

为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本发明要求的保护范围不构成限制作用。

以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。

实施例1

一种栓塞微球的制备方法，包括如下步骤：

(1)将10g聚丙烯酸(重均分子量为450000)溶于90g蒸馏水中，得到聚丙烯酸溶液。

(2)然后向聚丙烯酸溶液中加入0.1g氨基乙醛缩二乙醇交联剂，室温下搅拌形成均匀溶液。向上述溶液中加入1g EDCI和0.2g NHS，以及加入0.5mL三乙胺，室温下避光搅拌，发生酰胺缩合反应10h。反应完成后，加入盐酸中和，然后用纯化水溶液进行透析、冷冻干燥，得到交联中间体(固体)。

(3)在2L三颈瓶中加入1L液体石蜡，然后再加入10g司盘80，混合搅拌后得到油相。取5g交联中间体、5g聚乙烯醇(聚合度1700，醇解度88％)溶于20g蒸馏水中，加入5mL浓盐酸搅拌30min得到水相。缓慢将水相滴加到搅拌转速为300rpm的油相中。滴加完成后，搅拌分散20min，然后升温至60℃，发生交联反应6h，制得栓塞微球。

(4)将反应后得到的栓塞微球依次经过乙醇、水各洗涤5遍后，使用筛网将栓塞微球按照粒径筛分至100-300μm、300-500μm、500-800μm、800-1200μm区间。将栓塞微球浸泡于生理盐水中得到湿球，栓塞微球和生理盐水的体积比为2:8。

上述制得的PBS溶液具有如下式(Ⅰ)所示分子结构：

实施例2

一种栓塞微球的制备方法，包括如下步骤：

(1)将15g聚甲基丙烯酸(重均分子量为1200000)溶于85g蒸馏水中，得到聚甲基丙烯酸溶液。

(2)然后向聚甲基丙烯酸溶液中加入0.15g氨基乙醛缩二乙醇交联剂，室温下搅拌形成均匀溶液。向上述溶液中加入1.2g EDCI和0.3g NHS，室温下避光搅拌，发生酰胺缩合反应15h。反应完成后，将产物透析、冷冻干燥得到交联中间体(固体)。

(3)在3L三颈瓶中加入2L液体石蜡，然后再加入15g司盘80和10g吐温20，混合搅拌后得到油相。取10g交联中间体、12g聚乙烯醇(聚合度1400，醇解度99％)溶于30g蒸馏水中，加入10mL浓盐酸搅拌30min得到水相。将水相缓慢滴加到搅拌转速为350rpm的油相中。滴加完成后，搅拌分散30min，然后升温至50℃，发生交联反应8h，制得栓塞微球。

(4)将反应后得到的栓塞微球经过乙醇、水各洗涤5遍后，使用筛网将栓塞微球粒径筛分至100-300μm、300-500μm、500-800μm、800-1200μm区间。将栓塞微球浸泡到PBS溶液中得到湿球，栓塞微球和PBS溶液的体积比为2:7。

上述制得的PBS溶液具有如下式(Ⅱ)所示分子结构：

实施例3

一种栓塞微球的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤(4)中，取筛分后的微球，加入的甲醇浸泡30min(微球和甲醇的体积比为1:10)，过滤出去甲醇后加入纯水(微球和纯水的体积比为1:2)，然后将样品放置到0℃中预冻1h，再转移到-60℃中预冻1h，最后将样品在冻干机中进行冻干，设置冻干条件为-75℃、20pa、8h，制得干球。

实施例4

一种栓塞微球的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤(4)中，取筛分后的微球，加入浓度为0.05M的氢氧化钠溶液浸泡20min(微球和氢氧化钠溶液的体积比为1:50)，过滤后使用的纯水(微球和纯水的体积比为1:1)洗涤5次，然后将样品放置到-20℃中预冻1h，再转移到-80℃中预冻1h，最后将样品在冻干机中进行冻干，设置冻干条件为-80℃、50pa、6h，制得干球。

实施例5

一种栓塞微球的制备方法，与实施例1的区别在于，步骤(4)中，取筛分后的微球，加入生理盐水浸泡60min(微球和生理盐水的体积比为1:100)，过滤后加入乙醇浸泡60min(微球和乙醇的体积比为1:15)，过滤加入纯水(微球和纯水的体积比为1:4)。然后将样品放置到-10℃中预冻1h，再转移到-70℃中预冻1h，最后将样品在冻干机中进行冻干，设置冻干条件为-80℃、10pa、7h，制得干球。

实施例6

一种栓塞微球的制备方法，与实施例2的区别在于，步骤(4)中，取筛分后的微球，使用体积比为1:10的甲醇浸泡30min，过滤出去甲醇后加入体积比为1:2的纯水，然后将样品放置到0℃中预冻1h，再转移到-60℃中预冻1h，最后将样品在冻干机中进行冻干，设置冻干条件为-75℃、20pa、8h，制得干球。

实施例7

一种栓塞微球的制备方法，与实施例2的区别在于，步骤(4)中，取筛分后的微球，加入体积比为1:50、浓度为0.05M的氢氧化钠溶液浸泡20min，过滤后使用纯水洗涤5次(微球和纯水的体积比为1:1)，然后将样品放置到-20℃中预冻1h，再转移到-80℃中预冻1h，最后将样品在冻干机中进行冻干，设置冻干条件为-80℃、50pa、6h，制得干球。

实施例8

一种栓塞微球的制备方法，与实施例2的区别在于，步骤(4)中，取筛分后的微球，加入生理盐水(微球和生理盐水体积比为1:100)浸泡60min，过滤后加入乙醇(微球和乙醇体积比为1:15)浸泡60min，过滤加入纯水(微球和纯水体积比为1:4)。然后将样品放置到-10℃中预冻1h，再转移到-70℃中预冻1h，最后将样品在冻干机中进行冻干，设置冻干条件为-80℃、10pa、7h，制得干球。

对比例1

本对比例提供一种市售栓塞微球产品Hepasphere(型号：V325HS，规格：25mg，尺寸：50-100μm)。

产品效果测试

1、栓塞微球形貌

实施例1制得的栓塞微球的SEM图如图1所示，由图1可见，本发明所制得的栓塞微球为光滑球形，粒径范围约为100-300μm。

实施例1制得的栓塞微球的红外图谱如图2所示，由图2可知，3000-3600cm^-1为羧基和羟基O-H伸缩振动、1600-1700cm^-1为羧基和酰胺C＝O伸缩振动、1462cm^-1为亚甲基C-H弯曲振动、1409cm^-1为羟基O-H弯曲振动、1100cm^-1为醚键C-O伸缩振动。以上结果表明本发明实施例1所制得的聚合物具有式(Ⅰ)所示分子结构。图2中Transmittance为透过率，Wavenumber为波数。

2、微球压缩性能测试

取上述实施例3、6制得的干球和对比例的栓塞微球加入生理盐水中溶胀重建，然后将溶胀重建后的各栓塞微球、实施例1-2制得湿球、对比例1的栓塞微球分别平铺在形变测试仪样品盘中进行测试。形变测试仪探头以0.1mm/s下降，直至压缩形变距离达到栓塞微球直径的20％、50％和80％。撤掉施加压力后，栓塞微球能回弹至原状且不出现破损则为“通过”，若不能回弹至原状或出现破损则为“不通过”。结果如表1所示。

表1各栓塞微球的压缩性能测试结果

测试样品	压缩20％	压缩50％	压缩80％	测试后的形貌
					实施例1湿球	通过	通过	通过	光滑球形
实施例3干球重建	通过	通过	通过	光滑球形
					实施例2湿球	通过	通过	通过	光滑球形
实施例6干球重建	通过	通过	通过	光滑球形
					对比例1	通过	通过	不通过	光滑球形

由上表可知，本发明制备得到的栓塞微球外形在压缩性能测试后仍为光滑球形，压缩形变距离达到栓塞微球直径的80％后仍可回弹至原状。而对比例1的市售产品虽然压缩性能测试后形貌为光滑球形，但在压缩形变距离达到栓塞微球直径的80％时不能回弹至原状，出现破损，可压缩程度较低。

以上结果表明，本发明所制得的栓塞微球，无论是湿球还是干球重建，可压缩程度高。与对比例1的市售产品相比，本发明所制得的栓塞微球压缩性能更好，挤压不易破损。

3、载药性能测试

湿球载药：取实施例1、2的湿球(粒径100-300μm)，去除保存溶液，然后用量筒取1mL湿球，加入8mL浓度为5mg/mL的阿霉素溶液。每隔一段时间(5min、15min、30min)用紫外分光光度计在483nm波长下测试溶液中的药物浓度，按照式(Ⅰ)计算载药率，以监测微球对药物的吸收负载情况。

干球载药：取25mg实施例3、6中的干球(粒径区间为纯水中100-300μm)，分别加入16mL浓度为2.5mg/mL的阿霉素溶液。每隔一段时间(5min、15min、30min)用紫外分光光度计在483nm波长下测试溶液中的药物浓度，按照式(Ⅰ)计算载药率，以监测微球对药物的吸收负载情况。

载药率＝(药物总投入重量-溶液中剩余的药物重量)/药物总投入重量×100％式(Ⅰ)。

结果如下表2所示。

表2各栓塞微球的载药测试结果

测试样品	载药5min	载药15min	载药30min	载药后形貌
					实施例1湿球	91.25％	97.19％	98.66％	光滑球形
实施例3干球	93.46％	98.87％	99.28％	光滑球形
					实施例2湿球	90.63％	97.26％	98.14％	光滑球形
实施例6干球	92.52％	98.53％	99.19％	光滑球形
					对比例1干球	49.80％	86.50％	94.30％	光滑球形

由上表可知，本发明所制得的栓塞微球在5min内的载药率不低于90.63％(甚至可高达93.46％)，在15min内的载药率不低于97.19％(甚至可高达98.87％)，在30min内的载药率不低于98.14％(甚至可高达99.28％)。而对比例1的市售产品在5min内的载药率仅为49.80％，由于载药率低，因此需经两步载药(即起始加入8mL浓度为2.5mg/mL的阿霉素溶液，载药10min后再先加入8mL浓度为2.5mg/mL的阿霉素溶液)才能够在载药30min后达到94.30％的载药率，且载药率仍较本发明的栓塞微球低。

以上结果表明，本发明所制得的栓塞微球载药速度快，载药率高，载药后微球依旧可保持光滑球形。

4、载药栓塞微球的药物(阿霉素)释放性能测试

(1)分别取实施例1和对比例1的栓塞微球加入至20mg/mL阿霉素溶液，稍微倒置摇晃数次；静置2h后，取上清液测试吸光度，算出载药栓塞微球初始的载药量。

(2)然后将载药栓塞微球注入过滤袋，滤掉剩余药液；再将载药栓塞微球装入过滤袋后置于烧杯中，加入磁力搅拌转子，加入200mL 0.9％ NaCl生理盐水。

(3)将装有载药栓塞微球和生理盐水的烧杯置于37℃水浴搅拌避光环境下，分别于5min、10min、15min、20min、30min、45min、60min、90min、120min，用移液枪取3mL释放液，用紫外分光光度计检测溶液中药物浓度，记录测试数据；同时向烧杯中补充3mL生理盐水。自120min后，每天取一个测试样，重复上述检测步骤。

药物释放性能测试结果如图3所示，由图可知，本发明所制得的载药栓塞微球的药物释放时间可长达30天(d)左右，释药持久。而对比例1的载药栓塞微球药物释放时间仅约10天，不利于实现长时间给药治疗。

Claims

1.一种栓塞微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）先将阴离子型聚合物溶于水中，得到阴离子型聚合物溶液；

（2）向阴离子型聚合物溶液中加入交联剂，然后加入酰胺缩合剂和碱性物质发生反应，中和，得到交联中间体；

（3）将油溶性分散剂溶于有机溶剂中，得到油相；将交联中间体、多羟基聚合物、催化剂混合得到水相；将水相加入到油相中，发生交联反应，制得所述栓塞微球；

所述交联剂为氨基缩醛类化合物；

步骤（3）中，所述多羟基聚合物为聚乙烯醇；

步骤（3）中，所述催化剂为酸性物质；

步骤（1）中，所述阴离子型聚合物为聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸；

步骤（2）中，所述酰胺缩合剂为N-琥珀酰亚胺、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、二异丙基碳二亚胺、二环己基碳二亚胺、4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐中的至少一种；

步骤（2）中，所述交联剂为氨基乙醛缩二乙醇；

步骤（3）中，所述交联反应后，经洗涤、筛分，再将栓塞微球用盐溶液浸泡保存，制得湿态的栓塞微球，或者所述交联反应后，进行干燥，制得粉末状干态的栓塞微球。

2.根据权利要求1所述的栓塞微球的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述油溶性分散剂为司盘80、司盘20、吐温20中的至少一种。