CN110628810B

CN110628810B - 一种提高植物光合效率的方法

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Publication number: CN110628810B
Application number: CN201910744555.XA
Authority: CN
Inventors: 张先文; 王东芳; 向雅琴; 沈志成
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2019-08-13
Filing date: 2019-08-13
Publication date: 2022-06-28
Anticipated expiration: 2039-08-13
Also published as: CN110628810A

Abstract

本发明公开了一种提高植物光合效率的方法，所述方法为：抑制或敲除植物中胆汁酸钠协同转运蛋白基因，同时过表达乙醇酸脱氢酶基因、乙醛酸羧化酶基因和酒石半醛还原酶基因。本发明创造性地发现抑制植物中BASS6基因的表达，结合在叶绿体中过表达乙醇酸脱氢酶基因、乙醛酸羧化酶基因和酒石半醛还原酶基因，能显著减少光呼吸，提高植物的光合效率，提高植物生物量或产量，更重要的是这种转基因植物的耐旱性显著高于抑制PLGG1基因表达的植株，在干旱条件下生物量或产量比非转基因对照增加3％‑45％。

Description

一种提高植物光合效率的方法

(一)技术领域

本发明涉及一种提高植物光合效率的方法，通过转基因的方法来提高植物的光合效率、生物量或产量，改良植物种植资源。

(二)背景技术

人类数量的增加和生活水平的提高，需要消耗更多的粮食和饲料，这就要求在有限的土地上收获更多粮食。因此，培育新的高产植物品种非常重要。

植物整体的光合作用产物全部来源于酶催化CO₂转化为有机碳化合物。1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RubisCO)是卡尔文循环(Calvin-Benson(CB)cycle)中的羧化酶。由于RubisCO与CO₂或O₂都能反应，RubisCO与O₂反应产生磷酸乙醇酸，进入光呼吸循环，光呼吸导致植物中固定的碳和氮的浪费。在全球范围内，这一过程每年将大约29GT的新鲜同化碳被重新释放到大气中(Anav A，etal.Spatiotemporal patterns of terrestrial grossprimary production:a review.Rev Geophys 2015，53:785-818.)。

为了减少光呼吸造成的损失，提高植物的光合效率，目前常用的方法是通过新的光呼吸支路来回收乙醇酸中的CO₂，从而达到减少光呼吸提高光合效率的目的(Peterhansel C,Blume C,Offermann S.Photorespiratory bypasses:how can theywork？[J].Journal of Experimental Botany,2013,64(3):709-715.)。

乙醇酸脱氢酶(glycolate dehydrogenase，GDH)可以将乙醇酸转换成乙醛酸。目前用于植物转基因研究和应用的乙醇酸脱氢酶主要是来源于低等植物绿藻(Chlamydomonas reinhardtii)或者大肠杆菌。绿藻中的乙醇酸脱氢酶由一个基因编码，而大杆菌中的乙醇酸脱氢酶分别由3个基因编码的D、E、F三个亚基构成。有报到通过在土豆中过表达D、E、F三个亚基的编码基因的融合基因后，植株中的DEFp融合蛋白表达量增加，葡萄糖、果糖和蔗糖等糖分成倍增加，生物量也显著增加(Nolke G,Houdelet M,Kreuzaler F,et al.The expression of a recombinant glycolate dehydrogenase polyprotein inpotato(Solanum tuberosum)plastids strongly enhances photosynthesis and tuberyield[J].Plant Biotechnology Journal,2014,12(6):734-742.)。但是大肠杆菌来源和绿藻来源的乙醇酸脱氢酶在功能和活性方面都有显著差异，所以在转基因植物中的表现也有很大的差异。

乙醛酸羧化酶(GCL，glyoxylate carboxylyase)能催化乙醛酸转换成酒石半醛(tartronic semialdehyde，TS)，这种酶最早是从大肠杆菌中克隆出来的(Chang YY,WangAY,Cronan Jr JE.1993.Molecular cloning,DNAsequencing,and biochemical analysesof Escherichia coli glyoxylatecarboligase.An enzyme of the acetohydroxy acidsynthase-pyruvateoxidase family.Journal of Biological Chemistry 268,3911–3919.)。酒石半醛还原酶(tartronic semialdehydereductase,TSR)可以把酒石半醛还原成甘油酸。

胆汁酸钠协同转运蛋白(Bile Acid Sodium Symporter，BASS)和质体乙醇酸/甘油酸转运子1(plastidal glycolate/glyceratetranslocator 1，PLGG1)是光呼吸中，把叶绿体中的乙醇酸转运到过氧化物酶体的关键蛋白质(South P F,Walker B J,Cavanagh AP,et al.Bile Acid Sodium Symporter BASS6Can Transport Glycolate and IsInvolved in Photorespiratory Metabolism in Arabidopsis thaliana[J].The PlantCell，2017:tpc.00775.2016.)。BASS和PLGG1基因都有转运乙醇酸的功能，但是PLGG1同时还具有转运乙醇酸和甘油酸的功能。之前的研究表明在烟草叶绿体中过表达GDH和MS基因，同时抑制PLGG1基因的表达，可以显著提高烟草的生物量(PF South,AP Cavanagh,HW Liu,etal.Synthetic glycolate metabolism pathways stimulate crop growth andproductivity in the field,Science,2019:363(6422):eaat9077.)。

耐旱是植物非常重要的特性。植物具有一定的耐旱性有利于其抵抗干旱逆境，适应不同地理环境。在水资源日益紧张的情况下，培育耐旱能力强的作物新品种非常重要。

但是我们研究发现，在叶绿体中过表达GDH和MS基因，同时抑制PLGG1基因的表达的植物与对照相比，耐旱性显著降低。相比之下，在叶绿体中过表达GDH和MS基因，同时抑制BASS6基因的表达的植物的耐旱性显著高于抑制PLGG1基因的表达的植物。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种保持或提高植物耐旱性，且减少植物光呼吸，提高植物光合效率，提高植物生物量或产量的方法，为了实现上述技术目的，本发明的技术手段是抑制或敲除植物中BASS基因的表达，并在叶绿体中过表达GDH、GCL和TSR基因。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种提高植物光合效率的方法，所述方法为：抑制或敲除植物中胆汁酸钠协同转运蛋白(BASS)基因，同时过表达乙醇酸脱氢酶(GDH)基因、乙醛酸羧化酶(GCL)基因和酒石半醛还原酶(TSR)基因。

进一步，所述胆汁酸钠协同转运蛋白的编码基因来源于植物(表1)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3之一所示。当所述植物为水稻时，所述BASS6基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；当所述植物为大豆时，所述BASS6基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

进一步，抑制植物中胆汁酸钠协同转运蛋白基因的方法为RNA干扰法，具体是向植物中导入形成靶向胆汁酸钠协同转运蛋白基因发夹结构的双链RNA核苷酸序列。优选当植物为水稻时，导入靶向水稻OsBASS基因形成发夹结构的OsBASS-RNAi序列，核苷酸序列分别为SEQ ID NO.4；当所述植物为大豆时，导入靶向大豆GmBASS基因形成发夹结构的GmBASS-RNAi序列，核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示。

进一步，所述乙醇酸脱氢酶(GDH)基因可以来源于原核生物或者真核生物，包括但不限于表2所示，优选核苷酸序列如SEQ ID NO.6(氨基酸序列为SEQ ID NO.7)。

进一步，所述乙醛酸羧化酶(GCL)基因可以来源于原核生物或者真核生物，优选GCL基因核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，氨基酸序列为SEQ ID NO.9所示。

进一步，所述酒石半醛还原酶(TSR)基因可以来源于原核生物或者真核生物(表2)，优选TSR基因核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，氨基酸序列为SEQ ID NO.11所示。

表1：胆汁酸钠协同转运蛋白(BASS)基因

编号	来源物种	NCBI Accession Number
			1	Arabidopsisthaliana	<u>NP</u> 567671
2	Zeamays	<u>NP</u> 001158917
			3	Sorghumbicolor	XP 021308938
4	Oryzasativa	<u>XP</u>015612294
			5	Glycinemax	XP 003538535/XP 003517442

表2：不同物种来源的乙醇酸脱氢酶(GDH)基因

编号	来源物种	NCBI Accession Number
			1	Chlamydomonas reinhardtii	<u>XP 001695381.1</u>
2	Volvox carteri f.nagariensis	<u>XP002946459.1</u>
			3	Gonium pectorale	<u>KXZ46746.1</u>
4	Chlamydomonas eustigma	<u>GAX77289.1</u>
			5	Escherichia coli K-12	<u>NP</u> 417453.1、YP 026191.1、YP 026190.1

本发明所述方法是构建T-DNA载体，导入植物中完成；所述T-DNA载体构建方法为：以含有耐草铵膦bar基因的pCambia1300双元载体为基础载体，再分别连入乙醇酸脱氢酶基因(GDH)表达框、乙醛酸羧化酶基因(GCL)表达框、酒石半醛还原酶基因(TSR)表达框和胆汁酸钠协同转运蛋白基因RNAi表达框；所述含有耐草铵膦bar基因的pCambia1300双元载体是将原来的抗潮霉素基因hptII替换为抗草铵膦基因bar。

本发明中BASS基因RNAi表达框，GDH基因过表达框、GCL基因过表达框和TSR基因过表达框可以通过分子聚合或者杂交聚合的方法实现。分子聚合是指将BASS基因抑制表达框、GDH、GCL和TSR基因的表达框构建在同一个载体的T-DNA上，通过转基因的方法将T-DNA转入的受体植物基因组中，从而使得目标植株中同时对BASS基因的表达进行抑制，且过表达GDH基因、GCL和TSR基因。杂交聚合是指分别获得包含BASS基因抑制表达框、GDH过表达框、GCL过表达框和TSR过表达框的植株，再用传统育种的方法，将分别含有一个或两个上述表达框的植株进行杂交，获得同时含有上述3个表达框的转基因植株。

本发明介导GDH、GCL和TSR基因在叶绿体中过表达的信号肽来源于植物RuBisCO小亚基(RbcS)或磷酸葡萄糖变位酶转运肽序列，优选叶绿体信号肽的氨基酸序列如SEQ IDNO.12或SEQ ID NO.13所示，叶绿体信号肽序列融合在GDH、GCL和TSR蛋白的N端。本发明介导GDH、GCL和TSR过表达的启动子可以来源于真核生物或者原核生物，也可以通过人工合成获得，可以是组成型启动子或者特异性启动子。所述的启动子包括包括p35S(NCBIACCESSION:MG719235 REGION:848-1628)，玉米UBI启动子(NCBI ACCESSION:KR297238REGION:4879-6876)和水稻Actin1启动子(NCBI ACCESSION:AY452735 REGION:2428-3797)。

本发明终止子可以来源于真核生物或者原核生物，也可以通过人工合成获得，优选终止子为ter1(NCBI ACCESSION:KJ716235 REGION:3962-4158)和ter2(NCBIACCESSION:MG733984 REGION:2092-2314)。

本发明所述植物为C3植物，是指CO₂同化的最初产物是光合碳循环中的三碳化合物3-磷酸甘油酸的植物，主要包括水稻和大豆。

本发明提供了一种通过提高植物光合效率来显著提高植物生物量或产量且保持或提高其耐旱性的方法，通过对植物BASS基因进行RNA干扰，并结合在植物的叶绿体中过表达乙醇酸脱氢酶基因(GDH)、乙醛酸羧化酶基因(GCL)和酒石半醛还原酶基因(TSR)，在叶绿体中将乙醇酸转化为乙醛酸并进一步转化为酒石半醛，酒石半醛在酒石半醛还原酶的作用下变成甘油酸，从而达到减少光呼吸、提高光合效率和产量的目的。在水稻和大豆叶绿体中对BASS基因进行RNA干扰，并过表达乙醇酸脱氢酶基因、乙醛酸羧化酶基因和酒石半醛还原酶基因，使得水稻产量增加3％-45％，大豆产量增加3％-45％，且耐旱性与非转基因对照相当，或者比对照更好。

与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：

本发明创造性地发现抑制植物中BASS6基因的表达，结合在叶绿体中过表达乙醇酸脱氢酶基因(GDH)、乙醛酸羧化酶基因(GCL)和酒石半醛还原酶基因(TSR)，能显著减少光呼吸，提高植物的光合效率，提高植物生物量或产量，更重要的是这种转基因植物的耐旱性显著高于抑制PLGG1基因表达的植株，在干旱条件下生物量或产量比非转基因对照增加3％-45％。

(四)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1、载体的构建

本发明GDH基因可以来源原核生物，也可以来源于真核生物，本发明提供的GDH基因包括但不限于表2中所示的基因。为了构建转化载体，人工合成了大肠杆菌来源的GDH基因以及对应的终止子序列，包含叶绿体信号肽、GDH编码基因和终止子，核苷酸序列如SEQID NO.6所示，5‘端和3‘端分别设置有BamHI和KpnI位点。人工合成GCL基因，包含叶绿体信号肽、GCL编码基因和终止子，核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，5‘端和3‘端分别设置有BamHI和HindIII位点。人工合成TSR基因，包含叶绿体信号肽、TSR编码基因和终止子，核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，5‘端和3‘端分别设置有BamHI和EcoRI位点。

为了实现对BASS基因的表达抑制或敲除，本发明提供了植物自身的BASS基因；当所述植物为水稻时，所述BASS6基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；当所述植物为大豆时，所述BASS6基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。为了构建BASS基因干扰表达框，分别人工合成靶向水稻OsBASS基因和大豆GmBASS基因的可以形成发夹结构的OsBASS-RNAi和GmBASS-RNAi序列，序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。作为对照分别合成了靶向水稻OsPGGL1基因和大豆GmPGGL1基因的可以形成发夹结构的Os PGGL1-RNAi和Gm PGGL1-RNAi序列，如SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示。上述序列的3’端都分别加有终止子ter1，最终构成OsBASS-RNAi-ter、GmBASS-RNAi-ter和Os PGGL1-RNAi-ter、Gm PGGL1-RNAi-ter。5‘端和3‘端分别设置有BglII和HindIII位点。

同时，人工合成玉米Ubi启动子序列、水稻Actin启动子和花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子序列。Ubi启动子5‘端和3‘端分别设置有EcoRI和BamHI位点，Actin启动子的5‘端和3‘端分别设置有EcoRI和BamHI位点，35S启动子5‘端和3‘端分别设置有KpnI和BamHI位点。同时合成一个5‘端和3‘端分别设置有HindIII和BamHI位点的Ubi启动子，用于介导RNAi序列的转录。

为了构建可以用于农杆菌方法转化植物所用的双元载体，用商业化的双元载体pCambia1300为基础，通过XhoI酶切位点把之前的hptII(hygromycin resistance)基因置换成耐草铵膦的bar基因(NCBI ACCESSIONp:MG719235 REGION:287-835)，置换后的载体命名为pCambia1300-bar。

通过EcoRI和KpnI位点把Ubi启动子与GDH基因连入pCambia1300-bar载体中，获得过度载体pCambia1300-bar-GDH。再通过KpnI和HindIII位点把35S启动子和GCL基因连入过度载体pCambia1300-bar-GDH中，获得过度载体pCambia1300-bar-GDH-GCL。然后通过EcoRI对pCambia1300-bar-GDH-GCL进行单酶切，再与用EcoRI和BamHI酶切后的Actin启动子和用BamHI和EcoRI酶切的TSR基因连接，获得过度载体pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR。最后通过HindIII对pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR进行单酶切，再把用BglII和HindIII双酶切后的OsBASS-RNAi-ter或GmBASS-RNAi-ter和用BamHI和HindIII酶切后的Ubi启动子连接，构建成终载体，分别命名为pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-OsBASS-RNAi(GGTOsBi)和pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-GmBASS-RNAi(GGTGmBi)。

作为对照，用同样的方法构建含有抑制PGGL1基因表达框的载体，分别命名为pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-OsPGGL1-RNAi(GGTOsPi)和pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-GmPGGL1-RNAi(GGTGmPi)。

最后，通过电转的方法把T-DNA质粒转入农杆菌LB4404中，通过含有15μg/ml四环素和50μg/mL的卡那霉素的YEP固体培养基筛选出阳性克隆，并保菌，用于接下来的植物转化。

实施例2、水稻转化

转基因水稻的获得方法是采用现有技术(卢雄斌，龚祖埙(1998)生命科学10：125-131；刘凡等(2003)分子植物育种1：108-115)。选取成熟饱满的“秀水-134”种子去壳，诱导产生愈伤组织作为转化材料。取实施例1中构建好的分别含有pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-OsBASS-RNAi(GGTOsBi)和pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-OsPGGL1-RNAi(GGTOsPi)质粒的农杆菌划板。挑单菌落接种，准备转化用农杆菌。将待转化的愈伤组织放入OD为0.6左右的农杆菌菌液中(农杆菌菌液的制备：将农杆菌接种至培养基，培养至OD为0.6左右；培养基组成：3g/L K₂HPO₄、1g/L NaH₂PO₄、1g/L NH₄Cl、0.3g/L MgSO₄·7H₂O、0.15g/L KCl、0.01g/L CaCl₂、0.0025g/L FeSO₄·7H₂O、5g/L蔗糖、20mg/L乙酰丁香酮，溶剂为水，pH＝5.8)，让农杆菌结合到愈伤组织表面，然后把愈伤组织转移到共培养培养基(MS+2mg/L 2,4-D+30g/L葡萄糖+30g/L蔗糖+3g/L琼脂(sigma 7921)+20mg/L乙酰丁香酮)中，共培养2-3天。用无菌水冲洗转化后的愈伤，转移到筛选培养基(MS+2mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)+30g/L蔗糖+3g/L琼脂(sigma 7921)+20mg/L乙酰丁香酮+2mM草甘膦(Sigma))上，筛选培养两个月(中间继代一次)。把筛选后，生长活力良好的愈伤转移到预分化培养基(MS+0.1g/L肌醇+5mg/L ABA(脱落酸)+1mg/L NAA(萘乙酸)+5mg/L 6-BA(6-苄胺基腺嘌呤)+20g/L山梨醇+30g/L蔗糖+2.5g/L植物凝胶(gelrite))上培养20天左右，然后将预分化好的愈伤组织移到分化培养基上，每天14小时光照分化发芽。2-3周后，把抗性再生植株转移到生根培养基(1/2MS+0.2mg/L NAA+20g/L蔗糖+2.5g/L gelrite)上壮苗生根，最后将再生植株洗去琼脂移植于温室，选择产量高、种子大或者生物量高等能够提高水稻产量的转基因株系，培育新品种。分别获得含上述转化载体的转基因水稻植株。

实施例3.大豆转化

这里使用的获得转基因大豆的步骤来自于已有的技术(Deng et al.,1998,PlantPhysiology Communications 34:381-387；Ma et al.,2008,ScientiaAgriculturaSinica 41:661-668；Zhou et al.,2001,Journal of NortheastAgricultural University 32:313-319)。选取健康、饱满、成熟的“天隆1号”大豆，用80％乙醇消毒2分钟，再用无菌水清洗，然后放置在充满氯气(由50ml NaClO与2ml浓HCl反应生成)的干燥器中灭菌4-6个小时。灭菌后的大豆在超净工作台里被播撒到B5培养基中，25℃条件下培养5天，同时光密度在90-150μmol光子/m²·s水平。当子叶变绿并顶破种皮，无菌的豆芽就会长出。去掉了下胚轴的豆芽在长度上被切成五五开，使得两片外植体都具有子叶和上胚轴。在子叶和上胚轴的节点处切外植体大约7-8处，即可用作被侵染的目标组织。

分别取通过实施例1构建的含有载体pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-GmBASS-RNAi(GGTGmBi)和pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-GmPGGL1-RNAi(GGTGmPi)的单克隆农杆菌被分开培养待用。准备好的外植体浸没在农杆菌悬浮液(同实施例2方法制备)中共培养30分钟左右。然后，将侵染的组织上多余的细胞悬浮液用吸水纸吸收干净，再转移到1/10B5共培养培养基里25℃暗培养3-5天。

共培养的植物组织用B5液体培养基清洗，以除去多余的农杆菌，然后放置到B5固体培养基中25℃下培养5天，待其发芽。诱导发生的胚芽组织转移到含有0.1mM草甘膦的B5筛选培养基中，25℃光照培养4周，期间每两周更换一次培养基。筛选出来的胚芽组织再转移到固体培养基中，25℃培养，待其长成小苗。随后，将转基因植株苗转移到1/2B5培养基中进行生根诱导。最后，长成的小植株经清洗去除琼脂后栽种在温室中。

实施例4：转基因水稻的鉴定

通过实施例2分别获得了载体pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-OsBASS-RNAi(GGTOsBi)和pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-OsPGGL1-RNAi(GGTOsPi)的转基因水稻植株。上述转基因植株与非转基因对照相比生物量和产量都有所增加，并且，GGTOsBi植株在生物量或产量方面的增加幅度最大。为了进一步鉴定GGTOsBi转基因植株的表现变化，我们对上述转基因植株的生物量和种子产量进行了评估和比较，结果如表3所示。在正常条件下GGTOsBi转基因植株和GGTOsPi转基因植株的生物量或产量与非转基因对照相比都有显著增加，增幅达5％-45％；但是在干旱条件(表5)下，GGTOsBi转基因植株与对照相比生物量或产量仍然显著增加，而GGTOsPi转基因植株与非转基因对照相比生物量或产量没有显著增加。

表3生物量和产量对比

实施例5：转基因大豆的鉴定

通过实施例3分别获得了载体pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-GmBASS-RNAi(GGTGmBi)和pCambia1300-bar-GDH-GCL-TSR-GmPGGL1-RNAi(GGTGmPi)的转基因大豆植株。上述转基因植株与非转基因对照相比生物量和产量都有所增加，并且转基因植株在生物量或产量方面的增加幅度最大。为了进一步鉴定转基因植株的表现变化，我们对上述转基因植株的生物量和种子产量进行了评估，结果如表4所示。在正常条件下GGTGmBi转基因植株和GGTGmPi转基因植株的生物量或产量与非转基因对照相比都有显著增加，增幅达5％-45％；但是在干旱条件(表5)下，GGTGmBi转基因植株与对照相比生物量或产量仍然显著增加，而GGTGmPi转基因植株与非转基因对照相比生物量或产量没有显著增加。

表4生物量、产量比较

表5、基于农田与作物干旱形态指标等级(GB/T 32136-2015)

序列表

<110> 浙江大学

<120> 一种提高植物光合效率的方法

<160> 15

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 401

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 1

Met Ala Pro Asn Ala Ala Val Leu Val Arg Pro His Ile Ala Gly Val

1 5 10 15

His His Leu Pro Thr Gly Arg Arg Leu Pro Arg Leu Ala Pro Pro Gln

20 25 30

Ala Val Ser Pro Pro Phe Ser Arg Gln Lys Gly Ser Val Val Ala Ala

35 40 45

Ser Gly Arg Val Trp Ala Ser Ala Ser Gly Ser Phe Glu Lys Asp Arg

50 55 60

Ile Gly Asp Asp Asp Val Leu Ala Ser Pro Gln Ile Val Glu Glu Ser

65 70 75 80

Lys Val Asp Leu Leu Lys Ile Leu Lys Ser Ala Asn Thr Ile Ile Pro

85 90 95

His Val Val Leu Gly Ser Thr Ile Leu Ala Leu Val Tyr Pro Pro Ser

100 105 110

Phe Thr Trp Phe Thr Thr Arg Tyr Tyr Ala Pro Ala Leu Gly Phe Leu

115 120 125

Met Phe Ala Val Gly Val Asn Ser Ser Val Lys Asp Phe Ile Glu Ala

130 135 140

Ile Gln Arg Pro Asp Ala Ile Ala Ala Gly Tyr Val Gly Gln Phe Ile

145 150 155 160

Ile Lys Pro Phe Leu Gly Phe Leu Phe Gly Thr Leu Ala Val Thr Ile

165 170 175

Phe Asn Leu Pro Thr Ala Leu Gly Ala Gly Ile Met Leu Val Ser Cys

180 185 190

Val Ser Gly Ala Gln Leu Ser Asn Tyr Ala Thr Phe Leu Thr Asp Pro

195 200 205

His Met Ala Pro Leu Ser Ile Val Met Thr Ser Leu Ser Thr Ala Thr

210 215 220

Ala Val Phe Val Thr Pro Thr Leu Ser Tyr Phe Leu Ile Gly Lys Lys

225 230 235 240

Leu Pro Val Asp Val Lys Gly Met Met Ser Ser Ile Val Gln Ile Val

245 250 255

Val Ala Pro Ile Ala Ala Gly Leu Leu Leu Asn Arg Tyr Leu Pro Arg

260 265 270

Leu Cys Ser Ala Ile Gln Pro Phe Leu Pro Pro Leu Ser Val Phe Val

275 280 285

Thr Ala Leu Cys Val Gly Ser Pro Leu Ala Ile Asn Ile Lys Ala Val

290 295 300

Leu Ser Pro Phe Gly Leu Ala Thr Val Leu Leu Leu Phe Ala Phe His

305 310 315 320

Thr Ser Ser Phe Ile Ala Gly Tyr His Leu Ala Gly Thr Trp Phe Arg

325 330 335

Glu Ser Ala Asp Val Lys Ala Leu Gln Arg Thr Val Ser Phe Glu Thr

340 345 350

Gly Met Gln Ser Ser Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Asn Arg Phe Phe

355 360 365

Pro Asp Pro Leu Val Gly Val Pro Pro Ala Ile Ser Val Val Leu Met

370 375 380

Ser Leu Met Gly Phe Ala Leu Val Met Val Trp Ser Lys Arg Thr Lys

385 390 395 400

Glu

<210> 2

<211> 408

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 2

Met Ile Ser Ser Gly Leu Lys Leu Lys His Phe Arg Asn Ile Asp Ser

1 5 10 15

Leu Phe His Phe Pro Lys Ser Lys Pro Pro Ile Leu Leu Pro Cys Cys

20 25 30

Pro Thr Ile Ser Ser Pro Cys Ser Ile Arg Phe Asn Ser His Phe Pro

35 40 45

Tyr Arg Ser Thr Lys Val Pro Leu Lys Cys Ala Pro Leu Pro Ser Ser

50 55 60

Asp Ser Leu Pro Pro Asp Leu Ser Asp Ala Pro Thr Gln Thr Glu Gln

65 70 75 80

Asn Ser Met Ser Ile Leu Glu Ile Leu Lys Gln Ser Asn Ser Tyr Leu

85 90 95

Pro His Val Leu Ile Ala Ser Ile Leu Leu Ala Leu Ile Tyr Pro Pro

100 105 110

Ser Leu Thr Trp Phe Thr Ser Arg Tyr Tyr Ala Pro Ala Leu Gly Phe

115 120 125

Leu Met Phe Ala Val Gly Val Asn Ser Asn Glu Asn Asp Phe Leu Glu

130 135 140

Ala Phe Lys Arg Pro Ala Glu Ile Val Thr Gly Tyr Phe Gly Gln Phe

145 150 155 160

Ala Val Lys Pro Leu Leu Gly Tyr Leu Phe Cys Met Ile Ala Val Thr

165 170 175

Val Leu Ser Leu Pro Thr Thr Val Gly Ala Gly Ile Val Leu Val Ala

180 185 190

Cys Val Ser Gly Ala Gln Leu Ser Ser Tyr Ala Thr Phe Leu Thr Asp

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Pro Gln Met Ala Pro Leu Ser Ile Val Met Thr Ser Leu Ser Thr Ala

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Ser Ala Val Phe Val Thr Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ile Gly Lys

225 230 235 240

Lys Leu Pro Ile Asp Val Arg Gly Met Val Tyr Ser Ile Thr Gln Ile

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Val Val Val Pro Ile Ala Ala Gly Leu Leu Leu Asn Arg Phe Tyr Pro

260 265 270

Arg Ile Cys Asn Val Ile Arg Pro Phe Leu Pro Pro Leu Ser Val Leu

275 280 285

Val Ala Ser Ile Cys Ala Gly Ala Pro Leu Ala Phe Asn Val Glu Thr

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Met Lys Ser Pro Leu Gly Val Val Ile Leu Leu Leu Val Val Ala Phe

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His Leu Ser Ser Phe Ile Ala Gly Tyr Ile Leu Ser Gly Phe Val Phe

325 330 335

Arg Asp Ser Leu Asp Val Lys Ala Leu Gln Arg Thr Ile Ser Phe Glu

340 345 350

Thr Gly Leu Gln Ser Ser Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Asn Lys Phe

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Phe Glu Asp Pro Lys Val Ala Ile Pro Pro Ala Ile Phe Thr Ser Ile

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Met Ser Leu Met Gly Phe Val Leu Val Leu Ile Trp Thr Arg Arg Gly

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Lys Arg Asp Ile Lys His Ser Ser

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<213> 未知(Unknown)

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Leu Phe Asn Leu Ser Lys Ser Gln Gln Pro Pro Asn Pro Ile Ile Val

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Pro Cys Cys Arg Thr Asn Thr Asn Asn Asn Ile Ser Ser Pro Phe Ser

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Ile Arg Phe Asn Ser Pro Phe Pro Tyr Arg Ser Pro Lys Ile Pro Leu

50 55 60

Lys Cys Ala Pro Leu His Ser Ser Asp Ser Leu Pro Pro Asp Pro Ser

65 70 75 80

Ser Ala Ser Thr Gln Met Glu Gln Asn Ser Met Ser Ile Leu Glu Ile

85 90 95

Leu Lys Gln Ser Asn Ser Tyr Leu Pro His Ala Leu Ile Ala Ser Ile

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Ser Asn Glu Asn Asp Phe Leu Glu Ala Phe Lys Arg Pro Ala Glu Ile

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Val Thr Gly Tyr Phe Gly Gln Phe Ala Val Lys Pro Leu Leu Gly Tyr

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Leu Phe Cys Met Ile Ala Val Thr Val Leu Gly Leu Pro Thr Thr Val

180 185 190

Gly Ala Gly Ile Val Leu Val Ala Cys Val Ser Gly Ala Gln Leu Ser

195 200 205

Ser Tyr Ala Thr Phe Leu Thr Asp Pro Gln Met Ala Pro Leu Ser Ile

210 215 220

Val Met Thr Ser Leu Ser Thr Ala Ser Ala Val Phe Val Thr Pro Leu

225 230 235 240

Leu Leu Leu Leu Leu Ile Gly Lys Lys Leu Pro Ile Asp Val Lys Gly

245 250 255

Met Val Tyr Asn Ile Thr Gln Ile Val Val Val Pro Ile Ala Ala Gly

260 265 270

Leu Leu Leu Asn Arg Phe Phe Pro Arg Ile Cys Asn Val Ile Arg Pro

275 280 285

Phe Leu Pro Pro Leu Ser Val Leu Val Ala Ser Ile Cys Ala Gly Ala

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Pro Leu Ala Leu Asn Val Glu Thr Met Lys Ser Pro Leu Gly Val Ala

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Ile Leu Leu Leu Val Val Ala Phe His Leu Ser Ser Phe Ile Ala Gly

325 330 335

Tyr Ile Leu Ser Gly Phe Val Phe Arg Asp Ser Leu Asp Val Lys Ala

340 345 350

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Pro Pro Ala Ile Ser Thr Ser Ile Met Ser Leu Met Gly Phe Val Leu

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gcttttgatg gaaagacaga catcataccg aatttataaa aggaaaagaa ataaattcaa 60

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tggacagtga tgtcataact atgcttaaag gtgccatttg tggatcagtc aggaaagtag 600

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Gly Pro Ala Ser Pro Ser Ser Leu Glu Gln Gln Thr Arg Gln Val Ala

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Gln Val Ala Val Gln Gln Ser Thr Gln Gln Ala Val Lys Val Val Val

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Pro Ala Ile Lys Val Asp Leu Val Gly Ala Val Ser Ser Val Ser Glu

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Phe Glu Asp Gly Arg Tyr Ala Ala Phe Val Glu Glu Ile Thr Lys Phe

145 150 155 160

Ile Pro Lys Glu Arg Gln Tyr Ser Asp Pro Val Arg Thr Phe Ala Tyr

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Gly Thr Asp Ala Ser Phe Tyr Arg Leu Asn Pro Lys Leu Val Val Lys

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Gln Ala Ile Thr Asp Ser Val Leu Ile Lys Leu Ser His Thr Gly Lys

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Asn Phe Arg Asn Phe Thr Val His Gly Asp Gly Ser Val Ile Thr Val

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Glu Pro Gly Leu Ile Gly Gly Glu Val Asn Arg Ile Leu Ala Ala His

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Gln Lys Lys Asn Lys Leu Pro Ile Gln Tyr Lys Ile Gly Pro Asp Pro

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Ser Ser Ile Asp Ser Cys Met Ile Gly Gly Ile Val Ser Asn Asn Ser

290 295 300

Ser Gly Met Cys Cys Gly Val Ser Gln Asn Thr Tyr His Thr Leu Lys

305 310 315 320

Asp Met Arg Val Val Phe Val Asp Gly Thr Val Leu Asp Thr Ala Asp

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Pro Asn Ser Cys Thr Ala Phe Met Lys Ser His Arg Ser Leu Val Asp

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Gly Val Val Ser Leu Ala Arg Arg Val Gln Ala Asp Lys Glu Leu Thr

355 360 365

Ala Leu Ile Arg Arg Lys Phe Ala Ile Lys Cys Thr Thr Gly Tyr Ser

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Leu Asn Ala Leu Val Asp Phe Pro Val Asp Asn Pro Ile Glu Ile Ile

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Lys His Leu Ile Ile Gly Ser Glu Gly Thr Leu Gly Phe Val Ser Arg

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Ala Thr Tyr Asn Thr Val Pro Glu Trp Pro Asn Lys Ala Ser Ala Phe

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Ile Val Phe Pro Asp Val Arg Ala Ala Cys Thr Gly Ala Ser Val Leu

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Ile Lys Gly Cys Asp Pro Met Ala Ala Ala Leu Leu Ile Glu Cys Arg

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545 550 555 560

Arg Glu Pro Gly Thr Ser Met Leu Ile Glu Asp Val Ala Cys Pro Val

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Asp Lys Leu Ala Asp Met Met Ile Asp Leu Ile Asp Met Phe Gln Arg

580 585 590

His Gly Tyr His Asp Ala Ser Cys Phe Gly His Ala Leu Glu Gly Asn

595 600 605

Leu His Leu Val Phe Ser Gln Gly Phe Arg Asn Lys Glu Glu Val Gln

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His Ser Gly Ser Leu Lys Gly Glu His Gly Thr Gly Arg Asn Val Ala

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Asn Ile Val Asn Ala Met His Ser Val Val Gly Ser Ala Pro Leu Ser

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Ala Ile Ser Arg Ala Leu Asn Ala Ala Thr Asn His Phe Val Pro Val

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Trp Asn Pro Tyr Met Pro Lys Gly Ala Ala Pro Leu Lys Val Pro Ala

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Pro Pro Ala Pro Ala Ala Ala Glu Ala Ser Gly Ile Pro Arg Lys Val

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Lys Ala Gly Tyr Glu Val Ile Ile Pro Glu Gly Val Ala Ser Gln Cys

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Cys Gly Met Met Phe Asn Ser Arg Gly Phe Lys Asp Ala Ala Ala Ser

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gatcgagttc gacccggaca tgtacgagcc gctcccggtg tacaagccgg ccgcctcccg 720

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gttcctcatc gaggagctcg ccgtgggcgc ccagttcaac atcccgtaca tccacgtgct 1560

cgtgaacaac gcctacctcg gcctcatccg ccagtcccag cgcgccttcg acatggacta 1620

ctgcgtgcag ctcgccttcg agaacatcaa ctcctccgag gtgaacggct acggcgtgga 1680

ccacgtgaag gtggccgagg gcctcggctg caaggccatc cgcgtgttca agccggagga 1740

catcgccccg gccttcgagc aggccaaggc cctcatggcc cagtaccgcg tgccggtggt 1800

ggtggaggtg atcctcgagc gcgtgaccaa catctccatg ggctccgagc tcgacaacgt 1860

gatggagttc gaggacatcg ccgacaacgc cgccgacgcc ccgaccgaga cctgcttcat 1920

gcactacgag taagagctct agatcgttct gcacaaagtg gagtagtcag tcatcgatca 1980

ggaaccagac accagacttt tattcataca gtgaagtgaa gtgaagtgca gtgcagtgag 2040

ttgctggttt ttgtacaact tagtatgtat ttgtatttgt aaaatacttc tatcaataaa 2100

atttctaatt cctaaaacca aaatccagga agctt 2135

<210> 9

<211> 593

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 9

Met Ala Lys Met Arg Ala Val Asp Ala Ala Met Tyr Val Leu Glu Lys

1 5 10 15

Glu Gly Ile Thr Thr Ala Phe Gly Val Pro Gly Ala Ala Ile Asn Pro

20 25 30

Phe Tyr Ser Ala Met Arg Lys His Gly Gly Ile Arg His Ile Leu Ala

35 40 45

Arg His Val Glu Gly Ala Ser His Met Ala Glu Gly Tyr Thr Arg Ala

50 55 60

Thr Ala Gly Asn Ile Gly Val Cys Leu Gly Thr Ser Gly Pro Ala Gly

65 70 75 80

Thr Asp Met Ile Thr Ala Leu Tyr Ser Ala Ser Ala Asp Ser Ile Pro

85 90 95

Ile Leu Cys Ile Thr Gly Gln Ala Pro Arg Ala Arg Leu His Lys Glu

100 105 110

Asp Phe Gln Ala Val Asp Ile Glu Ala Ile Ala Lys Pro Val Ser Lys

115 120 125

Met Ala Val Thr Val Arg Glu Ala Ala Leu Val Pro Arg Val Leu Gln

130 135 140

Gln Ala Phe His Leu Met Arg Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu Val

145 150 155 160

Asp Leu Pro Phe Asp Val Gln Val Ala Glu Ile Glu Phe Asp Pro Asp

165 170 175

Met Tyr Glu Pro Leu Pro Val Tyr Lys Pro Ala Ala Ser Arg Met Gln

180 185 190

Ile Glu Lys Ala Val Glu Met Leu Ile Gln Ala Glu Arg Pro Val Ile

195 200 205

Val Ala Gly Gly Gly Val Ile Asn Ala Asp Ala Ala Ala Leu Leu Gln

210 215 220

Gln Phe Ala Glu Leu Thr Ser Val Pro Val Ile Pro Thr Leu Met Gly

225 230 235 240

Trp Gly Cys Ile Pro Asp Asp His Glu Leu Met Ala Gly Met Val Gly

245 250 255

Leu Gln Thr Ala His Arg Tyr Gly Asn Ala Thr Leu Leu Ala Ser Asp

260 265 270

Met Val Phe Gly Ile Gly Asn Arg Phe Ala Asn Arg His Thr Gly Ser

275 280 285

Val Glu Lys Tyr Thr Glu Gly Arg Lys Ile Val His Ile Asp Ile Glu

290 295 300

Pro Thr Gln Ile Gly Arg Val Leu Cys Pro Asp Leu Gly Ile Val Ser

305 310 315 320

Asp Ala Lys Ala Ala Leu Thr Leu Leu Val Glu Val Ala Gln Glu Met

325 330 335

Gln Lys Ala Gly Arg Leu Pro Cys Arg Lys Glu Trp Val Ala Asp Cys

340 345 350

Gln Gln Arg Lys Arg Thr Leu Leu Arg Lys Thr His Phe Asp Asn Val

355 360 365

Pro Val Lys Pro Gln Arg Val Tyr Glu Glu Met Asn Lys Ala Phe Gly

370 375 380

Arg Asp Val Cys Tyr Val Thr Thr Ile Gly Leu Ser Gln Ile Ala Ala

385 390 395 400

Ala Gln Met Leu His Val Phe Lys Asp Arg His Trp Ile Asn Cys Gly

405 410 415

Gln Ala Gly Pro Leu Gly Trp Thr Ile Pro Ala Ala Leu Gly Val Cys

420 425 430

Ala Ala Asp Pro Lys Arg Asn Val Val Ala Ile Ser Gly Asp Phe Asp

435 440 445

Phe Gln Phe Leu Ile Glu Glu Leu Ala Val Gly Ala Gln Phe Asn Ile

450 455 460

Pro Tyr Ile His Val Leu Val Asn Asn Ala Tyr Leu Gly Leu Ile Arg

465 470 475 480

Gln Ser Gln Arg Ala Phe Asp Met Asp Tyr Cys Val Gln Leu Ala Phe

485 490 495

Glu Asn Ile Asn Ser Ser Glu Val Asn Gly Tyr Gly Val Asp His Val

500 505 510

Lys Val Ala Glu Gly Leu Gly Cys Lys Ala Ile Arg Val Phe Lys Pro

515 520 525

Glu Asp Ile Ala Pro Ala Phe Glu Gln Ala Lys Ala Leu Met Ala Gln

530 535 540

Tyr Arg Val Pro Val Val Val Glu Val Ile Leu Glu Arg Val Thr Asn

545 550 555 560

Ile Ser Met Gly Ser Glu Leu Asp Asn Val Met Glu Phe Glu Asp Ile

565 570 575

Ala Asp Asn Ala Ala Asp Ala Pro Thr Glu Thr Cys Phe Met His Tyr

580 585 590

Glu

<210> 10

<211> 1232

<212> DNA

<213> 未知(Unknown)

<400> 10

ggatccaaca atggccccgt ccgtgatggc ctcctccgcc accaccgtgg ccccgttcca 60

gggcctcaag tccaccgccg gcatgccggt ggcccgccgc tccggcaact cctccttcgg 120

caacgtgtcc aacggcggcc gcatccgctg catgaagctc ggcttcatcg gcctcggcat 180

catgggcacc ccgatggcca tcaacctcgc ccgcgccggc caccagctcc acgtgaccac 240

catcggcccg gtggccgacg agctcctctc cctcggcgcc gtgaacgtgg acaccgcccg 300

ccaggtgacc gaggccgccg acatcatctt catcatggtg ccggacaccc cgcaggtgga 360

ggaggtgctc ttcggcgaga acggctgcac caaggcctcc ctcaagggca agaccatcgt 420

ggacatgtcc tccatctccc cgatcgagac caagcgcttc gcccgccagg tgaacgagct 480

cggcggcgac tacctcgacg ccccggtgtc cggcggcgag atcggcgccc gcgagggcac 540

cctctccatc atggtgggcg gcgacgaggc cgtgttcgag cgcgtgaagc cgctcttcga 600

gctcctcggc aagaacatca ccctcgtggg cggcaacggc gacggccaga cctgcaaggt 660

ggccaaccag atcatcgtgg ccctcaacat cgaggccgtg tccgaggccc tcctcttcgc 720

ctccaaggcc ggcgccgacc cggtgcgcgt gcgccaggcc ctcatgggcg gcttcgcctc 780

ctcccgcatc ctcgaggtgc acggcgagcg catgatcaag cgcaccttca acccgggctt 840

caagatcgcc ctccaccaga aggacctcaa cctcgccctc cagtccgcca aggccctcgc 900

cctcaacctc ccgaacaccg ccacctgcca ggagctcttc aacacctgcg ccgccaacgg 960

cggctcccag ctcgaccact ccgccctcgt gcaggccctc gagctcatgg ccaaccacaa 1020

gctcgcctaa gagctctaga tcgttctgca caaagtggag tagtcagtca tcgatcagga 1080

accagacacc agacttttat tcatacagtg aagtgaagtg aagtgcagtg cagtgagttg 1140

ctggtttttg tacaacttag tatgtatttg tatttgtaaa atacttctat caataaaatt 1200

tctaattcct aaaaccaaaa tccagggaat tc 1232

<210> 11

<211> 292

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 11

Met Lys Leu Gly Phe Ile Gly Leu Gly Ile Met Gly Thr Pro Met Ala

1 5 10 15

Ile Asn Leu Ala Arg Ala Gly His Gln Leu His Val Thr Thr Ile Gly

20 25 30

Pro Val Ala Asp Glu Leu Leu Ser Leu Gly Ala Val Asn Val Asp Thr

35 40 45

Ala Arg Gln Val Thr Glu Ala Ala Asp Ile Ile Phe Ile Met Val Pro

50 55 60

Asp Thr Pro Gln Val Glu Glu Val Leu Phe Gly Glu Asn Gly Cys Thr

65 70 75 80

Lys Ala Ser Leu Lys Gly Lys Thr Ile Val Asp Met Ser Ser Ile Ser

85 90 95

Pro Ile Glu Thr Lys Arg Phe Ala Arg Gln Val Asn Glu Leu Gly Gly

100 105 110

Asp Tyr Leu Asp Ala Pro Val Ser Gly Gly Glu Ile Gly Ala Arg Glu

115 120 125

Gly Thr Leu Ser Ile Met Val Gly Gly Asp Glu Ala Val Phe Glu Arg

130 135 140

Val Lys Pro Leu Phe Glu Leu Leu Gly Lys Asn Ile Thr Leu Val Gly

145 150 155 160

Gly Asn Gly Asp Gly Gln Thr Cys Lys Val Ala Asn Gln Ile Ile Val

165 170 175

Ala Leu Asn Ile Glu Ala Val Ser Glu Ala Leu Leu Phe Ala Ser Lys

180 185 190

Ala Gly Ala Asp Pro Val Arg Val Arg Gln Ala Leu Met Gly Gly Phe

195 200 205

Ala Ser Ser Arg Ile Leu Glu Val His Gly Glu Arg Met Ile Lys Arg

210 215 220

Thr Phe Asn Pro Gly Phe Lys Ile Ala Leu His Gln Lys Asp Leu Asn

225 230 235 240

Leu Ala Leu Gln Ser Ala Lys Ala Leu Ala Leu Asn Leu Pro Asn Thr

245 250 255

Ala Thr Cys Gln Glu Leu Phe Asn Thr Cys Ala Ala Asn Gly Gly Ser

260 265 270

Gln Leu Asp His Ser Ala Leu Val Gln Ala Leu Glu Leu Met Ala Asn

275 280 285

His Lys Leu Ala

290

<210> 12

<211> 47

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 12

Met Ala Pro Ser Val Met Ala Ser Ser Ala Thr Thr Val Ala Pro Phe

1 5 10 15

Gln Gly Leu Lys Ser Thr Ala Gly Met Pro Val Ala Arg Arg Ser Gly

20 25 30

Asn Ser Ser Phe Gly Asn Val Ser Asn Gly Gly Arg Ile Arg Cys

35 40 45

<210> 13

<211> 42

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 13

Met Ala Ser Ser Met Leu Ser Ser Ala Thr Met Val Ala Ser Pro Ala

1 5 10 15

Gln Ala Thr Met Val Ala Pro Phe Asn Gly Leu Lys Ser Ser Ala Ala

20 25 30

Phe Pro Ala Thr Arg Lys Ala Asn Gly Gly

35 40

<210> 14

<211> 838

<212> DNA

<213> 未知(Unknown)

<400> 14

cgatcggcag gtcatgcgaa atcgcgacga ggctgcgtgc attttgactg attgacgact 60

cacgctgggt aggcccgagg gagaggtggc gcccgcgcct cctcctcctc ctccggcggc 120

ggcggcggcg tggatcgggg cgatgaggcg gtggcgagga ttggcgggag ccatggagat 180

tgccgccgct tggcgggagg aggaggagga ggaggagggg ttgcgtcggc atcggcgggg 240

aggaagcgtg cggaggcggg gcggcgacgt ggcggtggcg gagggcgaaa ggcggcagcg 300

atggctgctg cgtagcgagg caatcatgca gggggaggat gatgatgagg tcgctgccat 360

ctcttctctt ctcttctctt cttctccttc tcctttggcc agcgagagag cagtggcagt 420

gacagtggat gagaagggag ctgggagcag tggcagaggc caggtggaag agaggagatg 480

gcagcgacct catcatcatc ctccccctgc atgattgcct cgctacgcag cagccatcgc 540

tgccgccttt cgccctccgc caccgccacg tcgccgcccc gcctccgcac gcttcctccc 600

cgccgatgcc gacgcaaccc ctcctcctcc tcctcctcct cccgccaagc ggcggcaatc 660

tccatggctc ccgccaatcc tcgccaccgc ctcatcgccc cgatccacgc cgccgccgcc 720

gccggaggag gaggaggagg cgcgggcgcc acctctccct cgggcctacc cagcgtgagt 780

cgtcaatcag tcaaaatgca cgcagcctcg tcgcgatttc gcatgacctg ccgatcgg 838

<210> 15

<211> 491

<212> DNA

<213> 未知(Unknown)

<400> 15

gccgtgacat aaatgacagt ctcagccaac aattgcaagc aaactttgtc taacagcagg 60

aatcgagcaa agaatggatc caaatatacc attcagagca taagcaatgg cacaaaatgg 120

gagagcctcg ggttccttgg cagacaaagc tgctgttcca agcccgtggg cactgaaaaa 180

taaaatttag gtcaagagag taagtaaata accatgcacg cacaaagaaa atgtcattca 240

actattattg catgtttggt atagattaat ttttgagaaa taatcactta ttttacagaa 300

actaatttta tttttcagtg cccacgggct tggaacagca gctttgtctg ccaaggaacc 360

cgaggctctc ccattttgtg ccattgctta tgctctgaat ggtatatttg gatccattct 420

ttgctcgatt cctgctgtta gacaaagttt gcttgcaatt gttggctgag actgtcattt 480

atgtcacggc c 491

Claims

1.一种提高植物光合效率的方法，其特征在于所述方法为：抑制或敲除植物中胆汁酸钠协同转运蛋白基因，同时过表达乙醇酸脱氢酶基因、乙醛酸羧化酶基因和酒石半醛还原酶基因。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述胆汁酸钠协同转运蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3之一所示。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于抑制植物中胆汁酸钠协同转运蛋白基因的方法为：向植物中导入形成靶向胆汁酸钠协同转运蛋白基因发夹结构的双链RNA核苷酸序列。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述双链RNA核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQID NO.5所示。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述乙醇脱氢酶基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述乙醛酸羧化酶基因的核苷酸序列如SEQID NO.8所示。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述酒石半醛还原酶基因的核苷酸序列如SEQID NO.10所示。

8.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述方法是构建T-DNA载体，导入植物中完成；所述T-DNA载体构建方法为：以含有耐草铵膦bar基因的pCambia1300双元载体为基础载体，再分别连入乙醇酸脱氢酶基因表达框、乙醛酸羧化酶基因表达框、酒石半醛还原酶基因表达框和胆汁酸钠协同转运蛋白基因RNAi表达框。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于用于表达框构建的启动子包括玉米Ubi启动子序列、水稻Actin启动子和花椰菜花叶病毒CaMV的35S启动子；终止子为终止子ter。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于所述植物为水稻或大豆。