[go: up one dir, main page]

CN112041454B - 辅酶q10的制造方法 - Google Patents

辅酶q10的制造方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112041454B
CN112041454B CN201980027800.3A CN201980027800A CN112041454B CN 112041454 B CN112041454 B CN 112041454B CN 201980027800 A CN201980027800 A CN 201980027800A CN 112041454 B CN112041454 B CN 112041454B
Authority
CN
China
Prior art keywords
coenzyme
porous membrane
production method
suspension
filtration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201980027800.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112041454A (zh
Inventor
铃木康之
加茂文贵
C.库哈普雷马
神田彰久
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kaneka Corp
Original Assignee
Kaneka Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kaneka Corp filed Critical Kaneka Corp
Publication of CN112041454A publication Critical patent/CN112041454A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112041454B publication Critical patent/CN112041454B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
    • B01D61/14—Ultrafiltration; Microfiltration
    • B01D61/145—Ultrafiltration
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D37/00—Processes of filtration
    • B01D37/02—Precoating the filter medium; Addition of filter aids to the liquid being filtered
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D67/00—Processes specially adapted for manufacturing semi-permeable membranes for separation processes or apparatus
    • B01D67/0081—After-treatment of organic or inorganic membranes
    • B01D67/0083—Thermal after-treatment
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D69/00—Semi-permeable membranes for separation processes or apparatus characterised by their form, structure or properties; Manufacturing processes specially adapted therefor
    • B01D69/10—Supported membranes; Membrane supports
    • B01D69/108—Inorganic support material
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D71/00—Semi-permeable membranes for separation processes or apparatus characterised by the material; Manufacturing processes specially adapted therefor
    • B01D71/02—Inorganic material
    • B01D71/022—Metals
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D71/00—Semi-permeable membranes for separation processes or apparatus characterised by the material; Manufacturing processes specially adapted therefor
    • B01D71/02—Inorganic material
    • B01D71/024—Oxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/66—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing the quinoid structure
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D2201/00—Details relating to filtering apparatus
    • B01D2201/20—Pressure-related systems for filters
    • B01D2201/202—Systems for applying pressure to filters

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
  • Filtering Materials (AREA)

Abstract

本发明提供一种通过在提取、破碎处理之前对产辅酶Q10微生物的培养悬浮液有效地进行浓缩并使辅酶Q10的损失最小化从而能够经济且稳定地操作运行的辅酶Q10制造方法。本发明为具有将产辅酶Q10微生物的培养悬浮液加热至35℃以上并向多孔膜通液的过滤工序的辅酶Q10的制造方法。为了提高平均透过通量，优选至少实施1次在培养悬浮液的通液处理中将过滤装置密闭并加压、然后释放压力的再生处理；或者至少实施1次在培养悬浮液的通液处理中通过滤液出口侧流入介质进行一定时间通液、然后恢复通常的过滤工序的再生处理。

Description

辅酶Q10的制造方法
技术领域
本发明涉及辅酶Q10的制造方法。更具体而言，本发明涉及具有将产辅酶Q10微生物的培养悬浮液向多孔膜通液的过滤工序的辅酶Q10的制造方法。
背景技术
辅酶Q是从细菌至哺乳动物广泛分布于生物体中的必需成分，作为生物体内的细胞中的线粒体的电子传递链构成成分而广为人知。已知辅酶Q通过在线粒体内反复进行氧化和还原而在电子传递链中起到作为传递成分的功能，而且还原型辅酶Q还具有抗氧化作用。对于人的辅酶Q而言，在辅酶Q的侧链具有10个重复结构的辅酶Q10是主要成分，在生物体内，通常40～90％左右以还原型的形式存在。作为辅酶Q的生理作用，可以列举：由线粒体激活作用带来的能量产生的活化、心功能的活性化、细胞膜的稳定化效果、由抗氧化作用带来的细胞的保护效果等。
目前制造/销售的辅酶Q10中多数为氧化型，近年来，显示出比氧化型辅酶Q10更高的口服吸收性的还原型辅酶Q10也已上市，逐渐被广泛使用。
已知一些方法来制造辅酶Q10。例如，专利文献1中记载了一种还原型辅酶Q10的制造方法，该方法包括：对产还原型辅酶Q10微生物进行培养，根据需要将微生物细胞破碎，然后利用有机溶剂进行提取。
另外，专利文献2中记载了一种辅酶Q10的制造方法，该方法包括：使产辅酶Q10微生物的提取液单独与将硅酸铝作为主成分的吸附剂接触、或者与将所述吸附剂和与其不同的吸附剂组合使用而成的多种吸附剂接触。根据专利文献2的方法，记载了可以提供一种用于从产辅酶Q10微生物的提取液中高效地去除来自于微生物的杂质而简洁且稳定地操作运行辅酶Q10的制造工序的辅酶Q10制造方法。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2008-253271号公报
专利文献2：WO2018/003974
发明内容
发明要解决的课题
在上述的现有方法中，为了稳定且有效简便地大量生产辅酶Q10，仍有改进的余地。
例如，在专利文献1的方法中，由于产辅酶Q10微生物的培养悬浮物的浓度低且水分含量多，因此不仅提取工序中的设备需要大型化，而且将微生物细胞破碎时需要很多时间，存在经济上效率差等的问题。
在专利文献2中，记载了可以将微生物细胞培养液适当浓缩后进行提取的主旨，在实施例中通过离心分离进行了浓缩。但是，在利用离心分离机进行浓缩的情况下，一部分产辅酶Q10微生物菌体流出至上清侧，有时导致收率降低。
本发明是为了解决上述课题而完成的，其目的在于提供具有在提取工序之前进行的过滤工序的辅酶Q10制造方法，所述过滤工序可以使产辅酶Q10微生物培养悬浮液中的辅酶Q10的损失最小化，并且能够将培养悬浮液尽量有效地浓缩，而且可以简洁且稳定地操作运行。
解决课题的方法
本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研究。其结果是发现了在提取工序之前设置使产辅酶Q10微生物的培养悬浮液在加热至35℃以上的特定温度条件下向多孔膜通液的过滤工序是有效的，通过采用上述过滤工序，可以使上述培养悬浮液的固体成分浓度增高后提取微生物内的成分，然后进行纯化，由此可以使辅酶Q10的损失最小化，能够以良好的效率将辅酶Q10纯化，从而完成了本发明。
即，本发明的辅酶Q10的制造方法的构成如下所述。
1.一种辅酶Q10的制造方法，该方法包括将产辅酶Q10微生物的培养悬浮液加热至35℃以上的温度并向多孔膜通液的过滤工序。
2.根据上述1所述的制造方法，其中，所述加热温度为48℃以上。
3.根据上述1或2所述的制造方法，其中，所述培养悬浮液的pH为3～7的范围内。
4.根据上述1～3中任一项所述的制造方法，其中，所述过滤工序中通液的线速度为0.1m/s以上。
5.根据上述1～4中任一项所述的制造方法，其中，在所述培养悬浮液的通液处理中，至少实施1次将过滤装置密闭并加压、然后释放压力的再生处理。
6.根据上述5所述的制造方法，其中，进行所述加压时的压力为0.1～1MPa。
7.根据上述5或6所述的制造方法，其中，进行所述加压时使用的介质是空气、氮、水、所述培养悬浮液、使所述培养悬浮液向多孔膜通液而得到的过滤液中的任意1种以上。
8.根据上述1～7中任一项所述的制造方法，其中，在所述过滤工序结束后，重复进行以下操作：实施对附着于所述多孔膜的微生物悬浮成分进行清洗的清洗工序，然后再次进行所述过滤工序。
9.根据上述8所述的制造方法，其中，进行所述清洗的清洗液为水、碱性水溶液、酸性水溶液中的任意1种以上。
10.根据上述8或9所述的制造方法，其中，进行所述清洗的清洗液的温度为10℃～90℃。
11.根据上述1～10中任一项所述的制造方法，其中，所述多孔膜为合成树脂制、陶瓷制、或金属制的膜中的任意膜。
12.根据上述11所述的制造方法，其中，所述多孔膜为金属制的多孔膜。
13.根据上述12所述的制造方法，其中，所述金属制的多孔膜是包含基于氧化钛的分离层和不锈钢支撑体的筒，其内径为5mm以上。
14.根据上述13所述的制造方法，其中，所述分离层的平均微孔直径为0.01～3μm。
15.根据上述1～14中任一项所述的制造方法，其中，在所述培养悬浮液的通液处理中，在实施从过滤液出口侧流入介质进行通液的处理后，恢复过滤工序。
16.根据上述15所述的制造方法，其中，所述流入的介质为空气、氮、水、使所述培养悬浮液向多孔膜通液而得到的过滤液中的任意1种以上。
17.根据上述15或16所述的制造方法，其中，所述流入的介质的温度为10℃～90℃。
发明的效果
根据本发明，可以提供一种辅酶Q10的制造方法，该方法通过在提取工序之前实施使产辅酶Q10微生物的培养悬浮液向多孔膜通液的过滤工序，能够使产辅酶Q10微生物的培养悬浮液中的辅酶Q10的损失最小化、且能够有效地浓缩培养悬浮液。其结果是，从减少提取或纯化辅酶Q10时的溶剂用量、提取的稳定化等操作性及经济性方面考虑，也可以有效地得到辅酶Q10。
具体实施方式
以下，对本发明的辅酶Q10的制造方法的一个方式进行说明，但本发明并不限定于此。
本发明的制造方法的特征在于具有使产辅酶Q10微生物的培养悬浮液在加热至35℃以上的状态下向多孔膜通液的过滤工序。在本发明的制造方法中，通过使用了多孔膜的上述过滤工序，利用有机溶剂从含有产辅酶Q10微生物的微生物细胞悬浮液、或将微生物细胞破碎物或微生物细胞破碎物的水性悬浮液浓缩而成的浓缩液中提取辅酶Q10，进一步根据需要通过与碱水溶液、水接触，从而可以对经纯化或提高了纯度的辅酶Q10进行分离/回收。
以下，对本发明的制造方法详细进行说明。
(1)本发明中使用的产辅酶Q10微生物
辅酶Q10中存在氧化型和还原型。在本发明中，作为辅酶Q10，以氧化型辅酶Q10、还原型辅酶Q10中的任一种作为对象，作为还原型辅酶Q10与氧化型辅酶Q10的混合物的辅酶Q10也是其对象。在本发明中使用的辅酶Q10为还原型辅酶Q10与氧化型辅酶Q10的混合物的情况下，还原型辅酶Q10含有比率没有特别限定。需要说明的是，在本说明书中，在仅记载为辅酶Q10的情况下，不论其种类，表示氧化型辅酶Q10、还原型辅酶Q10、还原型辅酶Q10与氧化型辅酶Q10的混合物的全部。
作为本发明中使用的产辅酶Q10微生物，只要是在微生物内产生辅酶Q10的微生物即可，可以没有限制地使用细菌、酵母、霉菌中的任一种。作为上述微生物，具体可以列举例如：土壤杆菌(Agrobacterium)属、曲霉菌(Aspergillus)属、醋杆菌(Acetobacter)属、胺杆菌(Aminobacter)属、农单胞菌(Agromonas)属、嗜酸菌(Acidiphilium)属、布勒担孢酵母(Bulleromyces)属、布勒掷孢酵母(Bullera)属、短波单胞菌(Brevundimonas)属、隐球菌(Cryptococcus)属、雪球酵母(Chionosphaera)属、假丝酵母(Candida)属、Cerinosterus属、外瓶霉(Exisophiala)属、外担菌(Exobasidium)属、Fellomyces属、线黑粉菌(Filobasidiella)属、线黑粉酵母(Filobasidium)属、地丝菌(Geotrichum)属、果黑粉菌(Graphiola)属、葡糖杆菌(Gluconobacter)属、考克娃酵母(Kockovaella)属、克氏担孢酵母(Kurtzmanomyces)属、Lalaria属、白冬孢酵母(Leucosporidium)属、军团菌(Legionella)属、甲基杆菌(Methylobacterium)属、枝面菌(Mycoplana)属、卵孢酵母(Oosporidium)属、假单胞菌(Pseudomonas)属、Psedozyma属、副球菌(Paracoccus)属、石座菌(Petromyc)属、红酵母(Rhodotorula)属、红冬孢酵母(Rhodosporidium)属、根单胞菌(Rhizomonas)属、红菌(Rhodobium)属、红游动菌(Rhodoplanes)属、红假单胞菌(Rhodopseudomonas)属、红细菌(Rhodobacter)属、掷孢酵母(Sporobolomyces)属、锁掷酵母(Sporidiobolus)属、Saitoella属、裂殖酵母(Schizosaccharomyces)属、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas)属、侧孢霉(Sporotrichum)属、Sympodiomycopsis属、Sterigmatosporidium属、外囊菌(Tapharina)属、银耳(Tremella)属、毛孢子菌(Trichosporon)属、Tilletiaria属、腥黑粉菌(Tilletia)属、褶孢黑粉菌(Tolyposporium)属、Tilletiopsis属、黑粉菌(Ustilago)属、Udeniomyce属、Xanthophllomyces属、黄色杆菌(Xanthobacter)属、拟青霉(Paecilomyces)属、支顶孢(Acremonium)属、Hyhomonus属、根瘤菌(Rhizobium)属、红发夫酵母(Phaffia)属、雨生红球藻(Haematococcus)属等微生物。
其中，从培养的容易度、生产性的观点考虑，优选为细菌或酵母。在细菌中更优选为非光合作用细菌，另外，可以列举土壤杆菌(Agrobacterium)属、葡糖杆菌(Gluconobacter)属等作为特别优选的例子，在酵母中可以列举裂殖酵母(Schizosaccharomyces)属、Saitoella属、红发夫酵母(Phaffia)属等作为特别优选的例子。
需要说明的是，作为辅酶Q10，为了制造还原型辅酶Q10，优选使用生产的辅酶Q10中还原型辅酶Q10含有比率高的微生物，例如，更优选使用培养后还原型辅酶Q10占辅酶Q10的含有比率(重量％基准)优选为70％以上、更优选为80％以上的微生物。
作为本发明中使用的产辅酶Q10微生物，不仅可以使用上述微生物的野生株，也可以使用例如对与作为上述微生物的目的的辅酶Q10的生物合成相关的基因的转录及翻译活性、或表达蛋白质的酶活性进行了改变或改良而得到的突变体、重组体。
通过培养上述微生物，可以得到含有辅酶Q10的微生物细胞。培养方法没有特别限定，可以适当选择适于对象微生物、或适于作为目标辅酶Q10的生产的培养方法。培养期间没有特别限定，只要是在微生物细胞中积累希望的量的目标辅酶Q10的期间即可。
在本发明中，优选使通过上述方法得到的产辅酶Q10微生物的培养悬浮液向多孔膜通液，但并不限定于此，也可以使通过其它方法得到的产辅酶Q10微生物的培养悬浮液通液。例如，可以使用暂时用压滤机进行了固液分离、干燥而得到的微生物菌体再悬浮于水中而得到的液体(干燥微生物细胞破碎物的悬浮液)。另外，如后所述，也可以使用微生物细胞的破碎物或微生物细胞破碎物的水性悬浮液。向多孔膜通液的培养悬浮液中的微生物浓度没有特别限制，换算为微生物的干燥重量优选为0.01～10重量％的范围。
(2)过滤工序
在本发明的制造方法中，需要将上述培养悬浮液加热至35℃以上后向多孔膜通液。在低于35℃的情况下，培养悬浮液中杂菌增殖，存在过滤效果降低的隐患。上述加热温度为35℃以上即可，没有特别限制，为了进一步提高过滤效果，优选为40℃以上，更优选为48℃以上。另外，其上限没有限定，从操作性、品质的观点考虑，优选为90℃以下，更优选为60℃以下。在过滤工序中，上述加热温度不需要恒定，只要在上述范围内即可，可以在过滤操作中改变温度。
另外，向多孔膜通液时上述培养悬浮液的pH优选为3～7的范围内，更优选为pH3～5、进一步优选为pH3.5～4.5的范围内。得到的培养悬浮液的pH满足这些范围时，可以直接使用，除此以外的情况下可以使用酸、碱调整为希望的pH。通过使pH为上述范围，不仅可以抑制培养悬浮液中的无机盐的析出，防止多孔膜内的堵塞，而且可以降低培养悬浮液的粘度，加快利用多孔膜的过滤工序。
在上述过滤工序中，对于使微生物培养悬浮液向多孔膜通液时的线速度没有特别限定，优选为0.1m/s以上，更优选为1m/s以上，进一步优选为3m/s以上。线速度越快，越可以加快过滤工序。
在上述过滤工序中，使微生物培养悬浮液向多孔膜通液时的透过通量只要不完全堵塞即可，没有特别限定，考虑到设备费用、生产量等经济方面，其值越高越好。通过过滤工序的平均透过通量优选为0.50kg/min/m2以上，更优选为1.0kg/min/m2以上。
向上述产辅酶Q10微生物的培养悬浮液通液的多孔膜的种类没有特别限定，可以列举合成树脂制、陶瓷制、金属制等的多孔膜作为优选的例子。
作为上述合成树脂，只要是具有能够耐受通液的分子量的树脂即可，没有特别限定，可以列举例如：聚乙烯、聚丙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、含氟树脂等。考虑到价格、获得性，优选为聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯。
作为上述陶瓷，可以列举例如：氧化铝、氧化锆、钛酸钡等氧化物类、羟基磷灰石(hydroxyapatite)等氢氧化物类、碳化硅等碳化物类、氮化硅等氮化物类、萤石等卤化物类、磷酸盐类等。考虑到通用性、获得性，优选为氧化物类陶瓷，更优选为氧化铝。
作为上述金属，可以列举例如：铁、铜、锌、锡、汞、铅、铝、钛、氧化钛、不锈钢等。考虑到耐酸性、耐碱性、强度，优选为不锈钢或氧化钛。
在本发明的制造方法中，从再生工序时获得高再生效果的观点考虑，优选使用金属制的多孔膜，具体而言，上述多孔膜更优选相当于过滤器部的分离层由氧化钛构成，支撑其的外装(支撑体)由不锈钢构成。在本发明中，“分离层(过滤器部)”只要是不使培养悬浮液中的微生物细胞或其破碎物通过而使水溶性的介质部分通过的分离层即可，没有特别限定，可以为网眼状、无纺布状、微孔状中的任意形态。
在本发明的制造方法中，用于对产辅酶Q10微生物的培养悬浮液进行过滤的多孔膜的形状没有特别限定，从操作运行方面、设备设置方面考虑，优选为筒状。特别是在多孔膜如上所述地由分离层(过滤器部)和支撑其的外装(支撑体)构成的情况下，具有基于氧化钛等的分离层的中空体更优选为容纳在不锈钢等筒状支撑体中的筒。具体而言，例如，通过制成在外装(不锈钢)的内部具有中空状微孔体(氧化钛)的多孔膜，可以使浓缩后的浆料通过中空部，使滤液排出至外侧，进行过滤/浓缩。对于本发明中使用的筒而言，考虑到操作容易性，优选轻质且细，另一方面，考虑到培养悬浮液中的固体成分浓度、粘度，其内径优选为2mm以上，更优选为5mm以上。从上述观点出发，其上限没有特别限定，考虑到设备的重量化、确保比表面积等观点，优选为约30mm。
另外，考虑到培养悬浮液中的微生物及其它来自于微生物培养的固体成分的粒径，上述分离层的平均微孔直径优选为0.01～3μm的范围。另外，考虑到生产性、强度、堵塞的难度、再生的容易性，更优选为0.05μm以上，另外优选为1μm以下，更优选为0.8μm以下。通过使多孔膜的分离层的平均微孔直径为上述范围，可以不使包含辅酶Q10的固体成分泄漏至滤液中而获得高收率。
在本发明的制造方法中，通过实施上述过滤工序，可以将微生物细胞悬浮液浓缩。过滤工序后的微生物细胞浓缩悬浮液中的微生物浓度没有特别限制，换算为微生物的干燥重量，优选以0.1～25重量％实施浓缩工序。进一步考虑到稳定、经济的观点，更优选以达到10～20重量％的范围的方式实施浓缩工序。
在上述过滤工序中，为了提高平均透过通量，可以在运行过程中使温度变化、适当导入再生操作。
继续进行微生物培养悬浮液向多孔膜的通液处理时，来自于微生物培养悬浮液的固体成分附着于多孔膜内部及表面，存在其过滤速度、透过通量逐步降低的倾向。因此，在本发明的制造方法中，在培养悬浮液向多孔膜的通液中，优选至少实施1次将过滤装置密闭并加压、然后释放压力的再生处理。通过进行该再生处理，将附着于多孔膜内部及表面的固体成分排出至过滤装置外，可以使过滤速度恢复，加快过滤工序。
上述再生工序是在培养悬浮液向多孔膜的通液中暂时(在通液工序的至少一部分期间)进行的工序，并不意味着在培养悬浮液的通液的全部过程中实施再生处理。具体而言，例如，在培养悬浮液向多孔膜的通液中，通过将出口部分暂时关闭并继续进行来自入口部分的培养悬浮液的通液而加压，然后打开出口部分，从而使体系内的压力复原，通过实施这样的操作，可以实施加压和压力释放的再生工序。或者，在培养悬浮液向多孔膜的通液中，通过将入口部分或出口部分的任一者暂时关闭，并从相反侧的出口部分或入口部分将介质注入体系内而加压，然后将已关闭的入口或出口部分打开，从而使体系内的压力复原，通过实施这样的操作，也可以实施加压和压力释放的再生工序。这样的再生工序的实施期间例如为通液工序中的全部期间的10％以下，优选为5％以下，更优选为2％以下。
用于进行加压的方法没有特别限定，作为进行加压时使用的介质，优选使用将空气、氮、水、微生物细胞悬浮液、微生物细胞悬浮液向过滤膜通液而得到的过滤液(以下，有时简称为过滤液)中的任意1种以上进行加压。更优选的介质为空气。
将上述过滤装置密闭并加压时的压力没有特别限定，优选为0.1～1MPa的范围。考虑到清洗效果、再生效果、以及装置的安全性，更优选为0.2MPa以上，而且更优选为0.6MPa以下。
另外，在上述加压后至释放压力为止的时间没有特别限定，从生产性的观点考虑，优选在尽量短的时间内进行再生处理，优选为5分钟以内，更优选为1分钟以内，进一步优选为20秒钟以内。
上述再生处理可以在培养悬浮液的通液中至少实施1次。但是在增加再生处理时，存在处理时间增长、操作变得烦杂等问题，因此，上限例如为100次，优选为60次。
另外，在本发明的制造方法中，在过滤工序结束后，优选重复进行实施对附着于多孔膜的微生物悬浮成分进行清洗的清洗工序后再次进行过滤工序的操作，由此，可以长期利用多孔膜。作为对附着于多孔膜的微生物悬浮成分进行清洗的清洗液，没有特别限定，可以使用水、碱性水溶液、酸性水溶液中的任意1种以上。具体而言，可以根据清洗对象物的种类适当选择清洗液的种类，例如，推荐在有机物的清洗中使用碱性水溶液，在无机物的清洗中使用酸性水溶液。优选为碱性水溶液和酸性水溶液，更优选进行基于碱性水溶液的清洗和基于酸性水溶液的清洗这两者。
上述碱性水溶液的种类没有特别限定，可以列举例如：氨水、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钠、碳酸氢钠、氧化镁、氢氧化钙、乙酸钠等。考虑到经济性，优选为氢氧化钠、氢氧化钾。上述碱性水溶液的浓度也没有特别限定，考虑到操作性，优选为5重量％以下。
上述酸性水溶液的种类没有特别限定，可以列举例如：盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、乙酸、碳酸、草酸、氨基磺酸、柠檬酸、硫化氢等。考虑到经济性、操作性，优选为硫酸、氨基磺酸、柠檬酸。上述酸性水溶液浓度也没有特别限定，考虑到经济性、操作性，优选为5重量％以下。
清洗时的上述清洗液的温度优选为高温，优选为10℃以上，更优选为40℃以上，进一步优选为65℃以上。通过以更高温进行清洗，可以提高多孔膜的再生效率。其上限没有特别限定，优选为90℃以下。
在本发明的制造方法中，作为将多孔膜再生的方法，除了以上记载的再生方法以外，还可以是在培养悬浮液的通液处理中通过过滤液出口侧将介质流入而通液后恢复过滤工序的方法。此时流入的介质没有特别限定，可以利用空气、氮、水、过滤液、碱性水溶液、酸性水溶液等，从经济性、安全性、品质的观点考虑，优选使用空气、氮、水、过滤液。
上述再生工序是在培养悬浮液的通液处理中暂时(在通液工序的至少一部分期间)进行的工序，并不意味着在培养悬浮液的通液的全部过程中实施再生处理。具体而言，可以举出例如，在培养悬浮液的通液处理中，通过过滤液出口侧流入介质并在一定时间反向通液后，再次恢复从入口侧进行培养悬浮液的通液的方法等。上述再生处理的时机根据允许的处理时间等而不同，可以举出例如，如果平均过滤速度降低(约0.2L/min/m2以下)则进行再生处理；无论平均过滤速度如何，例如每1小时进行再生处理等的方法。
另外，在上述再生工序中，流入介质进行通液的时间没有特别限定，只要进行将降低的过滤速度提高至给定数值的时间即可，例如，推荐1次再生处理通常进行5秒钟以上，优选进行15秒钟以上，更优选进行30秒钟以上。
另外，为了将上述多孔膜再生而流入的介质的温度没有特别限定，优选为10℃～90℃。考虑到不使过滤处理工序的温度大幅变化、确保清洗恢复性，更优选为30℃以上，而且更优选为70℃以下。
(3)根据需要进行破碎
在本发明的制造方法中，在上述过滤工序之后，使用有机溶剂提取辅酶Q10。在提取辅酶Q10时，也可以从经过如上所述地向多孔膜通液的过滤工序而得到的微生物细胞培养浓缩液中直接提取辅酶Q10，将浓缩液中的微生物细胞破碎而制成微生物细胞破碎物或微生物细胞破碎物的水性悬浮液，优选从该破碎物或微生物细胞破碎物的水性悬浮液中提取辅酶Q10。或者，也可以使微生物细胞干燥，从该干燥微生物细胞中提取辅酶Q10。
需要说明的是，在本发明中，可以通过首先实施微生物细胞培养液的破碎，然后使得到的微生物细胞破碎物的培养悬浮液或水性悬浮液向多孔膜通液，从而进行浓缩。即，(2)的过滤工序和(3)的破碎工序的顺序是无关的。但是，优选先进行(2)的过滤工序。
需要说明的是，在本发明的“破碎”中，可以将细胞壁等表面结构损失至能够提取目标辅酶Q10的程度。
作为上述破碎方法，可以列举例如：物理性处理、化学性处理等。
作为上述物理性处理，可以列举例如：高压均化器、旋叶式均化器、超声波均化器、弗氏压碎器、球磨机等使用、或者它们的组合。
作为上述化学性处理，可以列举例如：使用盐酸、硫酸等酸(优选为强酸)的处理、使用氢氧化钠、氢氧化钾等碱(优选为强碱)的处理等、它们的组合。
在本发明中，作为辅酶Q10的提取/回收的前处理的细胞破碎方法，在上述破碎方法中，从破碎效率的观点考虑，更优选为物理性处理。
在本发明的制造方法中，如上所述，也可以通过上述过滤工序将如上所述地得到的含有产辅酶Q10微生物的培养悬浮液浓缩后，使其干燥，从该干燥微生物细胞中提取辅酶Q10。作为使该情况下的微生物细胞干燥的干燥机，可以列举例如使用流化床干燥机、喷雾干燥机、箱型干燥机、圆锥型干燥机、圆筒振动式干燥机、圆筒搅拌式干燥机、倒圆锥型干燥机、过滤干燥机、冷冻干燥机、微波干燥机等、或者它们的组合。
干燥后的上述微生物细胞内的水分浓度优选为0～50重量％的范围。另外，也可以进一步利用上述的破碎方法对干燥微生物细胞进行破碎处理、或使用将上述微生物细胞破碎物干燥而得到的干燥微生物细胞破碎物。
(4)提取工序
在本发明的制造方法中，作为用于辅酶Q10的提取的上述有机溶剂，没有特别限定，可以列举：烃、脂肪酸酯、醚、醇、脂肪酸、酮、氮化合物(包含腈、酰胺)、硫化合物等。
作为上述烃，没有特别限制，可以列举例如：脂肪烃、芳香烃、卤代烃等。其中，优选为脂肪烃、芳香烃，更优选为脂肪烃。
作为脂肪烃，无论是环状、非环状的，或者是饱和、不饱和的，均没有特别限制，通常优选使用饱和的脂肪烃。通常可以使用碳原子数3～20、优选为碳原子数5～12、更优选为碳原子数5～8的脂肪烃。作为具体例子，可以列举例如：丙烷、丁烷、异丁烷、戊烷、2-甲基丁烷、己烷、2-甲基戊烷、2,2-二甲基丁烷、2,3-二甲基丁烷、庚烷、庚烷异构体(例如，2-甲基己烷、3-甲基己烷、2,3-二甲基戊烷、2,4-二甲基戊烷)、辛烷、2,2,3-三甲基戊烷、异辛烷、壬烷、2,2,5-三甲基己烷、癸烷、十二烷、2-戊烯、1-己烯、1-庚烯、1-辛烯、1-壬烯、1-癸烯、环戊烷、甲基环戊烷、环己烷、甲基环己烷、乙基环己烷、对烷、环己烯等。优选为戊烷、2-甲基丁烷、己烷、2-甲基戊烷、2,2-二甲基丁烷、2,3-二甲基丁烷、庚烷、2-甲基己烷、3-甲基己烷、2,3-二甲基戊烷、2,4-二甲基戊烷、辛烷、2,2,3-三甲基戊烷、异辛烷、壬烷、2,2,5-三甲基己烷、癸烷、十二烷、环戊烷、甲基环戊烷、环己烷、甲基环己烷、乙基环己烷、对烷等。更优选为戊烷、2-甲基丁烷、己烷、2-甲基戊烷、2,2-二甲基丁烷、2,3-二甲基丁烷、庚烷、2-甲基己烷、3-甲基己烷、2,3-二甲基戊烷、2,4-二甲基戊烷、辛烷、2,2,3-三甲基戊烷、异辛烷、环戊烷、甲基环戊烷、环己烷、甲基环己烷、乙基环己烷等，进一步优选为戊烷、己烷、环己烷、甲基环己烷等。从防氧化的效果特别高的观点、通用性的观点考虑，特别优选为戊烷、己烷、甲基环己烷，最优选为戊烷、己烷。
作为上述芳香烃，没有特别限制，通常可以使用碳原子数6～20、优选为碳原子数6～12、更优选为碳原子数7～10的芳香烃。作为具体例子，可以列举例如：苯、甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、乙苯、异丙基苯、均三甲苯、四氢化萘、丁基苯、对甲基异丙基苯、环己基苯、二乙基苯、戊基苯、二戊基苯、十二烷基苯、苯乙烯等。优选为甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、乙苯、异丙基苯、均三甲苯、四氢化萘、丁基苯、对甲基异丙基苯、环己基苯、二乙基苯、戊基苯等。更优选为甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、异丙基苯、四氢化萘。最优选为异丙基苯。
作为上述卤代烃，无论是环状、非环状的，或者是饱和、不饱和的，均没有特别限制，通常优选使用非环状的卤代烃。更优选为氯代烃、氟代烃，进一步优选为氯代烃。
另外，可以优选使用碳原子数1～6、碳原子数优选为1～4、碳原子数更优选为1～2的卤代烃。作为具体例子，可以列举例如：二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,1-二氯乙烷、1,2-二氯乙烷、1,1,1-三氯乙烷、1,1,2-三氯乙烷、1,1,1,2-四氯乙烷、1,1,2,2-四氯乙烷、五氯乙烷、六氯乙烷、1,1-二氯乙烯、1,2-二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、1,2-二氯丙烷、1,2,3-三氯丙烷、氯苯、1,1,1,2-四氟乙烷等。优选为二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,1-二氯乙烷、1,2-二氯乙烷、1,1,1-三氯乙烷、1,1,2-三氯乙烷、1,1-二氯乙烯、1,2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯、1,1,1,2-四氟乙烷等。更优选为二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯、1,1,1,2-四氟乙烷。
作为上述脂肪酸酯，没有特别限制，可以列举例如：丙酸酯、乙酸酯、甲酸酯等。优选为乙酸酯、甲酸酯，更优选为乙酸酯。作为上述酯基，没有特别限制，通常可以使用碳原子数1～8的烷基酯、碳原子数7～12的芳烷基酯，优选使用碳原子数1～6的烷基酯，更优选使用碳原子数1～4的烷基酯。
作为上述丙酸酯的具体例子，可以列举例如：丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丁酯、丙酸异戊酯。优选为丙酸乙酯。
作为上述乙酸酯的具体例子，可以列举例如：乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸戊酯、乙酸异戊酯、乙酸仲己酯、乙酸环己酯、乙酸苄酯等。优选可以列举：乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸戊酯、乙酸异戊酯、乙酸仲己酯、乙酸环己酯等。优选为乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯，最优选为乙酸乙酯。
作为上述甲酸酯的具体例子，可以列举例如：甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸异丙酯、甲酸丁酯、甲酸异丁酯、甲酸仲丁酯、甲酸戊酯等。优选为甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、甲酸异丁酯、甲酸戊酯。最优选为甲酸乙酯。
作为上述醚，无论是环状、非环状的，或者是饱和、不饱和的，均没有特别限制，通常优选使用饱和的醚。通常可以使用碳原子数3～20、优选为碳原子数4～12、更优选为碳原子数4～8的醚。作为上述醚的具体例子，可以列举例如：二乙醚、甲基叔丁基醚、二丙醚、二异丙基醚、二丁醚、二己醚、乙基乙烯基醚、丁基乙烯基醚、苯甲醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二烷、呋喃、2-甲基呋喃、四氢呋喃、四氢吡喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇二丁醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙二醇单丁醚等。优选为二乙醚、甲基叔丁基醚、二丙醚、二异丙基醚、二丁醚、二己醚、苯甲醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二烷、2-甲基呋喃、四氢呋喃、四氢吡喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇二丁醚、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚。更优选为二乙醚、甲基叔丁基醚、苯甲醚、二烷、四氢呋喃、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚。进一步优选为二乙醚、甲基叔丁基醚、苯甲醚，最优选为甲基叔丁基醚。
作为上述醇，无论是环状、非环状的，或者是饱和、不饱和的，均没有特别限制，通常优选使用饱和的醇类。通常使用碳原子数为1～20、优选碳原子数为1～12、更优选碳原子数为1～6的醇。其中，优选为碳原子数1～5的一元醇、碳原子数2～5的二元醇、碳原子数3的三元醇。
作为这些醇的具体例子，可以列举例如：甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、1-辛醇、2-辛醇、2-乙基-1-己醇、1-壬醇、1-癸醇、1-十一烷醇、1-十二烷醇、烯丙醇、炔丙醇、苄醇、环己醇、1-甲基环己醇、2-甲基环己醇、3-甲基环己醇、4-甲基环己醇等一元醇；1,2-乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、2,3-丁二醇、1,5-戊二醇等二元醇；甘油等三元醇。
作为上述一元醇，可以优选列举：甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、1-辛醇、2-辛醇、2-乙基-1-己醇、1-壬醇、1-癸醇、1-十一烷醇、1-十二烷醇、苄醇、环己醇、1-甲基环己醇、2-甲基环己醇、3-甲基环己醇、4-甲基环己醇等。优选为甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、环己醇。更优选为甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇。进一步优选为甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇，最优选为2-丙醇。
作为上述二元醇，优选为1,2-乙二醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇，最优选为1,2-乙二醇。作为上述三元醇，优选为甘油。
作为上述脂肪酸，可以列举例如：甲酸、乙酸、丙酸等。优选为甲酸、乙酸，最优选为乙酸。
作为上述酮，没有特别限制，可以优选使用碳原子数3～6的酮类。作为具体例子，可以列举例如：丙酮、甲乙酮、甲基丁基酮、甲基异丁基酮等。优选为丙酮、甲乙酮，最优选为丙酮。
作为上述腈，无论是环状、非环状的，或者是饱和、不饱和的，均没有特别限制，通常优选使用饱和的腈类。通常可以使用碳原子数2～20、优选为碳原子数2～12、更优选为碳原子数2～8的腈。
作为上述腈的具体例子，可以列举例如：乙腈、丙腈、丙二腈、丁腈、异丁腈、丁二腈、戊腈、戊二腈、己腈、辛腈、壬腈、十一腈、十二腈、十三腈、十五腈、硬脂腈、氯乙腈、溴乙腈、氯丙腈、溴丙腈、甲氧基乙腈、氰基乙酸甲酯、氰基乙酸乙酯、甲基苯腈、苯甲腈、氯苯甲腈、溴苯甲腈、氰基苯甲酸、硝基苯甲腈、茴香腈、萘甲腈、溴甲基苯腈、氰基苯甲酸甲酯、甲氧基苯甲腈、乙酰基苯甲腈、萘甲腈、氰基联苯、苯基丙腈、苯基丁腈、甲基苯乙腈、二苯基乙腈、萘基乙腈、硝基苯乙腈、氯苯乙腈、环丙甲腈、环己甲腈、环庚甲腈、苯基环己甲腈、甲苯基环己甲腈等。
优选为乙腈、丙腈、丁二腈、丁腈、异丁腈、戊腈、氰基乙酸甲酯、氰基乙酸乙酯、苯甲腈、甲基苯腈、氯丙腈，更优选为乙腈、丙腈、丁腈、异丁腈，最优选为乙腈。
作为除腈类以外的上述氮化合物，可以列举例如：甲酰胺、N-甲基甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等酰胺类；硝基甲烷、三乙胺、吡啶等。
作为上述硫化合物类，可以列举例如：二甲基亚砜、环丁砜等。
本发明中使用的上述有机溶剂优选考虑到沸点、熔点、粘性等性质而选择。例如，作为沸点，从能够为了提高溶解度而适度加热、且容易进行溶剂回收、置换的观点考虑，优选为1个大气压下约30～150℃的范围的有机溶剂。作为熔点，从室温下操作时及冷却至室温以下时也不容易固化的观点考虑，可以使用约0℃以上、优选为约10℃以上、更优选为约20℃以上的有机溶剂。优选使用在20℃下粘性低至约10cp以下的有机溶剂。
在本发明的制造方法中，在从微生物细胞或微生物细胞破碎物的水性浓缩悬浮液中提取辅酶Q10的情况下，在上述有机溶剂当中，优选使用疏水性有机溶剂或含有疏水性有机溶剂的有机溶剂作为提取溶剂。另外，通过使用在疏水性有机溶剂中混合有少量的亲水性有机溶剂(例如，异丙醇等醇类)、表面活性剂的有机溶剂，也可以进一步提高提取效率。
作为在该情况下使用的疏水性有机溶剂，没有特别限制，在上述的有机溶剂中，可以使用疏水性的溶剂，优选为烃、脂肪酸酯、醚，更优选为脂肪酸酯或烃，进一步可以优选使用脂肪烃。
在上述脂肪烃中，优选使用碳原子数5～8的脂肪烃。作为上述碳原子数5～8的脂肪烃的具体例子，可以列举例如：戊烷、2-甲基丁烷、己烷、2-甲基戊烷、2,2-二甲基丁烷、2,3-二甲基丁烷、庚烷、2-甲基己烷、3-甲基己烷、2,3-二甲基戊烷、2,4-二甲基戊烷、辛烷、2,2,3-三甲基戊烷、异辛烷、环戊烷、甲基环戊烷、环己烷、甲基环己烷、乙基环己烷等。特别优选为己烷、庚烷、甲基环己烷，最优选为己烷。
另外，作为脂肪酸酯，可以优选使用乙酸乙酯。
在本发明的制造方法中，作为提取溶剂的用量，没有特别限制，作为提取时的浓度，相对于全部溶液的容量，优选以25～80容量％的范围使用，更优选以50～75容量％的范围使用。在本发明的制造方法中，提取时的温度没有特别限制，通常可以以0～60℃、优选以20～50℃的范围实施。
作为上述提取方法，可以用分批提取、连续提取中的任意方法来进行，在工业上，从生产性方面考虑，优选连续提取，在连续提取中，特别优选逆流多级提取。分批提取时的搅拌时间没有特别限制，通常为5分钟以上，连续提取时的平均滞留时间没有特别限制，通常为10分钟以上。
(5)固体成分的分离除去
在本发明的制造方法中，将如上所述地得到的产辅酶Q10微生物的提取液直接冷却而使固体成分析出，将固体成分分离除去；或者，与碱性水溶液接触而使来自于微生物的脂溶性成分皂化，并在水洗后进行浓缩，制成浓缩提取液之后，进行冷却而使固体成分析出，将固体成分分离除去；由此，去除提取液中的杂质，也可以得到辅酶Q10纯度高的提取液。
作为用于使上述产辅酶Q10微生物的提取液皂化的碱性水溶液，可以列举：氨水、氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、氢氧化锂水溶液、碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液、氧化镁水溶液、氢氧化钙水溶液、乙酸钠水溶液等。鉴于皂化效率，优选为强碱，进一步考虑到经济性，更优选为氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液。
另外，与提取液接触的碱性水溶液的量没有特别限制，相对于全部提取液容量，为1容量％以上且200容量％以下，优选为1容量％以上且30容量％以下，更优选为1容量％以上且10容量％以下。
作为与上述碱性水溶液的接触方法，可以以分批方式、连续方式中的任意方法来进行，在工业上，从生产性方面考虑，优选为连续式，在连续方式中，考虑到清洗性，特别优选为并流方式。分批方式时的搅拌时间没有特别限制，通常为1分钟以上，连续提取时的平均滞留时间没有特别限制，通常为10秒钟以上。
与碱性水溶液接触后的提取液容易发生因热等导致的辅酶Q10分解、因形成二聚体导致的品质降低，因此优选进行水洗。与提取液接触的水的量没有特别限制，相对于全部提取液，为1容量％以上且200容量％以下，优选为1容量％以上且30容量％以下，更优选为1容量％以上且10容量％以下。
作为上述的接触方法，可以以分批方式、连续方式中的任意方法来进行，在工业上，从生产性方面考虑，优选为连续式，在连续方式中，考虑到清洗性，特别优选为并流方式。分批方式时的搅拌时间没有特别限制，通常为1分钟以上，连续提取时的平均滞留时间没有特别限制，通常为10秒钟以上。
在本发明的制造方法中，通过以上的操作将利用多孔膜浓缩后的含有产辅酶Q10微生物的微生物细胞悬浮液，进行浓缩之后，根据需要制成微生物细胞破碎物或微生物细胞破碎物的水性悬浮液、干燥微生物细胞或干燥微生物细胞破碎物，然后，在有机溶剂中提取辅酶Q10，并进一步根据需要使其与碱性水溶液、水接触，由此可以将纯化后的或提高了纯度的辅酶Q10分离/回收。
水洗处理后的辅酶Q10溶液可以直接利用，也可以使用吸附剂等进一步去除杂质，对纯化后的辅酶Q10提取液进一步进行处理，可以制成作为更优选的方式的含有高纯度辅酶Q10的组合物、辅酶Q10结晶。作为这样的处理工序，可以列举：浓缩、溶剂置换、氧化、还原、柱色谱、晶析等，当然也可以将它们进行组合。例如，也可以从由吸附剂分离得到的辅酶Q10提取液中蒸馏除去溶剂(浓缩)而制成包含辅酶Q10的纯化物、或者根据需要进一步通过硅胶等的柱色谱等进行了纯化后，蒸馏除去有机溶剂，制成包含辅酶Q10的纯化物。另外，也可以通过晶析操作等以结晶体的形式得到作为目标的辅酶Q10。
在上述柱色谱、氧化、还原、晶析之前，可以根据需要进一步进行溶剂置换。
需要说明的是，在本发明的制造方法中，为了制造单独的还原型辅酶Q10或还原型辅酶Q10比率高的辅酶Q10作为辅酶Q10，使用生产的辅酶Q10中的还原型辅酶Q10含有比率高的微生物作为产辅酶Q10微生物，在耐氧化性气体氛围中(例如，氮气等非活性气体氛围中)，在上述浓缩工序之后，进行提取、纯化处理的方法是有效的。由此，可以得到单独的还原型辅酶Q10或还原型辅酶Q10比率高的辅酶Q10而不进行特别的处理。当然，通过对这样得到的还原型辅酶Q10比率高的辅酶Q10进一步进行还原，可以进一步提高还原型比率。另外，也可以不对含有辅酶Q10的提取液特别实施防止氧化的方法、或者被空气中的氧、氧化剂氧化而得到还原型辅酶Q10比率较低的提取液(例如，50mol％以下、或30mol％以下)之后，实施还原反应，从而制造还原型辅酶Q10比率高的辅酶Q10。
为了制造还原型辅酶Q10，优选制造的最终工序或作为最终产品的还原型辅酶Q10含有比率高者，在辅酶Q10的总量100mol％中，还原型辅酶Q10例如可以为70mol％以上，优选为80mol％以上，更优选为90mol％以上，进一步更优选为96mol％以上。
作为更具体的一个方式，可以使产辅酶Q10微生物的培养悬浮液向多孔膜通液，进行浓缩，从该浓缩液或其破碎物中将辅酶Q10提取至有机溶剂中，得到含有辅酶Q10的提取液，通过使用柱色谱进一步进行纯化后，进行还原处理，使用晶析操作，获得高纯度的还原型辅酶Q10的结晶。
另外，本发明的制造方法也可以用于氧化型辅酶Q10的制造。在该情况下，从将产辅酶Q10微生物悬浮液浓缩而成的微生物细胞浓缩悬浮液、微生物细胞破碎物或微生物细胞破碎物的水性悬浮液、干燥微生物细胞或干燥微生物细胞破碎物中将辅酶Q10提取至有机溶剂中，然后，可以进行利用氧化剂的氧化处理；或者，通过仅在空气中等进行提取、吸附、其它纯化、后处理等、或在提取前在空气中对菌体进行干燥，从而可以利用自然氧化以简便的操作得到氧化型辅酶Q10比率高的辅酶Q10。
作为具体的一个方式，可以使产辅酶Q10微生物的培养悬浮液向多孔膜通液，进行浓缩，从该浓缩液或其破碎物中将辅酶Q10提取至有机溶剂中，将得到的含有辅酶Q10的提取液进行溶剂置换后，使用柱色谱进一步进行纯化，然后进行氧化处理，使用晶析操作，获得高纯度的氧化型辅酶Q10的结晶。
本申请要求2018年4月27日提出申请的日本专利申请第2018-087146号的优先权。将2018年4月27日提出申请的日本专利申请第2018-087146号的说明书的全部内容援引至本申请作为参考。
实施例
以下，列举实施例、比较例对本发明进一步详细地进行说明，但本发明并不仅限定于这些实施例。另外，对于实施例、比较例中的辅酶Q10的收率及辅酶Q10的纯度而言，未限定本发明的极限值，也没有限定其上限值。
辅酶Q10的浓度使用高效液相色谱(HPLC)(SHIMADZU制造)在下述条件下进行测定。
(HPLC测定条件)
柱：YMC-Pack ODS-A
烘箱温度：30℃
流动相：甲醇/己烷＝85/15(容积比)
送液速度：1.0ml/分
检测：UV275nm
直接计算滤液量或在上述HPLC分析条件下测定产辅酶Q10微生物悬浮液的辅酶Q10浓度，计算出通过多孔膜进行过滤时的浓缩度。另外，通过测定滤液中的辅酶Q10浓度，对有无损失进行了评价。
另外，对于多孔膜的清洗恢复性，在将上述产辅酶Q10微生物悬浮液通液之前，使水向多孔膜通液，将经过了3小时时的透过速度作为基准，在过滤处理后，使用温水、试剂实施清洗，然后同样地将水进行通液，根据3小时后的透过速度计算恢复率。
实施例1
使用培养基(蛋白胨5g/L、酵母提取物3g/L、麦芽提取物3g/L、葡萄糖20g/L、pH6.0)在25℃下有氧培养产生辅酶Q10的Saitoella complicata IFO10748株160小时。
然后，将得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至60℃、并调整为pH6后，以线速度4m/s、膜间压力差(TMP)0.2MPa向由氧化钛的中空状的微孔体和不锈钢制支撑体制成的多孔膜(φ＝6mm、L＝609mm、平均微孔直径＝0.5μm、过滤面积＝0.0114m2；Graver公司制造)通液，实施了过滤处理。
进行了10小时连续运行的结果是，过滤处理前的固体成分浓度(相当于微生物细胞悬浮液中换算为微生物干燥重量的微生物浓度)为8.06％，与此相对，在过滤处理后被浓缩至10.35％，通过过滤工序的平均透过通量为0.69kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，对于得到的微生物浓缩悬浮液，利用压力破碎机将微生物破碎，向该微生物破碎液添加相当于微生物破碎液体积的1.8倍的量的己烷、相当于0.7倍的量的2-丙醇，重复2次在40℃下搅拌1小时的操作，通过2步分批提取操作提取辅酶Q10。其结果是，提取率为96.8％，通过利用多孔膜进行浓缩，确认到良好地提取了辅酶Q10。
实施例2
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH6之后，与实施例1同样地以线速度3m/s、膜间压力差(TMP)0.3MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。
进行了10小时的连续运行的结果是，过滤处理前的固体成分浓度为8.06％，在过滤处理后被浓缩至10.32％，通过过滤工序的平均透过通量为0.59kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，与实施例1同样地对得到的微生物浓缩悬浮液进行压力破碎，提取了辅酶Q10。其结果是，提取率为97.1％，确认了通过利用多孔膜进行浓缩，良好地提取了辅酶Q10。
实施例3
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至40℃，在调整至pH6之后，与实施例1同样地以线速度5m/s、膜间压力差(TMP)0.4MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。
进行了11.2小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为8.06％，在过滤处理后被浓缩至10.85％，通过过滤工序的平均透过通量为0.78kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，与实施例1同样地对得到的微生物浓缩悬浮液进行压力破碎，提取了辅酶Q10。其结果是，提取率为97.0％，确认了通过利用多孔膜进行浓缩，良好地提取了辅酶Q10。
实施例4
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至60℃，在调整至pH5之后，与实施例1同样地以线速度3m/s、膜间压力差(TMP)0.4MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。
进行了10小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为8.06％，在过滤处理后被浓缩至10.27％，通过过滤工序的平均透过通量为0.55kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，与实施例1同样地对得到的微生物浓缩悬浮液进行压力破碎，提取了辅酶Q10。其结果是，提取率为94.6％，确认了通过利用多孔膜进行浓缩，良好地提取了辅酶Q10。
实施例5
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH4之后，与实施例1同样地以线速度4m/s、膜间压力差(TMP)0.4MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。
进行了8.5小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为8.06％，在过滤处理后被浓缩至11.0％，通过过滤工序的平均透过通量为1.09kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，与实施例1同样地对得到的微生物浓缩悬浮液进行压力破碎，提取了辅酶Q10。其结果是，提取率为97.2％，确认了通过利用多孔膜进行浓缩，良好地提取了辅酶Q10。
实施例6
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至60℃，在调整至pH4之后，与实施例1同样地以线速度5m/s、膜间压力差(TMP)0.3MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。
进行了6小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为8.15％，在过滤处理后被浓缩至13.04％，通过过滤工序的平均透过通量为1.60kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，与实施例1同样地对得到的微生物浓缩悬浮液进行压力破碎，提取了辅酶Q10。其结果是，提取率为96.9％，确认了通过利用多孔膜进行浓缩，良好地提取了辅酶Q10。
实施例7
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至40℃，在调整至pH4之后，与实施例1同样地以线速度3m/s、膜间压力差(TMP)0.2MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。
进行了10小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为8.06％，在过滤处理后被浓缩至10.09％，通过过滤工序的平均透过通量为0.65kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，与实施例1同样地对得到的微生物浓缩悬浮液进行压力破碎，提取了辅酶Q10。其结果是，提取率为96.9％，确认了通过利用多孔膜进行浓缩，良好地提取了辅酶Q10。
实施例8
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH5之后，与实施例1同样地以线速度5m/s、膜间压力差(TMP)0.2MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。
进行了8.7小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为8.06％，在过滤处理后被浓缩至11.01％，通过过滤工序的平均透过通量为1.08kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，与实施例1同样地对得到的微生物浓缩悬浮液进行压力破碎，提取了辅酶Q10。其结果是，提取率为95.9％，确认了通过利用多孔膜进行浓缩，良好地提取了辅酶Q10。
实施例9
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH4之后，与实施例1同样地以线速度5m/s、膜间压力差(TMP)0.2MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。
进行了6.7小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为7.9％，在过滤处理后被浓缩至12.2％，通过过滤工序的平均透过通量为1.65kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，与实施例1同样地对得到的微生物浓缩悬浮液进行压力破碎，提取了辅酶Q10。其结果是，提取率为98.0％，确认了通过利用多孔膜进行浓缩，良好地提取了辅酶Q10。
实施例10
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH4之后，以线速度5m/s、膜间压力差(TMP)0.2MPa向由氧化钛的中空状微孔体和不锈钢制支撑体制成的多孔膜(φ＝9mm、L＝1520mm、平均微孔直径：0.5μm、过滤面积：0.0462m2；Graver公司制造)通液，实施了过滤处理。
进行了29.5小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为7.11％，在过滤处理后为12.96％，通过过滤工序的平均透过通量为2.35kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
另外，与实施例1同样地对得到的微生物浓缩悬浮液进行压力破碎，提取了辅酶Q10。其结果是，提取率为98.0％，确认了通过利用多孔膜进行浓缩，良好地提取了辅酶Q10。
实施例11
在上述实施例10的过滤运行中，从滤液排出侧流入30秒钟空气，实施了多孔膜的清洗和再生处理。其结果是，再生处理前的透过通量为1.49kg/min/m2，与此相对，再生处理后恢复至2.34kg/min/m2。
实施例12
在上述实施例11的过滤运行后，用50℃的温水对该多孔膜进行了1小时循环清洗，结果是其清洗恢复性为40％。另外，对清洗所使用的清洗液中的辅酶Q10浓度进行了测定，结果为检测限以下。
实施例13
在上述实施例12之后，用70℃的2％氢氧化钠水溶液对该多孔膜进行了1小时循环清洗，结果是其清洗恢复性为97％。
另外，对清洗所使用的清洗液中的辅酶Q10浓度进行了测定，结果为检测限以下。
实施例14
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH5之后，与实施例1同样地以线速度10m/s、膜间压力差(TMP)0.25MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。
进行了7.5小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为6.96％，在过滤处理后被浓缩至13.29％，通过过滤工序的平均透过通量为3.41kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
实施例15
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH5之后，与上述实施例1同样地向多孔膜通液，并将线速度变更为在7m/s下4小时、接着在5m/s下5.5小时、随后在6m/s下4小时，同时将膜间压力差(TMP)设为0.35MPa，实施了过滤处理。
进行了总计13.5小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为7.46％，与此相对，过滤处理后为12.71％，通过过滤工序的平均透过通量为2.74kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
实施例16
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH5之后，与实施例1同样地以线速度7m/s、膜间压力差(TMP)0.25MPa向多孔膜通液，实施了过滤处理。过滤处理前的固体成分浓度为6.71％，在确认到被浓缩至12.5％的时刻，将得到的滤液的一部分返回至处理前的微生物培养悬浮液的原液，将固体成分浓度稀释至9.5％，再次浓缩至12.5％，将这样的连续重复试验实施了总计4次。
浓缩至给定浓度的平均透过通量分别为第1次2.41kg/min/m2、第2次2.40kg/min/m2、第3次2.08kg/min/m2、第4次1.38kg/min/m2，尽管平均透过通量逐渐降低，但通过4次重复运行，良好地进行了过滤。
实施例17
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH5之后，以线速度7.5m/s、膜间压力差(TMP)0.19MPa向陶瓷膜(φ＝3.5mm、L＝1187mm、平均微孔直径：0.2μm、过滤面积：0.35m2；TAMI公司制造)通液，实施了过滤处理。
进行了1.5小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为8.0％，与此相对，过滤处理后为12.84％，通过过滤工序的平均透过通量为2.92kg/min/m2。
另外，测定了滤液侧的辅酶Q10浓度，结果为检测限以下。
实施例18
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至50℃，在调整至pH5之后，与实施例17同样地以线速度7m/s、膜间压力差(TMP)0.3MPa向陶瓷膜通液，实施了过滤处理。
进行了30分钟的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为7.57％，与此相对，过滤处理后为12.93％，通过过滤工序的平均透过通量为3.81kg/min/m2。然后，切换为循环处理并运行20小时，结果是，该期间的平均透过通量降低至1.32kg/min/m2，在整个运行中观察到的平均透过通量为1.80kg/min/m2。
(比较例1)
使用桐山漏斗及桐山漏斗用滤纸No.5-C尝试了对与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液(固体成分浓度8.06％)进行过滤，但由于一开始起就发生了筛眼堵塞，因此无法得到滤液。
(比较例2)
利用BECKMAN COULTER公司制造的Allegra X-22R CENTRIGUGE以1000g对与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液(固体成分浓度8.06％)离心分离5分钟，分离成微生物浓缩液和上清，回收了上清。确认了上清中的辅酶Q10浓度为0.3g/L，损失了微生物培养液中的1.4％的辅酶Q10。
(比较例3)
利用与比较例2同样的离心分离机以2000g对与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液(固体成分浓度8.06％)离心分离5分钟，分离成微生物浓缩液和上清，回收了上清。确认了上清中的辅酶Q10浓度为0.1g/L，损失了微生物培养液中的0.6％的辅酶Q10。
(比较例4)
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至30℃，在调整至pH5之后，以线速度3m/s、膜间压力差(TMP)0.05MPa向陶瓷膜(φ＝6mm、L＝1187mm、平均微孔直径：0.2μm、过滤面积：0.16m2；TAMI公司制造)通液，实施了过滤处理。
进行了4.5小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为7.0％，与此相对，过滤处理后被浓缩至11.72％，通过过滤工序的平均透过通量大幅降低至0.49kg/min/m2。
(比较例5)
将与上述实施例1同样地得到的包含辅酶Q10的微生物培养液加热至30℃，在调整至pH5之后，以线速度1.1m/s、膜间压力差(TMP)0.015MPa向有机膜(平均微孔直径：0.2μm、过滤面积：0.022m2；DAISEN公司制造)通液，实施了过滤处理。
进行了12小时的连续运行，结果是过滤处理前的固体成分浓度为6.75％，与此相对，过滤处理后被浓缩至9.98％，通过过滤工序的平均透过通量大幅降低至0.42kg/min/m2。

Claims (15)

1.一种辅酶Q10的制造方法，该方法包括：
过滤工序，使产辅酶Q10微生物的培养悬浮液在加热至35℃以上且90℃以下的状态下向多孔膜通液，得到固体成分浓度比所述培养悬浮液更高的微生物细胞培养浓缩液；
提取工序，使所述微生物细胞培养浓缩液中的微生物细胞破碎，作为微生物细胞破碎物或微生物细胞破碎物的水性悬浮液，从该破碎物或微生物细胞破碎物的水性悬浮液提取辅酶Q10，
所述多孔膜为合成树脂制、陶瓷制、或金属制的膜中的任意膜，
所述多孔膜的平均微孔直径为0.01～3μm，
经所述过滤工序得到的滤液中的辅酶Q10浓度为检测限以下。
2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，所述加热温度为48℃以上。
3.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，所述培养悬浮液的pH为3～7的范围内。
4.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，所述过滤工序中通液的线速度为0.1m/s以上。
5.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，在所述培养悬浮液的通液处理中，至少实施1次将过滤装置密闭并加压、然后释放压力的再生处理。
6.根据权利要求5所述的制造方法，其中，进行所述加压时的压力为0.1～1MPa。
7.根据权利要求5所述的制造方法，其中，进行所述加压时使用的介质是空气、氮、水、所述培养悬浮液、使所述培养悬浮液向多孔膜通液而得到的过滤液中的任意1种以上。
8.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，在所述过滤工序结束后，重复进行以下操作：实施对附着于所述多孔膜的微生物悬浮成分进行清洗的清洗工序，然后再次进行所述过滤工序。
9.根据权利要求8所述的制造方法，其中，进行所述清洗的清洗液为水、碱性水溶液、酸性水溶液中的任意1种以上。
10.根据权利要求8所述的制造方法，其中，进行所述清洗的清洗液的温度为10℃～90℃。
11.根据权利要求1所述的制造方法，其中，所述多孔膜为金属制的多孔膜。
12.根据权利要求11所述的制造方法，其中，所述金属制的多孔膜是包含基于氧化钛的分离层和不锈钢支撑体的筒，其内径为5mm以上。
13.根据权利要求1或2所述的制造方法，其中，在所述培养悬浮液的通液处理中，在实施从过滤液出口侧流入介质进行通液的处理后，恢复过滤工序。
14.根据权利要求13所述的制造方法，其中，所述流入的介质为空气、氮、水、使所述培养悬浮液向多孔膜通液而得到的过滤液中的任意1种以上。
15.根据权利要求13所述的制造方法，其中，所述流入的介质的温度为10℃～90℃。
CN201980027800.3A 2018-04-27 2019-04-25 辅酶q10的制造方法 Active CN112041454B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2018087146 2018-04-27
JP2018-087146 2018-04-27
PCT/JP2019/017546 WO2019208676A1 (ja) 2018-04-27 2019-04-25 補酵素ｑ１０の製造方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112041454A CN112041454A (zh) 2020-12-04
CN112041454B true CN112041454B (zh) 2025-02-18

Family

ID=68295475

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980027800.3A Active CN112041454B (zh) 2018-04-27 2019-04-25 辅酶q10的制造方法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20210238637A1 (zh)
JP (1) JP7539831B2 (zh)
CN (1) CN112041454B (zh)
WO (1) WO2019208676A1 (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004029076A2 (en) * 2002-09-25 2004-04-08 Novo Nordisk A/S Purification process comprising microfiltration at elevated temperatures

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5568295A (en) * 1978-11-17 1980-05-22 Godo Shiyusei Kk Production of ubiquinone
JPS56151493A (en) * 1980-04-23 1981-11-24 Nisshin Flour Milling Co Ltd Preparation of coenzyme q10
JPS5791196A (en) * 1980-11-27 1982-06-07 Takeda Chem Ind Ltd Separation of inosine, guanosine or their mixture from cell bodies and high polymeric substances
JPS6078588A (ja) * 1983-10-04 1985-05-04 Ajinomoto Co Inc 限外濾過流束改良法
JPS6283894A (ja) * 1985-10-08 1987-04-17 Mitsubishi Gas Chem Co Inc 助酵素ｑ↓１↓１の製造法
JPS6336789A (ja) * 1986-07-29 1988-02-17 Mitsubishi Gas Chem Co Inc 補酵素ｑ↓１↓０の製造法
JPS63317092A (ja) * 1987-06-19 1988-12-26 Mitsubishi Gas Chem Co Inc 補酵素ｑ↓１↓０の製造法
JPH09173792A (ja) * 1995-10-23 1997-07-08 Ajinomoto Co Inc 発酵液の処理方法
JP3904305B2 (ja) * 1997-10-07 2007-04-11 三菱化学株式会社 高純度エリスリトール結晶の製造方法
AU3709199A (en) 1998-04-14 1999-11-01 Dsm N.V. Membrane filtration
TWI305547B (en) * 2001-12-27 2009-01-21 Kaneka Corp Processes for producing coenzyme q10
JP6126401B2 (ja) * 2013-02-08 2017-05-10 日本碍子株式会社 微細藻類の回収・成形方法
EP3480317A4 (en) * 2016-07-01 2020-01-22 Kaneka Corporation METHOD FOR PRODUCING KOENZYME Q10
CN107337593B (zh) * 2017-07-24 2021-02-19 宁夏泰胜生物科技有限公司 一种辅酶q10纯品的制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004029076A2 (en) * 2002-09-25 2004-04-08 Novo Nordisk A/S Purification process comprising microfiltration at elevated temperatures

Also Published As

Publication number Publication date
WO2019208676A1 (ja) 2019-10-31
JPWO2019208676A1 (ja) 2021-05-13
CN112041454A (zh) 2020-12-04
US20210238637A1 (en) 2021-08-05
JP7539831B2 (ja) 2024-08-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5074287B2 (ja) 補酵素ｑ１０の製造方法
WO2012011589A1 (ja) 脂溶性生理活性物質の製造方法
CN112839921B (zh) 稳定性优异的还原型辅酶q10结晶的制造方法
CN107501045B (zh) 一种利用大孔吸附树脂从发酵液中分离提纯丁三醇的方法
JP2011515308A (ja) 固体塩組成物を精製するための方法及び装置
CN109415744B (zh) 辅酶q10的制造方法
JPWO2003008363A1 (ja) 還元型補酵素ｑ１０の安定化方法並びに酸性結晶化方法
CN112041454B (zh) 辅酶q10的制造方法
Pérez et al. Integration of a liquid membrane in Taylor flow regime with a fermentation by Lactobacillus casei ATCC 393 for in-situ lactic acid removal
JP6757724B2 (ja) 還元型補酵素ｑ１０の製造方法
JP3769505B2 (ja) 主成分の酢酸およびギ酸からなる水性混合物を分離および精製するための方法
JP7421471B2 (ja) 補酵素ｑ１０の製造方法
JP5802115B2 (ja) 粗製テレフタル酸の精製方法
JPS6246156B2 (zh)
CN105820213A (zh) 高效分离纯化纽莫康定的方法
Kanaya et al. Process for producing reduced coenzyme Q 10
WO2015105078A1 (ja) ヘキサクロロアセトンの製造方法
WO2023242151A1 (en) Producing 2,5-furandicarboxylic acid with recovery of acid
CN103265572A (zh) 一种采用含羧基/多羟基溶剂萃取分离纯化磷脂酰胆碱的方法
CN111153786A (zh) 一种辅酶q10提取方法及装置
JPH05213963A (ja) β−ラクタム化合物溶液の濃縮法
JPH04217953A (ja) インドールの回収方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant