CN103222938B - 含有番荔枝种子提取物的皮肤外用剂组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及含有番荔枝种子提取物的皮肤外用剂组合物，具体地说，从发芽的番荔枝种子制备的提取物，或者利用亚临界提取法制备的番荔枝种子提取物，与以往的普通番荔枝种子提取物相比，可提供含有更多量环肽以及各种氨基酸的番荔枝种子提取物，通过利用这些提取物，发挥更高效能的皮肤外用剂组合物。

Description

含有番荔枝种子提取物的皮肤外用剂组合物

技术领域

本发明涉及含有番荔枝种子提取物的皮肤外用剂组合物，具体地说，涉及从发芽的番荔枝种子制备的提取物，或者利用亚临界提取法制备的番荔枝种子提取物，与以往的普通番荔枝种子提取物相比，可提供含有更多量的环肽以及各种氨基酸的番荔枝种子提取物，通过利用这些提取物，发挥更高效能的皮肤外用剂组合物。

背景技术

随着老化，作为皮肤组成物质的胶原蛋白、弹性蛋白、透明质酸以及糖蛋白质的含量及排列发生变化或减少，而且被自由基和活性有害氧产生氧化应激。另外，随着老化的进行或紫外线影响，组成皮肤的大部分细胞就会增强环氧合酶-2(Cox-2，Cyclooxygenase)的生物合成，该酶产生已知能够引起炎症的促炎细胞因子。通过这些炎性因子，就会增强作为皮肤组织分解酶的基质金属蛋白酶(MMP，Matrix metalloproteinase)的生物合成，增强通过iNOS(inducible nitric oxide synthase，诱导型一氧化氮合酶)的NO(氮氧化物)的生成。也就是，随着自然进行的内因性老化，细胞活性就会减少，并且由于微细炎症的基质物质的合成就会减少，而且各种有害环境产生的应激的增加以及太阳光线引起的活性氧簇的增加等外因会引起分解及变性加速，皮肤基质就会破坏且变薄，引起皮肤老化的各种症状。因此，目前进行着很多防止且改善老化现象的活性成分的研究。

现有技术文献

专利文献：韩国公开专利第2011-0125247号

发明内容

本发明的发明人发现，在天然提取物中，番荔枝种子的提取物具有优良的抗老化效果，特别是发芽的番荔枝种子的提取物比普通的番荔枝种子含有更多的氨基酸等成分，而且利用亚临界提取法时可提取更多种类和更多量的有效成分，能够提供更加良好的抗老化效果，由此完成本发明。

因此，本发明的目的是提供具有包括抗老化效果的多种皮肤改善效果的含有番荔枝种子提取物的皮肤外用剂组合物。

为达到上述目的，本发明提供将发芽的番荔枝种子提取物作为有效成分含有的皮肤外用剂组合物。

另外，本发明提供利用亚临界提取法制备的番荔枝种子提取物作为有效成分含有的皮肤外用剂组合物。

而且，本发明提供将发芽的番荔枝种子提取物或者利用亚临界提取法制备的番荔枝种子提取物作为有效成分含有的抗老化用皮肤外用剂组合物。

本发明的组合物通过使用发芽的番荔枝种子提取物或者利用亚临界提取法制备的番荔枝种子提取物，与以往的常规提取法提取的番荔枝种子提取物相比，含有更多量的氨基酸成分，可提供更加优秀的胶原蛋白合成效果和更高的抗老化效果。

具体实施方式

本发明的皮肤外用剂组合物含有番荔枝种子提取物作为有效成分。

本发明中使用的番荔枝种子是番荔枝树的种子，番荔枝的学名是AnonaCherimolia、Anona Squamosa、Anona Reticulata、Anona Muricata等。

番荔枝的果子是具有柔和奶油色果肉的2-4英寸大小的小块形状，像乳蛋糕一样甜，像薄荷一样清凉，果子内有1厘米大小的黑色籽。

番荔枝的种子含有8种环肽，具有提高皮肤弹性和提拉(lifting)效果，而且有效抑制炎症诱发细胞因子，所以一直用作治疗皮肤病或白斑等的多种民间疗法的材料。

本发明中使用的番荔枝种子提取物是从番荔枝树的种子中提取的，优选是发芽的番荔枝种子中提取的。发芽状态的番荔枝种子与发芽之前相比，含有更多对生命现象必需的有效成分，因此可提供更强效果。

番荔枝种子的发芽条件没有特别限定，可使用以下方法发芽。在21-27℃的温度条件的水中，在此状态保持5-8小时。种子浸泡水中，在25-30℃的温度条件下，将光照条件和黑暗条件反复实施进行发芽。此时，光照条件实施16-18小时，黑暗条件实施5-7小时，培养持续5-7天。

另外，本发明的组合物将利用亚临界提取法(Subcritical Water Extraction)制备的番荔枝种子提取物作为有效成分含有。此时，番荔枝种子可使用发芽之前的番荔枝种子，也可以使用已发芽的番荔枝种子。

以往使用的超临界提取法中，超临界流体的密度与液体类似，粘度和扩散系数与气体类似。因此，将超临界流体作为提取溶剂使用时，很容易渗透到植物体的微细气孔中，得到适当的分子密度，包围所需物质的分子后提取，以此方式得到所需物质的提取物。此时，可制成超临界状态作为提取溶剂而使用的物质首先要满足无毒性，而且因为超临界状态为高温/高压，所以不能有爆炸危险性，并且作为提取溶剂需要具有良好的溶解能力。只要满足上述条件，任何物质都可以制成超临界流体进行提取。

另一方面，本发明中使用的亚临界技术是，将溶剂在不超过临界点的状态下用作提取溶剂，所以根据选择何种溶剂，得到与超临界提取相同的效果。本发明中作为溶剂使用水。另外，超临界二氧化碳不能提取极性物质，所以需要将有机溶剂作为辅助溶剂一起使用，但是亚临界水具有非常好的提取性能，而且操作条件的变化范围广，可实施非极性物质及极性物质的提取。而且，利用亚临界水进行提取时，也可以进行水解反应。

本发明中使用的利用亚临界提取法的番荔枝种子提取物是具体以如下方法制备。将番荔枝种子利用亚临界提取装置在50-200MPa，优选是100MPa的高压下，分解番荔枝种子，提取有效成分。压力小于50MPa时，不能充分提取有效成分，而压力大于200MPa时，相对高压，有效成分提取量并不大，所以在上述范围的压力下进行提取。提取后，在具有1.2μm孔隙的过滤器中过滤一次、在具有0.45μm孔隙的过滤器中过滤一次，在具有0.2μm孔隙的过滤器中过滤一次，去除异物及微生物，得到亚临界番荔枝种子提取物。

本发明的组合物中，相对组合物的总量，可含有0.01-95.0重量％的发芽的番荔枝种子的提取物或通过上述方法制备的亚临界番荔枝种子提取物，优选含有5.0-95.0重量％，更优选是10.0-90.0重量％。提取物的含量不足0.01重量％时，不能得到成分对皮肤的效果，而超过95.0重量％时，不能进一步提高效果，降低其原料效率。

本发明的组合物增强胶原蛋白的合成，由此得到提高皮肤弹性、改善皱纹的良好的抗老化效果。

另外，本发明的组合物除了皮肤的抗老化效果，有助于改善皮肤的整体状态，可提供优良的抗氧化能力，可提供皮肤美白效果、皮肤保湿能力改善效果、抗炎效果、痤疮及过敏性皮炎等皮肤问题的改善效果、皮脂调节效果、毛孔收缩效果、角质改善效果、皮肤紧致或调节效果、通过血液循环改善的面色改善、皮肤刺激缓和效果、动态平衡提高效果等全面的皮肤状态的整体改善效果。

本发明的组合物可含有化妆品学或者皮肤学上允许的介质或基本试剂进行剂型化。可以是适用于局部的所有剂型，例如，可提供为溶液、凝胶、固体、无水膏状物、油相分散在水相的乳液、混悬液、微乳剂、微胶囊、微细颗粒球、或离子型(脂质体)以及非离子型的小囊分散剂的形态，或者霜、化妆水、乳液、粉、软膏、喷雾以及遮瑕棒形态。另外，也可以提供泡沫形态、或者进一步含有压缩的推进剂的喷雾(airosol)组合物的形态。这些组合物可根据本领域的通常方法制备。

另外，本发明的组合物可含有脂肪物质、有机溶剂、溶解剂、浓缩剂、凝胶剂、软化剂、抗氧化剂、助悬剂、稳定剂、发泡剂(foaming agent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子型或非离子型乳化剂、填充剂、金属离子崩解剂、螯合剂、保存剂、维生素、阻断剂、湿润剂、必需油、染料、颜料、亲水性或亲油性活性剂、脂囊泡以及化妆品中常用的任意其他成分的化妆品学或皮肤学领域中通常使用的辅助剂。上述辅助剂的含量为化妆品学或皮肤学领域中通常使用的量。

另外，本发明的组合物为了增加抗老化效果，含有皮肤吸收促进物质。

下面通过试验例和剂型例，进一步说明本发明的组成及效果。这些试验例和剂型例只是为了帮助对本发明的理解，本发明的范畴及范围并不限定于此。

实施例1普通发芽番荔枝种子提取物的制备

将发芽状态的番荔枝种子放入70重量％精制水和30重量％乙醇的溶剂中，在25℃下放置6小时，提取活性成分。提取后，在具有3μm孔隙的过滤器中过滤一次，在具有1μm孔隙的过滤器中过滤一次，消除异物，最后利用除菌过滤器，消除微生物，得到普通的番荔枝种子提取物。

实施例2亚临界番荔枝种子提取物的制备

将不发芽状态的番荔枝种子利用亚临界提取装置，在100MPa的高压下提取有效成分。提取后，在具有1.2μm孔隙的过滤器中过滤一次，在具有0.45μm孔隙的过滤器中过滤一次，在具有0.2μm孔隙的过滤器中过滤一次，消除异物和微生物，得到亚临界番荔枝种子提取物。

实施例3亚临界发芽番荔枝种子提取物的制备

将发芽状态的番荔枝种子利用亚临界提取装置，在100MPa的高压下提取有效成分。提取后，在具有1.2μm孔隙的过滤器中过滤一次，在具有0.45μm孔隙的过滤器中过滤一次，在具有0.2μm孔隙的过滤器中过滤一次，消除异物和微生物，得到亚临界番荔枝种子提取物。

对比例1普通番荔枝种子提取物的制备

将不发芽状态的番荔枝种子放入70％精制水和30％乙醇的溶剂中，在25℃下放置6小时，提取活性成分。提取后，在具有3μm孔隙的过滤器中过滤一次，在具有1μm孔隙的过滤器中过滤一次，消除异物，最后利用除菌过滤器，消除微生物，得到普通的番荔枝种子提取物。

试验例1根据番荔枝种子提取物的提取方法及发芽状态的有效成分含量的比较

利用如下的氨基酸分析方法(OPA方法)，对上述实施例1-3以及对比例1的番荔枝种子提取物，分析各氨基酸的含量。其结果如表1所示。

氨基酸分析方法(OPA方法)

1)HPLC条件

---柱：zorbax柱(专用于氨基酸分析)

---流动相：

A＝1.36g的乙酸钠三水合物+100μl三乙胺→500ml定容→pH 7.2(用乙酸调节)→THF 1.5ml

B＝1.36g的乙酸钠三水合物/100ml H₂O→pH 7.2+甲醇200ml+ACN200ml

---流速：0.5ml/分钟

---注入：为了在线衍生化(online derivatization*)的注入程序

---检测器：338nm

---梯度：在线程序*

2)试剂准备

---氨基酸标准液：天门冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸等试剂各10mg/100ml H₂O

---OPA试剂：由HP公司制备供应的试剂，保质期6个月，安瓶形态

---硼酸缓冲液：100ml单位供給，对氨基酸发色所必需

表1

从上述表1可以看出，利用普通提取方法得到的番荔枝种子提取物(对比例1)的氨基酸的含量假设为100％进行对比时，发芽状态的番荔枝种子提取物(实施例1)和利用本发明的亚临界提取方法制备的番荔枝种子提取物(实施例2)的总氨基酸含量为178％，特别是使用发芽状态的种子进行亚临界提取的发芽番荔枝种子提取物(实施例3)的总氨基酸含量为246％，很明显增多。

因此，可以确认本发明中使用的发芽状态的番荔枝种子提取物以及亚临界发芽番荔枝种子提取物，相比以往的普通番荔枝种子提取物，含有更多有效成分。

参考例1剂型例1-3及对比剂型例1-2的制备

按下述表2的组成，制备剂型例1-3及对比剂型例1-2的化妆水。

表2

剂型例及对比剂型例的制备方法

1)将水相成分在室温下均匀混合。

2)将乙醇相成分加热(50-55℃)，溶解混合均匀。

3)将上述1)在搅拌下添加到上述2)，均匀溶解混合。

试验例2皮肤弹性改善效果

为了测试对人体皮肤的弹性改善效果，利用上述剂型例1-3和对比剂型例1-2，进行如下试验。将30-40岁的女性100名分为5组，每组20名，分别在早晨、晚上每天两次持续4周涂敷在脸上后，利用皮肤弹性测定器(Cutometer SEM 575，C+K Electronic Co.，Germany)，测定皮肤弹性改善效果，其结果如下述表3所示。表3的结果值表示皮肤弹性测定器的皮肤粘弹性(viscoelasticity)的性质。

表3

试验物质	皮肤弹性效果
		剂型例1	0.48±0.10
剂型例2	0.47±0.10
		剂型例3	0.53±0.10
对比剂型例1	0.29±0.09
		对比剂型例2	0.20±0.09

如上述表3所示，含有普通番荔枝种子提取物的对比剂型例1的情况，相比没有含有番荔枝种子提取物的对比剂型例2，显示出150％的皮肤弹性增强效果；而含有发芽的番荔枝种子提取物的剂型例1和含有亚临界番荔枝种子提取物的剂型例2的情况，相比对比剂型例2，显示大约为250％的皮肤弹性增强效果，相比对比剂型例1，显示大约为165％的皮肤弹性增强效果；含有亚临界发芽番荔枝种子提取物的剂型例3的情况，相比对比剂型例2，显示大约为265％的皮肤弹性增强效果，确认具有最好的效果。

试验例3胶原蛋白合成促进效果

将人体成纤维细胞在24孔平板培养基上培养后，替换为按表4的浓度含有普通番荔枝种子提取物和发芽的番荔枝种子提取物的培养基。培养第三天时，将含有10％的胎牛血清的DMEM培养基添加到各孔，每孔添加0.5ml，接着添加L[2，3，4，5-3H]-脯氨酸10μCi。经过24小时后，刮下各孔的培养基和细胞收集，加入到5重量％的三氯乙酸(TCA；Trichloroacetic acid)溶液中水洗后，分到2个试管内，其中一个试管中加入1unit/μl的I型胶原蛋白，在37℃培养90分钟；另一个试管在4℃保管。然后，对这两个试管都加入0.05ml的50％三氯乙酸，在4℃放置20分钟。接着，分别在12000rpm下离心分离10分钟，将各自的上层液和沉淀物通过液体闪烁计数器(LSC)，得到每分钟计数值(CPM：Count per Minute)，利用下述数学式1，得到对照组和实验组的相对胶原蛋白质的生物合成值(RCB)，其结果示于下述表4。

数学式1

表4

如上述表4的结果所示，含有普通番荔枝种子提取物的情况，相比没有含有番荔枝种子提取物的对照组，显示出大约为118％的相对胶原蛋白生物合成值；而含有发芽的番荔枝种子提取物和含有亚临界番荔枝种子提取物的情况，相比对照组，显示出大约为138％的相对胶原蛋白生物合成值；含有亚临界发芽番荔枝种子提取物的情况，相比对照组，显示出153％的相对胶原蛋白生物合成值。

试验例4提拉效果的性能评价

将25-30岁的女性中担忧皮肤松弛的50名分为5组，每组10名，分别用四周时间，以普通化妆水相同使用方法使用上述剂型例1-3和对比剂型例1-2的化妆水，根据使用者的意见，将皮肤提拉效果以如下评价标准进行判定。其结果示于下表5。

评价标准

+++：非常良好的改善效果；

++：明显的改善效果；

+：有些改善效果；

±：没有改善效果，但没有恶化；

-：没有改善效果，且恶化。

表5

如上述表5的结果所示，相比没有含有番荔枝种子提取物的对比剂型例2和含有普通番荔枝种子提取物的对比剂型例1，含有发芽的番荔枝种子提取物的剂型例1和含有亚临界番荔枝种子提取物的剂型例2以及含有亚临界发芽番荔枝种子提取物的剂型例可确认具有迅速且良好的提拉效果。

Claims (6)

1.皮肤外用剂组合物，其特征在于，该组合物含有发芽的番荔枝种子提取物作为有效成分，

其中，采用70重量％精制水和30重量％乙醇的混合溶剂提取所述提取物。

2.皮肤外用剂组合物，其特征在于，该组合物含有利用亚临界提取法制备的番荔枝种子提取物作为有效成分，其中，番荔枝种子是发芽的番荔枝种子，并且以亚临界水为溶剂在50-200MPa压力下提取所述提取物。

3.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其中，相对组合物的总量，所述提取物的含量为0.01-95重量％。

4.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其中，所述组合物是抗老化用皮肤外用剂组合物。

5.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其中，所述组合物是皮肤弹性增强用皮肤外用剂组合物。

6.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其中，所述组合物是胶原蛋白生物合成增强用皮肤外用剂组合物。