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CN112166123B - 抗紧密连接蛋白18.2抗体 - Google Patents

抗紧密连接蛋白18.2抗体 Download PDF

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CN112166123B CN201980016664.8A CN201980016664A CN112166123B CN 112166123 B CN112166123 B CN 112166123B CN 201980016664 A CN201980016664 A CN 201980016664A CN 112166123 B CN112166123 B CN 112166123B
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丁怡
董晨
李志伟
约翰·利平可特
司秉慧
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Beijing Xuan Yi Medical Science And Technology Co ltd
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Abstract

本发明提供了抗紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)抗体及其片段。还提供了编码抗CLDN18.2抗体的经分离核酸分子、包含此类核酸的载体和包含此类载体或核酸的宿主细胞。提供了制备抗CLDN18.2的方法。还提供了相关医药组合物和使用此类医药组合物治疗与异常CLDN18.2表达相关的病症(例如，癌症)的方法。

Description

抗紧密连接蛋白18.2抗体
相关申请案的交叉参考
本专利申请案主张2018年3月14日申请的美国临时申请案第62/643,035号和2019年2月8日申请的美国临时申请案第62/803,297号的优先权，该等申请案的内容以全文引用的方式并入本文中。
序列表以ASCII正文档案提交
以下以ASCII正文档案提交的内容系以全文引用的方式并入本文中：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名：776172000141SEQLIST.TXT，记录日期：2019年3月14日，大小：82,610字节)。
背景技术
紧密连接蛋白为表达于上皮及内皮中且形成决定紧密连接渗透性的细胞旁障壁及微孔的紧密连接膜蛋白家族。紧密连接蛋白18同型2(CLDN18.2)，即紧密连接蛋白18蛋白的剪接变异体，为表达于短寿命经分化胃上皮细胞上的胃系抗原。在其他健康人类组织中，CLDN18.2的表达通常不可侦测。然而，CLDN18.2大量地异位表达于多种人类癌症中，包括胃食道癌及胰脏癌(Sahin等人(2008)Clin Cancer Res,14(23):7624-34)。时常在胃癌的癌转移中也侦测到CLDN18.2。
胃癌为全球最常见癌症之一，为发达国家中癌症相关死亡的第四(男性)和第五(女性)常见原因。2012年估计出现了951,600个新的胃癌病例及723,100例死亡(Torre等人(2015)CA Cancer J.Clin.65(2):87-108)。大部分患有胃癌的患者通常在疾病晚期才得到诊断，且通常需要用姑息性化疗，给予8-10个月的中位生存时间。因此，需要针对表达CLDN18.2的癌细胞的抗体疗法。本发明满足此需求及其他需求。
发明内容
提供了一种抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段，包含：(a)包含GX1X2FX3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:11)的CDR-H1，其中X1为F或Y；X2为T或S；X3为T或S；X4为D、G、V、N或S；X5为Y、W或N；X6为G、N、S或A；X7为M或I；且X8为F、H、S、Y或N；(b)包含X1IX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14KG(SEQ ID NO:30)的CDR-H2，其中X1为Y、E、T、H或N；X2为S、N、D、Y或I；X3为S、P或I；X4为G、N、K、R或Y；X5为S、N、G或Y；X6为S、G、T、N或D；X7为N、T、V、Y、I或P；X8为I、T或F；X9为Y、H或N；X10为Y或S；X11为A、N、P、T或V；X12为D、Q或E；X13为T、K、S或R；且X14为V、F、M或L；(c)包含X1X2X3GNX4X5X6Y(SEQ ID NO:43)的CDR-H3，其中：X1为I、F、P、A、Q或H；X2为A、Y、V、T；X3为R或Y；X4为A、V、S或T；X5为M、L或F；且X6为D或A；(d)包含X1SX2QX3LX4NX5X6NX7X8NYLX9(SEQ ID NO:54)的CDR-L1，其中：X1为K或R；X2为S或R；X3为S或I；X4为L或F；X5为S或T；X6为G或E；X7为Q或L；X8为K或R；且X9为T、A或S；(e)包含WX1STRX2S(SEQ ID NO:58)的CDR-L2，其中X1为A或T；且X2为E或D；和(f)包含QX1X2X3X4X5PX6X7(SEQ ID NO:71)的CDR-L3，其中X1为N或D；X2为D、G、N或A；X3为Y或F；X4为F、S、I或Y；X5为Y或F；X6为L或F；且X7为T或P。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:1-6和8-10中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12-16和18-28中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ IDNO:31-42中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44-47和49-52中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55-57中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:59-63和65-70中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段不特异性结合CLDN18.1。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMF(SEQ ID NO:1)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSNIYYADTVKG(SEQ ID NO:12)的CDR-H2，和(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YINSGSSTIYYADTVKG(SEQ ID NO:13)的CDR-H2，和(c)包含FARGNVLDY(SEQ ID NO:32)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含RSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQ ID NO:45)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GYSFTGYNIH(SEQ ID NO:3)的CDR-H1，(b)包含YIDPNNGVTYSNQKFKG(SEQ ID NO:14)的CDR-H2，和(c)包含PYYGNSFDY(SEQ ID NO:33)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNLRNYLT(SEQ ID NO:46)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QDGYFYPFP(SEQ ID NO:61)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GYTFTVWSMS(SEQID NO:4)的CDR-H1，(b)包含EIYPKSGNTHYNEKFKG(SEQ ID NO:15)的CDR-H2，和(c)包含AYYGNSFAY(SEQ ID NO:34)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQID NO:47)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDFIYPFT(SEQID NO:62)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSNNAMS(SEQ ID NO:5)的CDR-H1，(b)包含TIIIGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:16)的CDR-H2，和(c)包含QVYGNSFAY(SEQ ID NO:35)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNNYFYPFT(SEQ ID NO:63)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，和(c)包含FVRGNSMDY(SEQ ID NO:36)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含HISSGSNIIHYADTLKG(SEQ ID NO:19)的CDR-H2，和(c)包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNAYSFPLT(SEQ ID NO:66)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，和(c)包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3；和/或VL域，其包含(d)包含KSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQID NO:47)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQID NO:60)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSNTFYYTDTVKG(SEQ ID NO:20)的CDR-H2，和(c)包含FTRGNALDY(SEQ ID NO:38)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)包含YISSGSNTIYYADTVKG(SEQ ID NO:21)的CDR-H2，和(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含HISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:22)的CDR-H2，和(c)包含FVRGNALDY(SEQ ID NO:39)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIHYVDTMKG(SEQ ID NO:23)的CDR-H2，和(c)包含FARGNTLDY(SEQ ID NO:40)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLFNTGNQKNYLT(SEQID NO:49)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含NGYSYPLT(SEQID NO:60)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIYYADTVKG(SEQ ID NO:24)的CDR-H2，和(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLFNSGNQRNYLA(SEQ ID NO:50)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSPIYYADTVKG(SEQ ID NO:25)的CDR-H2，和(c)包含FARGNAMDY(SEQ ID NO:41)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRDS(SEQ ID NO:56)的CDR-L2，和(f)包含QNNYYYPLT(SEQ ID NO:68)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，和(c)包含FVRGNSMDY(SEQ ID NO:36)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSNYAMS(SEQID NO:8)的CDR-H1，(b)包含TIIIGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:16)的CDR-H2，和(c)包含QVYGNSFAY(SEQ ID NO:35)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNNYIYPFT(SEQID NO:69)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)包含YISSGSNNIYYADTVKG(SEQ ID NO:26)的CDR-H2，和(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GYTFTSWSIS(SEQ ID NO:9)的CDR-H1，(b)包含EIYPRSDNIHYNEKFKG(SEQ ID NO:27)的CDR-H2，和(c)包含AYYGNSFAY(SEQ ID NO:34)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQILLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:51)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYYYPFT(SEQ ID NO:70)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GYSFTGYNMN(SEQ ID NO:10)的CDR-H1，(b)包含NINPYYSNTNYNQRFKG(SEQ ID NO:28)的CDR-H2，和(c)包含CDRGNSFDY(SEQ ID NO:42)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSRQSLFNSENQKNYLS(SEQ ID NO:52)的CDR-L1，(e)包含WTSTRES(SEQ ID NO:57)的CDR-L2，和(f)包含QNNYIYPFT(SEQ ID NO:69)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段不特异性结合CLDN18.1。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:72-76、78-85和87-92中的任一个中所列的氨基酸序列的VH域，和/或包含SEQ ID NO:94-98、100-107和109-114中的任一个中所列的氨基酸序列的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:72的VH域和/或包含SEQ ID NO:94的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ IDNO:73的VH域和/或包含SEQ ID NO:95的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:74的VH域和/或包含SEQ ID NO:96的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:75的VH域和/或包含SEQ ID NO:97的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:76的VH域和/或包含SEQ ID NO:98的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:78的VH域和/或包含SEQ ID NO:100的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:79的VH域和/或包含SEQ IDNO:101的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:80的VH域和/或包含SEQ ID NO:102的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:81的VH域和/或包含SEQ ID NO:103的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:82的VH域和/或包含SEQ ID NO:104的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:83的VH域和/或包含SEQ IDNO:105的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:84的VH域和/或包含SEQ ID NO:106的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:85的VH域和/或包含SEQ ID NO:107的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:87的VH域和/或包含SEQ ID NO:109的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:88的VH域和/或包含SEQ IDNO:110的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:89的VH域和/或包含SEQ ID NO:111的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:90的VH域和/或包含SEQ ID NO:112的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:91的VH域和/或包含SEQ ID NO:113的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:92的VH域和/或包含SEQ IDNO:114的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段不特异性结合CLDN18.1。
提供了一种抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)包含GFX1FSDYGMX2(SEQ ID NO:121)的CDR-H1，其中X1为T或S；且X2为HY；(b)包含X1ISSGSSX2IYX3ADTX4KG(SEQID NO:122)的CDR-H2，其中X1为Y、H或F；X2为S或T；X3为Y或C；且X4为V或M；(c)包含X1ARGNX4MDY(SEQ ID NO:123)的CDR-H3，其中X1为I或F；且X4为T或A；(d)包含KSSQSLLNSGNX1X2NYLX3(SEQ ID NO:124)的CDR-L1，其中X1为Q或L；X2为R或K；且X3为T或A；(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2；和(f)包含QNX1YX2YPLT(SEQ ID NO:125)的CDR-L3，其中X1为G或D；且X2为S或F。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段结合紧密连接蛋白18.1(CLDN18.1)。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含SEQ ID NO:2、6和7中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ ID NO:17、22和29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2，和(c)包含SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:37中所列的氨基酸序列的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含SEQ ID NO:44、48和53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1，(e)包含SEQ ID NO:55中所列的氨基酸序列的CDR-L2，和(f)包含SEQ ID NO:59、60和64中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段结合紧密连接蛋白18.1(CLDN18.1)。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSSIYYADTVKG(SEQ ID NO:17)的CDR-H2，和(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQRNYLA(SEQ ID NO:48)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYSYPLT(SEQ ID NO:64)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFSFSDYGMH(SEQ ID NO:7)的CDR-H1，(b)包含HISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:22)的CDR-H2，和(c)包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)包含FISSGSSTIYCADTVKG(SEQ ID NO:29)的CDR-H2，和(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNLKNYLT(SEQ ID NO:53)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段结合紧密连接蛋白18.1(CLDN18.1)。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:77、86和93中的任一个中所列的氨基酸序列的VH域，和/或包含SEQ ID NO:99、108和115中的任一个中所列的氨基酸序列的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ IDNO:77的VH域和/或包含SEQ ID NO:99的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:86的VH域和/或包含SEQ ID NO:108的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:93的VH域和/或包含SEQ ID NO:115的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段结合紧密连接蛋白18.1(CLDN18.1)。
提供了一种抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其包含由4个氨基酸、小于4个氨基酸或三个氨基酸组成的CDR-H3。还提供了一种抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)包含GYTFX1X2YX3X4H(SEQ ID NO:139)的CDR-H1，其中：X1为T或I；X2为S或N；X3为L或V；且X4为I或M；(b)包含YINPX1X2DGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:140)的CDR-H2，其中：X1为Y或F；且X2为N或D；(c)包含GDX1的CDR-H3，其中X1为F或Y；(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ IDNO:44)的CDR-L1；(e)包含WASX1RX2S(SEQ ID NO:141)的CDR-L2，其中X1为T或I；且X2为A或D；和(f)包含LNDYSFPLT(SEQ ID NO:131)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段特异性结合紧密连接蛋白18.1(CLDN18.1)。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:128或132中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQID NO:129或133中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含GDF或GDY的CDR-H3；(d)包含SEQID NO:44中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:130或134中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:131中所列的氨基酸序列的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：(i)VH域，其包含：(a)包含GYTFISYLIH(SEQ ID NO:128)的CDR-H1，(b)包含YINPYNDGTKYNEKFKG(SEQ IDNO:129)的CDR-H2，(c)包含GDF的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASIRAS(SEQ ID NO:130)的CDR-L2，和(f)包含LNDYSFPLT(SEQ ID NO:131)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：VH域，其包含：(a)包含GYTFTNYVMH(SEQ IDNO:132)的CDR-H1，(b)包含YINPFDDGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:133)的CDR-H2，(c)包含GDY的CDR-H3；和/或VL域，其包含：(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRDS(SEQ ID NO:134)的CDR-L2，和(f)包含LNDYSFPLT(SEQ ID NO:131)的CDR-L3。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段特异性结合紧密连接蛋白18.1(CLDN18.1)。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:135和136中的任一个中所列的氨基酸序列的VH域；和/或包含SEQ ID NO:137和138中的任一个中所列的氨基酸序列的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:135的VH域；和/或包含SEQ ID NO:137的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:136的VH域；和/或包含SEQ ID NO:138的VL域。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段特异性结合紧密连接蛋白18.1(CLDN18.1)。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段包含人类IgG的Fc序列。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该人类IgG为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段为嵌合、人源化或人类抗体。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗原结合片段系选自由以下组成的群：Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段、双功能抗体和线性抗体。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗体为多特异性抗体。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该CLDN18.2为人类CLDN18.2。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该CLDN18.1为人类CLDN18.1。
在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段系与治疗剂接合。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段系与标记物接合。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，标记物选自由以下组成的群：放射性同位素、荧光染料和酶组成的群组。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段为抗CLDN18.2构筑体的部分，例如嵌合抗原受体(抗CLDN18.2 CAR)。在一些实施例中，该抗CLDN18.2 CAR包含：包含抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段的胞外域、跨膜域和胞内信号传导域。在一些实施例中，该胞内信号传导域包含CD3ζ胞内信号传导序列和共刺激信号传导序列或共刺激信号传导序列的组合。在一些实施例中，该共刺激信号传导序列为CD28胞内信号传导序列。在一些实施例中，该共刺激信号传导序列为4-1-BB胞内信号传导序列。在一些实施例中，该共刺激信号传导序列为CD28和4-1-BB或其他共刺激信号传导序列的组合。在一些实施例中，该胞内信号传导域包含CD3ζ胞内信号传导序列和共刺激信号传导序列，或共刺激信号传导序列的组合，该传导序列与细胞因子转基因一起经转染，例如CAR诱导的介白素-12(IL-12)卡匣。
提供了经分离核酸分子，其编码根据(或适用于)上述任何实施例的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段(或抗CLDN18.2构筑体)。还提供了表达载体，其编码根据(或适用于)上述任何实施例的核酸分子。提供了宿主细胞，其包含根据(或适用于)上述任何实施例的核酸分子或表达载体。还提供了免疫细胞(例如T细胞、NK细胞或巨噬细胞)和制备此类免疫细胞的方法，该等免疫细胞包含上文所描述的抗CLDN18.2 CAR中的任一个(例如抗CLDN18.2 CART)。
还提供了一种制备抗CLDN18.2抗体的方法，其包含培养根据(或适用于)上述任何实施例的宿主细胞。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，该方法进一步包含回收来自细胞培养物的抗体。
提供了一种侦测来自患者的样本中CLDN18.2蛋白的方法，此方法通过根据(或应用于)上述任何实施例的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段与样本接触和侦测结合于CLDN18.2蛋白的抗CLDN18.2抗体来进行。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段用于免疫组织化学分析(IHC)或ELISA分析。
还提供了一种组合物，其包含根据(或适用于)上述任何实施例的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段和医药学上可接受的载剂。提供了一种治疗个体癌症的方法，其包含给予该个体有效量的根据(或适用于)上述任何实施例的医药组合物。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，癌症选自实体肿瘤、胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌。在根据(或适用于)以上任何实施例的一些实施例中，向个体进一步给予选自由以下组成的群的治疗剂：抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂和细胞毒性剂。
附图说明
本专利或申请案文件含有至少一幅彩制图。根据申请并支付必要费用后，专利局将提供具有彩色图式的本专利或专利申请公开案的复本。
图1展示了使用来自杂交瘤的上层清液进行FACS分析的结果，以评定抗体与HEK293-CLDN18.2(红色)、HEK293-CLDN18.1(蓝色)和亲本HEK293细胞(灰色)的结合。
图2展示了进行ELISA的结果，以评定经纯化嵌合抗CLDN18.2抗体与HEK293-CLDN18.1间的相互作用。
图3A提供了实验结果，进行该等实验以评定与参考抗CLDN18.2抗体IMAB362相比，抗CLDN抗体10-K12-A、1-B13-A、1-M5-A、2-D22-A、4-N1-A、5-J22-A、6-C5-A、6-M11-A、7-A21-A和7-B15-A与KATO III人类胃癌细胞表面表达的CLDN18.2的结合。
图3B提供了实验结果，进行该等实验以评定与参考抗CLDN18.2抗体IMAB362相比，抗CLDN抗体7-E20A、7-G17-A、9-B11-A、9-C6-A、9-M7-A、9-N14-A、10-J10-B和10-P12-A与KATO III人类胃癌细胞表面表达的CLDN18.2的结合。
图3C提供了实验结果，进行该等实验以评定与参考抗CLDN18.2抗体IMAB362相比，抗CLDN18.2抗体10-K12-A、1-B13-A、9-M7-A和10-P12-A与NUGC-4人类胃腺癌细胞表面表达的CLDN18.2的结合。
图4A提供了ELISA实验的结果，进行该等实验以确定抗CLDN18.2抗体10-K12-A、1-B13-A、6-C5-A、7-A21-A、7-G17-A、9-B11-A、9-M7-A、9-N14-A和10-J10-B是否可结合至肽2C，即一种先前已展示以次纳摩尔亲和力结合抗CLDN18.2抗体IMAB362的环化肽。
图4B提供了ELISA实验的结果，进行该等实验以确定抗CLDN18.2抗体10-K12-A、1-B13-A、6-C5-A、7-A21-A、7-G17-A、9-B11-A、9-M7-A、9-N14-A和10-J10-B是否可结合至肽3C，即一种先前已展示以次纳摩尔亲和力结合抗CLDN18.2抗体IMAB362的环化肽。
图5提供了竞争分析的结果，进行该分析以确定肽2C或3C是否抑制抗CLDN18.2抗体10-K12-A、1-B13-A、1-M5-A、2-D22-A、4-N1-A、5-J22-A、6-C5-A、6-M11-A、7-A21-A、7-B15-A、7-E20A、7-G17-A、9-B11-A、9-C6-A、9-M7-A、9-N14-A、10-J10-B、10-P12-A或参考抗体IMAB362与HEK293-CLDN18.2细胞的结合。
图6A和图6B提供了小鼠中的患者来源胃肿瘤异种移植(PDX)实验的结果，进行该等实验以评定抗体1-B13-A、7-G17-A、9-M7-A和参考抗体IMAB362在抑制肿瘤生长方面的活体内功效。图6A展示用各抗体(或媒剂对照)处理期间随时间变化的平均肿瘤体积。图6B展示用各抗体(或媒剂对照)处理期间随时间变化的肿瘤生长抑制％。
具体实施方式
定义
在详细描述所揭示实施例之前，应理解本发明不限于特定组合物或生物系统，当然可变化。还应理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施例的目的，且并不是意图限制实施例。
在本说明书和所附权利要求书中使用的单数形式“一(a/n)”和“该、所述(the)”包括复数个指示物，除非文中另有明确规定。因此，例如，提及“一个分子”视情况包括两个或多于两个此类分子的组合，等等。
用于本文的术语“约”指本领域技术人员易于知晓的各别值的常见误差范围。本文中，对“约”一个值或参数的提及包括(和描述)针对该值或参数本身的实施例。
应理解，本发明的态样和实施例包括“包含”态样和实施例、“由态样和实施例组成”和“基本上由态样和实施例组成”。
术语“紧密连接蛋白18”或“CLDN18”优选地指人类CLDN18并包括CLDN 18例如CLDN18.1和CLDN18.2的任何剪接变异体。CLDN18.1和CLDN18.2在包含第一跨膜(TM)区和环1的N端部分不同，而C端的一级蛋白序列相同。
术语“CLDN18.1”优选地指人类CLDN18.1，且特别地，指包含氨基酸序列
Figure GDA0002661925870000101
Figure GDA0002661925870000111
或该氨基酸序列的变异体的蛋白质。
术语“CLDN18.2”优选地指人类CLDN18.2，且特别地，指包含氨基酸序列
Figure GDA0002661925870000112
或该氨基酸序列的变异体的蛋白质。
术语“CLDN”“CLDN18”“CLDN18.1”和“CLDN18.2”指任何翻译后修饰变异体和构形变异体。
本文所用的术语“抗体”可指代完整(全长)抗体；抗体片段(包括(但不限于)Fab、F(ab')2、Fab'-SH、Fv、双功能抗体、scFv、scFv-Fc、单域抗体、单重链抗体和单轻链抗体)，如果它们展现出所需的生物活性(例如，抗原决定基结合)；单株抗体；多株抗体；单特异性抗体；多特异性抗体(例如，双特异性抗体)；和抗体样蛋白，包括(但不限于)，例如融合蛋白、经半胱氨酸工程改造的抗体、共价修饰抗体和抗体缀合物(如抗体-药物缀合物或与可侦测标记物缀合的抗体)。
“被分离”抗体可指代已从其自然环境的组分(例如宿主细胞或生物体)中分离和/或回收的抗体。在一些实施例中，抗体被纯化至所需纯度(例如，至少95％)；和/或通过SDS-PAGE的应用进行同质化监测，比如使用例如银、考马斯蓝(Coomassie)等染色。在一些实施例中，依循一个或多个纯化步骤获得被分离抗体。
如本领域中已知，“原生”抗体是指包括两个相同轻(L)链和两个相同重(H)链的典型异四聚体复合物。除链内二硫桥键以外，可变数量的二硫键连接两个重链，且一个二硫键将各轻链连接至一重链。这些重链包括一个接着(N端至C端)三个或四个恒定域的可变域(VH)。这些轻链包括一个接着一恒定域(CL)的可变域(VL)。通常，哺乳动物轻链基于胺基酸序列属于两个类别中的一个：κ和λ。
“恒定域”可指代抗体或片段更保守的部分，例如可变域外部。该术语可包括CL域以及重链恒定域CH1、CH2、CH3和视情况存在的CH4。
重链的恒定域可分为5个主要类型中的一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。许多这些主要类型具有若干亚型。不同类别的免疫球蛋白的次单元结构和三维构形为已知的和一般描述于例如Abbas等人,Cellular and Mol.Immunology,第4版(W.B.Saunders公司,2000)中。
本文所用的术语“抗体可变域”指抗体轻链和重链的包括互补决定区(CDR，例如CDR L1、CDR L2、CDR L3、CDR H1、CDR H2和CDR H3)和构架区(FR)的部分。
术语“可变”指可变域的子序列的顺序在抗体之间基本上不同，且其对于特定抗体针对其抗原的结合特异性至关重要。可变性在VH和VL域两者中集中于的三个“高变区”(HVR)或“互补决定区”(CDR)中。(术语“HVR”和“CDR”在本文中可互换使用。)可变域更保守部分被称作构架区(FR)，其中穿插有CDR。原生重链和轻链的可变域各自包含四个通过三个成环CDR相连的FR区(参见Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第五版,National Institute of Health,Bethesda,Md.(1991))。
术语“高变区(HVR)”或“互补决定区(CDR)”可指代特征在于增强的序列可变性和/或限定环的形成的VH和VL域的子区。这些子区包括VH域中的三个CDR(H1、H2和H3)和VL域中的三个CDR(L1、L2和L3)。H3被认为在赋予良好结合特异性方面至关重要，L3和H3展示最高水平的多样性。参见Johnson和Wu的Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo,编,Human Press,Totowa,N.J.,2003)。
已知多种CDR/HVR描绘。Kabat互补决定区(CDR)是基于序列可变性并且是最常用的(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。Chothia指结构环的位置(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM HVR表示Kabat HVR与Chothia结构环之间的妥协，且由Oxford Molecular的AbM抗体模型化软件使用。“接触”HVR是基于可用复合晶体结构的分析。来自这些HVR/CDR中的每一个残基标注如下。“构架”或“FR”残基为除HVR/CDR残基外的那些可变域残基。
Figure GDA0002661925870000121
Figure GDA0002661925870000131
还已知“扩展”HVR：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)；和VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)(Kabat编号)。
“根据Kabat的编号”可指代前述Kabat等人用于抗体编译的重链可变域或轻链可变域的编号系统。实际线性氨基酸序列可对应于可变域的FR或HVR的缩短或嵌入含有更少氨基酸或额外氨基酸。对于既定抗体，可通过将抗体序列的同源区与”标准”Kabat编号序列比对来确定残基的Kabat编号。通常，在提及可变域中的残基(大致为轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时使用Kabat编号，而在提及重链恒定区中的残基时通常使用EU编号系统或指数(例如，根据EU IgG1的如同Kabat编号的EU指数)。
与抗体片段相对，“全长”或“完整”抗体通常包括例如具有Fc区的重链。具有单一抗原结合位点的抗原结合“Fab”片段可释放自通过木瓜酶分解的残余Fc片段。F(ab')2片段包括通过抗体的胃蛋白酶处理产生的两个抗原结合位点。然而，抗体片段将包括一或多个抗体可变区。
“Fv”片段含有完整抗原结合位点。单链Fv(scFv)可包括VH和VL域，其通过肽连接符连接以使得VH域和VL域例如在抗体或Fab片段中缔合，使得HVR形成抗原结合位点。参见Pluckthün的The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编,(Springer-Verlag,New York,1994)，第269-315页。在一些实施例中，scFv与抗体Fc域融合(例如，scFv-Fc)。虽然六个HVR通常包含一抗原结合位点，但具有三个HVR的单一可变域仍能够结合抗原，虽然是以较低亲和力结合。参见Hamers-Casterman等人,Nature363:446-448(1993)；Sheriff等人,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。单域抗体(例如，骆驼科抗体)通常包括用于抗原结合的单一单体可变域。单重链(VHH)和单轻链抗体也是已知的。相比Fab片段，Fab'片段通常在C端处包括更多残基。Fab'-SH包括具有游离硫醇基的半胱氨酸残基。片段的各种化学偶合在本领域中是已知的。
“双功能抗体”包括具有两个抗原结合位点的抗体片段。这些抗体片段包括由连接符连接的VH和VL域，该连接符通常过短而不能促进同一链中域的配对。双功能抗体可为二价或双特异性的。三功能抗体和四功能抗体或其他数量的VH/VL域是已知的。参见Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)。
本文所用的“单株”抗体是指获自基本上同质抗体(例如基本上相同但允许少量背景突变和/或修饰)的群体的抗体。“单株”表示基本上同质的抗体特性，且不需要通过任何特定方法产生的抗体。在一些实施例中，单株抗体系根据其HVR、VH和/或VL序列和/或结合特性而选择的，例如选自一个克隆池(例如，重组型、杂种瘤或噬菌体衍生型)。单株抗体可经工程改造为包括一或多个突变，例如以影响抗体的结合亲和力或其他特性、产生人源化或嵌合抗体、改良抗体产生和/或同构化、工程改造多特异性抗体，其所得抗体仍被视为实质上单株的。单株抗体群体可区别于多株抗体，因为该群体的个别单株抗体识别同一抗原位点。用于产生单株抗体的多种技术是已知的；参见例如杂种瘤方法(例如，Kohler和Milstein,Nature,256:495-97(1975)；Hongo等人,Hybridoma,14(3):253-260(1995),Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor LaboratoryPress,第2版1988)；Hammerling等人,Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(参见例如美国专利第4,816,567号)、噬菌体呈现技术(参见例如Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；和Lee等人,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)，和用于在具有部分或所有人类免疫球蛋白基因座或编码人类免疫球蛋白序列的基因的动物中产生人类或人类样抗体的技术(参见例如WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO1991/10741；Jakobovits等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits等人,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann等人,Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利第5,545,807号、第5,545,806号、第5,569,825号、第5,625,126号、第5,633,425号和第5,661,016号；Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等人,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild等人,NatureBiotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996)；和Lonberg和Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995)。
“嵌合”抗体可指代抗体，其一部分来自特定同型、类别或生物体的重链和/或轻链，并且另外一部分来自另一同型、类别或生物体。在一些实施例中，可变区将来自一个来源或生物体，并且恒定区将来自另一来源或生物体。
“人源化抗体”可指代具有占主要人类序列和最低量的非人类(例如，小鼠或鸡)序列的抗体。在一些实施例中，人源化抗体具有一或多个来自来源于接枝至人类受体抗体构架(FR)上的非人类(例如，小鼠或鸡)生物体的抗体的HVR序列(带有相关结合特异性)。在一些实施例中，非人类残基进一步经接枝至人类构架(不存在于来源或接受者抗体上)，例如以改良抗体特性。一般而言，人源化抗体将包含至少一个且通常两个可变域的全部，其中所有或基本上所有高变环对应于非人类免疫球蛋白的高变环且所有或基本上所有FR为人类免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体视情况也将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常包含人类免疫球蛋白恒定区的至少一部分。参见Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596(1992)。
“人类”抗体可指代具有如下氨基酸序列的抗体：该氨基酸序列对应于由人类产生的和/或使用用于制备如本文所揭示的人类抗体的这些技术中的任何一个制备的抗体的氨基酸序列。人类抗体可使用现有技术中已知的各种技术产生，包括：噬菌体呈现集合库，Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581(1991)；如Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,第77页(1985)；Boerner等人,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)中所描述的人类单株抗体的制备；和通过向经修饰以响应于抗原攻击产生此类抗体，但其内源基因座已失能的转殖基因动物给予抗原，该转殖基因动物例如经免疫Xenomouse(参见例如关于XENOMOUSETM技术的美国专利第6,075,181号和第6,150,584号)或具有人类免疫球蛋白序列的鸡(参见例如WO2012162422、WO2011019844和WO2013059159)。
本文所用的术语“细胞毒性剂”可指代抑制细胞增殖或诱导细胞死亡的任何药剂。细胞毒性剂包括(但不限于)化学治疗剂；放射性同位素；生长抑制剂；和例如小分子毒素或酶活性毒素的毒素，包括其片段和/或变异体。示例性细胞毒性剂包括(不限于)代谢抑制剂、抗微管剂、含铂化合物、烷基化剂、蛋白酶体抑制剂、拓朴异构酶II抑制剂、抗代谢物、拓朴异构酶I抑制剂、信号转导路径抑制剂、非受体酪氨酸激酶血管生成抑制剂、激素和激素类似物、促凋亡剂、LDH-A抑制剂、细胞周期抑制剂、HDAC抑制剂和抗生素。
本文所用的“标记物”可包括充当例如本发明经标记抗体与大分子或细胞之间的结合的侦测剂的任何部分。示例性标记物包括(不限于)荧光部分(例如，化合物或蛋白质)、放射性部分或酶部分，以及亲和纯化标签。
术语”侦测”打算包括测定物质是否存在或对物质(例如CLDN18.2)的量进行定量。因此，该术语指本发明的物质、组合物和方法用于定性和定量测定的用途。一般而言，用于侦测的特定技术并非实践本发明的关键。
例如，根据本发明的“侦测”可包括：观测CLDN18.2多肽的CLDN18.2基因产物是否存在；CLDN18.2多肽的含量或结合于标靶的量的变化；CLDN18.2多肽的生物功能/活性的变化。在一些实施例中，“侦测”可包括侦测野生型CLDN18.2含量(例如多肽含量)。侦测可包括对与对照相比时在10％与90％之间的任何值的变化(增加或减少)或在30％与60％之间或超过100％的任何值的变化(增加或减少)进行定量。侦测可包括对在2倍至10倍(包括端点)之间或更高(例如100倍)的任何值的变化进行定量。
本文所用的抗体可以说以足以使抗体适用于活体外和/或活体内操控抗原的亲和力“结合”抗原。
本文所用的术语“亲和力”或“结合亲和力”是指两个分子之间的结合相互作用的强度。一般而言，结合亲和力是指分子与其结合搭配物(例如高亲和力SIRP-αD1变异体和CD47)之间的非共价相互作用的总强度。除非另外指示，否则结合亲和力是指反映结合对的成员之间1:1相互作用的固有结合亲和力。两个分子之间的结合亲和力通常通过解离常数(Kd)或缔合常数(Ka)描述。彼此具有低结合亲和力的两个分子一般结合缓慢、往往容易解离且展现较大Kd。彼此具有高亲和力的两个分子一般容易结合、往往更久地保持结合且展现较小Kd。在一些实施例中，使用已知方法和技术(例如表面电浆子共振(SPR))测定两个相互作用分子的Kd。Kd可以koff/kon比形式计算。
本文所用的术语“小于……的Kd”是指数值较小的Kd值和相对于所引述Kd值增加的结合亲和力。本文所用的术语“大于…的Kd”是指数值较大的Kd值和相对于所引述Kd值降低的结合亲和力。
本文所用的“治疗”可指代分子、化合物、调配物、组合物等的治疗性给药，以获得包括临床结果在内的有益或所需治疗结果。出于本发明的目的，有益或所需临床结果包括(但不限于)以下中的一个或多个：减轻由疾病引起的一或多个症状，降低疾病的程度，使疾病稳定(例如，预防或延迟疾病的恶化)，预防或延迟疾病的扩散(例如，转移)，预防或延迟疾病的复发，延迟或减缓疾病的进展，改善疾病病状，使疾病(部分或完全)缓解，降低治疗疾病所需的一或多种其他药物的剂量，缓和病理症状或疾病病状，提高或改善生活质量，预防过度体重减轻，改善预后，实现疾病缓解和/或延长存活期。“治疗”也涵盖癌症的病理性结果(例如肿瘤体积)的减少。本发明的方法涵盖这些治疗态样中的任何一或多个。
本文所用的“延迟疾病的进展”可指代减缓、延缓、推后、推迟疾病病理过程的发展、使该病理过程稳定或在其它方面阻止该病理过程。在一些实施例中，该术语可指代足以有效地涵盖预防的延迟，例如预防个体患病。在一些实施例(例如晚期癌症)中，延迟进展可包括延迟转移。本领域技术人员会了解，精确的延迟长度可视个体状况而定，例如根据具体疾病等等。
术语“复发(recurrence、relapse或relapsed)”指在临床评估疾病消失之后产生的疾病或病症的重现，其特征在于异常CLDN18.2表达或异常CLDN18.2活性(例如，肿瘤或癌症，例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)。
术语“难治性”或“抗性”指未对特定药剂或药剂组合的治疗产生反应的疾病或病症，其特征在于异常CLDN18.2表达或异常CLDN18.2活性(例如，癌症，例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)。
本文所用的术语“有效量”可指代本发明抗体或含有本发明抗体的医药组合物的量，该量足以且有效达到治疗或延迟患疾病的患者的进展的预期疗效，该疾病例如表达CLDN18.2的肿瘤或特征在于异常CLDN18.2表达或活性的癌症，例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等。在一些实施例中，治疗有效量将避免不良副作用，和/或有益作用会超过此类副作用。有效量可取决于治疗的个体，例如年龄、体重、性别、疾病病状以及药剂产生所需反应的能力。有效量可在一或多次给与中给予。如在临床情形下，药物、化合物或医药组合物的有效量可以或可以不结合另一药物、化合物或医药组合物(例如另一治疗剂)达成。因此，也可在投与一或多种其他治疗剂的情形下考虑“有效量”，且若结合一或多种其他药剂有可能达成或达成所需结果，则可考虑以有效量给予单一药剂。
术语“治疗有效量”指如本文所揭示的抗CLDN18.2抗体(或其片段)或组合物有效“治疗”哺乳动物(也称为患者或个体)的疾病或病症的量。就癌症而言，本文所公开的抗CLDN18.2抗体(或其片段)或组合物的治疗有效量可以减少癌细胞的数目；降低肿瘤大小或重量；抑制(即，在一定程度上减缓并最好停止)癌细胞浸润到周边器官中；抑制(即，在一定程度上减缓并最好停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；并/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。在如本文所公开的抗CLDN18.2抗体(或其片段)或组合物可阻止现有癌细胞生长和/或杀灭现有癌细胞的情况下，其可为细胞生长抑制和/或细胞毒性剂。在一个实施例中，治疗有效量为生长抑制量。在另一实施例中，治疗有效量为延长患者存活期的量。在另一个实施例中，治疗有效量为提高患者的无进展存活期的量。
本文所用的术语“医药组合物”可指代包括活性成分以及赋形剂或稀释剂(或赋形剂和稀释剂两者)且使得活性成分能够通过适合方式给予的医学或医药调配物。在一些实施例中，本文所公开的医药组合物包括与一或多种本发明抗体相容的医药学上可接受的组分。在一些实施例中，医药组合物为用于口服的的药片或胶囊装或为用于例如通过注射静脉内或皮下给予的含水形式。
本文所用的“医药学上可接受”或“药理学上兼容”意为不是生物学上或其他方面不适宜的物质，例如，该物质可掺入向患者给予的医药组合物中而不会引起任何显著不适宜生物效应或以有害方式与含有其的组合物的任何其他组分相互作用。医药学上可接受的载剂或赋形剂较好地满足毒理学和制造测试的要求的和/或包括在美国食品药物管理局(U.S.Food and Drug administration)制定的非活性成分指南(Inactive IngredientGuide)中的标准。
如本文所用，术语“受试者”、“个体”和“患者”可互换使用以指代脊椎动物，例如哺乳动物。哺乳动物包括(但不限于)鼠类、类人猿、人类、农畜、体育动物和宠物。
关于本文中鉴别的多肽和抗体序列的“氨基酸序列一致性百分比(％)”或“同源性”定义为在序列比对后，在将任何保守性取代考虑为序列一致性的一部分的情况下，候选序列中与所比较多肽中氨基酸残基一致的氨基酸残基的百分比。出于测定氨基酸序列一致性百分比目的的比对可以本领域技术范围内的各种方式达成，例如使用公开可获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可测定用于量测比对的适当参数，包括在比较序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，出于本文的目的，氨基酸序列一致性％值通过使用序列比较计算机程序ALIGN-2生成。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.设计，且源代码已在U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559申请用户文文件，注册在美国版权注册第TXU510087号下。ALIGN-2程序为可由Genentech公司,South San Francisco,California公开获得。ALIGN-2程序应经编译以用于UNIX操作系统，优选Digital UNIX V4.0D。所有序列比较参数均由ALIGN-2程序设定并且不变化。
本文所引用的所有参考文献，包括专利申请案和公开案以全文引用的方式并入本文中。
抗紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)抗体
本发明系基于鉴别结合紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)的抗体。本文所提供的抗CLDN18.2抗体可用于多种治疗和诊断方法中。举例而言，抗CLDN18.2抗体可单独或与其他药剂组合用于治疗疾病或病症，该疾病或病症的特征在于异常CLDN18.2表达或异常CLDN18.2活性，包括(但不限于)实体肿瘤或癌症，例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)。本文所提供的抗体也可用于侦测患者或患者样本中的CLDN18.2，其通过例如向患者投与抗CLDN18.2抗体和侦测结合于CLDN18.2(例如活体内或离体)的抗CLDN18.2抗体，或例如通过使患者的样本与抗CLDN18.2抗体接触和定性或定量侦测结合于CLDN18.2蛋白的抗CLDN18.2抗体来进行。
抗CLDN18.2抗体为以足够亲和力和特异性与CLDN18.2结合的抗体。举例而言，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其生物学活性片段)可用作靶向和阻止与异常(aberrant/abnormal)CLDN18.2表达和/或活性相关的疾病或病况的治疗剂。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体为嵌合单株抗体。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体包含本文所揭示的抗体的至少一个CDR、重链可变域(VH)和/或轻链可变域(VL)。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含GX1X2FX3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:11)的CDR-H1，其中X1为F或Y；X2为T或S；X3为T或S；X4为D、G、V、N或S；X5为Y、W或N；X6为G、N、S或A；X7为M或I；且X8为F、H、S、Y或N；(b)包含X1IX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14KG(SEQ ID NO:30)的CDR-H2，其中X1为Y、E、T、H或N；X2为S、N、D、Y或I；X3为S、P或I；X4为G、N、K、R或Y；X5为S、N、G或Y；X6为S、G、T、N或D；X7为N、T、V、Y、I或P；X8为I、T或F；X9为Y、H或N；X10为Y或S；X11为A、N、P、T或V；X12为D、Q或E；X13为T、K、S或R；且X14为V、F、M或L；(c)包含X1X2X3GNX4X5X6Y(SEQ ID NO:43)的CDR-H3，其中：X1为I、F、P、A、Q或H；X2为A、Y、V、T；X3为R或Y；X4为A、V、S或T；X5为M、L或F；且X6为D或A；(d)包含X1SX2QX3LX4NX5X6NX7X8NYLX9(SEQID NO:54)的CDR-L1，其中：X1为K或R；X2为S或R；X3为S或I；X4为L或F；X5为S或T；X6为G或E；X7为Q或L；X8为K或R；且X9为T、A或S；(e)包含WX1STRX2S(SEQ ID NO:58)的CDR-L2，其中X1为A或T；且X2为E或D；和(f)包含QX1X2X3X4X5PX6X7(SEQ ID NO:71)的CDR-L3，其中X1为N或D；X2为D、G、N或A；X3为Y或F；X4为F、S、I或Y；X5为Y或F；X6为L或F；且X7为T或P。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GX1X2FX3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:11)的CDR-H1，其中X1为F或Y；X2为T或S；X3为T或S；X4为D、G、V、N或S；X5为Y、W或N；X6为G、N、S或A；X7为M或I；且X8为F、H、S、Y或N；(b)包含X1IX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14KG(SEQ ID NO:30)的CDR-H2，其中X1为Y、E、T、H或N；X2为S、N、D、Y或I；X3为S、P或I；X4为G、N、K、R或Y；X5为S、N、G或Y；X6为S、G、T、N或D；X7为N、T、V、Y、I或P；X8为I、T或F；X9为Y、H或N；X10为Y或S；X11为A、N、P、T或V；X12为D、Q或E；X13为T、K、S或R；且X14为V、F、M或L；(c)包含X1X2X3GNX4X5X6Y(SEQ ID NO:43)的CDR-H3，其中：X1为I、F、P、A、Q或H；X2为A、Y、V、T；X3为R或Y；X4为A、V、S或T；X5为M、L或F；且X6为D或A；(d)包含X1SX2QX3LX4NX5X6NX7X8NYLX9(SEQID NO:54)的CDR-L1，其中：X1为K或R；X2为S或R；X3为S或I；X4为L或F；X5为S或T；X6为G或E；X7为Q或L；X8为K或R；且X9为T、A或S；(e)包含WX1STRX2S(SEQ ID NO:58)的CDR-L2，其中X1为A或T；且X2为E或D；和(f)包含QX1X2X3X4X5PX6X7(SEQ ID NO:71)的CDR-L3，其中X1为N或D；X2为D、G、N或A；X3为Y或F；X4为F、S、I或Y；X5为Y或F；X6为L或F；且X7为T或P。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含GX1X2FX3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:11)的CDR-H1，其中X1为F或Y；X2为T或S；X3为T或S；X4为D、G、V、N或S；X5为Y、W或N；X6为G、N、S或A；X7为M或I；且X8为F、H、S、Y或N；(b)包含X1IX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14KG(SEQ ID NO:30)的CDR-H2，其中：X1为Y、E、T、H、N或F；X2为S、N、Y或I；X3为S、P或I；X4为G、K、R或Y；X5为S、G或Y；X6为S、G、T、N或D；X7为N、T、Y、S、I或P；X8为I、T或F；X9为Y、H或N；X10为Y或C；X11为A、N、P、T或V；X12为D、Q或E；X13为T、K、S或R；且X14为V、F、M或L；(c)包含X1X2X3GNX4X5X6Y(SEQ ID NO:43)的CDR-H3，其中：X1为I、F、P、A、Q或H；X2为A、Y、V、T；X3为R或Y；X4为A、V、S或T；X5为M、L或F；且X6为D或A；(d)包含KSX1QX2LX3NX4X5NX6X7NYLX8(SEQ IDNO:116)的CDR-L1，其中X1为S或R；X2为S或I；X3为L或F；X4为S或T；X5为G或E；X6为Q或L；X7为K或R；且X8为T、A或S；(e)包含WX1STRX2S(SEQ ID NO:58)的CDR-L2，其中X1为A或T；且X2为E或D；和(f)包含QNX2X3X4X5PX6T(SEQ ID NO:117)的CDR-L3，其中：X2为D、G、N或A；X3为Y或F；X4为F、S、I或Y；X5为Y或F；且X6为L或F。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GX1X2FX3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:11)的CDR-H1，其中X1为F或Y；X2为T或S；X3为T或S；X4为D、G、V、N或S；X5为Y、W或N；X6为G、N、S或A；X7为M或I；且X8为F、H、S、Y或N；(b)包含X1IX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14KG(SEQ ID NO:30)的CDR-H2，其中：X1为Y、E、T、H、N或F；X2为S、N、Y或I；X3为S、P或I；X4为G、K、R或Y；X5为S、G或Y；X6为S、G、T、N或D；X7为N、T、Y、S、I或P；X8为I、T或F；X9为Y、H或N；X10为Y或C；X11为A、N、P、T或V；X12为D、Q或E；X13为T、K、S或R；且X14为V、F、M或L；(c)包含X1X2X3GNX4X5X6Y(SEQ ID NO:43)的CDR-H3，其中：X1为I、F、P、A、Q或H；X2为A、Y、V、T；X3为R或Y；X4为A、V、S或T；X5为M、L或F；且X6为D或A；(d)包含KSX1QX2LX3NX4X5NX6X7NYLX8(SEQ IDNO:116)的CDR-L1，其中X1为S或R；X2为S或I；X3为L或F；X4为S或T；X5为G或E；X6为Q或L；X7为K或R；且X8为T、A或S；(e)包含WX1STRX2S(SEQ ID NO:58)的CDR-L2，其中X1为A或T；且X2为E或D；和(f)包含QNX2X3X4X5PX6T(SEQ ID NO:117)的CDR-L3，其中：X2为D、G、N或A；X3为Y或F；X4为F、S、I或Y；X5为Y或F；且X6为L或F。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含GX1X2FX3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:11)的CDR-H1，其中X1为F或Y；X2为T或S；X3为T或S；X4为D、G、V、N或S；X5为Y、W或N；X6为G、N、S或A；X7为M或I；且X8为F、H、S、Y或N；(b)包含X1IX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14KG(SEQ ID NO:30)的CDR-H2，其中X1为Y、E、T、H或N；X2为S、N、D、Y或I；X3为S、P或I；X4为G、N、K、R或Y；X5为S、N、G或Y；X6为S、G、T、N或D；X7为N、T、V、Y、I或P；X8为I、T或F；X9为Y、H或N；X10为Y或S；X11为A、N、P、T或V；X12为D、Q或E；X13为T、K、S或R；且X14为V、F、M或L；(c)包含X1X2X3GNX4X5X6Y(SEQ ID NO:43)的CDR-H3，其中X1为I、F、P、A、Q或H；X2为A、Y、V、T；X3为R或Y；X4为A、V、S或T；X5为M、L或F；且X6为D或A；(d)包含X1SX2QX3LX4NX5X6NX7X8NYLX9(SEQID NO:54)的CDR-L1，其中X1为K或R；X2为S或R；X3为S或I；X4为L或F；X5为S或T；X6为G或E；X7为Q或L；X8为K或R；且X9为T、A或S；(e)包含WX1STRX2S(SEQ ID NO:58)的CDR-L2，其中X1为A或T；且X2为E或D；和(f)包含QX1X2X3X4X5PX6X7(SEQ ID NO:71)的CDR-L3，其中X1为N或D；X2为D、G、N或A；X3为Y或F；X4为F、S、I或Y；X5为Y或F；X6为L或F；且X7为T或P。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GX1X2FX3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:11)的CDR-H1，其中X1为F或Y；X2为T或S；X3为T或S；X4为D、G、V、N或S；X5为Y、W或N；X6为G、N、S或A；X7为M或I；且X8为F、H、S、Y或N；(b)包含X1IX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14KG(SEQ ID NO:30)的CDR-H2，其中X1为Y、E、T、H或N；X2为S、N、D、Y或I；X3为S、P或I；X4为G、N、K、R或Y；X5为S、N、G或Y；X6为S、G、T、N或D；X7为N、T、V、Y、I或P；X8为I、T或F；X9为Y、H或N；X10为Y或S；X11为A、N、P、T或V；X12为D、Q或E；X13为T、K、S或R；且X14为V、F、M或L；(c)包含X1X2X3GNX4X5X6Y(SEQ ID NO:43)的CDR-H3，其中X1为I、F、P、A、Q或H；X2为A、Y、V、T；X3为R或Y；X4为A、V、S或T；X5为M、L或F；且X6为D或A；(d)包含X1SX2QX3LX4NX5X6NX7X8NYLX9(SEQ ID NO:54)的CDR-L1，其中X1为K或R；X2为S或R；X3为S或I；X4为L或F；X5为S或T；X6为G或E；X7为Q或L；X8为K或R；且X9为T、A或S；(e)包含WX1STRX2S(SEQ ID NO:58)的CDR-L2，其中X1为A或T；且X2为E或D；和(f)包含QX1X2X3X4X5PX6X7(SEQ ID NO:71)的CDR-L3，其中X1为N或D；X2为D、G、N或A；X3为Y或F；X4为F、S、I或Y；X5为Y或F；X6为L或F；且X7为T或P。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含GX1X2FX3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:11)的CDR-H1，其中X1为F或Y；X2为T或S；X3为T或S；X4为D、G、V、N或S；X5为Y、W或N；X6为G、N、S或A；X7为M或I；且X8为F、H、S、Y或N；(b)包含X1IX2X3X4X5X6X7X8X9YX10X11X12X13KG(SEQ ID NO:118)的CDR-H2，其中X1为Y、E、T、H或N；X2为S、N、Y或I；X3为S、P或I；X4为G、K、R或Y；X5为S、G或Y；X6为S、G、T、N或D；X7为N、T、Y、I或P；X8为I、T或F；X9为Y、H或N；X10为A、N、P、T或V；X11为D、Q或E；X12为T、K、S或R；且X13为V、F、M或L；(c)包含X1X2X3GNX4X5X6Y(SEQ ID NO:43)的CDR-H3，其中X1为I、F、A、Q或H；X2为A、Y、V、T；X3为R或Y；X4为A、S或T；X5为M、L或F；且X6为D或A；(d)包含KSX1QX2LX3NX4X5NQX6NYLX7(SEQ ID NO:119)的CDR-L1，其中X1为S或R；X2为S或I；X3为L或F；X4为S或T；X5为G或E；X6为K或R；且X7为T、A或S；(e)包含WX1STRX2S(SEQ ID NO:58)的CDR-L2，其中X1为A或T；且X2为E或D；和(f)包含QNX1X2X3X4PX5T(SEQ ID NO:120)的CDR-L3，其中X1为D、G、N或A；X2为Y或F；X3为F、S、I或Y；X4为Y或F；且X5为L或F。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GX1X2FX3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO:11)的CDR-H1，其中X1为F或Y；X2为T或S；X3为T或S；X4为D、G、V、N或S；X5为Y、W或N；X6为G、N、S或A；X7为M或I；且X8为F、H、S、Y或N；(b)包含X1IX2X3X4X5X6X7X8X9YX10X11X12X13KG(SEQ ID NO:118)的CDR-H2，其中X1为Y、E、T、H或N；X2为S、N、Y或I；X3为S、P或I；X4为G、K、R或Y；X5为S、G或Y；X6为S、G、T、N或D；X7为N、T、Y、I或P；X8为I、T或F；X9为Y、H或N；X10为A、N、P、T或V；X11为D、Q或E；X12为T、K、S或R；且X13为V、F、M或L；(c)包含X1X2X3GNX4X5X6Y(SEQ ID NO:43)的CDR-H3，其中X1为I、F、A、Q或H；X2为A、Y、V、T；X3为R或Y；X4为A、S或T；X5为M、L或F；且X6为D或A；(d)包含KSX1QX2LX3NX4X5NQX6NYLX7(SEQ ID NO:119)的CDR-L1，其中X1为S或R；X2为S或I；X3为L或F；X4为S或T；X5为G或E；X6为K或R；且X7为T、A或S；(e)包含WX1STRX2S(SEQ ID NO:58)的CDR-L2，其中X1为A或T；且X2为E或D；和(f)包含QNX1X2X3X4PX5T(SEQ ID NO:120)的CDR-L3，其中X1为D、G、N或A；X2为Y或F；X3为F、S、I或Y；X4为Y或F；且X5为L或F。
在某些实施例中，提供了一种抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)，其特异性结合CLDN18.2且与第二抗CLDN18.2抗体竞争结合于CLDN18.2，该第二抗CLDN18.2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:1-10中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12-29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:31-42中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44-53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55-57中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:59-70中的任个一中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，提供了一种抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)，其特异性结合于与第二抗CLDN18.2抗体相同的CLDN18.2抗原决定基，该第二抗CLDN18.2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:1-10中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12-29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:31-42中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44-53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55-57中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ IDNO:59-70中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含SEQ ID NO:1-10中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(b)包含SEQ ID NO:12-29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(c)包含SEQID NO:31-42中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(d)包含SEQ ID NO:44-53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(e)包含SEQ ID NO:55-57中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；和(f)包含SEQ ID NO:59-70中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。
在某些实施例中，抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含SEQ ID NO:1-10中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(b)包含SEQ ID NO:12-29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(c)包含SEQ ID NO:31-42中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(d)包含SEQ ID NO:44-53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(e)包含SEQ ID NO:55-57中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；和(f)包含SEQ ID NO:59-70中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:31-42中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H3和/或包含SEQ ID NO:59-70中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含SEQ ID NO:1-10中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12-29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:31-42中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44-53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ IDNO:55-57中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:59-70中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含SEQ IDNO:1-10中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:12-29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:31-42中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44-53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55-57中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:59-70中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含GFX1FSDYGMX2(SEQ ID NO:121)的CDR-H1，其中X1为T或S；且X2为H或Y；(b)包含X1ISSGSSX2IYX3ADTX4KG(SEQ ID NO:122)的CDR-H2，其中X1为Y,H或F；X2为S或T；X3为Y或C；且X4为V或M；(c)包含X1ARGNX4MDY(SEQ ID NO:123)的CDR-H3，其中X1为I或F；且X4为T或A；(d)包含KSSQSLLNSGNX1X2NYLX3(SEQ ID NO:124)的CDR-L1，其中X1为Q或L；X2为R或K；且X3为T或A；(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2；和(f)包含QNX1YX2YPLT(SEQ ID NO:125)的CDR-L3，其中：X1为G或D；且X2为S或F。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFX1FSDYGMX2(SEQ ID NO:121)的CDR-H1，其中X1为T或S；且X2为H或Y；(b)包含X1ISSGSSX2IYX3ADTX4KG(SEQ ID NO:122)的CDR-H2，其中X1为Y,H或F；X2为S或T；X3为Y或C；且X4为V或M；(c)包含X1ARGNX4MDY(SEQ ID NO:123)的CDR-H3，其中X1为I或F；且X4为T或A；(d)包含KSSQSLLNSGNX1X2NYLX3(SEQ ID NO:124)的CDR-L1，其中X1为Q或L；X2为R或K；且X3为T或A；(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2；和(f)包含QNX1YX2YPLT(SEQ ID NO:125)的CDR-L3，其中：X1为G或D；且X2为S或F。
在某些实施例中，提供了一种抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)，其特异性结合CLDN18.2且与第二抗CLDN18.2抗体竞争结合于CLDN18.2，该第二抗CLDN18.2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:2、7和6中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:17、22和29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:31或37中所列的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44、48和53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:59、60和64中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，提供了一种抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)，其特异性结合于与第二抗CLDN18.2抗体相同的CLDN18.2抗原决定基，该第二抗CLDN18.2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:2、7和6中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:17、22和29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:31或37中所列的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44、48和53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:59、60和64中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含SEQ ID NO:2、7和6中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(b)包含SEQ ID NO:17、22和29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(c)包含SEQ ID NO:31或37中所列的氨基酸序列的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(d)包含SEQ ID NO:44、48和53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(e)包含SEQ ID NO:55中所列的氨基酸序列的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；和(f)包含SEQ ID NO:59、60和64中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含SEQ IDNO:2、7和6中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(b)包含SEQ ID NO:17、22和29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(c)包含SEQ ID NO:31或37中所列的氨基酸序列的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(d)包含SEQ ID NO:44、48和53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(e)包含SEQ ID NO:55中所列的氨基酸序列的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；和(f)包含SEQ ID NO:59、60和64中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:31或37中所列的氨基酸序列的CDR-H3和/或包含SEQ ID NO:59、60和64中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含SEQ ID NO:2、7和6中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:17、22和29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:31或37中所列的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44、48和53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ IDNO:55中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:59、60和64中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含SEQ IDNO:2、7和6中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:17、22和29中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含SEQ ID NO:31或37中所列的氨基酸序列的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44、48和53中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:55中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:59、60和64中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体包含：包含4个氨基酸、小于4个氨基酸或3个氨基酸(例如由其组成)的CDR-H3。在一些实施例中，包含含有4个氨基酸、小于4个氨基酸或3个氨基酸(例如由其组成)的CDR-H3的抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1和CLDN18.2。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含GYTFX1X2YX3X4H(SEQ ID NO:139)的CDR-H1，其中：X1为T或I；X2为S或N；X3为L或V；且X4为I或M；(b)包含YINPX1X2DGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:140)的CDR-H2，其中：X1为Y或F；且X2为N或D；(c)包含4个氨基酸、小于4个氨基酸或三个氨基酸(例如由其组成)的CDR-H3；(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1；(e)包含WASX1RX2S(SEQ ID NO:141)的CDR-L2，其中X1为T或I；且X2为A或D；和(f)包含LNDYSFPLT(SEQ ID NO:131)的CDR-L3。在一些实施例中，CDR-H3包含GDX1(例如由其组成)，其中X1为F或Y。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYTFX1X2YX3X4H(SEQ ID NO:139)的CDR-H1，其中：X1为T或I；X2为S或N；X3为L或V；且X4为I或M；(b)包含YINPX1X2DGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:140)的CDR-H2，其中：X1为Y或F；且X2为N或D；(c)包含4个氨基酸、小于4个氨基酸或三个氨基酸(例如由其组成)的CDR-H3；(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1；(e)包含WASX1RX2S(SEQ ID NO:141)的CDR-L2，其中X1为T或I；且X2为A或D；和(f)包含LNDYSFPLT(SEQ ID NO:131)的CDR-L3。在一些实施例中，CDR-H3包含GDX1(例如由其组成)，其中X1为F或Y。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在某些实施例中，提供了一种抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)，其特异性结合CLDN18.2且与第二抗CLDN18.2抗体竞争结合于CLDN18.2，该第二抗CLDN18.2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:128或132中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:129或133中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含4个氨基酸、小于4个氨基酸或三个氨基酸(例如由其组成)的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ IDNO:130或134中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:131中所列的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施例中，该CDR-H3包含GDX1(例如由其组成)，其中X1为F或Y。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在某些实施例中，提供了一种抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)，其特异性结合于与第二抗CLDN18.2抗体相同的CLDN18.2抗原决定基，该第二抗CLDN18.2抗体包含：(a)包含SEQ ID NO:128或132中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:129或133中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含4个氨基酸、小于4个氨基酸或三个氨基酸(例如由其组成)的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:130或134中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:131中所列的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施例中，CDR-H3包含GDX1(例如由其组成)，其中X1为F或Y。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含SEQ ID NO:128或132中所列的氨基酸序列的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(b)包含SEQ ID NO:129或133中所列的氨基酸序列的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(c)包含4个氨基酸、小于4个氨基酸或三个氨基酸(例如由其组成)的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44中所列的氨基酸序列的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(e)包含SEQ ID NO:130或134中所列的氨基酸序列的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；和(f)包含SEQ ID NO:131中所列的氨基酸序列的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在一些实施例中，CDR-H3包含GDX1(例如由其组成)，其中X1为F或Y。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含SEQ IDNO:128或132中所列的氨基酸序列的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(b)包含SEQ ID NO:129或133中所列的氨基酸序列的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(c)包含4个氨基酸、小于4个氨基酸或三个氨基酸(例如由其组成)的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44中所列的氨基酸序列的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；(e)包含SEQ ID NO:130或134中所列的氨基酸序列的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体；和(f)包含SEQ ID NO:131中所列的氨基酸序列的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在一些实施例中，CDR-H3包含GDX1(例如由其组成)，其中X1为F或Y。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含4个氨基酸、小于4个氨基酸或三个氨基酸(例如由其组成)的CDR-H3；和/或包含59-70中的任一个中所列的氨基酸序列的CDR-L3。在一些实施例中，CDR-H3包含GDX1(例如由其组成)，其中X1为F或Y。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含一个、两个、三个、四个、五个或六个选自由以下组成的群的互补决定区(CDR)序列：(a)包含SEQ ID NO:128或132中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:129或133中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含氨基酸序列GDF或GDY的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:130或134中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQID NO:131中所列的氨基酸序列的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含SEQ IDNO:128或132中所列的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:129或133中所列的氨基酸序列的CDR-H2；(c)包含氨基酸序列GDF或GDY的CDR-H3；(d)包含SEQ ID NO:44中所列的氨基酸序列的CDR-L1；(e)包含SEQ ID NO:130或134中所列的氨基酸序列的CDR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:131中所列的氨基酸序列的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
SEQ ID NO:1-10、11-29、31-42、44-53、55-57、59-70和128-134的氨基酸序列提供于下表1中。
表1
Figure GDA0002661925870000271
Figure GDA0002661925870000281
在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ IDNO:72-93和135-136中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链可变域(VH)；和/或包含与SEQ ID NO:94-115和137-138中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变域(VL)。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:72-93和135-136中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链可变域(VH)；和包含与SEQ ID NO:94-115和137-138中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变域(VL)。SEQ ID NO:72-115的氨基酸序列提供于下表2中：
表2
Figure GDA0002661925870000282
Figure GDA0002661925870000291
Figure GDA0002661925870000301
Figure GDA0002661925870000311
在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：重链可变域(VH)的一个、两个或三个CDR，该重链可变域包含与SEQ ID NO:72-93和135-136中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列；或轻链可变域(VL)的一个、两个或三个CDR，该轻链可变域包含与SEQ ID NO:94-115和137-138中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)的一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR，该重链可变域包含与SEQ ID NO:72-93和135-136中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列，该和轻链可变域包含与SEQ ID NO:94-115和137-138中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)的六个CDR，该重链可变域包含与SEQ ID NO:72-93中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列，该轻链可变域包含与SEQ ID NO:94-115中的任一个中所列的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMF(SEQ ID NO:1)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSSNIYYADTVKG(SEQ ID NO:12)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含IARGNAMDY(SEQ IDNO:31)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3和/或包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMF(SEQ IDNO:1)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSNIYYADTVKG(SEQ ID NO:12)的CDR-H2，(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:72至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:94至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:72的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:94的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:72的VH域和包含SEQ ID NO:94的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YINSGSSTIYYADTVKG(SEQ ID NO:13)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含FARGNVLDY(SEQ IDNO:32)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含RSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQ ID NO:45)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含FARGNVLDY(SEQ ID NO:32)的CDR-H3和/或包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YINSGSSTIYYADTVKG(SEQ ID NO:13)的CDR-H2，(c)包含FARGNVLDY(SEQ ID NO:32)的CDR-H3；(d)包含RSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQ ID NO:45)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ IDNO:60)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:73至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:95至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:73的VH域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:95的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:73的VH域和包含SEQ ID NO:95的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYSFTGYNIH(SEQ ID NO:3)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YIDPNNGVTYSNQKFKG(SEQ ID NO:14)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含PYYGNSFDY(SEQ IDNO:33)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNLRNYLT(SEQ ID NO:46)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QDGYFYPFP(SEQ ID NO:61)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含PYYGNSFDY(SEQ ID NO:33)的CDR-H3；和/或包含QDGYFYPFP(SEQ ID NO:61)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYSFTGYNIH(SEQ IDNO:3)的CDR-H1，(b)包含YIDPNNGVTYSNQKFKG(SEQ ID NO:14)的CDR-H2，包含PYYGNSFDY(SEQ ID NO:33)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNLRNYLT(SEQ ID NO:46)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QDGYFYPFP(SEQ ID NO:61)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:74至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:96至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:74的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:96的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:74的VH域和包含SEQ ID NO:96的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYTFTVWSMS(SEQ ID NO:4)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含EIYPKSGNTHYNEKFKG(SEQ ID NO:15)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含AYYGNSFAY(SEQ IDNO:34)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQ ID NO:47)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNDFIYPFT(SEQ ID NO:62)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含AYYGNSFAY(SEQ ID NO:34)的CDR-H3；和/或包含QNDFIYPFT(SEQ ID NO:62)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYTFTVWSMS(SEQ IDNO:4)的CDR-H1，(b)包含EIYPKSGNTHYNEKFKG(SEQ ID NO:15)的CDR-H2，(c)包含AYYGNSFAY(SEQ ID NO:34)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQ ID NO:47)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDFIYPFT(SEQ ID NO:62)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:75至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:97至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:75的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:97的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:75的VH域和包含SEQ ID NO:97的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSNNAMS(SEQ ID NO:5)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含TIIIGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:16)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含QVYGNSFAY(SEQ IDNO:35)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNNYFYPFT(SEQ ID NO:63)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含QVYGNSFAY(SEQ ID NO:35)的CDR-H3；和/或包含QNNYFYPFT(SEQ ID NO:63)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSNNAMS(SEQ IDNO:5)的CDR-H1，(b)包含TIIIGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:16)的CDR-H2，(c)包含QVYGNSFAY(SEQ ID NO:35)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNNYFYPFT(SEQ ID NO:63)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:76至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:98至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:76的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:98的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:76的VH域和包含SEQ ID NO:98的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含FVRGNSMDY(SEQ IDNO:36)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(c)包含FVRGNSMDY(SEQ ID NO:36)的CDR-H3；和/或包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，(c)包含FVRGNSMDY(SEQ ID NO:36)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:78至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQID NO:100至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:78的VH域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:100的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:78的VH域和包含SEQ ID NO:100的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含HISSGSNIIHYADTLKG(SEQ ID NO:19)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含FARGNTMDY(SEQ IDNO:37)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNAYSFPLT(SEQ ID NO:66)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3；和/或包含QNAYSFPLT(SEQ ID NO:66)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ IDNO:2)的CDR-H1，(b)包含HISSGSNIIHYADTLKG(SEQ ID NO:19)的CDR-H2，(c)包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNAYSFPLT(SEQ ID NO:66)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:79至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:101至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:79的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:101的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:79的VH域和包含SEQ ID NO:101的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，(c)包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQ ID NO:47)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3和/或包含QNGYSYPLT(SEQ IDNO:60)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，(c)包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQ ID NO:47)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ IDNO:60)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:80至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:102至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:80的VH域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:101的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:80的VH域和包含SEQ ID NO:102的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSNTFYYTDTVKG(SEQ ID NO:20)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含FTRGNALDY(SEQ IDNO:38)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(c)包含FTRGNALDY(SEQ ID NO:38)的CDR-H3；和/或包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSNTFYYTDTVKG(SEQ ID NO:20)的CDR-H2，(c)包含FTRGNALDY(SEQ ID NO:38)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:81至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQID NO:103至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:81的VH域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:103的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:81的VH域和包含SEQ ID NO:103的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSNTIYYADTVKG(SEQ ID NO:21)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含IARGNAMDY(SEQ IDNO:31)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3和/或包含QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)包含YISSGSNTIYYADTVKG(SEQ ID NO:21)的CDR-H2，(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:82至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:104至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:82的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:104的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:82的VH域和包含SEQ ID NO:104的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含HISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:22)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含FVRGNALDY(SEQ IDNO:39)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含FVRGNALDY(SEQ ID NO:39)的CDR-H3和/或包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ IDNO:2)的CDR-H1，(b)包含HISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:22)的CDR-H2，(c)包含FVRGNALDY(SEQ ID NO:39)的CDR-H3；(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:83至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:105至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:83的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:105的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:83的VH域和包含SEQ ID NO:105的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSSTIHYVDTMKG(SEQ ID NO:23)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含FARGNTLDY(SEQ IDNO:40)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLFNTGNQKNYLT(SEQ ID NO:49)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含NGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含FARGNTLDY(SEQ ID NO:40)的CDR-H3；和/或包含NGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIHYVDTMKG(SEQ ID NO:23)的CDR-H2，(c)包含FARGNTLDY(SEQ IDNO:40)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLFNTGNQKNYLT(SEQ ID NO:49)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含NGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:84至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:106至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:84的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:106的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:84的VH域和包含SEQ ID NO:106的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSSTIYYADTVKG(SEQ ID NO:24)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含IARGNAMDY(SEQ IDNO:31)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLFNSGNQRNYLA(SEQ ID NO:50)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3和/或包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIYYADTVKG(SEQ ID NO:24)的CDR-H2，(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLFNSGNQRNYLA(SEQ ID NO:50)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:85至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:107至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:85的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:107的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:85的VH域和包含SEQ ID NO:107的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSSPIYYADTVKG(SEQ ID NO:25)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含FARGNAMDY(SEQ IDNO:41)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRDS(SEQ ID NO:56)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNNYYYPLT(SEQ ID NO:68)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含FARGNAMDY(SEQ ID NO:41)的CDR-H3；和/或包含QNNYYYPLT(SEQ ID NO:68)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ IDNO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSPIYYADTVKG(SEQ ID NO:25)的CDR-H2，(c)包含FARGNAMDY(SEQ ID NO:41)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRDS(SEQ ID NO:56)的CDR-L2，和(f)包含QNNYYYPLT(SEQ ID NO:68)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:87至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:109至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:87的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:109的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:87的VH域和包含SEQ ID NO:109的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含FVRGNSMDY(SEQ IDNO:36)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含FVRGNSMDY(SEQ ID NO:36)的CDR-H3；和/或包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ IDNO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，(c)包含FVRGNSMDY(SEQ ID NO:36)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:88至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:110至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:88的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:110的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:88的VH域和包含SEQ ID NO:110的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSNYAMS(SEQ ID NO:8)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含TIIIGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:16)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含QVYGNSFAY(SEQ IDNO:35)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNNYIYPFT(SEQ ID NO:69)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含QVYGNSFAY(SEQ ID NO:35)的CDR-H3；和/或包含QNNYFYPFT(SEQ ID NO:69)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSNYAMS(SEQ IDNO:8)的CDR-H1，(b)包含TIIIGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:16)的CDR-H2，(c)包含QVYGNSFAY(SEQ ID NO:35)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNNYIYPFT(SEQ ID NO:69)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:89至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:111至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:89的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:111的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:89的VH域和包含SEQ ID NO:111的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSNNIYYADTVKG(SEQ ID NO:26)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含IARGNAMDY(SEQ IDNO:31)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3和/或包含QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMY(SEQ IDNO:6)的CDR-H1，(b)包含YISSGSNNIYYADTVKG(SEQ ID NO:26)的CDR-H2，(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:90至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:112至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:90的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:112的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:90的VH域和包含SEQ ID NO:112的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYTFTSWSIS(SEQ ID NO:9)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含EIYPRSDNIHYNEKFKG(SEQ ID NO:27)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含AYYGNSFAY(SEQ IDNO:34)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQILLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:51)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNDYYYPFT(SEQ ID NO:70)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含AYYGNSFAY(SEQ ID NO:34)的CDR-H3；和/或包含QNDYYYPFT(SEQ ID NO:70)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYTFTSWSIS(SEQ ID NO:9)的CDR-H1，(b)包含EIYPRSDNIHYNEKFKG(SEQ ID NO:27)的CDR-H2，(c)包含AYYGNSFAY(SEQ IDNO:34)的CDR-H3，(d)包含KSSQILLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:51)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYYYPFT(SEQ ID NO:70)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:91至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:113至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:91的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:113的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:91的VH域和包含SEQ ID NO:113的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYSFTGYNMN(SEQ ID NO:10)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含NINPYYSNTNYNQRFKG(SEQ ID NO:28)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含CDRGNSFDY(SEQ IDNO:42)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSRQSLFNSENQKNYLS(SEQ ID NO:52)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WTSTRES(SEQ ID NO:57)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNNYIYPFT(SEQ ID NO:69)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含CDRGNSFDY(SEQ ID NO:42)的CDR-H3；和/或包含QNNYIYPFT(SEQ ID NO:69)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYSFTGYNMN(SEQ IDNO:10)的CDR-H1，(b)包含NINPYYSNTNYNQRFKG(SEQ ID NO:28)的CDR-H2，(c)包含CDRGNSFDY(SEQ ID NO:42)的CDR-H3，(d)包含KSRQSLFNSENQKNYLS(SEQ ID NO:52)的CDR-L1，(e)包含WTSTRES(SEQ ID NO:57)的CDR-L2，和(f)包含QNNYIYPFT(SEQ ID NO:69)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:92至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQID NO:114至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:92的VH域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:114的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:92的VH域和包含SEQ ID NO:114的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YISSGSSSIYYADTVKG(SEQ ID NO:17)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含IARGNAMDY(SEQ IDNO:31)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQRNYLA(SEQ ID NO:48)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNDYSYPLT(SEQ ID NO:64)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和/或VL域，其包含含有QNDYSYPLT(SEQ ID NO:64)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)包含YISSGSSSIYYADTVKG(SEQ ID NO:17)的CDR-H2，(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQRNYLA(SEQ ID NO:48)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYSYPLT(SEQ IDNO:64)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:77至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:99至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:77的VH域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:99的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:77的VH域和包含SEQ ID NO:99的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFSFSDYGMH(SEQ ID NO:7)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含HISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:22)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含FARGNTMDY(SEQ IDNO:37)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3和/或包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFSFSDYGMH(SEQ IDNO:7)的CDR-H1，(b)包含HISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:22)的CDR-H2，(c)包含FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3；(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:86至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:108至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:86的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:108的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:86的VH域和包含SEQ ID NO:108的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含FISSGSSTIYCADTVKG(SEQ ID NO:29)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含IARGNAMDY(SEQ IDNO:31)的CDR-H3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNLKNYLT(SEQ ID NO:53)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3和/或包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：a)包含GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)包含FISSGSSTIYCADTVKG(SEQ ID NO:29)的CDR-H2，(c)包含IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNLKNYLT(SEQ ID NO:53)的CDR-L1，(e)包含WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)包含QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:93至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:115至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:93的VH域的3个CDR和/或包含SEQID NO:115的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:93的VH域和包含SEQ ID NO:115的VL域。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYTFISYLIH(SEQ ID NO:128)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含SEQ ID NO:YINPYNDGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:129)中所列的氨基酸序列的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含GDF(例如由其组成)的CDR-H3或其包含至多约3(例如约1、2或3中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASIRAS(SEQID NO:130)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含LNDYSFPLT(SEQ ID NO:131)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含GDF(例如由其组成)的CDR-H3；和/或包含LNDYSFPLT(SEQ ID NO:131)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYTFISYLIH(SEQ ID NO:128)的CDR-H1，(b)包含YINPYNDGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:129)的CDR-H2，(c)包含GDF(例如由其组成)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASIRAS(SEQ ID NO:130)的CDR-L2，和(f)包含LNDYSFPLT(SEQ IDNO:131)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:135至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:137至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:135的VH域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:135的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:135的VH域和包含SEQ ID NO:137的VL域。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYTFTNYVMH(SEQ ID NO:132)的CDR-H1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(b)包含YINPFDDGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:133)的CDR-H2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(c)包含GDY(例如由其组成)的CDR-H3或其包含至多约3(例如约1、2或3中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，(e)包含WASTRDS(SEQ ID NO:134)的CDR-L2或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体，和(f)包含LNDYSFPLT(SEQ IDNO:131)的CDR-L3或其包含至多约5(例如约1、2、3、4或5中的任一个)个氨基酸取代的变异体。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含GDY(例如由其组成)的CDR-H3；和/或包含LNDYSFPLT(SEQ ID NO:131)的CDR-L3。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：(a)包含GYTFTNYVMH(SEQ ID NO:132)的CDR-H1，(b)包含YINPFDDGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:133)的CDR-H2，(c)包含GDY(例如由其组成)的CDR-H3，(d)包含KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)包含WASTRDS(SEQ IDNO:134)的CDR-L2，和(f)包含LNDYSFPLT(SEQ ID NO:131)的CDR-L3。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含与SEQ ID NO:136至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VH域和/或包含与SEQ ID NO:138至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的VL域。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:136的VH域的3个CDR和/或包含SEQ ID NO:138的VL域的3个CDR。在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)包含：包含SEQ ID NO:136的VH域和包含SEQ ID NO:138的VL域。在某些实施例中，该抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.1。
在一些实施例中，提供本文所描述的抗CLDN18.2抗体的氨基酸序列变异体(“抗CLDN18.2抗体变异体”)。例如，可能需要改良抗CLDN18.2抗体的结合亲和力和/或其他生物特性。抗CLDN18.2抗体的氨基酸序列变异体可通过将适当修饰引入至编码抗体剂的核苷酸序列中或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体剂的氨基酸序列内的残基缺失和/或插入和/或取代。可进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终构筑体，其限制条件为最终构筑体具有所需特征，例如抗原结合。
在一些实施例中，提供了具有一或多个氨基酸取代的抗CLDN18.2抗体变异体。用于取代性诱变法的相关位点包括HVR和FR。氨基酸取代可经引入至相关抗体剂中，且筛选具有所需活性的产物，例如：保留/改良抗原结合、减少免疫原性、或改良ADCC或CDC。
示例性取代型变异体为亲和力熟成抗体剂，其通过例如使用基于噬菌体呈现的亲和力熟成技术便捷地产生。简言之，使一或多个CDR残基突变，且在噬菌体上呈现变异抗体部分，并针对特定生物活性(例如结合亲和力)进行筛选。可在HVR中进行改变(例如取代)，例如改良抗体亲和力。可在HVR“热点”(即，由在体细胞熟成过程期间经历高频率突变的密码子编码的残基)(参见例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或特异性决定残基(SDR)中进行此类改变，测试所得变异体VH或VL的结合亲和力。通过构筑二级集合库和自二级集合库再选择来达成亲和力熟成，其已描述于例如Hoogenboom等人的Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人编,Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。
在一些亲和力熟成的实施例中，通过多种方法(例如易错(error prone)PCR、链改组或寡核苷酸定向诱变法)中的任一种，将多样性引入用于熟成的可变基因中。随后产生二级集合库。接着筛选该集合库以鉴别具有所需亲和力的任何抗体剂变体。另一种引入多样性的方法涉及将若干HVR残基(例如，一次4至6个残基)随机分组的HVR引导方法。参与抗原结合的HVR残基可被特异性鉴别，例如使用丙氨酸扫描诱变法或模型化来进行特异性鉴别。特备是CDR-H3和CDR-L3通常作为标靶。
在一些实施例中，取代、插入或删除可发生在一或多个HVR内，只要此类改变不实质上降低抗体剂结合抗原的能力即可。例如，可在HVR中进行不实质上降低结合亲和力的保守性改变(例如，如本文所提供的保守性取代)。此类改变可位于HVR“热点”或SDR的外部。在上文所提供的变异VH和VL序列的一些实施例中，各HVR未改变或含有不超过一个、两个或三个氨基酸取代。
一种适用于鉴别可作为诱变目标的抗体剂的残基或区的方法称作”丙氨酸扫描诱变法”，如Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所描述。在此方法中，鉴别残基或目标残基群组(例如，带电残基，例如arg、asp、his、lys和glu)，且经中性或带负电氨基酸(例如，丙氨酸或聚丙氨酸)置换，以确定抗体剂与抗原的相互作用是否受影响。可在对初始取代展现功能敏感性的氨基酸位置处引入其他取代。或者或另外，可测定抗原-抗体剂复合物的晶体结构，以鉴别抗体剂与抗原之间的接触点。此类接触残基和邻近残基可作为取代候选物的目标或排除在取代候选物之外。可筛选变异体以确定其是否含有所需特性。
氨基酸序列插入包括长度在一个残基至含有一百个或多于一百个残基的多肽范围内的胺基端和/或羧基端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N端甲硫胺酰基残基的抗体剂。抗体剂分子的其他插入变异体包括抗体剂的N端或C端与酶(例如对于ADEPT而言)或延长抗体剂的血清半衰期的多肽的融合物。
在某些实施例中，抗CLDN抗体变异体中的氨基酸取代为保守性氨基酸取代。在某些实施例中，抗CLDN抗体变异体中的氨基酸取代为非保守性氨基酸取代。在某些实施例中，氨基酸取代不实质上降低抗体结合抗原的能力。举例而言，可进行不实质上降低CLDN18.2结合亲和力的保守性改变(例如，如本文所提供的保守性取代)。抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2的结合亲和力可使用以下实例中所描述的方法评定。
保守性取代以标题“保守性取代”展示于表3中。更多实质性变化以标题“示例性取代”提供于表3中，且参考氨基酸侧链类别在下文进一步描述。氨基酸取代可引入至相关抗体，且针对所需活性进行筛选的产物，例如保持/改良CLDN18.2结合。
表3：氨基酸取代
原始残基 示例性取代 优选取代
Ala(A) Val；Leu；Ile Val
Arg(R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn(N) Gln；His；Asp,Lys；Arg Gln
Asp(D) Glu；Asn Glu
Cys(C) Ser；Ala Ser
Gln(Q) Asn；Glu Asn
Glu(E) Asp；Gln Asp
Gly(G) Ala Ala
His(H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile(I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；Norleucine Leu
Leu(L) Norleucine；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys(K) Arg；Gln；Asn Arg
Met(M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe(F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro(P) Ala Ala
Ser(S) Thr Thr
Thr(T) Val；Ser Ser
Trp(W) Tyr；Phe Tyr
Tyr(Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val(V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；Norleucine Leu
非保守性取代需要将其中一个类别的成员换成另一个类别。一种示例性取代型变异体为亲和力熟成抗体，其可适宜例如使用基于噬菌体呈现的亲和力熟成技术(例如本文所描述的技术)产生。简言之，使一或多个CDR残基突变，且在噬菌体上呈现变异抗体并针对特定生物活性(例如结合亲和力)进行筛选。可在HVR中进行改变(例如取代)，例如以此来改良抗体亲和力。可在HVR“热点”(即，在体细胞熟成过程中经历高频率突变的由密码子编码的残基)(参见例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或SDR(a-CDR)中进行此类改变，测试所得变异体VH或VL的结合亲和力。通过构筑二级集合库和自二级集合库再选择来达成亲和力熟成已描述于例如Hoogenboom等人的Methods in MolecularBiology 178:1-37(O'Brien等人编,Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。
在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2蛋白(或其片段)的至少一种对偶基因变异体交叉反应。在一些实施例中，相较于天然存在的CLDN18.2(或其片段)，对偶基因变异体具有至多约30(例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30中的任一个)个氨基酸取代(例如保守性取代)。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体不与CLDN18.2蛋白(或其片段)的任何对偶基因变异体交叉反应。
在一些实施例中，该抗CLDN18.2抗体(或抗体变异体)与来自至少两种不同物种的CLDN18.2蛋白结合(例如，交叉反应)。在一些实施例中，举例而言，抗CLDN18.2抗体(或抗体变异体)与人类CLDN18.2蛋白(或其片段)和来自小鼠、大鼠或非人类灵长类动物(例如食蟹猕猴或恒河猴)的CLDN18.2蛋白(或其片段)结合。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体可对人类CLDN18.2具有完全特异性且可能不展现物种交叉反应性或其他类型的非人类交叉反应性。
在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体剂特定地识别表达于癌细胞(例如实体肿瘤)细胞表面上的CLDN18.2。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体剂特定地识别表达于肿瘤细胞表面上或癌组织(例如，胃癌细胞、食道癌细胞、胃食管接合部癌细胞、胆管癌细胞、胰脏癌细胞、卵巢癌细胞、肝癌细胞、头颈癌细胞、胆囊癌细胞、结肠癌细胞和肺癌细胞)上的CLDN18.2。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体剂特定地识别表达于一或多种癌细胞株(包括(但不限于)例如KATO III(ATCC HTB-103)和NUGC-4(JCRB0834))的细胞表面上的CLDN18.2。
在某些实施例中，抗CLDN18.2抗体特异性结合CLDN18.2而不结合CLDN18.1。在某些实施例中，抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2和CLDN18.1两者结合。在某些实施例中，与该抗体对于CLDN18.1的结合亲和力相比，其对于CLDN18.2的结合亲和力更强。在一些实施例中，该抗体对于CLDN18.2和CLDN18.1的亲和力相当，例如其中该抗体与CLDN18.2结合相比该抗体与CLDN18.1结合的EC50和/或Kd值处于小于约10倍、9倍、8倍、7倍、6倍、5倍、4倍、3倍、2倍或1.5倍中的任一个倍数内，如通过本领域已知(例如本文中别处所描述)的方法所量测。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体(任何形式)特异性结合于CLDN18.2，其中Kd为约10-7M至约10-13M(例如约10-7M至约10-13M、约10-9M至约10-13M，或约10-10M至约10-12M)。
在一些实施例中，CLDN18.2抗体与非标靶蛋白之间结合的Kd大于抗CLDN18.2抗体与CLDN18.2之间结合的Kd。在一些实施例中，该非标靶蛋白不是CLDN18.2。在一些实施例中，该非标靶蛋白为CLDN18.1。在一些实施例中，该非标靶蛋白不是CLDN18.1。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体与非标靶蛋白结合的Kd可比抗CLDN18.2抗体与标靶CLDN18.2之间结合的Kd大至少约10倍，例如约10-100倍、约100-1000倍、约103-104倍、约104-105倍、约105-106倍、约106-107倍、约107-108倍、约108-109倍、约109-1010倍、约1010-1011倍或约1011-1012倍。
在一些实施例中，本文所提供的特异性结合于CLDN18.2的CLDN18.2抗体与CLDN18.2(例如，人类CLDN18.2)上的抗原决定基结合，该抗原决定基与结合IMAB362的CLDN18.2的抗原决定基相异。在一些实施例中，本文所提供的特异性结合于CLDN18.2的CLDN18.2抗体与CLDN18.2(例如，人类CLDN18.2)上的抗原决定基结合，该抗原决定基不与结合IMAB362的CLDN18.2的抗原决定基交叠。IMAB362(也称为柔贝西单抗(zolbetuximab)或克迪西单抗(claudiximab))为结合CLDN18.2的嵌合单株抗体。
特异性结合于CLDN18.2的CLDN18.2抗体可为如上文所定义的各种类型的抗体中的任一个，但优选地为人类、人源化、嵌合抗体。还涵盖了非人类抗CLDN18.2抗体。在一些实施例中，非人类抗CLDN18.2抗体包含来自如本文所描述的抗CLDN18.2抗体的人类CDR序列和非人类构架序列。在一些实施例中，非人类构架序列包括可用于使用如本文所描述的一或多个人类CDR序列产生合成重链和/或轻链可变区的任何序列，包括例如哺乳动物，例如小鼠、大鼠、兔、猪、牛(例如，奶牛、公牛、水牛)、鹿、绵羊、山羊、鸡、猫、狗、雪貂、灵长类动物(例如，狨猴、恒河猴)等。在一些实施例中，非人类抗CLDN18.2抗体包括通过将如本文所描述的一或多个人类CDR序列接枝至非人类构架序列(例如，小鼠或鸡构架序列)上而产生的抗CLDN18.2抗体。
在某些实施例中，该抗体包含人类IgG(例如人类IgG1、人类IgG2、人类IgG3或人类IgG4)的Fc序列。在某些实施例中，Fc序列已改变或以其他方式变化以使得其缺乏抗体依赖性细胞毒性(ADCC)效应功能，该效应功能通常与其与Fc受体(FcR)的结合有关。存在可改变效应功能的使Fc序列变化或突变的许多实例，包括(但不限于)本文中别处所描述的实例。举例而言，WO 00/42072和Shields等人J Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)描述具有提高或下降的与FcR的结合的抗体变异体。那些出版物的内容以引用的方式特别并入本文中。该抗体可呈Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段、双功能抗体和线性抗体形式。此外，该抗体可为与CLDN18.2结合，而且结合一或多个其他标靶并抑制其功能的多特异性抗体。该抗体可与治疗剂接合(例如细胞毒性剂、放射性同位素和化学治疗剂)或用于侦测患者样本中的CLDN18.2或通过成像活体内侦测CLDN18.2的标记物(例如放射性同位素、荧光染料和酶)。其他修饰包括毒素与本文所提供的抗CLDN18.2抗体的结合。
编码抗紧密连接蛋白18.2抗体的核酸
本文也涵盖了编码本文所描述的抗CLDN18.2抗体的核酸分子。在一些实施例中，提供了编码抗CLDN18.2抗体(包括本文所描述的抗CLDN18.2抗体中的任一个)的核酸(或一组核酸)。在一些实施例中，编码本文所描述的抗CLDN18.2抗体的核酸(或一组核酸)可进一步包含编码标签肽标签(例如蛋白质纯化标签，例如His-标签、HA标签)的核酸序列。
本文也涵盖了经分离宿主细胞，其包含抗CLDN18.2抗体、编码抗CLDN18.2抗体的多肽组分的经分离核酸和包含编码本文所描述的抗CLDN18.2抗体的多肽组分的核酸的载体。
本申请也包括这些核酸序列的变异体。例如，上述变异体包括在至少中等严格的杂交条件下与编码本文所描述的抗CLDN18.2抗体的核酸序列杂交的核苷酸序列。
本发明也提供了其中插入有本发明的核酸的载体。
简单概括，通过编码抗CLDN18.2抗体的天然或合成核酸表达抗CLDN18.2抗体可通过将核酸插入至适当表达载体中，使得核酸与5'和3'调节组件(包括(例如)启动子(例如，淋巴球特异性启动子)和3'非转译区(UTR))可操作地连接来达成。载体可适合于真核宿主细胞中的复制和整合。典型克隆和表达载体含有转录和转译终止子、起始序列和适用于调节所需核酸序列表达的启动子。
本发明核酸也可用于使用标准基因递送方案的核酸免疫接种和基因疗法。基因递送方法为本领域中已知的。参见例如美国专利第5,399,346号、第5,580,859号、第5,589,466号，这些专利以全文引用的方式并入本文中。在一些实施例中，本发明提供了基因疗法载体。
核酸可克隆至许多类型的载体中。例如，核酸可克隆至包括(但不限于)质体、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和黏质体的载体中。尤其受关注的载体包括表达载体、复制载体、探针产生载体和定序载体。
此外，表达载体可以病毒载体形式提供至细胞。病毒载体技术为本领域中已知的且描述于例如Sambrook等人(2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,ColdSpring Harbor Laboratory,New York)和其他病毒学和分子生物学手册中。适用作载体的病毒包括(但不限于)反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和慢病毒。一般而言，合适的载体含有在至少一个生物体中具功能性的复制起点、启动子序列、适宜限制性核酸内切酶位点和一或多种可选标记物(参见例如WO 01/96584；WO 01/29058；和美国专利第6,326,193号)。
已开发出用于将基因转移至哺乳动物细胞中的多种基于病毒的系统。例如，反转录病毒提供了基因递送系统的适宜平台。所选基因可插入至载体中且使用本领域中已知的技术封装于反转录病毒粒子中。重组病毒随后可经分离且在活体内或离体递送至个体的细胞中。多种反转录病毒系统为本领域中已知。在一些实施例中，使用腺病毒载体。多种腺病毒载体为本领域中已知的。在一些实施例中，使用慢病毒载体。来源于反转录病毒(例如慢病毒)的载体为达成长期基因转移的适合工具，因为其允许长期稳定整合转殖基因和其在子细胞中的传播。慢病毒载体具有优于来源于致癌反转录病毒(例如鼠类白血病病毒)的载体的额外优势，因为其可转导非增殖性细胞，例如肝细胞。其也具有低免疫原性的额外优势。
其他启动子组件(例如，强化子)调节转录起始频率。通常，这些组件位于起始位点上游30-110bp区域中，但是许多启动子近期已显示出也含有位于起始位点下游的功能组件。启动子组件之间的间距通常为灵活的，使得当组件倒置或相对于彼此移动时保留启动子功能。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子组件之间的间距在活性开始减退之前可增加至相隔50bp。
适合启动子的一个实例为即刻早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。此启动子序列为能够驱动任何与其可操作地连接的聚核苷酸序列的高表达量的强组成性启动子序列。适合启动子的另一实例为延伸生长因子-1α(EF-1α)。然而，也可以使用其他组成性启动子序列，包括(但不限于)猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳房肿瘤病毒(MMTV)、人类免疫缺损病毒(HIV)长末端重复序列(LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽类白血病病毒启动子、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus)即刻早期启动子、劳斯肉瘤病毒启动子(Rous sarcomavirus promoter)，以及人类基因启动子，例如(但不限于)肌动蛋白启动子、肌凝蛋白启动子、血红蛋白启动子和肌酸激酶启动子。此外，本发明不应限于组成性启动子的使用。本文也涵盖诱导性启动子作为本发明的一部分。诱导性启动子的使用提供了分子开关，该分子开关能够在需要其可操作地连接的聚核苷酸序列表达时打开此类表达或在不需要表达时关闭表达。诱导性启动子的实例包括(但不限于)金属硫蛋白启动子、糖皮质激素启动子、孕酮启动子和四环素启动子。
在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体剂的表达为诱导性的。在一些实施例中，编码抗CLDN18.2抗体剂的核酸序列与诱导性启动子(包括本文所描述的任何诱导性启动子)可操作地连接。
抗体生产方法
本发明抗体可通过本领域中已知的任何方式产生。示例性抗体产生技术描述如下；但这些示例性技术仅出于说明性目的提供且并不意图限制本发明。另外，进一步描述经涵盖适用于本文所描述的抗体的示例性抗体特性。
为了制备抗原，该抗原可经纯化或以其他方式获自天然来源，或其可使用重组技术表达。在一些实施例中，抗原可用作可溶性蛋白。在一些实施例中，抗原可结合于另一多肽或其他部分，例如为了增加其免疫原性。举例而言，本文所描述的抗原可与Fc区偶合。在一些实施例中，在其细胞表面上表达抗原的细胞可用作抗原。
可通过多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射抗原和佐剂来在动物中培养多株抗体。举例而言，本文描述了对鸡免疫接种的描述。在一些实施例中，抗原使用双功能或衍生剂结合于免疫原性蛋白，例如钥孔血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂。本文提供了用于鸡免疫接种的示例7性方法。适合于多种其他生物体(例如哺乳动物)的相关方法为本领域中熟知。
如上文所描述的，单株抗体可通过多种方法产生。在一些实施例中，本发明的单株抗体使用首次由Kohler等人Nature,256:495(1975)描述且进一步描述于Hongo等人Hybridoma,14(3):253-260(1995)；Harlow等人Antibodies:A Laboratory Manual,(ColdSpring Harbor Laboratory Press,第2版1988)；和Hammerling等人MonoclonalAntibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981)中的杂种瘤方法制备。人类杂种瘤技术(三源杂种瘤技术(Trioma technology))描述于Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)以及Vollmers和Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)中。杂种瘤细胞生长于其中的培养基可针对相关抗体的存在，例如通过活体外结合分析、免疫沉淀、ELISA、RIA等进行筛选；且可通过例如斯卡查德分析(Scatchard analysis)测定结合亲和力。产生具有所需结合特性的抗体的杂种瘤可使用已知培养技术亚克隆和生长，作为腹水性肿瘤在动物活体内生长，例如此类。
在一些实施例中，使用集合库方法(例如噬菌体呈现集合库)制备单株抗体。参见例如Hoogenboom等人的Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人编,HumanPress,Totowa,NJ,2001)。在一些实施例中，VH和VL基因的谱系是通过聚合酶链反应(PCR)克隆且在噬菌体集合库中随机重组，其随后可如Winter等人,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所描述的，针对抗原结合噬菌体进行筛选。噬菌体通常以单链Fv(scFv)片段或Fab片段形式呈现抗体片段。或者，可克隆(例如自人类)原始谱系来提供针对广泛范围的非自体抗原以及自体抗原的单一抗体来源而无需任何免疫接种，如Griffiths等人,EMBO J,12:725-734(1993)所描述的。最终，原始集合库也可通过克隆未经重排源自干细胞的V基因区段，并且使用含有随机序列的PCR引子编码高变CDR3区和实现活体外重排来以合成方式制得，如由Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所描述的。
在一些实施例中，本发明抗体为鸡抗体。鸡抗体可使用本领域中已知的各种技术产生；参见例如美国专利第6,143,559号、第8,592,644号和第9,380,769号。
在一些实施例中，本发明抗体为嵌合抗体。参见例如美国专利第4,816,567号和Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)。在一些实施例中，嵌合抗体包含非人类可变区(例如源自鸡、小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人类灵长类动物(例如猴)的可变区)和人类恒定区。在一些实施例中，嵌合抗体为“类别转换”抗体，其中类别或子类别已自亲本抗体的类别或子类别变化。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在一些实施例中，嵌合抗体为人源化抗体。可使非人类抗体人源化以降低对人类的免疫原性，同时保持亲本非人类抗体的特异性和亲和力。一般而言，人源化抗体包含一或多个可变域，其中HVR(例如CDR)(或其部分)来源于非人类抗体(例如，鸡抗体)，且FR(或其部分)来源于人类抗体序列。人源化抗体视情况也包含人类恒定区的至少一部分。在一些实施例中，人源化抗体中的一些FR残基经来自非人类抗体(例如，HVR或CDR残基所来源的抗体)的对应残基取代，例如来恢复或改良抗体特异性或亲和力。人源化抗体和其制备方法评述于例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中。使鸡抗体人源化的方法也描述于例如WO2005014653中。
适用于人源化的人类构架区包括(但不限于)：使用“最佳拟合”方法选择的构架区；来源于具有轻链或重链可变区的特定子组的人类抗体的共同序列的构架区；人类体细胞突变构架区或人类生殖系构架区；和来源于筛选FR集合库的构架区。参见例如Sims等人J.Immunol.151:2296(1993)；Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；Presta等人J.Immunol.,151:2623(1993)；Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)；和Baca等人J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)。
在一些实施例中，本发明抗体为人类抗体。可使用本领域中已知的各种技术来产生人类抗体。在一些实施例中，人类抗体通过非人类动物产生，例如经基因工程改造的鸡(参见例如美国专利第8,592,644号和第9,380,769号)和/或本文所描述的小鼠。人类抗体大体描述于Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)。
在一些实施例中，本发明抗体为抗体片段，包括(但不限于)Fab、F(ab')2、Fab'-SH、Fv或scFv片段，或单域、单重链或单轻链抗体。抗体片段可通过例如酶分解或重组技术产生。在一些实施例中，完整抗体的蛋白分解用以产生抗体片段，例如如Morimoto等人,Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117(1992)和Brennan等人,Science,229:81(1985)中所描述。在一些实施例中，抗体片段通过重组宿主细胞产生。例如，Fab、Fv和scFv抗体片段由大肠杆菌表达且分泌自大肠杆菌。抗体片段可替代地分离自抗体噬菌体集合库。
Fab'-SH片段可直接回收自大肠杆菌并且以化学方式偶合来形成F(ab')2片段。参见Carter等人,Bio/Technology 10:163-167(1992)。F(ab')2片段也可直接分离自重组宿主细胞培养物。拥有增加的活体内半衰期和包含救助受体结合抗原决定基残基的Fab和F(ab')2片段描述于美国专利第5,869,046号中。
在一些实施例中，抗体为单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185和美国专利第5,571,894号和第5,587,458号。可构筑sFv融合蛋白来在sFv的胺基端或羧基端产生效应蛋白的融合物。抗体片段也可以是“线性抗体”，例如像美国专利第5,641,870号中所描述的。此类线性抗体可具有单特异性或双特异性。
在一些实施例中，本发明抗体为多特异性抗体。多特异性抗体对超过一种抗原具有结合特异性(例如，两种、三种或更多种结合特异性)。在一些实施例中，抗体为双特异性抗体。在一些实施例中，双特异性抗体包含对相同抗原的两种不同结合特异性(例如，对相同抗原具有不同结合亲和力和/或特异性抗原决定基)。在一些实施例中，双特异性抗体包含针对两种不同抗原的结合特异性。在一些实施例中，双特异性抗体为全长或完整抗体。在一些实施例中，双特异性抗体为本发明的抗体片段。
用于产生和纯化双特异性抗体的各种方法为本领域中已知的。已描述多种方法。一种方法为“杵-进入-臼(knobs-into-holes)”或“突起-进入-空穴(protuberance-into-cavity)”方法(参见例如美国专利第5,731,168号)。在一些实施例中，通过在两个Fc域单体(例如“杵-进入-臼”残基对和电荷残基对)中引入不同但相容的取代来促进Fc域单体的异二聚合。杵-臼相互作用有利于异二聚体形成，而杵-杵和臼-臼相互作用归因于立体冲突和有利相互作用的缺失而阻碍同二聚体形成。臼指在蛋白质中的原始氨基酸经具有较小侧链体积的不同氨基酸置换时产生的空隙。杵指在蛋白质中的原始氨基酸经具有较大侧链体积的不同氨基酸置换时产生的凸块。例如，在一些实施例中，经置换的氨基酸处于Fc域单体的CH3抗体恒定域中且参与两个Fc域单体的二聚合。在一些实施例中，一个CH3抗体恒定域中产生一臼以容纳另一CH3抗体恒定域中的一杵，使得杵和臼氨基酸用于促进或有利于两个Fc域单体的异二聚合。在一些实施例中，一个CH3抗体恒定域中产生一臼以优选容纳另一CH3抗体恒定域中的一原始氨基酸。在一些实施例中，一个CH3抗体恒定域中产生一杵以形成与另一CH3抗体恒定域中的原始氨基酸的其他相互作用。
在一些实施例中，通过用具有较小侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸或苏氨酸)置换具有较大侧链的氨基酸(例如酪氨酸或色氨酸)，例如CH3抗体恒定域中的Y407V突变来构筑臼。类似地，在一些实施例中，通过用具有较大侧链的氨基酸置换具有较小侧链的氨基酸，例如CH3抗体恒定域中的T366W突变来构筑杵。在一些实施例中，一个Fc域单体包括杵突变T366W，且另一Fc域单体包括臼突变T366S、L358A和Y407V。杵-臼氨基酸对包括(但不限于)表4中所示的氨基酸。
表4：杵-进入-臼氨基酸突变
Figure GDA0002661925870000531
Figure GDA0002661925870000541
另一方法使用与免疫球蛋白恒定域序列(例如与免疫球蛋白重链恒定域，包含铰链区、CH2区和CH3区的至少部分)融合的具有所需结合特异性的抗体可变域(抗体-抗原结合位点)。在一些实施例中，双特异性抗体具有一个臂中的具有第一结合特异性的杂交免疫球蛋白重链和另一臂中的杂交免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)。参见WO94/04690。另一方法使用交联(参见例如美国专利第4,676,980号)产生杂接合抗体。在一些实施例中，可使用化学键(参见例如Brennan等人,Science,229:81(1985))将完整抗体蛋白质裂解成F(ab')2片段来制备双特异性抗体，上述F(ab')2片段在二硫醇错合剂存在下减少并转化成硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物，其中的一个通过还原再转化成Fab'-硫醇且与另一Fab'-TNB衍生物混合形成双特异性抗体。在一些实施例中，以化学方式偶合Fab'-SH片段。在一些实施例中，使用亮氨酸拉链在细胞培养物中产生双特异性抗体片段，如Kostelny等人,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)。其他双特异性抗体形式参见例如Spiess,C.等人(2015)Mol.Immunol.67:95-106。
在一些实施例中，本发明抗体为双功能抗体。参见例如Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)。在双功能抗体中，一个片段的VH和VL域与另一片段的互补VL和VH域配对，因此形成两个抗原结合位点。通过使用单链Fv(sFv)二聚体制备双特异性抗体片段的另一种策略也已报导。参见Gruber等人,J.Immunol,152:5368(1994)。
在一些实施例中，本发明抗体为单域抗体。单域抗体指包含抗体的重链可变域的全部或一部分或轻链可变域的全部或一部分的单一多肽链。在某些实施例中，单域抗体为人类单域抗体(参见例如美国专利第6,248,516B1号)。在一个实施例中，单域抗体包括抗体的重链可变域的全部或一部分。骆驼科抗体也是已知的。
抗体可使用重组方法产生。为了重组产生抗抗原抗体，分离编码该抗体的核酸且插入到用于进一步克隆(DNA的扩增)或用于表达的可复制载体中。编码抗体的DNA可使用常规程序容易地分离和定序(例如使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性地结合的寡核苷酸探针)。许多载体是可利用的。载体组分一般包括(但不限于)以下中的一或多个：信号序列、复制起点、一或多个标记基因、强化子组件、启动子和转录终止序列。
本发明抗体可通过异源多肽(例如在成熟蛋白或多肽的N端具有特异性裂解位点的信号序列或其他多肽)作为融合多肽以重组方式产生。所选择的异源信号序列可为通过宿主细胞识别和处理(例如，通过信号肽酶裂解)的信号序列。对于并不识别和处理原生抗体信号序列的原核宿主细胞，信号序列经例如选自碱性磷酸酶、青霉素酶、lpp或热稳定肠毒素II前导子的原核信号序列取代。用于酵母分泌，原生信号序列可经例如酵母转化酶前导子、因子前导子(包括酵母和克鲁维酵母α-因子前导子)或酸性磷酸酶前导子、白色念珠菌葡萄糖淀粉酶前导子等取代。在哺乳动物细胞表达中，可利用哺乳动物信号序列以及病毒分泌性前导子，例如单纯疱疹病毒gD信号。
表达载体和克隆载体两者含有使得载体能够在一或多个所选宿主细胞中复制，例如以允许载体独立于宿主染色体DNA而复制的核酸序列。此序列可包括复制起点或自主复制序列。用于各种细菌、酵母和病毒的此类序列是已知的。一般而言，哺乳动物表达载体不需要复制起点组分(可使用SV40起点，因为其含有早期启动子)。
表达载体和克隆载体可含有选择基因或可选标记。典型的选择基因编码如下蛋白质：(a)赋予针对抗生素或其他毒素(例如安比西林(ampicillin)、新霉素(neomycin)、甲胺喋呤或四环素)的抗药性，(b)补体营养缺陷性不足，或(c)供应无法自复杂培养基中获得的关键营养物。大部分选择的实例是使用药物新霉素、霉酚酸(mycophenolic acid)和潮霉素(hygromycin)。另一个对于哺乳动物细胞的适合可选标记的实例为使得能够鉴别可摄取编码抗体的核酸的细胞的标记，例如DHFR、谷氨酰胺合成酶(GS)、胸苷激酶、金属硫蛋白-I和金属硫蛋白-II(优选灵长类动物金属硫蛋白基因)、腺苷脱胺酶、鸟氨酸去羧酶，等等。例如，经DHFR基因转型的内源DHFR活性缺乏性中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株是通过在含有甲胺喋呤(Mtx)(DHFR的竞争性拮抗剂)的培养基中培养转型体来鉴别。
或者，经编码相关抗体、野生型DHFR基因和另一种可选标记(例如胺基糖苷3'-磷酸转移酶(APH))的DNA序列转型或共转型的宿主细胞(尤其是含有内源性DHFR的野生型宿主)可通过使细胞在含有针对可选标记(例如胺基糖苷抗生素，例如卡那霉素(kanamycin)、新霉素或G418)的选择剂的培养基中生长来选择。
表达载体和克隆载体一般含有由宿主生物体识别且与编码抗体的核酸可操作地连接的启动子。适合于与原核宿主一起使用的启动子包括phoA启动子、β-内酰胺酶和乳糖启动子系统、碱性磷酸酶启动子、色氨酸(trp)启动子系统和杂交启动子，例如tac启动子。然而，其他已知细菌启动子为合适的。真核生物的启动子序列是已知的。酵母启动子为本领域中周知的并且可包含通过生长条件调节的诱导性启动子/强化子。几乎所有的真核基因均具有富AT区，其位于转录起始位点上游约25至30个碱基处。实例包括(不限于)用于3-磷酸甘油酸激酶或其他糖酵解酶的启动子，这些糖酵解酶例如烯醇酶、甘油醛-3-磷酸去氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、磷酸果糖激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡萄糖激酶。哺乳动物宿主细胞中自载体的抗体转录可通过例如从病毒基因组的启动子获取来控制。SV40病毒的早期和晚期启动子适宜以也含有SV40病毒复制起点的SV40限制性片段形式获得。人类巨细胞病毒的即刻早期启动子适宜以HindIII E限制性片段形式获得。或者，可使用劳斯肉瘤病毒(RousSarcoma Virus)长末端重复序列作为启动子。
编码本发明抗体的DNA由高级真核生物进行的转录通常通过插入强化子序列至载体中而增加。现已知来自哺乳动物基因(血球蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白和胰岛素)的许多强化子序列。然而，通常，将使用来自真核细胞病毒的强化子。
真核宿主细胞(酵母细胞、真菌细胞、昆虫细胞、植物细胞、动物细胞、人类细胞或来自其他多细胞生物体的有核细胞)中使用的表达载体也会含有转录终止和稳定mRNA所需的序列。
本文中适用于在载体中克隆或表达DNA的宿主细胞为上文所描述的原核生物、酵母或高级真核生物细胞。适用于此目的的原核生物包括真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如肠内菌科(Enterobacteriaceae)，例如埃希氏菌属(例如大肠杆菌)、肠杆菌属(Enterobacter)、伊文氏杆菌属(Erwinia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、沙门氏菌属(Salmonella)(例如鼠伤寒沙门杆菌(Salmonella typhimurium))、沙雷氏菌属(Serratia)(例如黏质沙雷氏菌(Serratia marcescans))和志贺杆菌属(Shigella)等。除原核生物以外，例如丝状真菌或酵母的真核微生物为编码抗体的载体的适合克隆或表达宿主。在低级真核宿主微生物中最常使用酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)或普通面包酵母。可选择某些真菌和酵母株，其中糖基化路径已经”人源化”，从而使得产生具有部分或完全人类糖基化模式的抗体。参见例如Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
棉花、玉米、马铃薯、大豆、矮牵牛、西红柿、浮萍(亚麻科)、苜蓿(苜蓿属)和烟草的植物细胞培养物也可用作宿主。
适用于表达糖基化抗体的宿主细胞也来源于多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已鉴别多种杆状病毒株和变异体以及来自例如草地黏虫(Spodoptera frugiperda)(毛虫)、埃和伊蚊(Aedes aegypti)(蚊子)、白纹伊蚊(Aedes albopictus)(蚊子)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)(果蝇)和家蚕(Bombyx mori)的宿主的对应许可昆虫宿主细胞。
脊椎动物细胞可用作宿主，且脊椎动物细胞在培养物(组织培养物)中的繁殖已成为常规程序。适用哺乳动物宿主细胞株的实例为经SV40转型的猴肾CV1株系(COS-7,ATCCCRL 1651)；人胚肾株系(293细胞或经次克隆以在悬浮培养物中生长的293细胞,Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977))；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；小鼠塞特利氏细胞(TM4，Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980))；猴肾细胞(CV1 ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人类子宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；水牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人类肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人类肝细胞(Hep G2，HB 8065)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562，ATCCCCL51)；TR1细胞(Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982))；MRC 5细胞；FS4细胞；和人类肝肿瘤株系(Hep G2)。其他有用的哺乳动物宿主细胞株包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞株，例如NS0和Sp2/0。关于适合于产生抗体的某些哺乳动物宿主细胞株的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,HumanaPress,Totowa,N.J.,2003),第255-268页。
本发明宿主细胞可在多种培养基中培养。市售培养基，例如Ham's F10(Sigma)、最低必需培养基(MEM)(Sigma)、RPMI-1640(Sigma)和杜尔贝科氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium；DMEM)(Sigma)，适用于培养宿主细胞。另外，描述于以下文献中的任一培养基可用作宿主细胞培养基：Ham等人,Meth.Enz.58:44(1979)；Barnes等人,Anal.Biochem.102:255(1980)；美国专利第4,767,704号、第4,657,866号、第4,927,762号、第4,560,655号或第5,122,469号；WO 90/03430；WO 87/00195；或美国专利Re.30,985。这些培养基中的任一个在必要时可以补充激素和/或其他生长因子(例如胰岛素、运铁蛋白或表皮生长因子)、盐(例如氯化钠、钙盐、镁盐和磷酸盐)、缓冲液(例如HEPES)、核苷酸(例如腺苷和胸苷)、抗生素(例如GENTAMYCINTM药物)、微量元素(定义为通常以微摩尔浓度范围内的最终浓度存在的无机化合物)和葡萄糖或等效能量来源。任何其它所需的补充剂也可以以本领域技术人员已知的适当浓度被纳入在内。培养条件，例如温度、pH等等是先前与选用于表达的宿主细胞一起使用的那些条件并且对于本领域技术人员会是显而易见的。
当使用重组技术时，抗体可产生于细胞内、周质间隙中或直接分泌于培养基中。若抗体在细胞内产生，则作为第一步骤，通过例如离心或超滤移除微粒碎片(宿主细胞或溶解片段)。Carter等人,Bio/Technology 10:163-167(1992)描述分离分泌至大肠杆菌周质间隙的抗体的程序。
由细胞制备的抗体组合物可使用例如羟磷灰石层析、疏水相互作用层析、凝胶电泳、透析和亲和层析来纯化，其中亲和层析为通常优选的纯化步骤之一。
糖基化变异体
在一些实施例中，本文提供的抗CLDN18.2抗体经改变以增加或减少抗CLDN18.2抗体经糖基化的程度。抗CLDN18.2抗体的糖基化位点的添加或缺失可便利地通过改变抗CLDN18.2抗体的氨基酸序列或其多肽部分以使得产生或移除一或多个糖基化位点来实现。
在抗CLDN18.2抗体包含Fc区的情况下，可改变与其连接的碳水化合物。由哺乳动物细胞产生的原生抗体通常包含分支链双触角寡醣，其通常通过N键连接至Fc区的CH2域的Asn297。参见例如Wright等人,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡醣可包括各种碳水化合物，例如甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及连接至双触寡醣结构的“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施例中，可修饰本发明抗CLDN18.2抗体中的寡醣以便产生某些特性改良的抗CLDN18.2抗体变异体。
连接至Fc的CH2域的N-聚醣为异质的。CHO细胞中产生的抗体或Fc融合蛋白通过岩藻糖基转移酶活性进行岩藻糖基化。参见Shoji-Hosaka等人,J.Biochem.2006,140:777-83。通常，可在人类血清中侦测到小百分比的天然存在的无岩藻糖基化IgG。Fc的N-糖基化对于与FcγR结合而言十分重要；并且N-聚醣的无岩藻糖基化增强了Fc对FcγRIIIa的结合能力。增加的FcγRIIIa结合可增强ADCC，其可有利于需要细胞毒性的某些抗体剂治疗应用。
在一些实施例中，当Fc介导的细胞毒性非所需时，增强的效应功能可为有害的。在一些实施例中，Fc片段或CH2域未经糖基化。在一些实施例中，CH2域中的N-糖基化位点发生突变以防止糖基化。
在一些实施例中，提供了抗CLDN18.2抗体变异体，其包含Fc区，其中连接至Fc区的碳水化合物结构具有减少的岩藻糖或不具有岩藻糖，这样可以改良ADCC功能。特定地，本文中涵盖相对于野生型CHO细胞中产生的相同抗CLDN18.2抗体上的岩藻糖的量，具有减少的岩藻糖的抗CLDN18.2抗体。即其特征在于岩藻糖的量比其原本由原生CHO细胞(例如产生原生糖基化模式的CHO细胞，比如含有原生FUT8基因的CHO细胞)产生的量低。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体为其上小于约50％、40％、30％、20％、10％或5％N键连接的聚糖包含岩藻糖的抗体。例如，此类抗CLDN18.2抗体中的岩藻糖的量可为1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体为其上N键连接的聚糖中没有一个包含岩藻糖，即其中抗CLDN18.2抗体完全不含岩藻糖，或不具有岩藻糖或无岩藻糖基化的抗体。岩藻糖的量是通过计算糖链内Asn297处的岩藻糖相对于通过如MALDI-TOF质谱量测的连接至Asn297的所有醣结构(例如复合、杂交和高甘露糖结构)的总和的平均量来测定，例如，如WO 2008/077546中所描述。Asn297指大约位于Fc区中位置297(Fc区残基的EU编号)处的天冬酰胺残基；然而，Asn297也可因为抗体中的少量序列变异而位于位置297上游或下游约±3个氨基酸处，也是位置294与300之间。此类岩藻糖基化变异体可具有改良的ADCC功能。参见例如美国专利公开案第US 2003/0157108号(Presta,L.)；第US 2004/0093621号(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。与“无岩藻糖基化”或“岩藻糖缺乏”抗体剂变异体相关的公开案实例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等人J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够产生无岩藻糖基化抗体的细胞株的实例包括缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13 CHO细胞(Ripka等人,Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请案第US 2003/0157108 A1号，Presta,L；以及WO 2004/056312 A1，Adams等人，尤其实例11)，和基因剔除细胞株，例如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因、FUT8、基因剔除CHO细胞(参见例如Yamane-Ohnuki等人,Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；以及WO2003/085107)。
进一步提供了具有平分寡醣的抗CLDN18.2抗体变异体，例如其中连接至抗CLDN18.2抗体的Fc区的双触角寡醣由GlcNAc平分。此类抗CLDN18.2抗体变异体可具有减少的岩藻糖基化和/或改良的ADCC功能。此类抗体剂变异体的实例描述于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人)；美国专利第6,602,684号(Umana等人)；US 2005/0123546(Umana等人)；和Ferrara等人,Biotechnology and Bioengineering,93(5):851-861(2006)中。还提供了寡醣中的至少一个半乳糖残基与Fc区连接的抗CLDN18.2抗体变异体。此类抗CLDN18.2抗体变异体可具有改良的CDC功能。此类抗体剂变异体描述于例如WO1997/30087(Patel等人)；WO 1998/58964(Raju,S.)；和WO 1999/22764(Raju,S.)中。
在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体变异体包含能够与FcγRIII结合的Fc区。在一些实施例中，包含Fc区的抗CLDN18.2抗体变异体在人类效应细胞(例如，T细胞)存在下具有ADCC活性或在人类效应细胞存在下具有相较于包含人类野生型IgG1Fc区的其他方面相同的抗CLDN18.2抗体增加的ADCC活性。
经半胱氨酸工程改造变异体
在一些实施例中，可能需要产生经半胱氨酸工程改造抗CLDN18.2抗体，其中一或多个氨基酸残基经半胱氨酸残基取代。在一些实施例中，经取代的残基存在于抗CLDN18.2抗体的可接近位点处。通过经半胱氨酸取代那些残基，从而使反应性硫醇基群位于抗CLDN18.2抗体的可接近位点并且这些硫醇基可用来使抗CLDN18.2抗体结合于其他部分，例如药物部分或连接符-药物部分，以产生如本文中进一步描述的抗CLDN18.2免疫缀合物。可如例如美国专利第7,521,541号中所描述产生经半胱氨酸工程改造抗CLDN18.2抗体。
效应功能工程改造
可能需要关于效应功能修饰本文所提供的抗CLDN18.2抗体，以便增强例如抗体治疗癌症的有效性。例如，可将半胱氨酸残基引入至Fc区中，从而允许此区域中的链间二硫键形成。因此产生的同二聚抗体可具有改良的内化能力和/或增加的补体介导的细胞杀灭作用和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。参见Caron等人,J.Exp.Med.,176:1191-1195(1992)和Shapes,J.Immunol.,148:2918-2922(1992)。具有增强的抗肿瘤活性的同二聚抗体也可使用异双功能性交叉连接符制备，如Wolff等人,Cancer Research,53:2560-2565(1993)中所描述。或者，抗体可经工程改造以包含普通Fc区并且可以从而具有增强的补体溶解和ADCC能力。参见Stevenson等人,Anti-Cancer Drug Design3:219-230(1989)。
可进行Fc区序列的突变或改变以改良FcR结合(例如与FcγR、FcRn的结合)。在一些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体包含至少一个改变的效应功能，例如相较于原生IgG或亲本抗体改变的ADCC、CDC和/或FcRn结合。在一些实施例中，包含突变或改变的抗体的效应功能相对于亲本抗体提高。在一些实施例中，包含突变或改变的抗体的效应功能相对于亲本抗体降低。若干适用特定突变的实例描述于例如Shields,RL等人(2001)JBC276(6)6591-6604；Presta,L.G.,(2002)Biochemical Society Transactions 30(4):487-490；和WO 00/42072中。
在一些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体包含Fc受体突变，例如Fc区的至少一个位置处的取代突变。此类取代突变可发生于Fc域中的氨基酸位置，包括(但不限于)例如238、239、246、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、332、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439，其中Fc区中残基的编号系根据EU编号系统。在一些实施例中，Fc受体突变为D265A取代。在一些实施例中，Fc受体突变为N297A取代。其他适合突变为本领域中已知的。示例性突变阐述于例如美国专利第7,332,581号中。
免疫结合物和共价修饰
本发明还涉及包含结合于第二部分抗体的免疫结合物。在一些实施例中，第二部分为细胞毒性剂，例如化学治疗剂、毒素(例如，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即，放射性结合物)。
可使用的酶活性毒素和其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa))、篦麻毒素A链、相思子毒素A链、莫迪素A链、α-帚曲菌素(alpha-sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白、康乃馨蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树素(gelonin)、有丝分裂素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素、伊诺霉素(enomycin)和单端孢霉烯(tricothecene)。多种放射性核种可用于产生放射性结合抗体。实例包括212Bi、131I、131In、90Y和186Re。适用于产生此类免疫结合物的示例性化学治疗剂描述于本文其它地方。
在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)结合于美登素(maytansine)、类美登素(maytansinoid)或卡奇霉素(calicheamicin)。在某些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)结合于类美登素DM1。
抗体与细胞毒性剂的结合物可使用多种双功能蛋白质偶合剂来制备，该等蛋白质偶合剂例如N-丁二酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸酯(SPDP)、亚胺基硫异环戊烷(IT)、酰亚胺酯的双官能衍生物(例如二亚胺代己二酸二甲酯盐酸盐)、活性酯(例如辛二酸二丁二酰亚胺酯)、醛(例如戊二醛)、双叠氮化合物(例如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮鎓衍生物(例如双-(对重氮鎓苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(例如2,6-二异氰酸伸甲苯酯)和双活性氟化合物(例如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。举例而言，蓖麻毒素免疫毒素可如Vitetta等人,Science,238:1098(1987)中所描述来制备。经碳14标记的1-异硫氰基苯甲基-3-甲基二伸乙三胺五乙酸(MX-DTPA)为用于使放射性核苷酸与抗体结合的示例性螯合剂。参见WO94/11026。
在另一实施例中，抗体可结合于“受体”(例如抗生蛋白链菌素)，以用于肿瘤预先靶向，其中向患者给予抗体-受体结合物，随后使用清除剂将未结合的结合物从循环中移除，且随后施用结合于细胞毒性剂(例如放射性核苷酸)的“配体”(例如抗生素蛋白)。
还提供了杂接合抗体，其包含共价连接至少一种其他抗体的本文所描述的抗CLDN18.2抗体。例如，已提出杂接合抗体使免疫系统细胞靶向不要的细胞(美国专利第4,676,980号)和治疗HIV感染。包含本文所描述的抗CLDN18.2抗体的杂接合抗体可于活体外，使用合成蛋白质化学方法(包括涉及交联剂的那些方法)中的已知方法制备。举例而言，免疫毒素可使用二硫键交换反应或通过形成硫醚键来构筑。适用于此目的的试剂的实例包括亚胺基硫醇酯和4-巯基丁酰亚氨酸甲酯和那些揭示于例如美国专利第4,676,980号中的试剂。
还提供了包含至少一个共价修饰的抗CLDN18.2抗体。一种共价修饰包括使抗CLDN18.2的标靶氨基酸残基与能够与抗体的所选侧链或N-端或C端残基反应的有机衍生剂反应。常用交联剂包括(但不限于)例如1,1-双(重氮乙酰基)-2-苯乙烷、戊二醛、N-羟基丁二酰亚胺酯(例如4-叠氮基水杨酸酯)、同型双官能酰亚胺酯(包括二丁二酰亚胺酯，例如3,3'-二硫代双(丁二酰亚胺基-丙酸酯))、双官能顺丁烯二酰亚胺(例如双N-顺丁烯二酰亚胺基-1,8-辛烷)和例如3-[(对叠氮苯基)-二硫基]丙酰亚氨酸甲酯的试剂。
其他修饰包括麸酰胺酰基和天冬酰胺酰基残基分别去酰胺化而形成对应麸胺酰基和天冬胺酰基残基，脯氨酸和离氨酸的羟基化，丝胺酰基或苏胺酰基残基的羟基磷酸化，离氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-胺基甲基化[T.E.Creighton,Proteins:Structure andMolecular Properties,W.H.Freeman&Co.,San Francisco,第79-86页(1983)]、N端胺的乙酰化，和任何C端羧基的酰胺化。
另一类型的共价修饰包含以美国专利第4,640,835号、第4,496,689号、第4,301,144号、第4,670,417号、第4,791,192号或第4,179,337号中所阐述的方式使本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)连接至多种非蛋白质聚合物中的一个，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯。
嵌合分子
本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)也可经修饰，以形成包含与另一异源多肽或氨基酸序列融合的抗体的嵌合分子。
在一个实施例中，此嵌合分子包含本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)与蛋白质转导域的融合物，该蛋白质转导域靶向用于使用例如人类免疫缺乏病毒TAT蛋白的蛋白质转导域递送至各种组织和更特定的跨血脑障壁递送的多肽(Schwarze等人,1999,Science 285:1569-72)。
在另一实施例中，此嵌合分子包含本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)与标签多肽的融合物，该标签多肽提供抗标签抗体可选择性结合的抗原决定基。抗原决定基标签一般处于多肽的胺基或羧基端。本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)的此类抗原决定基标签形式的存在可使用针对标签多肽的抗体来侦测。各种标签多肽和其各别抗体为本领域中已知的。实例包括聚-组氨酸(poly-His)或聚-组氨酸-甘氨酸(poly-His-gly)标签；流感HA标签多肽和其抗体12CA5[Field等人,Mol.Cell.Biol.,8:2159-2165(1988)]；c-myc标签和其8F9、3C7、6E10、G4、B7和9E10抗体[Evan等人,Molecularand Cellular Biology,5:3610-3616(1985)]；和单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签和其抗体[Paborsky等人,Protein Engineering,3(6):547-553(1990)]。其他标签多肽包括Flag肽[Hopp等人,BioTechnology,6:1204-1210(1988)]；KT3抗原决定基肽[Martin等人,Science,255:192-194(1992)]；α-微管蛋白抗原决定基肽[Skinner等人,J.Biol.Chem.,266:15163-15166(1991)]；和T7基因10蛋白肽标签[Lutz-Freyermuth等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:6393-6397(1990)]。
嵌合抗原受体(CAR)和CAR效应细胞
在一些实施例中，抗CLDN18.2抗体或其片段(被称作“抗CLDN18.2部分”)为抗CLDN18.2构筑体的部分。在一些实施例中，抗CLDN18.2构筑体为包含抗CLDN18.2抗体部分的嵌合抗原受体(CAR)(在本文中也被称作“抗CLDN18.2 CAR”)。还提供了CAR效应细胞(例如，T细胞、NK细胞或巨噬细胞)，其包含含有抗CLDN18.2抗体部分的CAR。此细胞在本文中也被称作“抗CLDN18.2 CAR效应细胞”，例如“抗CLDN18.2 CAR T细胞”、“抗CLDN18.2 CAR NK细胞”或“抗CLDN18.2 CAR巨噬细胞”。
在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR包含：a)包含特异性结合于CLDN18.2的抗CLDN18.2抗体部分的胞外域，和b)胞内信号传导域。跨膜域可存在于胞外域与胞内域之间。
在抗CLDN18.2 CAR的胞外域与跨膜域之间，或在抗CLDN18.2 CAR的胞内域与跨膜域之间，可存在间隔域。间隔域可为用于将多肽链中的跨膜域连接至胞外域或胞内域的任何寡肽或多肽。间隔域可包含至多约300个氨基酸，包括例如约10至约100，或约25至约50个氨基酸。
跨膜域可来源于天然来源或合成来源。在来源为天然时，该域可来源于任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。在本发明中具有特定用途的跨膜区可来源于T细胞受体、CD28、CD3ε、CD3ζ、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137或CD154的α、β、δ或γ链(即至少包含其跨膜区)。在一些实施例中，跨膜域可以是合成的，在此情况下，其可主要包含疏水性残基，例如白氨酸和缬氨酸。在一些实施例中，在合成跨膜域的各端可发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施例中，具有例如长度在约2与约10(例如约2、3、4、5、6、7、8、9或10中的任一个)个氨基酸之间的长度的短寡肽或多肽连接符可在抗CLDN18.2 CAR的跨膜域与胞内信号传导域之间形成键联。在一些实施例中，连接符为甘氨酸-丝氨酸二联体。
在一些实施例中，使用与抗CLDN18.2 CAR的胞内域的一个序列天然结合的跨膜域(例如如果抗CLDN18.2 CAR胞内域包含4-1BB共刺激序列，则抗CLDN18.2 CAR的跨膜域来源于4-1BB跨膜域)。
抗CLDN18.2 CAR的胞内信号传导域负责其中已置入抗CLDN18.2 CAR的免疫细胞的至少一种正常效应功能的活化。T细胞、NK细胞或巨噬细胞的效应功能可为例如细胞溶解活性或辅助细胞活性，包括细胞介素的分泌。因此，术语“胞内信号传导域”是指转导效应功能信号且导引细胞执行特定功能的蛋白质部分。虽然通常可使用整个胞内信号传导域，但在许多情况下，无需使用整条链。就使用胞内信号传导域的截短部分而言，此类截短部分只要转导效应功能信号即可用于替代完整链。因此,术语“胞内信号传导域”意为包括足以转导效应功能信号的胞内信号传导域的截短部分。
用于本发明的抗CLDN18.2 CAR中的胞内信号传导域的实例包括共同起到在抗原受体接合之后起始信号转导作用的T细胞受体(TCR)和辅助受体的细胞质序列，以及这些序列的任何衍生物或变异体和具有相同功能能力的任何合成序列。
T细胞活化可由两种相异类别的胞内信号传导序列介导：那些经由TCR起始抗原依赖性一级活化的(一级信号传导序列)和那些以抗原独立方式起作用以提供二级或共刺激信号的(共刺激信号传导序列)。本文所描述的抗CLDN18.2 CAR可包含上述信号传导序列中的一个或两个。
一级信号传导域以刺激方式或抑制方式调节TCR复合物的一级活化。以刺激方式起作用的一级信号传导序列可含有信号传导基元，其被称为基于免疫受体酪氨酸的活化基元或ITAM。在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR构筑体包含一或多个ITAM。在本发明中具有特定用途的含有ITAM的一级信号传导序列实例包括来源于TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的那些序列。
在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR包含衍生自CD3ζ的一级信号传导序列。举例而言，CAR的胞内信号传导域可包含CD3ζ胞内信号传导序列本身或与适用于本发明抗CLDN18.2 CAR的情形的任何其他所需胞内信号传导序列组合。
本文所描述的共刺激信号传导序列可为共刺激分子的胞内域的一部分，包括例如CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴球功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、特异性结合CD83的配体和其类似者。
在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR的胞内信号传导域包含CD3ζ的胞内信号传导序列和CD28的胞内信号传导序列。在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR的胞内信号传导域包含CD3ζ的胞内信号传导序列和4-1BB的胞内信号传导序列。在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR的胞内信号传导域包含CD3ζ的胞内信号传导序列和CD28和4-1BB或其他共刺激分子的胞内信号传导序列。
因此，举例而言，在一些实施例中，提供了抗CLDN18.2 CAR，其包含：a)包含特异性结合于CLDN18.2(例如抗CLDN18.2抗体或其片段(例如，scFv)中的任一个)的抗CLDN18.2抗体部分的胞外域，b)跨膜域，和c)胞内信号传导域。在一些实施例中，胞内信号传导域能够活化免疫细胞。在一些实施例中，胞内信号传导域包含一级信号传导序列和共刺激信号传导序列。在一些实施例中，一级信号传导序列包含CD3ζ胞内信号传导序列。在一些实施例中，共刺激信号传导序列包含CD28和/或4-1BB胞内信号传导序列。在一些实施例中，胞内域包含CD3ζ胞内信号传导序列和CD28和/或4-1BB胞内信号传导序列。在一些实施例中，胞内域包含CD3ζ胞内信号传导序列和CD28和/或4-1BB胞内信号传导序列，以及单独细胞介素转殖基因，如CAR诱导性介白素-12(iIL-12)卡匣。
本文还提供了表达抗CLDN18.2 CAR的效应细胞(例如T细胞、NK细胞和/或巨噬细胞)。
还提供了产生表达抗CLDN18.2 CAR的效应细胞的方法，该方法包含将编码抗CLDN18.2 CAR的核酸引入至效应细胞中。在一些实施例中，该方法包含例如通过转导、转染或电穿孔将包含编码抗CLDN18.2 CAR的核酸的载体引入至效应细胞中。在一些实施例中，该方法包含通过病毒转导引入包含编码抗CLDN18.2 CAR的核酸序列的载体。在一些实施例中，该方法包含通过转座子引入包含编码抗CLDN18.2 CAR的核酸的载体。在一些实施例中，该方法包含通过CRISPR/Cas9引入包含编码抗CLDN18.2 CAR的核酸序列的载体。在一些实施例中，该方法包含通过非病毒转移(例如质体DNA或经活体外转录mRNA(IVT-mRNA)的电穿孔)引入包含编码抗CLDN18.2 CAR的核酸序列的载体。载体或mRNA至效应细胞中的转导、转染或电穿孔可使用本领域中已知的任何方法进行。
治疗方法
本文所描述的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)可给予受试者(例如，哺乳动物，例如人类)，以治疗涉及异常CLDN18.2活性或表达的疾病或病症或延迟其进展，该疾病或病症包括例如实体肿瘤或癌症(例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)。在某些实施例中，提供了本文所描述的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)，用于制备治疗个体(例如哺乳动物，例如人类)的实体肿瘤或癌症(例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)的药剂。在某些实施例中，提供了本文所描述的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)，用于治疗个体(例如哺乳动物，例如人类)的实体肿瘤或癌症(例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)。在某些实施例中，提供了包含本文所描述的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)的医药组合物，用于治疗个体(例如哺乳动物，例如人类)的实体肿瘤或癌症(例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)。在一些实施例中，治疗表达CDLN 18.2的肿瘤。
在某些实施例中，待治疗的个体为哺乳动物(例如，人类、非人类灵长类动物、大鼠、小鼠、奶牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫等)。在某些实施例中，个体为人类。在某些实施例中，个体为临床患者、临床试验志愿者、实验动物等。在某些实施例中，怀疑个体患有表达CDLN 18.2的肿瘤(例如实体肿瘤)或癌症(例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)或处于患该肿瘤或癌症的风险下。在某些实施例中，已诊断个体患有表达CDLN 18.2的肿瘤(例如实体肿瘤)或癌症(例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)和/或与异常CLDN18.2表达或活性相关的疾病。在某些实施例中，经给予本文所描述的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)的个体对克迪西单抗(IMAB362)或其生物类似物具有抗性。在某些实施例中，经给予本文所描述的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)的个体对于克迪西单抗(IMAB362)或其生物类似物已进展。在某些实施例中，经给予本文所描述的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)的个体难以用克迪西单抗(IMAB362)或其生物类似物治疗。
针对表达CDLN 18.2的肿瘤(例如实体肿瘤)或癌症(例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)或与异常CLDN18.2活性相关的其他疾病的许多诊断方法和那些疾病的临床划定为本领域中已知的。此类方法包括(但不限于)例如免疫组织化学、PCR、荧光原位杂交(FISH)。关于用于评定异常CLDN18.2活性或表达的上述诊断方法的其他细节描述于例如Gupta等人(2009)ModPathol.22(1):128-133；Lopez-Rios等人(2013)J Clin Pathol.66(5):381-385；Ellison等人(2013)J Clin Pathol 66(2):79-89；和Guha等人(2013)PLoS ONE 8(6):e67782中。
本文所描述的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)可使用包括例如静脉内、肌肉内或皮下途径的任何适合途径给予。在一些实施例中，本文提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)与第二、第三或第四药剂(包括例如抗赘生剂、生长抑制剂、细胞毒性剂或化学治疗剂)组合投与以治疗与异常CLDN18.2活性相关的疾病或病症。此类药剂包括(但不限于)例如多西他赛(docetaxel)、吉非替尼(gefitinib)、FOLFIRI(伊立替康(irinotecan)、5-氟尿嘧啶和甲酰四氢叶酸(leucovorin))、伊立替康、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、贝伐单抗(bevacizumab)(抗VEGF抗体)、FOLFOX-4(输注用氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸和奥沙利铂(oxaliplatin))、阿法替尼(afatinib)、吉西他滨(gemcitabine)、卡培他滨(capecitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、提瓦替尼(tivantinib)、依维莫司(everolimus)、CpG-ODN、雷帕霉素(rapamycin)、来那度胺(lenalidomide)、维罗非尼(vemurafenib)、内皮生长抑素(endostatin)、拉帕替尼(lapatinib)、PX-866、Imprime PGG和埃洛替尼(irlotinibm)。在一些实施例中，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)结合于抗赘生性剂、生长抑制剂、细胞毒性剂或化学治疗剂。
在某些实施例中，本文提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)与一或多种其他疗法(例如放射疗法、手术、化学疗法和/或靶向疗法)组合给予。在某些实施例中，本文提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)与化学疗法组合给予。在某些实施例中，化学疗法包含EOX(即，表柔比星(epirubicin)、奥沙利铂(oxaliplatin)和卡培他滨(capecitabine))。在某些实施例中，化学疗法包含唑来膦酸(zoledronic acid)和介白素-2。
取决于有待治疗的适应症和本领域的熟练医师所熟悉的给药相关因素而定，本文所提供的抗体将以有效用于治疗上述适应症、同时使毒性和副作用降至最小的剂量给予。为了治疗表达CDLN 18.2的肿瘤(例如实体肿瘤)或癌症(例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)，典型的剂量可以是例如在0.001至1000μg的范围内；然而，低于或超出此示例性范围的剂量处于本文所描述的治疗方法的范畴内。剂量可以是以总体重计约0.1μg/kg至约100mg/kg(例如，约5μg/kg、约10μg/kg、约100μg/kg、约500μg/kg、约1mg/kg、约50mg/kg，或由前述值中的任两个界定的范围，包括前述值之间的任何范围)。在一些实施例中，典型剂量可介于例如10mg/m2与1500mg/m2之间；然而，低于或超出此示例性范围的剂量处于本文所描述的治疗方法的范畴内。剂量可以是约25mg/m2至约1000mg/m2(例如，约25mg/m2、约100mg/m2、约250mg/m2、约500mg/m2、约750mg/m2或由前述值中的任两个界定的范围，包括前述值之间的任何范围)。在一些实施例中，剂量为约300mg/m2、600mg/m2、800mg/m2或1000mg/m2中的任一个。
本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)可以单次日剂量投与，或每日总剂量可以每日两次、三次或四次的分次剂量投与。或者，抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)可以低于每天的频率投与，举例而言，一周六次、一周五次、一周四次、一周三次、一周两次、一周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每月一次、每两个月一次或每六个月一次。
在一些实施例中，本文提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)在第一循环期间以800mg/m2的剂量给予一次，此后每三周或每21天以600mg/m2的剂量给予一次。在一些实施例中，本文提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)以1000mg/m2的剂量每三周或每21天给予一次。在一些实施例中，本文提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)在第1循环的第1天以800mg/m2的剂量给予，之后在每一其他后续循环的第1天以600mg/m2的剂量给予。
可通过定期评定接受治疗的个体来监测治疗或预防功效。对于经数天或更长时间的重复给予，视病况而定，重复治疗直至出现疾病症状的所需抑制为止。然而，其他剂量方案可适用且属于本发明的范畴。所需剂量可通过本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)的单次药团给予，通过本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)的多次药团给予或通过本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其抗原结合片段)的连续输注给予来递送。
癌症治疗可通过例如(但不限于)肿瘤消退、肿瘤肿瘤或尺寸缩小、发生进展时间、减轻率、存活持续时间、无进展存活期、总反应率、总存活期、反应持续时间、疾病控制率、临床效益率、生活质量、CLDN18.2表达量或位准和/或CLDN18.2活性的位准。可采用确定治疗功效的方法，包括(例如)经由例如RECIST(实体肿瘤的反应评估)指标量测反应(参见例如Eisenhauer等人(2009)”New response evaluation in solid tumors:Revised RECISTguideline(版本1.1).”Eur J.Cancer.45:228-247)。
抗CLDN18.2 CAR效应细胞疗法
本发明还提供了刺激个体的包含CLDN18.2呈现细胞的标靶细胞群体或组织的效应细胞介导反应(例如T细胞、NK细胞或巨噬细胞介导的免疫反应)的方法，其包含向个体投与表达抗CLDN18.2 CAR的效应细胞(例如T细胞)的步骤。在一些实施例中，个体为人类个体。
表达抗CLDN18.2 CAR的抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞、NK细胞和/或巨噬细胞)可输注至有需要的接受者。在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞、NK细胞和/或巨噬细胞)能够活体内复制，从而产生长期存留，使得能够进行持续肿瘤控制。在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR效应细胞可经历稳定活体内T细胞扩增并存留延长的时间量。在一些实施例中，本发明的抗CLDN18.2 CAR T细胞发展为特异性记忆T细胞，其可经再活化以抑制任何其他肿瘤形成或生长。
离体程序为本领域中熟知的。简言之，细胞自个体(例如，人类)分离且经表达本文所揭示的抗CLDN18.2 CAR的载体或mRNA修饰。抗CLDN18.2 CAR细胞可给予至哺乳动物接受者以提供治疗效益。哺乳动物接受者可为人类且抗CLDN18.2 CAR细胞相对于接受者可为自体的。或者，细胞相对于接受者可为同种异体的、同基因型的或异种的。
用于造血干细胞和祖细胞的离体扩增的程序描述于以引用的方式并入本文中的美国专利第5,199,942号中，其可适用于本发明的细胞。其他适合方法在本领域中已知；因此，本发明不限于任何特定的细胞离体扩增方法。简言之，T细胞的离体培养和扩增包含：(1)自哺乳动物、自周边血液收集物或骨髓外植体收集CD34+造血干细胞和祖细胞；和(2)离体扩增这类细胞。除美国专利第5,199,942号中所描述的细胞生长因子以外，也可使用其他因子(例如flt3-L、IL-1、IL-3和c-kit配体)培养和扩增细胞。
本发明的抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)可单独或作为与稀释剂和/或其他组分，例如IL-2或其他细胞介素或细胞群体组合的医药组合物给予。简言之，本发明的医药组合物可包含抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)与一或多种医药学上或生理学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂的组合。此类组合物可包含：缓冲剂，例如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水和类似物；碳水化合物，例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露糖醇；蛋白质；多肽或氨基酸，例如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，例如EDTA或麸胱甘肽；佐剂(例如氢氧化铝)；和防腐剂。在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)组合物经调配用于静脉内给予。
待给予的本发明抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)组合物的精确量可由医师考量在年龄、体重、肿瘤尺寸、感染或癌转移程度和患者(个体)病况方面的个体差异而确定。在一些实施例中，包含抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)的医药组合物以每公斤体重约104至约109个细胞(如每公斤体重约104至约105、约105至约106、约106至约107、约107至约108或约108至约109个细胞中的任一个(包括那些范围内的所有整数值))的剂量给予。抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)组合物还可以这些剂量给予多次。细胞可通过使用免疫疗法中通常已知的输注技术给予(参见例如Rosenberg等人,New Eng.J.of Med.319:1676,1988)。特定患者的最佳剂量和治疗方案可由熟习医药技术者通过监测患者的疾病病征且相应地调整治疗而容易确定。
抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)的给予可以以任何适宜方式进行，包括通过雾化吸入、注射、摄入、输注、植入或移植。可皮下、皮内、瘤内、结节内、髓内、肌肉内、静脉内(i.v.)注射或腹膜内向患者给予本文所描述的组合物。在一些实施例中，本发明的抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)组合物是通过皮内或皮下注射向患者给予。在一些实施例中，本发明的抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)组合物系通过静脉内注射给予。抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞)的组合物可直接注射至肿瘤、淋巴结或感染位点中。
因此，举例而言，在一些实施例中，提供了治疗个体的疾病(例如癌症)的方法，其包含向个体给予有效量的组合物，该组合物包含表达抗CLDN18.2 CAR的效应细胞(例如T细胞)，该抗CLDN18.2 CAR包含：a)包含特异性结合于CLDN18.2的抗CLDN18.2抗体部分的胞外域，b)跨膜域，和c)包含CD3ζ胞内信号传导序列和4-1BB胞内信号传导序列的胞内信号传导域。在一些实施例中，个体为CLDN18.2阳性的。在一些实施例中，相较于患者群体的中等量，个体表达高CLND18.2量。在一些实施例中，给药由静脉内、腹膜内或瘤内途径进行。在一些实施例中，给药由静脉内途径进行。在一些实施例中，给药由瘤内途径进行。在一些实施例中，个体为人类。
在一些实施例中，提供了启动个体中的T细胞的方法，其包含向个体给予有效量的组合物，该组合物包含表达根据上文所描述的抗CLDN18.2 CAR中的任一个的抗CLDN18.2CAR的效应细胞(例如T细胞)。在一些实施例中，个体患有癌症。在一些实施例中，给药由静脉内、腹膜内或瘤内途径进行。在一些实施例中，给药由静脉内途径进行。在一些实施例中，给药由瘤内途径进行。在一些实施例中，个体为人类。
医药调配物
本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其片段)可经医药学上可接受的载剂或赋形剂调配，使得其适合于向有需要的个体(例如哺乳动物，例如人类)给予。抗体的适合调配物是通过将具有所需纯度的抗体(或其片段)与视情况选用的医药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))混合而以冻干调配物或水溶液形式获得。医药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒性且包括：缓冲剂，例如磷酸酯、柠檬酸酯和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如氯化十八烷基二甲基苯甲基铵；氯化六羟季铵；氯化苯甲烃铵、苄索氯铵；丁基苯酚或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，例如聚乙烯吡咯啶酮；氨基酸，例如甘氨酸、麸酰氨酸、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或离氨酸；单醣、双醣和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露糖醇、岩藻糖或山梨糖醇；成盐相对离子，例如钠；金属错合物(例如Zn-蛋白质错合物)；和/或非离子界面活性剂，例如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
本文所揭示的抗体也可调配成免疫脂质体形式。含有抗体的脂质体系通过本领域中已知的方法来制备，例如描述于以下文献的制备方法：Epstein等人,PNAS USA,82:3688(1985)；Hwang等人,PNAS USA,77:4030(1980)；和美国专利第4,485,045号和第4,544,545号。循环时间延长的脂质体揭示于美国专利第5,013,556号中。
特别有用的脂质体可通过逆相蒸发法，用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物产生。脂质体经由孔径经限定的过滤器挤出以产生具有所需直径的脂质体。本发明抗体的Fab'片段可经由二硫基交换反应结合于如Martin等人,J.Biol.Chem.,257:286-288(1982)中所描述的脂质体。抗赘生剂、生长抑制剂或化学治疗剂(例如小红莓(doxorubicin))视情况也包含在脂质体内。参见Gabizon等人,J.National Cancer Inst.,81(19):1484(1989)。
包含本文所描述的抗CLDN18.2抗体的医药调配物也可含有超过一种视需要用于待治疗的特定适应症的活性化合物，优选地为具有不会有害地影响彼此的互补活性的那些化合物。例如，可能需要提供除本文所描述的抗CLDN18.2抗体以外的抗赘生剂、生长抑制剂、细胞毒性剂或化学治疗剂。此类分子宜以有效用于预期目的的量组合存在。此类其他药剂的有效量取决于调配物中存在的抗体量、疾病或病症或者治疗的类型和上文所论述的其他因素。此类其他药剂的有效量取决于调配物中存在的抗体量、疾病或病症或者治疗的类型和上文所论述的其他因素。这些药剂一般以如本文所描述的相同剂量和投与途径或迄今采用的剂量的约1％至99％使用。
在一些实施例中，本发明的抗体是冻干的。此类冻干调配物可利用适合稀释剂复原至高蛋白浓度，且复原调配物可给予至哺乳动物(例如人类)。
在某些实施例中，待用于活体内给药的医药调配物是无菌的。这通过例如经由无菌过滤膜过滤包含本文所描述的抗CLDN18.2抗体的溶液已经无困难地实现。
使用抗紧密连接蛋白18.2抗体诊断和成像的方法
特异性结合于CLDN18.2多肽的经标记抗CLDN18.2抗体、其片段以及其衍生物和类似物可用于诊断目的来侦测、诊断或监测与CLDN18.2的表达、异常表达和/或活性有关的疾病和/或病症。例如，本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其片段)可原位、活体内、离体和活体外用于诊断分析或成像分析。侦测CLDN18.2多肽的表达的方法包含：(a)使用本发明的一或多种抗体分析个体的细胞(例如组织)或体液中多肽的表达，和(b)比较该基因表达量与标准基因表达量，从而所分析的基因表达量相较于标准表达量的增加或减少表明异常表达。此类分析可例如使用获自患者的样本活体内或离体进行。
本文还提供了诊断动物(例如哺乳动物，例如人类)的与CLDN18.2的表达或异常表达相关的疾病或病症的方法。在一些实施例中，方法包含侦测哺乳动物的CLDN18.2多肽。在某些实施例中，诊断包含：(a)向哺乳动物给予有效量的经标记抗CLDN18.2抗体(或其片段)，(b)给予后等待一段时间以允许经标记抗CLDN18.2抗体(或其片段)优先集中在个体中表达CLDN18.2的位点处(和/或使未结合的经标记分子自背景量清除)；(d)侦测个体的经标记抗CLDN18.2抗体的量或含量，和(e)比较个体的经标记抗CLDN18.2抗体的量或含量与健康对照个体的抗CLDN18.2抗体的含量或量。若个体的经标记抗CLDN18.2抗体的量或含量超过健康对照个体的抗CLDN18.2抗体的量或含量，则此可表明个体患有与CLDN18.2的表达或异常表达相关的疾病或病症。
本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其片段)可用于使用如本领域技术人员已知的经典免疫组织化学方法来分析生物样本中的CLDN18.2的量或含量(例如参见Jalkanen等人,J.Cell.Biol.101:976-985(1985)；Jalkanen等人,J.Cell.Biol.105:3087-3096(1987))。适用于侦测CLDN18.2表达的其他基于抗体的方法包括免疫分析，例如酶联免疫吸附分析(ELISA)和放射免疫分析(RIA)。适合抗体分析标记物为本领域中已知且包括酶标记物，例如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，例如碘(131I、125I、123I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(115mIn、113mIn、112In、111In)和鎝(99Tc、99mTc)、铊(201Ti)、镓(68Ga、67Ga)、钯(103Pd)、钼(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru；鲁米诺(luminol)；和荧光标记物，例如荧光素和若丹明(rhodamine)，和生物素。
本领域中已知的技术可应用于本文所提供的经标记抗体(或其片段)。此类技术包括(但不限于)使用双功能结合剂(参见例如美国专利第5,756,065号；第5,714,631号；第5,696,239号；第5,652,361号；第5,505,931号；第5,489,425号；第5,435,990号；第5,428,139号；第5,342,604号；第5,274,119号；第4,994,560号；和第5,808,003号)。
在一些实施例中，CLDN18.2过度表达是通过例如使用基于抗体的分析测定例如血清的生物体液中散布的抗原量来量测(同时参见例如1990年6月12日发布的美国专利第4,933,294号；1991年4月18日公开的W091/05264；1995年3月28日发布的美国专利5,401,638；和Sias等人,J.Immunol.Methods 132:73-80(1990))。除上述分析以外，本领域技术人员可使用各种活体内和离体分析。例如，可使哺乳动物体内的细胞暴露于视情况经可侦测标记物(例如放射性同位素)标记的抗体，且可例如通过外部扫描放射能或通过分析获自先前暴露于抗体的哺乳动物的样本(例如活体组织切片或其他生物样本)评估抗体与它的结合。
CAR效应细胞制备
本发明在一个态样中提供了表达抗CLDN18.2 CAR的效应细胞(例如T细胞、NK细胞和/或巨噬细胞)。本文提供了制备表达抗CLDN18.2 CAR的效应细胞(例如T细胞、NK细胞和/或巨噬细胞)(抗CLDN18.2 CAR效应细胞，例如抗CLDN18.2 CAR T细胞、抗CLDN18.2 CAR NK细胞和/或抗CLDN18.2 CAR巨噬细胞)的示例性方法。
在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞、NK细胞或巨噬细胞)可通过将包含抗CLDN18.2 CAR(例如，包含抗CLDN18.2抗体部分、4-1BB共刺激序列和CD3ζ一级信号传导序列或可延长CAR细胞存活的其他序列(例如IL-2、IL15)或可消除CAR细胞的序列的CAR)的载体(包括(例如)慢病毒载体)引入至效应细胞(例如T细胞、NK细胞或巨噬细胞)中来产生。在一些实施例中，本发明的抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞、NK细胞和/或巨噬细胞)能够活体内复制。在一些实施例中，抗CLDN18.2 CAR效应细胞(例如T细胞、NK细胞或巨噬细胞)可通过将编码抗CLDN18.2 CAR(例如，包含抗CLDN18.2抗体部分、4-1BB共刺激序列和CD3ζ一级信号传导序列的CAR)的mRNA引入至效应细胞(例如T细胞、NK细胞和/或巨噬细胞)中来产生。
本发明的抗CLDN18.2 CAR T细胞可经历稳定的活体内T细胞扩增且可建立在血液和骨髓中长时间高含量存留的CLDN18.2特异性记忆细胞。在一些实施例中，输注至患者体内的本发明的抗CLDN18.2CAR T细胞可活体内消除患有疾病(例如，以高CLDN18.2表达为特征的疾病)的患者的CLDN18.2呈现细胞，例如CLDN18.2呈现癌细胞。
在扩增和基因修饰T细胞、NK细胞或巨噬细胞之前，T细胞、NK细胞或巨噬细胞的来源是从个体获得的。例如，T细胞可获自许多来源，包括周边血液单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染位点的组织、腹水、肋膜积液、脾组织和肿瘤。在本发明的一些实施例中，可使用任何数目的本领域中可获得的T细胞、NK细胞和/或巨噬细胞细胞株。在本发明的一些实施例中，T细胞可获自使用任何数目的本领域技术人员已知的技术(例如FicollTM分离)自个体收集的血液单元。在一些实施例中，通过血球分离术获得来自个体的循环血液的细胞。血球分离术产物通常含有淋巴细胞，包括T细胞、单核球、粒细胞、B细胞、其他成核白血球、红血球和血小板。在一些实施例中，通过血球分离术收集的细胞可经洗涤以移除血浆部分且将细胞置于适当缓冲液或培养基中以用于后续处理步骤。在一些实施例中，细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤。在一些实施例中，洗涤溶液缺乏钙且可能缺乏镁或可能缺乏许多(若非全部)二价阳离子。如一般本领域技术人员将会容易了解的，洗涤步骤可通过熟习本领域中已知的方法实现，例如通过根据制造商说明书使用半自动“流通”离心(例如Cobe 2991细胞处理器、Baxter CytoMate或Haemonetics细胞保存器5)。洗涤之后，可以将细胞再悬浮于多种生物兼容缓冲液中，例如不含Ca2+、不含Mg2+的PBS、PlasmaLyte A或其他具有或不具有缓冲剂的生理盐水溶液。或者，可移除血球分离术样本的非所需组分且细胞直接再悬浮于培养基中。
在一些实施例中，通过溶解红血球和耗竭单核球而使T细胞自周边血液淋巴球分离，例如通过PERCOLLTM密度梯度进行离心或通过逆流离心淘析。T细胞的特定亚群(例如CD3+、CD28+、CD4+、CD8+、CD45RA+和CD45RO+T细胞)可通过正向或负向选择技术进一步分离。可使用多轮选择。
通过负向选择增浓T细胞群体可使用针对负向选择细胞独特的表面标记的抗体组合来实现。一种方法为经由负向磁性免疫黏附或流动式细胞测量术进行的细胞分选和/或选择，其使用针对存在于经负向选择细胞上的细胞表面标记的单株抗体混合物。
制品和套组
提供了制品，其包含适用于治疗表达CDLN 18.2的肿瘤(例如实体肿瘤)或癌症的物质，该肿瘤或癌症例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等。
在某些实施例中，制品或套组包含含有本文所描述的抗CLDN18.2抗体或组合物中的一或多个的容器。在某些实施例中，制品或套组包含含有本文所描述的编码抗CLDN18.2抗体中的一个(或多个)的核酸或组合物的容器。在一些实施例中，套组包括产生如本文所描述的抗CLDN18.2抗体的细胞株的细胞。在一些实施例中，套组包括一或多种阳性对照，例如CLDN18.2(或其片段)或CLDN18.2+细胞。在一些实施例中，套组包括阴性对照，例如基本上不含CLDN18.2的表面或溶液。
在某些实施例中，制品或套组包含容器和容器上或容器随附的标签或药品说明书。适合容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可由多种材料(例如玻璃或塑料)形成。容器容纳组合物本身或组合物与对治疗、预防和/或诊断表达CDLN 18.2的肿瘤(例如实体肿瘤)或癌症(例如，胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)有效的另一组合物的组合，且可具有无菌接取口(例如，容器可为具有可由皮下注射针头刺穿的塞子的静脉溶液袋或小瓶)。组合物中的至少一种药剂为本文所描述的抗CLDN18.2抗体。标签或药品说明书表明组合物用于治疗表达18.2的肿瘤(例如实体肿瘤)或癌症(例如胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌等)。
此外，制品或套组可包含：(a)其中含有组合物的第一容器，其中该组合物包含本文所描述的抗CLDN18.2抗体；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中该组合物包含另一细胞毒性剂或其他治疗剂。在一些实施例中，治疗剂为如本文所描述的免疫治疗剂。另外，制品可进一步包含其他容器，其包含医药学上可接受的缓冲液，例如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。其可进一步包括就商业和使用者观点而言所需的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
应理解，替代抗CLDN18.2抗体(或除此以外)，上述制品或套组中的任一个还可包括本文所描述的免疫缀合物。
还提供了适用于各种目的的套组，例如用于分离或侦测患者中的CLDN18.2，视情况与制品组合。为分离和纯化CLDN18.2，套组可含有偶合于珠粒(例如琼脂糖珠粒)的本文所提供的抗CLDN18.2抗体(或其片段)。可提供含有抗体(或其片段)的套组以用于例如在ELISA或西方墨点法中活体外侦测和定量CLDN18.2。如同制品，套组包含容器和容器上或容器随附的标签或药品说明书。举例而言，容器容纳包含本文所提供的至少一种抗CLDN18.2抗体的组合物。可包括其他容器，其含有例如稀释剂和缓冲剂、对照抗体。标签或药品说明书可提供对组合物的描述以及对预期活体外或诊断性用途的说明。
实例
实例1.抗紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)抗体的产生和表征
将过度表达经两个耐受破坏T细胞抗原决定基标记的CLDN18.2的UbercellsTM用以免疫接种NZB/W F1小鼠。经由FACS针对HEK293-CLDN18.2稳定细胞分析血浆效价。在最终效价量测后收集脾脏，合并且与骨髓瘤细胞融合以产生杂种瘤。融合后十天，通过FACS针对HEK293-CLDN18.2、HEK293-CLDN18.1和HEK293筛选杂种瘤清液层。杂种瘤对CLDN18.2显示不同结合亲和力和选择性。对于同一筛选的102份杂种瘤清液层，33份包含选择性结合于CLDN18.2的抗体；46份包含以几乎相等的亲和力结合CLDN18.2和CLDN18.1两者的抗体；且9份包含经证实与CLDN18.2的相互作用较差的抗体。参见图1(MFI＝平均荧光强度)。图1中所示的数据也提供于下表5中。
表5：与HEK293-CLDN18.2、HEK293-CLDN18.1和HEK293细胞结合的抗体的平均荧光强度
Figure GDA0002661925870000721
Figure GDA0002661925870000731
Figure GDA0002661925870000741
Figure GDA0002661925870000751
接着，经由细胞内ELISA测定20份杂种瘤殖株清液层对于CLDN18.2的EC50值。含有与CLDN18.1和CLDN18.2两者结合(参见图1)的抗体的杂种瘤5K4B清液层用作阳性对照。如下进行细胞内ELISA：在经聚-L-离氨酸涂布的96孔培养盘中的每一孔中接种5×103个HEK293-CLDN18.2细胞。随后在37℃与5％CO2下培育培养盘2天。培育后，自各孔移除培养基，且在室温下用每孔200μl阻断缓冲液(3％BSA/PBS(pH 7.4))阻断HEK293-CLDN18.2细胞，持续1小时。在室温下将每一杂种瘤清液层与细胞一起培育1小时。用含有1mM Ca2+和0.5mM Mg2+的200μl PBS(pH 7.4)将细胞轻轻地洗涤3次。接着，在室温下将细胞与100μlHRP-结合山羊抗人类IgG(H+L)抗体一起培育1小时。培育后，用含有1mM Ca2+和0.5mM Mg2+的200μl PBS(pH 7.4)将细胞洗涤三次。将100μl 1-StepTM Ultra TMB-ELISA受质添加至各孔，且通过添加50μl停止溶液停止反应。使用CLARIOStar微量培养盘读取器来量测OD450。使用HEK293-CLDN18.1细胞针对每一殖株重复细胞内ELISA。结果展示于下表6中。
表6
Figure GDA0002661925870000752
Figure GDA0002661925870000761
选择产生结合CLDN18.2但不结合CLDN18.1的抗体或相较CLDN18.1优先结合CLDN18.2的抗体的杂种瘤以用于克隆。也选择经证实与CLDN18.2和CLD18.1两者强力结合的杂种瘤5K4B和2F13A以用于克隆。简言之，在384孔培养盘中的每孔中接种来自表6中所测试的每一杂种瘤和杂种瘤1B13A的1个细胞。通过FACS筛选来自扩增殖株的清液层，以重新确认与CLDN18.2的结合。经由5'RACE扩增、TOPO克隆且定序来自对CLDN18.2展示高亲和力的殖株杂种瘤的编码重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)的DNA片段。殖株的VH域的氨基酸序列展示于表7中，且殖株的VL域的氨基酸序列展示于表8中(CDR经加粗且加底线)。
表7
Figure GDA0002661925870000762
Figure GDA0002661925870000771
表8
Figure GDA0002661925870000781
Figure GDA0002661925870000791
合成表7和表8中所示的每一殖株的编码VH和VL域的DNA片段。编码VH域的DNA片段均经克隆至具有人类IgG1恒定区的框架中的pcDNA3.4中，且编码VL域的DNA片段均经克隆至具有人类Igκ恒定区的框架中的pcDNA3.4中。随后将表达表7和表8中所示的抗体殖株中的每一个的重链和轻链的质体共转染至生长于无血清FreeStyleTM 293表达培养基中的293-6E细胞中。第6天收集细胞培养物清液层且使用
Figure GDA0002661925870000792
A层析纯化。合并经溶离蛋白质部分，且将缓冲液替换为PBS，pH 7.2。通过A280测定每一经溶离部分的蛋白浓度，且经由SDS-PAGE测定每一溶离份的纯度>95％。
使用HEK293-CLDN18.2细胞通过细胞内ELISA和FACS评定20份经纯化嵌合抗体与CLDN18.2的相互作用。如上文所描述进行细胞内ELISA。如下进行FACS分析：制备表7和表8中所示的每一抗体殖株的连续稀释液，且用HEK293-CLDN18.2细胞于冰上染色30min，其中最终抗体浓度为10μg/ml、3μg/ml、1μg/ml、0.3μg/ml、0.1μg/mlμg/ml、0.03μg/ml、0.01μg/ml和0μg/ml。用染色缓冲液(PBS+2％胎牛血清)洗涤细胞以移除游离抗体，且用AlexFluor488结合抗人类IgG抗体于冰上进一步染色30min。洗涤细胞，且通过FACS分析。下表9中概述嵌合抗体的EC50：
表9
Figure GDA0002661925870000801
进行第二组细胞内ELISA分析以评定经纯化嵌合抗体与CLDN18.1(CLDN蛋白的不同剪接变异体)的结合。使用1μg/ml各抗体殖株和HEK293-CLDN18.1细胞如上文所描述进行分析。将1μg/ml人类IgG1用作阴性对照。含有与CLDN18.1和CLDN18.2两者结合(参见图1)的抗体的杂种瘤5K4B清液层用作阳性对照。如图2中所示，2-D22-A、9-A13-B和1H16-A显示与CLDN18.1的一定程度的相互作用，而其他各者仅结合于CLDN18.2，但不结合于CLDN18.1。
实例2：与胃癌细胞株结合的CLDN18.2特异性抗体
发现人类胃癌细胞株KATO-III(ATCC HTB-103)和NUGC-4(JCRB0834)呈现CLDN 18的稳定内源表达。通过FACS分析描述于实例1中的经纯化嵌合抗体与组成性表达于KATO-III和NUGC-4活细胞上的CLDN18.2的细胞表面结合，且测定每一抗体的结合EC50值。描述于实例1中的20种抗体中的18种(即10-K12-A、1-B13-A、1-M5-A、2-D22-A、4-N1-A、5-J22-A、6-C5-A、6-M11-A、7-A21-A、7-B15-A、7-E20-A、7-G17-A、9-B11-A、9-C6-A、9-M7-A、9-N14-A、10-J10-B和10-P12-A)的EC50的EC50值低于抗CLDN18.2参考抗体IMAB362的EC50值。这些18种抗体相比IMAB362也具有较高最大结合值，表明抗体10-K12-A,1-B13-A,1-M5-A,2-D22-A,4-N1-A,5-J22-A,6-C5-A,6-M11-A,7-A21-A,7-B15-A,7-E20-A,7-G17-A,9-B11-A,9-C6-A,9-M7-A,9-N14-A,10-J10-B,10-P12-A具有高于参考抗体IMAB362的CLDN18.2亲和力。参见图3A、图3B和图3C。
实例3：评定抗CLDN18.2抗体与IMAB362特异性肽的结合
IMAB362(也称为柔贝西单抗或克迪西单抗)为对CLDN18.2具有特异性的嵌合IgG1抗体。通过噬菌体呈现预先产生两种较小环化肽(即，肽2C和肽3C)，随后经由肽微数组技术优化以结合至IMAB362，以供在临床组织样本中通过ELISA侦测血清IMAB362(参见Daneschdar等人(2014)JPT Peptide Technologies,Volmerstrasse 5,12489)。Daneschdar和同事通过ELISA展示IMAB362以亚纳摩尔级亲和力结合于肽2C和肽3C。通过ELISA评定描述于实例1中的抗体和参考抗体IMAB362结合肽2C和肽3C的能力。针对自高至低变动的代表性亲和力，选择抗体10-K12A、1-B13-A、6-C5-A、7-G17-A、9-B11-A、9-N14-A、10-J10-B、7-A21-A和9-M7-A。发现仅参考抗体IMAB362结合肽2C和3C，而抗体10-K12A、1-B13-A、6-C5-A、7-A21-A、7-G17-A、9-B11-A、9-M7-A、9-N14-A和10-J10-B不结合任一种肽。此类结果表明抗体10-K12A、1-B13-A、6-C5-A、7-A21-A、7-G17-A、9-B11-A、9-M7-A、9-N14-A和10-J10-B结合至CLDN18.2的抗原决定基，该抗原决定基不同于结合IMAB362的抗原决定基。
使用肽2C和3C进行另一竞争实验以评定该等肽是否干扰抗体10-K12-A、1-B13-A、1-M5-A、2-D22-A、4-N1-A、5-J22-A、6-C5-A、6-M11-A、7-A21-A、7-B15-A、7-E20-A、7-G17-A、9-B11-A、9-C6-A、9-M7-A、9-N14-A、10-J10-B、10-P12-A结合至HEK293-CLDN18.2细胞(其描述于实例1中)的表面的能力。如图5中所示，肽2C和肽3C两者有效地与参考抗体(下图中的IMAB362)竞争结合于表达在HEK293细胞的表面上的CLDN18.2。两种肽均不影响抗体10-K12-A、1-B13-A、1-M5-A、2-D22-A、4-N1-A、5-J22-A、6-C5-A、6-M11-A、7-A21-A、7-B15-A、7-E20-A、7-G17-A、9-B11-A、9-C6-A、9-M7-A、9-N14-A、10-J10-B、10-P12-A结合HEK293-CLDN18.2细胞的能力。
实例4：在小鼠PDX模型中对所选抗体的活体内功效研究
将三个抗体殖株(1-B13-A、7-G17-A和9-M7-A)和参考抗体IMAB362重组至小鼠IgG2a，且使用患者来源的胃肿瘤异种移植物(即，患者来源的异种移植物或PDX)测试其活体内抗肿瘤功效。根据自高至低的与胃癌细胞株的结合亲和力选择1-B13-A、7-G17-A和9-M7-A。为一百四十只BALB/c裸小鼠(雌性，6-10周龄，获自CrownBio：www(dot)crownbio(dot)com/oncology/in-vivo-services/patient-derived-xenograft-pdx-tumor-models)植入患者来源的胃肿瘤(约2-3mm3)。当肿瘤尺寸达到50-100mm3时，将小鼠随机分成6组(8只小鼠/组)且根据下表10中所列举的给药时程给药。
表10：用于胃PDX模型中的功效研究的给药时程
Figure GDA0002661925870000811
Figure GDA0002661925870000821
*IV＝静脉内
**BIW＝每周两次(一周两次)。
如图6A中所示，用9-M7-A处理的小鼠相对于用1-B13-A、7-G17-A或参考抗体IMAB362处理的小鼠展现显著降低的肿瘤负荷。对应地，图6B展示用9-M7-A处理将小鼠在肿瘤生长抑制55％，而参考抗体IMAB362在相同研究将肿瘤生长抑制仅40％。
先前实例仅出于说明性目的提供，且不意欲以任何方式限制本发明的范畴。本领域技术人员将自前述描述显而易知除本文中所示和所描述的那些修改以外的本发明的各种修改，且这些修改处于随附申请专利范围的范畴内。
序 列 表
<110> 北京轩义医药科技有限公司
<120> 抗紧密连接蛋白CLAUDIN 18.2 (CLDN18.2)抗体
<130> PN135794
<150> US 62/803,297
<151> 2019-02-08
<150> US 62/643,035
<151> 2018-03-14
<160> 141
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
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Gly
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<223> CDR-H2的合成结构
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Tyr Ile Asn Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
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Gly
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<223> CDR-H2的合成结构
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Tyr Ile Asp Pro Asn Asn Gly Val Thr Tyr Ser Asn Gln Lys Phe Lys
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Gly
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<223> CDR-H2的合成结构
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Glu Ile Tyr Pro Lys Ser Gly Asn Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
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Gly
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Thr Ile Ile Ile Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
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Gly
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Gly
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Gly
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<223> CDR-H2的合成结构
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Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Phe Tyr Tyr Thr Asp Thr Val Lys
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Gly
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<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 21
Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
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Gly
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<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 22
His Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Met Lys
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Gly
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
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Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile His Tyr Val Asp Thr Met Lys
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Gly
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<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 24
Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 25
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 25
Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Pro Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 26
Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Asn Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 27
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 27
Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Asp Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 28
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 28
Asn Ile Asn Pro Tyr Tyr Ser Asn Thr Asn Tyr Asn Gln Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 29
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 29
Phe Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Cys Ala Asp Thr Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 30
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Tyr, Glu, Thr, His, Asn, or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ser, Asn, Asp, Tyr, or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ser, Pro, or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Gly, Asn, Lys, Arg, or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ser, Asn, Gly, or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Ser, Gly, Thr, Asn, or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Asn, Thr, Val, Tyr, Ser, Ile, or Pro
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ile, Thr, or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Tyr, His, or Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = Tyr, Ser, or Cys
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Ala, Asn, Pro, Thr, or Val
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Asp, Gln, or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa = Thr, Lys, Ser, or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = Val, Phe, Met, or Leu
<400> 30
Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 31
Ile Ala Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 32
Phe Ala Arg Gly Asn Val Leu Asp Tyr
1 5
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 33
Pro Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr
1 5
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 34
Ala Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Tyr
1 5
<210> 35
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 35
Gln Val Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Tyr
1 5
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 36
Phe Val Arg Gly Asn Ser Met Asp Tyr
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 37
Phe Ala Arg Gly Asn Thr Met Asp Tyr
1 5
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 38
Phe Thr Arg Gly Asn Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 39
Phe Val Arg Gly Asn Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 40
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 40
Phe Ala Arg Gly Asn Thr Leu Asp Tyr
1 5
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 41
Phe Ala Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<400> 42
His Val Arg Gly Asn Ser Phe Asp Tyr
1 5
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Ile, Phe, Pro, Ala, Gln, or His
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Ala, Tyr, Val, or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Arg or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ala, Val, Ser, or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Met, Leu, or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Asp or Ala
<400> 43
Xaa Xaa Xaa Gly Asn Xaa Xaa Xaa Tyr
1 5
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 44
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 45
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 45
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 46
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Leu Arg Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 47
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 47
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 48
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 49
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Thr Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 50
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 50
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 51
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 51
Lys Ser Ser Gln Ile Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 52
Lys Ser Arg Gln Ser Leu Phe Asn Ser Glu Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ser
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<400> 53
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Leu Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Lys or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ser or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Ser or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Leu or PHe
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ser or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Gly or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Gln or Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Lys or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa = Thr, Ala, or Ser
<400> 54
Xaa Ser Xaa Gln Xaa Leu Xaa Asn Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Xaa
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(7)
<223> CDR-L2的合成结构
<400> 55
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(7)
<223> CDR-L2的合成结构
<400> 56
Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser
1 5
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(7)
<223> CDR-L2的合成结构
<400> 57
Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 58
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(7)
<223> CDR-L2的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Ala or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Glu or Asp
<400> 58
Trp Xaa Ser Thr Arg Xaa Ser
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 59
Gln Asn Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 60
Gln Asn Gly Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 61
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 61
Gln Asp Gly Tyr Phe Tyr Pro Phe Pro
1 5
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 62
Gln Asn Asp Phe Ile Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 63
Gln Asn Asn Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 64
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 65
Gln Asn Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 66
Gln Asn Ala Tyr Ser Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 67
Gln Asn Asp Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 68
Gln Asn Asn Tyr Tyr Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 69
Gln Asn Asn Tyr Ile Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 70
Gln Asn Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Asn or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Asp, Gly, Asn, or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Tyr or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Phe, Ser, Ile, or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Tyr or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Leu or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Thr or Phe
<400> 71
Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Xaa
1 5
<210> 72
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 72
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Ala Arg Gly Asn Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 73
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Asn Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Ala Arg Gly Asn Val Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 74
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 74
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Asn Asn Gly Val Thr Tyr Ser Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 75
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 75
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Val Trp
20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Gln Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Lys Ser Gly Asn Thr His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Tyr Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Pro Ala
115
<210> 76
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 76
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Ser Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Asn
20 25 30
Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ile Ile Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Val Tyr Gly Asn Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Ser Val Ser Ala
115
<210> 77
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 77
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Ser Val Thr Val Thr Ser
115
<210> 78
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 78
Glu Val Gln Leu Val Asn Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
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100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 79
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 79
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 80
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Phe Tyr Tyr Thr Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Gly Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115
<210> 83
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 83
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 84
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 84
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile His Tyr Val Asp Thr Met
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 85
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 85
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Gly Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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100 105 110
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115
<210> 86
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 86
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala His Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Met
50 55 60
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100 105 110
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115
<210> 87
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 87
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115
<210> 88
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 89
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 89
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 90
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 90
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Asn Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Ser Val Ile Val Ser Ser
115
<210> 91
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 91
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Trp
20 25 30
Ser Ile Ser Trp Val Lys Gln Arg Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Glu Ile Tyr Pro Arg Ser Asp Asn Ile His Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 92
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 92
Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
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100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 93
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(118)
<223> VH域的合成结构
<400> 93
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
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100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 94
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 94
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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Lys
<210> 95
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 95
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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100 105 110
Lys
<210> 96
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 96
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
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50 55 60
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65 70 75 80
Ile Asn Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Phe Cys Gln Asp
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Gly Tyr Phe Tyr Pro Phe Pro Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Val Ile
100 105 110
Lys
<210> 97
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 97
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Ala Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Phe Ile Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 98
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 98
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
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85 90 95
Asn Tyr Phe Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 99
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 99
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 100
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 100
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Thr Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 101
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 101
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Thr Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 102
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 102
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Thr Phe Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Gly Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 103
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 103
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Thr Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 104
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 104
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Gly Leu
100 105 110
Lys
<210> 105
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 105
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Thr Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Gly Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 106
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 106
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Thr
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Thr Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Gly Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 107
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 107
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 108
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 108
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Thr Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Gly Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 109
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 109
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asn Tyr Tyr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 110
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 110
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Asn Val Gln Ala Glu Asp Leu Thr Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Ala Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 111
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 111
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asn Tyr Ile Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 112
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 112
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ile Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Gly Leu
100 105 110
Lys
<210> 113
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 113
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ile Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Tyr Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 114
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 114
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Val Gly Cys Lys Ser Arg Gln Ser Leu Phe Asn Ser
20 25 30
Glu Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Glu Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asn Tyr Ile Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 115
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 115
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Leu Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Thr Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Phe Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 116
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ser or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Ser or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Leu or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ser or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Gly or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Gln or Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Lys or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa = Thr, Ala, or Ser
<400> 116
Lys Ser Xaa Gln Xaa Leu Xaa Asn Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Xaa
<210> 117
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Asp, Gly, Asn, or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Tyr or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Phe, Ser, Ile, or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Tyr or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Leu or Phe
<400> 117
Gln Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1 5
<210> 118
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Tyr, Glu, Thr, His, or Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ser, Asn, Tyr, or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ser, Pro, or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Gly, Lys, Arg, or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ser, Gly, or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Ser, Gly, Thr, Asn, or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Asn, Thr, Tyr, Ile, or Pro
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ile, Thr, or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Tyr, His, or Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Ala, Asn, Pro, Thr, or Val
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Asp, Gln, or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa = Thr, Lys, Ser, or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = Val, Phe, Met, or Leu
<400> 118
Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 119
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ser or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Ser or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Leu or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ser or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Gly or Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Lys or Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa = Thr, Ala, or Ser
<400> 119
Lys Ser Xaa Gln Xaa Leu Xaa Asn Xaa Xaa Asn Gln Xaa Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Xaa
<210> 120
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L3的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Asp, Gly, Asn, or Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Tyr or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Phe, Ser, Ile or Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Tyr or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Leu or Phe
<400> 120
Gln Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1 5
<210> 121
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(10)
<223> CDR-H1的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Thr or Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = His or Tyr
<400> 121
Gly Phe Xaa Phe Ser Asp Tyr Gly Met Xaa
1 5 10
<210> 122
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Tyr, His, or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Ser or Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = Tyr or Cys
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = Val or Met
<400> 122
Xaa Ile Ser Ser Gly Ser Ser Xaa Ile Tyr Xaa Ala Asp Thr Xaa Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 123
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-H3的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Ile or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Thr or Ala
<400> 123
Xaa Ala Arg Gly Asn Xaa Met Asp Tyr
1 5
<210> 124
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-L1的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Gln or Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Arg or Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa = Thr or Ala
<400> 124
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Xaa Xaa Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Xaa
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Gly or Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Ser or Phe
<400> 125
Gln Asn Xaa Tyr Xaa Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 126
<211> 261
<212> PRT
<213> Homo sapiens（智人）
<400> 126
Met Ser Thr Thr Thr Cys Gln Val Val Ala Phe Leu Leu Ser Ile Leu
1 5 10 15
Gly Leu Ala Gly Cys Ile Ala Ala Thr Gly Met Asp Met Trp Ser Thr
20 25 30
Gln Asp Leu Tyr Asp Asn Pro Val Thr Ser Val Phe Gln Tyr Glu Gly
35 40 45
Leu Trp Arg Ser Cys Val Arg Gln Ser Ser Gly Phe Thr Glu Cys Arg
50 55 60
Pro Tyr Phe Thr Ile Leu Gly Leu Pro Ala Met Leu Gln Ala Val Arg
65 70 75 80
Ala Leu Met Ile Val Gly Ile Val Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Val
85 90 95
Ser Ile Phe Ala Leu Lys Cys Ile Arg Ile Gly Ser Met Glu Asp Ser
100 105 110
Ala Lys Ala Asn Met Thr Leu Thr Ser Gly Ile Met Phe Ile Val Ser
115 120 125
Gly Leu Cys Ala Ile Ala Gly Val Ser Val Phe Ala Asn Met Leu Val
130 135 140
Thr Asn Phe Trp Met Ser Thr Ala Asn Met Tyr Thr Gly Met Gly Gly
145 150 155 160
Met Val Gln Thr Val Gln Thr Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ala Leu Phe
165 170 175
Val Gly Trp Val Ala Gly Gly Leu Thr Leu Ile Gly Gly Val Met Met
180 185 190
Cys Ile Ala Cys Arg Gly Leu Ala Pro Glu Glu Thr Asn Tyr Lys Ala
195 200 205
Val Ser Tyr His Ala Ser Gly His Ser Val Ala Tyr Lys Pro Gly Gly
210 215 220
Phe Lys Ala Ser Thr Gly Phe Gly Ser Asn Thr Lys Asn Lys Lys Ile
225 230 235 240
Tyr Asp Gly Gly Ala Arg Thr Glu Asp Glu Val Gln Ser Tyr Pro Ser
245 250 255
Lys His Asp Tyr Val
260
<210> 127
<211> 261
<212> PRT
<213> Homo sapiens（智人）
<400> 127
Met Ala Val Thr Ala Cys Gln Gly Leu Gly Phe Val Val Ser Leu Ile
1 5 10 15
Gly Ile Ala Gly Ile Ile Ala Ala Thr Cys Met Asp Gln Trp Ser Thr
20 25 30
Gln Asp Leu Tyr Asn Asn Pro Val Thr Ala Val Phe Asn Tyr Gln Gly
35 40 45
Leu Trp Arg Ser Cys Val Arg Glu Ser Ser Gly Phe Thr Glu Cys Arg
50 55 60
Gly Tyr Phe Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Met Leu Gln Ala Val Arg
65 70 75 80
Ala Leu Met Ile Val Gly Ile Val Leu Gly Ala Ile Gly Leu Leu Val
85 90 95
Ser Ile Phe Ala Leu Lys Cys Ile Arg Ile Gly Ser Met Glu Asp Ser
100 105 110
Ala Lys Ala Asn Met Thr Leu Thr Ser Gly Ile Met Phe Ile Val Ser
115 120 125
Gly Leu Cys Ala Ile Ala Gly Val Ser Val Phe Ala Asn Met Leu Val
130 135 140
Thr Asn Phe Trp Met Ser Thr Ala Asn Met Tyr Thr Gly Met Gly Gly
145 150 155 160
Met Val Gln Thr Val Gln Thr Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ala Leu Phe
165 170 175
Val Gly Trp Val Ala Gly Gly Leu Thr Leu Ile Gly Gly Val Met Met
180 185 190
Cys Ile Ala Cys Arg Gly Leu Ala Pro Glu Glu Thr Asn Tyr Lys Ala
195 200 205
Val Ser Tyr His Ala Ser Gly His Ser Val Ala Tyr Lys Pro Gly Gly
210 215 220
Phe Lys Ala Ser Thr Gly Phe Gly Ser Asn Thr Lys Asn Lys Lys Ile
225 230 235 240
Tyr Asp Gly Gly Ala Arg Thr Glu Asp Glu Val Gln Ser Tyr Pro Ser
245 250 255
Lys His Asp Tyr Val
260
<210> 128
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(10)
<223> CDR-H1的合成结构
<400> 128
Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr Leu Ile His
1 5 10
<210> 129
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 129
Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 130
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(7)
<223> CDR-L2的合成结构
<400> 130
Trp Ala Ser Ile Arg Ala Ser
1 5
<210> 131
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR-L3的合成结构
<400> 131
Leu Asn Asp Tyr Ser Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 132
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(10)
<223> CDR-H1的合成结构
<400> 132
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Val Met His
1 5 10
<210> 133
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<400> 133
Tyr Ile Asn Pro Phe Asp Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 134
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(7)
<223> CDR-L2的合成结构
<400> 134
Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser
1 5
<210> 135
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(112)
<223> VH域的合成结构
<400> 135
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Leu Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Ser
65 70 75 80
Met Glu Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 136
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(112)
<223> VH域的合成结构
<400> 136
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Phe Asp Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 137
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 137
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg Ala Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 138
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(113)
<223> VL域的合成结构
<400> 138
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 139
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(10)
<223> CDR-H1的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Thr or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ser or Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Leu or Val
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ile or Met
<400> 139
Gly Tyr Thr Phe Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa His
1 5 10
<210> 140
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> CDR-H2的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Tyr or Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Asn or Asp
<400> 140
Tyr Ile Asn Pro Xaa Xaa Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 141
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence（人工序列）
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(7)
<223> CDR-L2的合成结构
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Thr or Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ala or Asp
<400> 141
Trp Ala Ser Xaa Arg Xaa Ser
1 5

Claims (26)

1.一种抗CLDN18.2抗体或抗原结合片段，其特征在于，包含：
(i)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMF(SEQ ID NO:1)的CDR-H1，(b)YISSGSSNIYYADTVKG(SEQ ID NO:12)的CDR-H2，和(c)IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3；
(ii)VH域，其包含：(a)GYTFTVWSMS(SEQ ID NO:4)的CDR-H1，(b)EIYPKSGNTHYNEKFKG(SEQ ID NO:15)的CDR-H2，和(c)AYYGNSFAY(SEQ ID NO:34)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQ ID NO:47)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNDFIYPFT(SEQ ID NO:62)的CDR-L3；
(iii)VH域，其包含：(a)GFTFSNNAMS(SEQ ID NO:5)的CDR-H1，(b)TIIIGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:16)的CDR-H2，和(c)QVYGNSFAY(SEQ ID NO:35)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNNYFYPFT(SEQ ID NO:63)的CDR-L3；
(iv)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，和(c)FVRGNSMDY(SEQ ID NO:36)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3；
(v)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)HISSGSNIIHYADTLKG(SEQ ID NO:19)的CDR-H2，和(c)FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNAYSFPLT(SEQ ID NO:66)的CDR-L3；
(vi)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，和(c)FARGNTMDY(SEQ ID NO:37)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQRNYLT(SEQ ID NO:47)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3；
(vii)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)YISSGSNTFYYTDTVKG(SEQ ID NO:20)的CDR-H2，和(c)FTRGNALDY(SEQ ID NO:38)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3；
(viii)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)YISSGSNTIYYADTVKG(SEQ ID NO:21)的CDR-H2，和(c)IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3；
(ix)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)HISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:22)的CDR-H2，和(c)FVRGNALDY(SEQ ID NO:39)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3；
(x)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)YISSGSSTIHYVDTMKG(SEQ ID NO:23)的CDR-H2，和(c)FARGNTLDY(SEQ ID NO:40)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLFNTGNQKNYLT(SEQ ID NO:49)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)NGYSYPLT(SEQ ID NO:60)的CDR-L3；
(xi)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)YISSGSSTIYYADTVKG(SEQ ID NO:24)的CDR-H2，和(c)IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLFNSGNQRNYLA(SEQ ID NO:50)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNDYFYPLT(SEQ ID NO:59)的CDR-L3；
(xii)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)YISSGSSPIYYADTVKG(SEQ ID NO:25)的CDR-H2，和(c)FARGNAMDY(SEQ ID NO:41)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRDS(SEQ ID NO:56)的CDR-L2，和(f)QNNYYYPLT(SEQ ID NO:68)的CDR-L3；
(xiii)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)YISSGSSTIYYADTMKG(SEQ ID NO:18)的CDR-H2，和(c)FVRGNSMDY(SEQ ID NO:36)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNAYSYPLT(SEQ ID NO:65)的CDR-L3；
(xiv)VH域，其包含：(a)GFTFSNYAMS(SEQ ID NO:8)的CDR-H1，(b)TIIIGGTYTYYPDSVKG(SEQ ID NO:16)的CDR-H2，和(c)QVYGNSFAY(SEQ ID NO:35)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNNYIYPFT(SEQ ID NO:69)的CDR-L3；
(xv)VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMY(SEQ ID NO:6)的CDR-H1，(b)YISSGSNNIYYADTVKG(SEQ ID NO:26)的CDR-H2，和(c)IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:44)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNDYIYPLT(SEQ ID NO:67)的CDR-L3；
(xvi)VH域，其包含：(a)GYTFTSWSIS(SEQ ID NO:9)的CDR-H1，(b)EIYPRSDNIHYNEKFKG(SEQ ID NO:27)的CDR-H2，和(c)AYYGNSFAY(SEQ ID NO:34)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQILLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:51)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNDYYYPFT(SEQ ID NO:70)的CDR-L3；或
(xvii)VH域，其包含：(a)GYSFTGYNMN(SEQ ID NO:10)的CDR-H1，(b)NINPYYSNTNYNQRFKG(SEQ ID NO:28)的CDR-H2，和(c)CDRGNSFDY(SEQ ID NO:42)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSRQSLFNSENQKNYLS(SEQ ID NO:52)的CDR-L1，(e)WTSTRES(SEQ IDNO:57)的CDR-L2，和(f)QNNYIYPFT(SEQ ID NO:69)的CDR-L3。
2.根据权利要求1所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：
VH域，其包含SEQ ID NO:72-76、78-85和87-92中的任一个所列的氨基酸序列；和
VL域，其包含SEQ ID NO:94-98、100-107和109-114中的任一个所列的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：
(i)SEQ ID NO:72所示的VH域；和SEQ ID NO:94所示的VL域；
(ii)SEQ ID NO:75所示的VH域；和SEQ ID NO:97所示的VL域；
(iii)SEQ ID NO:76所示的VH域；和SEQ ID NO:98所示的VL域；
(iv)SEQ ID NO:78所示的VH域；和SEQ ID NO:100所示的VL域；
(v)SEQ ID NO:79所示的VH域；和SEQ ID NO:101所示的VL域；
(vi)SEQ ID NO:80所示的VH域；和SEQ ID NO:102所示的VL域；
(vii)SEQ ID NO:81所示的VH域；和SEQ ID NO:103所示的VL域；
(viii)SEQ ID NO:82所示的VH域；和SEQ ID NO:104所示的VL域；
(ix)SEQ ID NO:83所示的VH域；和SEQ ID NO:105所示的VL域；
(x)SEQ ID NO:84所示的VH域；和SEQ ID NO:106所示的VL域；
(xi)SEQ ID NO:85所示的VH域；和SEQ ID NO:107所示的VL域；
(xii)SEQ ID NO:87所示的VH域；和SEQ ID NO:109所示的VL域；
(xiii)SEQ ID NO:88所示的VH域；和SEQ ID NO:110所示的VL域；
(xiv)SEQ ID NO:89所示的VH域；和SEQ ID NO:111所示的VL域；
(xv)SEQ ID NO:90所示的VH域；和SEQ ID NO:112所示的VL域；
(xvi)SEQ ID NO:91所示的VH域；和SEQ ID NO:113所示的VL域；或
(xvii)SEQ ID NO:92所示的VH域；和SEQ ID NO:114所示的VL域。
4.根据权利要求1至3中的任一项所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体不特异性结合CLDN18.1。
5.一种抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：
VH域，其包含：(a)GFTFSDYGMH(SEQ ID NO:2)的CDR-H1，(b)YISSGSSSIYYADTVKG(SEQID NO:17)的CDR-H2，和(c)IARGNAMDY(SEQ ID NO:31)的CDR-H3；和VL域，其包含：(d)KSSQSLLNSGNQRNYLA(SEQ ID NO:48)的CDR-L1，(e)WASTRES(SEQ ID NO:55)的CDR-L2，和(f)QNDYSYPLT(SEQ ID NO:64)的CDR-L3。
6.根据权利要求5所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：
SEQ ID NO:77所示的VH域；和SEQ ID NO:99所示的VL域。
7.根据权利要求5或6中的任一项所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体结合紧密连接蛋白18.1(CLDN18.1)。
8.根据权利要求1至4、或权利要求5或6中的任一项所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体包含人类IgG的Fc序列。
9.根据权利要求8所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述人类IgG为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
10.根据权利要求8所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体为嵌合、人源化或人类抗体。
11.根据权利要求8所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗原结合片段选自由以下组成的群：Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段、双功能抗体和线性抗体。
12.根据权利要求8所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体为多特异性抗体。
13.根据权利要求8所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述CLDN18.2为人类CLDN18.2。
14.根据权利要求8所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，与治疗剂接合。
15.根据权利要求8所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，与标记物接合。
16.根据权利要求15的所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述标记物选自由以下组成的群：放射性同位素、荧光染料和酶。
17.一种经分离核酸分子，其特征在于，编码如权利要求1至16中的任一项所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段。
18.一种表达载体，其特征在于，编码如权利要求17所述的核酸分子。
19.一种宿主细胞，其特征在于，包含如权利要求17所述的核酸分子或如权利要求18所述的表达载体。
20.一种产生抗CLDN18.2抗体的方法，其特征在于，包含培养如权利要求19所述的宿主细胞和自所述细胞培养物回收所述抗体。
21.一种组合物，其特征在于，包含如权利要求1至14中任一项所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段，和医药学上可接受的载剂。
22.一种非诊断目的的侦测患者样本中的CLDN18.2蛋白的方法，其特征在于，由如权利要求1至13或15至16中的任一项所述的抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段与所述样本接触，和侦测与所述CLDN18.2蛋白结合的抗CLDN18.2抗体。
23.根据权利要求22所述的方法，其特征在于，所述抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段用于免疫组织化学分析(IHC)或ELISA分析中。
24.权利要求21所述的组合物在制备治疗个体癌症的药物上的应用。
25.根据权利要求24所述的应用，其特征在于，所述癌症选自实体肿瘤、胃癌、食道癌、胃食道接合部癌症、胰脏癌、胆管癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌、肝癌、头颈癌、胆囊癌。
26.根据权利要求24或25所述的应用，其特征在于，所述药物选自由以下组成的群的治疗剂：抗赘生剂、化学治疗剂、生长抑制剂和细胞毒性剂。
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