CN114966021A - 一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶a2测定试剂盒 - Google Patents
一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶a2测定试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114966021A CN114966021A CN202210545428.9A CN202210545428A CN114966021A CN 114966021 A CN114966021 A CN 114966021A CN 202210545428 A CN202210545428 A CN 202210545428A CN 114966021 A CN114966021 A CN 114966021A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lipoprotein
- reagent
- stabilizer
- assay kit
- associated phospholipase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于临床体外检测试剂技术领域，公开了一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品，其中，试剂R1中的组分包括缓冲液和防腐剂，试剂R2中的组分包括缓冲液、脂蛋白相关磷脂酶A2底物、防腐剂、稳定剂和表面活性剂；其中，所述稳定剂的浓度为1‑5g/L，稳定剂选自氨基酸、糖类、聚乙二醇、羟乙基淀粉和β‑环糊精中的一种或多种。该试剂盒具有较好的贮存稳定性。
Description
技术领域
本发明属于临床体外检测试剂技术领域，具体涉及一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒。
背景技术
这里的陈述仅提供与本发明相关的背景技术，而不必然地构成现有技术。
脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein-associated phospholipaseA2(Lp-PLA2))又称血小板活化因子乙酞水解酶(PAF-AH)，由血管内膜中的巨噬细胞、T细胞和肥大细胞分泌。动脉粥样硬化斑块中Lp-PLA2表达上调，并且在易损斑块纤维帽的巨噬细胞中强表达。
释放到血液循环中的Lp-PLA2主要与富含载脂蛋白(Apo)B的脂蛋白结合。在动脉粥样硬化性疾病患者中，Lp-PLA2水平与LDL亚组分水平呈正相关。
市售的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒一般具有精密度和特异性分析较高的优势，且不需要昂贵的设备进行检测，受到临床的广泛推广。但是现有的脂蛋白相关磷脂酶A2试剂盒存在稳定性较差的问题，贮存时间较短，容易影响检测的准确性。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒。该试剂盒与常规的试剂盒相比，具有较好的准确性、重复性和稳定性，更加有利于试剂盒的临床推广。
为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：
一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品，其中，试剂R1中的组分包括缓冲液和防腐剂，试剂R2中的组分包括缓冲液、脂蛋白相关磷脂酶A2底物、防腐剂、稳定剂和表面活性剂；
其中，所述稳定剂的浓度为1-5g/L，稳定剂选自氨基酸(甘氨酸、精氨酸、L-脯氨酸等)、糖类(蔗糖、海藻糖等)、聚乙二醇(PEG200、PEG400、PEG600、PEG800、PEG6000、PEG8000等)、PluoronicF-68、羟乙基淀粉和β-环糊精中的一种或多种。
上述本发明的有益效果如下：
以上脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂盒中，甘氨酸和PluoronicF-68能够降低酶蛋白的构象或胶体稳定性，β-环糊精可以增强蛋白质的化学修饰，增加蛋白质的半衰期，海藻糖能够保护酶蛋白的热稳定性；
通过在试剂中加入由卡松、甘氨酸、海藻糖、PluoronicF-68和β-环糊精的一种或多种组成的稳定剂，可以有效提高脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂盒的稳定性，延长其贮存时间。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1是本发明实施例1与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图2为实施例2与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图3为实施例3与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图4为实施例4与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图5为实施例5与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图6为实施例6与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图7为实施例7与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图8为实施例8与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图9为实施例9与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图10为实施例10与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图11为实施例11与对比例准确度验证实验检测结果相关性图；
图12为实施例12与对比例准确度验证实验检测结果相关性图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品，其中，试剂R1中的组分包括缓冲液和防腐剂，试剂R2中的组分包括缓冲液、脂蛋白相关磷脂酶A2底物、防腐剂、稳定剂和表面活性剂；
其中，所述稳定剂的浓度为1-5g/L，稳定剂选自氨基酸、糖类、聚乙二醇、PluoronicF-68、羟乙基淀粉和β-环糊精中的一种或多种。
在一些实施例中，所述氨基酸为甘氨酸、精氨酸或L-脯氨酸；
所述糖类为蔗糖或海藻糖；
所述聚乙二醇为PEG200、PEG400、PEG600、PEG800、PEG6000或PEG8000。
在一些实施例中，所述稳定剂为氨基酸、糖类、聚乙二醇、羟乙基淀粉和β-环糊精中至少三种的混合物。
优选的，所述稳定剂为氨基酸、糖类、聚乙二醇、羟乙基淀粉、PluoronicF-68和β-环糊精中至少四种的混合物。
进一步优选的，所述稳定剂为甘氨酸、海藻糖、PluoronicF-68和β-环糊精的混合物，甘氨酸、海藻糖、PluoronicF-68和β-环糊精的浓度分别为0.8-1.2g/L、0.8-1.2g/L、0.08-0.12g/L和0.8-1.2g/L。
甘氨酸和PluoronicF-68能够降低酶蛋白的构象或胶体稳定性，β-环糊精可以增强蛋白质的化学修饰，增加蛋白质的半衰期，海藻糖能够保护酶蛋白的热稳定性，当这四种物质按特定比例配合制备稳定剂时，可以有效提高试剂盒的稳定性，制备的试剂盒的重复多次检测的变异系数更小，可以贮存更好时间。
在一些实施例中，试剂R1的缓冲液的浓度为0.1-0.2mol/L，试剂R2的缓冲液的浓度为0.05-0.1mol/L；两缓冲液的pH值均为7.0。
优选的，所述缓冲液选自磷酸盐、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、硼酸、柠檬酸、碳酸盐、Tris等缓冲液中的一种或多种。
在一些实施例中，所述防腐剂选自卡松、叠氮钠、proclin 300、苯甲酸钠或苯酚中的一种或多种。
优选的，试剂R1和试剂R2中的防腐剂的浓度为1-5g/L。
在一些实施例中，所述表面活性剂为PluoronicF-68、Tweens或曲拉通；
Tweens为Tween20、Tween60或Tween80；
曲拉通为Triton X-100或Triton X-405。
优选的，表面活性剂的浓度为0.1-0.5g/L。
在一些实施例中，脂蛋白相关磷脂酶A2底物的浓度为10-30mmol/L。
实施例1
一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂盒，包括试剂R1和R2。
试剂R1的成分和含量为：
磷酸盐(pH7.0) 0.1mol/L
叠氮钠 1g/L
试剂R2的成分和含量为：
在使用时，其测定方法是采用自动生化分析仪，如日立7180自动分析仪，操作如下：
加入生理盐水、样本或校准品1.5μl，之后再加入试剂R1为120μl孵育5min；加入试剂R2为40μl，60秒后测定初始吸光度A1，再孵育150秒后，读取吸光度A2，计算ΔA/min。
实施例2
一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂盒，包括试剂R1和R2。
试剂R1的成分和含量为：
HEPES(pH7.0) 0.15mol/L
卡松 3g/L
试剂R2的成分和含量为：
检测方法同实施例1。
实施例3
一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂盒，包括试剂R1和R2。
试剂R1的成分和含量为：
Tris(pH7.0) 0.2mol/L
proclin 300 5g/L
试剂R2的成分和含量为：
检测方法同实施例1。
实施例4
与实施例1的区别在于：稳定剂的组成为：甘氨酸1g/L，海藻糖1g/L，PluoronicF-68 0.1g/L。
实施例5
与实施例1的区别在于：稳定剂的组成为：甘氨酸1g/L，海藻糖1g/L。
实施例6
与实施例1的区别在于：稳定剂的组成为：甘氨酸1g/L。
实施例7
与实施例1的区别在于：稳定剂的组成为：海藻糖1g/L。
实施例8
与实施例1的区别在于：稳定剂的组成为：β-环糊精1g/L。
实施例9
与实施例1的区别在于：稳定剂的组成为：甘氨酸1g/L，蔗糖1g/L。
实施例10
与实施例1的区别在于：稳定剂的组成为：甘氨酸1g/L，蔗糖1g/L，PEG200 3g/L。
实施例11
与实施例1的区别在于：稳定剂的组成为：L-脯氨酸1g/L，蔗糖1g/L，PEG200 3g/L，羟乙基淀粉1g/L。
实施例12
与实施例1的区别在于：稳定剂的组成为：甘氨酸1g/L，海藻糖1g/L，PluoronicF-68 0.1g/L，羟乙基淀粉1g/L，β-环糊精1g/L。
对比例
对比例为市场上获得认可的一种脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂盒。
试剂R1组成为：
HEPES缓冲液 200mmol/L
试剂R2组成为：
柠檬酸缓冲液 20mmol/L
脂蛋白相关磷脂酶A2底物 30mmol/L
检测方法同实施例1。
对上述对比例和实施例中制得的试剂盒分析性能进行准确度实验验证。
准确度验证实验：
将实施例1-12的试剂盒作为实验组，对比例中市场上获得认可的准确度优异的脂蛋白相关磷脂酶A2试剂盒作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的结果如图1-图12。
通过图1-图12的检测数据可知，实施例1-12检测试剂盒与对比例测试剂盒的检测结果线性相关系数r2分别为0.9980、0.9983、0.9990、0.9989、0.9988、0.9987、0.9988、0.9989、0.9989、0.9983、0.9986、0.9989，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
重复性验证实验
以对比例为对照组，对实施例1-12的试剂进行对照检测，分别检测质控品(靶值为335U/L)，重复10次，并计算其变异系数，检测结果如表1-1、表1-2和表1-3所示。
表1-1试剂盒重复性检测结果
表1-2试剂盒重复性检测结果
表1-3试剂盒重复性检测结果
由表1-1、表1-2和表1-3可以看出，上述实施例1-12所得试剂重复性CV值均小于2％，优于对照组试剂。
稳定性验证实验
在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测12种试剂的稳定性。12种试剂每月选取同一样本测定三次，取平均值，与新鲜的对比例1试剂检测结果进行比对，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如表2-1、表2-2和表2-3所示。
表2-1稳定性验证实验检测结果
表2-2稳定性验证实验检测结果
表2-3稳定性验证实验检测结果
实验结果显示，对比例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存13个月稳定，而实施例1-12试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存18个月稳定，说明在试剂中加入由甘氨酸、海藻糖、PluoronicF-68和β-环糊精中的一种或多种组成的稳定剂，有效的增加了试剂的稳定性。
综合以上分析，本发明提供的脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂盒，在试剂R2中通过加入甘氨酸、海藻糖、PluoronicF-68和β-环糊精中的一种或多种组成的稳定剂能够有效的提高试剂盒的稳定性，同时试剂的准确度和重复性也较好。因此，本发明提供的脂蛋白相关磷脂酶A2检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：包括试剂R1、试剂R2和校准品，其中，试剂R1中的组分包括缓冲液和防腐剂，试剂R2中的组分包括缓冲液、脂蛋白相关磷脂酶A2底物、防腐剂、稳定剂和表面活性剂；
其中，所述稳定剂的浓度为1-5g/L，稳定剂选自氨基酸、糖类、聚乙二醇、羟乙基淀粉、PluoronicF-68和β-环糊精中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：所述氨基酸为甘氨酸、精氨酸或L-脯氨酸中的一种；
所述糖类为蔗糖或海藻糖；
所述聚乙二醇为PEG200、PEG400、PEG600、PEG800、PEG6000或PEG8000中的一种。
3.根据权利要求1所述的稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：所述稳定剂为氨基酸、糖类、聚乙二醇、羟乙基淀粉和β-环糊精中至少三种的混合物。
4.根据权利要求3所述的稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：所述稳定剂为氨基酸、糖类、聚乙二醇、羟乙基淀粉、PluoronicF-68和β-环糊精中至少四种的混合物。
5.根据权利要求4所述的稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：所述稳定剂为甘氨酸、海藻糖、PluoronicF-68、羟乙基淀粉和β-环糊精的混合物，甘氨酸、海藻糖、PluoronicF-68、羟乙基淀粉和β-环糊精的浓度分别为0.8-1.2g/L、0.8-1.2g/L、0.08-0.12g/L、0.8-1.2g/L和0.8-1.2g/L；
或，所述稳定剂为甘氨酸、海藻糖、PluoronicF-68和β-环糊精的混合物，甘氨酸、海藻糖、PluoronicF-68和β-环糊精的浓度分别为0.8-1.2g/L、0.8-1.2g/L、0.08-0.12g/L和0.8-1.2g/L。
6.根据权利要求1所述的稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：试剂R1的缓冲液的浓度为0.1-0.2mol/L，试剂R2的缓冲液的浓度为0.05-0.1mol/L；两缓冲液的pH值均为7.0。
7.根据权利要求6所述的稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：所述两缓冲液均选自磷酸盐、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、硼酸、柠檬酸、碳酸盐、Tris缓冲液中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：所述防腐剂选自卡松、叠氮钠、proclin 300、苯甲酸钠或苯酚中的一种或多种。
9.根据权利要求1所述的稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂为PluoronicF-68、Tweens或曲拉通中的一种；
Tweens为Tween20、Tween60或Tween80中的一种；
曲拉通为Triton X-100或Triton X-405。
10.根据权利要求1所述的稳定的脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒，其特征在于：脂蛋白相关磷脂酶A2底物的浓度为10-30mmol/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210545428.9A CN114966021B (zh) | 2022-05-19 | 2022-05-19 | 一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶a2测定试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210545428.9A CN114966021B (zh) | 2022-05-19 | 2022-05-19 | 一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶a2测定试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114966021A true CN114966021A (zh) | 2022-08-30 |
| CN114966021B CN114966021B (zh) | 2025-03-04 |
Family
ID=82985359
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210545428.9A Active CN114966021B (zh) | 2022-05-19 | 2022-05-19 | 一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶a2测定试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114966021B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006013921A1 (ja) * | 2004-08-05 | 2006-02-09 | Asahi Kasei Pharma Corporation | プロテアーゼ反応促進剤及び／又は色素の安定化剤を含む試薬 |
| CN101511391A (zh) * | 2006-07-25 | 2009-08-19 | 利普生技术有限公司 | N末端聚唾液酸化 |
| CN105717292A (zh) * | 2016-02-01 | 2016-06-29 | 杭州惟新生物技术有限公司 | 脂蛋白磷脂酶a2检测试剂盒 |
| CN112285367A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-01-29 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 一种检测钙离子的试剂盒及其应用 |
| CN114381495A (zh) * | 2022-03-22 | 2022-04-22 | 北京雅康博生物科技有限公司 | 一种芳香基硫酸酯酶反应试剂、试剂盒及其应用 |
-
2022
- 2022-05-19 CN CN202210545428.9A patent/CN114966021B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006013921A1 (ja) * | 2004-08-05 | 2006-02-09 | Asahi Kasei Pharma Corporation | プロテアーゼ反応促進剤及び／又は色素の安定化剤を含む試薬 |
| CN101511391A (zh) * | 2006-07-25 | 2009-08-19 | 利普生技术有限公司 | N末端聚唾液酸化 |
| CN105717292A (zh) * | 2016-02-01 | 2016-06-29 | 杭州惟新生物技术有限公司 | 脂蛋白磷脂酶a2检测试剂盒 |
| CN112285367A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-01-29 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 一种检测钙离子的试剂盒及其应用 |
| CN114381495A (zh) * | 2022-03-22 | 2022-04-22 | 北京雅康博生物科技有限公司 | 一种芳香基硫酸酯酶反应试剂、试剂盒及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114966021B (zh) | 2025-03-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107727587B (zh) | 一种抗凝血酶ⅲ测定试剂盒及其检测方法 | |
| Pashkova et al. | Coumarin tags for improved analysis of peptides by MALDI-TOF MS and MS/MS. 1. Enhancement in MALDI MS signal intensities | |
| CN106383116A (zh) | 一种检测高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒 | |
| CN105241873A (zh) | 一种脂肪酶检测试剂盒 | |
| CN111808921A (zh) | 一种基于Trinder反应的检测试剂盒及其应用 | |
| CN105203472A (zh) | 一种稳定的游离脂肪酸测定试剂盒 | |
| Bush et al. | Bromcresol purple dye-binding methods underestimate albumin that is carrying covalently bound bilirubin. | |
| CN116410258A (zh) | 因子xi缺乏血浆保护剂及其应用 | |
| CN114966021A (zh) | 一种稳定的脂蛋白相关磷脂酶a2测定试剂盒 | |
| Winecker et al. | HbA1c as a postmortem tool to identify glycemic control | |
| JPH11316228A (ja) | 組換え組織因子に基づく、即時使用可能なプロトロンビン時間試薬 | |
| JPH0670798A (ja) | 尿酸測定用試薬組成物 | |
| CN105400862B (zh) | 一种葡萄糖检测试剂盒 | |
| CN109298190B (zh) | 一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒 | |
| CN107703288A (zh) | 提高反应稳定性的胆汁酸检测试剂 | |
| JP2007151553A (ja) | 安定化コリンエステラーゼ基質溶液 | |
| CN105368917A (zh) | 一种尿素检测试剂盒 | |
| CN102010890B (zh) | 线粒体天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒 | |
| CN115825443A (zh) | 一种α2巨球蛋白测定试剂盒 | |
| JPH04262796A (ja) | 基質液の安定化法及び基質液 | |
| Chen et al. | Proteomic alteration of mitochondrial aldehyde dehydrogenase 2 in sepsis regulated by heat shock response | |
| WO2010101206A1 (ja) | 管理試料の安定化剤、当該安定化剤を含有する管理試料、及び、当該管理試料を含む測定用キット | |
| JP5177479B2 (ja) | 糖化アルブミン測定試薬 | |
| JP4798600B2 (ja) | フルクトシルペプチドオキシダ−ゼの安定化方法 | |
| CN111088320A (zh) | α-L-岩藻糖苷酶测定试剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |