CN110114677B

CN110114677B - 使用了免疫凝聚反应的浓度测定中的受试物质浓度的适当性的判定方法及具有用于该判定方法的处理部的试样分析装置

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Publication number: CN110114677B
Application number: CN201780077568.5A
Authority: CN
Inventors: 伊串达夫; 前田拓斗
Original assignee: Horiba Ltd
Current assignee: Horiba Ltd
Priority date: 2016-12-15
Filing date: 2017-09-12
Publication date: 2023-06-20
Anticipated expiration: 2037-09-12
Also published as: US20200080935A1; CN110114677A; JP2022046716A; EP3557253A1; JPWO2018110006A1; WO2018110006A1; JP7101124B2; EP3557253A4

Abstract

本发明提供一种方法、以及具有用于实行该方法的处理部的试样分析装置，所述方法是判定反应液中的受试物质的浓度是否是对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度的方法，该方法包括：对于在反应液中产生的受试物质和其结合配偶体之间的免疫凝聚反应，基于在该反应的第1期间中的该反应液的散射光强度及在该反应的第2期间中的该反应液的散射光强度，决定与在该第1期间中的散射光强度的变化速度和在该第2期间中的散射光强度的变化速度之间的变动有关的指标值的工序；以及通过比较该指标值和预先设定的阈值，从而判定该受试物质的浓度是否为适当范围内的浓度的工序。

Description

使用了免疫凝聚反应的浓度测定中的受试物质浓度的适当性的判定方法及具有用于该判定方法的处理部的试样分析装置

技术领域

本发明涉及大致使用了免疫凝聚反应的浓度测定法的技术领域，更详细而言，涉及判定受试物质的浓度是否是对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度的方法、以及具有用于该方法的处理部的试样分析装置。

背景技术

在使用免疫凝聚反应的浓度测定法中，作为在使用该测定试剂的自动分析装置中的光学测定方法，使用吸光度测定及散射光测定(专利文献1)。

在这些光学测定中，使用表示从反应开始起特定时间后的浊度的变化速度与样品浓度的关系的校准曲线，基于所测定的浊度的变化速度进行受试物质的定量。在这些校准曲线中，随着受试物质的浓度变高，斜率变小，在更高浓度区域中产生斜率为反梯度的区域(前带区域)。

在前带区域中，根据校准曲线产生2个解，因此不能进行定量。因此，判定试验对象是否包含在前带区域中的高浓度物质、并且判定是否在前带区域中测定受试物质在使用自动分析装置的测定中是至关重要的。

以往，为了判定前带区域，使用了反应初始吸光度的值、直至使吸光度稳定为止的时间、反应初始吸光度的变化速度等。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：WO 2014/192963 A1

发明内容

发明要解决的课题

基于如上所述的现有技术的前带区域的判定，是通过在直至反应达到平衡为止采取充分长的测定时间而利用此时的一定时间内的初始吸光度和直至该时间为止的吸光度变化量等的判定。然而，为了在更短时间内完成测定，理想的是能够在反应的初始阶段进行前带判定的方法。

另外，理想的是不易受到由试剂变动等所致的测定结果变动的影响的耐用的判定方法。

本发明是鉴于该技术领域中的上述问题而完成的发明，其课题在于提供在短时间内不易受到测定变动的影响的、判定受试物质的浓度是否为对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度的方法以及具有用于该方法的处理部的试样分析装置。

用于解决课题的手段

本发明人对上述的课题进行了深入研究，结果发现：利用吸光度(透射光)测定求得免疫凝聚反应的第1期间的浊度变化速度与第2期间的浊度变化速度之比，并将该比与规定的阈值进行比较，由此即使在反应未达到平衡的短时间内，也可以进行受试物质浓度的适当性的判定。然而，在使用利用吸光度测定求得的上述比的情况下，在接近前带区域的受试物质浓度下，该比的测定值与阈值之差小，存在容易受到包括试剂变动在内的测定结果变动的影响。

为此，本发明人进一步研究了改良，结果想到代替利用吸光度测定求得的上述比而使用与在反应的第1期间的散射光强度变化速度和第2期间的散射光强度变化速度之间的变动有关的指标值的方法论。与使用透射光的情况相比，利用散射光强度的测定求得的指标值能够增大与受试物质的浓度增加相伴随的该指标值增加的程度，并且发现在前带区域附近的高浓度范围内该指标值达到一定值以上。因此可知：即使是受试物质浓度为前带区域附近的样品，也能增大用于前带判定的阈值与所测定的该指标值之间的差值，由此能够不易受到测定变动的影响。本发明人基于这些发现进行进一步的研究，以至完成本发明。

即，本发明提供以下内容。

[1]一种方法，其是判定反应液中的受试物质的浓度是否是对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度的方法，

该方法包括：

对于在反应液中产生的受试物质和其结合配偶体之间的免疫凝聚反应，基于在该反应的第1期间中的该反应液的散射光强度及在该反应的第2期间中的该反应液的散射光强度，决定与在该第1期间中的散射光强度的变化速度和在该第2期间中的散射光强度的变化速度之间的变动有关的指标值的工序；以及

通过比较该指标值和预先设定的阈值，从而判定该受试物质的浓度是否为适当范围内的浓度的工序。

[2]根据上述[1]所述的方法，其中，该指标值为在该第1期间中的散射光强度的变化速度与在该第2期间中的散射光强度的变化速度之比。

[3]根据上述[1]或[2]所述的方法，其中，作为上述的散射光强度，使用散射光强度的测定值与透射光强度的测定值之比。

[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的方法，其中，该反应液来自于包含该受试物质的湿性生物试样。

[5]根据上述[4]所述的方法，其中，该湿性生物试样为选自血液、唾液、尿、汗、淋巴液及咳痰中的物质。

[6]根据上述[1]～[5]中任一项所述的方法，其中，该受试物质为选自蛋白质、肽、脂质、核酸、多糖类、糖类及抗体中的物质。

[7]根据上述[1]～[6]中任一项所述的方法，其中，该反应液是通过将包含该受试物质的样品试样和包含担载有该结合配偶体的不溶性载体颗粒的悬浮液混合而制备的液体。

[8]根据上述[7]所述的方法，其中，该不溶性载体颗粒包含选自乳胶、金属胶体、二氧化硅、碳及磁性体颗粒中的1种以上。

[9]根据上述[1]～[8]中任一项所述的方法，其中，该适当范围的浓度既不是产生前带现象的浓度也不是其附近的浓度。

[10]根据上述[1]～[9]中任一项所述的方法，其还包括：在测定受试物质的浓度、并且该测定到的浓度低于规定的阈值浓度的情况下，判定该受试物质的浓度不为适当范围内的浓度的工序。

[11]一种试样分析装置，其具有：

散射光强度测定部，用于测定散射光强度；

指标值决定部，对于在反应液中产生的受试物质和其结合配偶体之间的免疫凝聚反应，基于在该反应的第1期间中的该反应液的散射光强度及在该反应的第2期间中的该反应液的散射光强度，决定与在该第1期间中的散射光强度的变化速度和在该第2期间中的散射光强度的变化速度之间的变动有关的指标值；以及

第1判定部，通过将该指标值和预先设定的阈值进行比较，从而判定该受试物质的浓度是否是对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度。

[12]根据上述[11]所述的试样分析装置，其中，该指标值为在该第1期间中的散射光强度的变化速度与在该第2期间中的散射光强度的变化速度之比。

[13]根据上述[11]或[12]所述的试样分析装置，其还具有用于测定透射光强度的透射光强度测定部，

作为上述的散射光强度，使用散射光强度的测定值与透射光强度的测定值之比。

[14]根据上述[11]～[13]中任一项所述的试样分析装置，其是用于对包含该受试物质的湿性生物试样进行分析的装置。

[15]根据上述[14]所述的试样分析装置，其中，该湿性生物试样为选自血液、唾液、尿、汗、淋巴液及咳痰中的物质。

[16]根据上述[11]～[15]中任一项所述的试样分析装置，其中，该第1判定部为对该受试物质的浓度是否既不是产生前带现象的浓度也不是其附近的浓度进行判定的部件。

[17]根据上述[11]～[16]中任一项所述的试样分析装置，其还具有用于测定受试物质的浓度的浓度测定部。

[18]根据上述[17]所述的试样分析装置，其还具有：第2判定部，用于在所测定的该受试物质的浓度低于规定的阈值浓度的情况下，判定该受试物质的浓度不为适当范围内的浓度。

发明效果

根据本发明，能够提供在短时间内不易受到测定变动的影响的、判定受试物质的浓度是否为对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度的方法以及具有用于该方法的处理部的试样分析装置。

附图说明

图1是表示一个实施方式涉及的本发明的试样分析装置的构成的概略的框图的图。

图2是概略地表示本发明的试样分析装置可以具有的光学系统的构成例的框图。

图3是表示另一个实施方式涉及的本发明的试样分析装置的构成的概略的框图的图。

图4是表示对包含已知浓度的CRP的血清进行测定时的测定表示值的变化的图。

图5是表示分别使用散射光及吸光度时的弯曲值相对于血清CRP浓度的变化的图。

具体实施方式

以下，对于本发明的判定方法及具有用于该方法的处理部的本发明的试样分析装置，示出其例示性的方式进行详细的说明。

(判定方法)

本发明提供判定反应液中的受试物质的浓度是否是对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度的方法。

本发明的判定方法包括：

在本说明书中，“免疫凝聚反应”是指通过抗原与抗体的反应而发生凝聚的反应。在本发明中特别是指对于受试物质和其结合配偶体之间的抗原-抗体反应进行应答而发生在反应液中存在的颗粒的凝聚的反应。该凝聚可能会带来反应液的浊度的增加。通过对由免疫凝聚反应产生的颗粒的凝聚进行定量，从而测定受试物质的浓度。一般而言，已知在使用免疫凝聚反应的浓度测定法中产生“前带现象”或者被称作“钩子效应(Hook-effect)”的现象，所述被称作“钩子效应(hook-effect)”的现象在抗原-抗体反应中抗原量或抗体量过剩的情况下，所测定的信号值减少，其结果赋予比原本应该得到的受试物质浓度更低的受试物质浓度、或仅由该信号值不能唯一地确定受试物质浓度。在一个实施方式中，本发明的判定方法是判定在使用免疫凝聚反应的受试物质的浓度测定中是否产生前带现象的方法。另外，一般而言，因试剂量的变动等而可能使测定结果发生变动，因此即使是与产生前带现象的浓度区域(在本说明书中也称作前带区域。)接近的浓度区域，也存在对于用于浓度测定而言不适当的可能性。因此，在优选的实施方式中，本发明的判定方法是判定受试物质的浓度不为前带区域内或其附近的区域内的浓度(换言之，怀疑有产生前带现象的可能性的浓度)的方法。

另外，本发明的判定方法可以进一步包含以下工序：在测定受试物质的浓度、并且该测定的浓度低于规定的阈值浓度的情况下，判定该受试物质的浓度不是适当范围内的浓度。该工序优选在本发明涉及的“指标值”的决定工序之前进行。这是由于：一般在低浓度区域中测定再现性并不良好，并且反应开始后初始的浊度变化小，因此该指标值的数值不稳定。

本发明的判定方法可以与使用免疫凝聚反应的受试物质的浓度测定一起进行。通过使用本发明的判定方法，从而可以判定是否对适当浓度范围内的受试物质进行了该测定。浓度测定值的取得方法并无特别限定。例如可以测定透射光(吸光度)、散射光、或者透射光及散射光，并基于所得的信号值和校准曲线来决定浓度。

在本说明书中，“反应液”只要是通过在该液中共存受试物质、其结合配偶体和颗粒而进行免疫凝聚反应的反应液，则并无特别限定。该反应液例如可以通过将包含受试物质的试样和(i)包含结合配偶体及颗粒的溶液、或者(ii)包含结合配偶体的溶液及包含颗粒的溶液混合来制备。

本发明涉及的作为分析对象的试样并无特别限定，但通常为湿性生物试样。作为湿性生物试样，可列举例如血液(全血、血清、血浆)、唾液、尿、汗、淋巴液、咳痰等体液。另外，在“包含受试物质的试样”中不仅包含如上所述的试样本身，而且还包含用于分析目的的进行各种调制(例如与缓冲溶液等的混合或稀释等)的试样。为了进行稀释，可以使用pH5～11、优选pH6～10的缓冲溶液，具体为磷酸缓冲溶液、甘氨酸缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液、硼酸缓冲溶液、柠檬酸缓冲溶液等。

在本说明书中，“受试物质”只要是使用免疫凝聚反应能够测定浓度的受试物质，则并无特别限定。受试物质可以为例如蛋白质、肽、脂质、核酸、多糖类及糖类等的抗原或抗体。作为抗原，可列举各种的抗原、受体、激素及激素样物质、药物、酶等，具体而言，可列举例如C反应性蛋白质(CRP)、胰岛素、人纤维素蛋白原、微量白蛋白、IV型胶原、支原体抗原、HBs抗原、血红蛋白A1c等。作为抗体，可列举与各种疾病相关联的自身抗体、对各种的毒素或病原菌等的抗体等，具体而言，可列举例如：类风湿因子、抗核抗体、抗CCP抗体、抗DNA抗体、抗ENA抗体、抗内因子抗体、抗磷脂抗体等自身抗体；抗梅毒抗原抗体、抗梅毒螺旋体抗体、抗HBs抗体、抗HBc抗体、抗HBe抗体、抗胰岛素抗体、抗CRP抗体、抗磷脂抗体等。

受试物质的结合配偶体只要是可以与受试物质发生抗原-抗体反应、并且利用该反应能诱发颗粒的凝聚的物质，则并无特别限定。另外，为了诱发颗粒的凝聚，可以根据需要或期望进行成分(例如能够与作为1次抗体的结合配偶体特异性结合的2次抗体)的追加。结合配偶体适宜为例如蛋白质、肽、脂质、核酸、多糖类及糖类等抗原或抗体。

结合配偶体可以在制备反应液的时刻担载于颗粒上，或者也可以在该时刻不担载于颗粒上(作为后者的例子，可列举血红蛋白A1c的测定等。)。担载于颗粒上的结合配偶体的量或结合配偶体与颗粒的量比还根据所使用的具体物质等的不同而不同，并无特别限定。

颗粒只要是能够利用受试物质和其结合配偶体的抗原-抗体反应诱发凝聚的颗粒，则并无特别限定。该颗粒优选为不溶性载体颗粒。作为不溶性载体颗粒，可以使用公知的载体颗粒。作为载体的材质，可列举例如：聚苯乙烯、苯乙烯-甲基丙烯酸共聚物、苯乙烯-(甲基)丙烯酸缩水甘油酯共聚物、苯乙烯-苯乙烯磺酸盐共聚物、甲基丙烯酸聚合物、丙烯酸聚合物、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物、氯乙烯-丙烯酸酯共聚物、聚乙酸乙烯酯丙烯酸酯等合成高分子粉末；金属胶体(金、钛、镍等)、二氧化硅、碳、磁性体颗粒等。使水或水系介质中稳定地悬浮各种高分子微颗粒的乳胶被频繁地用于该技术领域中，在本发明中也被列举为优选的载体颗粒。

不溶性载体颗粒的粒径并无特别限定，还根据在本发明中所使用的测定方法或颗粒的材质等而不同，通常为0.01～1.0μm，优选为0.1～0.7μm左右。另外，溶液中的载体颗粒浓度只要是为了免疫凝聚反应而通常使用的浓度即可，通常优选为1～20重量％。

如上所述，结合配偶体可以在制备反应液的时刻担载于颗粒(优选不溶性载体颗粒)上。使结合配偶体担载于不溶性载体颗粒的方法并无特别限定，可以使用物理吸附法及基于共价键的化学键合法等以往公知的方法。另外，在担载后可以适宜进行使用BSA(牛血清白蛋白)等的阻滞处理等公知的处理。

包含结合配偶体和/或颗粒的溶液，适宜为以水或水系介质为基础的溶液。该溶液可以进一步包含稳定化剂或凝聚促进剂等追加成分。或者，这些追加成分可以被添加到包含受试物质的试样溶液中，或者也可以被另行添加到发生免疫凝聚反应的反应液中。作为稳定化剂，可列举例如如上所述的缓冲溶液、聚乙二醇或多糖类等合成或天然高分子、表面活性剂等。作为凝聚促进剂，可列举例如聚乙二醇、聚乙烯基吡咯烷酮、羧甲基纤维素、葡聚糖、支链淀粉、磷脂聚合物等合成或天然高分子。另外，可以在混合前的任一溶液或反应液中根据需要适当添加表面活性剂、合成或天然高分子、有机或无机试剂等。

通过将如上所述的、包含受试物质的试样溶液与包含结合配偶体和/或颗粒的1种以上的溶液(任意地包含追加成分的再一种溶液)混合，从而可以在该混合液(反应液)中开始免疫凝聚反应。

在免疫凝聚反应开始后，基于在该反应的第1期间中的该反应液的散射光强度及在该反应的第2期间中的该反应液的散射光强度，决定与在第1期间中的散射光强度的变化速度和在第2期间中的散射光强度的变化速度之间的变动有关的指标值。

第1期间及第2期间的选择只要不明显损害所决定的指标值的可靠性，则可以为任意的期间。第1期间和第2期间可以部分重复。一般而言，在反应刚开始后(例如从反应开始到5秒为止)反应液还未被充分地搅拌，因此存在无法得到稳定的信号的可能性，因此该期间优选不作为第1期间或第2期间来使用。另外，出于能够进行在短时间内的判定的目的，还会根据具体的反应体系的不同而不同，但是，第1期间及第2期间为从反应开始起的例如5分钟以内，优选为3分钟以内，更优选为2分钟以内，进一步优选为1分钟以内的期间。

在一个实施方式中，第1期间及第2期间中的一者为在反应开始后浊度急速变化的期间(反应的前期)，另一者为度过浊度急速变化的期间而浊度的变化变缓后的期间(反应的后期)。更详细而言，例如，反应的前期适宜为包含浊度达到反应变得平衡时的浊度的20％的时刻的期间，反应的后期适宜为包含浊度达到反应变得平衡时的70％的时刻的期间。实际上，这些期间可以通过任意地确定测定时间、并由测定期间适当定义前期及后期来决定。虽然还根据作为对象的反应体系的不同而不同，但是，具体而言，例如在1测定的情况下，可以将从反应开始起的11～30秒设为反应的前期，将从反应开始起的41～60秒设为反应的后期。

为了决定上述指标值而使用的散射光强度，适宜为在第1期间的2个以上的时刻测定的该反应液的散射光强度及在第2期间的2个以上的时刻测定的该反应液的散射光强度。在该情况下，第1期间及第2期间的时间长度(即该2个以上的时刻间的最大的时间差)并无特别限定，但从提高在各期间中的散射光强度的变化速度的可靠性的观点出发，分别通常为10～25秒，优选为15～20秒。

在第1期间或第2期间中的散射光强度的变化速度，只要表示在该期间内的散射光强度的变化速度的程度，则并无特别限定，可以为在各期间内的确定的时刻的变化速度，或者也可以表示各期间内的整体的变化速度。具体而言，该变化速度可以通过例如以下方式等来决定，即，(a)通过在该期间内等间隔(例如每1秒)地测定散射光强度，从而求得在各时刻的每单位时间的散射光强度的变化量，再将其遍布该期间进行平均；或者(b)在该期间内的任意的2个时刻测定散射光强度，再由测定值之间的变化量除以2个时刻间的时间长度。或者，也可以由在多个时刻的散射光强度的测定值制作与散射光强度的时间变化有关的图，再由该图中的曲线的切线的斜率决定变化速度。

在本发明中，“散射光强度”只要定量地表示来自作为测定对象的反应液中的散射光的强度，则并无特别限定。在优选的实施方式中，作为给定的时刻t的散射光强度，如下述式所示，可以使用在时刻t的散射光强度的测定值与透射光强度的测定值之比：

散射光强度(t)＝S(t)/T(t)；

(式中，S(t)表示在时刻t测定的散射光强度，T(t)表示在时刻t测定的透射光强度。)

散射光的信号根据入射于测定位置的光量而发生变动，因此通过使用这样定义的散射光强度，从而可以用衰减后的透射光修正在溶液中的测定位置的表观散射光。

在散射光强度(及根据情况为透射光强度)的测定中使用的光源并无特别限定，可以使用灯、半导体激光器、LED(发光二极管)等。从能够照射单波长的观点出发，优选半导体激光器。对于照射光波长，也并无特别限定，优选使用530～780nm(例如650nm)的波长区域的照射光。另外，例如在由全血试样进行CRP的测定的情况下，为了回避血红蛋白的吸收波长，优选使用600～780nm的照射光。

对于散射光强度的测定中使用的散射角度，也并无特别限定，但出于降低在散射光测定中的透射光的影响、并且对充分强度的散射光进行受光的目的，优选为3～85度，更优选为35～55度。

指标值的计算方法只要是表示在第1期间中的散射光强度的变化速度和在第2期间中的散射光强度的变化速度之间的变动程度的计算方法，则并无特别限定。作为指标值的具体例，可列举该2个变化速度之间的比(例如为如实施例中记载那样在反应后期中的散射光强度的变化速度相对于在反应前期中的散射光强度的变化速度之比)或该2个变化速度之间的差等。

如果如上述那样地决定指标值，则通过将该指标值与预先设定的阈值进行比较，从而判定受试物质的浓度是否为对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度。

阈值可以采用使用多个含有已知浓度的受试物质的试样制作的校准曲线及对这些试样分别得到的上述指标值来设定。即，例如，根据使用多个含有已知浓度的受试物质的试样制作的校准曲线，将产生前带现象的浓度或其附近的浓度设定为阈值浓度C₀，再在与本发明的判定方法中的测定方法同一条件下求得在该阈值浓度C₀下的指标值A₀，可以将所得的指标值A₀设定为上述阈值。根据对样品试样确定的指标值是大于这样设定的阈值A₀还是比其小，可以判定样品试样中的受试物质浓度是否处于前带区域或其附近的浓度区域。

(试样分析装置)

本发明还提供试样分析装置。本发明的试样分析装置是具有用于实行上述的本发明的判定方法的处理部的装置。因此，关于本发明的判定方法的上述全部的实施方式及优选的方式等也可以同样地对于本发明的试样分析装置进行应用。因此，关于作为采用该装置的分析对象的试样及受试物质，也可以应用上述的记载。

本发明的试样分析装置具有：

散射光强度测定部，用于测定散射光强度；

一个实施方式涉及的本发明的试样分析装置的概略的框图如图1所示。

本例的试样分析装置10被构成为具有散射光强度测定部11、透射光强度测定部12、指标值决定部13及第1判定部14。关于本发明的判定方法，如上述所示，作为为了本发明涉及的判定而使用的散射光强度，可以使用以透射光强度的测定值修正散射光强度的测定值后的值，在本例中，为了该目的，在作为本发明的装置中必须的构成部件的散射光强度测定部11、指标值决定部13及第1判定部14的基础上，还具有透射光强度测定部12。但是，在本发明的实施中，未必需要采用透射光强度的散射光强度的修正，因此，透射光强度测定部12并非必须的构成部件。

散射光强度测定部11及透射光强度测定部12可以如图2中例示的概略的框图所示那样作为一个光学系统来构成。图2所示的光学系统被构成为具有光源31、测定单元32、散射光受光部33、透射光受光部34及控制部35。光源31适宜为灯、半导体激光器、LED(发光二极管)等，从能够照射单波长的观点出发，优选半导体激光器。在测量单元32中设置样品溶液，并从光源31对其照射光。该散射光及透射光分别被散射光受光部33及透射光受光部34进行受光。这些受光部适宜为由光电二极管等受光元件构成的受光部。来自散射光受光部33及透射光受光部34的模拟信号被传送到控制部35中，控制部35将其转换为数字信号。控制部35还驱动光源31、散射光受光部33及透射光受光部34，因此向它们供给电力。用于测量散射光强度及透射光强度的上述的构成，可以使用与以往公知的光学测定装置同样的构成。另外，光的波长或散射角度等各种参数与本发明的判定方法有关而如上述所示。

指标值决定部13及第1判定部14可以作为一个控制装置来构成。该控制装置在优选的实施方式中使用计算机进行安装。

指标值决定部13由散射光强度测定部11的例如控制部35来接收在各测量时间完成的散射光强度、以及与这些散射光强度对应的从反应开始起的经过时间的数据。指标值决定部13基于所接收的这些数据来决定有关本发明的判定方法的如上所述的指标值。

第1判定部14通过将由指标值决定部13决定的指标值和例如由用户预先对第1判定部14设定的阈值进行比较来判定样品试样中的受试物质浓度的适当性。适当性的判定方法与本发明的判定方法有关而如上述所示。

另一实施方式涉及的本发明的试样分析装置的概略的框图如图3所示。

本例的试样分析装置20被构成为在散射光强度测定部21、透射光强度测定部22、指标值决定部23及第1判定部24的基础上具有浓度测定部25及第2判定部26。散射光强度测定部21、透射光强度测定部22、指标值决定部23及第1判定部24适宜为分别与关于图1所示的试样分析装置10所说明的、散射光强度测定部11、透射光强度测定部12、指标值决定部13、及第1判定部14同样的构成。

浓度测定部25是用于测定样品试样中的受试物质的浓度的功能部。用于浓度测定的方法并无特别限定，例如可以使用透射光强度的测定值和/或散射光强度的测定值和预先制作的校准曲线并利用本身公知的方法来测定浓度。因此，在图3中，用虚线将浓度测定部25和透射光强度测定部22及散射光强度测定部21连接。

第2判定部26是用于在由浓度测定部25测定的受试物质的浓度低于规定的阈值浓度的情况下判断该受试物质的浓度不是适当范围内的浓度的功能部。关于本发明的判定方法，如上述所示，基于第2判定部的判定优选在基于第1判定部的判定之前进行。试样分析装置20优选被构成为：在由第2判定部判定受试物质浓度不在适当范围内时，将其报告给用户，使其不进行用于基于第1判定部的判定的进一步的处理(即追加的透射光和/或散射光强度测定、基于指标值决定部及第1判定部的处理)。

以下，列举更具体的实施例对本发明进行说明，但是，本发明并不受以下实施例的限定。

例如，利用以下的步骤，可以测定来自血液试样的C反应性蛋白质(CRP)浓度。

CRP测定步骤

1.抽取缓冲溶液，排出到测定单元内。

2.接着，抽取溶血试剂，排出到测定单元内。

3.抽取样品，排出到测定单元内。

4.抽取乳胶试剂，排出到测定单元内。

5.充分搅拌测定单元内的溶液。

6.发生免疫反应，进行CRP测定。在1分钟内测定每秒的吸光度的变化。此时的数据经过信号处理部而取入到计算部。

7.若上述测定结束，则将CRP试样池用稀释液进行清洗，全部的测定结束。

8.基于通过测定得到的数据，求出从20秒到60秒的吸光度的时间变化量，根据预先由已知浓度的血清求得的校准曲线得到CRP浓度。

(将横轴设为吸光度的时间变化，将纵轴设为浓度，预先制作了校准曲线。)

利用上述的步骤，使用以已知的浓度包含CRP的10个试样，开始与担载有对CRP的抗体的乳胶的免疫凝聚反应。之后，结合吸光度测定来测定散射光强度。在散射光强度的测定中使用波长650nm、散射角45度的散射光和透射光的信号。对于各反应液，决定基于浊度(吸光度)的弯曲值及基于散射光量的弯曲值。弯曲值为本发明涉及的指标值的一例，具体而言，如以下所示地进行计算。

弯曲值＝Sp(40-59)/Sp(10-29)

Sp(10-29)为从试剂反应开始后10秒～29秒的平均单位时间变化量

Sp(40-59)为从试剂反应开始后40秒～59秒的平均单位时间变化量

浊度和散射光使用按照以下的关系求得的值。

浊度＝―log(T_t/T₀)

T₀：检测体系空白时的透射光量

T_t：在反应时间t的透射光量

散射光＝S_t/T_t

S_t：在反应时间t的散射光量

图4是将浓度已知的血清蛋白和用吸光度测定时的测定值的关系绘制成的图。血清浓度32mg/dl为峰值，比该浓度高的血清被观察到表观测定值较小。以相同的血清浓度测定吸光度和散射光的弯曲值时的关系如图5所示。由吸光度求得的弯曲值在8～32mg/dL内变化量较大，之后，缓慢地增加至100mg/dL。

由散射光计算到的弯曲值在血清浓度8～16mg/dl内急剧地增加，之后大幅地增加至32mg/dL。之后，不依赖于血清浓度而显示恒定值。

为了高精度地判定前带，在通常测定浓度下显示较小的值，若接近前带，则具有该数值大幅变化的性质的指标较佳。若考虑到测定变动的影响，则指标的变化幅度越小的指标与变化幅度大的指标相比更能在低浓度下进行判定。对于图5中的16mg/dL～32mg/dL的数值变化量，若将吸光度的情况设为ΔR_L，将散射光的情况设为ΔR_S，则散射光的数值与吸光度的数值相比，相对于相同浓度变化量的变化量大1.8倍。该数值越大，测定变动的影响越小，能够进行更高精度的前带判定。若将前带判定的阈值在吸光度和散射光中设为D_T和D_S，则在散射光下的D_S与吸光度的D_T相比，相对于阈值的变化量的余裕更大，可见进一步改善了测定变动影响。

本申请以在日本申请的日本特愿2016-243796(申请日：2016年12月15日)作为基础，其内容全部包含在本说明书中。

符号说明

10，20 试样分析装置

11，21 散射光强度测定部

12，22 透射光强度测定部

13，23 指标值决定部

14，24 第1判定部

25 浓度判定部

26 第2判定部

31 光源

32 测定单元

33 散射光受光部

34 透射光受光部

35 控制部

Claims

1.一种方法，其是判定反应液中的受试物质的浓度是否是对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度的方法，所述使用免疫凝聚反应的浓度测定为使用表示通过测定透射光强度所得的从反应开始起特定时间后的浊度的变化速度与样品浓度的关系的校准曲线，基于所测定的浊度的变化速度进行受试物质的定量的浓度测定，

该方法包括：

测定散射光强度的工序；

2.根据权利要求1所述的方法，其中，该指标值为在该第1期间中的散射光强度的变化速度与在该第2期间中的散射光强度的变化速度之比。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，作为所述的散射光强度，使用散射光强度的测定值与透射光强度的测定值之比。

4.根据权利要求2所述的方法，其中，作为所述的散射光强度，使用散射光强度的测定值与透射光强度的测定值之比。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，该反应液来自于包含该受试物质的湿性生物试样。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，该湿性生物试样为选自血液、唾液、尿、汗、淋巴液及咳痰中的物质。

7.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，该受试物质为选自蛋白质、肽、脂质、核酸、多糖类、糖类及抗体中的物质。

8.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，该反应液是通过将包含该受试物质的样品试样和包含担载有该结合配偶体的不溶性载体颗粒的悬浮液混合而制备的液体。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，该不溶性载体颗粒包含选自乳胶、金属胶体、二氧化硅、碳及磁性体颗粒中的1种以上。

10.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，该适当范围的浓度既不是产生前带现象的浓度也不是其附近的浓度。

11.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其还包括：在测定受试物质的浓度、并且该测定到的浓度低于规定的阈值浓度的情况下，判定该受试物质的浓度不为适当范围内的浓度的工序。

12.一种试样分析装置，该试样分析装置具有：

散射光强度测定部，用于测定散射光强度；

第1判定部，通过将该指标值和预先设定的阈值进行比较，从而判定该受试物质的浓度是否是对于用于使用免疫凝聚反应的浓度测定而言为适当范围内的浓度，所述使用免疫凝聚反应的浓度测定为使用表示通过测定透射光强度所得的从反应开始起特定时间后的浊度的变化速度与样品浓度的关系的校准曲线，基于所测定的浊度的变化速度进行受试物质的定量的浓度测定。

13.根据权利要求12所述的试样分析装置，其中，该指标值为在该第1期间中的散射光强度的变化速度与在该第2期间中的散射光强度的变化速度之比。

14.根据权利要求12所述的试样分析装置，其还具有用于测定透射光强度的透射光强度测定部，

作为所述的散射光强度，使用散射光强度的测定值与透射光强度的测定值之比。

15.根据权利要求13所述的试样分析装置，其还具有用于测定透射光强度的透射光强度测定部，

16.根据权利要求12~15中任一项所述的试样分析装置，其是用于对包含该受试物质的湿性生物试样进行分析的装置。

17.根据权利要求16所述的试样分析装置，其中，该湿性生物试样为选自血液、唾液、尿、汗、淋巴液及咳痰中的物质。

18.根据权利要求12~15中任一项所述的试样分析装置，其中，该第1判定部为对该受试物质的浓度是否既不是产生前带现象的浓度也不是其附近的浓度进行判定的部件。

19.根据权利要求12~15中任一项所述的试样分析装置，其还具有用于测定受试物质的浓度的浓度测定部。

20.根据权利要求19所述的试样分析装置，其还具有：第2判定部，用于在所测定的该受试物质的浓度低于规定的阈值浓度的情况下，判定该受试物质的浓度不为适当范围内的浓度。