CN115990127B - 一种具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物、及其制备和应用，该组合物包括质量比为0.5～5：1～10：1～3的兵豆籽提取物、酵母菌/大米发酵产物滤液和重组人源胶原蛋白。化妆品由以下质量百分含量的组分组成：0.5～30％的收缩毛孔和光滑皮肤的C相，10～30％的油相A相，50～85％的水相B相。与现有技术相比，本发明采用的有效成分中兵豆籽提取物可调节TGM‑1和IVL表达，减少毛孔周围有核细胞，增强毛孔壁的支撑，酵母菌/大米发酵滤液调节皮肤表面微生态平衡，帮助维持皮肤油水平衡，肌肤保湿，人源胶原蛋白帮助保持皮肤平整细腻，从肌肤内部，外部全面的解决毛孔问题。

Description

一种具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及日用化学品领域，尤其是涉及一种具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

随着年龄增长，皮肤变得粗糙，毛孔变得粗大。在与年龄有关的皮肤松弛过程中，由表皮和真皮支撑的孔壁变得松弛扩大。由沟纹方向和深度定义的皮肤微地形，也与毛孔变形和老化相关。与非扩张的毛孔相比，扩张的毛孔周围存在着更多的含有细胞核的细胞，这些异常保留的细胞核是角质化过程异常的表现之一。

现有技术中，许多细致毛孔的产品通过添加酒精等成分使肌肤达到即时清爽收敛的效果，但是对于敏感肌来说易引起肌肤刺激不能长久使用。此外，有些产品添加水杨酸、乳糖酸等有效抑制皮肤油脂，达到细致毛孔的作用，但是pH值偏酸性，对敏感肌不友好，不适宜每天使用。清洁毛孔类产品多含有火山泥等成分，这类产品使用时量大，可有效清洁脸部油脂，但使用后容易引起肌肤缺水发干的情况，不宜频繁使用。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的角质剥脱容易引起肌肤敏感，收缩毛孔时间太长，且效果不显著等缺陷，而提供一种具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物及其制备和应用，具有良好的细致毛孔的功效，同时，适合长期使用，安全温和，无刺激，在细致毛孔的同时还能补水保湿，平滑肌肤。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明提供一种具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物，所述组合物包括质量比为0.5～5：1～10：1～3的兵豆籽提取物、酵母菌/大米发酵产物滤液、重组人源胶原蛋白。优选兵豆籽提取物、酵母菌/大米发酵产物滤液、重组人源胶原蛋白重量比为0.5～5:1～5.5:1～3，进一步优选：2:5:2。

其中，酵母菌/大米发酵产物滤液通过以下方法制得：

(1)大米粉末加水加热，搅拌，成为米浆，在米浆中加入β-葡聚糖酶，酶的添加量为米浆质量的0.001％-0.5％，酶活为150-200U/g，进行酶解，获得米浆酶解液；

(2)将酵母菌种Saccharomyces veronae接种米浆酶解液中，发酵的条件为：发酵温度20-40℃，发酵时间24-48小时，发酵过程pH控制为6-6.5，发酵后获得发酵液；

(3)发酵液通过反渗透技术浓缩，高效富集活性物质，经过加温杀菌，冷却过滤得到米发酵液，即含有活性物质的酵母菌/大米发酵产物滤液。

其中，所述的兵豆籽提取物活性部分主要由寡糖(DP2到DP5)组成，主要形式为海藻糖、麦芽糖、水糖和毛蕊花糖。兵豆籽提取物可增加皮肤中TGM-1和IVL mRNA表达，促进Ⅰ型胶原蛋白表达。

本发明，从兵豆籽提取物的作用机理，调节TGM-1和IVL表达，减少毛孔周围有核细胞，增强毛孔壁的支撑；酵母菌/大米发酵滤液调节皮肤表面微生态平衡，帮助维持皮肤油水平衡，肌肤保湿；人源胶原蛋白帮助保持皮肤平整细腻，从肌肤内部、外部全面的解决毛孔问题。

本发明还提供一种含有上述组合物的乳液，该乳液包括以下质量百分含量的组分组成：

10～30％的油相A相，

50～85％的水相B相；

0.5～30％的含具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物的C相。

进一步地，所述C相包括以下质量百分含量的组分组成：

更进一步地，所述C相包括以下质量百分含量的组分组成：

进一步地，所述A相包括以下质量百分含量的组分组成：

更进一步地，所述A相包括以下质量百分含量的组分组成：

进一步地，所述B相包括以下质量百分含量的组分组成：

更进一步地，所述B相包括以下质量百分含量的组分组成：

本发明还提供上述乳液的制备方法，具体步骤如下：

(1)A相制备：按比例取A相各组分于反应器中，水浴加热至70～90℃，融化搅拌均匀为油相；

(2)B相制备：按比例取B相各组分于反应器中，水浴加热至80～90℃，搅拌溶解均匀，作为水相；

(3)将A相和B相加入到乳化锅中，搅拌均匀，乳化均质3～10min；

(4)二者搅拌冷却至30～60℃时，加入C相，搅拌均匀，即得收缩毛孔和光滑皮肤的乳液。

兵豆是古老的豆科植物，兵豆籽提取物，富含寡糖，能促进角质化细胞成熟的过程，从而消除毛孔周围使毛孔壁变硬的有核细胞，强化真皮的胶原蛋白结构，从而减少毛孔变形和松弛；能够减少油脂分泌，恢复正常的角质化过程，收紧毛孔并细致皮肤纹理。

所述酵母菌/大米发酵滤液含有α-酮戊二酸，α-酮戊二酸对于5α-还原酶具有较强的抑制作用，该酶依赖还原性辅酶Ⅱ为供氢体，将睾酮不可逆的转化为活性更强的二氢睾酮，高水平的二氢睾酮会引发雄激素依赖型疾病，例如痤疮、脂溢性皮炎、女性多毛症等疾病。α-酮戊二酸抑制该酶，可减少皮肤油脂分泌。

所述重组人源化胶原蛋白为分子量大于10万道尔顿且水溶性强的III型胶原蛋白，其蛋白基础结构跟人体一模一样，同时在此基础上优化，提高胶原蛋白亲水性，其能通过角质层与上皮细胞作用，补充皮肤所需氨基酸，赋予其平滑感。

本发明经研究发现，兵豆籽提取物可以显著增加TGM-1和IVL mRNA表达及减少有核细胞的作用，减少皮脂分泌，促进Ⅰ型胶原蛋白表达，增强毛孔壁的支撑结构，恢复角质形成细胞的正常角质化过程，该活性成分较其他成分而言，作用机制清楚，可以从不同维度减小毛孔，效果显著，且安全温和，对敏感肌友好无刺激，在化妆品领域具有广阔的应用前景。

本发明选用上述组合物从增加TCM-1和IVLmRNA表达，减少有核细胞作用，抑制5α-还原酶及增加皮肤含水量多个角度协同增效，抑制皮肤油脂分泌，从而更好的发挥缩小毛孔的功效。

本发明所述具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物，还可以用于制备其他各种具有收缩毛孔和光滑皮肤的化妆品，如面霜、面膜等，所述组合物在化妆品中的质量含量为2.5-18％。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

(1)本发明的兵豆籽提取物能够有效增加了TGM-1和IVL mRNA的表达，减少了有核细胞，有助于收缩毛孔，可显著减少了黑头粉刺和面部痤疮，同时平滑肌肤，补水保湿，而且安全温和，不刺激，可长期使用。

(2)本发明采用兵豆籽提取物、酵母菌/大米发酵液及重组人源化胶原蛋白进行复配，多种活性成分协同增效。其中兵豆籽提取物可以显著增加TGM-1和IVL mRNA表达及减少有核细胞的作用，减少皮脂分泌，促进Ⅰ型胶原蛋白表达，增强毛孔壁的支撑结构，恢复角质形成细胞的正常角质化过程；同时酵母菌/大米发酵滤液富含a-KG能够促进老旧角质的脱落，促进新生细胞的生长；此外，重组人源化胶原蛋白于人自身胶原蛋白高度相似，具有典型的三螺旋结构，填充在皮肤真皮之间，产生皮肤张力，缩小毛孔；三者由里及外协同作用，促进毛孔收缩的同时，提高补水保湿效果，并使皮肤更具有弹性。

附图说明

图1为不同含量的兵豆籽提取物对细胞进行处理后转谷氨酰胺酶1的mRNA表达(*p<0.05)；

图2为不同含量的兵豆籽提取物对细胞进行处理后involucrin的mRNA表达(*p<0.05)；

图3为PRIMOS的痤疮大小原始图和分析图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。其他根据本发明作出的一些非本质的修改和调整仍属于本发明的保护范围。

如无特别说明的原料或处理技术，则表明其均为本领域的常规市售产品或常规处理技术。

其中，

兵豆籽提取物可选用兰州沃特莱斯生物科技有限公司等公司的市售产品；

重组人源化胶原蛋白可选用成都远睿生物技术有限公司(FWS0003C)、赛尔瑞成(北京)生命科学技术有限公司(PF1103)等企业市售的III型胶原蛋白。

1、对兵豆籽提取物在促进mRNA表达上的应用，将兵豆籽提取物用于增加皮肤中TGM-1和IVL mRNA表达，促进Ⅰ型胶原蛋白表达，具体实验评价如下：

评价方法：

将正常人角质形成细胞接种于24孔超低粘附孔板，并在37℃下含有5％二氧化碳的环境中培养。24小时后，用0.5％或1.0％(v/v，兵豆籽提取物在细胞培养液中的浓度)的兵豆籽提取物对细胞进行处理。然后将它们在37℃下含5％二氧化碳的环境中培养。48小时后，收集细胞，并提取总RNA。将RNA逆转录，并通过定量PCR技术分析获得的反转录DNA。β-2微球蛋白的mRNA(内部参考对照)也与转谷氨酰胺酶1和内披蛋白(involucrin)的mRNAs做了平行分析。使用热循环仪(iCycler–MyiQ–Bio-Rad)连续测量荧光(SYBR绿)。使用Genex软件(Bio-Rad)进行Ct分析(相对定量)。

评价结果：

采用上述方法在体外对正常人角质细胞进行0、0.5％和1％的兵豆籽提取物测试，如图1所示，LESE指兵豆籽提取物，为不同含量的兵豆籽提取物对细胞进行处理后转谷氨酰胺酶1(即TGM 1)的mRNA表达，图中control为兵豆籽提取物体积浓度为0，0.5％LESE为兵豆籽提取物体积浓度为0.5％，1.0％ LESE为兵豆籽提取物体积浓度为1.0％，对细胞进行处理后，转谷氨酰胺酶1的mRNA表达，可以看出，随着兵豆籽提取物浓度的增加，转谷氨酰胺酶1的mRNA表达增加；图2为不同含量的兵豆籽提取物对细胞进行处理后involucrin的mRNA表达，可以看出，随着兵豆籽提取物浓度的增加，involucrin的mRNA表达增加；具体地，1％的兵豆籽提取物显著刺激了involucrin(增加27％)和转谷氨酰胺酶1(增加34％)的表达——角质细胞分化的两个标记物。TGM-1和IVL mRNA的表达增加在细胞水平上促进了角质细胞的分化，有助于毛孔周围角质细胞的增厚和更新，进而有利于缩小毛孔。这些结果表明兵豆籽提取物可增强皮肤屏障。TGM-1和IVL mRNA的表达越高，外部基质对细胞中骨架结构的粘附性越好，角化细胞包膜越完整，细胞的砖墙结构越坚强，细胞与基质的联系越紧密，皮肤的屏障功能越好。

2、实施例1-3、对照例1-4制备具有收缩毛孔和光滑皮肤的乳液及效果测试

本发明实施例1-3的一种具有收缩毛孔和光滑皮肤的乳液的制备工艺流程如下所示：

(1)A相制备：按表1中各比例取A相各组分于反应器中，水浴加热至80℃，融化搅拌均匀为油相；

(2)B相制备：反应器中加入表1中各个比例的B相组分，水浴加热至85℃，搅拌溶解均匀，作为水相；

(3)将A相和B相加入到乳化锅中，搅拌均匀，乳化均质6min；

(4)二者搅拌冷却至50℃时，加入C相，搅拌均匀，即得具有收缩毛孔和光滑皮肤的乳液。

表1实施例1-3和对照例1-4的原料组分配比

注：表中百分比(％)均为质量百分含量。

其中酵母菌/大米发酵滤液的制备方法如下：

1)酵母菌的培养

从试管挑取酵母菌种Saccharomyces veronae接种于500mL无菌种子培养液中，摇床转速150rpm，pH为6.5，30℃下培养24h后，至对数生长期，再次接种扩培到5L种子培养基中，二次培养12h后至对数期，以15000rpm离心40min后弃掉上清液获得用于后续米浆发酵液制备的酵母菌种Saccharomyces veronae。

2)酵母菌/大米发酵液的制备

(1)称取30kg糙米浸入70kg水催芽24h，然后50℃烘干12h、粉碎为全部过200目的糙米粉，水分为10％；加70L水混为米浆，加入1.5mmol/L的CaCl₂溶液；

(2)在米浆中加入β-葡聚糖酶，酶的添加量为米浆质量的0.5％，酶活为150-200U/g，进行酶解，酶解温度为35-40℃之间，时间10小时，酶解到终点，酶解终点为间隔1h的葡萄糖含量不再变化，获得米浆酶解液；其中，所述葡萄糖含量测定可采用常用的化学法如DNS法、斐林试剂法、间接碘量法以及旋光法等。

(3)将酵母菌种Saccharomyces veronae接种米浆酶解液中，发酵的条件为：发酵温度30℃，发酵时间24小时，发酵过程pH控制为6±0.2之间，发酵后获得发酵液；

(4)发酵液通过多段式反渗透技术，反渗透压为3.5MPa，控制反渗透膜滤过温度为35℃，运行至截流部分体积为总体积的50％，通过5段式渗透过程，浓缩至10倍，得到10倍浓缩酵母菌/大米发酵液，且富含活性成分。

对照例1-4

本发明对照例的组合物的制备工艺流程如下所示：

(1)A相制备：按表1中各比例取A相各组分于反应器中，水浴加热至80℃，融化搅拌均匀为油相；

(2)B相制备：反应器中加入表1中各个比例的B相组分，水浴加热至85℃，搅拌溶解均匀，作为水相；

(3)将A相和B相加入到乳化锅中，搅拌均匀，乳化均质6min；

(4)二者搅拌冷却至50℃时，加入C相，搅拌均匀，即得对照例的乳液。

对实施例和对照例所得乳液进行性能检测如下：

本研究对象为70名(每组10名，7组)毛孔粗大的健康白人男性和女性志愿者，年龄在22至67岁，平均年龄41±12岁。在使用实施例1-3和对照例1-4所得乳液前和每天两次使用28天后进行相关测试，测量区域的位置在不同时间保持一致，测试结果(表2、3、4、5)为每组10名受试者的平均值。

2.1评价对于有核细胞的影响

在对研究对象的脸颊细胞进行适当染色后，通过评估脸颊样本上毛孔周围有核细胞情况来研究本发明产品的效果。测试样本是在使用实施例1-3和对照例1-4所得乳液前和每天两次使用28天后采集的，测量区域的位置及其在不同时间的标记必须严格一致。

所有参与者在研究开始时签署了知情同意书。本研究遵照《赫尔辛基宣言》的伦理原则和适用的监管要求进行。通过柔性载玻片采集样品，载玻片上预先沉积和涂抹了一滴氰基丙烯酸酯(3S-Biokit，参考号：G03SCK Monaderm)。将载玻片施加恒定压力30秒，然后轻轻移开，尽可能多地采集细胞。将这些样品在4℃下保存。对采集的样品采用PBS(+)进行冲洗，将细胞于Hoechst标记液中室温下孵育10—30分钟，吸去标记液，并用PBS(+)冲洗3次，然后固定盖玻片。细胞标记后，在白光显微镜下观察样品(IX70，奥林巴斯)，显微镜配有CCD相机(DXM.1200C，尼康)并与图像分析软件(NIS-Elements AR，尼康)相连。每个样本拍摄四张代表性照片。五位经过培训的评价人员采用5步评分量表对照片上的有核细胞进行评价。为了进行全盲评价，每张照片都分配了一个代码并随机分组。

将实施例1-3和对照例1-4所得乳液每天涂抹在待测区域，经过28天每天两次的连续使用比较。

五位经过培训的评价人员采用5步评分量表对照片上的有核细胞进行评价如下：以实施例1、对照例1、对照例4为例，5名经过训练的评估者的平均评分表如下表2所示，毛孔周围有核细胞数量降低率＝(使用样品后的评分平均值-使用样品前的评分平均值)/使用样品前的评分平均值*100％。

表2 5名经过训练的评估者的平均评分

由上表2可以看出，本发明样品更有利于减少有核细胞的聚集，有助于减少毛孔增大。

2.2毛孔区域和毛孔数量的检测

通过VISIA-CR采集皮肤表面图像，比较面部毛孔数量和面部毛孔区域，VISIA-CR利用标准光、交叉偏振光、平行偏振光和紫外光进行图像采集。

毛孔区域和毛孔数量的变化比例＝(使用样品后的测量值-使用样品前的测量值)/使用样品前的测量值*100％。

如表3(每组10个受试者的平均数据)所示，其中pore area为毛孔区域，porenumber为毛孔数量。从表中可以看出，使用各实施例和对照例样品都能降低毛孔数量和区域，且使用实施例1-3样品效果明显优于使用对照例。

表3使用各实施例和对照例样品后毛孔数量和区域较使用前的降低率

2.3评价对于黑头和痤疮的影响

如表4所示，为采用VISIA-CR检测，使用各实施例和对照例样品后鼻尖黑头和痤疮区域较使用前的降低率(每组10个受试者的平均数据)，其中，Blackhead and acne area为黑头和痤疮的平均区域，Blackhead and acne area proportion为黑头和痤疮的平均区域面积比，可以看出，使用实施例1-3样品效果明显优于使用对照例。

表4为使用各实施例和对照例样品后鼻尖黑头和痤疮区域较使用前的降低率

用三维测量设备PRIMOS lite系统(Canfield)采集痤疮区域的真实三维微地貌。为了确保研究中采集条件的良好可重复性，采用PRIMOS面部设备(Canfield)进行了测量。此外，测量过程中，志愿者都戴着黑色头巾式帽子。为了确定痤疮区域参数的变化，在各关注区域选定一个区域(随机一侧，左侧或右侧)，并用PRIMOS软件(Canfield)进行评估。通常，痤疮区域参数越低，皮肤的痤疮就越少。如表5所示(每组10个受试者的平均数据)，56天治疗后，痤疮大小显著下降，且使用实施例1-3样品效果明显优于使用对照例。

表5为使用各实施例和对照例样品后痤疮区域较使用前的降低率

图3为PRIMOS的痤疮大小原始图和分析图，图中，Original组为原始图组(原始图为相机拍摄图，未用软件进行评估，可看到肉眼观测的情况)，Analysis组为分析图组(分析图为导入到PRIMOS软件后所得的分析数据)，分析图中类圆形亮处为痤疮，从图中可以看出，某位受试者每天使用实施例1乳液56天后，亮处明显减小，代表痤疮数量和大小都有明显减少。

Claims (9)

1.一种具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物，其特征在于，该组合物包括质量比为0.5～5：1～10：1～3的兵豆籽提取物、酵母菌/大米发酵产物滤液和重组人源胶原蛋白；

所述的酵母菌/大米发酵产物滤液通过以下方法制得：

(1)大米粉末加水加热，搅拌，成为米浆，在米浆中加入β-葡聚糖酶，酶的添加量为米浆质量的0.001％-0.5％，酶活为150-200U/g，进行酶解，获得米浆酶解液；

(2)将酵母菌种Saccharomyces veronae接种米浆酶解液中，发酵的条件为：发酵温度20-40℃，发酵时间24-48小时，发酵过程pH控制为6-6.5，发酵后获得发酵液；

(3)发酵液通过反渗透技术浓缩，高效富集活性物质，经过加温杀菌，冷却过滤得到米发酵液，即含有活性物质的酵母菌/大米发酵产物滤液。

2.一种含有如权利要求1所述组合物的乳液，其特征在于，该乳液包括以下质量百分含量的组分组成：

10～30％的油相A相；

50～85％的水相B相；

0.5～30％的含具有收缩毛孔和光滑皮肤的组合物的C相。

3.根据权利要求2所述的乳液，其特征在于，所述C相包括以下质量百分含量的组分组成：

4.根据权利要求2所述的乳液，其特征在于，所述A相包括以下质量百分含量的组分组成：

5.根据权利要求2所述的乳液，其特征在于，所述B相包括以下质量百分含量的组分组成：

6.一种如权利要求2所述的乳液的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)A相制备：按比例取A相各组分于反应器中，水浴加热至70～90℃，融化搅拌均匀为油相；

(2)B相制备：按比例取B相各组分于反应器中，水浴加热至80～90℃，搅拌溶解均匀，作为水相；

(3)将A相和B相加入到乳化锅中，搅拌均匀，乳化均质3～10min；

(4)二者搅拌冷却至30～60℃时，加入C相，搅拌均匀，即得收缩毛孔和光滑皮肤的乳液。

7.一种如权利要求1所述组合物的应用，其特征在于，将所述组合物用于制备具有收缩毛孔和光滑皮肤的化妆品。

8.根据权利要求7所述组合物的应用，其特征在于，所述组合物中兵豆籽提取物用于增加皮肤中TGM-1和IVL mRNA表达，促进Ⅰ型胶原蛋白表达。

9.根据权利要求7所述的组合物的应用，其特征在于，所述组合物在化妆品中的质量含量为2.5-18％。