CN114480129A - 一种人粪便保存液及使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物应用技术领域，具体来说是一种人粪便保存液及使用方法，人粪便保存液包含：6.5‑8g/L甘氨酸，8‑9.5g/L氯化钠，5‑6g/L牛血清蛋白，200‑220g/L肌氨酸，0.01%‑0.1%Krovin500，1‑5mL 10M的NaOH溶液，300μL/L消泡剂SE‑15。提供一种安全便捷，常温下就可以很好保存、运输的粪便保存液。
Description
技术领域
本发明涉及生物应用技术领域，具体来说是一种人粪便保存液及使用方法。
背景技术
人体微生物数量巨大，数目是人身体细胞数的10倍还要高，这些微生物被一些研究人员认为是人体的一个“器官”，它关乎我们人体的健康，微生物的检测也越来越重要，而这些微生物绝大多数存在于肠道中，所以我们需要从粪便中提取微生物的DNA，进而进行相关检测。现在面临的问题是，一旦粪便被排除体外则微生物的生存环境发生巨大的变化，所以需要及时对粪便进行保存，而粪便可以在-20℃下保存1周其中的微生物可以得到很好的保存，但是很多情况下粪便样品的采集不在实验室，不能及时放入-20℃的环境下保存，所以需要一款常温下即可保存粪便微生物的保存液和对应的使用方法。
申请公布号为CN 106769289 A的中国发明专利公开了组分为“缓冲剂：20-50mM的Tris buffer(pH 7.4)，封闭剂：5-15％的牛血清蛋白、0.10-0.20％Tween-20、120-160mM氯化钠，金属离子螯合剂：10-20mM EDTA，防腐剂：0.090-0.15％叠氮化钠、10-20μg/mL庆大霉素”的粪便保存液，虽然将常用的封闭剂乙醇替换掉，便于运输，但是使用剧毒品叠氮化钠作为防腐剂，对医护人员来说，仍有很大的风险。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种安全便捷，常温下就可以很好保存、运输的粪便保存液。
为了实现上述目的，设计一种人粪便保存液，包含：6.5-8g/L甘氨酸，8-9.5g/L氯化钠，5-6g/L牛血清蛋白，200-220g/L肌氨酸，0.01％-0.1％Krovin500，1-5mL10M的NaOH溶液，300μL/L消泡剂SE-15。
优选地，所述保存液所有组分均用无菌去离子水溶解。
优选地，所述保存液pH为8.0-8.5。
还涉及了一种保存液的使用方法，使用时，新鲜粪便与保存液质量体积比为1：3。
本发明同现有技术相比，其优点在于：不含乙醇方便运输，不含异硫氰酸胍，叠氮化钠等有毒物质更安全，常温保存一周后DNA仍未被破坏，能大量提取出来。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，本发明的结构和原理对本专业的人来说是非常清楚的。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：(本配方)
取新鲜粪便与保存液质量体积比为1：3，进行混匀，常温下保存一周进行DNA提取，DNA提取使用的是天根的粪便基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)。
对比例1：(生理盐水对照组)
取新鲜粪便与0.9％氯化钠溶液质量体积比为1：3，进行混匀，常温下保存一周进行DNA提取，DNA提取使用的是天根的粪便基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)。
不同上述实施例1和对比例1所提取的核酸的测试：
采用紫外分光光度计测定实施例1和对比例1的核酸的浓度，实验结果如下所示：
表1不同实施例所提取的核酸的浓度和纯度测定结果
实施例1和对比例1对比可知，实施例1保存样品一周后提取出的DNA浓度为213.1ng/mL，而对比例1保存样品一周后提取出的DNA浓度为7.8ng/mL，相比于实施例1相差巨大，由二者浓度差可以看出，通过保存液保存的样品在一周后仍可提取出高浓度的DNA，而通过0.9％氯化钠溶液保存的样品一周后DNA被严重破坏，余量很少。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1. 一种人粪便保存液，其特征在于，包含：6.5-8g/L甘氨酸，8-9.5g/L氯化钠，5-6g/L牛血清蛋白，200-220g/L肌氨酸，0.01%-0.1% Krovin500，1-5mL 10M的NaOH溶液，300μL/L消泡剂SE-15。
2.根据权利要求1所述一种人粪便保存液，其特征在于，保存液所有组分均用无菌去离子水溶解。
3.根据权利要求1或2所述一种人粪便保存液，其特征在于，所述保存液pH为8.0-8.5。
4.如权利要求1所述一种人粪便保存液的使用方法，其特征在于，使用时，新鲜粪便与保存液质量体积比为1：3。
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