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CN109476743A - 预防或缓解毒性的早期干预方法 - Google Patents

预防或缓解毒性的早期干预方法 Download PDF

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CN109476743A
CN109476743A CN201780031706.6A CN201780031706A CN109476743A CN 109476743 A CN109476743 A CN 109476743A CN 201780031706 A CN201780031706 A CN 201780031706A CN 109476743 A CN109476743 A CN 109476743A
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CN
China
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therapy
cell
substance
processing
given
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CN201780031706.6A
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M·詹森
R·加德纳
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Seattle Childrens Hospital
Original Assignee
Seattle Childrens Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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Abstract

提供了用于通过预先或早期给予毒性靶向剂来预防或缓解由疗法(如免疫疗法或细胞疗法)所导致或引起的毒性的方法。在一些实施方式中，疗法是细胞疗法，其中细胞一般表达重组受体如嵌合受体，例如，嵌合抗原受体(CAR)或其他转基因受体如T细胞受体(TCR)。该方法的特征，包括给予针对毒性的物质或处理的时间提供了各种优势，如在保持所给予细胞的维持和功效同时具有较低毒性。

Description

预防或缓解毒性的早期干预方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年3月22日提交的题为“预防或缓解毒性的早期干预方法(EarlyIntervention Methods to Prevent or Ameliorate Toxicity)”的美国临时申请号62/311,906、2016年11月3日提交的题为“预防或缓解毒性的早期干预方法(EarlyIntervention Methods to Prevent or Ameliorate Toxicity)”的美国临时申请号62/429,722、和2016年12月2日提交的题为“预防或缓解毒性的早期干预方法(EarlyIntervention Methods to Prevent or Ameliorate Toxicity)”的美国临时申请号62/429,722的优先权，其各自内容通过引用其全文纳入本文。
通过引用纳入序列表
本申请与电子格式的序列表一同提交。所提供的序列表名称为735042005140seqlist.txt，创建于2017年3月22日，其文件大小为17.6kb。序列表的电子格式的信息通过引用其全文方式纳入本文。
技术领域
本公开设计用于通过预先或早期给予毒性靶向剂来预防或缓解由疗法(如免疫疗法或细胞疗法)所导致或引起的毒性的方法。在一些实施方式中，疗法是细胞疗法，其中细胞一般表达重组受体如嵌合受体，例如，嵌合抗原受体(CAR)或其他转基因受体如T细胞受体(TCR)。该方法的特征(包括给予针对毒性的物质或处理的时间)提供了各种优势，如在保持所给予细胞的维持和功效同时具有较低毒性。
背景
各种免疫疗法和/或细胞疗法方法能用于治疗疾病和病症。例如，需要改善的方法以降低这类方法的毒性风险。例如，需要改善的方法以降低例如由给予的细胞的增殖和/或维持而引起的对于细胞疗法的毒性风险，同时保持对象暴露于给予的细胞提供了满足上述需求的方法和用途。
发明内容
在一些方面提供的是这样的处理方法，其包括向对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理。在一些情况中，在所述给予时，对象已经在先接受过治疗，如包括免疫疗法和/或细胞疗法的疗法。在一些实施方式中，在开始给予疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时给予物质或其他处理。在一些实施方式中，在对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时给予物质或其他处理。在一些实施方式中，在对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时给予物质或其他处理。在一些方面中，在疗法开始给予之时与物质或其他处理给予之时之间，对象不表现出重度CRS和/或不表现出2级或更高的CRS。在一些情况中，在细胞疗法开始给予之时与物质或其他处理给予之时之间，对象不表现出重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
在一些实施方式中提供的是这样的处理方法，其包括向已被给予疗法(包括免疫疗法和/或细胞疗法)的对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理。在一些情况中，在开始给予疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时给予物质或其他处理。在一些实施方式中，在对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时给予物质或其他处理。在一些方面中，在细胞疗法开始给予之时与物质或其他处理给予之时之间，对象不表现出重度CRS和/或不表现出2级或更高的CRS。在一些实施方式中，在对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时给予物质或其他处理。在一些方面中，在细胞疗法开始给予之时与物质或其他处理给予之时之间，对象不表现出重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
在一些方面中提供了一种处理方法，其包括向患有疾病或病症的对象给予免疫疗法或细胞疗法。在一些情况中，该方法涉及向对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理。在一些情况中，在开始给予疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时给予物质或其他处理。在一些实施方式中，在对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时给予物质或其他处理。在一些实施方式中，在疗法开始给予之时与物质或其他处理给予之时之间，对象不表现出重度CRS和/或不表现出2级或更高的CRS。在一些方面中，在对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时给予物质或其他处理。在一些情况中，在疗法开始给予之时与物质或其他处理给予之时之间，对象不表现出重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。在一些实施方式中，疗法包括表达重组受体的细胞剂量。
在任意这些实施方式的一些中，物质或其他处理在所述对象表现出1级CRS时给予，或在所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予。在一些情况中，物质或其他处理在对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予。在一些情况中，物质或其他处理在开始给予疗法后出现1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予。
在一些实施方式中，1级CRS的迹象或症状为发热。在一些情况中，物质或其他处理在开始给予疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
在一些方面中提供的是这样的处理方法，其包括向已被给予疗法(包括免疫疗法和/或细胞疗法)的对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理。在一些情况中，物质或其他处理在开始给予疗法后最初迹象发热出现的24小时内给予。
在一些实施方式中，在给予物质或其他处理前，该方法包括向对象给予用于治疗疾病或病症的疗法。
在一些实施方式中提供了一种处理方法，其包括向患有疾病或病症的对象给予免疫疗法或细胞疗法。在一些情况中，该方法包括在开始给予疗法后最初迹象发热出现后24小时内向对象给予物质或其他处理，所述物质或其他处理能治疗、预防、延缓或减轻对给予的免疫疗法或细胞疗法的毒性生发。在一些方面中，物质或其他处理在开始给予疗法后最初迹象发热出现后约16小时内、约12小时内、约8小时内、约2小时内或约1小时内给予。
在一些实施方式中，发热为持续发热。在一些情况中，在用退热剂处理后，发热不降低或降低不超过1℃。在一些方面中，发热是在用退热剂处理后不降低或降低不超过1℃的发热。在一些情况中，在用退热剂处理后，发热尚未降低超过1℃。
在一些实施方式中，发热包括至少或至少约38.0℃的温度。在一些方面中，发热包括介于或介于约38.0℃和42.0℃之间、38.0℃和39.0℃之间、39.0℃和40.0℃之间或40.0℃和42.0℃之间的温度，各自包括端值。在一些实施方式中，发热包括这样的温度，所述温度高于或高于约或为或约为38.5℃、39.0℃、39.5℃、40.0℃、41.0℃、42.0℃。
在一些实施方式中，物质或其他处理在开始给予疗法后少于5天，在开始给予疗法后少于4天或在开始给予疗法后少于3天给予。
在一些实施方式中，疗法为或包括细胞疗法。在一些情况中，细胞疗法为或包括过继细胞疗法。在一些方面中，疗法为或包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或重组或重组受体表达细胞疗法，其任选地为T细胞疗法。在一些实施方式中，疗法为嵌合抗原受体(CAR)-表达T细胞疗法。
在一些情况中，物质或其他处理为或包括类固醇，或选自下述的细胞因子或细胞因子受体的拮抗剂或抑制剂：IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β。
在一些方面中，拮抗剂或抑制剂为或包括选自下述的物质：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。在一些情况中，物质或其他处理为或包括选自下述的物质：托珠单抗、希妥昔单抗(situximab)、夏瑞鲁单抗(sarilumab)、欧罗单抗(olokizumab)(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(sirukumab)(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
在一些实施方式中，物质或其他处理为或包括托珠单抗。在一些这样的实施方式中，托珠单抗以从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值，或者所述托珠单抗以至少或至少约或约2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
在一些方面中，方法还包括向对象给予类固醇。在一些这类方面中，在开始给予疗法后7天、8天或9天内给予类固醇。在一些情况中，在开始给予疗法后最初迹象低血压出现后24小时内给予类固醇。在一些情况中，在给予疗法后对象表现出2级细胞因子释放综合征(CRS)的最初迹象后24小时内或对象表现出2级CRS时给予类固醇。在一些实施方式中，在给予疗法后对象表现出2级神经毒性的最初迹象或症状后24小时内或对象表现出2级神经毒性时给予类固醇。
在一些实施方式中提供了一种处理方法，其包括向已经被给予疗法(如免疫疗法和/或细胞疗法)的对象给予类固醇。在一些实施方式中，在开始给予疗法后7天、8天或9天内开始类固醇的给予。在一些实施方式中，在开始给予疗法后最初迹象低血压出现后24小时内开始类固醇的给予。在一些实施方式中，在开始给予疗法后对象表现出2级细胞因子释放综合征(CRS)的最初迹象后24小时内或对象表现出2级CRS时开始类固醇的给予。在一些实施方式中，在开始给予疗法后对象表现出2级神经毒性的首发迹象或症状后24小时内或对象表现出2级神经毒性时开始类固醇的给予。
在一些情况中，在给予类固醇前，该方法包括向对象给予用于治疗疾病或病症的疗法。
在一些方面中提供了处理方法，其包括向患有疾病或病症的对象给予疗法，如免疫疗法和/或细胞疗法。在一些情况中，方法还涉及向对象给予类固醇。在一些方面中，在开始给予疗法后7天、8天或9天内开始类固醇的给予。在一些方面中，在开始给予疗法后最初迹象低血压出现后24小时内开始类固醇的给予。在一些方面中，在开始给予疗法后或对象表现出2级或更高的细胞因子释放综合征(CRS)的最初迹象后24小时内或对象表现出2级或更高的CRS时开始类固醇的给予。在一些方面中，在开始给予疗法后对象表现出2级或更高的神经毒性的最初迹象或症状后24小时内或对象表现出2级或更高的神经毒性时开始类固醇的给予。
在一些实施方式中，在给予类固醇时，对象不表现出重度CRS，不表现出3级或更高的CRS，或不表现出重度神经毒性或不表现出3级或更高的神经毒性。
在一些方面中，类固醇在开始给予疗法后最初迹象低血压出现的同时或其后24小时内给予。在一些情况中，类固醇在开始加压疗法的同时给予。在一些情况中，低血压包括小于或小于约90mm Hg、80mm Hg或70mm Hg的收缩压。在一些情况中，低血压包括小于60mmHg、50mm Hg或40mm Hg的舒张压。
在一些实施方式中，物质为或包括类固醇，所述类固醇为或包括皮质类固醇。在一些方面中，物质为类固醇，所述类固醇为或包括糖皮质激素。在一些情况中，皮质类固醇为或包括地塞米松或泼尼松。在一些情况中，类固醇为静脉内或口服给予。
在一些情况中，类固醇以从或从约1.0mg至20mg地塞米松/天、1.0mg至10mg地塞米松/天或2.0mg至6.0mg地塞米松/天量的等效剂量给予，各自包括端值。
在一些实施方式中，给予类固醇前，该方法包括给予能够治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理。在一些方面中，在开始给予疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时给予物质或其他处理。在一些方面中，在对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时给予物质或其他处理。在一些方面中，在疗法开始给予之时与物质或其他处理给予之时之间，对象不表现出重度CRS和/或不表现出2级或更高的CRS。在一些方面中，在对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时给予物质或其他处理。在一些实施方式中，在疗法开始给予之时与物质或其他处理给予之时之间，对象不表现出重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
在一些实施方式中，疗法包括表达重组受体的细胞剂量。
在一些方面中，物质或其他处理在所述对象表现出1级CRS时给予，或在所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予。在一些实施方式中，1级CRS的迹象或症状为发热。在一些实施方式中，CRS的最初迹象或症状为发热。在一些情况中，所述物质或其他处理在开始给予疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
在一些方面中，给予类固醇前，该方法包括给予能够治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理。在一些情况中，物质或其他处理在开始给予疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。在一些方面中，物质或其他处理在开始给予疗法后最初迹象发热出现后约16小时内、约12小时内、约8小时内、约2小时内或约1小时内给予。
在一些实施方式中，发热为持续发热。在一些情况中，在用退热剂处理后，发热不降低或降低不超过1℃。在一些实施方式中，发热是在用退热剂处理后不降低或降低不超过1℃的发热。在一些情况中，在用退热剂处理后，发热尚未降低超过1℃。
在一些情况中，发热包括至少或至少约38.0℃的温度。在一些实施方式中，发热包括介于或介于约38.0℃和42.0℃之间、38.0℃和39.0℃之间、39.0℃和40.0℃之间或40.0℃和42.0℃之间的温度，各自包括端值。在一些方面，发热包括这样的温度，所述温度高于或高于约或为或约为38.5℃、39.0℃、39.5℃、40.0℃、41.0℃、42.0℃。
在一些实施方式中，物质或其他处理在开始给予所述疗法后少于5天给予，在开始给予所述疗法后少于4天给予或在开始给予所述疗法后少于3天给予。
在上述任何实施方式的一些情况中，该疗法为或包括细胞疗法。在一些实施方式中，细胞疗法为或包括过继细胞疗法。在一些情况中，疗法为或包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或重组或重组受体表达细胞疗法，其任选地为T细胞疗法。在一些实施方式中，疗法为或包括嵌合抗原受体(CAR)-表达T细胞疗法。
在一些实施方式中，物质或其他处理为或包括类固醇，或选自下述的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂：IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β。在一些实施方式中，拮抗剂或抑制剂为或包括选自下述的物质：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
在一些情况中，物质或其他处理为或包括选自下述的物质：托珠单抗、希妥昔单抗(situximab)、夏瑞鲁单抗(sarilumab)、欧罗单抗(olokizumab)(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(sirukumab)(CNTO136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
在一些方面中，物质或其他处理为或包括托珠单抗。在一些实施方式中，托珠单抗以从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值，或者所述托珠单抗以至少或至少约或约2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
在上述任何实施方式的一些情况中，其中，疗法为或包括细胞疗法，所给予的细胞数量介于约0.25x106细胞/kg对象体重和5x106细胞/kg之间，0.5x106细胞/kg对象体重和3x106细胞/kg之间，介于约0.75x106cells/kg和2.5x106细胞/kg之间或介于约1x106细胞/kg和2x106细胞/kg之间，各自包括端值。
在一些实施方式中，疗法为或包括细胞疗法，并且细胞以含有细胞的单一药物组合物给予。在一些情况中，疗法为或包括细胞疗法并且细胞剂量为分开剂量，其中所述细胞剂量在不超过3天的时间内以数个组合物给予，所述数个组合物总体包含所述剂量的细胞。
在一些实施方式中，疾病或病症为或包括肿瘤或癌症。在一些情况中，疾病或病症为或包括白血病或淋巴瘤。在一些实施方式中，疾病或病症为B细胞恶性肿瘤或为血液性疾病或病症。在一些方面中，疾病或病症为或包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
在一些实施方式中，疗法为细胞疗法，其包括表达重组受体的细胞剂量。在一些方面中，重组受体结合、识别或靶向与所述疾病或病症相关的抗原。在一些情况中，重组受体为T细胞受体或功能性非T细胞受体。在一些情况中，重组受体为嵌合抗原受体(CAR)。
在一些实施方式中，CAR包含特异性结合抗原的胞外抗原识别结构域和包含ITAM的胞内信号转导结构域。在一些情况中，抗原为CD19。在一些实施方式中，胞内细胞信号转导结构域包含CD3ζ链的胞内结构域。在一些实施方式中，CAR还包含共刺激信号转导区域。在一些方面中，共刺激信号转导结构域包含CD28或4-1BB的信号转导结构域。
在一些实施方式中，疗法为或包括含有T细胞的细胞剂量。在一些情况中，T细胞为CD4+或CD8+。在一些实施方式中，T细胞对于对象是自体的。
在一些实施方式中，方法还包括在给予疗法前给予化疗剂。在一些情况中，在开始给予疗法前，已经用化疗剂治疗所述对象。在一些方面中，化疗剂包括选自下组的物质：环磷酰胺、氟达拉滨和/或其组合。在一些实施方式中，在开始给予疗法前2-5天之间给予化疗剂。在一些情况中，在介于或约为对象的1g/m2和介于或约为对象的3g/m2之间的剂量下给予化疗剂。
在一些实施方式中，毒性为神经毒性。在一些实施方式中，相较于包括其他处理方案的方法(其中物质或其他处理在重度CRS或神经毒性发生后或2级或更高的CRS或神经毒性发生后给予对象)，对象在给予所述疗法后多至或多至约7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天无可测CNS后果或CNS后果降低。在一些实施方式中，毒性后果是与3级或更高的神经毒性相关的症状或与2级更高的CRS相关的症状。在一些实施方式中，毒性后果降低大于50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些情况中，毒性后果为与3级或更高的神经毒性有关的症状。在一些实施方式中，毒性后果选自3级或更高的神经毒性中，包括混乱、谵妄、表达性失语、反应迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫-样活动、癫痫。
在一些方面，疗法为这样的疗法，细胞在对象中表现出比在包括其他处理方案的方法中给予的细胞增加或更长的增殖和/或维持，其中在重度CRS或神经毒性产生后或在2级或更高的CRS或神经毒性产生后向所述对象给予物质或其他处理。在一些情况中，增殖和/或维持增加2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在一些实施方式中，毒性后果为3级或更高的CRS，其包括选自下述的一种或多种症状：高于或等于约38摄氏度的持续发热，至少持续三天；需要高剂量血管加压剂或多种血管加压剂的低血压；缺氧，其任选地包括低于或低于约90％的(例如，血浆氧(PO2)水平以及需要机械呼吸的呼吸衰竭。在一些实施方式中，疗法是包括细胞剂量的细胞疗法，并且所述细胞在对象中相较于(在该对象中或在其他组群或处理组中的对应对象中)使用其他处理方案给予细胞疗法的情况表现出增殖和/或维持增加或延长，其中所述其他处理方案包括在重度CRS发生后或在2级或更高的CRS发生后给予细胞疗法并且随后给予物质或其他处理，并且其中任选地，在给予细胞之后以及2级或更高的CRS或重度CRS发生之前，所述其他处理方案中的对象没有被给予所述物质，并且任选地，没有被给予旨在治疗CRS或神经毒性的任何其他处理。在一些实施方式中，增殖和/或维持增加或延长2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在一些实施方式中，疗法为包括细胞剂量的细胞疗法，并且，所述细胞在对象中相较于(在所述对象中或在其他组群或处理组中对应对象中)使用其他处理方案给予细胞疗法的情况表现出增殖和/或维持增加或延长。在一些情况中，所述其他处理方案包括在重度CRS或神经毒性发生后或在2或更高的CRS或神经毒性发生后，给予细胞疗法随后给予物质或其他处理。在一些情况中，所述其他处理方案中的对象没有被给予所述物质。在一些情况中，在给予细胞后并且在所述2级或更高的CRS或重度CRS或2级或更高的神经毒性或重度神经毒性的发生之前，所述其他处理方案中的对象没有被给予旨在治疗CRS或神经毒性的任何其他处理.
在一些实施方式中，增殖和/或维持增加或延长2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在一些实施方式中，该细胞在对象中具有与以包括其他处理方案的方法给予的细胞相同或相似的增殖和/或维持，所述其他处理方案中，细胞疗法在不存在物质或其他处理的情况下被给予对象。在一些实施方式中，增殖和/或维持比以包括其他处理方案的方法降低或减少不超过2倍，所述其他处理方案中，细胞疗法在不存在物质或其他处理的情况下被给予对象。
在一些实施方式中，疗法为细胞疗法，其包括工程改造的和/或表达CAR的细胞。在一些情况中，在开始给予疗法后第30天、第60天或第90天，对象血液中工程改造的和/或表达CAR的细胞的浓度和数量至少为或约为10个工程改造的或表达CAR的细胞/微升，至少50％外周血单核细胞(PBMC)总数，至少或至少约1x105个工程改造的或表达CAR的细胞，和/或至少5,000拷贝的编码CAR的或编码工程改造的受体的DNA/微克DNA。在一些实施方式中，在开始给予疗法后第30、60或90天，对象的血液或血清中可检测到表达CAR的和/或工程改造的细胞。在一些情况中，在开始给予疗法后第30、60或90天，对象的血液含有至少20％表达CAR的细胞，至少10个表达CAR的细胞/微升或至少1x104个表达CAR的细胞。在一些情况中，在开始给予疗法后第30、60或90天，对象的血液含有50％、60％、70％、80％或90％生物有效剂量的细胞。在一些实施方式中，在开始给予疗法后第30、60或90天，对象的血液含有至少20％工程改造的和/或表达CAR的细胞，至少10个工程改造的和/或表达CAR的细胞/微升和/或至少1x104个工程改造的和/或表达CAR的细胞。在一些情况中，在开始给予疗法后第30、60或90天，对象表现出疾病或病症负荷降低或持续降低。在一些情况中，疾病或病症负荷的降低或持续降低是或约是或至少是或至少约是疗法给予后50％、60％、70％或80％峰值降低或与有效剂量相关的降低。
在一些实施方式中，在开始给予疗法后第30、60或90天，细胞疗法处理后的对象不表现，和/或未表现出重度神经毒性、重度CRS、2级或更高的CRS、2级或更高的神经毒性，和/或未表现出癫痫或其他CNS后果；或在开始给予疗法后第30、60或90天，少于或约少于25％、少于与或约少于20％、少于或约少于15％或少于或约少于10％这样治疗的对象在细胞疗法处理后不表现，和/或未表现出重度神经毒性、重度CRS、2级或更高的CRS、2级或更高的神经毒性，和/或未表现出癫痫或其他CNS后果。
在一些实施方式中，疗法为细胞疗法，其包括工程改造的和/或表达CAR的细胞；并且在所述疗法给予后，工程改造的和/或表达CAR的细胞的血液浓度随时间的曲线下面积(AUC)大于经由包括其他给药方案的方法所得，例如所述其他给药方案中，向对象给予疗法并且在对象表现出重度或2级或更高的或3级或更高的CRS或神经毒性时给予所述物质或其他处理。
在一些实施方式中，还提供了物质或其他处理，其用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法。在一些实施方式中，(a)向对象给予所述物质或其他处理是：(i)在对象已经被给予的疗法开始后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或(b)在对象已经被给予的疗法开始之时与物质或其他处理给予之时之间，(i)对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
在一些实施方式中，物质或其他处理在对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予，或在疗法给予后对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予。在一实施方式中，1级CRS的迹象或症状为发热；和/或物质或其他处理在开始给予疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
在一些实施方式中，还提供了物质或其他处理，其用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，物质或其他处理在疗法给予后最初迹象发热出现的24小时内给予。
在一些实施方式中，还提供了物质或其他处理，其用作药物用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法。在一些实施方式中，(a)向对象给予所述物质或其他处理是：(i)在对象已经被给予的疗法开始后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或(b)在对象已经被给予的疗法开始之时与物质或其他处理给予之时之间，(i)对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
在一些实施方式中，物质或其他处理在对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予，或在疗法给予后对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予。在一实施方式中，1级CRS的迹象或症状为发热；和/或物质或其他处理在开始给予疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
在一些实施方式中，还提供了物质或其他处理，其用作药物用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，物质或其他处理在所述疗法给予后以及最初迹象发热出现的24小时内给予。
在一些实施方式中，还提供了物质或其他处理在制备用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的药物中的用途，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法。在一些实施方式中，(a)向对象给予所述物质或其他处理是在：(i)在对象已经被给予的疗法开始后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或(b)在对象已经被给予的疗法开始之时与物质或其他处理给予之时之间，(i)对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。在一些实施方式中，物质或其他处理在对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予，或在疗法给予后对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予。在一实施方式中，1级CRS的迹象或症状为发热；和/或物质或其他处理在开始给予疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
在一些实施方式中，还提供了物质或其他处理在制备用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的药物中的用途，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，物质或其他处理在疗法给予后最初迹象发热出现的24小时内给予。
在本文所提供的物质、其他处理或其用途的一些实施方式中，物质或其他处理在给予疗法后最初迹象发热出现后约16小时内、约12小时内、约8小时内、约2小时内或约1小时内给予。
在一些实施方式中，发热为持续发热。在一些实施方式中，发热是在用退热剂处理后不降低或降低不超过1℃的发热，和/或其中发热在用退热剂处理对象后未降低超过1℃。在一些实施方式中，发热包括至少或至少约38.0℃的温度。在一些实施方式中，发热包括介于或介于约38.0℃和42.0℃之间、38.0℃和39.0℃之间、39.0℃和40.0℃之间或40.0℃和42.0℃之间的温度，各自包括端值。发热包括高于或高于约或为或约为38.5℃、39.0℃、39.5℃、40.0℃、41.0℃、42.0℃的温度。
在一些实施方式中，物质或其他处理为或包括类固醇，或选自下述的细胞因子或细胞因子受体的拮抗剂或抑制剂：IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β。在一些实施方式中，拮抗剂或抑制剂为或包括选自下述的物质：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
在一些实施方式中，物质或其他处理为或包括选自下述的物质：托珠单抗、希妥昔单抗(situximab)、夏瑞鲁单抗(sarilumab)、欧罗单抗(olokizumab)(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(sirukumab)(CNTO136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。在一些实施方式中，物质或其他处理为或包括托珠单抗。在一些实施方式中，托珠单抗用于以从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值，或者所述托珠单抗以至少或至少约或约2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
在一些实施方式中，物质为或包括类固醇，所述类固醇任选地为或包括皮质类固醇，其任选地为糖皮质激素。在一些实施方式中，皮质类固醇为或包括地塞米松或泼尼松。在一些情况中，用于给予的类固醇为从或从约1.0mg至20mg地塞米松/天、1.0mg至10mg地塞米松/天或2.0mg至6.0mg地塞米松/天的等效剂量，各自包括端值。In some embodiments,the steroid is formulated for intravenous or oral administration.
在本文所述提供的物质、其他处理或用途的一些实施方式中，疗法为或包括细胞疗法。在一些实施方式中，细胞疗法为或包括过继细胞疗法。在一些实施方式中，疗法为或包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或重组受体表达细胞疗法，其任选地为T细胞疗法，其任选地为嵌合抗原受体(CAR)-表达细胞疗法。在一些实施方式中，疗法为细胞疗法，其包括表达重组受体的细胞剂量，其中：重组受体结合、识别或靶向与疾病或病症相关的抗原；和/或重组受体为T细胞受体或功能性非T细胞受体；和/或重组受体为嵌合抗原受体(CAR)。
在一些实施方式中，CAR包含特异性结合抗原的胞外抗原识别结构域和包括ITAM的胞内信号转导结构域。在一些实施方式中，抗原为CD19。在一些实施方式中，胞内细胞信号转导结构域包括CD3ζ链的胞内结构域。在一些实施方式中，CAR还包括共刺激信号转导区域。在一些实施方式中，共刺激信号转导结构域包括CD28或4-1BB的信号转导结构域。
在一些实施方式中，疗法为或包括含有T细胞的细胞剂量。在一些实施方式中，T细胞为CD4+或CD8+。在一些实施方式中，T细胞对于对象是自体的。在一些实施方式中，疾病或病症是肿瘤或癌症。在一些实施方式中，疾病或病症是白血病或淋巴瘤。在一些实施方式中，疾病或病症为非霍奇金淋巴瘤(NHL)或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
在一些实施方式中，在疗法给予之前，已经用化疗剂治疗该对象。在一些实施方式中，化疗剂包括选自下组的试剂：环磷酰胺、氟达拉滨和/或其组合。
附图说明
图1A和1B显示了用表达CAR的T细胞处理的示例性对象的毒性概况。图1A显示了用表达CAR的T细胞处理后表现轻度毒性副作用的对象的毒性概况，其中没有进行毒性的干预。图1B显示了表现严重副作用的对象的毒性概况，其中干预方法在CRS症状严重时采用托珠单抗(toci)，在低血压发生时采用加压治疗，和在加压治疗后采用地塞米松。描述了CNS毒性存在的时间段。
图2A、2B、2C和2D显示了输注CAR+T细胞后第28天时具有(有)和没有(无)重度CRS的对象中IL-6、IFN-γ、颗粒酶B和IL-2各自峰细胞因子水平的关联。P值表示相同组群内具有或没有重度CRS的对象之间的统计学的显著差异。
图3描述了接受用于测试严重毒性的地塞米松(Dex)、托珠单抗(toci)或泼尼松+重组IL-1受体拮抗剂阿那白滞素(pred+阿那白滞素)的干预后，给予CAR+T细胞输注后不同天数时对象血液中所有T细胞中CAR+T细胞的百分比。描述了重度CRS(sCRS)和重度细胞毒性(sNTox)的发作。CAR+T细胞峰值扩增为454细胞/μL。扩增并不受到给予干预疗法的影响。
图4A和图4B分别显示了具有(有)和没有(无)重度CRS或重度神经毒性的每微升外周血的CAR T-细胞峰数量。
具体实施方式
本文提供了涉及预防或缓解潜在毒性的早期或先期处理的方法，所述潜在毒性可能与给予对象时某些疗法相关。
本发明中提及的所有出版物，包括专利文件、学术论文和数据集，均以各个体出版物好似独立地通过引用纳入的相同程度通过引用其全文纳入本文用于所有目的。如果本文所示的定义与通过引用纳入本文的专利、公开申请和其他出版物中所示的定义不同或其他情况下不一致，则相对于通过引用纳入本文的文件中的定义，以本文所示的定义为主。
本文所用章节标题仅用于组织目的，而不应理解为限制所述客体。
I.用毒性靶向剂的先期干预方法
提供了这样的方法，所述方法涉及给予免疫疗法如细胞疗法(例如，CAR-T细胞疗法)和给予毒性靶向剂用于早期干预对免疫疗法的毒性或产生对免疫疗法的毒性的风险，如是或包括细胞因子释放综合症(CRS)或神经毒性的毒性。在一些实施方式中，方法涉及在由免疫疗法(如细胞疗法)所导致的细胞因子释放综合症(CRS)迹象或症状相对轻微和/或不严重时给予毒性靶向剂。在一些实施方式中，方法允许用治疗疾病或紊乱的疗法(如免疫疗法或细胞疗法)处理对象，所述疾病或紊乱在其他情况下可能在对象中导致中度至重度CRS或神经毒性副作用。在提供的方法中，用毒性靶向剂的早期干预或先期处理预防或缓解中度至重度CRS或神经毒性的风险，同时保持疗法的功效，如对于细胞疗法的情况来说，保持疗法的维持。
在一些实施方式中，对象已经或正在接受例如用于在对象中处理疾病或病症的疗法，如免疫疗法或细胞疗法。例如，在一些实施方式中，细胞疗法为过继性细胞疗法，包括涉及给予表达对感兴趣的疾病或紊乱特异性的嵌合受体如嵌合抗原受体(CAR)和/或其他重组抗原受体的细胞的疗法，以及其他过继免疫细胞和过继性T细胞疗法。在一些实施方式中，过继细胞疗法包括给予表达重组受体如CAR或其他重组抗原受体的细胞剂量。在一些实施方式中，嵌合受体，如嵌合抗原受体，含有一个或多个结构域，其组合配体结合结构域(例如抗体或抗体片段)和胞内信号传导结构域，配体结合结构域提供针对所需抗原(例如肿瘤抗原)的特异性。在一些实施方式中，胞内信号传导结构域是活化性胞内结构域部分，例如T细胞活化性结构域，提供主要活化信号。在一些实施方式中，胞内信号传导结构域含有或另外含有共刺激信号传导结构域以促进效应物功能。在一些实施方式中，当嵌合受体经基因工程改造入免疫细胞时可调节T细胞活性，并且在一些情况下可调节T细胞分化或体内平衡，从而导致基因工程改造的细胞的体内寿命、存活和/或维持改善，例如用于过继性细胞疗法方法。
过继性细胞疗法(包括涉及给予表达对感兴趣的疾病或紊乱特异性的嵌合受体如嵌合抗原受体(CAR)和/或其他重组抗原受体的细胞的疗法以及其他过继免疫细胞和过继性T细胞疗法)可以有效治疗癌症和其他疾病和紊乱。在某些情况下，过继性细胞疗法的可行方法可能并不总是令人满意。在一些情况下，最佳功效可取决于给予的细胞的下述能力：识别和结合靶标(例如靶标抗原)，运输、定位并成功进入对象、肿瘤及其环境内的适当位点，被激活、扩增，发挥各种效应功能，包括细胞毒性杀伤作用和各种因子如细胞因子的分泌，持久(包括长期)，分化、转换或参与重编程为某些表型状态(如效应物、长效记忆、弱分化和效应状态)，在清除和再次暴露于靶配体或抗原之后提供有效和强烈的回忆响应，并且避免或减少耗竭、无反应性、终末分化和/或分化成抑制状态。
在一些方面中，提供的实施方式基于以下发现：过继细胞疗法的功效可能会受到给予这类细胞的对象中毒性生发的影响，其中毒性在一些情况中可以是严重的。例如，在一些情况中，给予表达重组受体(例如，CAR)的细胞剂量可以导致毒性或风险，如CRS或神经毒性。在一些情况中，尽管较高剂量的这类细胞可以增强处理的功效，例如，通过增加对细胞的暴露如通过促进增殖和/或维持，但是它们也有可能导致产生毒性或更严重毒性的更大风险。同样，在一些情况中，具有较高疾病负荷的对象也可能处于产生毒性或更严重毒性的更大风险。
用于治疗或缓解毒性的某些可用方法可能并不总是完全令人满意。许多这样的方法例如聚焦于在靶向毒性的下游作用，例如通过细胞因子阻断，和/或递送剂如高剂量类固醇，其还可以消除或损害所给予的细胞的功能。此外，这类方法常常涉及仅在检测到毒性的体征或症状后给予这类干预，其通常涉及中度至重度毒性(例如，中度至中度CRS或中度至重度神经毒性)的迹象或症状。例如，图1A和1B提供了毒性概况的比较，其中一个对象(图1B示出)需要干预并且在CRS重度症状存在时给予这类物质。许多这些其他方法也不能阻止其他形式的毒性，如神经毒性，这可能与过继细胞疗法有关。
在一些情况中，这是在这类症状为重度之时，因此其可能需要甚至更严厉或更极端的处理(例如，较高的剂量或增加的给药频率)以缓解或治疗毒性。
使用某些其他方法并不能提供对于这类问题的满意解决方案。在一些情况中，这类物质和疗法(例如，类固醇)自身与毒性副作用相关。这类副作用在更高的剂量或频率时甚至可能会更强，对其需要用物质或疗法来管理或治疗，从而治疗或缓解可能由细胞疗法所导致的毒性的严重程度。此外，在一些情况中，人们相信，用于治疗毒性的物质或疗法可能限制细胞疗法的功效，例如作为细胞疗法一部分提供的表达在细胞上的嵌合受体(例如，CAR)的功效(Sentman(2013)Immunotherapy,5:10)。
提供的方法比可用的方法有优势。在一些实施方式中，提供的方法涉及在对象表现出超过轻度的毒性体征或症状之前，如在表现出重度毒性体征或症状之前，早期或先期处理对象。在一些实施方式中，在轻度CRS(如1级CRS)体征或症状存在时，但是在中度或重度CRS生发之前或2级或3级CRS生发之前进行处理。在一些实施方式中，在轻度神经毒性(如1级神经毒性)体征或症状存在时，但是在中度或重度神经毒性生发之前或发展成2级或3级神经毒性生发之前进行处理。在一些实施方式中，在没有神经毒性体征或症状发生时进行毒性靶向剂的处理。因此，在一些情况中，所提供的方法提供了能够在不希望的CNS相关后果出现前进行早期干预的能力。在一些情况中，在毒性后果或潜在毒性后果的处理中早期干预的能力可以意味着可以给予剂量减少的用于治疗或缓解毒性的毒性靶向剂和/或可以给予给药频率降低的这类物质或疗法。
在一些实施方式中，提供的方法包括向已经被给予疗法(如免疫疗法和/或细胞疗法)的对象给予毒性靶向剂。在一些实施方式中，毒性靶向剂是能够在对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质。此类毒性靶向剂的示例如后文所述。
在一些实施方式中，毒性靶向剂在开始给予疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时给予。在一些实施方式中，毒性靶向剂在对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时给予。在一些实施方式中，在疗法(例如，细胞疗法)开始给予之时与毒性靶向剂给予之时之间，对象不表现出重度CRS和/或不表现出2级或更高的CRS。在一些实施方式中，毒性靶向剂在对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时给予。在一些实施方式中，在疗法(例如，细胞疗法)开始给予之时与毒性靶向剂给予之时之间，对象未表现出重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的CRS。
在一些实施方式中，例如，相较于在对象重度CRS发生后或2级或更高的CRS发生后向其给予物质或其他处理时给予疗法，提供的方法旨在或包括特征，所述特征导致较低程度的毒性、毒性后果或症状、毒性促进概况、因子或性质，如与细胞因子释放综合症(CRS)或神经毒性相关或指示其的症状或后果。
在一些方面，疗法(如细胞疗法)的毒性后果是或相关于或指示细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)。在某些情况下，CRS，例如，sCRS可以在对象的过继T细胞治疗和给予其他生物制品之后出现。参见Davila等，SciTransl Med 6,224ra25(2014)；Brentjens等，Sci.Transl.Med.5,177ra38(2013)；Grupp等，N.Engl.J.Med.368,1509–1518(2013)；和Kochenderfer等，Blood 119,2709–2720(2012)；Xu等，Cancer Letters 343(2014)172-78。
通常，CRS由例如由T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、和/或巨噬细胞介导的放大的全身免疫应答引起。这样的细胞可以释放大量的炎性介质，如细胞因子和趋化因子。细胞因子可能引发急性炎症反应和/或诱导内皮器官损伤，这可能导致微血管渗漏、心力衰竭或死亡。严重的危及生命的CRS可导致肺部浸润和肺损伤、肾衰竭或弥散性血管内凝血。其他严重的危及生命的毒性可包括心脏毒性、呼吸窘迫、神经毒性和/或肝衰竭。
CRS的后果、迹象和症状是已知的，并且包括本文所述的那些。在一些实施方式中，在特定剂量方案或给药实现或不实现给定的CRS相关的后果、迹象或症状的情况中，可以规定特定后果、体征、和症状和/或其数量或程度。
在给予CAR-表达细胞的情况下，CRS(如重度CRS)通常在输注表达CAR的细胞后6-20天出现。参见Xu等，Cancer Letters 343(2014)172-78。在一些情况下，CRS在CAR T细胞输注后不到6天或超过20天时出现。CRS的发生和时间可能与输注时基线细胞因子水平或肿瘤负荷有关。通常，CRS涉及升高的干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和/或白介素(IL)-2的血清水平。可能在CRS中被快速诱导的其他细胞因子是IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10。
已经开发了与CRS发病相关的CRS标准，以预测哪些患者更有可能发生sCRS的风险(参见Davilla等，Science translational medicine.2014；6(224)：224ra25)。因子包括发热，缺氧，低血压，神经变化，炎症细胞因子血清水平升高，如7种细胞因子(IFNγ，IL-5，IL-6，IL-10，Flt-3L，分形趋化因子和GM-CSF)，其治疗诱导的升高可以与预处理疾病负荷(例如，肿瘤负荷)和sCRS症状良好相关。关于CRS的诊断和治疗的其他指导是已知的(参见例如Lee等，Blood.214；124(2)：188-95)。在一些实施方案中，反映CRS等级的标准是下表1中详述的那些。
在一些实施方式中，如果在给药后，对象显示：(1)持续至少3天的至少38摄氏度的发热；(2)细胞因子升高，其包括(a)与紧随给药后的水平相比，下组7种细胞因子中的至少两种的至少为75的最大倍数变化：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和IL-5和/或(b)与紧随给药后的水平相比，下组7种细胞因子中的至少一种的至少250的最大倍数变化：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子和IL-5；和(c)至少一种毒性的临床症状，例如低血压(需要至少一种静脉内血管活加压剂)或缺氧(PO2<90％)或一种或多种神经系统紊乱(包括精神状态改变、肥胖症和/或癫痫发作)，则对象被认为发生响应给予细胞疗法或其细胞剂量或其继发的“严重CRS”(“sCRS”)。在一些实施方式中，重度CRS包括3级或更高的CRS，如表1所示。
在一些实施方式中，后果与重度CRS或3级CRS或更高的(如4级或更高的)相关，如表1所示。在一些实施方式中，其包括以下中的一种或多种：持续发热，例如，持续2天或更多天，例如3天或更多天，例如4天或更多天，或至少持续三天的，例如，指定温度的发热，超过等于或约38摄氏度的发热；超过等于或约38摄氏度的发热；与至少两种细胞因子(例如，下组中的至少两个：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、分形趋化因子、和IL-5，和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的预处理水平相比，例如至少等于或约75的最大倍数变化的细胞因子升高，或例如至少一种这样的细胞因子的至少等于或约250的最大倍数变化；和/或至少一种毒性的临床迹象，例如低血压(例如，通过至少一种静脉内血管活性加压剂测量)；缺氧(例如低于或低于约90％的血浆氧(PO2)水平)；和/或一种或多种神经系统紊乱(包括精神状态变化，痴呆和癫痫发作)。在一些实施方式中，重度CRS包括需要在重症监护病房(ICU)中管理或护理的CRS。
在一些实施方式中，重度CRS包括(1)持续发热(持续至少3天至少38摄氏度的发热)和(2)至少等于或约20mg/dL的血清CRP水平的组合。在一些实施方式中，重度CRS包括需要使用两种或更多种血管加压剂的低血压或需要机械呼吸的呼吸衰竭。在一些实施方式中，在第二或后续给药中增加血管加压剂的剂量。
在一些实施方式中，重度CRS或3级CRS包括丙氨酸氨基转移酶增加，天冬氨酸氨基转移酶增加，畏寒，发热性中性粒细胞减少症，头痛，左心室功能障碍，脑病，脑积水和/或震颤。
在一些实施方式中，提供的方法涉及在对象重度CRS生发之前或2级或3级CRS生发之前进行早期干预。在一些实施方式中，应理解的是，CRS的体征或症状可能存在，但是这些体征或症状通常为轻度的和/或不是重度的。在一些实施方式中，毒性靶向剂在所述对象表现出1级CRS时给予，或在所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予。在一些实施方式中，在最初持续发热时或在发热(如持续发热)发生1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、18小时或24小时内向对象给予毒性靶向剂。
在一些实施方式中，对象表现出发热，并且在一些方面中，在对象表现出这类发热时和/或表现出或已经表现出一段特定时间的发热时进行治疗。
在一些实施方式中，对象中的发热以对象的体温为特征，所述对象的体温在(或经测量在)或高于某个阈值温度或水平。在一些方面，阈值温度至少与低等级发热，至少与中度发热，和/或至少与高等级发热相关。在一些实施方式中，阈值温度为特定温度或范围。例如，阈值温度可以是或约是或至少是或至少约38、39、40、41或42摄氏度，和/或可以是或约是38摄氏度至是或约是39摄氏度的范围，是或约是39摄氏度至是或约是40摄氏度的范围，是或约是40摄氏度至是或约是41摄氏度的范围，或是或约是41摄氏度至是或约是42摄氏度的范围。
在一些实施方式中，发热为持续发热，在一些方面中，在这样的时间治疗对象，在所述时间已经确定对象具有持续发热，如在具有诱导毒性潜能的初始疗法(如靶向疾病的疗法)后首次这种确定的或这种确定的1、2、3、4、5、6或数小时内。
在一些实施方式中，如果他或她表现出介于或高于相关阈值温度的发热，并且其中对象的发热或体温不波动约1℃或波动不超过约1℃，并且通常不波动约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃或波动不超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，则对象具有和/或经鉴定或被认为具有持续发热。这类缺少高于或等于一定量的波动通常在给定的时间段内(如在24小时、12小时、8小时、6小时、3小时或1小时的时间段内，其可以从高于指定阈值的第一温度或最初迹象发热测量)测量。例如，在一些实施方式中，如果他或她表现出至少是或约或至少是或约38或39摄氏度的发热，并且在6小时的时间内、在8小时的时间内或在12小时的时间内、或在24小时的时间内温度波动不超过或不超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，那么对象被认为或经鉴定表现持续发热。
在一些实施方式中，如果他或她表现出介于或高于相关阈值温度的发热，并且其中在特定处理如旨在降低发热的处理(如用退热剂的处理)后，对象的发热或体温没有降低，或没有降低特定值或没有降低超过特定值(例如，超过1℃，和通常不波动约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃或波动不超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃)，则对象具有和/或经鉴定或被认为具有持续发热。退热剂可以包括任何物质，例如，降低发热的化合物、组合物或成分，例如任何数量已知具有退热作用的物质中的一种，如NSAID(如布洛芬，萘普生，酮洛芬和尼美舒利)，水杨酸盐，如阿司匹林，水杨酸胆碱，水杨酸镁和水杨酸钠，醋氨酚，对乙酰氨基酚，安乃近，纳布美通，非那宗(Phenaxone)，安替比林，解热剂(febrifuges)。在一些实施方式中，退热剂为对乙酰氨基酚。在一些实施方式中，对乙酰氨基酚可以12.5mg/kg口服或静脉注射的剂量多至每4小时给予。在一些实施方式中，其是或包括布洛芬或阿司匹林。例如，如果他或她表现出至少是或约38或39摄氏度的发热，其在6小时的时间内、在8小时的时间内或在12小时的时间内、或在24小时的时间内(甚至在用退热剂如对乙酰氨基酚处理后)，温度不降低约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃或降低不超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，或温度不降低1％、2％、3％、4％或5％或不降低约1％、2％、3％、4％或5％，那么认为对象具有持续发热。在一些实施方式中，退热剂的剂量为在降低对象发热或特定种类的发热，如与细菌或病毒感染(例如，局部或全身感染)相关的发热中通常有效的剂量。
在一些实施方式中，在对象经鉴定或确认(例如首次经鉴定或确认)表现持续发热时或这之后立即给予一种或多种毒性靶向疗法，例如，如根据任何前述实施方式所测量的。在一些实施方式中，在这类确认或测定的特定时间段内，如在30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时或8小时内，给予一种或多种毒性靶向疗法。
在一些实施方式中，在神经毒性的体征或症状之前给予毒性靶向剂。在一些情况中，神经毒性(包括重度神经毒性)是可以与各种疗法(如细胞疗法)的给予相关的毒性后果。
在一些实施方式中，与神经毒性的临床风险相关的症状包括混乱、谵妄、表达性失语、反应迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫-样活动、癫痫(任选地由脑电图[EEG]确诊)、升高水平的淀粉样β(Aβ)、升高水平的谷氨酸、和升高水平的氧自由基。在一些实施方式中，神经毒性基于严重性分级(例如，使用1-5级标度(参见例如Guido Cavaletti和Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月))；国立癌症研究院-常用毒性标准4.03版(NCI-CTCAE v4.03)。
在一些情况下，神经系统症状可能是sCRS的最早症状。在一些实施方式中，看到神经症状在细胞疗法输注后5至7天开始。在一些实施方式中，神经变化的持续时间可以在3至19天的范围内。在一些情况下，sCRS的其他症状已经解决之后发生神经变化的恢复。在一些实施方式中，通过用抗IL-6和/或类固醇处理不会加速神经变化的时间或程度。
在一些实施方式中，如果在给药后，对象显示以下限制的自我护理(例如洗澡、穿衣和脱衣、进食、使用厕所、服用药物)的症状，则认为对象响应细胞疗法或其细胞剂量的给予或其继发为“严重神经毒性”：1)周围运动神经病变的症状，包括周围运动神经的炎症或变性；2)外周感觉神经病变的症状，包括周围感觉神经的炎症或变性，感觉异常，如感觉的扭曲，导致异常和不愉快的感觉，神经痛，如神经或一组神经的剧烈疼痛感觉，和/或感觉异常，例如感觉神经元的功能障碍，导致刺激不存在刺痛，麻木，压力，冷热的异常皮肤感觉。在一些实施方式中，严重神经毒性包括等级为3或更高的神经毒性，如表2所示。
在一些实施方式中，相较于其他方法，该方法减少与CRS相关的症状、后果或因子，包括与重度CRS或3级或更高的CRS相关的症状、后果或因子。例如，根据本文所述方法治疗的对象可能缺乏可测CNS症状、后果或因子和/或CNS症状、后果或因子降低，例如，重度CRS或3级或更高的CRS，如任何所述的，例如，表1中所示。
在一些实施方式中，与其他方法相比，该方法减少与CNS-后果或神经毒性相关的症状。例如，相比通过其他方法处理的对象，根据本发明的方法处理的对象可能缺乏可测神经毒性症状和/或神经毒性症状降低，例如肢体虚弱或麻木，丧失记忆、视力和/或智力，不可控制的强迫症和/或强迫行为，妄想，头痛，认知和行为问题，包括运动控制丧失、认知衰退和自主神经系统功能障碍以及性功能障碍等问题，所述其他方法中，毒性靶向剂的给予是在后续给予并且是在重度CRS或重度神经毒性或其它毒性后果生发后给予。在一些实施方式中，根据本发明方法处理的对象可以具有减少的与外周运动神经病变、周围感觉神经病、异常感觉、神经痛或感觉异常相关的症状。
在一些实施方式中，该方法减少与神经毒性相关的后果，包括对神经系统和/或脑的损伤，例如神经元的死亡。在某些方面，该方法降低与神经毒性相关的因子的水平，例如β淀粉样蛋白(Aβ)、谷氨酸和氧自由基。
在一些实施方式中，相比包括其他处理方案的方法，给予与具有毒性靶向剂的早期干预联用的疗法的对象具有与CRS相关的或与CNS-关联后果或神经毒性(例如，重度神经毒性或3级或更高的神经毒性)相关的症状、后果或因子减少，其中，所述其他方案中物质或其他处理在重度CRS发生后或在2级或更高的CRS或2级或更高的神经毒性发生后给予对象。在一些实施方式中，CRS(例如，重度CRS或3级或更高的CRS)或CNS-关联的或神经毒性(例如，重度神经毒性或3级或更高的神经毒性)后果减少大于50％、60％、70％、80％、90％或更多。
在一些实施方式中，细胞疗法的给予导致一个或多个不良事件。在一些实施方式中，不良时间包括但不限于，丙氨酸氨基转移酶增加，天冬氨酸氨基转移酶增加，畏寒，发热性中性粒细胞减少症，头痛，左心室功能障碍，脑病，脑积水和/或震颤。在一些实施方式中，本文所提供的干预方法缓解或减少这类不良事件。
在一些实施方式中，提供的方法包括给予用于缓解毒性后果的毒性靶向剂(例如，用于缓解神经毒性或CRS如重度神经毒性或重度CRS的物质)，靶向剂的剂量比在下述时间给予对象的所述靶向剂的剂量减少或更小：在当重度CRS或神经毒性的体征或症状生发时和/或在对象表现出2级或3级CRS或神经毒性时和/或在给予或开始细胞疗法后或给予或开始细胞疗法的第一剂后大于6、7、8、9、10、11、12、13或14天时。在一些实施方式中，剂量的极少为至少1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在一些实施方式中，提供的方法包括以剂量周期或方案中的频率给予毒性靶向剂，所述频率小于在下述时间开始的所述靶向剂的剂量周期或方案中的给药频率：在当重度CRS或神经毒性的体征或症状生发时和/或在对象表现出2级或3级CRS或神经毒性时和/或在给予或开始细胞疗法后或给予或开始细胞疗法的第一剂后大于3天(例如，大于3-14天，如大于3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天)时。在一些实施方式中，其中物质(例如，类固醇)处理的参照方案或周期涉及3天的给药，给药频率的降低可以是1天或2天的给药。
在一些实施方式中，提供的方法与细胞疗法的给予相关，例如，在过继细胞疗法中给予细胞，例如用于处理疾病或病症，包括各种肿瘤。该方法涉及给予表达重组受体的工程细胞，所述重组受体被设计为识别和/或特异性地结合与疾病或病症相关的分子，并导致响应，例如在结合到这些分子时对这些分子的免疫应答。受体可以包括嵌合受体，例如嵌合抗原受体(CAR)和其他转基因抗原受体，包括转基因T细胞受体(TCR)。在一些实施方式中，提供的方法随后是早期干预疗法，用于在开始所述细胞疗法后在对象中治疗毒性，例如在2级或更高的CRS或重度CRS的迹象和症状之前或在2级或更高的细胞毒性或重度神经毒性发生前开始早期干预
A.细胞疗法和工程改造的细胞
在一些方面中，提供的治疗方法涉及向对象(例如，患者)给予表达重组受体的细胞和其组合物。在一些实施方式中，细胞包含或经工程化改造而包含：工程化改造的受体，例如工程化改造抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)，或T细胞受体。细胞包括此类细胞的群，包含此类细胞的组合物和/或富含此类细胞的组合物，例如其中某一类型的细胞(如T细胞或CD8+或CD4+细胞)被富集或选择。组合物包括用于给药的药物组合物和制剂，如用于过继细胞治疗。.
在一些实施方式中，所述细胞包括通过基因工程改造导入的一种或多种核酸，并，由此表达所述核酸的重组或经基因工程改造的产物。在一些实施方式中，基因转移通过如下方式进行：首先，刺激细胞，例如，通过将其与刺激物合并，所述刺激物诱导响应，例如增殖、存活和/或活化，例如，通过细胞因子或活化标志物的表达来检测，然后转导该活化的细胞，并且在培养物中扩增至足以供于临床应用的数量。
用于引入遗传工程改造的组分，例如，抗原受体(例如，CAR)的各种方法是熟知的，并可采用本文提供的方法和组合物。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些，包括通过病毒，例如，逆转录病毒或慢病毒，转导，转座子，和电穿孔。
1.重组受体
细胞通常表达重组受体，如抗原受体，包括功能性非TCR抗原受体，例如，嵌合抗原受体(CAR)，和其他抗原结合受体如转基因T细胞受体(TCR)。受体还包括其他嵌合受体。
a.嵌合抗原受体(CAR)
示例性的抗原受体，包括CAR，以及用于工程改造和将受体导入细胞中的方法，包括例如，在国际专利申请公开号WO200014257、WO2013126726、WO2012/129514、WO2014031687、WO2013/166321、WO2013/071154、WO2013/123061，美国专利申请公开号US2002131960、US2013287748、US20130149337，美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353、和8,479,118，和欧洲专利申请号EP2537416中所述的那些，和/或Sadelain等，Cancer Discov.2013年4月；3(4):388–398；Davila等，(2013)PLoSONE 8(4):e61338；Turtle等，Curr.Opin.Immunol.,2012年10月；24(5):633-39；Wu等，Cancer,2012年3月18(2):160-75中所述的那些。在一些方面中，所述抗原受体包括美国专利号7,446,190中所述的CAR，和国际专利申请公开号WO/2014055668A1中所述的那些。CAR的实例包括任何上述出版物中公开的CAR，例如WO2014031687，US 8,339,645，US 7,446,179，US 2013/0149337，美国专利号7,446,190，美国专利号8,389,282，Kochenderfer等，2013,NatureReviews Clinical Oncology,10,267-276(2013)；Wang等，(2012)J.Immunother.35(9):689-701；和Brentjens等，Sci Transl Med.2013 5(177)。还参见WO2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190和美国专利号:8,389,282。嵌合受体，例如CAR通常包括细胞外抗原结合结构域，如抗体分子的一部分，通常是抗体的可变重(VH)链区和/或可变轻(VL)链区，例如，scFv抗体片段。
在一些实施方式中，受体靶向的抗原是多肽。在一些实施方式中，其是碳水化合物或其他分子。在一些实施方式中，与正常或非靶向的细胞或组织相比，抗原在疾病或病症的细胞，例如，肿瘤或致病性细胞上选择性表达或过表达。在其他实施方式中，抗原在正常细胞上表达和/或在工程改造的细胞上表达。
在一些实施方式中，受体靶向的抗原包括：孤儿酪氨酸激酶受体RORl、tEGFR、Her2、Ll-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA、和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、EPHa2、ErbB2、3、或4、FBP、胎儿乙酰胆碱e受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、kdr、κ轻链、Lewis Y、L1-细胞粘附分子、MAGE-A1、间皮素、MUC1、MUC16、PSCA、NKG2D配体、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原、PSMA、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2，和MAGE A3、CE7、维尔姆斯瘤(WT-1)、细胞周期蛋白如细胞周期蛋白A1(CCNA1)和/或生物素化的分子，和/或通过HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。
在一些实施方式中，CAR结合病原体特异性抗原。在一些实施方式中，所述CAR对病毒抗原(例如HIV，HCV，HBV等)，细菌抗原，和/或寄生性抗原具有特异性。
在一些实施方式中，重组受体(例如，CAR)的抗体部分还包括免疫球蛋白恒定区的至少部分，如铰链区，例如，IgG4铰链区，和/或CH1/CL和/或Fc区。在一些实施方式中，恒定区或部分是人IgG(如IgG4或IgG1)的。在一些方面中，恒定区的部分作为抗原-识别部分，例如，scFv，和跨膜结构域之间的间隔子区域。间隔子的长度可以是：与没有间隔子相比，该长度的间隔子提高抗原结合之后的细胞响应。示例性间隔子，例如，铰链区，包括描述于国际专利申请公开号WO2014031687中的那些。在一些实例中，间隔子长度为或约为12个氨基酸或长度不超过12个氨基酸。示例性的间隔子包括具有如下长度的那些：至少约10至229个氨基酸、约10至200个氨基酸、约10至175个氨基酸、约10至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约10至100个氨基酸、约10至75个氨基酸、约10至50个氨基酸、约10至40个氨基酸、约10至30个氨基酸、约10至20个氨基酸或约10至15个氨基酸，并且包括上述所列范围的任何端点之间的整数。在一些实施方式中，间隔子区具有约12个氨基酸或更短，约119个氨基酸或更短或约229个氨基酸或更短。示例性间隔子包括单IgG4铰链，IgG4铰链连CH2和CH3结构域，或IgG4铰链连CH3结构域。示例性的间隔子包括但不限于，描述于Hudecek等.(2013)Clin.Cancer Res.,19:3153,国际专利申请公开号WO2014031687，美国专利号8,822,647或公开申请号US2014/0271635中的那些。
在一些实施方式中，恒定区或部分是人IgG(如IgG4或IgG1)的。在一些实施方式中，所述间隔子具有序列ESKYGPPCPPCP(示于SEQ ID NO:1)，并且由示于SEQ ID NO:2的序列编码。在一些实施方式中，所述间隔子具有示于SEQ ID NO:3的序列。在一些实施方式中，所述间隔子具有示于SEQ ID NO:4的序列。在一些实施方式中，所述恒定区或部分是IgD的。在一些实施方式中，所述间隔子具有示于SEQ ID NO:5的序列。在一些实施方式中，所述间隔子具有与SEQ ID NO:1、3、4或5显示至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的氨基酸序列。
该抗原识别结构域一般连接至一个或多个胞内信号转导组分，例如在CAR的情况中，模拟通过抗原受体复合物(例如TCR复合物)的活化的信号转导组分，和/或通过另一细胞表面受体的信号。因此，在一些实施方式中，抗原-结合组分(例如，抗体)与一个或多个跨膜和胞内信号转导结构域连接。在一些实施方式中，跨膜结构域融合于胞外结构域。实施方式之一中，采用天然关联受体(例如CAR)内结构域之一的跨膜结构域。在一些情况中，跨膜结构域经氨基酸取代修饰或选择，以避免这类结构域结合相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域，尽可能减少与受体复合物其他成员的相互作用。
在一些实施方式中，所述跨膜结构域源自天然或合成来源。当所述来源是天然来源时，某些方面，所述结构域源自任何膜结合或跨膜蛋白。跨膜区包括源自T-细胞受体的α、β或ζ链，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137，CD154的那些(即包含至少它们的跨膜区域)。或者，在一些实施方式中，所述跨膜结构域是合成的。某些方面，合成跨膜结构域以疏水残基为主，例如亮氨酸和缬氨酸。某些方面，合成跨膜结构域的各末端会有苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方式中，连接是通过接头、间隔子和/或跨膜结构域。
胞内信号传导结构域包括模拟或近似通过天然抗原受体的信号、通过此类受体联合共刺激受体的信号，和/或仅通过共刺激受体的信号的那些。在一些实施方式中，存在短的寡肽或多肽接头，例如，长度为2至10个氨基酸的接头，例如包含甘氨酸和丝氨酸(例如，甘氨酸-丝氨酸二联体)的接头，并在CAR的胞质信号传导结构域和跨膜结构域之间形成连接。
受体如CAR一般包括至少一种或一个胞内信号传导组分。在一些实施方式中，受体包括TCR复合物的胞内组分，例如介导T-细胞活化和细胞毒性的TCR CD3链，例如，CD3ζ链。因此，某些方面，抗原-结合部分连接一个或多个细胞信号传导模块。在一些实施方式中，细胞信号传导模块包括CD3跨膜结构域、CD3胞内信号传导结构域，和/或其他CD跨膜结构域。在一些实施方式中，所述受体，例如，CAR，还包括一种或多种其他分子的部分，例如Fc受体γ、CD8、CD4、CD25或CD16。例如，在一些方面，CAR或其他嵌合受体包括CD3ζ(CD3-ζ)或Fc受体γ与CD8、CD4、CD25或CD16的嵌合分子。
在一些实施方式中，在CAR或其他嵌合受体结合时，受体的胞质结构域或胞内信号传导结构域活化免疫细胞(如经改造表达CAR的T细胞)至少一项正常效应功能或应答。例如，在一些情况中，CAR诱导T细胞诸如溶细胞活性或辅助性T细胞活性等功能，如分泌细胞因子或其他因子。在一些实施方式中，采用抗原受体部分或共刺激分子的胞内信号传导结构域的截短部分来代替完整免疫刺激链，例如，如果其转导效应物功能信号的话。在一些实施方式中，一个或多个胞内信号传导结构域包括T细胞受体(TCR)的胞质序列，并且在一些方面中，还包括天然情况下存在与这些受体一致作用以在抗原受体结合后启动信号传导的共受体。
就天然TCR而言，完全活化一般不仅需要通过TCR的信号传导，而且还需要共刺激信号。因此，在一些实施方式中，为了促进完全活化，CAR还包括用于产生次或共刺激信号的组分。在其他实施方式中，CAR不包括用于产生共刺激信号的组分。某些方面，同一细胞表达另一CAR来提供用于产生次级信号或共刺激信号的组分。
某些方面，T细胞活化被认为通过两类胞质信号传导序列介导：引发通过TCR的抗原依赖性主活化的那些(主胞质信号传导序列)和以非抗原依赖性方式作用提供次或共刺激信号的那些(次胞质信号传导序列)。某些方面，CAR包含这些信号传导组分之一或两者。
某些方面，CAR包含主胞质信号传导序列，其调控TCR复合物的主活化。以刺激方式作用的初级胞质信号传导序列可包含信号传导基序，这些基序又称基于免疫受体酪氨酸的活化基序或ITAM。ITAM的实例包括初级胞质信号传导序列，其包括源自如下的那些：TCRζ，FcRγ，FcRβ，CD3γ，CD3δ，CD3ε，CD8、CD22、CD79a、CD79b，和CD66d。在一些实施方式中，CAR中的胞质信号传导分子包含胞质信号传导结构域，其部分，或源自CD3ζ的序列。
在一些实施方式中，CAR包含共刺激受体(例如CD28、4-1BB、OX40、DAP10，和ICOS)的跨膜部分和/或信号传导结构域。某些方面，同一CAR既包含活化组分又包含共刺激组分。
在一些实施方式中，活化结构域包括在一个CAR内，而共刺激组分由识别另一种抗原的另一CAR提供。在一些实施方式中，CAR包括活化或刺激性CAR、共刺激CAR，其均表达在相同细胞上(参见WO2014/055668)。在一些方面，细胞包括一种或多种刺激或活化CAR和/或共刺激CAR。在一些实施方式中，细胞还包括抑制性CAR(iCAR，参见Fedorov等，Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013年12月))，如识别除了与疾病或病症相关和/或特异性的CAR，由此通过所述疾病靶向CAR递送的激活信号通过抑制性CAR与其配体结合而减少或抑制，例如减少脱靶效应。
在某些实施方式中，所述胞内信号传导结构域包含CD28跨膜和信号传导结构域，其连接至CD3(例如，CD3-ζ)胞内结构域。在一些实施方式中，胞内信号传导结构域包括了嵌合CD28和CD137(4-1BB，TNFRSF9)共刺激结构域，其连接CD3ζ胞内结构域。
在一些实施方式中，CAR的胞质部分包含一个或多个例如两个或更多共刺激结构域和活化结构域如主要活化结构域。示例性的CAR含有CD3-ζ、CD28和4-1BB的胞内部分。
在一些实施方式中，CAR或其他抗原受体还包括标志物，例如细胞表面标志物，其可用于确定使细胞表达受体(例如细胞表面受体的截短形式，例如截短的EGFR(tEGFR))的转导或工程改造。在一些方面，标志物包括CD34、NGFR或表皮生长因子受体(例如tEGFR)的全部或部分(例如截短形式)。在一些实施方式中，编码标志物的核酸可操作性地连接编码接头序列(例如可切割接头序列，例如，T2A)的多核苷酸。例如，标志物，和任选地，接头序列，可以是国际专利申请公开号WO2014031687中描述的任一种。例如，所述标志物可以是截短的EGFR(tEGFR)，其任选地连接至接头序列，例如T2A可切割接头序列。用于截短的EGFR(例如tEGFR)的示例性的多肽包含示于SEQ ID NO:7或16的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:7或16显示至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的氨基酸序列。示例性T2A接头序列包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或显示出与SEQ ID NO:6有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列相同性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，标志物是分子，例如，非天然可见于T细胞或T细胞表面的细胞表面蛋白或其组成部分。在一些实施方式中，所述分子是非自体分子，例如非自体蛋白质，即不被待接受该细胞过继转移的宿主的免疫系统识别为“自身”的蛋白质。
在一些实施方式中，所述标志物无治疗性功能和/或除了用作遗传改造的标志物(例如，用于选择成功被改造的细胞)之外没有任何作用。在其他实施方式中，所述标志物可以是治疗性分子或在其他情况中发挥一些所需效果的分子，例如有待在体内遇到的细胞的配体，例如共刺激或免疫哨点分子，用来增强和/或抑制所述细胞在过继转移和遇到配体之后的响应。
在一些情况中，CAR被称为第一、第二和/或第三代CAR。在一些方面中，第一代CAR是在抗原结合时仅提供CD3链诱导信号的CAR；在一些方面中，第二代CAR是提供此信号和共刺激信号的CAR，如包括来自共刺激受体(例如CD28或CD137)的胞内信号传导结构域的CAR；在一些方面中，第三代CAR是包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的CAR。
在一些实施方式中，嵌合抗原受体包括包含抗体或抗体片段的胞外部分。在一些方面，嵌合抗原受体包括包含抗体或片段的胞外部分和胞内信号传导结构域。在一些实施方式中，抗体或片段包括scFv，且胞内结构域包含ITAM。在一些方面，胞内信号转导结构域包括CD3-ζ链的ζ链的信号转导结构域。在一些实施方式中，嵌合抗原受体包括跨膜结构域，其连接胞外结构域和胞内信号传导结构域。在一些方面中，所述跨膜结构域包含CD28的跨膜部分。在一些实施方式中，所述嵌合抗原受体包含T细胞共刺激分子的细胞内结构域。胞外结构域和跨膜结构域可直接或间接相连。在一些实施方式中，胞外结构域和跨膜通过间隔子，例如本文所述的任何间隔子连接。在一些实施方式中，所述受体包含作为跨膜结构域的衍生来源的分子的胞外部分，例如CD28胞外部分。在一些实施方式中，所述嵌合抗原受体包含源自T细胞共刺激分子或其功能变体的胞内结构域，例如在跨膜结构域和胞内信号传导结构域之间。某些方面，T细胞共刺激分子是CD28或41BB。
例如，在一些实施方式中，CAR含有抗体，例如抗体片段，是或含有CD28的跨膜部分或其功能变体的跨膜结构域，以及含有CD28的信号传导部分或功能性变体的胞内信号传导结构域，和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体。在一些实施方式中，CAR含有抗体，例如抗体片段，是包含或含有CD28的跨膜部分或其功能变体的跨膜结构域，以及含有4-1BB的信号传导部分或功能变体的胞内信号传导结构域，以及CD3ζ的信号传导部分或其功能变体。在一些所述实施方式中，所述受体还包括间隔子，其包含Ig分子(例如人Ig分子)的部分，例如Ig铰链，例如IgG4铰链，例如仅铰链间隔子。
在一些实施方式中，所述重组受体(例如，CAR)的跨膜结构域是或包括人CD28(例如登录号P01747.1)或其变体的跨膜结构域，例如包含示于SEQ ID NO:8的氨基酸序列的跨膜结构域，或与SEQ ID NO:8显示至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的氨基酸序列；在一些实施方式中，包含重组受体的部分的跨膜-结构域包含示于SEQ ID NO:9的氨基酸序列，或与其具有至少是或约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述重组受体(例如CAR)的胞内信号转导部分包含人CD28或其功能变体或部分的胞内共刺激信号转导结构域，例如在原始CD28蛋白的位置186-187处具有LL-GG取代的结构域。例如，胞内信号传导结构域可包含示于SEQ ID NO:10或11的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:10或11显示至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述胞内结构域包含4-1BB(例如(登录号Q07011.1)或功能变体或其部分的胞内共刺激信号传导结构域，例如示于SEQ ID NO:12的氨基酸序列，或与SEQ IDNO:12显示至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述重组受体(例如CAR)的胞内信号转导结构域包含人CD3ζ刺激信号转导结构域或其功能变体，例如人CD3ζ(登录号:P20963.2)同种型3的112AA胞质结构域，或CD3ζ信号转导结构域，其描述于美国专利号:7,446,190或美国专利号8,911,993。例如，在一些实施方案中，胞内信号传导结构域包含如SEQ ID NO:13、14或15所示的氨基酸序列或显示与SEQ IDNO:13、14或15有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列相同性的氨基酸序列。
在一些方面中，所述间隔子仅包含IgG的铰链区，例如仅IgG4或IgG1的铰链，例如仅示于SEQ ID NO:1的间隔子铰链。在其他实施方式中，所述间隔子是或包含Ig铰链，例如，IgG4源性的铰链，其任选地连接至CH2和/或CH3结构域。在一些实施方式中，所述间隔子是Ig铰链，例如，IgG4铰链，其连接至CH2和CH3结构域，例如示于SEQ ID NO:4。在一些实施方式中，所述间隔子是Ig铰链，例如，IgG4铰链，其仅连接至CH3结构域，例如示于SEQID NO:3。在一些实施方式中，间隔子是或含富甘氨酸-丝氨酸序列或其他柔性接头，例如已知柔性接头。
例如，在一些实施方式中，CAR包括抗体，例如抗体片段，包括scFv，间隔物，例如含有免疫球蛋白分子的一部分的间隔物，例如铰链区和/或一个或多个重链分子恒定区，例如含有Ig-铰链的间隔物，含有全部或部分CD28衍生的跨膜结构域的跨膜结构域，CD28衍生的胞内信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方式中，CAR包括抗体或片段，例如scFv，间隔物，例如任何含有Ig-铰链的间隔物，CD28衍生的跨膜结构域、4-1BB衍生的细胞内信号转导结构域和CD3ζ衍生信号转导结构域。
在一些实施方式中，编码所述CAR构建体的核酸分子还包括编码T2A核糖体跳跃元件和/或tEGFR序列的序列，例如，在编码CAR的序列的下游。在一些实施方式中，所述序列编码SEQ ID NO:6所示的T2A核糖体跳跃元件，或与SEQ ID NO:6显示至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的氨基酸序列。在一些实施方式中，还可产生表达抗原受体(例如CAR)的T细胞以表达截短EGFR(EGFRt)作为非免疫原性的选择表位(例如通过引入编码被T2A核糖体开关隔开的CAR和EGFRt的构建体，以从相同构建体表达两种蛋白质)，其随后可被用作标志物以检测所述细胞(参见例如美国专利号8,802,374)。在一些实施方式中，所述序列编码SEQ ID NO:7或16所示的tEGFR序列，或与SEQ ID NO:7或16显示至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的氨基酸序列。
由给予对象的细胞表达的重组受体(例如CAR)通常识别或特异性结合被治疗的疾病或病症或细胞中所表达的、与之相关的和/或特异性的分子。在特异性结合分子例如抗原时，受体通常将免疫刺激信号(例如ITAM转导的信号)递送到细胞中，从而促进靶向疾病或病症的免疫应答。例如，在一些实施方式中，细胞表达CAR，所述CAR特异性结合由疾病或病症的细胞或组织表达的抗原或与疾病或病症相关的抗原。
b.TCR
在一些实施方式中，基因工程化改造的抗原受体包括：重组T细胞受体(TCR)和/或从天然存在的T细胞克隆的TCR。在一些实施方式中，鉴定分离自患者的针对靶抗原(例如，癌症抗原)的高亲和力T细胞克隆，并导入所述细胞。在一些实施方式中，针对靶抗原的TCR克隆已在用人免疫系统基因(例如，人白细胞抗原系统，或HLA)工程改造的转基因小鼠中产生。参见例如，肿瘤抗原(参见例如，Parkhurst等，(2009)Clin Cancer Res.15:169–180和Cohen等.(2005)J Immunol.175:5799–5808)。在一些实施方式中，使用噬菌体展示分离针对目标抗原的TCR(参见例如，Varela-Rohena等，(2008)Nat Med.14:1390–1395和Li(2005)Nat Biotechnol.23:349–354)。
在一些实施方式中，获得T细胞克隆后，将TCRα和β链分离并克隆入基因表达载体。在一些实施方式中，TCRα和β基因通过小核糖核酸病毒2A核糖体跳跃肽(skip peptide)连接，使得两条链共表达。在一些实施方式中，TCR的遗传转移(genetic transfer)通过逆转录病毒或慢病毒载体，或通过转座子完成(参见例如，Baum等，(2006)Molecular Therapy:The Journal of the American Society of Gene Therapy.18:1748–1757；和Hackett等，(2010)Molecular Therapy:The Journal of the American Society of GeneTherapy.18:674–683)。
c.多靶向
在一些实施方式中，细胞和方法包括多靶向策略，如在细胞上表达两种或更多种基因工程改造的受体，其各自识别相同或不同抗原，并且一般各自包含不同的胞内信号转导组成部分。这类多靶向策略描述于，例如，国际专利申请公开号WO 2014055668A1(描述了活化和共刺激性CAR的组合，例如，靶向在脱靶(例如正常细胞)上独立存在但仅在待治疗的疾病或病症的细胞上一起存在的2种不同抗原)和Fedorov等，Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013年12月)(描述了表达活化和抑制性CAR的细胞，如其中活化CAR结合正常或非疾病细胞以及待治疗疾病或病症的细胞上同时表达的抗原，并且抑制性CAR结合仅在正常细胞或不希望治疗的细胞上表达的另一种抗原的那些策略)。
例如，在一些实施方式中，细胞包括表达第一遗传工程改造的抗原受体(例如，CAR或TCR)的受体，其能够诱导针对该细胞的活化信号，一般在特异性结合至由第一受体识别的抗原，例如第一抗原之后。在一些实施方式中，细胞还包括第二传工程改造的抗原受体(例如，CAR或TCR)，例如，嵌合共刺激受体，其能够诱导针对免疫细胞的共刺激信号，一般在特异性结合至由第二受体识别的第二抗原之后。在一些实施方式中，第一抗原和第二抗原是相同的。在一些实施方式中，第一抗原和第二抗原是不同的。
在一些实施方式中，所述第一和/或第二遗传工程改造的抗原受体(例如，CAR或TCR)能够诱导针对细胞的活化信号。在一些实施方式中，受体包括包含ITAM或ITAM-样基序的胞内信号转导组成部分。在一些实施方式中，由第一受体诱导的活化包括细胞中的蛋白质表达改变或信号转导，其导致引发免疫应答，如ITAM磷酸化和/或引发ITAM-介导的信号转导级联，位于结合受体附近簇集分子(例如，CD4或CD8等)和/或形成免疫学突触，一种或多种转录因子(如NF-κB和/或AP-1)的活化，和/或诱导因子如细胞因子的表达、增殖和/或存活。
在一些实施方式中，所述第一和/或第二受体包括共刺激受体的胞内信号转导结构域，如CD28、CD137(4-1BB)、OX40、和/或ICOS。在一些实施方式中，第一和第二受体包括不同的共刺激受体的胞内信号转导结构域。在一实施方式中，第一受体包含CD28共刺激信号转导区域，而第二受体包含4-1BB共刺激信号转导区域，或反之亦然。
在一些实施方式中，第一和/或第二受体包括包含ITAM或ITAM-样基序的胞内信号转导结构域以及共刺激受体的胞内信号转导结构域。
在一些实施方式中，第一受体包括包含ITAM或ITAM-样基序的胞内信号转导结构域，而所述第二受体包含共刺激受体的胞内信号转导结构域。与在相同细胞内诱导的活化信号结合的共刺激信号导致了免疫应答，如稳健且持续的免疫应答，如增加的基因表达、细胞因子和其他因子的分泌，和T细胞介导的效应功能，如细胞杀伤。
在一些实施方式中，仅连接第一受体或仅连接第二受体都不会诱导稳健的免疫应答。在一些方面中，如果仅连接一个受体，细胞变得耐受或对抗原无应答，或者被抑制，和/或不被诱导增殖或分泌因子或发挥效应物功能。在一些这类实施方式中，然而，当连接多个受体时，如在表达第一和第二抗原的细胞的相遇之后，实现所需的应答，如全免疫活化或刺激，例如，由一种或多种细胞因子的分泌、增殖、持续、和/或进行免疫效应功能如细胞毒性杀伤靶细胞所示。
在一些实施方式中，两种受体分别诱导针对细胞的活化和抑制信号，使得受体之一与其抗原的结合活化细胞或诱导应答，但是第二抑制性受体与其抗原的结合诱导阻抑或减弱该应答的信号。示例是活化CAR与抑制性CAR或iCAR的组合。可使用这种策略，例如，其中活化CAR结合在疾病或病症中表达但也在正常细胞上表达的抗原，而抑制性受体结合在正常细胞上表达但不在疾病或病症的细胞上表达的单独抗原。
在一些实施方式中，在如下情况中使用多靶向策略，瞬时(例如，在与遗传工程改造相关的刺激下)或永久地在非疾病细胞上表达和/或工程改造的细胞本身上表达与特定疾病或病症相关的抗原。在这种情况中，通过要求连接2个分离并单独特异性的抗原受体，可改善特异性、选择性和/或功效。
在一些实施方式中，多种抗原，例如，第一和第二抗原在靶向的细胞、组织、或者疾病或病症上，如癌细胞上表达。在一些方面中，细胞、组织、疾病或病症是多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞。在一些实施方式中，多种抗原中的一种或多种一般也在不希望用细胞治疗靶向的细胞(如正常或非疾病细胞或组织)和/或工程改造的细胞本身上表达。在这类实施方式中，通过需要连接多个受体来实现细胞应答，实现了特异性和/或功效。
2.细胞以及制备用于遗传工程改造的细胞
表达受体并以本文所述的方法提供的细胞包括工程改造的细胞。基因工程改造一般涉及将编码重组或工程改造部分的核酸导入含有细胞的组合物中，例如，通过逆转录病毒转导、转染或转化进行。
在一些实施方式中，核酸是异源性的，即，通常不存在于细胞或从该细胞获得的样品中，如从另一个生物体或细胞获得的样品，其例如通常不在工程改造中的细胞和/或这类细胞来源的生物体中发现。在一些实施方式中，核酸不是天然存在的，如核酸不是自然中发现的，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合。
所述细胞一般是真核细胞，例如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方式中，细胞衍生自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫系统的细胞，如先天或适应性免疫的细胞，例如，骨髓或淋巴样细胞，包括淋巴细胞，一般是T细胞和/或NK细胞。其他示例性的细胞包括干细胞，如多能(multipotent)和多潜能(pluripotent)干细胞，包括诱导性多潜能干细胞(iPSC)。细胞一般是原代细胞，如直接从对象分离和/或从对象分离并冷冻的那些细胞。在一些实施方式中，细胞包括T细胞或其他细胞类型的一个或多个亚组，如全T细胞群、CD4+细胞、CD8+细胞及其亚群，如由功能、活化状态、成熟、分化潜力、扩增、再循环、定位，和/或持续能力、抗原特异性、抗原受体类型、特定器官或区室中的存在、标志物或细胞因子分泌概况，和/或分化程度限定的那些。关于待治疗的对象，细胞可以是同种异体和/或自体的。方法包括现成的方法。某些方面，如对于现成的技术，细胞是多潜能和/或多能的，如干细胞，如诱导性多潜能干细胞(iPSC)。在一些实施方式中，该方法包括从对象分离细胞，对其进行制备、处理、培养和/或工程改造，并且在冷冻保存前或后将其再导入同一患者。
T细胞和/或CD4+和/或CD8+T细胞的亚型和亚群包括：原初T(TN)细胞、效应T细胞(TEFF)、记忆T细胞及其亚型，如干细胞记忆T(TSCM)、中心记忆T(TCM)、效应记忆T(TEM)、或终末分化的效应记忆T细胞、肿瘤-浸润性淋巴细胞(TIL)、不成熟T细胞、成熟T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粘膜相关的非变体T(MAIT)细胞、天然产生的和过继性调节T(Treg)细胞、辅助T细胞，如TH1细胞、TH2细胞、TH3细胞、TH17细胞、TH9细胞、TH22细胞、滤泡辅助T细胞、α/βT细胞，和δ/γT细胞。
在一些实施方式中，细胞是自然杀伤(NK)细胞。在一些实施方式中，细胞是单核细胞或粒细胞，例如，骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞，和/或嗜碱性粒细胞。
在一些实施方式中，所述细胞包括通过基因工程改造导入的一种或多种核酸，并，由此表达所述核酸的重组或经基因工程改造的产物。在一些实施方式中，核酸是异源性的，即，通常不存在于细胞或从该细胞获得的样品中，如从另一个生物体或细胞获得的样品，其例如通常不在工程改造中的细胞和/或这类细胞来源的生物体中发现。在一些实施方式中，核酸不是天然存在的，如核酸不是自然中发现的，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合。
在一些实施方式中，经工程改造的细胞的制备包括一种或多种培养和/或一个或多个制备步骤。用于导入编码转基因受体(如CAR)的核酸的细胞可从样品(如生物样品，例如，获自或源自对象的样品)分离。在一些实施方式中，从中分离细胞的对象是患有一定疾病或病症或需要细胞治疗或将给予细胞治疗的对象。在一些实施方式中，对象是需要特定治疗性介入的人，如过继细胞疗法，用于该疗法的细胞是经分离、加工和/或经工程改造的。
因此，在一些实施方式中，所述细胞是原代细胞，例如，原代人细胞。所述样品包括直接取自对象的组织、体液和其他样品，以及获自一个或多个处理步骤，例如分离、离心、基因工程改造(例如采用病毒载体的转导)、清洗和/或孵育的样品。所述生物样品可以是直接获自生物来源的样品或经处理的样品。生物样品包括但不限于，体液，例如血液、血浆、血清、脑脊髓液、滑膜液、尿液和汗液，组织和器官样品，包括源自它们的经处理的样品。
某些方面，作为衍生或分离细胞来源的样品是血液或血液源性的样品，或者为或衍生自血浆分离置换法或白细胞去除术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检物、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关的淋巴样组织、粘膜相关的淋巴样组织、脾、其他淋巴样组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、乳腺、骨、前列腺、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官，和/或源自其中的细胞。在细胞治疗(如过继细胞治疗)中，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。
在一些实施方式中，所述细胞源自细胞系，例如，T细胞系。在一些实施方式中，细胞获自异种异体来源，例如，获自小鼠、大鼠、非人灵长类，和猪。
在一些实施方式中，细胞的分离包括一个或多个制备和/或非基于亲和性的细胞分离步骤。在一些实施例中，细胞在一种或多种反应剂的存在下经清洗、离心和/或孵育，例如，以去除不需要的组分，富集所需组分，裂解或去除对某些反应剂敏感的细胞。在一些实施例中，细胞基于一种或多种特性如封闭、粘附性质、尺寸、对某些组分的敏感性和/或抗性来分离。
在一些实施例中，通过例如单采或白细胞去除术获取对象循环血液的细胞。某些方面，所述样品包括淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核血液白细胞、血红细胞和/或血小板，某些方面包括血红细胞和血小板之外的细胞。
在一些实施方式中，采自对象的血液细胞经清洗如去除血浆部分，然后将其置于合适的缓冲液或培养基中留待后用。在一些实施方式中，所述细胞用磷酸盐缓冲盐水(PBS)清洗。在一些实施方式中，清洗溶液不含钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面中，清洗步骤按照生产商说明，通过半自动化的“流通”离心法(例如，Cobe 2991细胞处理器，百特公司(BaXter))完成。在一些方面中，清洗步骤按照生产商说明，通过内切流过滤(TFF)完成。在一些实施方式中，在清洗后，所述细胞在多种生物相容缓冲液中重悬，例如，无Ca++/Mg++PBS。在某些实施方式中，血液细胞样品中的组分去除后细胞直接重悬于培养基中。
在一些实施方式中，所述方法包括基于封闭的细胞分离方法，如通过裂解血红细胞并通过Percoll或Ficoll梯度离心来从外周血制备血液白细胞。
在一些实施方式中，所述分离方法包括，基于细胞中一种或多种特定分子，例如表面标志物，例如，表面蛋白质、胞内标志物或核酸的表达或存在来分离不同的细胞类型。在一些实施方式中，可采用任何基于此类标志物进行分离的已知方法。在一些实施方式中，所述分离是基于亲和性或基于免疫亲和性的分离。例如，某些方面，所述分离包括基于细胞的一种或多种标志物(通常是细胞表面标志物)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如，通过与特异性地结合此类标志物的抗体或结合伴侣孵育，随后通常是清洗步骤，将已结合所述抗体或结合伴侣的细胞与从未结合至所述抗体或结合伴侣的那些细胞分离。
此类分离步骤可基于正选择，保留已结合所述反应剂的细胞被用于后续应用，和/或负选择，保留未结合至所述抗体或结合伴侣的细胞。在一些实施例中，两种级份均保留用于后续应用。某些方面，当没有可用于在异质群中特异性地鉴定细胞类型的抗体时，负选择可能是特别有用的，这样，分离最好是基于细胞表达的标志物而不是基于想要的细胞群。
所述分离的结果必需是特定细胞群或表达特定标志物的细胞的100％的富集或去除。例如，特定类型细胞(如表达某标志物的细胞)的正选择或富集指的是提高此类型细胞的数量或百分数，其结果不必是使不表达该标志物的细胞完全消失。同样地，特定类型细胞(如表达某标志物的细胞)的负选择、去除或消除指的是减少此类细胞的数量或百分数，其结果不必是此类细胞的完全清除。
在一些实施例中，进行多轮分离步骤，其中，对来自一个步骤的正或负选择的级份进行另一分离步骤，例如后续的正或负选择。在一些实施例中，单个分离步骤同时消除表达多种标志物的细胞，例如通过将细胞与分别对负选择目标标志物具有特异性的多种抗体或结合伴侣一同孵育。同样地，可同时正选择多种细胞类型，通过将细胞与不同类型细胞上表达的多种抗体或结合伴侣一同孵育。
例如，某些方面，通过正或负选择技术分离特定T细胞亚群，例如一种或多种表面标志物阳性细胞或高表达T细胞，例如，CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+和/或CD45RO+T细胞。
例如，CD3+、CD28+T细胞可以采用抗-CD3/抗-CD28抗体连接的磁珠(例如，M-450CD3/CD28T细胞扩增器)来正选择。
在一些实施方式中，分离通过如下方式进行：通过正选择富集特定细胞群，或通过负选择消除特定细胞群。在一些实施方式中，正或负选择通过将细胞与特异性地结合一种或多种表面标志物的一种或多种抗体或其他结合剂一同孵育来完成，所述一种或多种表面标志物分别在正选择或负选择的细胞上表达(标志物+)或高表达(标志物高)。
在一些实施方式中，通过对非T细胞(例如B细胞、单核细胞或其他血液白细胞)上表达的标志物(例如CD14)进行负选择来从PBMC样品分离T细胞。某些方面，使用CD4+或CD8+选择步骤来分离CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞。通过针对一种或多种原初、记忆和/或效应T细胞亚群上表达或以相对高表达的标志物进行正或负选择，可将此类CD4+和CD8+群进一步分选成亚群。
在一些实施方式中，在CD8+细胞中进一步富集或消除原初、中心记忆、效应记忆和/或中心记忆干细胞，例如通过基于相应亚群相关表面抗原的正选择或负选择。在一些实施方式中，富集中心记忆T(TCM)细胞以提高功效，如以改善长期存活、扩增和/或给予后的植入，某些方面，其在此类亚群中特别强势。参见Terakura等.(2012)Blood.1:72–82；Wang等(2012)J Immunother.35(9):689-701。在一些实施方式中，将TCM-富集的CD8+T细胞与CD4+T细胞合并进一步增强功效。
在实施方式中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+和CD62L-亚组。可在PBMC中富集或消除CD62L-CD8+和/或CD62L+CD8+部分，例如采用抗CD8和抗CD62L抗体。
在一些实施方式中，针对中心记忆T(TCM)细胞的富集基于CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3、和/或CD127阳性或高表面表达；在一些方面中，其基于CD45RA和/或粒酶B表达或高度表达的细胞进行负选择。在一些方面中，分离CD8+TCM细胞富集群是通过如下方式进行：消除CD4、CD14、CD45RA表达细胞，并正选择或富集CD62L表达细胞。某一方面，富集中心记忆T(TCM)细胞从基于CD4表达的负选择细胞级份开始，对该级份进行基于CD14和CD45RA表达的负选择和基于CD62L的正选择。某些方面，这些选择同时进行，而在其他方面的内容中，这些选择按任意顺序依次进行。某些方面，将用于制备CD8+细胞群或亚群的基于CD4表达的相同选择步骤用于产生CD4+细胞群或亚群，这样，基于CD4分离的阳性和阴性级份均被保留用于后续步骤，可以是任选地继以一种或多种进一步的正选择或负选择步骤之后。
在某具体实施例中，对PBMC样品或其他血液白细胞样品进行CD4+细胞选择，负选和正选级份都保留。然后，对负选级份再基于CD14和CD45RA或CD19进行负选择，而正选级份基于中心记忆T细胞特征性标志(如CD62L或CCR7)进行正选择，其中，所述正和负选择以任一顺序进行。
通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将辅助CD4+T细胞分选成原初、中心记忆和效应细胞。CD4+淋巴细胞可通过标准方法获得。在一些实施方式中，原初CD4+T淋巴细胞是CD45RO-、CD45RA+、CD62L+、CD4+T细胞。在一些实施方式中，中心记忆CD4+细胞是CD62L+和CD45RO+。在一些实施方式中，效应CD4+细胞是CD62L-和CD45RO-。
在某一实施例中，为了通过负选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合物(cocktail)通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施方式中，使所述抗体或结合伴侣结合至固体支持物或基质如磁珠或顺磁珠，从而能够分离正选择和/或负选择的细胞。例如，在一些实施方式中，所述细胞和细胞群采用免疫磁性(或亲和性磁性)分离技术分开(separated)或分离(isolated)(综述参见《分子医学方法》(Methods inMolecular Medicine)，第58卷：代谢研究方法(Metastasis Research Protocols)，第2卷：细胞体外和体内性能(Cell Behavior In Vitro and In Vivo)，第17-25页，S.A.Brooks和U.Schumacher编新泽西州托托华的胡玛纳出版社(Humana Press Inc.))。
在一些方面中，待分离的样品或细胞组合物与较小的可磁化或磁响应性材料(如磁响应性颗粒或微粒，例如顺磁珠(例如，Dynalbeads珠或MACS珠))孵育。所述磁响应性材料(例如，颗粒)一般直接或间接连接结合伴侣(例如，抗体)，其特异性地结合某一分子，例如，需要分离(例如，需要进行负或正选择)的一种或多种细胞或细胞群上存在的表面标志物。
在一些实施方式中，所述磁性颗粒或珠包括磁响应性材料，其结合特异性的结合部分，例如抗体或其他结合伴侣。有多种熟知的磁响应性材料用于磁性分离方法。合适的磁性颗粒包括描述于Molday，美国专利号4,452,773和欧洲专利说明书EP 452342 B中的那些，其通过引用纳入本文。胶体定形的颗粒，例如描述于Owen美国专利号4,795,698的那些，而Liberti等，美国专利号5,200,084是其他实例。
孵育一般在一定条件下进行，所述条件下所述抗体或结合伴侣或分子(如二抗或其他反应剂，其特异性地结合所述抗体或结合伴侣)连接所述磁性颗粒或珠，特异性地结合所述样品中的细胞上的细胞表面分子(如果存在)。
某些方面，将所述样品置于磁场中，并且，具有与其连接的磁性响应或可磁化颗粒的那些细胞将被磁体吸引，并与未标记的细胞分离。对于正选择而言，保留被磁体吸引的细胞；对于负选择而言，保留不被吸引的细胞(未标记的细胞)。某些方面，在同一选择步骤过程中进行正和负选择的组合，其中，保留阳性和阴性部分，并进一步处理或进行进一步分离步骤。
在某些实施方式中，磁响应性颗粒外包被一抗或其他结合伴侣、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素。在某些实施方式中，磁性颗粒通过一抗覆层连接细胞，所述一抗对一种或多种标志物具有特异性。在某些实施方式中，所述细胞，而非珠，用一抗或结合伴侣标记，然后，添加细胞类型特异性的二抗或其他结合伴侣(例如，链霉亲和素)包被的磁性颗粒。在某些实施方式中，链霉亲和素包被的磁性颗粒与生物素化一抗或二抗联用。
在一些实施方式中，使所述磁响应性颗粒连接和留在待后续孵育、培养和/或工程改造的细胞；某些方面，使所述颗粒连接留在用于给予患者的细胞。在一些实施方式中，从所述细胞去除可磁化的或磁响应性颗粒。用于从细胞移去可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括，例如，采用竞争性非标记的抗体、和可磁化颗粒或连接至可切割接头的抗体。在一些实施方式中，可磁化颗粒是生物可降解的。
在一些实施方式中，所述基于亲和力的选择通过磁性活化的细胞分选(MACS)(加利福尼亚奥本的美天旎生物技术公司(Miltenyi Biotech))进行。磁性活化细胞分选(MACS)系统能够高纯度选择其上连接有磁化颗粒的细胞。在某些实施方式中，MACS以如下模式操作：在施加外部磁场之后，依次洗脱非目标和目标物质。即，使连接磁化颗粒的细胞保持在原位，而洗脱未连接的物质。然后，在该第一洗脱步骤完成后，将滞留在磁场中且防止被洗脱的物质以使得它们可被洗脱和回收的某种方式释放。在某些实施方式中，标记非靶细胞并将其从异质细胞群中消除。
在某些实施方式中，分离(isolation)或分开(separation)采用系统、器械或设备来进行，它们实施所述方法分离、细胞制备、分开、处理、孵育、培养和/或配制步骤中的一个或多个步骤。某些方面，系统用以在封闭或无菌环境中进行这些步骤中的每一步骤，为的是例如尽可能减少误差、用户操作和/或污染。在某一实施例中，所述系统是国际专利申请公开号WO2009/072003或美国专利申请公开号US 20110003380 A1中描述的系统。
在一些实施方式中，所述系统或设备在集成或独立系统中，和/或以自动化的或可编程的形式，进行分离、处理、工程改造和配制步骤中的一个或多个，例如全部。某些方面，所述系统或设备包括与所述系统或设备信息连通的计算机和/或计算机程序，其允许用户编程、控制、评估所述处理、分离、工程改造和配制步骤的结果，和/或调节所述处理、分离、工程改造和配制步骤的各方面。
在一些方面中，使用CliniMACS系统(美天旎生物技术公司(Miltenyi Biotic))进行所述分离和/或其他步骤，例如，以供在封闭和无菌系统中进行临床级别水平的细胞的自动化分离。组件可包括集成微型计算机、磁性分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。某些方面，集成计算机控制仪器的所有组件，并指示所述系统以标准化的顺序进行重复操作。某些方面，磁性分离单元包括可移动的永久磁体和用于选择柱的握持装置(holder)。蠕动泵控制贯穿通过管组的流速，并且与夹管阀一起确保通过所述系统的缓冲液和连续细胞悬液的受控流速。
某些方面，CliniMACS系统使用以无菌、无热源溶液的形式提供的抗体-偶联的可磁化颗粒。在一些实施方式中，在用磁性颗粒标记细胞之后，清洗细胞以去除过量的颗粒。然后，将细胞制备袋连与管组相连，管组再连接含缓冲液的袋和细胞收集袋。所述管组由预组装的无菌管道组成，包括前置柱和分离柱，并且仅用于单次使用。在分离程序启动之后，系统自动将细胞样品上样到分离柱。带标记的细胞留在柱中，而未标记细胞则经一系列清洗步骤去除。在一些实施方式中，用于本文所述方法的细胞群是未标记的，不留在柱中。在一些实施方式中，用于本文所述方法的细胞群是经标记的，并且留在柱中。在一些实施方式中，撤去磁场之后从柱上洗脱用于本文所述方法的细胞群，并将其收集在细胞收集袋中。
在某些实施方式中，分离和/或其他步骤采用CliniMACS Prodigy系统(美天旎生物技术公司)进行。某些方面，CliniMACS Prodigy系统装配有细胞处理单元，所述细胞处理单元允许自动化清洗和离心分级分离细胞。CliniMACS Prodigy系统还可包括内置相机和图像识别软件，通过辨别来源细胞产物的肉眼可见层来确定最优选细胞分级分离终点。例如，外周血被自动化地分离成红细胞、血液白细胞和血浆层。CliniMACS Prodigy系统还可包括集成化的细胞培育腔室，其完成细胞培养测序，例如细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可允许无菌排出和补充培养基，细胞可采用整合显微镜来监测。参见例如，Klebanoff等.(2012)J Immunother.35(9):651–660,Terakura等.(2012)Blood.1:72–82,和Wang等.(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方式中，本文所述细胞群通过流式细胞术收集和富集(或消除)，其中细胞经多种表面标志物染色并携载于流体流中。在一些实施方式中，本文所述的细胞群通过制备规模(FACS)-分选法收集和富集(或消除)。在某些实施方式中，本文所述的细胞群通过采用微电机系统(MEMS)芯片联合基于FACS的检测系统来收集和富集(或消耗)(参见例如，国际专利申请公开号WO 2010/033140，Cho等(2010)Lab Chip 10，1567-1573；和Godin等(2008)JBiophoton.1(5):355–376。在这两种情况中，细胞都可用多种标志物标记，以允许以高纯度分离明确的T细胞亚组。
在一些实施方式中，抗体或结合伴侣用一种或多种可检测标志物标记，以利于正选择和/或负选择的分离。例如，分离可基于与荧光标记抗体的结合。在一些实施例中，将基于抗体或对一种或多种细胞表面标志物具有特异性的其他结合伴侣的结合所进行的细胞分离携载于流体流中，例如通过荧光活化的细胞分选(FACS)(其包括制备规模(FACS)和/或微机电系统(MEMS)芯片)，例如与流式细胞术检测系统联合。此类方法允许进行基于多种标志物的同时正选择和负选择。
在一些实施方式中，制备方法包括冷冻例如冻存所述细胞的步骤，在分离、孵育和/或工程改造之前或之后。在一些实施方式中，所述冷冻和后续融化步骤去除细胞群中的粒细胞，并且一定程度去除细胞群中的单核细胞。在一些实施方式中，将所述细胞悬浮于冷冻溶液中，例如在清洗去除血浆和血小板之后。可采用各种已知冷冻溶液和某些方面的参数。例子涉及用到包含20％DMSO和8％人血清白蛋白(HAS)的PBS，或是其他合适的细胞冷冻培养基。然后，用培养基1:1将其稀释，使得DMSO和HSA的终浓度分别是10％和4％。然后，一般以1°/分钟的速率将细胞冷冻至-80℃，并贮存在液氮储罐的汽相中。
在一些实施方式中，在基因工程改造之前或与基因工程改造一起孵育和/或培养细胞。孵育步骤可包括培养、孵育、刺激、活化、和/或增殖。孵育和/或工程改造可以在培养容器中进行，如单元、腔室、孔、柱、管、管组、阀，小瓶，培养皿，袋或其他培养或培养细胞的容器。在一些实施方式中，在刺激条件或刺激剂存在下孵育细胞或组合物。这类条件包括设计成诱导群中细胞增殖、繁殖、活化，和/或存活，模拟抗原接触，和/或细胞预备以备基因改造如导入重组抗原受体的那些条件。
所述条件可包括如下一项或多项：特定培养基、温度、含氧量、二氧化碳含量、时间、用剂如营养物、氨基酸、抗生素、离子，和/或刺激因子，例如细胞因子、趋化因子、抗原、结合伴侣、融合蛋白、重组可溶性受体，和设计用来活化细胞的任何其他物质。
在一些实施方式中，刺激条件或用剂包括一种或多种物质如配体，它能够活化TCR复合物的胞内信号传导结构域。某些方面，所述物质打开或启动T细胞中的TCR/CD3胞内信号传导级联。这类物质可以包括抗体，如对TCR具有特异性的那些，例如，抗-CD3。在一些实施方式中，刺激条件包括一种或多种物质，例如，配体，其能够刺激共刺激受体，例如，抗-CD28。在一些实施方式中，这类物质和/或配体可以结合固体支持物如珠，和/或一种或多种细胞因子。任选地，扩增方法还可包括如下步骤：向培养基(如以至少约0.5ng/ml的浓度)添加抗CD3和/或抗CD28抗体。在一些实施方式中，刺激剂包括1L-2和/或IL-15，例如，至少约10单位/mL浓度的IL-2。在一些方面中，IL-2浓度为或至少约10单位/mL。在一些实施方式中，刺激剂包括PMA和离子毒素。
在一些方面中，孵育根据技术，例如授予Riddell等的美国专利号6,040,16,040,177，Klebanoff等.(2012)J Immunother.35(9):651–660,Terakura等.(2012)Blood.1:72–82和/或Wang等.(2012)J Immunother.35(9):689-701中所述的那些进行。
在一些实施方式中，T细胞群通过如下方式扩增：在培养启动组合物在添加饲养层细胞，如非分裂型外周血单核细胞(PBMC)，(例如令所得细胞群中初始待扩增群中的各T淋巴细胞有至少约5、10、20或40或更多PBMC饲养层细胞)；并孵育所述培养物(例如孵育足以扩增所述数量的T细胞时)。某些方面，所述非分裂型饲养细胞可包括经γ-辐照的PBMC饲养细胞。在一些实施方式中，所述PBMC用约3000-3600拉德范围内的γ射线辐照以防止细胞分裂。某些方面，所述饲养细胞在添加T细胞群之前添加至培养基。
在一些实施方式中，刺激条件包括适于人T淋巴细胞生长的温度，例如至少约25摄氏度，一般至少约30度，且一般是或约是37摄氏度。可选地，孵育还可包括添加非分裂型EBV-转化的类淋巴母细胞(LCL)作为饲养层细胞。
LCL可以用约6000-10000拉德范围内的γ射线辐照。某些方面，LCL饲养细胞以任何合适的量提供，例如LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比率是至少约10:1。
某些实施方式中，通过用抗原刺激原初或抗原特异性T淋巴细胞来获得抗原特异性T细胞，如抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞。例如，可如下产生对巨细胞病毒抗原的抗原特异性T细胞系或克隆：从感染对象分离T细胞并采用巨细胞病毒抗原体外刺激细胞。
3.用于基因工程改造的方法和载体
用于引入基因工程改造的组分(例如，重组受体，例如，CAR或TCR)的各种方法是熟知的，并可用于本文提供的方法和组合物。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些，包括通过病毒，例如，逆转录病毒或慢病毒，转导，转座子，和电穿孔。
在一些实施方式中，采用重组感染性病毒颗粒将重组核酸转移进入细胞，例如，源自猿病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体。在一些实施方式中，采用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体，例如γ-逆转录病毒载体，将重组核酸转移进入T细胞(参见例如，Koste等，(2014)Gene Therapy 2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等，(2000)Exp Hematol 28(10):1137-46；Alonso-Camino等，(2013)Mol Ther Nucl Acids 2,e93；Park等，Trends Biotechnol.2011年11月；29(11):550–557)。
在一些实施方式中，所述逆转录病毒载体具有长末端重复序列(LTR)，例如，源自莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)，骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)，鼠胚胎干细胞病毒(MESV)，鼠干细胞病毒(MSCV)，脾病灶形成病毒(SFFV)或腺相关病毒(AAV)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体源自鼠逆转录病毒。在一些实施方式中，逆转录病毒包括源自任何禽或哺乳动物细胞来源的那些。逆转录病毒通常是兼嗜性的，这意味着它们能够感染数种物种(包括人类)的宿主细胞。在一个实施方式中，用待表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已描述许多示例性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740；6,207,453；5,219,740；Miller和Rosman(1989)BioTechniques 7:980-990；Miller，A.D.(1990)HumanGene Therapy 1:5-14；Scarpa等(1991)Virology 180:849-852；Burns等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:8033-8037；和Boris-Lawrie和Temin(1993)Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109。
慢病毒转导方法是已知的。示例性方法描述于，例如，Wang等，(2012)J.Immunother.35(9):689-701；Cooper等，(2003)Blood.101:1637–1644；Verhoeyen等，(2009)Methods Mol Biol.506:97-114；和Cavalieri等，(2003)Blood.102(2):497-505。
在一些实施方式中，通过电穿孔将重组核酸转移进入T细胞(参见例如，Chicaybam等，(2013)PLoS ONE 8(3):e60298和Van Tedeloo等.(2000)GeneTherapy 7(16):1431-1437)。在一些实施方式中，通过转位将重组核酸转移进入T细胞(参见例如，Manuri等(2010)Hum Gene Ther 21(4):427-437；Sharma等，(2013)Molec Ther Nucl Acids 2,e74；和Huang等，(2009)Methods Mol Biol506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，描述于《分子生物学方案新编》(Current Protocols inMolecular Biology)，约翰威利父子公司(John Wiley&Sons)，纽约州纽约)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染；钨颗粒促进的微粒轰击(Johnston，Nature,346:776-777(1990))；和磷酸锶DNA共沉淀(Brash等，Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。
用于转移编码重组产物的核酸的其他方法和载体是描述于，例如，国际专利申请公开号WO2014055668和美国专利号7,446,190的那些。
在一些实施方式中，可在扩增期间或之后，用T细胞受体或嵌合抗原受体(CAR)转染细胞(例如T细胞)。用于引入所需受体基因的该转染可用任何合适的逆转录病毒载体进行(例如)。然后，可从起始刺激物(例如CD3/CD28刺激物)释放基因修饰的细胞群，随后用第二类刺激物(例如通过从头诱导的受体(denovo introduced receptor))刺激。该第二类刺激物可包括：肽/MHC分子形式的抗原性刺激物，遗传引入受体的同源(交联)配体(例如CAR的天然配体)或任何直接结合新受体框架内的任何配体(如抗体)(例如同识别受体内的恒定区)。参见，例如，Cheadle等，“Chimeric antigen receptors for T-cell basedtherapy”(“用于基于T细胞的治疗的嵌合抗原受体”)2012；907:645-66或Barrett等，Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer(“癌症的嵌合抗原受体治疗”)AnnualReview of Medicine Vol.65:333-347(2014).
在一些情况中，可采用无需细胞(例如T细胞)被活化的载体。在一些此类情况中，在活化前，可对细胞进行选择和/或转导。因此，可在培养细胞之前或之后，在一些情况中，在培养的至少一部分的期间或同时对细胞的工程化改造。
在一些方面中，细胞进一步经工程改造以促进细胞因子或其他因子的表达。用于引入的其他核酸(例如基因)包括用以例如通过促进转移的细胞的活力和/或功能改善治疗功效的那些；用以提供遗传标志物以供选择和/或评价细胞的基因，例如以评估体内存活或定位；用以改善安全性的基因，例如，通过使细胞对体内负选择易感，如Lupton S.D.等，Mol.and Cell Biol.,11:6(1991)；和Riddell等，Human Gene Therapy 3:319-338(1992)所述；也参见Lupton的公开号PCT/US91/08442和PCT/US94/05601等，其描述显性阳性可选择的标志物与阴性可选择的标志物的融合衍生的双功能可选择的融合基因的应用。参见例如Riddell等，美国专利号6,040,177，第14-17栏。
在一些情况中，刺激因子(例如，淋巴因子或细胞因子)的过表达可能对对象具有毒性。因此，在一些情况中，工程改造的细胞包括，例如在过继免疫治疗中给予之后，使细胞对体内负选择易感的基因区段。例如在一些方面中，所述细胞经工程改造，从而它们可因它们所给予的对象的体内状况的变化而被消除。可负选择的表型可通过插入赋予对所给予物质(例如，化合物)敏感性的基因来产生。可负选择的基因包括：单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV-I TK)基因(Wigler等，Cell II:223，I977)，其提供更昔洛韦敏感性；细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因，细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(APRT)基因，细菌胞嘧啶脱氨酶(Mullen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89:33(1992))。
B.组合物和制剂
在一些实施方式中，免疫疗法和/或细胞疗法以组合物或制剂提供，如药物组合物或制剂。这类组合物可以按照提供的方法使用，如在预防或治疗疾病、病症和紊乱中，或在检测、诊断和预防方法中。
术语“药物制剂”指此类形式的制剂：所述其中所含活性成分的生物学活性有效，并且不含对待接受该制剂的对象具有不可接受的毒性的其他成分。
“药学上可接受的运载体”指药物制剂中的一种成分，其不是活性成分，其对对象无毒。药学上可接受的运载体包括但是不限于，缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
在一些实施方式中，用药学上可接受的运载体配制T细胞疗法，如工程改造的T细胞(例如，CAR T细胞)。某些方面，运载体的选择部分决定于具体的细胞和/或给药方法。因此，存在多种合适的配方。例如，所述药物组合物可包含防腐剂。合适的防腐剂可包括，例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。某些方面，采用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物的存在量通常是约0.0001％至约2％(以组合物总重量计)。运载体描述于，例如，《雷明顿药物科学》(Remington's PharmaceuticalSciences)，第16版，Osol,A.编(1980)。在所用剂量和浓度下，药学上可接受的运载体通常是对受者无毒的，包括但不限于：缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸缓冲剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷酯，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷胺酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他糖，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；形成盐的抗衡离子，如钠；金属络合物(如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，例如聚乙二醇(PEG)。
某些方面，所述组合物包含缓冲剂。合适的缓冲剂包括，例如，柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和多种其他酸和盐。某些方面，采用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物的存在量通常是约0.001％至约4％(以组合物总重量计)。用于制备可给予的药物组合物的方法是已知的。示例性方法具体描述于，例如，《雷明顿：药物科学与实践》(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，LWW公司(Lippincott Williams&Wilkins)；第21版(2005年5月1日)。
该制剂可包含水溶液。所述制剂或组合物还可包含超过一种活性成分，该活性成分能够用于待用所述细胞治疗或预防的特定适应症、疾病或病症，其包括一种或多种活性成分，其中活性与细胞互补和/或相应活性剂彼此不产生负面影响。这类活性成分适合以有效用于所需目的的用量联合存在。因此，在一些实施方式中，所述药物组合物还包含其他药学活性物质或药物，例如化疗剂，例如，天冬酰胺酶，白消安，卡铂，顺铂，柔红霉素，多柔比星，氟尿嘧啶，吉西他滨，羟基脲，甲氨蝶呤，紫杉醇，利妥昔单抗，长春碱，长春新碱等。
在一些实施方式中，药物组合物包含有效治疗或预防疾病或病症的量如治疗有效或预防有效量的细胞。在一些实施方式中，通过定期评估治疗的对象来监测治疗或预防功效。对于数天或更长时间的重复给药，可根据所述病症重复治疗直至疾病症状得到所需阻遏。然而，其他剂量方案可能是有用的并且可以确定。所需剂量的递送可以通过单次推注(bolus)给予所述组合物，通过多次推注给予所述组合物或通过连续输注给予组合物。
可采用标准给药技术、制剂和/或器械给予细胞。本文提供了用于储存和给予组合物的制剂和装置，如注射器和瓶。对于细胞，给予可以是自体同源或是异源的。例如，可以从一个对象获取免疫抑制细胞或祖细胞，给予同一对象或不同的相容对象。外周血衍生的免疫抑制细胞或其后代(例如，体内、离体或体外衍生的)可通过局部注射给予，包括导管给药、全身注射、局部注射、静脉注射、或胃肠外给药。当给予治疗性组合物(例如含有遗传修饰免疫抑制细胞的药物组合物)时，其通常被配制成单位剂型的可注射形式(溶液、悬液、乳液)。
制剂包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、肺、透皮、肌肉内、鼻内、粘膜、舌下或栓剂给药的那些。在一些实施方式中，胃肠外给予所述物质或细胞群。本文所用的术语“胃肠外”包括静脉内、肌内、皮下、直肠、阴道和腹膜内给予。在一些实施方式中，所述物质或细胞群通过静脉内、腹膜内或皮下注射采用外围全身递送给予对象。
在一些实施方式中，组合物是无菌液体制剂，例如等渗水性溶液、悬液、乳液、分散系或粘性组合物，其某些方面可缓冲至选定pH。液体制剂通常比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物更容易制备。另外，液体组合物一定程度上多少更便于给药，尤其是通过注射给药。在另一方面，粘性组合物可配制在合适的粘度范围以延长与特定组织的接触时间。液体或粘性组合物可包括运载体，其可以是溶剂或分散介质，其含有，例如，水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多羟基化合物(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适混合物。
可通过将所述细胞纳入溶剂中，例如与合适的运载体、稀释剂、或赋形剂如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等活化，来制备无菌可注射溶液。也可将该组合物冻干。组合物可含有辅助性物质，如润湿、分散、或乳化剂(例如，甲基纤维素)、pH缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、风味剂、色素等，这取决于所需的给药和制备途径。某些方面，可查阅标准文件来制备合适制备物。
可添加增强组合物稳定性和无菌性的各种添加剂，包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。也可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)确保避免微生物作用。可通过使用延迟吸收的物质(如单硬脂酸铝和明胶)延长可注射药物形式的吸收。
用于体内给药的制剂一般为无菌的。例如，可通过无菌滤膜过滤方便地地做到无菌。
对于预防或治疗疾病，合适剂量可取决于待治疗的疾病类型、一种或多种物质的类型、重组受体或细胞类型、疾病的严重程度和疾病病程、是否给予物质或细胞用于预防性或治疗性目的、先前治疗、对象的临床史和对所述物质或细胞的响应，以及主治医师的判断。在一些实施方式中，所述组合物适合在一个时间点或以一系列治疗来给予对象。
C.治疗和方法
在一些实施方式中，将免疫疗法和/或细胞疗法，例如，表达重组受体的细胞剂量给予对象以治疗或预防疾病、病症和紊乱，包括癌症。在一些实施方式中，将免疫疗法和/或细胞疗法，例如，细胞、群和组合物给予患有待治疗的特定疾病或病症的对象或患者，例如，通过过继细胞疗法，例如过继T细胞疗法。在一些实施方式中，将细胞和组合物，例如在孵育和/或其他处理步骤之后工程改造的组合物和生产终末组合给予对象，如具有所述疾病或病症或有风险患上所述疾病或病症的对象。某些方面，所述方法由此治疗例如缓解所述疾病或病症的一种或多种症状，例如减小癌症的肿瘤负荷，该癌症表达经改造T细胞识别的抗原。在一些实施方式中，提供的方法包括一种或多种早期或先期干预，包括通过在除了免疫疗法和/或细胞疗法外给予物质或疗法或其他处理。
给予过继细胞治疗所用细胞的方法是已知的，可与本文方法和组合物联用。例如，过继T细胞疗法方法描述于，例如，Gruenberg等的美国专利申请公开号2003/0170238；Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)NatRev Clin Oncol.8(10):577-85)。参见例如Themeli等.(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等.(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等.(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
所治疗的疾病或病症可以是如下所述任何疾病或病症：其中抗原的表达与疾病状况或紊乱的病因相关和/或参与疾病状况或紊乱的病因，例如抗原表达造成、加剧或者涉及该疾病、病症或紊乱。示例性的疾病和病症可包括与细胞恶性化或转化相关的疾病或病症(例如肿癌症)、自身免疫性或炎性疾病或感染性疾病(例如细菌、病毒或其他病原体所致感染)。示例性的抗原，包括与可接受治疗的各自疾病和病症关联的抗原，如前文所描述。某些具体实施方式中，嵌合抗原受体或转基因TCR特异性结合与疾病或病症相关抗原。
所述疾病、病症和紊乱包括肿瘤，包括实体肿瘤、血液恶性肿瘤，和黑素瘤，并包括局部和转移性肿瘤，感染性疾病，例如病毒或其他病原体，例如，HIV，HCV，HBV，CMV的感染，和寄生性疾病，以及自身免疫和炎性疾病。在一些实施方式中，所述疾病或病症是肿瘤，癌症，恶性肿瘤，赘生物，或其他增殖性疾病或病症。所述疾病包括但不限于：白血病、淋巴瘤、例如、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、非霍奇金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、难治滤泡性淋巴瘤淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、惰性B细胞淋巴瘤、B细胞恶性瘤、结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、皮肤癌、包括黑素瘤、骨癌、和脑癌、卵巢癌、上皮癌、肾细胞癌、胰腺腺癌、霍奇金淋巴瘤、宫颈、结肠直肠癌、胶质母细胞瘤、成神经细胞瘤、尤文肉瘤、成神经管细胞瘤、骨肉瘤、滑膜肉瘤，和/或间皮瘤。在一些实施方式中，对象患有急性淋巴细胞性白血病(ALL)。在一些实施方式中，对象具有非霍奇金氏淋巴瘤。
在一些实施方式中，所述疾病或病症是感染性疾病或病症，例如但不限于，病毒、逆转录病毒、细菌和原生动物感染、免疫缺陷、巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、腺病毒、BK多瘤病毒。在一些实施方式中，所述疾病或病症是自体免疫或炎性疾病或病症，例如关节炎，例如类风湿性关节炎(RA)，I型糖尿病，系统性红斑狼疮(SLE)，炎性肠病，牛皮癣，硬皮病，自身免疫性甲状腺疾病，格雷夫斯病，克罗恩病多发性硬化，哮喘和/与移植相关的疾病或病症。
在一些实施方式中，与所述疾病或紊乱相关的抗原选择自下组：孤儿酪氨酸激酶受体RORl、tEGFR、Her2、Ll-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA、和肝炎B表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、EPHa2、ErbB2、3、或4、FBP、胎儿乙酰胆碱e受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、kdr、κ轻链、LewisY、L1-细胞粘附分子、MAGE-A1、间皮素、MUC1、MUC16、PSCA、NKG2D配体、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原、PSMA、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、酪氨酸蛋白激酶B2、CD123、CS-1、c-Met、GD-2，和MAGE A3、CE7、维尔姆斯瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白如细胞周期蛋白A1(CCNA1)和/或生物素化分子，和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。
在一些实施方式中，所述细胞治疗(如过继T细胞治疗)通过自体移植进行，其中，自接受细胞治疗的对象分离和/或以其他方法制得细胞，或者从该对象的样品获得细胞。因此，某些方面，细胞源自需要治疗的对象(例如，患者)，并在分离和处理后回输给同一对象。
在一些实施方式中，细胞治疗(如过继T细胞治疗)通过同种异体移植进行，其中，作为分离和/或以其他方法制备细胞的来源的对象(如第一对象)不是待接受或最终接受细胞治疗的对象。在此类实施方式中，然后将所述细胞给予相同物种的不同对象，例如第二对象。在一些实施方式中，所述第一和第二对象遗传相同。在一些实施方式中，所述第一和第二对象遗传学相似。在一些实施方式中，所述第二对象表达与第一对象病毒相同的HLA类或超型。
所述细胞可通过任何合适的方式给予，例如，通过推注(bolus)输注，通过注射，例如，静脉内或皮下注射、眼内注射、眼底注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、反间隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、巩膜上腔注射、球后注射、眼周注射或球周递送。在一些实施方式中，它们通过胃肠外、肺内的和鼻内，以及如果希望局部治疗，病灶内给予。腹膜外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。在一些实施方式中，通过单次推注给予细胞来给予给定剂量。在一些实施方式中，通过多次推注给予细胞，例如，在不超过3天的时间内，或通过连续输注给予细胞来给予。
对于预防或治疗疾病，合适剂量可取决于待治疗的疾病类型，重组受体或细胞类型，疾病的严重程度和疾病病程、该细胞是否给予用于预防性或治疗性目的、先前治疗、对象的临床史和对所述细胞的响应，以及主治医师的判断。在一些实施方式中，所述组合物和细胞适合在一个时间点或以一系列治疗来给予对象。
在一些实施方式中，细胞作为联合治疗的一部分给予，例如与另一治疗性干预(如抗体或经工程改造的细胞或受体或药剂(如细胞毒性或治疗行药剂))同时或以任何顺序依次给予。在一些实施方式中，细胞与一种或多种其他治疗剂共同给予或与另一治疗干预联合给予，或者同时或者以任何顺序依次进行。在一些情况中，所述细胞与其他治疗共同给予，时间上足够接近从而细胞群增强一种或多种其他治疗剂的作用，反之亦然。在一些实施方式中，细胞在一种或多种其他治疗剂之前给予。在一些实施方式中，细胞在一种或多种其他治疗剂之后给予。在一些实施方式中，一种或多种其他治疗剂包括细胞因子如IL-2，例如用于以增强维持。在一些实施方式中，所述方法包括给予化疗剂。
在一些实施方式中，该方法包括在给予之前给予化疗剂，例如，调节化疗剂，例如，以降低肿瘤负荷。
某些方面中，用免疫消耗(例如，淋巴消耗)疗法预调节对象可改善过继细胞治疗(ACT)的效果。
因此，在一些实施方式中，该方法包括在开始细胞疗法之前向对象给予预调节剂，例如淋巴消耗剂或化学治疗剂，例如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。例如，可在开始细胞疗法之前至少2天，如至少3天、4天、5天、6天或7天之前，给予对象预调节剂。在一些实施方式中，在开始细胞疗法之前不超过7天(例如之前不超过6、5、4、3或2天)给予对象预调节剂。
在一些实施方式中，用约20mg/kg至100mg/kg，如约40mg/kg至80mg/kg之间的剂量的环磷酰胺预调节对象。在一些方面，用约60mg/kg环磷酰胺预调节对象。在一些实施方式中，可以单一剂量给予或可以多个剂量，例如每天，每隔一天或每三天给予环磷酰胺。在一些实施方式中，环磷酰胺以每日一次给予1或2天。
在一些实施方式中，当淋巴消耗剂包含氟达拉滨时，以约1mg/m2至100mg/m2，例如约10mg/m2至75mg/m2，15mg/m2至50mg/m2，20mg/m2至30mg/m2，或24mg/m2至26mg/m2的剂量向对象给予氟达拉滨。在一些情况下，给予对象25mg/m2的氟达拉滨。在一些实施方式中，可以单一剂量给予或可以多个剂量，例如每天，每隔一天或每三天给予氟达拉滨。在一些实施方式中，每天给予氟达拉滨，例如进行1-5天，例如，进行3-5天。
在一些实施方式中，淋巴消耗剂包含物质的组合，例如环磷酰胺和氟达拉滨的组合。因此，物质的组合可包含任何剂量或给药方案(例如上述那些)的环磷酰胺和任何剂量或给药方案(例如上述那些)的氟达拉滨。例如，在一些方面，在第一或后续剂量之前，给予对象60mg/kg(约2g/m2)的环磷酰胺和3至5个剂量的25mg/m2氟达拉滨。
在给予细胞之后，在一些实施方式中，检测经工程改造细胞群的生物活性，例如采用任意已知方法。用以评估的参数包括：工程改造的或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，体内方式(例如，通过成像)或离体方式(例如，通过ELISA或流式细胞术)。在某些实施方式中，工程改造的细胞破坏靶细胞的能力可采用本领域已知的任何合适的方法来检测，例如描述于如下文献的细胞毒性试验，例如，Kochenderfer等，J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)，和Herman等.J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)。在某些实施方式中，通过测定一种或多种细胞因子，例如CD107a，IFNγ，IL-2和TNF的表达和/或分泌，来检测细胞的生物活性。某些方面，生物活性通过评估临床效果来检测，例如肿瘤负荷或负载的减少。
在某些实施方式中，所述工程改造的细胞以各种方式进一步修饰，从而增加其治疗或预防功效。例如，通过细胞群表达的工程改造的CAR或TCR可通过接头直接或间接地偶联靶向部分。与化合物偶联是本领域已知的，例如将CAR或TCR连接至靶向部分。参见例如，Wadwa等,J.Drug Targeting 3:1 1 1(1995)，和美国专利5,087,616。
1.给药
在本文所提供的方法的一些实施方式中，药物组合物包含有效治疗或预防疾病或病症的量的细胞，如治疗有效或预防有效量的细胞。在一些实施方式中，细胞以有效降低疾病或病症负荷的量包含于组合物中。
在过继细胞治疗的情况下，给予给定的“剂量”包括以单一组合物和/或单次不间断给药，例如以单次注射或连续输注给予给定量或数量的细胞，并且还包括在不超过3天特定时间段内，以分开剂量，在多个单独组合物或输注物中提供，给予给定量或数量的细胞。因此，在一些情况下，剂量是在单个时间点给予或开始的指定数量的细胞的单次或连续给予。然而，在一些情况下，剂量在不超过三天的时间段内进行多次注射或输注，例如每天一次持续三天或两天，或通过在一天时间内的多次输注。
因此，在一些方面，以单一药物组合物给予所述剂量的细胞。在一些实施方式中，所述剂量的细胞以总体含有第一剂量的细胞的多个组合物给予。
术语“分开剂量”是指分开的剂量，使其在超过一天的时间内给药。这种类型的给药包括在本方法中，并且被认为是单一剂量。
因此，在一些方面中，所述剂量可以分开剂量给予。例如，在一些实施方式中，可在2天或3天内向对象给予该剂量。分开给药的示例性方法包括在第一天给予25％的剂量，并在第二天给予剩余的75％的剂量。在其他实施方式中，第一剂量的33％可以在第一天给予，而在第二天给予剩余的67％。在一些方面，在第一天给予10％的剂量，在第二天给予30％的剂量，并且在第三天给予60％的剂量。在一些实施方式中，分开剂量扩展不超过3天。
在一些实施方式中，可以将一个或多个连续或后续细胞剂量给予对象。在一些实施方式中，连续或后续细胞剂量在开始给予细胞的第一剂量后大于或大于约7天、14天、21天、28天或35天给予。连续或后续细胞剂量可以超过、约为、等于或少于第一剂量。在一些实施方式中，可以重复给予T细胞疗法，如给予第一和/或第二细胞剂量。
在一些实施方式中，按照本文所提供的方法向对象给予细胞剂量。在一些实施方式中，剂量的大小或时间作为对象中特定疾病或病症的函数而确定。本领域技术人员能够凭经验地确定针对特定疾病剂量的大小或时间。剂量可根据疾病或紊乱和/或患者和/或其他治疗的具体属性而不同。
在某些实施方式中，所述细胞或各细胞亚型群以约10万-1000亿细胞和/或每公斤体重该数量的细胞给予对象，例如约10万-约500亿细胞(例如，约500万细胞、约2500万细胞、约5亿细胞、约10亿细胞、约50亿细胞、约200亿细胞、约300亿细胞、约400亿细胞、或以上任意两个值构成的范围)、约100万-约500亿细胞(例如，约500万细胞、约2500万细胞、约5亿细胞、约10亿细胞、约50亿细胞、约200亿细胞、约300亿细胞、约400亿细胞、或以上任意两个值构成的范围)、如约1000万-约1000亿细胞(e.g.、约2000万细胞、约3000万细胞、约4000万细胞、约6000万细胞、约7000万细胞、约8000万细胞、约9000万细胞、约100亿细胞、约250亿细胞、约500亿细胞、约750亿细胞、约900亿细胞、或以上任意两个值构成的范围)，并且在一些情况中，约1亿细胞-约500亿细胞(例如，约1.2亿细胞、约2.5亿细胞、约3.5亿细胞、约4.5亿细胞、约6.5亿细胞、约8亿细胞、约9亿细胞、约30亿细胞、约300亿细胞、约450亿细胞)，或以上任一范围内任一数值，和/或对象每公斤体重以上所述数量的细胞。剂量可根据疾病或紊乱和/或患者和/或其他治疗的具体属性而不同。在一些实施方式中，所述值指的是表达重组受体的细胞的数量；在其他实施方式中，它们指的是给予的T细胞或PBMC或总细胞的数量。
在一些实施方式中，细胞疗法包括给予含有这样数量细胞的剂量，所述数量细胞至少为或至少约为或为或约为0.1x106细胞/kg对象体重，0.2x106细胞/kg，0.3x106细胞/kg，0.4x106细胞/kg，0.5x106细胞/kg，1x106细胞/kg，2.0x106细胞/kg，3x106细胞/kg或5x106细胞/kg。
在一些实施方式中，细胞疗法包括给予含有下述数量细胞的剂量：介于或介于约0.1x106细胞/kg对象体重和1.0x107细胞/kg之间，介于或介于约0.5x106细胞/kg和5x106细胞/kg之间，介于或介于约0.5x106细胞/kg和3x106细胞/kg之间，介于或介于约0.5x106细胞/kg和2x106细胞/kg之间，介于或介于约0.5x106细胞/kg和1x106cell/kg之间，介于或介于约1.0x106细胞/kg对象体重和5x106细胞/kg之间，介于或介于约1.0x106细胞/kg和3x106细胞/kg之间，介于或介于约1.0x106细胞/kg和2x106细胞/kg之间，介于或介于约2.0x106细胞/kg对象体重和5x106细胞/kg之间，介于或介于约2.0x106细胞/kg和3x106细胞/kg之间或介于或介于约3.0x106细胞/kg对象体重和5x106细胞/kg之间，各自包括端值。
在一些实施方式中，所述细胞剂量包括介于是或约是2x105的细胞/kg和是或约是2x106的细胞/kg之间，如介于是或约是4x105的细胞/kg和是或约是1x106的细胞/kg之间或介于是或约是6x105的细胞/kg和是约是8x105的细胞/kg之间。在一些实施方式中，所述细胞剂量包括不超过2x105的细胞(例如，表达抗原如表达CAR的细胞)/千克对象体重(细胞/kg)，如不超过或不超过约3x105细胞/kg，不超过或不超过约4x105细胞/kg，不超过或不超过约5x105细胞/kg，不超过或不超过约6x105细胞/kg，不超过或不超过约7x105细胞/kg，不超过或不超过约8x105细胞/kg，不超过或不超过约9x105细胞/kg，不超过或不超过约1x106细胞/kg或不超过或不超过约2x106细胞/kg。在一些所示中，细胞剂量包括至少或至少约或为或约为2x105的细胞(例如，表达抗原如表达CAR的细胞)/千克对象体重(细胞/kg)，如至少或至少约或为或约为3x105细胞/kg，至少或至少约或为或约为4x105细胞/kg，至少或至少约或为或约为5x105细胞/kg，至少或至少约或为或约为6x105细胞/kg，至少或至少约或为或约为7x105细胞/kg，至少或至少约或为或约为8x105细胞/kg，至少或至少约或为或约为9x105细胞/kg，至少或至少约或为或约为1x106细胞/kg，或至少或至少约或为或约为2x106细胞/kg。
在一些实施方式中，所述细胞以所需剂量给予，其在一些方面中包括所需剂量或细胞数量或细胞类型和/或所述细胞类型的所需比率。因此，在一些实施方式中，细胞剂量基于总细胞数量(或数量/kg体重)和个体群或亚型的所需比率，例如CD4+与CD8+之比。在一些实施方式中，细胞剂量基于个体群中细胞的所需总数(或数量/kg体重)或个体细胞类型。在一些实施方式中，所述剂量基于此类特征的组合，例如总细胞所需数量、所需比率，和个体群中的所需总细胞数量。
在一些实施方式中，所述细胞的群或亚型，例如CD8+和CD4+T细胞，在或处于总细胞的所需剂量，例如T细胞的所需剂量的耐受差异之内给予。在一些方面中，所述所需的剂量是所需的细胞数量或所需的细胞数量/向其给予所述细胞的对象的体重单位，例如，细胞/kg。在一些方面中，所需剂量是或高于最小细胞数量或最小细胞数量/体重单位。在一些方面中，在以所需剂量给予的总细胞中，个体群或亚型以或接近所需的输出比(例如CD4+与CD8+之比)存在，例如，处于所述比率的某一耐受差异或误差之内。
在一些实施方式中，所述细胞以或在细胞的一种或多种个体群或亚型的所需剂量的耐受差异之内给予，例如CD4+细胞的所需剂量和/或CD8+细胞的所需剂量。在一些方面中，所需剂量是所述亚型或群的所需细胞数量，或此类细胞的所需数量/向其给予所述细胞的对象的体重单位，例如，细胞/kg。在一些方面中，所需剂量是或高于所述群或亚型的最小细胞数量，或所述群或亚型的最小细胞数量/体重单位。
因此，在一些实施方式中，所述剂量基于总细胞的所需固定剂量和所需比率，和/或基于所述个体亚型或亚群的一种或多种，例如，各自，的所需固定剂量。因此，在一些实施方式中，所述剂量基于T细胞的所需固定或最小剂量和所需CD4+与CD8+细胞之比，和/或基于CD4+和/或CD8+细胞的所需固定或最小剂量。
在一些实施方式中，所述细胞按如下量或在一定误差范围内给予：多重细胞群或亚型，例如CD4+和CD8+细胞或亚型的所需输出比。在一些方面中，所需比率可以是特定比率或可以是比率范围。例如，在一些实施方式中，所需比率(例如，CD4+与CD8+细胞之比)介于是或约是5:1和是或约是5:1(或大于约1:5和少于约5:1)之间，或介于是或约是1:3和是或约是3:1(或大于约1:3和少于约3:1)之间，如介于是或约是2:1和是或约是1:5(或大于约1:5和少于约2:1，例如是或约是5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9:1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5。在一些方面中，所述耐受差异在所需比率的约1％，约2％，约3％，约4％约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％之内，包括这些范围之间的任何值。在具体实施方式中，细胞的数量和/或浓度是指重组受体(例如CAR)表达型细胞的数量。在其他实施方式中，细胞的数量和/或浓度是指给予的所有细胞、T细胞或外周血单个核细胞(PBMC)的数量或浓度。
在一些方面，基于一个或多个标准来确定剂量的大小，例如对象对在先治疗的反应，例如，化疗，对象的疾病负荷，例如肿瘤负荷，体积，大小或度，程度，或转移类型，阶段和/或对象发生毒性后果的可能性或发生率，所述毒性后果例如CRS，巨噬细胞活化综合征，肿瘤溶解综合征，神经毒性和/或针对给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答。
II.治疗或缓解毒性症状的毒性靶向剂
在一些实施方式中，方法包括通过给予物质或疗法或其他处理进行的一种或多种早期或先期干预，所述物质或疗法或其他处理治疗免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或细胞毒性，例如重度CRS或重度神经毒性)和/或预防、延缓或减轻CRS或神经毒性(例如，重度CRS或重度神经毒性)的生发或发展的风险。例如，在一些实施方式中，物质为毒性靶向剂或处理或干预。
在一些实施方式中，物质(例如，毒性靶向剂)是类固醇，是细胞因子受体(如IL-6受体、CD122受体(IL-2Rβ受体)或CCR2)的拮抗剂或抑制剂，或细胞因子(如IL-6、MCP-1、IL-10、IFN-γ、IL-8或IL-18)的抑制剂。在一些实施方式中，物质为细胞因子受体和/或细胞因子(如TGF-β)的激动剂。在一些实施方式中，物质(例如，激动剂、拮抗剂或抑制剂)为抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方式中，流体推注(fluid bolus)可以用作干预，例如治疗与CRS相关的低血压。在一些实施方式中，目标血细胞比容水平>24％。在一些实施方式中，干预包括与血液或血浆过滤联用吸收剂树脂技术。在一些情况中，干预包括透析、血浆去除术或相似的技术。在一些实施方式中，可使用血管加压剂(vassopressor)或乙酰氨基酚。
在一些实施方式中，物质可以顺序地、间歇地或与疗法同时给予，或在与疗法相同的组合物(如用于过继细胞疗法的细胞)中给予。例如，物质可以在给予免疫疗法和/或细胞疗法之前、期间、同时或之后给予。
在一些实施方式中，在如本文所述的时间并且按照所提供的方法给予物质。在一些实施方式中，毒性靶向剂在开始给予免疫疗法和/或细胞疗法后例如小于或不超过3、4、5、6、7、8、9或10天之内的时间给予。在一些实施方式中，毒性靶向剂在开始给予免疫疗法和/或细胞疗法后1天、2天或3天之内或约1天、2天或3天之内给予。
在一些实施方式中，在开始给予免疫疗法和/或细胞疗法后对象并不表现出2级或更高的CRS或2级或更高的神经毒性时向对象给予物质，例如，毒性靶向剂。在一些实施方式中，在开始给予免疫疗法和/或细胞疗法后对象并不表现重度CRS或重度神经毒性时给予毒性靶向剂。因此，在提供的方法中，介于开始给予免疫疗法和/或细胞疗法和毒性靶向剂之间，对象不表现出2级或更高的CRS，如重度CRS，和/或不表现出2级或更高的神经毒性，如重度神经毒性。
用于治疗或缓解毒性如重度CRS(sCRS)的非限制示例在表3中描述。在一些实施方式中，干预包括如所述的毒性靶向剂或托珠单抗，其可以在对象存在高于或高于约38℃或高于或高于约39℃的持续或持久性维持发热时。在一些实施方式中，发热在干预前在对象中持续超过10小时、超过12小时、超过16小时、或超过24小时。
表3
在一些情况中，物质或疗法或干预(例如，毒性靶向剂)单独给予或作为组合物或制剂(如药物组合物或制剂)的部分给予，如本文所述。因此，单独的或作为药物组合物部分的物质可以静脉给予或口服给予，或通过任何其他可接受的已知给药途径或如本文所述。
在一些实施方式中，给药方案中的物质剂量或给予物质的频率低于如下所述方法中的物质剂量或其频率：在2级或更高的CRS或神经毒性(如在重度例如3级或更高的CRS，或在重度例如3级或更高的神经毒性后)已经发生或已经诊断后(例如，在已经显示3级或更高的CRS或神经毒性的体征或迹象后)用物质治疗对象在一些实施方式中，给药方案中的物质剂量或给予物质的频率低于如下所述方法中物质剂量或其频率：在给予免疫疗法和/或细胞疗法后对对象进行大于3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周或更多周的CRS或神经毒性治疗。在一些实施方式中，剂量减少大于或大于约1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多。在一些实施方式中，剂量减少大于或大于约10％、20、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些实施方式中，给药的频率降低，例如每日剂量的数量减少或给药天数的数量减少。
A.毒性靶向剂
1.类固醇
在一些实施方式中，治疗和/或预防、延缓或减轻对于免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如2级或更高的或重度CRS或神经毒性)生发或发展风险的物质(例如毒性靶向剂)是类固醇，例如皮质类固醇。皮质类固醇通常包括糖皮质激素和盐皮质激素。
本文提供的方法可以使用任何皮质类固醇，例如，糖皮质激素。在一些实施方式中，糖皮质激素包括合成的和非合成的糖皮质激素。在一些实施方式中，糖皮质激素包括但不限于：阿氯米松(alclomethasone)，阿尔孕酮(algestone)，倍氯米松(如二丙酸倍氯米松)，倍他米松(如倍他米松17-戊酸酯，倍他米松乙酸钠，倍他米松磷酸钠，戊酸倍他米松)，布地奈德(budesonide)，氯倍他索(clobetasol)(如丙酸氯倍他索)，氯倍他松(clobetasone)，氯可托龙(如新戊酸氯可托龙)，氯泼尼醇(cloprednol)，皮质酮，可的松和氢化可的松(如乙酸氢化可的松)，可的伐唑(cortivazol)，地夫可特(deflazacort)，地奈德(desonide)，去氯地塞米松(desoximethasone)，地塞米松(如21-磷酸盐地塞米松，乙酸地塞米松，地塞米松磷酸钠)，双醋二氟松(例如双醋酸双醋二氟松)，二氟可龙，二氟泼尼酯，甘草次酸(enoxolone)，氟恶米松(fluazacort)，氟氯奈德，氟氢可的松(例如，乙酸氟氢可的松)，氟米松(例如新戊酸氟米松)，氟尼缩松，氟轻松(例如氟轻松缩丙酮)，氟轻松醋酸酯，氟可丁，氟可龙，氟米龙(例如乙酸氟米龙)，氟替隆(如乙酸氟替隆)，氟泼尼定，氟泼尼松龙(fluprednisolone)，氟氢缩松(flurandrenolide)，氟替卡松(fluticasone)(如丙酸氟替卡松)，氟甲酰龙(formocortal)，哈西奈德，乌倍他索(halobetasol)，卤米松，卤泼尼松(halopredone)，氢可他酯，氢化可的松(如21-丁酸氢化可的松，醋酸丙酸氢化可的松，乙酸氢化可的松，丙丁氢化可的松，丁酸氢化可的松，环戊丙酸氢化可的松，半琥珀酸氢化可的松，丁酸氢化可的松，氢化可的松磷酸钠，氢化可的松琥珀酸钠，戊酸氢化可的松)，依碳酸氯替泼诺，马泼尼酮，甲羟松，甲泼尼松，甲基泼尼松龙(醋丙甲泼尼松龙，乙酸甲基泼尼松龙，半琥珀酸甲基泼尼松龙，甲基泼尼松龙琥珀酸钠)，莫米松(如糠酸莫米松)，帕拉米松(如乙酸帕拉米松)，泼尼卡酯，泼尼松龙(如25-二乙氨基乙酸泼尼松龙，泼尼松龙磷酸钠，21-半琥珀酸泼尼松龙，乙酸泼尼松龙；法呢酸泼尼松龙酯(prednisolone farnesylate)，半琥珀酸泼尼松龙，泼尼松龙-21(β-D-葡萄苷酸)，间磺基苯泼尼松龙，司替泼尼松龙，特布酸泼尼松龙，四氢邻苯二甲酸泼尼松龙)，泼尼松，泼尼松龙戊酸酯(prednival)，泼尼立定，利美索龙，替可的松，曲安奈德(例如丙酮缩曲安奈德(triamcinolone acetonide)，苯曲安奈德(triamcinolone benetonide)，己曲安奈德(triamcinolone hexacetonide)，21-棕榈酸丙酮缩曲安奈德，双醋酸曲安奈德)。这些糖皮质激素及其盐形式在例如《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，A.Osol编，宾西马尼亚州伊斯顿的马克出版公司(16版，1980)中详述。
在一些示例中，糖皮质激素选自：可的松，地塞米松，氢化可的松，甲基泼尼松龙，泼尼松龙和泼尼松。在一个特定实例中，糖皮质激素为地塞米松。
在一些实施方式中，物质为皮质类固醇并以治疗有效的量给予，以治疗、缓解或减少对免疫疗法和/或细胞疗法(如CRS或神经毒性)的一种或多种毒性症状。在一些实施方式中，改善或成功治疗的指标包括确定未能显示毒性分级量表(例如CRS或神经毒性分级量表)的相关评分，例如小于3的评分，或如本文所讨论的分级量表上分级或严重程度的变化，如从4分到3分的变化，或从4分变为2、1或0分的变化。
在一些方面，皮质类固醇以治疗有效剂量提供。治疗有效浓度可以凭经验地通过在已知的体外或体内(例如，动物模型)系统中进行测试确定。例如，可以通过标准临床技术确定所选的皮质类固醇的量，所述皮质类固醇的量待给予以缓解对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状或副作用。此外，可以采用动物模型以辅助鉴别最优的剂量范围。精确剂量(其可以凭经验地确定)可能取决于特定治疗剂制备，方案和给药计划，给药途径和疾病的严重程度。
可以有效缓解与毒性(如与CRS或神经毒性)相关的一种或多种症状的任何量给予皮质类固醇。皮质类固醇，例如糖皮质激素可以例如这样量给予70kg成年人对象，所述量介于或介于每剂约0.1和100mg之间，0.1至80mg，0.1至60mg，0.1至40mg，0.1至30mg，0.1至20mg，0.1至15mg，0.1至10mg，0.1至5mg，0.2至40mg，0.2至30mg，0.2至20mg，0.2至15mg，0.2至10mg，0.2至5mg，0.4至40mg，0.4至30mg，0.4至20mg，0.4至15mg，0.4至10mg，0.4至5mg，0.4至4mg，1至20mg，1至15mg或1至10mg。通常，皮质类固醇如糖皮质激素以介于或介于约0.4和20mg之间的量给予平均成年人对象，例如，每剂为或约为0.4mg，0.5mg，0.6mg，0.7mg，0.75mg，0.8mg，0.9mg，1mg，2mg，3mg，4mg，5mg，6mg，7mg，8mg，9mg，10mg，11mg，12mg，13mg，14mg，15mg，16mg，17mg，18mg，19mg或20mg。
在一些实施方式中，例如，糖皮质激素可以下述剂量给予通常重约70kg至75kg的平均成年人对象：所述剂量为或约为0.001mg/kg(对于对象)，0.002mg/kg，0.003mg/kg，0.004mg/kg，0.005mg/kg，0.006mg/kg，0.007mg/kg，0.008mg/kg，0.009mg/kg，0.01mg/kg，0.015mg/kg，0.02mg/kg，0.025mg/kg，0.03mg/kg，0.035mg/kg，0.04mg/kg，0.045mg/kg，0.05mg/kg，0.055mg/kg，0.06mg/kg，0.065mg/kg，0.07mg/kg，0.075mg/kg，0.08mg/kg，0.085mg/kg，0.09mg/kg，0.095mg/kg，0.1mg/kg，0.15mg/kg，0.2mg/kg，0.25mg/kg，0.30mg/kg，0.35mg/kg，0.40mg/kg，0.45mg/kg，0.50mg/kg，0.55mg/kg，0.60mg/kg，0.65mg/kg，0.70mg/kg，0.75mg/kg，0.80mg/kg，0.85mg/kg，0.90mg/kg，0.95mg/kg，1mg/kg，1.05mg/kg，1.1mg/kg，1.15mg/kg，1.20mg/kg，1.25mg/kg，1.3mg/kg，1.35mg/kg或1.4mg/kg。
皮质类固醇或糖皮质激素例如地塞米松可以口服(片剂、液体或液体浓缩物)、PO、静脉注射(IV)、肌肉内给予或通过任何其他已知途径或本文所讨论的途径(例如，对于药物制剂)。在一些方面，皮质类固醇以推注(bolus)给予，而在其他方面，可以在一段时间内将其给予。
在一些方面中，糖皮质激素可以在超过1天的一段时间内给予，如超过2天、超过3天、或超过4天或更多天。在一些实施方式中，皮质类固醇可以每天一次，每天两次、或每天三次或每天多次给予。例如，在一些示例中，皮质类固醇例如地塞米松可以10mg(或等效的)IV每天两次给予3天。
在一些实施方式中，皮质类固醇例如糖皮质激素的剂量以每次治疗连续降低的剂量给予。因此，在一些这类处理方案中，皮质类固醇的剂量是逐渐减少的。例如，皮质类固醇可以4mg的初始剂量(或等效剂量，例如对于地塞米松)，并且在各连续给药后，剂量可以降低，因此下次给药的剂量为3mg，下次给药为2mg，下次给药为1mg。
通常给予皮质类固醇的剂量取决于特定皮质类固醇，因为不同皮质类固醇之间存在效力的差异。通常的理解是药物的效力不同，并且因此为了获得等效效果，剂量可能不同。表4示出就效力而言不同糖皮质激素和给药途径的等效性。本领域技术人员熟知临床给药中的等效效力。关于等效类固醇给药(以非作息治疗的方式)的信息参见英国国家处方集(British National Formulary(BNF)37,1999年3月
因此，在一些实施方式中，类固醇以从或从约1.0mg至20mg地塞米松/天、如1.0mg至15mg地塞米松/天，1.0mg至10mg地塞米松/天，2.0mg至8mg地塞米松/天，或2.0mg至6.0mg地塞米松/天的等效剂量给予，各自包括端值。在一些情况中，类固醇以是或约是4mg或是或约是8mg地塞米松/天的等效剂量给予。
在一些实施方式中，如果在用托珠单抗治疗后仍然发热，给予类固醇。例如，在一些实施方式中，对于稽留热，以5-10mg/多至6-12小时的剂量口服或静脉注射地塞米松。在一些实施方式，托珠单抗的给予与氧气补充同时或在其之后。
2.其他物质
在一些实施方式中，治疗或缓解免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状的物质(例如，毒性靶向剂)是靶向细胞因子的物质，例如细胞因子的拮抗剂或抑制剂，所述细胞因子如转化生长因子β(TGF-β),白细胞介素6(IL-6)，白细胞介素10(IL-10)，IL-2，MIP1β(CCL4)，TNFα，IL-1，干扰素γ(IFN-γ)或单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)。在一些实施方式中，治疗或缓解免疫疗法和/或细胞疗法毒性(如CRS或神经毒性)症状的物质是靶向细胞因子受体(例如，抑制或对细胞因子受体进行拮抗作用)的物质，所述细胞因子受体如IL-6受体(IL-6R)，IL-2受体(IL-2R/CD25)，MCP-1(CCL2)受体(CCR2或CCR4)，TGF-β受体(TGF-βI、II或III)，IFN-γ受体(IFNGR),MIP1β受体(例如，CCR5)，TNFα受体(例如，TNFR1)，IL-1受体(IL1-Rα/IL-1Rβ)或IL-10受体(IL-10R)。
可以通过标准临床技术确定待给予以缓解对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状或不利作用的选定物质的量，所述选定物质处理或缓解免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状。示例性的不利事件包括但不限于，丙氨酸氨基转移酶增加，天冬氨酸氨基转移酶增加，畏寒，发热性中性粒细胞减少症，头痛，左心室功能障碍，脑病，脑积水和/或震颤。
在一些实施方式中，物质以从或从约30mg至5000mg，如50mg至1000mg，50mg至500mg，50mg至200mg，50mg至100mg，100mg至1000mg，100mg至500mg，100mg至200mg，200mg至1000mg，200mg至500mg or500mg至1000mg的剂量给予。
在一些实施方式中，物质以从或从约0.5mg/kg至100mg/kg，如从或丛约1mg/kg至50mg/kg，1mg/kg至25mg/kg，1mg/kg至10mg/kg，1mg/kg至5mg/kg，5mg/kg至100mg/kg，5mg/kg至50mg/kg，5mg/kg至25mg/kg，5mg/kg至10mg/kg，10mg/kg至100mg/kg，10mg/kg至50mg/kg，10mg/kg至25mg/kg，25mg/kg至100mg/kg，25mg/kg至50mg/kg至50mg/kg至100mg/kg给予。在一些实施方式中，物质以从或从约1mg/kg至10mg/kg，2mg/kg至8mg/kg，2mg/kg至6mg/kg，2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值。在一些方面中，物质以至少或至少约为或约为1mg/kg，2mg/kg，4mg/kg，6mg/kg，8mg/kg，10mg/kg或更高的剂量给予。在一些实施方式中，物质以4mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
在一些实施方式中，给予物质通过注射，例如，静脉内或皮下注射、眼内注射、眼底注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、反间隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、巩膜上腔注射、球后注射、眼周注射或球周递送。在一些实施方式中，它们通过胃肠外、肺内的和鼻内，以及如果希望局部治疗，病灶内给予。腹膜外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。
在一些实施方式中，大约或大致每天两次、每天、每隔一天、每周三次、每周、每隔一周或每月给予物质的量。
在一些实施方式中，物质以组合物或制剂的部分提供，如下述药物组合物或制剂。因此，在一些情况中，含有物质的组合物如下所述给予。在其他方面，单独给予物质，并且可以通过任何已知的可接受给药途径或通过本文所述的一种进行给药，如关于组合物和药物制剂。
在一些实施方式中，治疗或缓解免疫疗法和/或细胞疗法毒性(如CRS或神经毒性)症状的物质是抗体或抗体结合片段。在一些实施方式中，物质是托珠单抗、希妥昔单抗、夏瑞鲁单抗(sarilumab)、欧罗单抗(olokizumab)(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(sirukumab)(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301或FM101。
在一些实施方式中，物质是IL-6或IL-6受体(IL-6R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，物质是中和IL-6活性的抗体，如结合IL-6或IL-6R的抗体或抗原结合片段。例如，在一些实施方式中，物质为或包括托珠单抗(阿特立珠单抗(atlizumab))或夏瑞鲁单抗(sarilumab)，抗-IL-6R抗体。在一些实施方式中，物质为美国专利号8,562,991中所述的抗-IL-6R抗体。在一些情况中，靶向IL-6的物质是抗-IL-6抗体，如希妥昔单抗、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(sirukumab)(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301、FM101或欧罗单抗(olokizumab)(CDP6038)。在一些方面，该物质可以通过抑制配体-受体相互作用来中和IL-6活性。已经用白细胞介素-1天然存在的受体拮抗剂证明了这种一般方法的可行性。参见Harmurn,C.H.等,Nature(1990)343:336-340。.在一些方面中，IL-6/IL-6R拮抗剂或抑制剂为IL-6突变蛋白质，如美国专利号5591827中所述。在一些实施方式中，作为IL-6/IL-6R拮抗剂或抑制剂的物质是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方式中，物质是托珠单抗。在一些实施方式中，托珠单抗作为早期干预根据提供的方法从或从约1mg/kg至12mg/kg的剂量给予，如为或约4mg/kg、8mg/kg或10mg/kg。在一些实施方式中，托珠单抗通过静脉输注给予。在一些实施方式中，对于高于39℃、持续10小时、对乙酰胺基酚无应答的持续发热，给予托珠单抗。在一些实施方式中，如果初始剂量后48小时症状复发，第二次给予托珠单抗。
在一些实施方式中，物质为TGF-β或TGF-β受体(例如，TGF-β受体I、II或III)的激动剂或刺激物。在一些方面，物质是增强TGF-β活性的抗体，如结合TGF-β或其受体之一的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，作为TGF-β和/或其受体的激动剂或刺激物的物质是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方式中，物质是MCP-1受体(CCL2)或MCP-1受体(例如，MCP-1受体CCR2或CCR4)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，物质是中和MCP-1活性的抗体，如结合MCP-1或其受体(CCR2或CCR4)的抗体或抗原结合片段。在一些实施方式中，MCP-1拮抗剂或抑制剂是Gong等.J Exp Med.1997年7月7日；186(1):131–137或Shahrara等J Immunol 2008；180:3447-3456中所述任何抗体。在一些实施方式中，作为MCP-1和/或其受体(CCR2or CCR4)的拮抗剂或抑制剂的物质是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方式中，物质是IFN-γ或IFN-γ受体(IFNGR)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，物质是中和IFN-γ活性的抗体，如结合IFN-γ或其受体(IFNGR)的抗体或抗原结合片段。在一些方面，IFN-γ中和抗体是Dobber等CellImmunol.1995年2月；160(2):185-92或Ozmen等J Immunol.1993年3月1日；150(7):2698-705中所述的任何抗体。在一些实施方式中，作为IFN-γ/IFNGR拮抗剂或抑制剂的物质是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方式中，物质是IL-10或IL-10受体(IL-10R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，物质是其中和IL-10活性的抗体，如结合IL-10或IL-10R的抗体或抗原结合片段。在一些方面，IL-10中和抗体是Dobber等.Cell Immunol.1995年2月；160(2):185-92或Hunter等J Immunol.2005年6月1日；174(11):7368-75中所述的任何抗体。在一些实施方式中，作为IL-10/IL-10R拮抗剂或抑制剂的物质是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
B.组合物和制剂
在一些实施方式中，物质如毒性靶向剂以组合物或制剂提供，如药物组合物或制剂。这类组合物可以根据提供的方法使用，如在早期干预中用于预防、治疗或缓解毒性，例如以延缓、减轻、降低对象的CRS或神经毒性。
在一些实施方式中，用药物运载体配制毒性靶向剂。这样的运载体包括，例如，与物质一起给予的诸如稀释剂、佐剂、赋形剂或载剂的运载体。合适的药物运载体的示例参见E.W.Martin的“Remington's Pharmaceutical Sciences
(《雷明顿药物科学》)”。这类组合物含有治疗有效量的物质，通常是其纯化形式，以及适量运载体，以提供适合给予对象的形式。这类药物载体可以是无菌液体，如水和油，包括来自石油、动物、植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油和芝麻油。盐水溶液和右旋糖水溶液和甘油溶液也可用作液体运载体，特别适用于注射液。药物组合物可以含有任何一种或多种下述内容：稀释剂、佐剂、抗粘附剂、粘合剂、涂料、填料、调味剂、颜料、润滑剂、助流剂、防腐剂、洗涤剂、吸附剂、乳化剂、药物赋形剂、pH缓冲剂或甜味剂或其组合。在一些所述方法中，药物组合物可以是液体、固体、冻干粉末、凝胶形式和/或其组合。某些方面，运载体的选择部分决定于具体的物质和/或给药方法。
在一些实施方式中，药物组合物可以含有防腐剂。合适的防腐剂可包括，例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。某些方面，采用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物的存在量通常是约0.0001％至约2％(以组合物总重量计)。运载体描述于，例如，《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第16版，Osol,A.编(1980)。在所用剂量和浓度下，药学上可接受的运载体通常是对受者无毒的，包括但不限于：缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸缓冲剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷酯，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷胺酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它糖，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；形成盐的抗衡离子，如钠；金属络合物(如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，例如聚乙二醇(PEG)。
某些方面，所述组合物包含缓冲剂。合适的缓冲剂包括，例如，柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和多种其他酸和盐。某些方面，采用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物的存在量通常是约0.001％至约4％(以组合物总重量计)。用于制备可给予的药物组合物的方法是已知的。示例性方法具体描述于，例如，《雷明顿：药物科学与实践》(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，LWW公司(Lippincott Williams&Wilkins)；第21版(2005年5月1日)。
在一些实施方式中，所述试剂以盐，例如，药学上可接受的盐，的形式给予。合适的药学上可接受的酸加成盐包括源自无机酸的那些，例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸，和有机酸，例如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡萄糖酸、琥珀酸和芳基磺酸，例如，对甲苯磺酸。
活性成分可包封在微囊剂中，在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)中或在大乳液(macroemulsion)中。在某些实施方式中，所述药物组合物配制成包结复合物(例如环糊精包结复合物)或脂质体。脂质体可用于将试剂靶向至特定组织。许多方法可用于制备脂质体，例如描述于，例如，Szoka等，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.,9:467(1980)和美国专利4,235,871、4,501,728、4,837,028和5,019,369中的那些。
某些方面，药物组合物采用定时-释放、延迟释放和持续释放递送系统，这样，组合物的递送发生在治疗部位敏化之前发生，并且有足够的时间造成该部位敏化。许多类型的释放递送系统是可得并已知的。此类系统能避免重复给予所述组合物，由此提高对象和医师的便利度。
在一些实施方式中，药物组合物含一定量的物质，所述量有效缓解毒性和/或预防、延缓或减轻毒性生发或发展出毒性的风险(如治疗有效或预防有效量)。在一些实施方式中，通过定期评估治疗的对象来监测治疗或预防功效。对于数天或更长时间的重复给药，可根据所述病症重复治疗直至毒性或症状得到所需阻遏，所述毒性或症状与毒性发生和/或发展出毒性的风险相关。然而，其他剂量方案可能是有用的并且可以确定。所需剂量的递送可以通过单次推注(bolus)给予所述组合物，通过多次推注给予所述组合物或通过连续输注给予组合物。
所述试剂可通过任何合适的方式给予，例如，通过，单次推注(bolus)，通过注射，例如，静脉内或皮下注射、眼内注射、眼底注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、反间隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、巩膜上腔注射、球后注射、眼周注射或球周递送。在一些实施方式中，它们通过胃肠外、肺内的和鼻内，以及如果希望局部治疗，病灶内给予。腹膜外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。在一些实施方式中，通过单次推注给予试剂来给予给定剂量。在一些实施方式中，通过多次推注给予试剂来进行给予。
对于缓解毒性和/或延缓、减轻预防毒性的风险，合适的剂量可取决于待治疗的疾病类型、一种或多种试剂的类型、之前给予对象的重组受体或细胞类型、疾病的严重程度和疾病病程、是否给予试剂或细胞用于预防性或治疗性目的、先前治疗、对象的临床史和对试剂或细胞的响应，以及主治医师的判断。在一些实施方式中，所述组合物适合在一个时间点或以一系列治疗来给予对象。
可采用标准给药技术、制剂和/或器械给予细胞或试剂。本文提供了用于储存和给予组合物的制剂和装置，如注射器和瓶。当给予治疗性组合物(例如，含有治疗或缓解细胞毒性如CRS或神经毒性的试剂的药物组合物)时，其通常被配制成单位剂型的可注射形式(溶液、悬液、乳液)。
制剂包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、肺、透皮、肌肉内、鼻内、粘膜、舌下或栓剂给药的那些。在一些实施方式中，胃肠外给予所述试剂。在一些实施方式中，所述试剂通过静脉内、腹膜内或皮下注射采用外围全身递送给予对象。
在一些实施方式中，组合物是无菌液体制剂，例如等渗水性溶液、悬液、乳液、分散系或粘性组合物，其某些方面可缓冲至选定pH。液体制剂通常比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物更容易制备。另外，液体组合物一定程度上多少更便于给药，尤其是通过注射给药。在另一方面，粘性组合物可配制在合适的粘度范围以延长与特定组织的接触时间。液体或粘性组合物可包括运载体，其可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多羟基化合物(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及以上合适的混合物。
可通过将所述试剂纳入溶剂中，例如与合适的运载体、稀释剂、或赋形剂如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等活化，来制备无菌可注射溶液。也可将该组合物冻干。组合物可含有辅助性物质，如润湿、分散、或乳化剂(例如，甲基纤维素)、pH缓冲剂、胶凝或粘度增强添加剂、防腐剂、风味剂、色素等，这取决于所需的给药和制备途径。某些方面，可查阅标准文件来制备合适制备物。
可添加增强组合物稳定性和无菌性的各种添加剂，包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。也可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)确保避免微生物作用。可通过使用延迟吸收的物质(如单硬脂酸铝和明胶)延长可注射药物形式的吸收。
可制备缓释制剂。缓释制剂的合适例子包括含抗体固体疏水性聚合物半渗透基质，其中基质是成型制品的形式，例如膜或微胶囊。
用于体内给药的制剂一般为无菌的。例如，可通过无菌滤膜过滤方便地地做到无菌。
在一些实施方式中，毒性靶向剂通常配制为单位剂型或多重剂型并以单位剂型或多重剂型进行给药。各单位剂量含有预定量治疗活性化合物，其与所需药物运载体、载剂或稀释剂联用时足以产生需要的治疗效果。在一些实施方式中，单位剂量形式包括但不限于，片剂、胶囊剂、丸剂、粉末剂、颗粒剂、无菌胃肠道外溶液剂或混悬剂和口服溶液剂或混悬剂以及油水乳液，其含有合适量的化合物或其药学上可接受的衍生物。单位剂型可以包括安瓿和注射器或单独包装的片剂或胶囊剂。单位剂型可以逐份给予或给予多份。在一些实施方式中，多重剂型是包装在单个容器内的多个相同的单位剂型，其以分开的单位剂型形式给予。多重剂型的示例包括小瓶、片剂或胶囊剂瓶或者品脱或加仑瓶。
III.示例性实施方式
提供的实施方式包括：
1.一种处理方法，其包括向对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理，其中，在所述给予时，所述对象已经在先接受过疗法，所述疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，并且其中：
(a)所述物质或其他处理的给予是：(i)在开始给予所述疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或
(b)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，(i)所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)所述对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
2.一种处理方法，其包括：
(a)向患有疾病或病症的对象给予疗法，该疗法包括免疫疗法或细胞疗法；和
(b)向所述对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理，其中：
(i)在开始给予所述疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时给予所述物质或其他处理；和/或
(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时给予所述物质或其他处理；和/或
(iii)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或
(iv)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时给予所述物质或其他处理；和/或
(v)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，所述对象未表现出重度神经毒性和/或未表现出2级或更高的神经毒性。
3.如实施方式1或2所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予或所述对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予。
4.如实施方式1-3中任一项所述的方法，其中：
1级CRS的迹象或症状为发热；和/或
所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
5.一种处理方法，包括向先前已被给予疗法的对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现的24小时内给予。
6.如实施方式1或5所述的方法，其还包括，在给予所述物质或其他处理前，向所述对象给予用于治疗疾病或病症的疗法。
7.一种处理方法，其包括：
(a)向患有疾病或病症的对象给予疗法，所述疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法；和
(b)在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后24小时内向所述对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理。
8.如实施方式1-7中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后约16小时内、约12小时内、约8小时内、约2小时内或约1小时内给予。
9.如实施方式4-8中任一项所述的方法，其中，所述发热为持续发热。
10.如实施方式4-9中任一项所述的方法，其中，所述发热是在用退热剂处理后不降低或降低不超过1℃的发热，和/或所述发热在用退热剂处理对象后未降低超过1℃。
11.如实施方式4-10中任一项所述的方法，其中，所述发热包括至少或至少约38.0℃的温度。
12.如实施方式4-11中任一项所述的方法，其中：
所述发热包括介于或介于约38.0℃和42.0℃之间、38.0℃和39.0℃之间、39.0℃和40.0℃之间或40.0℃和42.0℃之间的温度，各自包括端值；或
发热包括高于或高于约或为或约为38.5℃、39.0℃、39.5℃、40.0℃、41.0℃、42.0℃的温度。
13.如实施方式1-12中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后少于5天，在开始给予所述疗法后少于4天或在开始给予所述疗法后少于3天给予。
14.如实施方式1-13中任一项所述的方法，其中，所述疗法为或包括细胞疗法。
15.如实施方式14所述的方法，其中，所述细胞疗法为或包括过继细胞疗法。
16.如实施方式1-15中任一项所述的方法，其中，所述疗法为或包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或重组受体表达细胞疗法，任选地为T细胞疗法，任选地为嵌合抗原受体(CAR)-表达细胞疗法。
17.如实施方式1-16中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括类固醇，或选自下述的细胞因子或细胞因子受体的拮抗剂或抑制剂：IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β。
18.如实施方式17所述的方法，其中，所述拮抗剂或抑制剂为或包括选自下述的物质：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
19.如实施方式17或18所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括选自下述的物质：托珠单抗、希妥昔单抗(situximab)、夏瑞鲁单抗(sarilumab)、欧罗单抗(olokizumab)(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(sirukumab)(CNTO136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
20.如实施方式1-19中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括托珠单抗。
21.如实施方式20所述的方法，其中，所述托珠单抗以从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值，或者所述托珠单抗以至少或至少约或约2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
22.如实施方式1-21中任一项所述的方法，其还包括向所述对象给予第二物质，所述第二物质任选地为类固醇，所述类固醇：
(i)在开始给予所述疗法后7天、8天或9天内开始，
(ii)在开始给予所述疗法后最初迹象低血压出现后24小时内开始；
(iii)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级细胞因子释放综合征(CRS)的最初迹象后24小时内或所述对象表现出2级CRS时给予；和/或
(iv)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级神经毒性的最初迹象或症状后24小时内或所述对象表现出2级神经毒性时给予。
23.一种处理方法，其包括向给予疗法的对象给予类固醇，该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中所述给予类固醇：
(i)在开始给予所述疗法后7天、8天或9天内开始，
(ii)在开始给予所述疗法后最初迹象低血压出现后24小时内开始；
(iii)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级细胞因子释放综合征(CRS)的最初迹象后24小时内或所述对象表现出2级CRS时开始；和/或
(iv)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级神经毒性的最初迹象或症状后24小时内或所述对象表现出2级神经毒性时开始。
24.如权利要求23所述的方法，其中，在给予所述类固醇前，所述方法包括向所述对象给予用于治疗疾病或病症的疗法。
25.一种处理方法，其包括：
(a)向患有疾病或病症的对象给予疗法，所述疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法；和
(b)向所述对象给予类固醇，其中所述给予类固醇：
(i)在开始给予所述疗法后7天、8天或9天内开始，
(ii)在开始给予所述疗法后最初迹象低血压出现后24小时内开始；
(iii)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级细胞因子释放综合征(CRS)的最初迹象后24小时内或所述对象表现出2级CRS时开始；和/或
(iv)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级神经毒性的最初迹象或症状后24小时内或所述对象表现出2级神经毒性时开始。
26.如实施方式22-25中任一项所述的处理方法，其中，在给予所述类固醇时，所述对象不表现出重度CRS，不表现出3级或更高的CRS，或不表现出重度神经毒性或不表现出3级或更高的神经毒性。
27.如实施方式22-26中任一项所述的方法，其中，所述类固醇在开始给予所述疗法后最初迹象低血压出现同时或之后24小时内给予。
28.如实施方式22-27中任一项所述的方法，其中，所述类固醇在加压疗法开始的同时给予。
29.如实施方式22-28中任一项所述的方法，其中，所述低血压包括：
小于或小于约90mm Hg、80mm Hg或70mm Hg的收缩压；或
小于60mm Hg、50mm Hg或40mm Hg的舒张压。
30.如实施方式1-17和22-29中任一项所述的方法，其中，所述物质为或包括类固醇，任选地为或包括皮质类固醇，任选地为糖皮质激素。
31.如实施方式30所述的方法，其中所述皮质类固醇为或包括地塞米松或泼尼松。
32.如实施方式17或22-31中任一项所述的方法，其中所述类固醇以从或从约1.0mg至20mg地塞米松/天、1.0mg至10mg地塞米松/天或2.0mg至6.0mg地塞米松/天量的等效剂量给予，各自包括端值。
33.如实施方式17或22-32中任何一项所述的方法，其中，所述类固醇经静脉内或口服给予。
34.如实施方式23-33中任一项所述的方法，其中，给予所述类固醇前，所述方法包括给予能治疗、预防、延缓或减轻相关毒性生发的物质或其他处理，其中：
(i)所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时给予；和/或
(ii)所述物质或其他处理在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时给予；和/或
(iii)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或
(iv)所述物质或其他处理在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时给予；和/或
(v)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，所述对象未表现出重度神经毒性和/或未表现出2级或更高的CRS。
35.如实施方式34所述的方法，其中，所述物质或其他处理在所述对象表现出1级CRS时给予，或在所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予。
36.如实施方式34或35所述的方法，其中：
所述1级CRS的最初迹象或症状为发热；或
所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
37.如实施方式23-36中任一项所述的方法，其还包括，在给予所述类固醇前，给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理，其中所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
38.如实施方式36或37所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后约16小时内、约12小时内、约8小时内、约2小时内或约1小时内给予。
39.如实施方式36-38中任一项所述的方法，其中，所述发热为持续发热。
40.如实施方式36-39中任一项所述的方法，其中，所述发热是在用退热剂处理后不降低或降低不超过1℃的发热，和/或其中所述发热在用退热剂处理对象后未降低超过1℃。
41.如实施方式36-40中任一项所述的方法，其中，所述发热包括至少或至少约38.0℃的温度。
42.如实施方式36-41中任一项所述的方法，其中：
所述发热包括介于或介于约38.0℃和42.0℃之间、38.0℃和39.0℃之间、39.0℃和40.0℃之间或40.0℃和42.0℃之间的温度，各自包括端值；或
发热包括高于或高于约或为或约为38.5℃、39.0℃、39.5℃、40.0℃、41.0℃、42.0℃的温度。
43.如实施方式34-42中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后少于5天，在开始给予所述疗法后少于4天或在开始给予所述疗法后少于3天给予。
44.如实施方式23-43中任一项所述的方法，其中，所述疗法为细胞疗法。
45.如实施方式44所述的方法，其中，所述细胞疗法为过继细胞疗法。
46.如实施方式23-45中任一项所述的方法，其中，所述疗法为肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或重组受体表达细胞疗法，任选地为T细胞疗法，任选地为嵌合抗原受体(CAR)-表达细胞疗法。
47.如实施方式34-46中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理为选自下述的细胞因子或细胞因子受体的拮抗剂或抑制剂：IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β。
48.如实施方式47所述的方法，其中，所述拮抗剂或抑制剂为或包括选自下述的物质：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质、肽和核酸。
49.如实施方式47或48所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括选自下述的物质：托珠单抗、希妥昔单抗(situximab)、夏瑞鲁单抗(sarilumab)、欧罗单抗(olokizumab)(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(sirukumab)(CNTO136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
50.如实施方式34-49中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括托珠单抗。
51.如实施方式50所述的方法，其中，所述托珠单抗以从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值，或者所述托珠单抗以至少或至少约或约2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
52.如实施方式1-51中任一项所述的方法，其中，所述疗法为或包括细胞疗法，并且所给予的细胞数量介于约0.25x106细胞/kg对象体重和5x106细胞/kg之间，0.5x106细胞/kg对象体重和3x106细胞/kg之间，介于约0.75x106细胞/kg和2.5x106细胞/kg之间或介于约1x106细胞/kg和2x106细胞/kg之间，各自包括端值。
53.如实施方式1-52中任一项所述的方法，其中所述疗法为或包括细胞疗法，并且所述细胞以包括所述细胞的单一药物组合物给予。
54.如实施方式1-52中任一项所述的方法，其中，所述疗法为或包括细胞疗法并且细胞剂量为分开剂量，其中所述细胞剂量在不超过3天的时间内以数个组合物给予，所述数个组合物总体包含所述剂量的细胞。
55.如实施方式1-54中任一项所述的方法，其中，所述疾病或病症是肿瘤或癌症。
56.如实施方式1-55中任一项所述的方法，其中，所述疾病或病症是白血病或淋巴瘤。
57.如实施方式1-56中任一项所述的方法，其中，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
58.如实施方式1-57中任一项所述的方法，其中，所述疗法为细胞疗法，其包括表达重组受体的细胞剂量，其中：
所述重组受体结合、识别或靶向与所述疾病或病症相关的抗原；和/或
所述重组受体为T细胞受体或功能性非T细胞受体；和/或
所述重组受体为嵌合抗原受体(CAR)。
59.如实施方式58所述的方法，其中，所述CAR包含特异性结合所述抗原的胞外抗原识别结构域和包括ITAM的胞内信号转导结构域。
60.如实施方式59所述的方法，其中，所述抗原是CD19。
61.如实施方式60所述的方法，其中，所述胞内信号转导结构域包括CD3-ζ链的胞内结构域。
62.如实施方式60或61所述的方法，其中，所述CAR还包含共刺激信号转导区域。
63.如实施方式62所述的方法，其中，所述共刺激信号转导结构域包括CD28或4-1BB的信号转导结构域。
64.如实施方式1-63中任一项所述的方法，其中，所述疗法为细胞疗法，包括含有T细胞的细胞剂量。
65.如实施方式64所述的方法，其中，所述T细胞为CD4+或CD8+。
66.如实施方式64或65中任一项所述的方法，其中，所述T细胞对于所述对象是自体的。
67.如实施方式1-66中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在给予所述疗法前给予化疗剂，和/或其中在开始给予所述疗法前，所述对象之前已经用化疗剂治疗。
68.如实施方式67所述的方法，其中，所述化疗剂包括选自下述的物质：环磷酰胺、氟达拉滨、和/或其组合。
69.如实施方式67或68所述的方法，其中所述化疗剂在开始给予所述疗法之前2至5天给予。
70.如实施方式67-69中任一项所述的方法，其中：
所述化疗剂为氟达拉滨，其以或以约1mg/m2和100mg/m2之间的剂量、以或以约10mg/m2和75mg/m2之间的剂量、以或以约15mg/m2和50mg/m2之间的剂量、以或以约20mg/m2和30mg/m2之间的剂量或以或以约24mg/m2和26mg/m2之间的剂量给予；和/或
所述化疗剂为环磷酰胺，其以或以约20mg/kg和100mg/kg之间、以或以约40mg/kg和80mg/kg之间或以或以约30mg/kg和60mg/kg之间给予。
71.如实施方式1-70中任一项所述的方法，其中，相较于包括其他处理方案而所述其他处理方案包括对象在重度CRS发生后或2级或更高的CRS发生后接受所述物质或其他处理的方法，所述对象在给予所述疗法后多至或多至约7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天无可测毒性后果或毒性后果降低。
72.如实施方式71所述的方法，其中，所述毒性后果降低大于50％、60％、70％、80％、90％或更多。
73.如实施方式71或72所述的方法，其中所述毒性后果是与3级或更高的神经毒性相关的症状或与2级更高的CRS相关的症状。
74.如实施方式71-73中任一项所述的方法，其中，所述毒性后果为3级或更高的神经毒性，包括选自下述的一种或多种症状：混乱、谵妄、表达性失语、反应迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫-样活动、癫痫。
75.如实施方式71-73中任一项所述的方法，其中，所述毒性后果为3级或更高的CRS，包括选自下述的一种或多种症状：高于或等于约38摄氏度的持续发热，至少持续三天；需要高剂量血管加压剂或多种血管加压剂的低血压；缺氧，任选地包括低于或低于约90％的血浆氧(PO2)水平以及需要机械呼吸的呼吸衰竭。
76.如实施方式1-75中任一项所述的方法，其中，所述疗法为包括细胞剂量的细胞疗法，并且，所述细胞在对象中表现出相较于使用其他处理方案在其他组群或治疗组中对应对象中或在所述对象中给予所述细胞疗法而言增加或延长的增殖和/或维持，
其中，所述其他处理方案包括给予所述细胞疗法并随后在重度CRS发生后或在2级或更高的CRS发生后给予所述物质或其他处理，并且其中任选地，在给予所述细胞之后和所述2级或更高的CRS或重度CRS发生之前，所述其他处理方案中的对象没有被给予所述物质，并且任选地，没有被给予旨在治疗CRS或神经毒性的任何其他处理。
77.如实施方式76的方法，其中，所述增殖和/或维持增加或延长2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
78.如实施方式1-77中任一项所述的方法，其中：
所述疗法为细胞疗法，包括工程改造的和/或表达CAR的细胞；和
在开始给予所述疗法后第30天、第60天或第90天，所述对象血液中所述工程改造的和/或表达CAR的细胞的浓度和数量至少为或约为10个工程改造的或表达CAR的细胞/微升，至少50％外周血单核细胞(PBMC)总数，至少或至少约1x105个工程改造的或表达CAR的细胞，和/或至少5,000拷贝的编码CAR的或编码工程改造的受体的DNA/微克DNA；和/或；
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象的血液或血清中可检测到表达CAR的和/或工程改造的细胞；和/或
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象的血液含有至少20％表达CAR的细胞，至少10表达CAR的细胞/微升或至少1x104个表达CAR的细胞；
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象的血液含有至少50％、60％、70％、80％或90％生物有效剂量的细胞；
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象的血液含有至少20％工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞，至少10工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞/微升和/或至少1x104个工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞；
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象表现出所述疾病或病症负荷降低或持续降低，所述疾病或病症负荷降低或持续降低为或约为或至少为或至少约为疗法给予后50％、60％、70％或80％峰值降低或与有效剂量相关的降低。
79.如实施方式1-78中任一项所述的方法，其中：
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象不表现和/或未表现出重度神经毒性、重度CRS、2级或更高的CRS、2级或更高的神经毒性，和/或未表现出癫痫或其他CNS后果；或
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，少于或约少于25％、少于与或约少于20％、少于或约少于15％或少于或约少于10％的这样治疗的所述对象不表现和/或未表现出重度神经毒性、重度CRS、2级或更高的CRS、2级或更高的神经毒性，和/或未表现出癫痫或其他CNS后果。
80.如实施方式1-79中任一项所述的方法，其中，所述疗法为细胞疗法，包括工程改造的和/或表达CAR的细胞；和
在所述疗法给予后，所述工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞的血液浓度随时间的曲线下面积(AUC)大于经由包括其他给药方案的方法所得，所述其他给药方案中，向所述对象给予所述疗法并且在所述对象表现出重度或2级或更高的或3级或更高的CRS或神经毒性时给予所述物质或其他处理。
81.一种物质或其他处理，其用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中：
(a)向对象给予所述物质或其他处理是：(i)在所述对象已经被给予的所述疗法开始后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或
(b)在所述对象已经被给予的所述疗法开始之时与所述物质或其他处理给予之时之间，(i)所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)所述对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
82.如实施方式81所述的物质或其他处理，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予或所述对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予。
83.如实施方式81或82所述的物质或其他处理，其中：
1级CRS的迹象或症状为发热；和/或
所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现后24小时内给予。
84.一种物质或其他处理，其用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现的24小时内给予。
85.一种物质或其他处理，其用作药物用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中：
(a)向对象给予所述物质或其他处理是：(i)在所述对象已经被给予的所述疗法开始后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或
(b)在所述对象已经被给予的所述疗法开始之时与所述物质或其他处理给予之时之间，(i)所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)所述对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
86.如实施方式85所述的物质或其他处理，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予或所述对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予。
87.如实施方式85或86所述的物质或其他处理，其中：
1级CRS的迹象或症状为发热；和/或
所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现后24小时内给予。
88.一种物质或其他处理，其用作药物用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现的24小时内给予。
89.一种物质或其他处理在制备用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的药物中的用途，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中：
(a)向对象给予所述物质或其他处理是：(i)在所述对象已经被给予的所述疗法开始后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或
(b)在所述对象已经被给予的所述疗法开始之时与所述物质或其他处理给予之时之间，(i)所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)所述对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
90.如实施方式89所述用途，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予或所述对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予。
91.如实施方式89或90所述的用途，其中：
1级CRS的迹象或症状为发热；和/或
所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现后24小时内给予。
92.一种物质或其他处理在制备用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的药物中的用途，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现的24小时内给予。
93.如实施方式1-88中任一项所述的物质或其他处理或如实施方式89-92中任一项所述的用途，其中，所述物质或其他处理在给予所述疗法后最初迹象发热出现后约16小时内、约12小时内、约8小时内、约2小时内或约1小时内给予。
94.如实施方式83、84、87、88和91-93中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述发热为持续发热。
95.如实施方式83、84、87、88和91-94中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述发热是在用退热剂处理后不降低或降低不超过1℃的发热，和/或其中所述发热在用退热剂处理对象后未降低超过1℃。
96.如实施方式83、84、87、88和91-95中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中所述发热包括至少或至少约38.0℃的温度。
97.如实施方式83、84、87、88和91-96中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，
所述发热包括介于或介于约38.0℃和42.0℃之间、38.0℃和39.0℃之间、39.0℃和40.0℃之间或40.0℃和42.0℃之间的温度，各自包括端值；或
发热包括高于或高于约或为或约为38.5℃、39.0℃、39.5℃、40.0℃、41.0℃、42.0℃的温度。
98.如实施方式81-97中任一项所述物质或其他处理或用途，其中，所述物质或其他处理为或包括类固醇，或选自下述的细胞因子或细胞因子受体的拮抗剂或抑制剂：IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β。
99.如实施方式98所述的物质或其他处理或用途，其中，所述拮抗剂或抑制剂为或包括选自下述的物质：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
100.如实施方式98或99所述的物质或其他处理或用途，其中，所述物质或其他处理为或包括选自下述的物质：托珠单抗、希妥昔单抗(situximab)、夏瑞鲁单抗(sarilumab)、欧罗单抗(olokizumab)(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(sirukumab)(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
101.如实施方式81-100中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述物质或其他处理为或包括托珠单抗。
102.如实施方式101所述的物质或其他处理或用途，其中，所述托珠单抗以从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值，或者所述托珠单抗以至少或至少约或约2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
103.如实施方式81-98中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述物质为或包括类固醇，任选地为或包括皮质类固醇，任选地为糖皮质激素。
104.如实施方式103所述的物质或其他处理或用途，其中所述皮质类固醇为或包括地塞米松或泼尼松。
105.如实施方式81-98、103和104中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中所述类固醇以从或从约1.0mg至20mg地塞米松/天、1.0mg至10mg地塞米松/天或2.0mg至6.0mg地塞米松/天的等效剂量给予，各自包括端值。
106.如实施方式81-98和103-105中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述类固醇配制为用于静脉内或口服给予。。
107.如实施方式81-106中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疗法为或包括细胞疗法。
108.如实施方式107所述的物质或其他处理或用途，其中，所述细胞疗法为或包括过继细胞疗法。
109.如实施方式81-108中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疗法为或包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或重组受体表达细胞疗法，任选地为T细胞疗法，任选地为嵌合抗原受体(CAR)-表达细胞疗法。
110.如实施方式81-109中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疗法为细胞疗法，其包括表达重组受体的细胞剂量，其中：
所述重组受体结合、识别或靶向与所述疾病或病症相关的抗原；和/或
所述重组受体为T细胞受体或功能性非T细胞受体；和/或
所述重组受体为嵌合抗原受体(CAR)。
111.如实施方式109或110所述的物质或其他处理或用途，其中，所述CAR包含特异性结合所述抗原的胞外抗原识别结构域和包括ITAM的胞内信号转导结构域。
112.如实施方式111所述的物质或其他处理或用途，其中所述抗原为CD19。
113.如实施方式111所述的物质或其他处理或用途，其中，所述胞内信号转导结构域包括CD3-ζ(CD3ζ)链的胞内结构域。
114.如实施方式109-113中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述CAR还包括共刺激信号转导区域。
115.如实施方式114所述的物质或其他处理或用途，其中，所述共刺激信号转导结构域包括CD28或4-1BB的信号转导结构域。
116.如实施方式81-115中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疗法为细胞疗法，包括含有T细胞的细胞剂量。
117.如实施方式116所述的物质或其他处理或用途，其中，所述T细胞为CD4+或CD8+。
118.如实施方式116或117所述的物质或其他处理或用途，其中，所述T细胞对于所述对象是自体的。
119.如实施方式110-118中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疾病或病症是肿瘤或癌症。
120.如实施方式110-119中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疾病或病症是白血病或淋巴瘤。
121.如实施方式110-120中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
122.如实施方式81-121中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，在所述疗法给予之前，所述对象之前已经用化疗剂治疗。
123.如实施方式122所述的物质或其他处理或用途，其中，所述化疗剂包括选自下述的物质：环磷酰胺、氟达拉滨和/或其组合。
IV.定义
除非另外定义，本文使用的所有专业术语、符号和其它技术和科学术语或专有词汇旨在具有本发明所属领域技术人员通常所理解的相同含义。在一些情况中，本文出于阐明和/或便于引用目的对具有常规理解含义的术语加以限定，本文中包括此类限定不应理解为表示与本领域常规理解的有显著差异。
术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用，表示氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。包括提供的受体和其他多肽(例如接头或肽)的多肽可以包括氨基酸残基，包括天然和/或非天然氨基酸残基。该术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化和磷酸化。在一些方面中，所述多肽可包含对原始或天然序列进行的修饰，只要该蛋白质保留所需活性即可。这些修饰可以是有意的，例如通过定点诱变，或者可以是偶然的，例如通过产生蛋白质的宿主突变或PCR扩增所致的误差。
术语“药物制剂”指此类形式的制剂：所述其中所含活性成分的生物学活性有效，并且不含对待接受该制剂的对象具有不可接受的毒性的其他成分。
“药学上可接受的运载体”指药物制剂中的一种成分，其不是活性成分，其对对象无毒。药学上可接受的运载体包括但是不限于，缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
本文中所用的“对象”是哺乳动物，例如人或其它动物，并且通常是人。在一些实施方式中，给予所述一种或多种试剂、细胞、细胞群或组合物的对象(例如，患者)是哺乳动物，通常是灵长类，例如人。在一些实施方式中，所述灵长类是猴子或猿。所述对象可以是男性或女性，并且可以是任何合适的年龄，包括婴儿，少年，青少年，成人和老年对象。在一些实施方式中，所述对象是非灵长类哺乳动物，例如啮齿类。
本文中所用的术语“处理/治疗”(及其语法变化形式例如“处理/治疗的”和“治疗性”)指完全或部分缓解或减少疾病或病症或紊乱或与其相关的症状、不利作用或后果或表型。所需的治疗效果包括但不限于，预防疾病的发生或复发、缓减症状、减少疾病的任何直接或间接病理学结果、防止转移、降低疾病进展速度、缓解或缓和疾病状态和减轻或改善预后。该术语不表示完全治愈疾病或完全消除任一症状或作用或所有症状或后果。
本文中所用“延缓疾病的发生/生发”表示推迟、阻碍、减慢、延迟、稳定、遏制和/或拖延所述疾病(例如癌症)的发生/生发。延缓可有不同的时间长度，这取决于疾病的病史和/或待治疗的个体。如本领域技术人员所知，实际上，充分或显著的延缓可涵盖预防(对于未发育成所述疾病的个体而言)。例如，晚期癌症(例如转移的生发)可被延缓。
本文中所用的“预防”包括对于在倾向于发展成某疾病但尚未被诊断为该病的对象中对疾病发生或复发的预防。在一些实施方式中，所提供的试剂、细胞和组合物用于延缓疾病发展或减缓疾病进展。
本文中，“阻抑”某功能或活性指相比其他相同仅目标条件或参数不同的情况或者相比另一情况，功能或活性降低。例如，与没有细胞条件下的肿瘤生长速率相比，阻抑肿瘤生长的细胞降低了肿瘤的生长速度。
物质(例如，药物制剂、试剂、细胞或组合物)在给予中的“有效量”是指在一定剂量/量下、且作用必要的时间长度时，有效获得所需结果(例如治疗或预防结果)的量。
组合物(如包括试剂或细胞的药物制剂)的“治疗有效量”指某一个量，其按照一定数量的剂量和必需时程，能够有效实现所需治疗效果，例如疾病、病症或紊乱的治疗，和/或该治疗的药物动力学或药代动力学效果。治疗有效量可根据多种因素而不同，例如疾病状态、对象年龄、性别和体重，以及给予的细胞群或试剂。在一些实施方式中，所提供的方法涉及给予有效量(例如，治疗有效量)的试剂、细胞和/或组合物。
“预防有效量”指某一个量，其按照一定数量的剂量和必要时程，能够有效实现所需预防效果。通常但非一定，由于预防剂量在疾病的早期或之前用于对象，预防有效量将小于治疗有效量。
V.实施例
下面的实施例仅是为了阐述，而不是用来限制本发明的范围。
实施例1用于预防或减少用表达CAR的自体T细胞治疗的癌症患者毒性的早期干预方法
向患有儿科急性淋巴细胞白血病(ALL)的对象组(n＝6)给予表达抗-CD19嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞。编码CAR的构建体还包括编码截短的EGFR(EGFRt)的核酸，用作标志物。在给予细胞之前，患者接受白细胞分离术，并用包括氟达拉滨和环磷酰胺的调节化疗方案治疗。为了产生表达自体CAR的T细胞，通过基于来自个体对象的白细胞分离样品的免疫亲和性富集对T细胞进行分离，该T细胞经活化并用编码抗CD19CAR的病毒载体转导，然后进行扩增。
在给予表达CAR的T细胞之前，用每天30mg/m2氟达拉滨3天和每天300mg/m2环磷酰胺3天中任一治疗对象。在d＝0时，用0.5-10x106细胞/kg的表达CAR的T细胞治疗。
作为预防或缓解潜在毒性的早期或先期治疗，在出现重度毒性之前和/或神经毒性迹象或症状之前的时间点，向对象给予能够治疗或预防所述潜在毒性的物质。在给予表达CAR的T细胞后最初迹象持续发热出现时(例如，给予退热剂之后并不消退的发热)，用4mg/kg或8mg/kg的抗-IL-6受体抗体托珠单抗对对象进行治疗。在表现出低血压(如在某种程度上指示应当用低剂量加压疗法治疗的低血压)的对象中，在这类低血压的事件开始(如在给予所述加压治疗的时间)向对象给予类固醇地塞米松。如果适用，向这类对象给予2天地塞米松5-10mg/天。
在相关治疗的各时间点，评价对象的肿瘤负荷。在第63+天，该组中的各对象表现出最小残留疾病(MRD)-阴性完全缓解(CR)，CAR-T持久性大于80％生物等效剂量(BED)，如B细胞发育不全(BCA)水平所测。
该组1/6的对象产生需要加压疗法的低血压，并且没有(0/6)对象产生重度神经毒性的迹象或症状(CNS后果)或表现出癫痫。该结果表明用毒性靶向剂成功进行了先期干预，显示了用下述方案进行先期治疗的对象表现出不存在任何CNS后果或神经毒性以及不存在重度CRS，同时还表现了CAR-T细胞随时间维持和持续的功效：所述方案涉及使用物质进行早期干预，所述物质通常用于靶向在CAR-T治疗后(重度CRS或神经毒性迹象发生前)观察到的毒性后果。
实施例2用于预防或减少用表达CAR的自体T细胞治疗的癌症患者毒性的早期干预方法
作为研究的延伸，向患有儿科急性淋巴细胞白血病(ALL)的对象组(总n＝43)给予表达抗-CD19嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞，如实施例1中所述进行评估。
在该评估中，在CAR-T细胞输注后剂量限制性毒性证据或迹象(如果适用)之后向第一组中的对象(n＝20)给予针对毒性的治疗，而(2)向第二组中的对象(n＝23)在发生或表现出剂量限制性毒性之前给予早期干预疗法以缓解或预防毒性或毒性后果。具体的，在第一组(n＝20)中，在剂量限制性毒性事件中，用具有或不具有类固醇的8mg/kg抗-IL-6受体抗体托珠单抗治疗对象。如果在给予表达CAR的T细胞后，对象表现出高于或等于39℃的持续发热(尽管使用10小时退热剂)，初始流体推注后持续的/复发性的低血压，和/或开始氧气补充，则向第二组中的对象(n＝23)给予抗-IL-6受体抗体托珠单抗和任选的地塞米松的早期或先期治疗。在相关治疗的各时间点，CAR T细胞的移植和B细胞发育不全通过流式细胞术确定，并评估对象的肿瘤负荷。最小残留疾病(MRD)-阴性完全缓解(CR)的总体比例为93％(40/43)，并且并不受到托珠单抗或地塞米松使用的影响。接受托珠单抗而无类固醇、托珠单抗与类固醇或仅类固醇的患者的MRT-阴性CR比例相似(分别为89％、100％、100％)。在接受托珠单抗和/或类固醇的对象中观察到CAR T细胞的持续外周血扩增。结果表明，用托珠单抗或地塞米松的早期干预治疗并不影响CAR T细胞疗法的功效、CAR T细胞的移植或CAR T细胞的维持。在2个组中观测到的CRS总体比例分别为91％(21/23)和95％(19/20)。重度CRS的比例分别为30％(9/23)和15％(3/20)，p＝0.3。早期干预策略的结论示于下述表5。
表5：
在接受针对重度毒性的干预的对象中评估细胞扩增。该结果显示，CAR T细胞的扩增并不受到给予托珠单抗的影响，如图3所示。每微升外周血中CART-细胞峰值数量在患有重度CRS(图4A)和重度神经毒性(图4B)的患者中显著高于那些没有重度CRS和神经毒性的患者(分别为p＝0.002和p＝0.0015)。该结果显示，具有较高峰CAR T细胞数量的患者可能具有对重度CRS和神经毒性更高的风险。
在第28天，对各组患有或没患有重度CRS的对象中的各种生物标志物进行评估。图2A、2B、2C和2D分别显示了对IL-6、IFN-γ、端粒酶B和IL-2峰值细胞因子水平的关联。一些生物标志物显示了相同组群内具有(有)或没有(无)重度CRS的对象之间的统计学的显著差异。
表6显示了2个组(N＝43)中所有对象的不良事件数据，其可能、也许或肯定与研究相关。
表6：
表7显示了2个组(N＝43)中所有对象的神经毒性事件数据，其可能、也许或肯定与研究相关。
表7：
本发明并不意在将范围限制于具体公开的实施方式，这些实施方式仅为提供，例如，对于本发明不同方面的说明。本文所述的组合物和方法的各种修饰将在本文的说明和启示后变得显而易见。可实施这类变化而不偏离本公开的真正范围和精神，并且落入本发明的范围内。
序列
序列表
<110> 西雅图儿童研究所（Seattle Children's Research Institute）
M·詹森（JENSEN, Michael）
R·加德纳（GARDNER, Rebecca）
<120> 预防或缓解毒性的早期干预方法
<130> 735042005140
<140> 未分配
<141> 共同提交
<150> 62/311,906
<151> 2016-03-22
<150> 62/417,287
<151> 2016-11-03
<150> 62/429,722
<151> 2016-12-02
<160> 16
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 间隔子(IgG4铰链)
<400> 1
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 间隔子(IgG4铰链)
<400> 2
gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36
<210> 3
<211> 135
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 铰链-CH3间隔子
<400> 3
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1 5 10 15
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
20 25 30
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
35 40 45
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
50 55 60
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
65 70 75 80
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
85 90 95
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
100 105 110
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
115 120 125
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
130 135
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 铰链-CH2-CH3间隔子
<400> 4
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 5
<211> 282
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> IgD-铰链-Fc
<400> 5
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln
65 70 75 80
Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val
100 105 110
Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn
130 135 140
Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro
145 150 155 160
Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser
180 185 190
Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu
195 200 205
Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro
210 215 220
Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser
225 230 235 240
Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr
245 250 255
Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg
260 265 270
Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His
275 280
<210> 6
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A
<400> 6
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 7
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> tEGFR
<400> 7
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys
210 215 220
Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu
225 230 235 240
Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met
245 250 255
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
260 265 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
275 280 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
290 295 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305 310 315 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
325 330 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Gly Leu Phe Met
355
<210> 8
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD28 (登录号P10747的氨基酸153-179)
<400> 8
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 9
<211> 66
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD28 (登录号P10747的氨基酸114-179)
<400> 9
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
35 40 45
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
50 55 60
Trp Val
65
<210> 10
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD28 (P10747的氨基酸180-220)
<400> 10
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28 (LL至GG)
<400> 11
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 12
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 4-1BB (Q07011.1的氨基酸214-255)
<400> 12
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD3ζ
<400> 13
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD3ζ
<400> 14
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> CD3ζ
<400> 15
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> tEGFR
<400> 16
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu
195 200 205
Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln
210 215 220
Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly
225 230 235 240
Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro
245 250 255
His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr
260 265 270
Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His
275 280 285
Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro
290 295 300
Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
325 330 335

Claims (123)

1.一种处理方法，其包括向对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理，其中，在所述给予时，所述对象已经在先接受过疗法，所述疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，并且其中：
(a)所述物质或其他处理的给予是：(i)在开始给予所述疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或
(b)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，(i)所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)所述对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
2.一种处理方法，其包括：
(a)向患有疾病或病症的对象给予疗法，所述疗法包括免疫疗法或细胞疗法；和
(b)向所述对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理，其中：
(i)在开始给予所述疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时给予所述物质或其他处理；和/或
(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时给予所述物质或其他处理；和/或
(iii)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或
(iv)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时给予所述物质或其他处理；和/或
(v)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，所述对象未表现出重度神经毒性和/或未表现出2级或更高的神经毒性。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予或所述对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中：
1级CRS的迹象或症状为发热；和/或
所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
5.一种处理方法，包括向先前已被给予疗法的对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理，其中所述疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现的24小时内给予。
6.如权利要求1或5所述的方法，该方法还包括，在给予所述物质或其他处理前，向所述对象给予用于治疗疾病或病症的疗法。
7.一种处理方法，该方法包括：
(a)向患有疾病或病症的对象给予疗法，所述疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法；和
(b)在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后24小时内向所述对象给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后约16小时内、约12小时内、约8小时内、约2小时内或约1小时内给予。
9.如权利要求4-8中任一项所述的方法，其中，所述发热为持续发热。
10.如权利要求4-9中任一项所述的方法，其中，所述发热是在用退热剂处理后不降低或降低不超过1℃的发热，和/或所述发热在用退热剂处理对象后未降低超过1℃。
11.如权利要求4-10中任一项所述的方法，其中，所述发热包括至少或至少约38.0℃的温度。
12.如权利要求4-11中任一项所述的方法，其中：
所述发热包括介于或介于约38.0℃和42.0℃之间、38.0℃和39.0℃之间、39.0℃和40.0℃之间或40.0℃和42.0℃之间的温度，各自包括端值；或
所述发热包括高于或高于约或为或约为38.5℃、39.0℃、39.5℃、40.0℃、41.0℃、42.0℃的温度。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后少于5天，在开始给予所述疗法后少于4天或在开始给予所述疗法后少于3天给予。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述疗法为或包括细胞疗法。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述细胞疗法为或包括过继细胞疗法。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中，所述疗法为或包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或重组受体表达细胞疗法，任选地为T细胞疗法，任选地为嵌合抗原受体(CAR)-表达细胞疗法。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括类固醇，或选自下述的细胞因子或细胞因子受体的拮抗剂或抑制剂：IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β。
18.如权利要求17所述的方法，其中，所述拮抗剂或抑制剂为或包括选自下述的物质：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
19.如权利要求17或18所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括选自下述的物质：托珠单抗、希妥昔单抗、夏瑞鲁单抗、欧罗单抗(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括托珠单抗。
21.如权利要求20所述的方法，其中，所述托珠单抗以从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值，或者所述托珠单抗以至少或至少约或约2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，该方法还包括向所述对象给予第二物质，所述第二物质任选地为类固醇的，所述类固醇：
(i)在开始给予所述疗法后7天、8天或9天内给予，
(ii)在开始给予所述疗法后最初迹象低血压出现后24小时内给予；
(iii)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级细胞因子释放综合征(CRS)的最初迹象后24小时内或所述对象表现出2级CRS时给予；和/或
(iv)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级神经毒性的最初迹象或症状后24小时内或所述对象表现出2级神经毒性时给予。
23.一种处理方法，该方法包括向给予疗法的对象给予类固醇，该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中所述给予类固醇：
(i)在开始给予所述疗法后7天、8天或9天内开始，
(ii)在开始给予所述疗法后最初迹象低血压出现后24小时内开始；
(iii)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级细胞因子释放综合征(CRS)的最初迹象后24小时内或所述对象表现出2级CRS时开始；和/或
(iv)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级神经毒性的最初迹象或症状后24小时内或所述对象表现出2级神经毒性时开始。
24.如权利要求23所述的方法，其中，在给予所述类固醇前，所述方法包括向所述对象给予用于治疗疾病或病症的疗法。
25.一种处理方法，该方法包括：
(a)向患有疾病或病症的对象给予疗法，所述疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法；和
(b)向所述对象给予类固醇，其中所述给予类固醇：
(i)在开始给予所述疗法后7天、8天或9天内开始，
(ii)在开始给予所述疗法后最初迹象低血压出现后24小时内开始；
(iii)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级细胞因子释放综合征(CRS)的最初迹象后24小时内或所述对象表现出2级CRS时开始；和/或
(iv)在开始给予所述疗法后所述对象表现出2级神经毒性的最初迹象或症状后24小时内或所述对象表现出2级神经毒性时开始。
26.如权利要求22-25中任一项所述的处理方法，其中，在给予所述类固醇时，所述对象不表现出重度CRS，不表现出3级或更高的CRS，或不表现出重度神经毒性或不表现出3级或更高的神经毒性。
27.如权利要求22-26中任一项所述的方法，其中，所述类固醇在开始给予所述疗法后最初迹象低血压出现同时或之后24小时内给予。
28.如权利要求22-27中任一项所述的方法，其中，所述类固醇在加压疗法开始的同时给予。
29.如权利要求22-28中任一项所述的方法，其中，所述低血压包括：
小于或小于约90mm Hg、80mm Hg或70mm Hg的收缩压；或
小于60mm Hg、50mm Hg或40mm Hg的舒张压。
30.如权利要求1-17和22-29中任一项所述的方法，其中，所述物质为或包括类固醇，任选地为或包括皮质类固醇，任选地为糖皮质激素。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述皮质类固醇为或包括地塞米松或泼尼松。
32.如权利要求17或22-31中任一项所述的方法，其中所述类固醇以从或从约1.0mg至20mg地塞米松/天、1.0mg至10mg地塞米松/天或2.0mg至6.0mg地塞米松/天的等效剂量给予，各自包括端值。
33.如权利要求17或22-32中任何一项所述的方法，其中，所述类固醇经静脉内或口服给予。
34.如权利要求23-33中任一项所述的方法，其中，给予所述类固醇前，所述方法包括给予能治疗、预防、延缓或减轻相关毒性生发的物质或其他处理，其中：
(i)所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时给予；和/或
(ii)所述物质或其他处理在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时给予；和/或
(iii)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或
(iv)所述物质或其他处理在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时给予；和/或
(v)在所述疗法开始给予之时与所述物质或其他处理给予之时之间，所述对象未表现出重度神经毒性和/或未表现出2级或更高的CRS。
35.如权利要求34所述的方法，其中，所述物质或其他处理在所述对象表现出1级CRS时给予，或在所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予。
36.如权利要求34或35所述的方法，其中：
所述1级CRS的最初迹象或症状为发热；或
所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
37.如权利要求23-36中任一项所述的方法，该方法还包括，在给予所述类固醇前，给予能治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的物质或其他处理，其中所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后24小时内给予。
38.如权利要求36或37所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后最初迹象发热出现后约16小时内、约12小时内、约8小时内、约2小时内或约1小时内给予。
39.如权利要求36-38中任一项所述的方法，其中，所述发热为持续发热。
40.如权利要求36-39中任一项所述的方法，其中，所述发热是在用退热剂处理后不降低或降低不超过1℃的发热，和/或所述发热在用退热剂处理对象后未降低超过1℃。
41.如权利要求36-40中任一项所述的方法，其中，所述发热包括至少或至少约38.0℃的温度。
42.如权利要求36-41中任一项所述的方法，其中：
所述发热包括介于或介于约38.0℃和42.0℃之间、38.0℃和39.0℃之间、39.0℃和40.0℃之间或40.0℃和42.0℃之间的温度，各自包括端值；或
所述发热包括高于或高于约或为或约为38.5℃、39.0℃、39.5℃、40.0℃、41.0℃、42.0℃的温度。
43.如权利要求34-42中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理在开始给予所述疗法后少于5天，在开始给予所述疗法后少于4天或在开始给予所述疗法后少于3天给予。
44.如权利要求23-43中任一项所述的方法，其中，所述疗法为细胞疗法。
45.如权利要求44所述的方法，其中，所述细胞疗法为过继细胞疗法。
46.如权利要求23-45中任一项所述的方法，其中，所述疗法为肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或重组受体表达细胞疗法，任选地为T细胞疗法，任选地为嵌合抗原受体(CAR)-表达细胞疗法。
47.如权利要求34-46中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理为选自下述的细胞因子或细胞因子受体的拮抗剂或抑制剂：IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β。
48.如权利要求47所述的方法，其中，所述拮抗剂或抑制剂为或包括选自下述的物质：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质、肽和核酸。
49.如权利要求47或48所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括选自下述的物质：托珠单抗、希妥昔单抗、夏瑞鲁单抗、欧罗单抗(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
50.如权利要求34-49中任一项所述的方法，其中，所述物质或其他处理为或包括托珠单抗。
51.如权利要求50所述的方法，其中，所述托珠单抗以从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值，或者所述托珠单抗以至少或至少约或约2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
52.如权利要求1-51中任一项所述的方法，其中，所述疗法为或包括细胞疗法，并且所给予的细胞数量介于约0.25x106细胞/kg对象体重和5x106细胞/kg之间，0.5x106细胞/kg对象体重和3x106细胞/kg之间，介于约0.75x106细胞/kg和2.5x106细胞/kg之间或介于约1x106细胞/kg和2x106细胞/kg之间，各自包括端值。
53.如权利要求1-52中任一项所述的方法，其中所述疗法为或包括细胞疗法，并且所述细胞以包括所述细胞的单一药物组合物给予。
54.如权利要求1-52中任一项所述的方法，其中，所述疗法为或包括细胞疗法并且细胞剂量为分开剂量，其中所述细胞剂量在不超过3天的时间内以数个组合物给予，所述数个组合物总体包含所述剂量的细胞。
55.如权利要求1-54中任一项所述的方法，其中，所述疾病或病症是肿瘤或癌症。
56.如权利要求1-55中任一项所述的方法，其中，所述疾病或病症是白血病或淋巴瘤。
57.如权利要求1-56中任一项所述的方法，其中，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
58.如权利要求1-57中任一项所述的方法，其中，所述疗法为包括表达重组受体的细胞剂量的细胞疗法，其中：
所述重组受体结合、识别或靶向与所述疾病或病症相关的抗原；和/或
所述重组受体为T细胞受体或功能性非T细胞受体；和/或
所述重组受体为嵌合抗原受体(CAR)。
59.如权利要求58所述的方法，其中，所述CAR包含特异性结合所述抗原的胞外抗原识别结构域和包括ITAM的胞内信号转导结构域。
60.如权利要求59所述的方法，其中，所述抗原是CD19。
61.如权利要求60所述的方法，其中，所述胞内信号转导结构域包括CD3-ζ链的胞内结构域。
62.如权利要求60或61所述的方法，其中，所述CAR还包含共刺激信号转导区域。
63.如权利要求62所述的方法，其中，所述共刺激信号转导结构域包括CD28或4-1BB的信号转导结构域。
64.如权利要求1-63中任一项所述的方法，其中，所述疗法为细胞疗法，所述细胞疗法包括含有T细胞的细胞剂量。
65.如权利要求64所述的方法，其中，所述T细胞为CD4+或CD8+。
66.如权利要求64或65中任一项所述的方法，其中，所述T细胞对于所述对象是自体的。
67.如权利要求1-66中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在给予所述疗法前给予化疗剂，和/或其中在开始给予所述疗法前，所述对象之前已经用化疗剂治疗。
68.如权利要求67所述的方法，其中，所述化疗剂包括选自环磷酰胺、氟达拉滨和/或其组合的物质。
69.如权利要求67或68所述的方法，其中所述化疗剂在开始给予所述疗法之前2至5天给予。
70.如权利要求67-69中任一项所述的方法，其中：
所述化疗剂为氟达拉滨，其以或以约1mg/m2和100mg/m2之间的剂量、以或以约10mg/m2和75mg/m2之间的剂量、以或以约15mg/m2和50mg/m2之间的剂量、以或以约20mg/m2和30mg/m2之间的剂量或以或以约24mg/m2和26mg/m2之间的剂量给予；和/或
所述化疗剂为环磷酰胺，其以或以约20mg/kg和100mg/kg之间、以或以约40mg/kg和80mg/kg之间或以或以约30mg/kg和60mg/kg之间给予。
71.如权利要求1-70中任一项所述的方法，其中，相较于包括其他处理方案而所述其他处理方案包括对象在重度CRS发生后或2级或更高的CRS发生后接受所述物质或其他处理的方法，所述对象在给予所述疗法后多至或多至约7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天无可测毒性后果或毒性后果降低。
72.如权利要求71所述的方法，其中，所述毒性后果降低大于50％、60％、70％、80％、90％或更多。
73.如权利要求71或72所述的方法，其中所述毒性后果是与3级或更高的神经毒性相关的症状或与2级更高的CRS相关的症状。
74.如权利要求71-73中任一项所述的方法，其中，所述毒性后果为3级或更高的神经毒性，包括选自下述的一种或多种症状：混乱、谵妄、表达性失语、反应迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫-样活动、癫痫。
75.如权利要求71-73中任一项所述的方法，其中，所述毒性后果为3级或更高的CRS，包括选自下述的一种或多种症状：高于或高于约38摄氏度的持续发热，至少持续三天；需要高剂量血管加压剂或多种血管加压剂的低血压；缺氧，任选地包括低于或低于约90％的血浆氧(PO2)水平以及需要机械呼吸的呼吸衰竭。
76.如权利要求1-75中任一项所述的方法，其中，所述疗法为包括细胞剂量的细胞疗法，并且，所述细胞在对象中表现出相较于使用其他处理方案的在其他组群或处理组中对应对象中或在所述对象中给予所述细胞疗法而言增加或延长的增殖和/或维持，
其中，所述其他处理方案包括给予所述细胞疗法并随后在重度CRS发生后或在2级或更高的CRS发生后给予所述物质或其他处理，并且其中任选地，在给予所述细胞之后和所述2级或更高的CRS或重度CRS发生之前，所述其他处理方案中的对象没有被给予所述物质，并且任选地，没有被给予旨在治疗CRS或神经毒性的任何其他治疗。
77.如权利要求76的方法，其中，所述增殖和/或维持增加或延长2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
78.如权利要求1-77中任一项所述的方法，其中：
所述疗法为细胞疗法，包括工程改造的和/或表达CAR的细胞；和
在开始给予所述疗法后第30天、第60天或第90天，对象血液中所述工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞的浓度和数量至少为或约10个工程改造的细胞或表达CAR的细胞/微升，至少50％外周血单核细胞(PBMC)总数，至少或至少约1x105个工程改造的细胞或表达CAR的细胞，和/或至少5,000拷贝的编码CAR的或编码工程改造的受体的DNA/微克DNA；和/或；
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象的血液或血清中能检测到表达CAR的细胞和/或工程改造的细胞；和/或
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象的血液含有至少20％表达CAR的细胞，至少10个表达CAR的细胞/微升或至少1x104个表达CAR的细胞；
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象的血液含有至少50％、60％、70％、80％或90％生物有效剂量的所述细胞；
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象的血液含有至少20％工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞，至少10个工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞/微升和/或至少1x104个工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞；
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象表现出所述疾病或病症负荷的降低或持续降低，所述降低或持续降低为或约为或至少为或至少约为疗法给予后50％、60％、70％或80％峰值降低或与有效剂量相关的降低。
79.如权利要求1-78中任一项所述的方法，其中：
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，所述对象不表现和/或未表现出重度神经毒性、重度CRS、2级或更高的CRS、2级或更高的神经毒性，和/或未表现出癫痫或其他CNS后果；或
在开始给予所述疗法后第30、60或90天，少于或约少于25％、少于与或约少于20％、少于或约少于15％或少于或约少于10％的这样治疗的对象不表现和/或未表现出重度神经毒性、重度CRS、2级或更高的CRS、2级或更高的神经毒性，和/或未表现出癫痫或其他CNS后果。
80.如权利要求1-79中任一项所述的方法，其中，所述疗法为细胞疗法，包括工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞；和
在所述疗法给予后，工程改造的细胞和/或表达CAR的细胞的血液浓度随时间的曲线下面积(AUC)大于经由包括其他给药方案的方法所得，所述其他给药方案中，向所述对象给予所述疗法并且在所述对象表现出重度或2级或更高的或3级或更高的CRS或神经毒性时给予所述物质或其他处理。
81.一种物质或其他处理，其用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中：
(a)向对象给予所述物质或其他处理是：(i)在所述对象已经被给予的所述疗法开始后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或
(b)在所述对象已经被给予的所述疗法开始之时与所述物质或其他处理给予之时之间，(i)所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)所述对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
82.如权利要求81所述的物质或其他处理，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予或所述对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予。
83.如权利要求81或82所述的物质或其他处理，其中：
1级CRS的迹象或症状为发热；和/或
所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现后24小时内给予。
84.一种物质或其他处理，其用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现的24小时内给予。
85.一种物质或其他处理，其用作药物用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中：
(a)向对象给予所述物质或其他处理是(i)在所述对象已经被给予的所述疗法开始后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或
(b)在所述对象已经被给予的所述疗法开始之时与所述物质或其他处理给予之时之间，(i)所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)所述对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
86.如权利要求85所述的物质或其他处理，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予或所述对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予。
87.如权利要求85或86所述的物质或其他处理，其中：
1级CRS的迹象或症状为发热；和/或
所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现后24小时内给予。
88.一种物质或其他处理，其用作药物用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现的24小时内给予。
89.一种物质或其他处理在制备用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的药物中的用途，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中：
(a)向对象给予所述物质或其他处理是(i)在所述对象已经被给予的所述疗法开始后小于或不超过10、7、6、5、4或3天时；和/或(ii)在所述对象不表现出重度细胞因子释放综合症(CRS)的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的CRS时；和/或(iii)在所述对象不表现出重度神经毒性的迹象或症状和/或不表现出2级或更高的神经毒性时；和/或
(b)在所述对象已经被给予的所述疗法开始之时与所述物质或其他处理给予之时之间，(i)所述对象未表现出重度CRS和/或未表现出2级或更高的CRS，和/或(ii)所述对象未表现重度神经毒性和/或不表现出2级或更高的神经毒性。
90.如权利要求89所述用途，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后所述对象表现出1级CRS的最初迹象或症状后24小时内给予或所述对象表现出CRS的迹象或症状和/或表现出1级CRS时给予。
91.如权利要求89或90所述的用途，其中：
1级CRS的迹象或症状为发热；和/或
所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现后24小时内给予。
92.一种物质或其他处理在制备用于在先前已经被给予疗法的对象中治疗、预防、延缓或减轻毒性生发的药物中的用途，其中该疗法包括免疫疗法和/或细胞疗法，其中，所述物质或其他处理在所述疗法给予后最初迹象发热出现的24小时内给予。
93.如权利要求81-88中任一项所述的物质或其他处理或如权利要求89-92中任一项所述的用途，其中，所述物质或其他处理在给予所述疗法后最初迹象发热出现后约16小时内、约12小时内、约8小时内、约2小时内或约1小时内给予。
94.如权利要求83、84、87、88和91-93中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述发热为持续发热。
95.如权利要求83、84、87、88和91-94中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述发热是在用退热剂处理后不降低或降低不超过1℃的发热，和/或其中所述发热在用退热剂处理对象后未降低超过1℃。
96.如权利要求83、84、87、88和91-95中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中所述发热包括至少或至少约38.0℃的温度。
97.如权利要求83、84、87、88和91-96中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，
所述发热包括介于或介于约38.0℃和42.0℃之间、38.0℃和39.0℃之间、39.0℃和40.0℃之间或40.0℃和42.0℃之间的温度，各自包括端值；或
所述发热包括高于或高于约或为或约为38.5℃、39.0℃、39.5℃、40.0℃、41.0℃、42.0℃的温度。
98.如权利要求81-97中任一项所述物质或其他处理或用途，其中，所述物质或其他处理为或包括类固醇，或选自下述的细胞因子或细胞因子受体的拮抗剂或抑制剂：IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β。
99.如权利要求98所述的物质或其他处理或用途，其中，所述拮抗剂或抑制剂为或包括选自下述的物质：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
100.如权利要求98或99所述的物质或其他处理或用途，其中，所述物质或其他处理为或包括选自下述的物质：托珠单抗、希妥昔单抗、夏瑞鲁单抗、欧罗单抗(CDP6038)、艾思莫单抗、ALD518/BMS-945429、希鲁库单抗(CNTO136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
101.如权利要求81-100中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述物质或其他处理为或包括托珠单抗。
102.如权利要求101所述的物质或其他处理或用途，其中，所述托珠单抗以从或从约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg的剂量给予，各自包括端值，或者所述托珠单抗以至少或至少约或约2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
103.如权利要求81-98中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述物质为或包括类固醇，任选地为或包括皮质类固醇，任选地为糖皮质激素。
104.如权利要求103所述的物质或其他处理或用途，其中所述皮质类固醇为或包括地塞米松或泼尼松。
105.如权利要求81-98、103和104中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中所述类固醇以从或从约1.0mg至20mg地塞米松/天、1.0mg至10mg地塞米松/天或2.0mg至6.0mg地塞米松/天的等效剂量给予，各自包括端值。
106.如权利要求81-98和103-105中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述类固醇配制为用于静脉内或口服给予。
107.如权利要求81-106中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疗法为或包括细胞疗法。
108.如权利要求107所述的物质或其他处理或用途，其中，所述细胞疗法为或包括过继细胞疗法。
109.如权利要求81-108中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疗法为或包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法、转基因TCR疗法或重组受体表达细胞疗法，任选地为T细胞疗法，任选地为嵌合抗原受体(CAR)-表达细胞疗法。
110.如权利要求81-109中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疗法为细胞疗法，其包括表达重组受体的细胞剂量，其中：
所述重组受体结合、识别或靶向与所述疾病或病症相关的抗原；和/或
所述重组受体为T细胞受体或功能性非T细胞受体；和/或
所述重组受体为嵌合抗原受体(CAR)。
111.如权利要求109或110所述的物质或其他处理或用途，其中，所述CAR包含特异性结合所述抗原的胞外抗原识别结构域和包括ITAM的胞内信号转导结构域。
112.如权利要求111所述的物质或其他处理或用途，其中所述抗原为CD19。
113.如权利要求111所述的物质或其他处理或用途，其中，所述胞内信号转导结构域包括CD3-ζ链的胞内结构域。
114.如权利要求109-113中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述CAR还包括共刺激信号转导区域。
115.如权利要求114所述的物质或其他处理或用途，其中，所述共刺激信号转导结构域包括CD28或4-1BB的信号转导结构域。
116.如权利要求81-115中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疗法为细胞疗法，包括含有T细胞的细胞剂量。
117.如权利要求116所述的物质或其他处理或用途，其中，所述T细胞为CD4+或CD8+。
118.如权利要求116或117所述的物质或其他处理或用途，其中，所述T细胞对于所述对象是自体的。
119.如权利要求110-118中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疾病或病症是肿瘤或癌症。
120.如权利要求110-119中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疾病或病症是白血病或淋巴瘤。
121.如权利要求110-120中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
122.如权利要求81-121中任一项所述的物质或其他处理或用途，其中，在所述疗法给予之前，所述对象之前已经用化疗剂治疗。
123.如权利要求122所述的物质或其他处理或用途，其中，所述化疗剂包括选自环磷酰胺、氟达拉滨和/或其组合的物质。
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