CN109797177A - 一种从连翘叶中制备连翘脂素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种从连翘叶中制备连翘脂素的方法,包括如下步骤：1)将连翘叶粉碎，过40目筛，喷洒适量水至连翘叶粗粉含水量为30％‑60％，控制温度为25～50℃，保温发酵1～3h后烘干；2)将上述连翘叶发酵产物用含醇溶剂提取、减压浓缩、冷藏静置、过滤、水洗涤沉淀、干燥沉淀得连翘脂素含量为30％以上的粗产物；3)将粗产物用非极性或弱极性大孔吸附树脂柱进行纯化，先用10％～40％乙醇水溶液淋洗2～4个柱体积，再用50％～80％乙醇水溶液淋洗2～4个柱体积，收集50％～80％乙醇淋洗液，减压浓缩干燥，得连翘脂素含量为80％～85％的产物。本发明工艺简单，便于操作，对设备要求低，加工成本低，适用于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及天然植物提取物领域，具体是一种从连翘叶中制备连翘脂素的方法。
背景技术
连翘叶为木犀科(Oleaceae)植物连翘[(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)]的干燥叶，是山西省、四川省地方习用药材，具有清热解毒作用，主要用于心烦尿赤，咽喉肿痛，口舌生疮等疾病的治疗。《玉樵医令》记载“连翘叶味苦、微辛、性寒、可泻火，寒能清热，入心肺二经”，《中华本草》记载“连翘茎叶，味苦，性寒，功能主治为：清热解毒，主治心肺积热”。现代研究表明，连翘叶含有连翘脂素、松脂素、连翘苷、芦丁、连翘酯苷I、连翘酯苷A等化学成分。药理学研究已证明连翘叶提取物具有抑菌、抗氧化、保肝、抗疲劳、降血脂、抗衰老等多种生物活性。
连翘脂素是连翘叶中含量较高的主要活性成分连翘苷的苷元，最早是ShizukaKitagawa(1984)等从连翘叶中提取分离出的木脂素类单体化合物。现代研究表明连翘脂素具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、保肝、降血脂等多种药理活性。连翘脂素虽具有多种药理活性，但因其在连翘叶、果实中的含量不高，因此，目前还没有成熟的转化方法而实现大规模开发利用。近年来，国内外对连翘脂素的制备方法研究已有一些研究，例如，利用微生物将连翘苷转化为连翘脂素、采用纤维素酶水解连翘苷制备连翘脂素，两种制备方法虽然工艺简单，但是需要大量的连翘苷单体，成本较高，很难实现工业化生产。此外，也有报道利用酸碱法处理连翘果实提取物制备连翘脂素的方法，但该方法存在较大环境污染问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从连翘叶中制备连翘脂素的方法。
所述的连翘脂素制备方法，是以连翘叶为原料，经自然发酵、含醇水溶液提取、大孔树脂分离、结晶、重结晶获得。连翘脂素的含量可达到95％以上，连翘脂素具体制备方法，包括如下步骤：
(1)连翘叶发酵：取干燥连翘叶，粉碎，过40目筛，喷洒适量水至连翘叶粗粉含水量为30％～60％，控制温度为25～50℃，保温发酵1～3h后，烘干，得连翘叶发酵产物。
(2)连翘脂素粗产物制备：将上述连翘叶发酵产物用20倍(重量比)、醇浓度为70％～90％的含醇水溶液提取。提取液经减压浓缩、冷藏静置、过滤，收集沉淀用水洗涤1～3次、干燥，得连翘脂素含量为30～35％的粗产物。
(3)连翘脂素纯化：将连翘脂素粗产物用非极性或弱极性大孔吸附树脂柱进行纯化，首先用10％～40％乙醇水溶液淋洗2～4个柱体积，再用50％～80％乙醇水溶液淋洗2～4个柱体积，收集50％～80％乙醇淋洗液，减压浓缩、干燥，得连翘脂素含量为80％～85％的产物。
步骤(1)中所述的连翘叶粗粉含水量优选为50％；发酵温度优选为30℃；保温发酵时间优选为2h。
步骤(2)中所述的70％～90％的含醇水溶液，可为乙醇或甲醇水溶液的任意一种，优选80％乙醇水溶液；沉淀用水洗涤优选为2次。
步骤(3)中所述的非极性或弱极性大孔吸附树脂柱的材料，可为非极性大孔吸附树脂D101或弱极性大孔吸附树脂AB-8的任意一种；淋洗剂优选70％乙醇水溶液。
本发明的有益效果：
本发明从连翘叶中制备连翘脂素的方法，是以药用植物连翘非药用部位连翘叶为原料，经自然发酵、含醇水溶液提取、大孔树脂分离、结晶、重结晶获得连翘脂素。具有如下明显优点：
(1)以连翘叶为原料制备连翘脂素，使资源得到了充分利用。
(2)本发明以连翘叶为发酵底物，不添加任何添加剂，利用植物自身的酶将其他成分转化成连翘脂素，转化后连翘叶发酵产物中连翘脂素的含量比发酵前连翘叶中含量提高25倍以上。
(3)本发明制备条件温和，生产工艺简单、周期短、成本低。利用该工艺可获得不同纯度要求的连翘脂素。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明，而不用于限制本发明的保护范围。
实施例1
从连翘叶中制备连翘脂素的方法，包括以下步骤：
(1)连翘叶发酵：取干燥连翘叶，粉碎，过40目筛，喷洒水至连翘叶粗粉含水量为50％，控制温度为30℃，保温发酵2h后，烘干，得连翘叶发酵产物。经HPLC法测定：按上述方法发酵后，连翘叶发酵产物中连翘脂素含量为47.51mg/g，比未经发酵处理的连翘叶含量提高了28倍。
(2)连翘脂素粗产物制备：上述连翘叶发酵产物用20倍(重量比)、醇浓度为80％的乙醇水溶液提取。提取液经减压浓缩、冷藏静置、过滤，收集沉淀用水洗涤2次、干燥，得连翘脂素含量为35.0％的粗产物。
(3)连翘脂素纯化：连翘脂素粗产物用D101非极性大孔吸附树脂柱纯化，首先用30％乙醇水溶液淋洗3个柱体积，再用70％乙醇水溶液淋洗3个柱体积，收集70％乙醇淋洗液，减压浓缩、干燥，得连翘脂素含量为85.0％的产物。
实施例2
从连翘叶中制备连翘脂素的方法，包括以下步骤：
(1)连翘叶发酵：取干燥连翘叶，粉碎，过40目筛，喷洒水至连翘叶粗粉含水量为50％，控制温度为30℃，保温发酵2h后，烘干，得连翘叶发酵产物。经HPLC法测定：按上述方法发酵后，连翘叶发酵产物中连翘脂素含量为47.51mg/g，比未经发酵处理的连翘叶含量提高了28倍。
(2)连翘脂素粗产物制备：上述连翘叶发酵产物用20倍(重量比)、醇浓度为70％的甲醇水溶液提取。提取液经减压浓缩、冷藏静置、过滤，收集沉淀用水洗涤2次、干燥，得连翘脂素含量为34.2％的粗产物。
(3)连翘脂素纯化：连翘脂素粗产物用AB-8弱极性大孔吸附树脂柱纯化，首先用30％乙醇水溶液淋洗3个柱体积，再用70％乙醇水溶液淋洗3个柱体积，收集70％乙醇淋洗液，减压浓缩、干燥，得连翘脂素含量为84.6％的产物。
实施例3
从连翘叶中制备连翘脂素的方法，包括以下步骤：
(1)连翘叶发酵：取干燥连翘叶，粉碎，过40目筛，喷洒水至连翘叶粗粉含水量为30％，控制温度为25℃，保温发酵2h后，烘干，得连翘叶发酵产物。经HPLC法测定：按上述方法发酵后，连翘叶发酵产物中连翘脂素含量为31.40mg/g，比未经发酵处理的连翘叶含量提高了26.0倍。
(2)连翘脂素粗产物制备：上述连翘叶发酵产物用20倍(重量比)、醇浓度为70％的乙醇水溶液提取。提取液经减压浓缩、冷藏静置、过滤，收集沉淀用水洗涤1次、干燥，得连翘脂素含量为30％的粗产物。
(3)连翘脂素纯化：连翘脂素粗产物用D101非极性大孔吸附树脂柱纯化，首先用10％乙醇水溶液淋洗4个柱体积，再用70％乙醇水溶液淋洗3个柱体积，收集70％乙醇淋洗液，减压浓缩、干燥，得连翘脂素含量为83.5％的产物。
实施例4
从连翘叶中制备连翘脂素的方法，包括以下步骤：
(1)连翘叶发酵：取干燥连翘叶，粉碎，过40目筛，喷洒水至连翘叶粗粉含水量为60％，控制温度为50℃，保温发酵1h后，烘干，得连翘叶发酵产物。经HPLC法测定：按上述方法发酵后，连翘叶发酵产物中连翘脂素含量为31.42mg/g，比未经发酵处理的连翘叶含量提高了25.4倍。
(2)连翘脂素粗产物制备：上述连翘叶发酵产物用20倍(重量比)、醇浓度为90％的乙醇水溶液提取。提取液经减压浓缩、冷藏静置、过滤，收集沉淀用水洗涤3次、干燥，得连翘脂素含量为32.0％的粗产物。
(3)连翘脂素纯化：连翘脂素粗产物用D101非极性大孔吸附树脂柱纯化，首先用40％乙醇水溶液淋洗2个柱体积，再用80％乙醇水溶液淋洗2个柱体积，收集80％乙醇淋洗液，减压浓缩、干燥，得连翘脂素含量为80.6％的产物。
实施例5
从连翘叶中制备连翘脂素的方法，包括以下步骤：
(1)连翘叶发酵：取干燥连翘叶，粉碎，过40目筛，喷洒水至连翘叶粗粉含水量为50％，控制温度为30℃，保温发酵2h后，烘干，得连翘叶发酵产物。经HPLC法测定：按上述方法发酵后，连翘叶发酵产物中连翘脂素含量为43.60mg/g，比未经发酵处理的连翘叶含量提高了26.0倍。
(2)连翘脂素粗产物制备：上述连翘叶发酵产物用20倍(重量比)、醇浓度为80％的乙醇水溶液提取。提取液经减压浓缩、冷藏静置、过滤，收集沉淀用水洗涤2次、干燥，得连翘脂素含量为34.0％的粗产物。
(3)连翘脂素纯化：连翘脂素粗产物用AB-8弱极性大孔吸附树脂柱纯化，首先用30％乙醇水溶液淋洗3个柱体积，再用50％乙醇水溶液淋洗4个柱体积，收集50％乙醇淋洗液，减压浓缩、干燥，得连翘脂素含量为84.5％的产物。
实施例6
从连翘叶中制备连翘脂素的方法，包括以下步骤：
(1)连翘叶发酵：取干燥连翘叶，粉碎，过40目筛，喷洒水至连翘叶粗粉含水量为50％，控制温度为30℃，保温发酵2h后，烘干，得连翘叶发酵产物。经HPLC法测定：按上述方法发酵后，连翘叶发酵产物中连翘脂素含量为46.08mg/g，比未经发酵处理的连翘叶含量提高了28.0倍。
(2)连翘脂素粗产物制备：上述连翘叶发酵产物用20倍(重量比)、醇浓度为80％的乙醇水溶液提取。提取液经减压浓缩、冷藏静置、过滤，收集沉淀用水洗涤2次、干燥，得连翘脂素含量为34.0％的粗产物。
(3)连翘脂素纯化：连翘脂素粗产物用AB-8弱极性大孔吸附树脂柱纯化，首先用30％乙醇水溶液淋洗3个柱体积，再用80％乙醇水溶液淋洗3个柱体积，收集80％乙醇淋洗液，减压浓缩、干燥，得连翘脂素含量为84.2.0％的产物。
Claims (7)
1.一种从连翘叶中制备连翘脂素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)连翘叶发酵：取干燥连翘叶，粉碎，过40目筛，喷洒适量水至连翘叶粗粉含水量为30％～60％，控制温度25～50℃，保温发酵1～3h，烘干，得连翘叶发酵产物；
(2)连翘脂素粗产物制备：将上述连翘叶发酵产物用20倍重量的醇浓度70％～90％的醇水溶液提取，提取液经减压浓缩、冷藏静置、过滤，收集沉淀用水洗涤1～3次、干燥，得连翘脂素粗产物；
(3)连翘脂素纯化：将连翘脂素粗产物用非极性或弱极性大孔吸附树脂柱进行纯化，先用10％～40％乙醇水溶液淋洗2～4个柱体积，再用50％～80％乙醇水溶液淋洗2～4个柱体积，收集50％～80％乙醇淋洗液，减压浓缩、干燥，得连翘脂素产物。
2.如权利要求1所述的从连翘叶中制备连翘脂素的方法，其特征在于，步骤(1)中所述连翘叶粗粉的含水量为50％；发酵温度为30℃；保温发酵时间为2h。
3.如权利要求1所述的从连翘叶中制备连翘脂素的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的醇水溶液，为乙醇或甲醇水溶液；所述沉淀用水洗涤次数为2次。
4.如权利要求3所述的从连翘叶中制备连翘脂素的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的乙醇水溶液为80％乙醇水溶液。
5.如权利要求1所述的从连翘叶中制备连翘脂素的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的非极性大孔吸附树脂柱的材料为非极性大孔吸附树脂D101。
6.如权利要求1所述的从连翘叶中制备连翘脂素的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的弱极性大孔吸附树脂柱的材料为弱极性大孔吸附树脂AB-8。
7.如权利要求1所述的从连翘叶中制备连翘脂素的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的淋洗剂选择70％乙醇水溶液。
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