CN110461839B

CN110461839B - 含有4元杂环酰胺的jak抑制剂

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Publication number: CN110461839B
Application number: CN201880017046.0A
Authority: CN
Inventors: 保罗·R·法特里; G·E·L·勃兰特; 卡梅伦·史密斯; 史蒂文·D·E·沙利文; 洛里·琼·范奥登; M·A·克莱因舍尔克; G·D·克拉泰尔
Original assignee: Theravance Biopharma R&D IP LLC
Current assignee: Theravance Biopharma R&D IP LLC
Priority date: 2017-03-09
Filing date: 2018-03-08
Publication date: 2022-08-23
Anticipated expiration: 2038-03-08
Also published as: US20200216447A1; TW201837037A; IL268679B; ZA201905618B; EP3592742A1; EA037748B1; TWI779016B; DK3592742T3; IL268689A; BR112019018648A2; JP7134990B2; US20220289737A1; MX388749B; EA201992128A1; US20190127371A1; PH12019501985A1; ZA201905585B; US10519153B2; AU2018231035A1; US10550118B2

Abstract

本发明提供适用作JAK激酶抑制剂的式(I)化合物，

Description

含有4元杂环酰胺的JAK抑制剂

技术领域

本发明是针对适用作JAK激酶抑制剂的化合物。本发明还针对包括此类化合物的医药组合物、使用此类化合物治疗呼吸疾病的方法及适用于制备此类化合物的方法及中间物。

背景技术

哮喘为气管的慢性疾病，其无预防或治愈方法。所述疾病的特征在于气管发炎、纤维化、高反应性及重构，其皆促成气流限制。全世界估计有3亿人罹患哮喘，且据估计，截至2025年，患有哮喘的人数将增长超过1亿。在美国，约6％至8％的人口罹患哮喘，使其成为所述国最常见的慢性疾病中的一种。虽然大多数患者可用吸入皮质类固醇实现对哮喘症状的控制，所述吸入皮质类固醇可与白三烯修饰剂及/或长效β促效剂组合，但仍有一部分患有重度哮喘的患者的疾病不受常规疗法控制。重度持续性哮喘定义为对吸入皮质类固醇的较高剂量保持不受控制的疾病。虽然估计重度哮喘患者占所有哮喘患者的约5％，但其有高罹病率及死亡率风险且造成哮喘患者中健保资源利用的不相称份额。仍需要新颖治疗剂来治疗这些患者。

细胞介素为细胞间信号传导分子，其包含趋化因子、干扰素、介白素、淋巴介质及肿瘤坏死因子。细胞介素对于正常细胞生长及免疫性调节为关键的且还驱动免疫介导的疾病且有助于恶性细胞生长。多种细胞介素的含量提高涉及哮喘发炎的病理学。举例来说，已展示靶向介白素(IL)-5及13的基于抗体的治疗剂以为重度哮喘患者子组提供临床益处。在涉及哮喘发炎的细胞介素中，多种视经由转录因子的信号转导与转录活化因子 (STAT)家族传导信号的酪氨酸激酶(JAK)的杰纳斯(Janus)家族而定，经由信号传导路径起作用。涉及经由JAK-STAT路径传导信号的哮喘发炎的细胞介素包含IL-2、IL-3、IL-4、 IL-5、IL-6、IL-9、IL-11、IL-13、IL-23、IL-31、IL-27、胸腺基质淋巴生成素(TSLP)、干扰素-γ(IFNγ)及粒细胞-巨噬细胞群落刺激因子(GM-CSF)。

JAK家族包括四个成员JAK1、JAK2、JAK3及酪氨酸激酶2(TYK2)。细胞介素结合至JAK依赖性细胞介素受体诱导受体二聚，其使得JAK激酶上酪氨酸残基磷酸化，影响JAK活化。磷酸化JAK转而结合且使各种STAT蛋白质磷酸化，所述蛋白质在单元细胞核中二聚、内化且直接调节基因转录，在其它作用中，导致与发炎疾病相关的下游作用。JAK通常与细胞介素受体成对缔合作为均二聚体或杂二聚体。特定细胞介素与特定JAK配对缔合。JAK家族的四个成员中的每一者涉及与哮喘发炎相关的细胞介素中的至少一者的信号传导。因此，相对于JAK家族的所有成员，具有泛活性的化学抑制剂可调节有助于重度哮喘的宽范围促炎性路径。

然而，此类抑制剂的较宽消炎剂作用可抑制正常免疫细胞功能，潜在地导致感染风险提高。JAK抑制剂托法替尼(tofacitinib)观测到感染风险提高的证据，所述抑制剂经口投配以用于治疗类风湿性关节炎。在哮喘中，发炎定位于呼吸道。除哮喘以外，气管发炎为其它呼吸疾病所特有的。慢性阻塞性肺病(COPD)、囊肿性纤维化(CF)、肺炎、间质肺病(包含特发性肺纤维化)、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合症、支气管炎、肺气肿、阻塞性细支气管炎及类肉瘤病还为呼吸道疾病，其中据信病理生理学与JAK信号传导细胞介素相关。通过吸入局部投予JAK抑制剂至肺脏提供通过将有效抗细胞介素药剂直接递送至作用位点治疗有效的可能性，限制全身暴露且因此限制不利的全身性免疫抑制的可能性。仍需要适用于局部投予至肺脏以便治疗呼吸疾病的有效JAK抑制剂。

JAK信号传导细胞介素还在T细胞活化中起主要作用，T细胞为对许多免疫过程重要的免疫细胞亚类。病理性T细胞活化对于多种呼吸道疾病的病因至关重要。自身反应性T细胞在阻塞性细支气管炎伴机化性肺炎(还称为COS)中起作用。与COS类似，肺移植排斥反应的病因与移植供体肺的受体T细胞的异常T细胞活化有关。肺移植排斥反应可以早期以原发性移植物功能障碍(PGD)、机化性肺炎(OP)、急性排斥反应(AR)或淋巴细胞性细支气管炎(LB)形式发生，或其可在肺移植后数年以慢性肺同种异体移植物功能障碍(CLAD)形式发生。CLAD先前称为阻塞性细支气管炎(BO)，但现在被认为是可以具有不同病理学表现的综合症，包含BO、限制性CLAD(rCLAD或RAS)以及嗜中性同种异体移植物功能障碍。慢性肺同种异体移植物功能障碍(CLAD)是肺移植受体长期管理中的主要挑战，因为其导致移植肺逐渐失去功能(Gauthier等人,Curr Transplant Rep.,2016, 3(3),185-191)。CLAD对治疗的反应差，且因此，仍需要能够预防或治疗此病症的有效化合物。诸如IFNγ及IL-5的若干JAK依赖性细胞介素在CLAD及肺移植排斥反应中上调(Berastegui等人,Clin Transplant.2017,31,e12898)。此外，诸如CXCL9及CXCL10 的在JAK依赖性IFN信号传导下游的CXCR3趋化因子的高肺含量与肺移植患者的恶化结果有关(Shino等人,PLOS One,2017,12(7),e0180281)。全身性JAK抑制已展示在肾脏移植排斥反应中有效(Vicenti等人,American Journal ofTransplantation,2012,12, 2446-56)。因此，JAK抑制剂有可能有效治疗或预防肺移植排斥反应及CLAD。描述为肺移植排斥反应的基础的类似T细胞活化事件还视为造血干细胞移植后可能发生的肺移植物抗宿主病(GVHD)的主要驱动因素。与CLAD类似，肺GVHD是一种慢性进行性疾病，其结果极差且目前尚未有批准的治疗。95例接受全身性JAK抑制剂卢佐替尼(ruxolitinib)作为补救治疗的患有类固醇难治愈的急性或慢性GVHD的患者的回溯性多中心调查研究表明，在大多数患者(包含患有肺GVHD的患者)中对卢佐替尼完全或部分反应(Zeiser等人,Leukemia,2015,29,10,2062-68)。由于全身性JAK抑制与严重不良事件及小治疗指数相关，因此仍需要吸入肺部定向的非全身性JAK抑制剂以预防及/或治疗肺移植排斥反应或肺GVHD。

发明内容

在一个方面中，本发明提供具有作为JAK激酶抑制剂的活性的新颖化合物。

因此，本发明提供一种式(I)化合物：

其中：

R¹是选自氢、C_1-3烷基及C_3-6环烷基，且X为-C(O)R²

其中

R²是-NR¹³R¹⁴，其中

R¹³及R¹⁴与其所连接的氮原子一起形成4元杂环基，其中所述杂环基任选地经-NR⁵R⁶及R⁷取代，

R⁵及R⁶独立地为C_1-3烷基或R⁵及R⁶与其所连接的氮原子一起形成任选地包含氧原子的5元或6元杂环基，

R⁷是C_1-3烷基，其任选地经含有一个氮原子的5元或6元杂环基取代，

或其医药学上可接受的盐。

如下文中所使用，除非另外指示，否则短语“式(I)化合物”意味着式(I)化合物或其医药学上可接受的盐；即此短语意味着呈自由碱形式或呈医药学上可接受的盐形式的式(I)化合物。

本发明还提供一种包括本发明化合物及医药学上可接受的载剂的医药组合物。

本发明还提供一种治疗哺乳动物的呼吸疾病，尤其哮喘的方法，所述方法包括向哺乳动物投予治疗有效量的化合物或本发明的医药组合物。在相应及不同方面中，本发明还提供本文所描述的合成方法及中间物，其适用于制备本发明化合物。

本发明还提供一种如本文所描述的本发明化合物，其适用于医学疗法；以及本发明化合物用于制造供治疗哺乳动物的呼吸疾病用的调配物或药物的用途。

具体实施方式

在其它方面中，本发明提供式(I)的JAK激酶抑制剂、其医药学上可接受的盐，及用于制备其的中间物。以下取代基及值意在提供本发明的各种方面的代表性实例。这些代表值意在进一步定义此类方面且不意在排除其它值或限制本发明的范围。

在一特定方面中，R¹是选自氢、C_1-3烷基及C_3-6环烷基。

在另一特定方面中，R¹是选自氢及C_1-3烷基。在另一特定方面中，R¹是C_1-3烷基。

R¹的特定值包含(但不限于)甲基、乙基、正丙基及异丙基。

在一特定方面中，R¹是选自氢及C_1-3烷基且X是-C(O)R²，其中R²是

其中R⁵及R⁶独立地是C_1-3烷基或R⁵及R⁶一起形成-(CH₂)_4-5-且R⁷是氢或C_1-3烷基。

在另一特定方面中，R¹是选自氢及C_1-3烷基且X为-C(O)R²，其中R²为

其中R⁵及R⁶皆为甲基或R⁵及R⁶一起形成-(CH₂)₅-；且R⁷为氢或甲基。

在另一方面中，本发明提供一种式(II)化合物：

其中：

R¹为C_1-3烷基；

R²为

其中

R⁵及R⁶独立地是C_1-3烷基或R⁵与R⁶一起形成-(CH₂)_4-5-，R⁷是氢或C_1-3烷基，

或其医药学上可接受的盐。

在另一特定方面中，R¹是C_1-3烷基；

R²是

其中

R⁵及R⁶皆为甲基或R⁵及R⁶一起形成-(CH₂)₅-，且R⁷为氢或甲基。

在另一方面中，本发明提供一种化合物，其中化合物为(S)-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁-1-基)(5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[5,4-c]吡啶-6-基)甲酮，或其医药学上可接受的盐。

在另一方面中，本发明提供一种化合物，其中所述化合物为(S)-(3-(二甲基氨基)-3- 甲基氮杂环丁-1-基)(5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H- 咪唑并[5,4-c]吡啶-6-基)甲酮。

在另一方面中，本发明提供一种化合物，其中化合物为(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁 -1-基)(5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[5,4-c] 吡啶-6-基)甲酮，或其医药学上可接受的盐。

在另一方面中，本发明提供一种化合物，其中所述化合物为(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并 [5,4-c]吡啶-6-基)甲酮。

在另一方面中，本发明提供一种选自以下化合物的化合物：

(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5- 异丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮，

(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5- 丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮，

(S)-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑 -3-基)-5-丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮，

及其医药学上可接受的盐。

在另一方面中，本发明提供一种选自以下化合物的化合物：

(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5- 丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮，以及

(S)-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑 -3-基)-5-丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮。

在另一方面中，本发明提供下式的(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-异丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮

或其医药学上可接受的盐。

在另一方面中，本发明提供一种下式的化合物

在一个方面中，本发明提供以下实例2、4、8及表1的化合物。

如ChemDraw软件(PerkinElmer,Inc.,Cambridge,MA)中所实施，本文中根据IUPAC公约命名化学结构。举例来说，化合物：

命名为(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑 -3-基)-5-异丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮。

此外，在式(I)的结构中的四氢咪唑并吡啶部分的咪唑并部分以互变异构形式存在，如下文针对实例1的化合物的片段所说明

根据IUPAC公约，这些结构式产生咪唑部分原子的不同编号：2-(1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7- 四氢-1H -咪唑并[4,5-c]吡啶(结构A)对比2-(1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H -咪唑并[4,5-c] 吡啶(结构B)。应理解，尽管结构是以具体的形式展示或命名，但本发明还包含其互变异构体。

本发明化合物可含有一或多个手性中心且因此，此类化合物(及其中间物)可以外消旋混合物形式存在；纯立体异构体(即对映异构体或非对映异构体)；立体异构体增浓的混合物及其类似物。除非另外指示，否则本文中展示或命名的在手性中心不具有确定立体化学的手性化合物意在包含在未确定的立构中心的任何或所有可能的立体异构体变化形式。除非另外指示，否则具体立体异构体的描述或命名意指所指示的立构中心具有指定的立体化学，同时应理解为也可存在少量其它立体异构体，限制条件为所描绘或所命名的化合物的效用不因存在另一立体异构体的存在而消除。

式(I)化合物还含有若干碱基(例如氨基)且因此，此类化合物可以自由碱或多种盐形式存在，诸如单质子化盐形式、二质子化盐形式、三质子化盐形式或其混合物。除非另外指明，否则所有此类形式都包含在本发明的范围内。

本发明还包含同位素标记的式(I)化合物，即一或多个原子置换为或增浓原子数相同但原子质量不同于在自然界中占绝大多数的原子质量的原子的式(I)化合物。可并入至式 (I)化合物中的同位素的实例包含(但不限于)²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O 及¹⁸O。尤其关注的为富含氚或碳14的式(I)化合物，所述化合物可用于例如组织分布研究中。尤其关注的还有尤其在代谢部位富含氘的式(I)化合物，这些化合物预期具有较高代谢稳定性。另外，尤其关注的为富含诸如¹¹C、¹⁵O及¹³N的正电子发射同位素的式(I) 化合物，所述化合物可用于例如正电子发射断层摄影法(PET)研究。

定义

除非另外指明，否则当描述本发明(包含其各种个方面及实施例)时，以下术语具有以下含义。

术语“烷基”意味着可为直链或分支链或其组合的单价饱和烃基。除非另外定义，否则此类烷基通常含有1至10个碳原子。代表性烷基包含例如甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(n-Pr)或(nPr)、异丙基(i-Pr)或(iPr)、正丁基(n-Bu)或(nBu)、仲丁基、异丁基、叔丁基(t-Bu)或(tBu)、正戊基、正己基、2,2-二甲基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2-乙基丁基、2,2-二甲基戊基、2-丙基戊基及其类似物。

当特定数目的碳原子意图用于具体术语时，碳原子数目在术语前展示。举例来说，术语“C_1-3烷基”意味着具有1至3个碳原子的烷基，其中碳原子呈任何化学可接受的构形，包含直链或分支链构形。

术语“环烷基”意味着可为单环或多环的单价饱和碳环基。除非另外定义，否则此类环烷基通常含有3至10个碳原子。代表性环烷基包含例如环丙基(cPr)、环丁基(cBu)、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、金刚烷基及其类似基团。

术语“杂环基(heterocyclyl)”、“杂环(heterocycle)”、“杂环(heterocyclic)”或“杂环 (heterocyclic ring)”意味着总共具有3至10个环原子的单价饱和或部分不饱和环状非芳族基团，其中环含有2至9个碳环原子及1至4个选自氮、氧及硫的环杂原子。杂环基可为单环或多环(即稠合或桥连)。代表性杂环基包含例如吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基、咪唑啶基、吗啉基、硫吗啉基、吲哚啉-3-基、2-咪唑啉基、四氢哌喃基、1,2,3,4-四氢异喹啉-2-基、奎宁环基、7-氮杂降莰烷基、降托烷基及其类似基团，其中连接点在任何可用的碳或氮环原子处。在上下文使得杂环基的连接点显而易见的情况下，此类基团可替代地称为非价物种，即吡咯啶、哌啶、哌嗪、咪唑、四氢哌喃等。

术语“卤基”意味着氟、氯、溴或碘。

术语“治疗有效量”意味着当投予至需要治疗的患者时足以实现治疗的量。

术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”意味着预防、改善或抑制患者(确切地说人类)中正在治疗的医学病状、疾病或病症(例如呼吸道疾病)；或减轻医学病况、疾病或病症的症状。

术语“医药学上可接受的盐”意味着可接受用于向患者或哺乳动物(诸如人类)投予的盐(例如对于给定剂量方案具有可接受的哺乳动物安全性的盐)。代表性医药学上可接受的盐包含乙酸盐、抗坏血酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙磺酸盐、乙二磺酸盐、反丁烯二酸盐、龙胆酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、麸氨酸盐、马尿酸盐、氢溴酸盐、氢氯酸盐、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、顺丁烯二酸盐、苹果酸盐、杏仁酸盐、甲烷磺酸盐、黏液酸盐、萘磺酸盐、萘-1,5-二磺酸盐、萘-2,6-二磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、磷酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、对甲苯磺酸盐及羟萘甲酸盐及其类似物。

术语“其盐”意味着当酸的氢经阳离子(诸如金属阳离子或有机阳离子及其类似阳离子)置换时所形成的化合物。举例来说，阳离子可为式(I)化合物的质子化形式，即一或多个氨基由酸质子化的形式。通常，所述盐为医药学上可接受的盐，但此这一点对于不意在投予患者的中间化合物的盐来说来说不是需要必需的。

术语“氨基保护基”意味着适合于防止在氨基氮处发生不当反应的保护基。代表性氨基保护基包含(但不限于)甲酰基；酰基，例如烷酰基，诸如乙酰基及三氟乙酰基；烷氧基羰基，诸如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧基羰基，诸如苯甲氧基羰基(Cbz)及9-茀基甲氧基羰基(Fmoc)；芳基甲基，诸如苯甲基(Bn)、三苯甲基(Tr)及1,1-二(4'-甲氧基苯基)甲基；硅烷基，诸如三甲基硅烷基(TMS)、叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)、[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基(SEM)；及其类似基团。

术语“羟基-保护基”意味着适用于防止在羟基处的不当反应的保护基。代表性羟基 -保护基包含(但不限于)烷基，诸如甲基、乙基及叔丁基；酰基，例如烷酰基，诸如乙酰基；芳基甲基，诸如苯甲基(Bn)、对甲氧基苯甲基(PMB)、9-茀基甲基(Fm)及二苯甲基(二苯甲基，DPM)；硅烷基，诸如三甲基硅烷基(TMS)及叔丁基二甲基硅烷基(TBS)；及其类似物。

许多保护基及其引入及移除描述于T.W.Greene及P.G.M.Wuts,ProtectingGroups in Organic Synthesis,第三版,Wiley,New York中

通用合成程序

本发明化合物及其中间物可根据以下通用方法及程序使用市售或常规制备的起始物质及试剂来制备。除非另外指示，否则以下流程中所用的取代基及变量(例如R¹、R²等)具有与本文别处所规定的含义相同的含义。此外，除非另外指示，否则具有酸性或碱性原子或官能基的化合物可用作或制造成盐形式(在一些情况下，在特定反应中使用盐将需要在进行反应的前使用常规程序将盐转化为非盐形成，例如自由碱)。

尽管可在以下程序中展示或描述本发明的特定实施例，但本领域的技术人员将认识到本发明的其它实施例或方面还可使用所述程序或通过使用本领域的技术人员已知的其它方法、试剂及起始物质来制备。确切地说，应了解，本发明化合物可通过多种制程途径制备，其中反应物以不同次序组合以提供不同中间物烯途径，以制备最终产物。

制备本发明的最终化合物(其中变量X定义为-C(O)R²且R¹为C_1-3烷基)的通用方法如流程1中通常所说明利用关键中间物1及式2的胺，且确切地说，例如其中R²定义为

以专门例示式(II)的代表性酰胺最终产物。

流程1

为了制备式(II)的酰胺化合物，式1的羧酸与胺2根据典型酰胺键形成条件反应。通常，羧酸1与约1至约4当量的胺2在过量碱存在下接触。如下文实例中所示，酰胺键形成反应可利用偶合剂，诸如六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓(HATU)或本领域中已知的其它酰胺偶合剂。反应通常在室温下进行，持续约2至约24 小时，或直到反应基本上完成。

式1的羧酸可如流程2中所述制备

流程2

其中Pg¹表示羟基-保护基且Pg²、Pg³及Pg⁴表示不同氨基-保护基。如下文实例中所述，保护基的适用选择是苯甲基或甲基作为Pg¹、四氢吡喃基(THP)作为Pg²、叔丁氧羰基(Boc)或苯甲基作为Pg³，以及[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基(SEM)作为Pg⁴。流程 2的第一步骤是中间物3与中间物4的钯催化的史帝尔偶合(Stille coupling)，其中苯基- 吲唑中间物3具有三甲基锡烷基部分且反应搭配物4经碘取代。反应通常在高温下进行，例如在约80℃至约180℃之间进行约10至约24小时，或直到反应基本上完成。

当苯甲基用作Pg¹时，在下一步骤中，中间物5的甲酯通过5与苯甲醇的反应转化成中间物6中的苯甲酯。通过钯催化氢化方便地移除苯甲基保护基，以提供中间物7，其可通过与酸(通常为盐酸)反应而完全脱除保护基。在最终步骤中，通过用试剂R^1a对中间物8进行还原性烷基化来添加取代基R¹，其中R^1a为规定的醛或酮使得在还原时，产生R¹。举例来说，为了添加甲基取代基R¹，使用甲醛作为试剂R^1a，为了添加异丙基部分作为取代基R¹，使用丙酮作为试剂R^1a。反应通常在诸如氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠或其类似物的还原剂存在下，在环境温度下进行约10至约24小时或直到反应基本上完成的时间段。

中间物3及4可由市售或容易制备的如下文详细描述的起始物质制备。确切地说，制备中间物3(其中Pg¹是苯甲基且Pg²是THP)的方法使用化合物9与化合物10的铃木 -宫浦偶合(Suzuki-Miyaura coupling)，随后进行常规反应以添加三甲基锡烷基。

中间物4可由化合物11制备，其以外消旋及立体特异性形式市售且还可由组氨酸制备。

因此，在一个方法方面中，本发明提供一种制备式(II)化合物或其医药学上可接受的盐的方法，所述方法包括使式1化合物与式2化合物如流程1中所述反应，提供式(II)化合物或其医药学上可接受的盐。

在另一方法方面中，本发明提供一种制备式1化合物的方法，所述方法包括使式8的化合物与R^1a在还原剂存在下反应，其中R^1a为规定的醛或酮使得当取代基R¹还原性烷基化时，其中R¹为C_1-3烷基，连接至式8的化合物以提供式1化合物。

在一个额外方法方面中，本发明提供一种制备式8的化合物的方法，所述方法包括将式7的化合物脱除保护基。

在另一方面中，本发明提供一种式1化合物及式7及8化合物，其适用于制备式1 化合物。

医药组合物

本发明的化合物及其医药学上可接受的盐通常以医药组合物或调配物的形式使用。此类医药组合物可有利地通过吸入向患者投予。另外，可通过任何可接受的投予途径投予医药组合物，包含(但不限于)经口、经直肠、经鼻、局部(包含经皮)及非经肠投予模式。

因此，在其一个组合物方面，本发明是针对一种医药组合物，其包括药学上可接受的载剂或赋形剂和式(I)化合物，其中如上所定义“式(I)化合物”意指式(I)化合物或其医药学上可接受的盐。任选地，必要时此类医药组合物可含有其它治疗剂及/或调配剂。当论述组合物和其用途时，“本发明的化合物”在本文中还可称作“活性剂”。如本文所用，术语“本发明化合物”意在包含式(I)涵盖的所有化合物以及以式(II)及(III)具体化的物种及其医药学上可接受的盐。

本发明的医药组合物通常含有治疗有效量的本发明化合物。然而，本领域的技术人员将了解，医药组合物可含有超过治疗有效量，即主体组合物，或小于治疗有效量，即设计用于多次投予以实现治疗有效量的个别单位剂量。

通常，此类医药组合物将含有约0.01至约95重量％的活性剂；包含例如约0.05至约30重量％；及约0.1重量％至约10重量％的活性剂。

任何常规载剂或赋形剂可用于本发明的医药组合物中。选择特定载剂或赋形剂，或载剂或赋形剂的组合将视用于治疗特定患者或特定类型的医学病状或疾病病况的投予模式而定。就此来说，对于特定模式模式，适合医药组合物的制备很好地在医药领域的技术人员的范围内。另外，本发明的医药组合物中所使用的载剂或赋形剂市售可得。作为进一步说明，常规调配技术描述于Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第 20版,Lippincott Williams&White,Baltimore,Maryland(2000)；以及H.C.Ansel等人,医药剂型及药物递送系统(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems),第7版,Lippincott Williams&White,Baltimore,Maryland(1999)。

可充当医药学上可接受的载剂的材料的代表性实例包含(但不限于)以下：糖，诸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉及马铃薯淀粉；纤维素，诸如微晶纤维素，及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；粉末状黄蓍；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可脂及栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如丙三醇、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁及氢氧化铝；褐藻酸；无热原质水；等张生理食盐水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及用于医药组合物的其它无毒相容物质。

通常通过将活性剂与医药学上可接受的载剂及一或多种任选成分充分且紧密地混合或掺合来制备医药组合物。随后可使用常规程序及设备将所得均匀掺合的混合物成形为锭剂、胶囊、丸剂及其类似物或装载至其中。

在一个方面中，医药组合物适用于吸入投予。用于吸入投予的医药组合物通常呈气雾剂或散剂形式。此类组合物一般使用吸入剂递送装置投予，诸如干燥粉末吸入器(DPI)、定量吸入器(MDI)、喷雾器吸入器或类似递送装置。

在一特定实施例中，医药组合物通过吸入，使用干燥粉末吸入器投予。此类干燥粉末吸入器通常以在吸气期间分散于患者的气流中的自由流动粉末形式投予医药组合物。为了获得自由流动粉末组合物，治疗剂通常以诸如乳糖、淀粉、甘露糖醇、右旋糖、聚乳酸(PLA)、聚乳酸交酯-共-乙交酯(PLGA)或其组合的适合的赋形剂调配。通常，使治疗剂微粉化且与适合的载剂组合以形成适用于吸入的组合物。

适用于干燥粉末吸入器的代表性医药组合物包括呈微粉化形式的乳糖及本发明化合物。此类干燥粉末组合物可例如通过将干燥研磨乳糖与治疗剂组合，且随后干掺合组分制得。随后通常将组合物装载至干燥粉末施配器中或与干燥粉末递送装置一起使用的吸入套筒或胶囊中。

适用于通过吸入投予治疗剂的干燥粉末吸入器递送装置描述于本领域中且此类装置的实例为可商购的。举例来说，代表性干燥粉末吸入剂递送装置或产物包含Aeolizer(Novartis)；Airmax(IVAX)；ClickHaler(Innovata Biomed)；Diskhaler(GlaxoSmithKline)； Diskus/Accuhaler(GlaxoSmithKline)；Ellipta(GlaxoSmithKline)；Easyhaler(Orion Pharma)；Eclipse(Aventis)；FlowCaps(Hovione)；Handihaler(Boehringer Ingelheim)； Pulvinal(Chiesi)；Rotahaler(GlaxoSmithKline)；SkyeHaler/Certihaler(SkyePharma)； Twisthaler(Schering-Plough)；Turbuhaler(AstraZeneca)；Ultrahaler(Aventis)；及其类似物。

在另一特定实施例中，医药组合物通过吸入，使用定量吸入器投予。此类定量吸入器通常使用压缩推进剂气体，排出量测量的治疗剂。因此，使用定量吸入器投予的医药组合物通常包括治疗剂于液化推进剂中的溶液或悬浮液。可采用任何适合的液化推进剂，包含氢氟烷烃(HFA)，诸如1,1,1,2-四氟乙烷(HFA 134a)及1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷 (HFA227)；及氯氟碳化物，诸如CCl₃F。在一特定实施例中，推进剂为氢氟烷烃。在一些实施例中，氢氟烷烃调配物含有共溶剂，诸如乙醇或戊烷；及/或表面活性剂，诸如脱水山梨糖醇三油酸酯、油酸、卵磷脂及丙三醇。

适用于定量吸入器的代表性医药组合物包括约0.01重量％至约5重量％本发明化合物；约0重量％至约20重量％乙醇；及约0重量％至约5重量％表面活性剂；其中剩余部分为HFA推进剂。此类组合物通常通过向含有治疗剂、乙醇(若存在)及表面活性剂(若存在)的适合的容器中添加经冷却或经加压的氢氟烷烃来加以制备。为制备悬浮液，将治疗剂微米尺寸化，且随后与推进剂合并。随后将组合物装载至气雾剂罐中，其通常形成定量吸入器装置的一部分。

适用于通过吸入投予治疗剂的定量吸入器装置描述于本领域中且此类装置的实例为可商购的。举例来说，代表性定量吸入器装置或产物包含AeroBid吸入器系统(ForestPharmaceuticals)；Atrovent吸入气雾剂(Boehringer Ingelheim)；Flovent(GlaxoSmithKline)； Maxair吸入器(3M)；Proventil吸入器(Schering)；Serevent吸入气雾剂(GlaxoSmithKline)；及其类似物。

在另一特定方面中，医药组合物通过吸入，使用喷雾器吸入器投予。此类喷雾器装置通常产生使医药组合物喷雾成进入患者的呼吸道的雾状物的高速空气流。因此，当适用于喷雾器吸入器调配时，可使治疗剂溶解于适合的载剂中以形成溶液。或者，治疗剂可经微米尺寸化或奈米研磨且与适合的载剂组合以形成悬浮液。

适用于喷雾器吸入器的代表性医药组合物包括溶液或悬浮液，其包括约0.05μg/mL 至约20mg/mL本发明化合物及与雾化调配物相容的赋形剂。在一个实施例中，溶液具有约3至约8的pH。

适用于通过吸入投予治疗剂的喷雾器装置描述于本领域中且此类装置的实例为可商购的。举例来说，代表性喷雾器装置或产品包含Respimat Softmist吸入器(Boehringer Ingelheim)；AERx肺部递送系统(Aradigm Corp.))PARI LC Plus可再用喷雾器(Pari GmbH)；及其类似物。

在又一方面中，本发明的医药组合物可替代地以意在用于经口投予的剂量形式制备。用于经口投予的适合医药组合物可呈胶囊、锭剂、丸剂、口含锭、扁囊剂、糖衣药丸、散剂、颗粒形式；或呈于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液形式；或呈水包油或油包水液体乳液形式；或呈酏剂或糖浆形式；及其类似形式；各自含有预定量的本发明化合物作为活性成份。

当以固体剂量形式意在用于经口投予时，本发明的医药组合物将通常包括活性剂及一或多种医药学上可接受的载剂(诸如柠檬酸钠或磷酸二钙)。任选地或替代地，此类固体剂量形式还可包括：填充剂或增量剂、粘合剂、保湿剂、溶液阻滞剂、吸收加速剂、湿润剂、吸附剂、润滑剂、着色剂及缓冲剂。释放剂、湿润剂、包衣剂、甜味剂、调味剂及芳香剂、防腐剂及抗氧化剂还可存在于本发明的医药组合物中。

替代调配物还可包含控制释放调配物、用于经口投予的液体剂量形式、经皮贴片及非经肠调配物。制备此类替代调配物的常规赋形剂及方法描述于例如上文雷明顿的参考文献中。

以下非限制性实例说明了本发明的代表性医药组合物。

干燥粉末组合物

将微米尺寸化式(I)化合物(1g)与经研磨的乳糖(25g)掺和。随后将此经掺和混合物以每剂量足以提供约0.1mg至约4mg之间的式I化合物的量装载至可剥离泡壳封装的单独泡壳中。使用干燥粉末吸入器投予泡壳的内含物。

干燥粉末组合物

将微米尺寸化式(I)化合物(1g)与经研磨的乳糖(20g)掺和以形成化合物与经研磨乳糖的重量比为1:20的主体组合物。将经掺和组合物封装于每剂量能够递送约0.1mg至约4mg式I化合物的干燥粉末吸入装置中。

定量吸入器组合物

将微米尺寸化式(I)化合物(10g)分散于通过使卵磷脂(0.2g)溶解于去矿物质水(200 mL)中所制备的溶液中。喷雾干燥所得悬浮液，且随后经微米尺寸化以形成包括平均直径小于约1.5μm的粒子的微米尺寸化组合物。随后将微米尺寸化组合物装载至以当通过定量吸入器投予时每剂量足以提供约0.1mg至约4mg式I化合物的量含有加压1,1,1,2- 四氟乙烷的定量吸入器套筒中。

喷雾器组合物

使式(I)化合物(25mg)溶解于含有1.5-2.5当量盐酸的溶液中，随后添加氢氧化钠以将pH调整至3.5至5.5且添加3重量％的甘油。充分搅拌溶液直到所有组分都溶解为止。使用每剂量提供约0.1mg至约4mg式I化合物的喷雾器装置投予溶液。

效用

本发明的JAK抑制剂已经设计用于治疗呼吸道的发炎性及纤维化疾病。特定来说，化合物已经设计以使得能够将有效抗细胞介素试剂直接递送至肺脏中的呼吸疾病作用位点，同时限制全身性暴露量。

已展示本发明化合物为酶的JAK家族：JAK1、JAK2、JAK3及TYK2的强效抑制剂。另外，化合物已表明在细胞分析中未展现细胞毒性的情况下有效抑制促炎性及促纤维化细胞介素。已认识到，JAK抑制剂的较宽消炎剂作用可抑制正常免疫细胞功能，潜在地导致感染风险提高。本发明化合物因此优化以限制从肺脏至血浆中的吸收，因此使免疫抑制风险减至最小。

如以下实验部分中所描述，典型化合物的吸收及分布已在临床前分析中描绘。在小鼠中测试的所选化合物同时展示肺脏组织中的高浓度及血浆中的低吸收。小鼠中测试的化合物展现比血浆中的暴露量大一至两个数量级的肺脏中的暴露量。化合物还展现小鼠肺脏中的显著滞留，如大于约5小时的肺脏半衰期所证明。重要的是，小鼠肺脏中的测试化合物的浓度已展示与JAK酶抑制的所预测的药效动力学作用相关。本发明化合物已展示抑制小鼠肺脏组织中的促炎性细胞介素IL-13的作用。具体来说，化合物已表明肺脏组织中IL-13-诱导的STAT6磷酸化的剂量及浓度依赖性抑制，其提供活体内局部肺脏 JAK靶向参与的证据。当在投予测试化合物之后4小时投予促炎性细胞介素IL-13时观测到此作用，提供肺脏中的显著滞留的其它证据。

所测试的化合物已表明，在肺脏组织中的细胞水准及显著滞留方面，展现两个有效抑制活性。本发明者广泛研究测定，尽管有可能鉴别在细胞水准下有效的化合物或展示肺脏中的显著滞留的化合物，发现同时展现两个所需特征的化合物更加困难。

JAK抑制剂的消炎活性已在哮喘的临床前模型中稳固地证明(Malaviya等人,IntImmunopharmacol,2010,10,829,-836；Matsunaga等人,Biochem and Biophys ResCommun, 2011,404,261-267；Kudlacz等人,Eur J Pharmacol,2008,582,154-161.)。因此，本发明化合物预期适用于治疗发炎性呼吸道病症，确切地说哮喘。肺部发炎及纤维化的特征在于除了慢性阻塞性肺病(COPD)、囊肿性纤维化(CF)、肺炎、间质性肺病(包含特发性肺纤维化)、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合症、支气管炎、肺气肿、阻塞性细支气管炎及类肉瘤病的外的其它呼吸道疾病。因此，本发明化合物还预期适用于治疗慢性阻塞性肺病、囊肿性纤维化、肺炎、间质性肺病(包含特发性肺纤维化)、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合症、支气管炎、肺气肿及阻塞性细支气管炎，及类肉瘤病。

本发明的化合物已证实抑制人类T细胞活化，抑制与发炎有关的细胞介素，以及对人类嗜酸性粒细胞及啮齿动物肺部嗜酸性粒细胞增多症模型的活性。因此，本发明化合物可能适用于治疗特定特异性呼吸道疾病。

嗜酸性粒细胞呼吸道发炎统称为嗜酸性粒细胞肺病的典型特征(Cottin等人,Clin. Chest.Med.,2016,37(3),535-56)。嗜酸性粒细胞疾病已与IL-4、IL-13及IL-5信号传导有关。嗜酸性粒细胞性肺病包含感染(尤其蠕虫感染)、药物诱发性肺炎(例如由抗生素、苯妥英或L-色氨酸等治疗药物引起)、真菌诱发的肺炎(例如过敏性支气管肺曲霉病)、过敏性肺炎及伴随多血管炎的嗜酸性粒细胞肉芽肿(先前称为彻奇-斯全司综合症(Churg-Strauss syndrome))。未知病源学的嗜酸性粒细胞性肺病包含特发性急性嗜酸性粒细胞肺炎、特发性慢性嗜酸性粒细胞肺炎、嗜酸性粒细胞增多综合症及洛弗勒综合症 (

syndrome)。已显示本发明的化合物显著降低啮齿动物呼吸道模型中的肺嗜酸性粒细胞增多症，且在细胞分析中有效抑制IL-13、IL-4及IL-2信号传导。另外，实例2 的化合物已证实有效抑制IL-5介导的人类嗜酸性粒细胞存活率。

IL-6基因中的多态现象与IL-6含量升高及发生肺动脉高血压(PAH)的风险增加有关 (Fang等人,J Am Soc Hypertens.,2017,11(3),171-177)。确证IL-6于PAH中的作用，IL-6 受体链gp130的抑制改善PAH大鼠模型中的疾病(Huang等人,Can J Cardiol.,2016,32(11),1356.e1-1356.e10)。实例2的化合物已显示抑制IL-6信号传导。

诸如IFNγ、IL-12及IL-6的细胞介素已涉及于一定范围的非过敏性肺病，诸如类肉瘤病及肺淋巴管平滑肌增生症中(El-Hashemite等人,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.,2005, 33,227-230，及El-Hashemite等人,Cancer Res.,2004,64,3436-3443)。实例2的化合物还已显示抑制IL-6及IFNγ信号传导。

支气管扩张及浸润性肺病为与慢性嗜中性白血球发炎有关的疾病。实例2的化合物已显示抑制与嗜中性白血球发炎有关的细胞介素(例如IL-6、IFNγ)。

病理性T细胞活化对于多种呼吸道疾病的病因至关重要。自身反应性T细胞在阻塞性细支气管炎伴机化性肺炎(还称为COS)中起作用。与COS类似，肺移植排斥反应的病因与移植供体肺的受体T细胞的异常T细胞活化有关。肺移植排斥反应可以早期以原发性移植物功能障碍(PGD)、机化性肺炎(OP)、急性排斥反应(AR)或淋巴细胞性细支气管炎(LB)形式发生，或其可在肺移植后数年以慢性肺同种异体移植物功能障碍(CLAD)形式发生。CLAD先前称为阻塞性细支气管炎(BO)，但现在被认为是可以具有不同病理学表现的综合症，包含BO、限制性CLAD(rCLAD或RAS)以及嗜中性同种异体移植物功能障碍。慢性肺同种异体移植物功能障碍(CLAD)是肺移植受体长期管理中的主要挑战，因为其导致移植肺逐渐失去功能(Gauthier等人,Curr Transplant Rep.,2016,3(3),185-191)。 CLAD对治疗的反应差，且因此，仍需要能够预防或治疗此病症的有效化合物。诸如IFNγ及IL-5的若干JAK依赖性细胞介素在CLAD及肺移植排斥反应中上调(Berastegui等人, Clin Transplant.2017,31,e12898)。此外，诸如CXCL9及CXCL10的在JAK依赖性IFN 信号传导下游的CXCR3趋化因子的高肺含量与肺移植患者的恶化结果有关(Shino等人, PLOS One,2017,12(7),e0180281)。全身性JAK抑制已展示在肾脏移植排斥反应中有效 (Vicenti等人,American Journal ofTransplantation,2012,12,2446-56)。因此，JAK抑制剂有可能有效治疗或预防肺移植排斥反应及CLAD。描述为肺移植排斥反应的基础的类似 T细胞活化事件还视为造血干细胞移植后可能发生的肺移植物抗宿主病(GVHD)的主要驱动因素。与CLAD类似，肺GVHD是一种慢性进行性疾病，其结果极差且目前尚未有批准的治疗。95例接受全身性JAK抑制剂卢佐替尼(ruxolitinib)作为补救治疗的类固醇难治愈的急性或慢性GVHD的回溯性多中心调查研究表明，在大多数患者(包含患有肺GVHD的患者)中对卢佐替尼完全或部分反应(Zeiser等人,Leukemia,2015,29,10, 2062-68)。由于全身性JAK抑制与严重不良事件及小治疗指数相关，因此需要吸入肺部定向的非全身性JAK抑制剂以预防及/或治疗肺移植排斥反应或肺GVHD。本发明的化合物具有满足此需要所需的特征。近年来，免疫检查点抑制剂诱发的肺炎是随着免疫检查点抑制剂的使用增加而出现的另一种T细胞介导的肺病。在用这些T细胞刺激剂处理的癌症患者中，可能产生致死性肺炎。已显示实例2的化合物抑制自活化的人类外周血分离的T细胞中抗CD3及IL-2诱发的IFNγ释放及呼吸道上皮细胞中的CXCL9及 CXCL10产生，且因此可能为这些未得到充分服务的严重呼吸道疾病提供新的治疗方法。

因此，在一个方面中，本发明提供一种治疗哺乳动物(例如人类)的呼吸道疾病的方法，所述方法包括向哺乳动物投予治疗有效量的本发明化合物或包括医药学上可接受的载剂及本发明化合物的医药组合物。

在一个方面中，呼吸道疾病为哮喘、慢性阻塞性肺病、囊肿性纤维化、肺炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、囊肿性纤维化(CF)、肺炎、间质性肺病(包含特发性肺纤维化)、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合症、支气管炎、肺气肿、阻塞性细支气管炎或类肉瘤病。在另一方面中，呼吸疾病为哮喘或慢性阻塞性肺病。

在一个方面中，呼吸道疾病是肺部感染、嗜酸性粒细胞疾病、蠕虫感染、肺动脉高血压、类肉瘤病、肺淋巴管平滑肌增生症、支气管扩张、浸润性肺病、药物诱发性肺炎、真菌诱发的肺炎、过敏性支气管肺曲霉病、过敏性肺炎、伴随多血管炎的嗜酸性粒细胞肉芽肿、特发性急性嗜酸性粒细胞肺炎、特发性慢性嗜酸性粒细胞肺炎、嗜酸性粒细胞增多综合症、洛弗勒综合症、阻塞性细支气管炎伴有机化肺炎、急性及慢性肺移植排斥反应(包含PGD、OP、LB、AR以及CLAD、BO、限制性CLAD及嗜中性同种异体移植功能障碍)、肺移植物抗宿主病阻塞性细支气管炎伴机化性肺炎、肺动脉高血压、支气管扩张或免疫检查点-抑制剂诱发的肺炎。

本发明进一步提供一种治疗哺乳动物的哮喘的方法，所述方法包括向哺乳动物投予治疗有效量的本发明化合物或包括医药学上可接受的载剂及本发明化合物的医药组合物。

当用于治疗哮喘时，本发明化合物通常将以单次日剂量或每天多个剂量形式投予，但可使用其它投予形式。每剂量投予的活性剂的量或每天投予的总量通常将由医师根据以下确定：相关环境，包含待治疗的病况、选择的投予途径、投予的实际化合物及其相对活性、个别患者的年龄、体重及反应，患者症状的严重程度及其类似物。

本发明进一步提供一种治疗哺乳动物的呼吸道疾病(包含(但不限于)本文所述的疾病)的方法，所述方法包括向哺乳动物投予治疗有效量的本发明化合物或包括医药学上可接受的载剂及本发明化合物的医药组合物。

当用于治疗呼吸道疾病(包含(但不限于)本文所述的疾病)时，尽管可使用其它形式的投予，但本发明的化合物通常将以单次每日剂量或每天多个剂量投予。每剂量投予的活性剂的量或每天投予的总量通常将由医师根据以下确定：相关环境，包含待治疗的病况、选择的投予途径、投予的实际化合物及其相对活性、个别患者的年龄、体重及反应，患者症状的严重程度及其类似物。

作为JAK抑制剂，本发明化合物还可适用于多种其它疾病。本发明化合物可适用于多种胃肠发炎适应症，包含(但不限于)发炎性肠病、溃疡性结肠炎(直肠乙状结肠炎、全结肠炎、溃疡性直肠炎及左半结肠炎)、克罗恩氏病(Crohn's disease)、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、白塞氏病(Behcet's disease)、乳糜泻、免疫检查点抑制剂诱发的结肠炎、回肠炎、嗜酸性粒细胞食道炎、移植物抗宿主疾病相关的结肠炎及感染性结肠炎。溃疡性结肠炎(Reimund等人,J Clin Immunology,1996,16,144-150)、克罗恩氏病(Woywodt等人,Eur J Gastroenterology Hepatology,1999,11,267-276)、胶原性结肠炎(Kumawat等人,Mol Immunology,2013,55,355-364)、淋巴细胞性结肠炎(Kumawat等人,2013)、嗜酸性粒细胞食道炎(Weinbrand-Goichberg等人,Immunol Res,2013,56,249-260)、移植物抗宿主疾病相关的结肠炎(Coghill等人,Blood,2001,117,3268-3276)、感染性结肠炎 (Stallmach等人,Int J Colorectal Dis,2004,19,308-315)、白塞氏病(Zhou等人,Autoimmun Rev,2012,11,699-704)、乳糜泻(de Nitto等人,World J Gastroenterol,2009,15, 4609-4614)、免疫检查点抑制剂诱发的结肠炎(例如CTLA-4抑制剂诱发的结肠炎；(Yano 等人,JTranslation Med,2014,12,191)、PD-1-或PD-L1-抑制剂诱发的结肠炎)，以及回肠炎(Yamamoto等人,Dig Liver Dis,2008,40,253-259)特征为特定促炎性细胞介素含量升高。由于许多促炎性细胞介素经由JAK活化来传导信号，所以本申请案中所描述的化合物能够减轻发炎且提供征状缓解。确切地说，本发明化合物适用于诱发且维持溃疡性结肠炎的缓解，且用于治疗克罗恩氏病、免疫检查点抑制剂诱发的结肠炎及移植物抗宿主疾病中的胃肠不良效应。因此，在一个方面中，本发明提供一种治疗哺乳动物(例如人类)的胃肠发炎性疾病的方法，所述方法包括向哺乳动物投予本发明化合物或其医药学上可接受的盐或包括医药学上可接受的载剂及本发明化合物或其医药学上可接受的盐的医药组合物。

异位性皮炎及其它发炎性皮肤病与依赖于JAK-STAT路径的促炎性细胞介素的升高有关。因此，本发明化合物或其医药学上可接受的盐可能有益于许多皮肤炎或瘙痒病况，其包含(但不限于)异位性皮炎、斑秃、白癜风、牛皮癣、皮肌炎、皮肤T细胞淋巴瘤(Netchiporouk等人,Cell Cycle.2014；13,3331-3335)及亚型(塞扎莱综合症(Sezarysyndrome)、蕈样霉菌病、佩吉特样网状细胞增多症(pagetoid reticulosis)、肉芽肿性松弛皮肤、淋巴瘤样丘疹病、慢性苔藓样糠疹、急性痘疮样苔癣样糠疹、CD30+皮肤T细胞淋巴瘤、继发性皮肤CD30+大细胞淋巴瘤、非蕈样霉菌病CD30-皮肤大T细胞淋巴瘤、多形性T细胞淋巴瘤、林内特淋巴瘤(Lennert lymphoma)、皮下T细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤)、结节性痒疹、扁平苔藓、原发性局部皮肤淀粉样变性、大疱性类天疱疮、移植物抗宿主病的皮肤表现、类天疱疮、盘状狼疮、环状肉芽肿、慢性单纯性苔癣、外阴/阴囊/肛周瘙痒症、硬化性苔癣、带状疱疹后神经痛痒、扁平苔藓及脱发性毛囊炎。确切地说，异位性皮炎(Bao等人,JAK-STAT,2013,2,e24137)、斑秃(Xing等人,Nat Med.2014,20,1043-1049)、白癜风(Craiglow等人,JAMA Dermatol. 2015,151,1110-1112)、结节性痒疹(Sonkoly等人,J Allergy Clin Immunol.2006,117, 411-417)、扁平苔癣(Welz-Kubiak等人,J Immunol Res.2015,ID:854747)、原发性局部皮肤淀粉样变性(Tanaka等人,Br JDermatol.2009,161,1217-1224)、大疱性类天疱疮 (Feliciani等人,Int J ImmunopatholPharmacol.1999,12,55-61)以及移植物抗宿主疾病的皮肤表现(Okiyama等人,J InvestDermatol.2014,134,992-1000)的特征在于经JAK活化信号传导的特定细胞介素升高。因此，本发明化合物或其医药学上可接受的盐可能能够减轻由这些细胞介素驱动的相关皮肤炎或瘙痒症。确切地说，本发明化合物或其医药学上可接受的盐可预期适用于治疗异位性皮炎及其它发炎性皮肤病。因此，在一个方面中，本发明提供一种治疗哺乳动物(例如人类)的发炎性皮肤病的方法，所述方法包括向哺乳动物的皮肤施加包括本发明化合物或其医药学上可接受的盐及医药载剂的医药组合物。在一个方面中，发炎性皮肤病为异位性皮炎。

许多眼部疾病已显示与依赖于JAK-STAT路径的促炎性细胞介素升高有关。因此，本发明化合物或其医药学上可接受的盐可适用于治疗许多眼部疾病，包含(但不限于)葡萄膜炎、糖尿病性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、干眼病、年龄相关性黄斑变性以及异位性角膜结膜炎。确切地说，葡萄膜炎(Horai及Caspi,J Interferon Cytokine Res,2011, 31,733-744)、糖尿病性视网膜病变(Abcouwer,J Clin Cell Immunol,2013,增刊1,1-12)，糖尿病性黄斑水肿(Sohn等人,American Journal of Opthamology,2011,152,686-694)、干眼病(Stevenson等人,Arch Ophthalmol,2012,130,90-100)以及年龄相关性黄斑变性(Knickelbein等人,Int Ophthalmol Clin,2015,55(3),63-78)的特征在于经JAK-STAT路径信号传导的特定促炎性细胞介素升高。因此，本发明化合物或其医药学上可接受的盐可能能够减轻相关眼部发炎且逆转疾病进展或提供症状缓解。因此，在一个方面中，本发明提供一种治疗哺乳动物的眼部疾病的方法，所述方法包括向哺乳动物的眼部投予包括本发明化合物或其医药学上可接受的盐及医药载剂的医药组合物。在一个方面中，眼部疾病是葡萄膜炎、糖尿病性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、干眼病、年龄相关的黄斑变性或异位性角膜结膜炎。在一个方面中，所述方法包括通过玻璃体内注射投予本发明化合物或其医药学上可接受的盐。本发明化合物或其医药学上可接受的盐还可与一或多种适用于眼部疾病的化合物组合使用。

本发明化合物或其医药学上可接受的盐还可适用于治疗其它疾病，诸如其它发炎疾病、自体免疫疾病或癌症。本发明化合物或其医药学上可接受的盐可用于治疗以下中的一或多者：关节炎、类风湿性关节炎、青少年类风湿性关节炎、移植排斥反应、干眼症、牛皮癣性关节炎、糖尿病、胰岛素依赖性糖尿病、运动神经元疾病、骨髓发育不良综合症、疼痛、肌肉减少症、恶病质、败血性休克、全身性红斑性狼疮症、白血病、慢性淋巴细胞性白血病，慢性骨髓细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病、僵直性脊椎炎、骨髓纤维化、B细胞淋巴瘤、肝细胞癌、霍奇金氏病、乳癌、多发性骨髓瘤、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、非小细胞肺癌、卵巢透明细胞癌、卵巢肿瘤、胰脏肿瘤、真性红血球增多症、休格连综合症(Sjoegrens syndrome)、软组织肉瘤、肉瘤、脾肿大、T细胞淋巴瘤以及重型地中海贫血。

组合疗法

本发明化合物或其医药学上可接受的盐可与通过相同机制或不同机制作用来治疗疾病的一或多种试剂组合使用。不同试剂可在分开的组合物或同一组合物中依序或同时投予。用于组合疗法的有用类别的试剂包含(但不限于)β2肾上腺素受体促效剂、蕈毒碱受体拮抗剂、糖皮质激素促效剂、G蛋白偶合受体-44拮抗剂、白三烯D4拮抗剂、蕈毒碱M3受体拮抗剂、组织胺H1受体拮抗剂、免疫球蛋白E拮抗剂、PDE 4抑制剂、IL-4 拮抗剂、蕈毒碱M1受体拮抗剂、组织胺受体拮抗剂、IL-13拮抗剂、IL-5拮抗剂、5- 脂肪加氧酶抑制剂、β肾上腺素受体促效剂、CCR3趋化因子拮抗剂、CFTR刺激剂、免疫球蛋白调节剂、介白素33配位体抑制剂、PDE 3抑制剂、磷酸肌醇-3激酶δ抑制剂、凝血脂素A2拮抗剂、弹性蛋白酶抑制剂、Kit酪氨酸激酶抑制剂、白三烯E4拮抗剂、白三烯拮抗剂、PGD2拮抗剂、TNFα配位体抑制剂、TNF结合剂、互补序列级联抑制剂、伊红趋素配位体抑制剂、谷胱甘肽还原酶抑制剂、组织胺H4受体拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL2基因刺激剂、免疫球蛋白γFc受体IIB调节剂、干扰素γ配位体、介白素13 配位体抑制剂、介白素17配位体抑制剂、L-选择素拮抗剂、白血球弹性蛋白酶抑制剂、白三烯C4拮抗剂、白三烯C4合成酶抑制剂、膜铜胺氧化酶抑制剂、金属蛋白酶-12抑制剂、金属蛋白酶-9抑制剂、螨过敏原调节剂、蕈毒碱受体调节剂、烟碱乙酰胆碱受体促效剂、核因子κB抑制剂、p-选择素拮抗剂、PDE 5抑制剂、PDGF受体拮抗剂、磷酸肌醇-3激酶γ抑制剂、TLR-7促效剂、TNF拮抗剂、Abl酪氨酸激酶抑制剂、乙酰胆碱受体拮抗剂、酸性哺乳动物壳质酶抑制剂、ACTH受体促效剂、肌动蛋白聚合调节剂、腺苷A1受体拮抗剂、腺苷酸环化酶刺激剂、肾上腺素受体拮抗剂、促肾上腺皮质激素配位体、醇脱氢酶5抑制剂、α1抗胰蛋白酶刺激剂、α1蛋白酶抑制剂、雄激素受体调节剂、血管收缩素转化酶2刺激剂、ANP促效剂、Bcr蛋白质抑制剂、β1肾上腺素受体拮抗剂、β2肾上腺素受体拮抗剂、β2肾上腺素受体调节剂、β淀粉样蛋白调节剂、BMP10 基因抑制剂、BMP15基因抑制剂、钙通道抑制剂、组织蛋白酶G抑制剂、CCL26基因抑制剂、CCR3趋化因子调节剂、CCR4趋化因子拮抗剂、细胞粘附分子抑制剂、伴侣蛋白刺激剂、壳质酶抑制剂、胶原蛋白I拮抗剂、互补序列C3抑制剂、CSF-1拮抗剂、 CXCR2趋化因子拮抗剂、细胞介素受体普通β链调节剂、细胞毒性T淋巴细胞蛋白质 -4刺激剂、去氧核糖核酸酶I刺激剂、去氧核糖核酸酶刺激剂、二肽基肽酶I抑制剂、 DNA旋转酶抑制剂、DP前列腺素受体调节剂、E-选择素拮抗剂、EGFR家族酪氨酸激酶受体抑制剂、弹性蛋白调节剂、内皮素ET-A拮抗剂、内皮素ET-B拮抗剂、环氧化物水解酶抑制剂、FGF3受体拮抗剂、Fyn酪氨酸激酶抑制剂、GATA 3转录因子抑制剂、葡糖神经酰胺酶调节剂、麸氨酸受体调节剂、GM-CSF配位体抑制剂、鸟苷酸环化酶刺激剂、H+K+ATP酶抑制剂、血红蛋白调节剂、肝素促效剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶-2刺激剂、HMG CoA还原酶抑制剂、I-κB激酶β抑制剂、ICAM1基因抑制剂、IL-17拮抗剂、IL-17受体调节剂、IL-23拮抗剂、IL-4受体调节剂、免疫球蛋白G调节剂、免疫球蛋白G1促效剂、免疫球蛋白G1调节剂、免疫球蛋白εFc受体 1A拮抗剂、免疫球蛋白γFc受体IIB拮抗剂、免疫球蛋白κ调节剂、胰岛素敏化剂、干扰素β配位体、白介素1样受体拮抗剂、介白素18配位体抑制剂、介白素受体17A 拮抗剂、介白素-1β配位体抑制剂、介白素-5配位体抑制剂、介白素-6配位体抑制剂、 KCNA电位闸控钾通道-3抑制剂、Kit配位体抑制剂、层黏连蛋白-5促效剂、白三烯 CysLT1受体拮抗剂、白三烯CysLT2受体拮抗剂、LOXL2基因抑制剂、Lyn酪氨酸激酶抑制剂、MARCKS蛋白质抑制剂、MDR相关蛋白质4抑制剂、金属蛋白酶-2调节剂、金属蛋白酶-9调节剂、盐皮质激素受体拮抗剂、蕈毒碱M2受体拮抗剂、蕈毒碱M4受体拮抗剂、蕈毒碱M5受体拮抗剂、利尿钠肽受体A促效剂、天然杀手细胞受体调节剂、烟碱ACh受体α7子单元刺激剂、NK细胞受体调节剂、核因子κB调节剂、类鸦片生长因子受体促效剂、P-醣蛋白抑制剂、P2X3嘌呤受体拮抗剂、p38MAP激酶抑制剂、肽酶1调节剂、磷脂酶A2抑制剂、磷脂酶C抑制剂、纤维蛋白溶酶原活化因子抑制剂1 抑制剂、血小板活化因子受体拮抗剂、PPARγ促效剂、前列环素促效剂、蛋白质酪氨酸激酶抑制剂、SH2结构域肌醇磷酸酶1刺激剂、信号转导抑制剂、钠通道抑制剂、STAT-3调节剂、干细胞抗原-1抑制剂、超氧化物歧化酶调节剂、T细胞表面醣蛋白CD28抑制剂、T细胞表面醣蛋白CD8抑制剂、TGFβ促效剂、TGFβ拮抗剂、凝血脂素合成酶抑制剂、胸腺基质淋巴蛋白配位体抑制剂、胸腺素促效剂、胸腺素β4配位体、TLR-8促效剂、TLR-9促效剂、TLR9基因刺激剂、拓朴异构酶IV抑制剂、肌钙蛋白I快速骨胳肌刺激剂、肌钙蛋白T快速骨胳肌刺激剂、I型IL-1受体拮抗剂、II型TNF受体调节剂、离子通道调节剂、子宫珠蛋白刺激剂以及VIP促效剂。

可与本发明JAK抑制剂化合物组合使用的特定试剂包含(但不限于)乙酸玫瑰酯、芜地溴铵、苏金单抗(secukinumab)、乙酸米特法林、十三酸乙酸酯、丙酸氟替卡松、α-环糊精稳定化萝卜硫素、特齐普单抗(tezepelumab)、糠酸莫米松、BI-1467335、杜普鲁单抗(dupilumab)、阿地铵(aclidinium)、福莫特罗、AZD-1419、HI-1640V、瑞维潘瑟(rivipansel)、CMP-001、甘露糖醇、ANB-020、奥马珠单抗(omalizumab)、曲加力单抗(tregalizumab)、Mitizax、苯纳珠单抗(benralizumab)、戈利木单抗(golimumab)、罗氟司特(roflumilast)、伊马替尼(imatinib)、REGN-3500、马赛替尼(masitinib)、阿普司特(apremilast)、RPL-554、阿克姆(Actimmune)、阿达木单抗(adalimumab)、卢帕他定(rupatadine)、帕罗格列(parogrelil)、MK-1029、二丙酸倍氯米松(beclometasonedipropionate)、反丁烯二酸福莫特罗、莫格利珠单抗(mogamulizumab)、塞曲司特(seratrodast)、UCB-4144、内米拉里布(nemiralisib)、CK-2127107、非维兰特(fevipiprant)、达尼日辛(danirixin)、波生坦(bosentan)、阿巴西普(abatacept)、EC-18、杜维力丝(duvelisib)、多西帕斯特(dociparstat)、环丙沙星、沙丁胺醇HFA、厄多司坦(erdosteine)、PrEP-001、奈多罗米、CDX-0158、沙丁胺醇、恩博沙(enobosarm)、R-TPR-022、朗齐鲁单抗 (lenzilumab)、糠酸氟替卡松、三氟甲磺酸威兰特罗、丙酸氟替卡松、沙美特罗、PT-007、 PRS-060、瑞梅斯特西-L(remestemcel-L)、瓜氨酸、RPC-4046、一氧化氮、DS-102、吉列姆单抗(gerilimzumab)、Actair、糠酸氟替卡松、芜地溴铵(umeclidinium)、威兰特罗 (vilanterol)、AG-NPP709、Gamunex、英利昔单抗(infliximab)、Ampion、阿修匹莫德(acumapimod)、康纳单抗(canakinumab)、INS-1007、CYP-001、思鲁库单抗(sirukumab)、丙酸氟替卡松、美泊利单抗(mepolizumab)、匹伐他汀(pitavastatin)、索利霉素(solithromycin)、依那西普(etanercept)、艾维卡福(ivacaftor)、阿那白滞素(anakinra)、 MPC-300-IV、格隆溴铵(glycopyrronium bromide)、阿地溴铵(aclidiniumbromide)、FP-025、里森基单抗(risankizumab)、格隆铵(glycopyrronium)、反丁烯二酸福莫特罗、Adipocell、 YPL-001、噻托溴铵、格隆溴铵、顺丁烯二酸茚达特罗、安德卡利单抗(andecaliximab)、奥达特罗(olodaterol)、埃索美拉唑(esomeprazole)、尘螨疫苗、艾蒿花粉过敏原疫苗、瓦莫隆(vamorolone)、吉发匹克(gefapixant)、来福那辛(revefenacin)、吉非替尼(gefitinib)、 ReJoin、泰鲁斯特(tipelukast)、贝多拉君(bedoradrine)、SCM-CGH、SHP-652、RNS-60、布罗达单抗(brodalumab)、BIO-11006、芜地溴铵、三氟甲磺酸威兰特罗(vilanterol trifenatate)、异丙托溴铵、塔罗金单抗(tralokinumab)、PUR-1800、VX-561、VX-371、奥洛他定(olopatadine)、妥布特罗(tulobuterol)、反丁烯二酸福莫特罗(formoterol fumarate)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、瑞利珠单抗(reslizumab)、羟萘甲酸沙美特罗、丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、二丙酸倍氯米松(beclometasone dipropionate)、反丁烯二酸福莫特罗(formoterol fumarate)、噻托溴铵(tiotropium bromide)、利格列珠单抗 (ligelizumab)、RUTI、柏替木单抗(bertilimumab)、奥马珠单抗(omalizumab)、格隆溴铵、 SENS-111、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、CHF-5992、LT-4001、茚达特罗、格隆溴铵、糠酸莫米松、菲索芬那定(fexofenadine)、格隆溴铵、阿奇霉素 (azithromycin)、AZD-7594、福莫特罗、CHF-6001、贝特芬特罗(batefenterol)、OATD-01、奥达特罗(olodaterol)、CJM-112、罗格列酮(rosiglitazone)、沙美特罗(salmeterol)、塞替匹兰特(setipiprant)、吸入干扰素β、AZD-8871、普卡那肽(plecanatide)、氟替卡松(fluticasone)、沙美特罗(salmeterol)、二十碳五烯酸单甘油酯、雷布瑞奇单抗(lebrikizumab)、RG-6149、 QBKPN、糠酸莫米松、茚达特罗、AZD-9898、丙酮酸钠、齐留通(zileuton)、CG-201、咪达那新(imidafenacin)、CNTO-6785、CLBS-03、莫米松(mometasone)、RGN-137、丙卡特罗(procaterol)、福莫特罗(formoterol)、CCI-15106、POL-6014、茚达特罗、倍氯米松、MV-130、GC-1112、Allergovac储槽、MEDI-3506、QBW-251、ZPL-389、乌地那非 (udenafil)、GSK-3772847、左旋西替利嗪(levocetirizine)、AXP-1275、ADC-3680、替马匹兰特(timapiprant)、阿贝迪特罗(abediterol)、AZD-7594、异丙托溴铵、硫酸沙丁胺醇、塔德基宁α(tadekinig alfa)、ACT-774312、链道酶α、伊洛前列素(iloprost)、巴特芬特罗 (batefenterol)、糠酸氟替卡松、阿利卡弗森(alicaforsen)、环索奈德(ciclesonide)、艾美酰胺(emeramide)、阿福莫特罗(arformoterol)、SB-010、Ozagrel、BTT-1023、德科特单抗 (Dectrekumab)、左旋沙丁胺醇(levalbuterol)、普鲁司特(pranlukast)、玻尿酸、GSK-2292767、福莫特罗(Formoterol)、NOV-14、鲁西坎特(Lucinactant)沙丁胺醇、泼尼龙、依巴司汀 (ebastine)、地塞米松培酯(dexamethasone cipecilate)、GSK-2586881、BI-443651、 GSK-2256294、VR-179、VR-096、hdm-ASIT+、布地奈德、GSK-2245035、VTX-1463、依美斯汀(Emedastine)、右旋普拉克索(dexpramipexole)、左旋沙丁胺醇、N-6022、地塞米松磷酸钠、PIN-201104、OPK-0018、TEV-48107、苏法塔斯特(suplatast)、BI-1060469、吉米卢卡斯特(Gemilukast)、干扰素γ、达拉扎肽(dalazatide)、吡拉斯汀(bilastine)、丙酸氟替卡松、沙美特罗昔萘酸酯、RP-3128、苯环喹溴铵、瑞利珠单抗(reslizumab)、PBF-680、 CRTH2拮抗剂、普鲁司特(Pranlukast)、羟萘甲酸沙美特罗、丙酸氟替卡松、单水合噻托溴铵、马斯鲁卡司特(masilukast)、RG-7990、多索茶碱、阿贝迪特罗(abediterol)、格隆溴铵、TEV-46017、ASM-024、丙酸氟替卡松、格隆溴铵、羟萘甲酸沙美特罗、沙丁胺醇、TA-270、氟尼缩松、色甘酸钠(sodiumchromoglycate)、Epsi-gam、ZPL-521、沙丁胺醇、阿肽地尔(aviptadil)、TRN-157、扎鲁司特(Zafirlukast)、司特佩西(Stempeucel)、哌罗来斯钠(pemirolast sodium)、纳多洛尔(nadolol)、丙酸氟替卡松+羟萘甲酸沙美特罗、 RV-1729、硫酸沙丁胺醇、二氧化碳+全氟碘代辛烷、APL-1、迪克特单抗(dectrekumab)+ VAK-694、乙酰基水杨酸赖氨酸、齐留通(zileuton)、TR-4、来源于人类同种异体脂肪组织的间充质祖细胞治疗、MEDI-9314、PL-3994、HMP-301、TD-5471、NKTT-120、哌罗来斯(pemirolast)、二丙酸倍氯米松、川丁特罗(trantinterol)、α流明诺单钠、IMD-1041、 AM-211、TBS-5、ARRY-502、塞曲司特(seratrodast)、重组迷笛萨酶(recombinant midismase)、ASM-8、地夫可特(deflazacort)、班布特罗(bambuterol)、RBx-10017609、异丙托铵+非诺特罗、氟替卡松+福莫特罗、依匹斯汀、WIN-901X、VALERGEN-DS、 OligoG-COPD-5/20、妥布特罗、奥克斯都保(oxis Turbuhaler)、DSP-3025、ASM-024、咪唑司汀、布地奈德+沙美特罗、LH-011、AXP-E、组织胺人类免疫球蛋白、YHD-001、茶碱、胺溴素+厄多司坦、雷马曲班、孟鲁司特、普鲁司特、AG-1321001、妥布特罗、异丙托铵+沙丁胺醇、曲尼司特、磺庚甲泼尼龙、考福辛达罗帕特(colforsin daropate)、瑞吡司特以及多索茶碱。

本文还提供医药组合物，其包括本发明化合物或其医药学上可接受的盐及一或多种其它治疗剂。治疗剂可选自上文规定的试剂类别及上文所述的特定试剂的清单。在一些实施例中，医药组合物适于传递至肺。在一些实施例中，医药组合物适于吸入或喷雾投予。在一些实施例中，医药组合物为干燥粉末或液体组合物。

另外，在一个方法方面中，本发明提供一种治疗哺乳动物的疾病或病症的方法，包括向哺乳动物投予本发明化合物或其医药学上可接受的盐以及一或多种其它治疗剂。

当用于组合疗法中时，药剂可调配成单一医药组合物，或药剂可提供在相应组合物中，这些相应组合物同时或在不同时间通过相同或不同的投予途径投予。此类组合物可分开封装或可作为试剂盒共同封装。试剂盒中两种或两种以上治疗剂可通过相同投予途径或通过不同投予途径投予。

本发明化合物已表明为酶结合分析中的JAK1、JAK2、JAK3及TYK2酶的有效抑制剂以具有有效官能活性，而无细胞分析中的细胞毒性，且在临床前模型中发挥JAK抑制的药效动力学作用，如以下实例中所描述。

实例

提供以下合成及生物实例以说明本发明，且不以任何方式解释为限制本发明的范围。除非另外指示，否则在以下实例中，以下缩写具有以下含义。以下未定义的缩写具有其一般可接受的含义。

ACN＝乙腈

DCM＝二氯甲烷

DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺

DMF＝N,N-二甲基甲酰胺

EtOAc＝乙酸乙酯

h＝小时

HATU＝六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓

IPA＝异丙醇

IPAc＝乙酸异丙酯

MeOH＝甲醇

min＝分钟

Pd(PPh₃)₄＝四(三苯基膦)钯(0)

RT＝室温

TFA＝三氟乙酸

THF＝四氢呋喃

双(频哪醇根基)二硼＝4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']联[[1,3,2]二氧杂硼杂环戊基]

试剂及溶剂购自商业供应商(Aldrich、Fluka、Sigma等)且不经进一步纯化即使用。通过薄层层析(TLC)、分析型高效液相层析(anal.HPLC)及质谱分析监测反应混合物的进展。如在各反应中尤其描述来处理反应混合物；通常通过萃取及其它纯化方法(诸如温度依赖性及溶剂依赖性结晶及沉淀)来纯化反应混合物。另外，通过管柱层析或通过制备型HPLC，通常地使用C18或BDS管柱填充物及常规洗脱剂来常规纯化反应混合物。下文描述典型的制备型HPLC条件。

通过质谱及¹H-NMR光谱常规进行反应产物的表征。对于NMR分析，样本溶解于氘化溶剂(诸如CD₃OD、CDCl₃或d₆-DMSO)中，且在标准观测条件下用瓦里安(Varian) Gemini2000仪器(400MHz)获得1H-NMR光谱。通过电喷雾电离法(ESMS)用耦接至自动纯化系统的Applied Biosystems(Foster City,CA)型号API 150EX仪器或Waters (Milford,MA)3100仪器，来进行化合物的质谱鉴定。

制备型HPLC条件

管柱：C18,5μm.21.2×150mm或C18,5μm 21×250或C14,5μm 21×150mm

管柱温度：室温

流动速率：20.0mL/min

移动相：A＝水+0.05％TFA

B＝ACN+0.05％TFA，

注射体积：(100-1500μL)

检测器波长：214nm

粗化合物以约50mg/mL溶解于1:1水:乙酸中。使用2.1×50mm C18管柱进行4分钟分析规模的测试操作，继而使用100μL注射液，使用基于分析规模的测试操作的B 滞留％，进行15或20分钟制备型规模操作。准确的梯度视样本而定。用21×250mm C18 柱及/或21×150mm C14管柱检验具有紧密操作杂质的样本以进行最佳分离。通过质谱分析鉴定含有所期望产物的馏分。

制剂1：2-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷 (9)

(a)1-(苯甲氧基)-4-溴-5-乙基-2-氟苯(21)

向4-溴-5-乙基-2-氟苯酚(20)(20g，910.32mmol)于ACN(250mL)中的溶液中添加K₂CO₃(31.55g，228.3mmol)，随后逐滴添加苯甲基溴(13.10mL，109.58mmol)。在80 ℃下搅拌所得反应混合物2小时。水层用EtOAc萃取(三次)，合并且用盐水洗涤。有机层经Na₂SO₄干燥且减压蒸发获得呈浅黄色油性液体状的标题中间物(25g，89％产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.48-7.30(m,5H),7.27(d,J＝10.5Hz,1H),6.87(d,J＝ 8.7Hz,1H),5.12(s,2H),2.66(q,J＝7.5Hz,2H),1.16(t,J＝7.5Hz,3H)。

(b)2-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(9)

向先前步骤的产物(21)(12.5g，40.45mmol)于二恶烷(100mL)中的溶液中添加双(频哪醇根基)二硼(15.40g，60.67mmol)及KOAc(11.9g，121.35mmol)。反应混合物用氮气吹扫15分钟，随后添加与二氯甲烷错合的[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(1.65g，2.023mmol)。所得反应混合物搅拌且在110℃下加热3小时，经硅藻土过滤且用EtOAc 洗涤残余物。滤液用过量EtOAc(200mL)稀释且用水(100mL)，随后盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且真空浓缩获得粗产物，其通过用3-5％EtOAc:洗脱的硅胶管柱层析(100-200)纯化获得呈灰白色固体状的所要产物(9.50g，66％产率)。¹H NMR(400MHz, 氯仿-d)δ7.54-7.27(m,6H),6.81(d,J＝7.9Hz,1H),5.16(s,2H),2.84(q,J＝7.5Hz,2H), 1.32(s,12H),1.14(t,J＝7.5Hz,3H)。

制剂2：6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-3-(三甲基锡烷基)-1H-吲唑(3')

(a)6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑(22)

向6-溴-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑(10)(50g，178.57mmol)及2-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(9)(76.3g，214.29mmol) 于DMF:H₂O(480:120mL)中的溶液中添加K₃PO₄(94.64g，446.86mmol)。反应混合物经氮气脱气15分钟，接着添加Pd(PPh₃)₂Cl₂催化剂(6.26g，8.93mmol)且混合物再次经氮气脱气5分钟，搅拌且在100-110℃下加热5小时。经硅藻土过滤反应混合物，且用 EtOAc洗涤残余物。滤液用EtOAc稀释，用冷水及盐水洗涤，经硫酸钠干燥，且真空浓缩提供粗产物，其通过急骤管柱层析纯化获得呈白色固体状的标题中间物(65g，86％产率)。C₂₇H₂₇FN₂O₂的(m/z):[M+H]⁺计算值431.21实验值431.46。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.06-7.98(m,2H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.51-7.32(m,5H),7.08(dd,J＝809.6, 8.3Hz,1H),7.03(d,J＝11.9Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,1H),5.76-5.64(m,1H),5.20(s, 2H),4.04(d,J＝10.1Hz,1H),3.72(t,J＝9.7Hz,1H),2.52(q,J＝7.5Hz,2H),2.22-2.02 (m,3H),1.80-1.71(m,3H),1.06(t,J＝7.5Hz,3H)。

(b)6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-1H-吲唑(23)

向先前步骤的产物(22)(65g，151.16mmol)于甲醇(700mL)中的溶液中添加浓HCl(120mL)且所得溶液在60-65℃下加热3小时，冷却至室温，且真空浓缩。将残余物溶解于EtOAc中且用饱和NaHCO₃水溶液及水洗涤。有机层经无水Na₂SO₄干燥且真空浓缩获得呈白色固体状的标题中间物(52g，99％(粗产物))。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ 8.13(s,1H),7.77(d,J＝8.3Hz,1H),7.59-7.30(m,6H),7.10(d,J＝8.3Hz,1H),7.01(d,J ＝11.8Hz,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),5.21(s,2H),2.53(q,J＝7.5Hz,2H),1.05(t,J＝ 7.5Hz,3H)。

(c)6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-3-碘-1H-吲唑(24)

向6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-1H-吲唑(23)(56g，161.18mmol)于DMF(400 mL)中的溶液中添加KOH(36.2g，647.39mmol)且搅拌混合物5分钟。在0℃下缓慢添加碘(82.2g，323.69mmol)于DMF(100mL)中的溶液且在室温下搅拌30分钟，用水(3× 150mL)稀释且用EtOAc(3×200mL)萃取。有机层用偏亚硫酸氢钠饱和水溶液(3×200 mL)及水(400mL)洗涤，经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩获得粗产物，其通过急骤管柱层析纯化获得呈浅褐色半固体状的标题中间物(64g，84％产率)。¹H NMR(400MHz, 氯仿-d)δ10.49(s,1H),7.57-7.32(m,7H),7.16(d,J＝8.3Hz,1H),7.04-6.91(m,2H), 5.20(s,2H),2.51(q,J＝7.4Hz,2H),1.04(t,J＝7.5Hz,3H)。

(d)6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-3-碘-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑(25)

向先前步骤的产物(24)(60g，127.12mmol)于DCM(700mL)中的冰冷的溶液中添加对甲苯磺酸(4.84g，25.423mmol)，随后逐滴添加3,4-二氢-2H-哌喃(17.43mL，190.68mmol)。在室温下搅拌反应混合物隔夜，用DCM稀释且用NaHCO₃饱和水溶液及盐水洗涤。有机层经无水Na₂SO₄干燥且在减压下浓缩获得粗产物，其通过急骤层析(硅胶) 纯化获得呈灰白色固体状的标题中间物(64g，91％产率)。C₂₇H₂₆FIN₂O₂的(m/z):[M+H]⁺计算值557.10实验值557.30。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.56-7.31(m,7H),7.14(d,J ＝8.3Hz,1H),7.01(d,J＝11.8Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,1H),5.68(d,J＝9.3Hz,1H), 5.20(s,2H),4.08-3.99(m,1H),3.77-3.64(m,1H),2.50(q,J＝7.2Hz,2H),2.23-1.97 (m,3H),1.81-1.68(m,3H),1.06(t,J＝7.4Hz,3H)。

(e)6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-3-(三甲基锡烷基)-1H-吲唑(3')

向6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-3-碘-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑(25)(20 g，35.97mmol)于甲苯(150mL)中的溶液中添加六甲基二锡(9.2mL，43.17mmol)。反应混合物经氮气脱气20分钟，随后添加四(2.0g，1.80mmol)，接着在100℃下搅拌2小时，冷却至室温，经硅藻土过滤且用EtOAc洗涤残余物。浓缩滤液且通过用2-5％EtOAc:己烷洗脱的管柱层析(经中性氧化铝)纯化获得标题化合物(17.50g，82％产率)。 C₂₇H₂₆FIN₂O₂的(m/z):[M+H]⁺计算值557.10实验值557.30。C₃₀H₃₅FN₂O₂Sn的(m/z): [M+H]⁺计算值595.17,593.17实验值595.49,593.55。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.68 (d,J＝8.0Hz,1H),7.57-7.29(m,6H),7.13-7.00(m,2H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),5.81- 5.68(m,1H),5.21(s,2H),4.13-4.00(m,1H),3.81-3.66(m,1H),2.54(q,J＝7.3Hz,2H), 2.23-2.00(m,2H),1.87-1.59(m,4H),1.08(t,J＝7.5Hz,3H),0.47(s,9H)。

制剂3：(S)-2-碘-3-((2-三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-3,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c] 吡啶-5,6-二甲酸5-(叔丁酯)6-甲酯(4')

(a)(S)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸(11)

在0℃下，向L-组氨酸(26)(50g，322.24mmol)于水(420mL)中的搅拌悬浮液逐滴添加浓HCl(29mL)，随后在0℃下一次性添加甲醛(55mL，676.72mmol)。搅拌所得反应混合物30分钟，接着在75℃下加热6小时且浓缩。所得粗产物与乙醚一起搅拌2小时，过滤且用IPA:THF(100:300mL)洗涤提供呈灰白色固体状的标题中间物的HCl盐(75 g 99％产率(粗))。C₇H₉N₃O₂的计算值(m/z):[M+H]⁺168.07实验值168.17。

(b)(S)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(27)

在0℃下，向先前步骤的产物(11)(75.0g，312.5mmol)于甲醇(1500mL)中的经搅拌的溶液中逐滴添加SOCl₂(45.6mL，625mmol)且在室温下搅拌16小时，接着加热直到回流(70℃)1小时。通过蒸馏移除溶剂且粗产物用甲醇、随后乙醚湿磨，获得呈灰白色固体状的标题中间物的粗HCl盐(80g粗制物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.05(s, 1H),4.71(dd,J＝9.4,5.2Hz,1H),4.36(d,J＝15.5Hz,1H),4.30(d,J＝15.6Hz,1H),3.82 (s,3H),3.44-3.21(m,2H)。

(c)(S)-3,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5,6-二甲酸5-(叔丁酯)6-甲酯(28)

在0℃下，向先前步骤的产物(27)(80.0g，314.96mmol)于甲醇(1000mL)中的经搅拌的溶液中添加DIPEA(282mL，1574mmol)，随后添加二碳酸二叔丁酯(172mL，787.48mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时，接着添加液体NH₃(150mL，水中25％) 且在室温下再搅拌反应混合物16小时，通过蒸馏移除甲醇且在DCM(3×200mL)中萃取残余物。经无水Na₂SO₄干燥经合并的有机萃取物，浓缩且通过用5％MeOH:DCM洗脱的急骤层析(100-200目硅胶)纯化以获得标题中间物(41g,46％产率)。C₁₃H₁₉N₃O₄的 (m/z):[M+H]⁺计算值：282.14，实验值：282.21。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.85(s, 1H),7.50(s,1H),5.18(dd,J＝49.3,5.1Hz,1H),4.51(t,J＝14.2Hz,1H),4.09(dd,J＝ 43.9,16.1Hz,1H),3.59(s,3H),3.08(d,J＝15.5Hz,1H),2.94(d,J＝15.1Hz,1H),1.45(s, 9H)。

(d)(S)-2-碘-3,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5,6-二甲酸5-(叔丁酯)6-甲酯(29)

在0℃下，向先前步骤的产物(29)(41.0g，145.9mmol)于THF(500mL)中的溶液中添加N-碘代丁二酰亚胺(66.0g，291.8mmol)且将所得溶液在室温下搅拌4小时，用水稀释且用乙酸乙酯萃取。有机部分用10％硫代硫酸钠溶液(3×200mL)洗涤。经合并的有机层经无水硫酸钠干燥，且浓缩以获得标题化合物60g(粗制物)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。C₁₃H₁₈IN₃O₄的(m/z):[M+H]⁺计算值：408.03，实验值：408.31。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)δ12.48(s,1H),5.34-4.97(m,1H),4.67-4.35(m,1H),4.12-3.95(m, 1H),3.60(s,3H),3.14-2.82(m,2H),1.44(s,9H)。

(e)(S)-2-碘-3-((2-三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-3,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5,6-二甲酸5-(叔丁酯)6-甲酯(4')

在0℃下，向(S)-2-碘-3,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5,6-二甲酸5-(叔丁酯)6- 甲酯(29)(40g，0.098mol)于DMF(150mL)中的经搅拌的溶液添加DIPEA(35.1mL，0.19 mol)。搅拌反应混合物10分钟，接着在0℃下逐滴添加2-(三甲基硅烷基)-乙氧基甲基氯 (19.1mL，0.10mol)。在室温下搅拌所得反应混合物3小时。4小时之后，添加冷却水且反应混合物用EtOAc(2×200mL)萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，浓缩，且通过用 20-35％EtOAc:己烷洗脱的急骤管柱层析纯化，获得呈浅黄色粘稠液体状的标题产物(27 g)。C₁₉H₃₂IN₃O₅Si的(m/z):[M+H]⁺计算值538.12实验值538.42。¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆)δ5.33-5.04(m,3H),4.79-4.56(m,1H),4.54-4.14(m,1H),3.60(s,3H),3.47 (t,J＝7.8Hz,2H),3.31-3.16(m,1H),2.97(t,J＝18.9Hz,1H),1.44(s,9H),0.92-0.74 (m,2H),-0.03(s,9H)。

制剂4：(6S)-5-(叔丁氧羰基)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1-(四氢-2H-哌喃-2- 基)-1H-吲唑-3-基)-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸(7')

(a)(6S)-2-(6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-3- 基)-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-3,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5,6-二甲酸 5-(叔丁酯)6-甲酯(5')

向(S)-2-碘-3-((2-三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-3,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶 -5,6-二甲酸5-(叔丁酯)6-甲酯(4')(17.0g，31.65mmol)于甲苯(500mL)中的经搅拌的溶液添加6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-3-(三甲基锡烷基)-1H- 吲唑(3')(20g，34.82mmol)。反应混合物用氩气净化15分钟，添加Pd(PPh₃)₄(3.6g， 3.16mmol)及碘化铜(1.20g,6.33mmol)且在120℃下搅拌反应混合物16小时。反应混合物经硅藻土过滤，在减压下浓缩滤液且通过硅胶管柱层析(Redisep 80g管柱，用DCM洗脱10min，接着含15-20％EtOAc的己烷洗脱)纯化获得呈黄色固体状的标题中间物(15.10g，58％产率)。C₄₆H₅₈FN₅O₇Si的(m/z):[M+H]⁺计算值840.41实验值840.54。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.43(s,1H),7.54-7.33(m,6H),7.20(s,1H),7.05(d,J＝11.4 Hz,1H),6.95(d,J＝8.5Hz,1H),6.09-5.69(m,3H),5.59-5.36(m,1H),5.20(s,2H),4.97 -4.80(m,1H),4.12-3.90(m,1H),3.68(s,3H),3.57-3.47(m,2H),3.40(d,1H),3.21- 3.05(m,1H),2.74-2.34(m,4H),2.25-2.07(m,2H),1.94-1.65(m,4H),1.54(s,9H),1.12 -0.99(m,3H),0.91-0.75(m,2H),-0.12(s,9H)。

(b)(6S)-2-(6-(4-(苯甲氧基)-2-乙基-5-氟苯基)-1-(四氢-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑-3- 基)-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-3,4,6,7-四氢-5H-咪唑并[4,5-c]吡啶-5,6-二甲酸6- 苯甲酯5-(叔丁基)酯(6')

向圆底烧瓶添加先前步骤的产物(5')(15.0g，17.85mmol)于甲苯(400mL)、苯甲醇(46.3mL)及Ti(OEt)₄(7.15mL，35.70mmol)且反应混合物剧烈回流(140℃)持续48小时，用水稀释且用DCM萃取。过滤悬浮液，滤液经Na₂SO₄干燥，减压浓缩且通过硅胶管柱层析(Redisep 80g管柱，含0-5％EtOAc的己烷)纯化20分钟移除过量苯甲醇，接着用含 10-15％EtOAc的己烷)洗脱获得标题中间物。¹H NMR与结构相符。C₅₂H₆₂FN₅O₇Si的计算值(m/z):[M+H]⁺916.44实验值916.86。

(c)(6S)-5-(叔丁氧羰基)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1-(四氢-2H-哌喃-2- 基)-1H-吲唑-3-基)-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸(7')

向先前步骤的产物(6')(21.0g，22.92mmol)于1:1IPA:THF(400mL))中的经搅拌的溶液添加Pd(OH)₂(5.0g)。在室温下，在氢气气球下搅拌反应混合物16小时，经硅藻土过滤，减压浓缩且通过硅胶管柱层析(Redisep 80g管柱，用含25-40％EtOAc的己烷洗脱)纯化获得呈灰白色固体状的标题化合物(6.1g，8.29mmol)。C₃₈H₅₀FN₅O₇Si的(m/z): [M+H]⁺计算值736.35实验值736.5。¹H NMR与结构相符。C₃₈H₅₀FN₅O₇Si的(m/z):[M+H]⁺计算值736.35实验值736.5。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.94(s,1H),9.86(s,1H), 8.34(t,J＝7.6Hz,1H),7.66(s,1H),7.20(d,J＝8.7Hz,1H),7.03(d,J＝11.8Hz,1H),6.93 (d,J＝9.1Hz,1H),6.11-5.77(m,3H),5.33-5.06(m,1H),4.87-4.56(m,1H),4.52-4.14 (m,1H),3.97-3.69(m,2H),3.53-3.40(m,2H),3.23-3.11(m,1H),3.11-2.93(m,1H), 2.47-2.44(m,2H),2.13-1.96(m,2H),1.68(d,J＝70.9Hz,4H),1.48(s,9H),1.02(t,J＝ 7.5Hz,3H),0.86-0.68(m,2H),-0.17(s,9H)。

制剂5：(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸(8')

在0℃下，向(6S)-5-(叔丁氧基羰基)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1-(四氢-2H-哌喃 -2-基)-1H-吲唑-3-基)-3-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)-甲基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c] 吡啶-6-甲酸(7')(5.7g，7.75mmol)于5:1二恶烷:水(60mL)中的经搅拌的溶液逐滴添加浓 HCl(20mL)。使反应混合物升温且在90℃下搅拌16小时且真空蒸馏获得粗残余物，将其依序用冷藏的乙醚及乙腈湿磨获得呈淡褐色固体状的标题化合物的HCl盐(3.6g，95％产率)。C₂₂H₂₀FN₅O₃的(m/z):[M+H]⁺计算值422.16实验值422.24。¹H NMR(400MHz, D₂0/DMSO-d₆)δ8.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(s,1H),7.19(d,J＝8.1Hz,1H),6.99(d,J＝ 11.9Hz,1H),6.91(d,J＝9.0Hz,1H),4.56-4.51(m,1H),4.36(d,J＝15.5Hz,1H),4.30 (d,J＝15.5Hz,1H),3.35-3.25(m,1H),3.15-3.05(m,1H),2.4-2.55(m,2H),0.97(t,J＝ 7.5Hz,3H)。

制剂6：(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-丙基-4,5,6,7-四氢-3H- 咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸

向(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c] 吡啶-6-羧酸，HCl(400mg，0.874mmol)(8')及丙醛(0.095mL，1.310mmol)于DMF(7mL) 中的溶液中添加氰基硼氢化钠(165mg，2.62mmol)且在室温下搅拌反应混合物隔夜。添加硼氢化钠(33mg，0.874mmol)，浓缩溶液，且通过制备型HPLC纯化获得标题化合物的TFA盐(179mg，37％产率)。C₂₅H₂₆FN₅O₃的(m/z):[M+H]⁺计算值464.20实验值464.5。

制剂7：(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1H-吲唑-3-基)-5异丙基-4,5,6,7-四氢-3H- 咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸

向(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸，HCl(8')(400mg，0.874mmol)、丙酮(0.192mL，2.62mmol)及乙酸(0.150mL， 2.62mmol)于DMF(7mL)中的溶液中添加氰基硼氢化钠(274mg，4.37mmol)且在室温下搅拌反应混合物隔夜。添加硼氢化钠(33mg，0.874mmol)，浓缩溶液，且通过制备型HPLC纯化获得标题化合物的TFA盐(115mg，23％产率)。C₂₅H₂₆FN₅O₃的(m/z):[M+H]⁺计算值464.20实验值464.5。

制剂8：(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-甲基-4,5,6,7-四氢-3H- 咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸

向(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸，HCl(8')(300mg，0.655mmol)及含37重量％甲醛的水(0.059mL，0.786mmol) 于DMF(5mL)中的溶液中添加氰基硼氢化钠(165mg，2.62mmol)，且在室温下搅拌反应混合物隔夜。添加硼氢化钠25mg，0.655mmol)，浓缩溶液且通过急骤层析(100g管柱，5-75％ACN/水)纯化，获得标题化合物的TFA盐(85mg，24％产率)。C₂₃H₂₂FN₅O₃的(m/z):[M+H]⁺计算值436.17实验值436.45。

制剂9：(S)-5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H- 咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸

向(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟基苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c] 吡啶-6-甲酸，HCl(8')(450mg，0.983mmol)及乙醛(0.083mL，1.474mmol)于DMF(7mL) 中的溶液中添加氰基硼氢化钠(247mg，3.93mmol)且在室温下搅拌反应混合物隔夜。添加硼氢化钠(112mg，2.95mmol)，浓缩溶液，溶解于1:1乙酸:水+300μL TFA(7mL)中且通过急骤层析(100g管柱，5-65％ACN/水)纯化获得标题化合物的TFA盐(165mg，0.293mmol，30％产率)。C₂₄H₂₄FN₅O₃的(m/z):[M+H]⁺计算值450.19实验值450。

实例2：(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑 -3-基)-5-异丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮

向(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-异丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸，TFA(179mg，0.310mmol)、N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺，2HCl(107 mg，0.465mmol)及DIPEA(0.162mL 0.930mmol)于DMF(4mL)中的溶液中添加HATU (177mg，0.465mmol)且在室温下搅拌反应混合物隔夜。添加肼(5当量)，浓缩反应混合物且通过制备型HPLC纯化获得标题化合物的TFA盐(63mg，26％产率)。C₃₀H₃₆FN₇O₂的(m/z):[M+H]⁺计算值546.29实验值546.7。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.90(s, 1H),8.29(dd,1H),7.34(s,1H),7.07(d,1H),7.01(d,1H),6.89(d,1H),4.35-4.18(m,1H), 4.11-3.94(m,1H),3.94-3.73(m,3H),3.70-3.57(m,2H),3.06-2.94(m,2H),2.87-2.66 (m,2H),2.48-2.40(m,2H),2.13-2.00(m,6H),1.07(t,3H),1.03-0.93(m,6H)。

实例4：(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑 -3-基)-5-丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮

向(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸，TFA(30mg，0.052mmol)、N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺，2HCl(27.0 mg，0.156mmol)及DIPEA(0.064mL，0.364mmol)于DMF(1.5mL)中的溶液中添加HATU(29.6mg，0.078mmol)且在室温下搅拌反应混合物隔夜。添加肼(5当量)，在室温下搅拌反应混合物10分钟，浓缩且通过制备型HPLC纯化获得标题化合物的TFA盐(29.6 mg，74％产率)。C₃₀H₃₆FN₇O₂的(m/z):[M+H]⁺计算值546.29实验值546.6。

实例8：(S)-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮

向(S)-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸，TFA(30mg，0.052mmol)、N,N-3-三甲基氮杂环丁烷-3-胺，2HCl(29.2 mg，0.156mmol)及DIPEA(0.073mL，0.416mmol)于DMF(1mL)中的溶液中添加HATU(29.6mg，0.078mmol)且在室温下搅拌反应混合物隔夜。添加肼(5当量)，浓缩反应混合物且通过制备型HPLC纯化获得标题化合物的TFA盐(24.7mg，60％产率)。C₃₁H₃₈FN₇O₂的(m/z):[M+H]⁺计算值560.31实验值560.2。

实例8-22：(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮

将(S)-5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸，TFA(30mg，0.053mmol)、N,N-二甲基氮杂环丁烷-3-胺(16mg，0.16 mmol)及DIPEA(0.037mL，0.213mmol)溶解于DMF(1.0ml)中，接着添加HATU(30.4 mg，0.080mmol)且在室温下搅拌反应混合物6小时。添加肼(15μL)，接着浓缩溶液且通过制备型HPLC纯化获得标题偶合的TFA盐(27mg，66％产率)。C₂₉H₃₄FN₇O₂的(m/z): [M+H]+计算值532.6实验值532.2。

实例8-23：(S)-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)(5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4- 羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮

将(S)-5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸，TFA(30mg，0.053mmol)、N,N,3-三甲基氮杂环丁烷-3-胺(18mg， 0.16mmol)及DIPEA(0.037mL，0.213mmol)溶解于DMF(1.0ml)中，接着添加HATU(30.4mg，0.080mmol)且在室温下搅拌反应混合物6小时。添加肼(15μL)，接着浓缩溶液且通过制备型HPLC纯化获得标题偶合的TFA盐(28mg，68％产率)。C₃₀H₃₆FN₇O₂的 (m/z):[M+H]+计算值546.7实验值546.2。

实例8-14：(S)-(5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H- 咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)(3-(哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)甲酮，2TFA

将(S)-5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并 [4,5-c]吡啶-6-甲酸，TFA(40mg，0.071mmol)、1-(3-氮杂环丁烷基)哌啶(29.9mg，0.213 mmol)及DIPEA(0.050ml，0.284mmol)溶解于DMF(1.5ml)中，接着添加HATU(40.5mg， 0.106mmol)且在室温下搅拌反应混合物2小时。添加肼(0.011ml，0.355mmol)且在室温下搅拌反应混合物10分钟。接着浓缩溶液，通过制备型HPLC纯化获得标题化合物的TFA盐(36mg，63％产率)。C₃₂H₃₈FN₇O₂的(m/z):[M+H]+计算值572.7实验值572.5。

使用类似合成方法，制备表1的化合物。在下表中，任一栏中的空白指示氢原子，表上结构中的*指示手性中心，且取代基前方的符号(R)或(S)表示连接取代基的碳原子构造。

表1

生物学分析

已在以下生物学分析中的一或多者中表征本发明化合物。

分析法1：生物化学JAK激酶分析

将四种LanthaScreen JAK生物化学分析的组(JAK1、2、3及Tyk2)载于常见激酶反应缓冲液(50mM HEPES，pH 7.5，0.01％Brij-35，10mM MgCl₂，及1mM EGTA)中。重组GST标记的JAK酶及GFP标记的STAT1肽底物获自Life Technologies。

在白色384孔微量培养盘(Corning)中在环境温度下，使连续稀释的化合物与四种JAK酶中的每一者及底物一起预培育1小时。随后添加ATP，以10μL总体积用1％DMSO 起始激酶反应。JAK1、2、3及Tyk2的最终酶浓度分别为4.2nM、0.1nM、1nM以及 0.25nM；所用的相应Km ATP浓度为25μM、3μM、1.6μM以及10μM；而全部四种分析法的底物浓度为200nM。在环境温度下使激酶反应进行1小时，随后添加TR-FRET 稀释缓冲液(Life Technologies)中的EDTA(10mM最终浓度)及Tb抗pSTAT1(pTyr701) 抗体(Life Technologies，2nM最终浓度)的10μl制剂。将培养盘在环境温度下培育1小时，随后在EnVision读取器(Perkin Elmer)上读取。记录发射比信号(520nm/495nm)且用于计算基于DMSO及背景对照的抑制百分比值。

对于剂量反应分析，相较于化合物浓度绘制抑制百分比数据，且用Prism软件(GraphPad Software)从4参数稳固拟合模型测定IC₅₀值。结果表示为pIC₅₀(IC₅₀的负对数)，且随后使用Cheng-Prusoff等式变换为pK_i(解离常数Ki的负对数)。

在四种JAK分析法的每一种中具有较低K_i值或较高pK_i值的测试化合物显示对JAK活性的较大抑制。

分析法2：细胞JAKI效能分析

通过测量BEAS-2B人类肺上皮细胞(ATCC)中介白素-13(IL-13，R&D Systems)诱导的STAT6磷酸化来进行AlphaScreen JAKI细胞效能分析。将抗STAT6抗体(Cell SignalingTechnologies)结合至AlphaScreen受体珠粒(Perkin Elmer)，同时使用EZ-Link Sulfo-NHS- 生物素(Thermo Scientific)对抗pSTAT6(pTyr641)抗体(Cell SignalingTechnologies)进行生物素标记。

在5％CO₂含湿气培育箱中在37℃下，在补充有10％FBS(Hyclone)、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素(Life Technologies)及2mM GlutaMAX(Life Technologies)的50％DMEM/50％F-12培养基(Life Technologies)中，使BEAS-2B细胞生长。在分析第1天，在具有25μL培养基的白色聚D赖氨酸涂布的384孔培养盘(Corning)中，以7,500个细胞/孔密度接种细胞，且在培育箱中使其粘附隔夜。在分析第2天，将培养基移除，且用含有测试化合物的剂量反应的12μL分析缓冲液(汉克氏(Hank's)平衡盐溶液/HBSS，25 mM HEPES及1mg/ml牛血清白蛋白/BSA)替换。将化合物连续稀释于DMSO中，且随后在培养基中再稀释1000倍，以使最终DMSO浓度达至0.1％。在37℃下使细胞与测试化合物一起培育1小时，且随后添加12μL预温热的IL-13(80ng/ml于分析缓冲液中) 以用于刺激。在37℃下培育30分钟后，移除分析缓冲液(含有化合物及IL-13)，及10μL 细胞溶解缓冲液(25mM HEPES、0.1％SDS、1％NP-40、5mM MgCl₂、1.3mM EDTA、 1mM EGTA，且补充有Complete Ultra mini蛋白酶抑制剂及来自Roche Diagnostics的 PhosSTOP)。在环境温度下震荡培养盘30分钟，随后添加检测试剂。首先添加生物素抗 pSTAT6及抗STAT6结合的受体珠粒的混合物且在环境温度下培育2小时，随后添加抗生蛋白链菌素结合的供体珠粒(Perkin Elmer)。培育最少2小时后，在EnVision盘式读取器上读取分析培养盘。记录AlphaScreen发光信号，且用于计算基于DMSO及背景对照的抑制百分比值。

对于剂量反应分析，相较于化合物浓度绘制抑制百分比数据，且用Prism软件从4参数稳固拟合模型测定IC₅₀值。结果还可表示为IC₅₀值的负对数，pIC₅₀。

在此分析法中具有较低IC₅₀值或较高pIC₅₀值的测试化合物显示对IL-13诱导的STAT6磷酸化的较大抑制。

活体外分析结果

所选本发明的化合物在四种JAK酶分析法；JAK1、JAK2、JAK3及Tyk2，及上文所述的BEAS-2B细胞效能分析法中测试。如下表所示，观测到JAK1酶效能预测 BEAS-2B分析法中pan-JAK酶活性及细胞效能。因此，在JAK1酶分析及BEAS-2B细胞分析中测试制剂的全部化合物，且大部分化合物还在JAK3酶分析法中测试。全部化合物均显现介于0.04nM与0.6nM之间的JAK1 K_i值(pK_i介于9.2与10.4之间)。JAK3 酶分析法中测试的化合物展现介于0.08nM与0.5nM之间的K_i值(pK_i介于9.3与10.1 之间)。测试的化合物展现在BEAS-2B分析法中介于3nM与100nM之间的IC₅₀值(pIC₅₀介于7与8.5之间)。

表2

分析法3：小鼠中血浆及肺中的药物动力学

以下文方式测定测试化合物的血浆及肺含量及其比率。在分析中使用来自Charles River Laboratories的BALB/c小鼠。在20％丙二醇中，在pH 4柠檬酸盐缓冲液中以0.2 mg/mL的浓度个别地调配测试化合物，且通过经口抽吸将50μL的给药溶液引入小鼠的气管中。在给药后的多个时间点(通常0.167、2、6、24小时)，经心脏穿刺移出血液样本，且自小鼠切除完整肺脏。在4℃下以约12,000rpm使血液样本离心(Eppendorf centrifuge，5804R)4分钟以收集血浆。肺脏经填塞干燥、称取且在无菌水中以1:3倍稀释比均质化。通过LC-MS分析相对于在测试基质中构建成标准曲线的分析标准测定测试化合物的血浆及肺含量。肺与血浆比率测定为肺AUC(以μg hr/g为单位)与血浆AUC (以μg hr/mL为单位)的比率，其中AUC常规地定义为测试化合物浓度对比时间的曲线下面积。本发明化合物展现比小鼠的血浆的暴露量大一至两个数量级的肺脏中的暴露量。此分析中剖析的所有化合物均展现介于约4.5与约14小时之间的半衰期。

分析法4：肺组织中IL-13诱导的pSTAT6诱导的鼠类(小鼠)模型

Il-13为哮喘的病理生理学潜在的重要细胞介素(Kudlacz等人Eur.J.Pharmacol,2008,582,154-161)。IL-13与活化杰纳斯激酶家族(JAK)的成员的细胞表面受体结合，接着磷酸化STAT6且随后进一步活化转录路径。在所描述的模型中，将IL-13的剂量局部递送至小鼠肺中以诱导STAT6的磷酸化(pSTAT6)，其随后测量为终点。

在分析中使用来自Harlan的成年BALB/C小鼠。在研究当天，用异氟醚轻度麻醉动物且经由经口抽吸投予媒剂或测试化合物(1mg/mL，50μl总体积，经若干次呼吸)。在给药后，将动物侧卧放置且在返回其饲养笼的前监测从麻醉的完全恢复。四小时后，再次简单麻醉动物且在监测从麻醉恢复及返回至其饲养笼的前经由经口抽吸用媒剂或 IL-13(0.03μg总递送剂量，50μL总体积)进行刺激。在媒剂或IL-13投予之后一小时，针对使用抗pSTAT6ELISA的两个pSTAT6检测(家兔mAb捕获/包被抗体；小鼠mAb检测/报导抗体：抗pSTAT6-pY641；二级抗体：抗小鼠IgG-HRP)收集肺脏且如上文分析3 中所描述分析总药物浓度。

在分析中测试本发明的经选择化合物。相比于经媒剂处理、IL-13刺激的对照动物， 5小时时经处理的动物的肺脏中存在的pSTAT6含量降低证明所述模型中的活性。经媒剂处理、IL-13刺激的对照动物与经媒剂处理、媒剂刺激的对照动物之间的差异分别指示任何给定实验中的0％及100％抑制性作用。在分析中测试本发明的示例性化合物，且展现在如下文所证明的IL-13刺激之后4小时的STAT6磷酸化抑制。

确认JAK-STAT路径在气道发炎中的相关性，随后测试且证明在IL13诱导的pSTAT6小鼠模型中活体内靶向参与的化合物在过敏原诱导的嗜酸性粒细胞发炎的小鼠模型中有效。

活体内分析结果

在药物动力学分析(分析法3)及药效动力学分析(分析法4)中表征所选本发明化合物。在给药后类似时间点，在药物动力学分析中与药效动力学分析中测定的肺中的测试化合物浓度之间观测到良好相关性。药效动力学分析中的小鼠肺中的显著化合物浓度的观测结果确证，IL-13诱导的pSTAT6诱导的观测到的抑制为测试化合物活性的结果。

在下表中，对于肺暴露量与血浆暴露量的比率(分析法3)，A表示比率100-200，B表示介于50与100之间的比率，且C表示介于20与50之间的比率。对于IL-13诱导的pSTAT6诱导(分析法4)的抑制百分比，A表示介于60％与80％抑制之间，B表示介于 40％与60％抑制之间且C表示介于25％与40％抑制之间。

表3

分析法5：交链孢属赤星病菌(Alternaria alternata)诱导的肺的嗜酸性粒细胞发炎的鼠类模型

气道嗜酸性粒细胞增多症为人类哮喘的标志。交链孢属赤星病菌为可加重人类哮喘且在小鼠肺中诱导嗜酸性粒细胞发炎的真菌气源性过敏原(Havaux等人Clin ExpImmunol.2005年2月；139(2):179-88)。在小鼠中，已证实，交链孢属间接活化肺中的组织留置2型先天性淋巴细胞，其作出反应(例如IL-2及IL-7)且释放JAK依赖性细胞介素 (例如IL-5及IL-13)且配位嗜酸性粒细胞发炎(Bartemes等人J Immunol.2012年2月1 日；188(3):1503-13)。

在研究中使用来自Taconic的七至九周龄雄性C57小鼠。在研究当天，用异氟醚轻度麻醉动物且经由口咽抽吸投予媒剂或测试化合物(0.03-1.0mg/mL，50μl总体积，经若干次呼吸)。在给药后，将动物侧卧放置且在返回其饲养笼的前监测从麻醉的完全恢复。一小时后，再次简单麻醉动物且在监测从麻醉恢复及返回至其饲养笼的前经由口咽抽吸用媒剂或交链孢属萃取物(200μg总递送萃取物，50μL总体积)进行刺激。在交链孢属投予四十八小时之后，收集支气管肺泡灌洗液(BALF)且使用Advia 120Hematology系统 (Siemens)对BALF中的嗜酸性粒细胞进行计数。

在IL-13-pSTAT6药效动力学分析法中证明活体内活性的所选本发明化合物在此交链孢属分析法中进行测试。相比于经媒剂处理、交链孢属刺激的对照动物，四十八小时时经处理的动物的BALF中存在的嗜酸性粒细胞含量降低证明所述模型中的活性。数据表示为经媒剂处理、交链孢属刺激的BALF嗜酸性粒细胞响应的抑制百分比。为了计算抑制百分比，将各条件的BALF嗜酸性粒细胞的数目转化成平均经媒剂处理、交链孢属刺激的BALF嗜酸性粒细胞的百分比且减去一百百分比。在分析中测试本发明的示例性化合物且展现在如下文所证明的交链孢属刺激之后四十八小时的BALF嗜酸性粒细胞计数抑制。

活体内分析结果

所测试的全部化合物均表明交链孢属诱导的BALF嗜酸性粒细胞的抑制范围(73％-93％)。下表反映经媒剂处理、交链孢属刺激的嗜酸性粒细胞诱导水准的最大统计显著抑制百分比。

表4

分析法6：IL-5介导的嗜酸性粒细胞存活率分析法

在自人类全血(全细胞)分离的人类嗜酸性粒细胞中测量测试化合物对IL-5介导的嗜酸性粒细胞存活率的效能。因为IL-5经由JAK传导信号，所以此分析法提供JAK细胞效能的量度。

从健康供体的新鲜人类全血(全细胞)分离人类嗜酸性粒细胞。将血液与0.9％氯化钠溶液(Sigma-Aldrich)中的4.5％葡聚糖(Sigma-Aldrich)混合。使红血球沉降35分钟。移除富含白血球的上层且在Ficoll-Paque(GE Healthcare)上分层且在600g下离心30分钟。移除血浆及单核细胞层，随后将粒细胞层用水溶解以移除任何污染的红血球。嗜酸性粒细胞使用人类嗜酸性粒细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec)进一步纯化。将一部分纯化的嗜酸性粒细胞与抗CD16 FITC(Miltenyi Biotec)一起在暗处在4℃下培育10分钟。使用LSRII 流式细胞仪(BD Biosciences)分析纯度。

将细胞在37℃，5％CO₂含湿气培育箱中在补充有10％热不活化的胎牛血清(FBS，Life Technologies)、2mM Glutamax(Life Technologies)、25mM HEPES(LifeTechnologies) 及1×Pen/Strep(Life Technologies)的RPMI 1640(Life Technologies)中培养。将细胞以 10,000个细胞/孔接种于培养基(50μL)中。培养盘在300g下离心5分钟且移除上清液。将化合物连续稀释于DMSO中，接着在培养基中再稀释500倍达到2倍最终分析浓度。将测试化合物(50μL/孔)添加至细胞中，且在37℃，5％CO₂下培育1小时，随后在预温热的分析培养基(50μL)中添加IL-5(R&D Systems；最终浓度1ng/mL及10pg/ml)持续 72小时。

细胞介素刺激之后，将细胞以300g离心5分钟，且用冷DPBS(Life Technologies)洗涤两次。为了得到存活率及细胞凋亡，将细胞与碘化丙锭(Thermo Fisher Scientific)及 APC磷脂结合蛋白V(BD Biosciences)一起培育且使用LSRII流式细胞仪(BDBiosciences)进行分析。通过分析细胞存活率％对比化合物浓度的存活率曲线来测定IC₅₀值。数据表示为pIC₅₀(负十进制对数IC₅₀)值。实例2的化合物展现在10pg/ml IL-5存在下7.6±0.5的pIC₅₀值及在1ng/ml IL-5存在下6.2±0.1的pIC₅₀值。

分析法7：人类3D呼吸道培养物中IFNγ及IL-27诱导的趋化因子CXCL9及 CXCL10的抑制

EpiAirway组织培养物获自Mattek(AIR-100)。培养物来源于哮喘供体。在细胞培养插入物中，人类来源的气管/支气管上皮细胞在多孔膜载体上生长及分化，使得细胞下方的温热培养基与上述气态测试氛围具有气液界面。在维持培养基(Mattek，AIR-100-MM) 中在37℃，5％CO₂含湿气培育箱中培养组织。测试四名供体。在第0天，组织培养物用10μM、1μM及/或0.1μM测试化合物处理。化合物在二甲亚砜(DMSO，Sigma)中稀释至最终浓度0.1％。0.1％DMSO用作媒剂对照组。将测试化合物与培养物一起在37℃， 5％CO₂下培育1小时，随后添加含有IFNγ(R&D Systems)或IL-27(R&D Systems)的预温热培养基，最终浓度为100ng/ml。组织培养物保留8天。每2天将培养基换为含有化合物及IFNγ或IL-27的新鲜培养基。在第8天，收集组织培养物及上清液用于分析。使用luminex分析(EMD Millipore)分析上清液样本的CXCL10(IP-10)及CXCL9(MIG)。数据表示为抑制％+/-标准差(±STDV)。通过将针对IFNγ或IL-27诱导的CXCL10或 CXCL9分泌的化合物抑制效能与媒剂处理的细胞比较来测定抑制百分比。数据为来自3 或4名供体的平均值。与媒剂对照组相比时，实例2的化合物能够将IFNγ诱导CXCL10 分泌抑制101％±2.0(在10μM下)、65％±29(在μM下)以及6％±11(在0.1μM下)。当与媒剂比较时，实例2的化合物能够将IFNγ诱导的CXCL9分泌抑制93％±13(在10μM 下)及24％±49(在1μM下)。与媒剂对照组相比，实例2的化合物能够将IL-27诱导的 CXCL10分泌抑制108％±11(在10μM下)、101％±6(在1μM下)以及69％±10(在0.1μM 下)。与媒剂对照组相比，实例2的化合物能够将IL-27诱导的CXCL9分泌抑制100％±0 (在10μM下)、97％±3.6(在1μM下)以及57％±28(在0.1μM下)。

分析法8：细胞JAK效能分析法：抑制人类PBMC中IL-2/抗CD3刺激的IFNγ

在从人类全血分离的人类外周血液单核细胞(PBMC)(Stanford Blood Center)中测量测试化合物抑制介白素-2(IL-2)/抗CD3刺激的干扰素γ(IFNγ)的效能。因为IL-2经由JAK 传导信号，所以此分析法提供JAK细胞效能的量度。

(1)使用ficoll梯度从健康供体的人类全血分离人类外周血液单核细胞(PBMC)。将细胞在37℃，5％CO₂含湿气培育箱中在补充有10％热不活化的胎牛血清(FBS，LifeTechnologies)、2mM Glutamax(Life Technologies)、25mM HEPES(Life Technologies)及1×Pen/Strep(Life Technologies)的RPMI(Life Technologies)中培养。细胞以200,000个细胞/孔接种于培养基(50μL)中且培养1小时。将化合物连续稀释于DMSO中，接着在培养基中再稀释500倍(达到2倍最终分析浓度)。将测试化合物(100μL/孔)添加至细胞中，且在37℃，5％CO₂下培育1小时，随后在预温热的分析培养基(50μL)中添加IL-2(R&D Systems；最终浓度100ng/mL)及抗CD3(BD Biosciences；最终浓度1μg/mL)持续24小时。

(2)细胞介素刺激之后，细胞在500g下离心5分钟且移除上清液且在-80℃下冷冻。为了测定测试化合物对IL-2/抗CD3作出反应的抑制效能，经ELISA(R&D Systems) 测量上清液IFNγ浓度。通过分析IFNγ的浓度对比化合物浓度的抑制曲线来测定IC₅₀值。数据表示为pIC₅₀(负十进制对数IC₅₀)值。实例2的化合物在此分析法中展现约7.1 的pIC₅₀值。

分析法9：细胞JAK效能分析法：CD4+T细胞中IL-2刺激的pSTAT5的抑制

使用流式细胞测量术在从人类全血分离的人类外周血液单核细胞(PBMC)(Stanford Blood Center)中在CD4-阳性(CD4+)T细胞中测量测试化合物抑制介白素-2(IL-2)/抗CD3 刺激的STAT5磷酸化的效能。因为IL-2经由JAK传导信号，所以此分析法提供JAK细胞效能的量度。

使用藻红素(PE)结合的抗CD4抗体(克隆RPA-T4，BD Biosciences)鉴别CD4+T细胞，而使用Alexa Fluor 647结合的抗pSTAT5抗体(pY694，克隆47，BD Biosciences)检测STAT5磷酸化。

(1)遵照分析法8段落(1)的方案，不同之处在于用抗CD3的细胞介素刺激进行30分钟而非24小时。

(2)细胞介素刺激之后，将细胞用预温热的固定溶液(200μL；BD Biosciences)在37℃，5％CO₂下固定10分钟，用DPBS缓冲液(1mL，Life Technologies)洗涤两次，且在4℃下再悬浮于冰冷的彼尔姆缓冲液III(1000μL，BD Biosciences)中30分钟。细胞用含2％FBS的DPBS(FACS缓冲液)洗涤2次，接着在室温下在暗处再悬浮于含有抗CD4 PE(1:50倍稀释)及抗CD3抗CD3Alexa Fluor 647(1:5倍稀释)的FACS缓冲液(100μL) 中持续60分钟。培育之后，细胞在FACS缓冲液中洗涤两次，随后使用LSRII流式细胞仪(BD Biosciences)分析。为了测定测试化合物回应于IL-2/抗CD3的抑制效能，在 CD4+T细胞中测量pSTAT5的中位荧光强度(MFI)。通过分析MFI对比化合物浓度的抑制曲线测定IC₅₀值。数据表示为pIC₅₀(负十进制对数IC₅₀)值。实例2的化合物在此分析法中展现约7.3的pIC₅₀值。

分析法10：细胞JAK效能分析法：CD3+T细胞中IL-4刺激的pSTAT6的抑制

使用流式细胞测量术在从人类全血分离的人类外周血液单核细胞(PBMC)(Stanford Blood Center)中在CD3-阳性(CD3+)T细胞中测量测试化合物抑制介白素-4(IL-4)刺激的 STAT6磷酸化的效能。因为IL-4经由JAK传导信号，所以此分析法提供JAK细胞效能的量度。

使用藻红素(PE)结合的抗CD3抗体(克隆UCHT1，BD Biosciences)鉴别CD3+T细胞，而使用Alexa Fluor 647结合的抗pSTAT6抗体(pY641，克隆18/P，BD Biosciences) 检测STAT6磷酸化。

如分析法8及9中从健康供体的人类全血分离人类外周血液单核细胞(PBMC)。将细胞以250,000个细胞/孔接种于培养基(200μL)中，培养1小时，接着再悬浮于含有各种浓度的测试化合物的分析培养基(50μL)(补充有0.1％牛血清白蛋白(Sigma)、2mM Glutamax、25mM HEPES及1×Penstrep)中。将化合物连续稀释于DMSO中，接着在分析培养基中再稀释500倍(达到2倍最终分析浓度)。将测试化合物(50μL)与细胞一起在 37℃，5％CO₂下培育1小时，随后在预温热的分析培养基中添加IL-4(50μL)(R&D Systems；最终浓度20ng/mL)持续30分钟。细胞介素刺激之后，将细胞用预温热的固定溶液(100μL)(BD Biosciences)在37℃，5％CO₂下固定10分钟，用FACS缓冲液(1mL) (DPBS中2％FBS)洗涤两次，且在4℃下再悬浮于冰冷的彼尔姆缓冲液III(1000μL)(BD Biosciences)中30分钟。细胞用FACS缓冲液洗涤两次，接着在室温下在暗处再悬浮于含有抗CD3 PE(1:50倍稀释)及抗pSTAT6 AlexaFluor 647(1:5倍稀释)的FACS缓冲液 (100μL)中60分钟。培育之后，细胞在FACS缓冲液中洗涤两次，随后使用LSRII流式细胞仪(BD Biosciences)分析。

为了测定测试化合物回应于IL-4的抑制效能，在CD3+T细胞中测量pSTAT6的中位荧光强度(MFI)。通过分析MFI对比化合物浓度的抑制曲线测定IC₅₀值。数据表示为 pIC₅₀(负十进制对数IC₅₀)。实例2的化合物在此分析法中展现7.9的pIC₅₀值。

分析法11：细胞JAK效能分析法：CD3+T细胞中IL-6刺激的pSTAT3的抑制

使用类似于分析法10的方案来测定测试化合物抑制介白素-6(IL-6)刺激的STAT3磷酸化的效能。Alexa Fluor 647结合的抗pSTAT3抗体(pY705，克隆4/P，BD Biosciences)用于检测STAT3磷酸化。

实例2的化合物在此分析法中展现7.2的pIC₅₀值。

晶体结构

获得实例2的化合物的共晶体结构，其以

的分解度结合于人类JAK1。观测到配位体结合于ATP结合位点中。基于供体与受体原子之间

或更小的距离鉴别出七个特异性氢键相互作用。尤其应注意，在实例2的化合物的环外酰胺的羰基与JAK1 的Arg879的侧链之间鉴别出氢键相互作用。在早期建模研究中，已提出此相互作用作为提供JAK1相对于其它酪氨酸激酶的选择性的方式，否则密切相关的激酶(例如TRKA、 VEGFR、ABL1)在同等位置不具有精氨酸残基。晶体结构中氢键相互作用的观测结果及与不具有环外酰胺的系列相比改进的激酶组选择性验证了此设计假设。

虽然本发明已参考其特定方面或实施例进行描述，但一般技术人员应理解，可进行各种变化或可代入等效物，而不偏离本发明的真实精神及范围。另外，在由适用的专利状况及规定允许的程度上，本文中所引用的所有公开案、专利及专利申请案以全文引用的方式并入本文中，所述引用的程度如同将各文件单独地以引用的方式并入本文中一般。

Claims

1.一种式(I)化合物，

其中：

R¹是氢或C_1-3烷基，且X为-C(O)R²

其中

R²是-NR¹³R¹⁴，其中

R⁵及R⁶独立地为C_1-3烷基或R⁵及R⁶与其所连接的氮原子一起形成5元或6元杂环基，并且

R⁷是C_1-3烷基，

或其医药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的化合物或其医药学上可接受的盐，其中R¹为C_1-3烷基。

3.根据权利要求2所述的化合物或其医药学上可接受的盐，其中

R⁵及R⁶独立地为C_1-3烷基，且

R⁷为C_1-3烷基。

4.一种式(II)化合物，

其中：

R¹是C_1-3烷基；

R²是

其中

或其医药学上可接受的盐。

5.根据权利要求4所述的化合物或其医药学上可接受的盐，其中R⁵及R⁶为C_1-3烷基。

6.根据权利要求4所述的化合物，其中所述化合物为(S)-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)(5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[5,4-c]吡啶-6-基)甲酮或其医药学上可接受的盐。

7.根据权利要求4所述的化合物，其中所述化合物为(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(5-乙基-2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[5,4-c]吡啶-6-基)甲酮或其医药学上可接受的盐。

8.根据权利要求4所述的化合物，其中所述化合物是选自：

(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-异丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮，

(S)-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮，

(S)-(3-(二甲基氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)(2-(6-(2-乙基-5-氟-4-羟苯基)-1H-吲唑-3-基)-5-丙基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-基)甲酮，

及其医药学上可接受的盐。

9.一种化合物，其具有下式，

或其医药学上可接受的盐。

10.一种化合物，其具有下式

11.一种医药组合物，其包括根据权利要求1至10中任一权利要求所述的化合物及医药学上可接受的载剂。

12.一种制备式(II)化合物或其医药学上可接受的盐的方法，

其中R¹及R²是根据权利要求4中所定义，所述方法包括使式1化合物：

与式2化合物反应：

H-R²

2

以获得式(II)化合物或其医药学上可接受的盐。

13.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的化合物在制备用于治疗哺乳动物中的呼吸道疾病的药物中的用途。

14.根据权利要求13所述的用途，其中所述呼吸道疾病为哮喘、慢性阻塞性肺病、囊肿性纤维化、肺炎、特发性肺纤维化、急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合症、支气管炎、或类肉瘤病。

15.根据权利要求14所述的用途，其中所述慢性阻塞性肺病为肺气肿。

16.根据权利要求14所述的用途，其中所述呼吸道疾病为哮喘。

17.根据权利要求13所述的用途，其中所述呼吸道疾病是嗜酸性粒细胞疾病、蠕虫感染、肺动脉高血压、肺淋巴管平滑肌增生症、支气管扩张、浸润性肺病、药物诱发性肺炎、真菌诱发性肺炎、过敏性支气管肺曲霉病、过敏性肺炎、伴随多血管炎的嗜酸性粒细胞肉芽肿、特发性急性嗜酸性粒细胞肺炎、特发性慢性嗜酸性粒细胞肺炎、嗜酸性粒细胞增多综合症、洛弗勒综合症、阻塞性细支气管炎伴有机化肺炎、肺移植物抗宿主病或免疫检查点-抑制剂诱发的肺炎。

18.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的化合物在制备用于治疗哺乳动物中的肺移植排斥反应的药物中的用途。

19.根据权利要求18所述的用途，其中所述肺移植排斥反应为原发性移植物功能障碍、机化性肺炎、急性排斥反应、淋巴细胞性细支气管炎或慢性肺同种异体移植功能障碍。

20.根据权利要求18所述的用途，其中所述肺移植排斥反应为急性肺移植排斥反应。

21.根据权利要求18所述的用途，其中所述肺移植排斥反应是慢性肺同种异体移植功能障碍。

22.根据权利要求18所述的用途，其中所述肺移植排斥反应是阻塞性细支气管炎、限制性慢性肺同种异体移植功能障碍或嗜中性同种异体移植功能障碍。

23.根据权利要求13所述的用途，其中所述呼吸道疾病为阻塞性细支气管炎。