CN109072174A

CN109072174A - 微生物培养物，组合物，用途和方法

Info

Publication number: CN109072174A
Application number: CN201780010403.6A
Authority: CN
Inventors: J.内尔森; R.R.汉森; T.阿莫斯
Original assignee: Novozymes AS
Current assignee: Novozymes AS
Priority date: 2016-02-15
Filing date: 2017-02-07
Publication date: 2018-12-21
Also published as: EP3417050A1; WO2017142743A1; US20200270547A1

Abstract

本发明涉及芽孢杆菌属、赖氨酸芽孢杆菌属或假单胞菌属的一种或多种细菌培养物，包含细菌培养物的组合物，用于防止和/或减少游离脂肪酸量的细菌培养物的用途以及洗涤方法。

Description

微生物培养物，组合物，用途和方法

对生物材料的保藏的引用

本申请包含对生物材料的保藏的引用，该保藏通过引用结合在此。

技术领域

本发明涉及芽孢杆菌属、赖氨酸芽孢杆菌属或假单胞菌属的一种或多种分离的细菌培养物，包含细菌培养物的组合物，用于防止和/或减少游离脂肪酸量的细菌培养物的用途以及洗涤方法。

背景技术

顾客更喜欢，物品例如服装尽可能地干净。此类顾客典型地将清洁或处理过的物品的气味与这种物品的清洁度联系起来。因此，从顾客的角度来看，清洁和/或处理组合物的有效性通常与这种组合物赋予用这种组合物清洁或处理的物品的气味直接相关。

酯酶和脂肪酶是特别有效的清洁剂，并广泛用于洗涤剂组合物中用于洗衣或硬表面清洁。这些酶会产生生令人讨厌的脂肪酸气味，因为它们会降解物品上存在的脂质以释放脂肪酸。特别地，短链脂肪酸导致不希望的气味，例如丁酸和己酸的气味。因此消费者通常将这些气味与缺乏清洁度联系起来。气味主要在洗涤过程后发生，在干燥阶段中，由于含水量降低，脂肪酶的活性增加。

发明内容

本发明涉及一种分离的培养物，其特征与选自下组的菌株的特征基本相同，该组由以下组成：

-具有保藏登录号NRRL-B-67164的菌株；

-具有保藏登录号NRRL B-50256的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67163的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67162的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67160的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67161的菌株；

-这些保藏菌株中至少一种的突变体，其中该突变体具有该相应保藏菌株的全部鉴别特征；

-这些保藏菌株之一的后代；或

-这些菌株、突变体、或后代中的两种或更多种的混合物。

本发明进一步涉及一种包含一种或多种选自下组的分离的培养物物种的组合物，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillussubtilis subsp.subtilis)、污斑赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus contaminans)或蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)。

此外，本发明涉及一种或多种分离的细菌培养物用于减少物品上存在的游离脂肪酸的量的用途，其中该细菌培养物是芽孢杆菌属、赖氨酸芽孢杆菌属或假单胞菌属的菌株。

本发明还涉及一种用于洗涤物品的方法，该方法包含以下步骤：

a.将该物品暴露于洗涤液；

b.完成至少一个洗涤循环；以及

c.任选地用任选包含漂洗助剂的水漂洗该物品，

其中该洗涤液和/或该漂洗助剂包含一种或多种本发明的分离培养物或本发明的组合物。

定义

洗涤剂组分：洗涤剂组分与本发明的细菌培养物不同。这些洗涤剂组分的精确性质、其掺入水平将取决于组合物的物理形式和将在其中使用组合物的操作的性质。适合的洗涤剂组分包括，但不限于：以下描述的组分，例如表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。

洗涤剂组合物：术语“洗涤剂组合物”是指用于从有待清洁的物品(例如纺织品或硬表面)除去不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品，用于家用清洁和工业清洁二者。这些术语涵盖选择用于希望的具体类型的清洁组合物和产品的形式(例如、液体、凝胶、粉末、颗粒、糊状、或喷雾组合物)的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；织物清新剂；织物柔软剂；以及纺织品和衣物预去污剂/预处理)。除了含有本发明的细菌培养物之外，该洗涤剂组合物还可以含有一种或多种另外的酶(例如淀粉酶、过氧化氢酶、纤维素酶(例如内切葡聚糖酶)、角质酶、DNA酶、卤代过氧合酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、过氧化物酶、蛋白酶、黄原胶酶、木葡聚糖酶、或其任何混合物)，和/或洗涤剂佐剂成分，例如表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种EPA种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。

餐具：术语“餐具”旨在意指任何形式的厨房用具、成套餐具或餐桌用餐具(例如但不限于锅、盘、杯、刀、叉、匙、瓷料等)。该餐具是由任何适合的材料(例如金属、玻璃、橡胶、塑料、PVC、丙烯酸酯、陶瓷、瓷器或瓷料)。

硬表面：在此将术语“硬表面”定义为硬表面，该硬表面包括地板、桌子、墙壁、屋顶等，连同硬物体的表面，例如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。该术语“硬表面”还包括洗涤机内部的表面，例如洗衣机或洗碗机的内部，这包括进皂盒、壁、窗、篮子、衣架、喷嘴、水泵、水池、过滤器、管道线、管、接头、密封件、垫片、配件、叶轮、鼓、排水管、存水弯、硬币陷阱入口和出口。术语硬表面并不涵盖纺织品或织物。

分离的：术语“分离的”意思指处于自然界中不存在的形式或环境中的一种物质。分离的物质的非限制性实例包括：(1)任何非天然出现的物质；(2)包括但不限于任何微生物、细菌或真菌，其至少部分地从与其本质相关的一种或多种或所有天然出现的成分中移出；或者(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质。分离的物质可以存在于发酵液样品中或存在于合适的载体物质中。

湿洗：术语“湿洗”涉及家用湿洗和工业湿洗两者并且意指用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。湿洗过程可以例如使用例如家用或工业洗涤机进行或可以手动进行。

漂洗助剂：术语“漂洗助剂”意指在洗涤物品后的漂洗循环期间可与水一起使用的组合物。漂洗助剂的实例是在洗涤后漂洗衣物物品时在漂洗水中使用的织物柔软剂/织物调理剂。另一个实例是在自动餐具洗涤机中洗涤的餐具，其中餐具用包含漂洗助剂的水漂洗。漂洗助剂与本发明的细菌培养物不同。

纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织品材料，该任何纺织品材料包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织物材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料，这些材料制造的织物和由这些织物制成的产品(例如，服装和其他物品)。该纺织品或织物可以处于针织品、机织物、牛仔布、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。这些纺织品可以是纤维素基的，诸如天然纤维素，包括棉布、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括纤维胶/人造丝、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。纺织品或织物也可以不基于纤维素，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物以及其基于纤维素和不基于纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/纤维胶与一种或多种伴随材料的共混物，该伴随材料例如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)和/或含纤维素的纤维(例如人造丝/纤维胶、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如染污的家居衣物。当使用术语织物或衣服时，旨在还包括广义术语纺织品。在本发明的上下文中，术语“纺织品”还包括织物。

洗涤循环：在此将术语“洗涤循环”定义为一个洗涤操作，其中将物品例如纺织品/织物或硬表面暴露于洗涤液中，将某种机械作用施加至该纺织品/织物或硬表面，以释放污渍，并且协助洗涤液流进和流出或流在物品上，并且最终去除多余的洗涤液。在一个或多个洗涤循环后，通常对该物品进行漂洗和干燥。

洗涤液：在此将术语“洗涤液”定义为任选地包括本发明的细菌培养物的在水中的洗涤剂组分的溶液或水和洗涤剂组分的混合物。

具体实施方式

-具有保藏登录号NRRL-B-67164的菌株；

-具有保藏登录号NRRL B-50256的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67163的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67162的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67160的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67161的菌株；

-这些保藏菌株之一的后代；或

-这些菌株、突变体、或后代中的两种或更多种的混合物。

发明人已经令人惊讶地发现，这些细菌菌株在洗衣过程中是有益的，其中使用脂肪酶从衣物物品上去除脂质污渍。发明人已经发现，这些菌株能够减少来自包含一种或多种游离脂肪酸的衣物物品的游离脂肪酸的量，洗衣物品如具有包含用脂肪酶洗涤的脂质的污渍的洗衣物品。

此外，本发明涉及一种或多种分离的培养物或包含一种或多种细菌培养物的组合物用于减少物品上存在的游离脂肪酸的量的用途，其中该细菌培养物是芽孢杆菌属、赖氨酸芽孢杆菌属或假单胞菌属的菌株。

在本发明的一个实施例中，细菌培养物具有与保藏菌株之一或其混合物相同的特征。本发明的细菌培养物可以包含这些保藏菌株中至少一种的突变体，该突变体具有该相应保藏菌株的全部鉴别特征。

在本发明的一个实施例中，细菌培养物是保藏菌株之一或其后代。本发明的培养物能够减少来自包含一种或多种游离脂肪酸的物品的游离脂肪酸的量。在一个实施例中，该物品是衣物物品例如纺织品或织物。该物品可以是衣服、服装、亚麻布、桌布等。

有气味的游离脂肪酸是具有从2至10个碳原子链长的小链游离脂肪酸。发明人已经发现，保藏菌株能够减少一种或多种游离脂肪酸的量，这些游离脂肪酸具有从2至10个碳原子。游离脂肪酸可以选自下组，该组由以下组成：甲酸、乙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸和癸酸。实施例2和3示出，根据本发明的细菌培养物当在洗涤循环中与脂肪酶一起使用时能够减少源自脂质污渍的丁酸和己酸的量。

本发明进一步涉及一种包含一种或多种选自下组的分离的细菌培养物物种的组合物，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌枯草亚种、污斑赖氨酸芽孢杆菌或蒙氏假单胞菌。该组合物可以是洗涤剂组合物、清洁组合物或漂洗助剂，或者该组合物可以是与常规洗涤剂组合物、清洁组合物或漂洗助剂一起使用的附加组合物。该组合物可以包含根据本发明的细菌培养物之一，或者该组合物可以包含一种或多种细菌培养物。

重要的是在洗涤循环中使用期间和/或之后细菌培养物是有活性的。因此该组合物包含作为营养培养物、休眠培养物、或孢子细菌培养物的细菌培养物。

该组合物可以是洗涤剂或清洁组合物，除细菌培养物之外，该洗涤剂或该清洁组合物还可以包含一种或多种选下组的洗涤剂组分，该组由以下组成：表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。

在一个实施例中，本发明涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含结合一种或多种额外的清洁组合物组分的本发明的酶。另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分，包括以下列出的示例性、非限制性组分。

对于纺织品护理，组分的选择可以包括以下考虑：有待清洁的纺织品的类型、污物的类型和/或程度、进行清洁时的温度以及洗涤剂产品的配制。尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，一种组分可以包含另外的功能性。

在一个实施例中，本发明涉及ADW(自动餐具洗涤)组合物，该组合物包含与一种或多种另外的ADW组合物组分相结合的本发明的酶。另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分，包括以下列出的示例性、非限制性组分。

该组合物可以是漂洗助剂，例如包含本发明的一种或多种细菌培养物的织物柔软剂。

在一个实施例中，本发明的细菌培养物可以用于织物柔软剂或织物调理剂中。织物柔软剂(也称为织物调理剂)是一种典型地在洗涤机的漂洗循环施用至衣物上的化学化合物。织物柔软剂可以作为溶液和固体获得，也可以浸渍在干衣机中使用的烘衣纸中。

织物柔软剂用带电的化学化合物覆盖织物表面，导致线从表面“立起”并且从而使织物感觉更柔软。阳离子柔软剂通过静电引力与纤维表面上的带负电基团结合并中和它们的电荷。长脂族链随后朝向纤维的外部，赋予润滑性。

织物柔软剂化学品的导电性还可以防止在干衣机中可能产生的静电的累积。制造商声称的其他功能包括熨烫过程中熨烫滑动性的改进，增强的耐沾污性，减少起皱和起球以及减少干燥时间。很多柔软剂含有香料。阳离子织物柔软剂在漂洗循环而不是洗涤循环中添加，因为它们会干扰洗涤剂的清洁作用。

除了织物柔软化学品之外，织物柔软剂可以包括用于保持吸收的最佳pH值的酸或碱，基于硅酮的防沫剂，乳化稳定剂，香料和颜料。

阴离子柔软剂和抗静电剂可以是例如磷酸和脂肪醇的单酯和二酯的盐。这些通常与传统的阳离子柔软剂一起使用。阳离子柔软剂与洗涤剂中使用的阴离子表面活性剂不相容，因为它们与它们结合形成固体沉淀。所以，它们必须在漂洗循环中添加。阴离子柔软剂可直接与阴离子表面活性剂结合使用。其他阴离子柔软剂可以基于绿土。一些化合物，例如乙氧基化磷酸酯，具有软化，抗静电和表面活性剂性质。

所述组合物可进一步包含一种或多种酶。酶可以包含在组合物中，该组合物是洗涤剂或清洁组合物或漂洗助剂，例如织物柔软剂。组合物可以进一步包含选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：淀粉酶、阿拉伯糖酶、糖酶、纤维素酶、角质酶、DNA酶、半乳聚糖酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、氧化酶、果胶酶、蛋白酶、以及木聚糖酶。在一个实施例中，该组合物包含脂肪酶。

在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌和脂肪酶。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌、脂肪酶和表面活性剂。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌、脂肪酶和一种或多种洗涤剂组分。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌、脂肪酶和阴离子柔软剂。

在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或污斑赖氨酸芽孢杆菌。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或污斑赖氨酸芽孢杆菌和脂肪酶。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或污斑赖氨酸芽孢杆菌、脂肪酶和表面活性剂。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或污斑赖氨酸芽孢杆菌、脂肪酶和一种或多种洗涤剂组分。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或污斑赖氨酸芽孢杆菌、脂肪酶和阴离子柔软剂。

在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或枯草芽孢杆菌枯草亚种。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或枯草芽孢杆菌枯草亚种和脂肪酶。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或枯草芽孢杆菌枯草亚种、脂肪酶和表面活性剂。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或枯草芽孢杆菌枯草亚种、脂肪酶和一种或多种洗涤剂组分。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌和/或枯草芽孢杆菌枯草亚种、脂肪酶和阴离子柔软剂。

在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌、污斑赖氨酸芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌、污斑赖氨酸芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌和脂肪酶和脂肪酶。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌、污水赖氨酸芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌、脂肪酶和表面活性剂。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌、污斑赖氨酸芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌、脂肪酶和一种或多种洗涤剂组分。在本发明的一个实施例中，组合物包含细菌培养物枯草芽孢杆菌、污斑赖氨酸芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌、脂肪酶和阴离子柔软剂。

在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164和/或NRRL B-50256的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL B-50256、和脂肪酶的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL B-50256、脂肪酶和表面活性剂的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL B-50256、脂肪酶和一种或多种洗涤剂组分的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL B-50256、脂肪酶和阴离子柔软剂的细菌培养物。

在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164和/或NRRL-B-67160的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL-B-67160、和脂肪酶的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL-B-67160、脂肪酶和表面活性剂的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL-B-67160、脂肪酶和一种或多种洗涤剂组分的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL-B-67160、脂肪酶和阴离子柔软剂的细菌培养物。

在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164和/或NRRL-B-67161的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL-B-67161、和脂肪酶的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL-B-67161、脂肪酶和表面活性剂的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL-B-67161、脂肪酶和一种或多种洗涤剂组分的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、和/或NRRL-B-67161、脂肪酶和阴离子柔软剂的细菌培养物。

在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、和/或NRRL B-50256的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、和/或NRRL B-50256、和脂肪酶的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、和/或NRRL B-50256、脂肪酶和表面活性剂的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、和/或NRRL B-50256、脂肪酶和一种或多种洗涤剂组分的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、和/或NRRL B-50256、脂肪酶和阴离子柔软剂的细菌培养物。

在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、NRRL-B-67161、NRRL-B-67162、NRRL-B-67163、和/或NRRL B-50256的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、NRRL-B-67161、NRRL-B-67162、NRRL-B-67163、和/或NRRL B-50256和脂肪酶的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、NRRL-B-67161、NRRL-B-67162、NRRL-B-67163、和/或NRRL B-50256、脂肪酶和表面活性剂的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、NRRL-B-67161、NRRL-B-67162、NRRL-B-67163、和/或NRRL B-50256、脂肪酶和一种或多种洗涤剂组分的细菌培养物。在本发明的一个实施例中，组合物包含保藏号为NRRL-B-67164、NRRL-B-67160、NRRL-B-67161、NRRL-B-67162、NRRL-B-67163、和/或NRRL B-50256、脂肪酶、和阴离子柔软剂的细菌培养物。

配制根据本发明的组合物，使得有可能获得用于漂洗的洗涤液或水中的每种细菌培养物的浓度在1x 10⁴至1x 10¹²个细菌细胞/100mL的范围内。在一个实施例中，用于漂洗的洗涤液或水中的每种细菌培养物的浓度优选地在1x 10⁴至1x 10¹⁰个细菌细胞/100mL的范围内、在1x 10⁴至1x 10⁸个细菌细胞/100mL的范围内或在1x 10⁴至1x 10⁶个细菌细胞/100mL的范围内。

当根据本发明的细菌培养物用于减少物品上存在的游离脂肪酸的量时，当用测定II测量时，丁酸和/或己酸的量减少至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或者至少99％。实例2证明21小时后丁酸的量可以减少超过99％。实例3示出通过使用微生物孢子31小时后丁酸的量可以减少超过99％。

洗涤剂或清洁组合物可以是液体组合物。对于液体洗涤剂成分可以通过水可溶性袋中的隔室彼此物理性地分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在清洗溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。

该洗涤剂组合物可以采用一种单位剂量产品的形式。单位剂量产品是不可重复使用的容器中的单一剂量的包装。它越来越多地用于针对衣物的洗涤剂中。一个洗涤剂单位剂量产品是在单次洗涤中所用的洗涤剂量值的包装(例如，在由一种水溶性膜制得的一个袋中)。

袋可以是适于保存该组合物的任意形式、任何形状、和任何材料，例如不允许该组合物在与水接触之前从该袋中释放出。袋由封装内体积的水溶性膜制成。所述内部体积可以分成袋的室。优选的膜是高分子材料，优选被制成膜或片的形式的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是混合组合物，包含可通过水解可降解的以及水溶性的聚合物混合物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考(Trade reference)M8630下，由美国克里斯克拉夫特工业产品公司(Chris Craft In.Prod.Of Gary，Ind.,US)销售)，以及增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨糖醇及其混合物。这些袋可以包含固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。组合物中，液体组分的室可以与含固体的室不同(参见例如，US 2009/0011970)。

洗涤剂组分的选择可以包括(用于纺织品护理)有待清洁的纺织品的类型、污物的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，一种组分可以包含另外的功能性。

另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分，包括以下列出的示例性、非限制性组分。

细菌培养物可以在包含洗涤液的洗涤期间使用或在包含水和任选地漂洗助剂的漂洗期间使用。细菌培养物可以按在用于漂洗的洗涤液或水中每种细菌培养物的浓度在1x10⁴至1x 10¹²个细菌细胞/100mL的范围内使用。在一个实施例中，该浓度优选地在1x 10⁴至1x 10¹⁰个细菌细胞/100mL的范围内或在1x 10⁴至1x 10⁸个细菌细胞/100mL的范围内。在本发明的一个实施例中，用于漂洗的该洗涤液或水中每种细菌培养物的浓度优选地在1x10⁴至1x 10⁶个细菌细胞/100mL的范围内。

细菌培养物可以用于减少物品上存在的游离脂肪酸的量，其中物品是纺织品、织物、餐具或硬表面。细菌培养物可以在洗涤循环或漂洗循环中使用。

本发明进一步涉及一种用于洗涤物品的方法，该方法包含以下步骤：

a.将该物品暴露于洗涤液；

b.完成至少一个洗涤循环；以及

c.任选地用任选包含漂洗助剂的水漂洗该物品，

其中该洗涤液和/或该漂洗助剂包含一种或多种本发明的细菌培养物或本发明的组合物。

该物品是纺织品、织物、餐具或硬表面。在本发明的一个实施例中，该硬表面是洗衣机或自动餐具洗涤机的内部。

在本发明的一个实施例中，该漂洗助剂是织物柔软剂。

细菌培养物可以按在用于漂洗的洗涤液或水中每种细菌培养物的浓度在1x 10⁴至1x 10¹²个细菌细胞/100mL的范围内使用。在一个实施例中，该浓度优选地在1x 10⁴至1x10¹⁰个细菌细胞/100mL的范围内或在1x 10⁴至1x 10⁸个细菌细胞/100mL的范围内。在本发明的一个实施例中，用于漂洗的该洗涤液或水中每种细菌培养物的浓度优选地在1x 10⁴至1x 10⁶个细菌细胞/100mL的范围内。

在本发明一个实施例中，洗涤物品的方法包含以下步骤：

a.将该物品暴露于洗涤液；

b.完成至少一个洗涤循环；以及

c.任选地用任选包含漂洗助剂的水漂洗该物品，

其中该洗涤液和/或该漂洗助剂包含一种或多种本发明的细菌培养物或本发明的组合物，并且其中该培养物减少来自包含游离脂肪酸的物品的游离脂肪酸的量。在一个实施例中，细菌培养物减少具有从2至10个碳原子的游离脂肪酸的量。在一个实施例中，细菌培养物减少选自下组的的游离脂肪酸的量，该组由以下组成：甲酸、乙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸和癸酸。

在本发明的一个实施例中，当用测定II测量时丁酸和/或己酸的量减少至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或者至少99％。

洗涤剂产品的配制品

本发明的洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，膏，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。

袋可以被配置为单个或多个隔室。它可以具有适合容持该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。袋由封装内体积的水溶性膜制成。所述内部体积可以分成袋的室。优选的膜是高分子材料，优选被制成膜或片的形式的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，该共混组合物包含可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSol有限责任公司出售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包含固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在构成上可以与含固体的室不同：US 2009/0011970。

可以由水可溶的袋中或片剂的不同层中的隔室来将洗涤剂成分物理地彼此分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在清洗溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。

非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地包含按重量计至少20％并且最高达95％的水，例如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。

液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。

洗衣皂条

本发明的细菌培养物可以被添加至洗衣皂条中并且用于手洗衣物、织物和/或纺织品。术语洗衣皂条包括衣物条、皂条、组合条(combo bar)、合成洗涤剂条以及洗涤剂条。条的类型通常区别在于它们含有的表面活性剂的类型，并且术语洗衣皂条包括含有来自脂肪酸的皂和/或合成皂的那些。洗衣皂条具有在室温下为固体而非液体、凝胶或粉末的物理形式。术语固体被定义为不随时间显著变化的物理形式，即如果固体物体(例如洗衣皂条)被放置在容器里，该固体物体不会为了填充其被放置的容器而发生改变。该条是固体时典型地是条的形式但也可能是其他的固体形状例如圆形或椭圆。

该洗衣皂条可以含有一个或多个另外的酶、蛋白酶抑制剂例如肽醛类(或次硫酸盐加合物或半缩醛加合物)、硼酸、硼酸盐、硼砂和/或苯基硼酸衍生物例如4-甲酸基本硼酸、一个或多个皂或合成的表面活性剂、多元醇例如甘油、pH控制化合物例如脂肪酸、柠檬酸、乙酸和/或甲酸、和/或一价阳离子和有机阴离子的盐，其中该一价阳离子可以是例如Na⁺、K⁺或NH₄ ⁺并且该有机阴离子可以是例如甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐或乳酸盐，这样使得该一价阳离子和有机阴离子的盐可以是例如甲酸钠。

洗衣皂条还可以包含络合剂像EDTA和HEDP，香料和/或不同类型的填充剂，表面活性剂例如阴离子型合成表面活性剂，助洗剂，聚合的污垢释放剂，洗涤剂螯合剂，稳定剂，填充剂，染料，着色剂，染料转移抑制剂，烷氧基化的聚碳酸酯，抑泡剂，结构剂，粘合剂，浸出剂，漂白活化剂，粘土去污剂，抗再沉积剂，聚合分散剂，增白剂，织物柔软剂，香料和/或本领域已知的其他化合物。

洗衣皂条可以在常规的洗衣皂条制造设备中进行加工，例如但不限制于：混合器、压条机例如双级真空压条机、挤出机、切割机、标识压模机(logo-stamper)、冷却隧道以及包装机。本发明不局限于通过任何单一方法制备洗衣皂条。可以在过程的不同阶段向皂中添加本发明的预混料。例如，可以制备含有皂、本发明的细菌培养物、任选地一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂以及一价阳离子和有机阴离子的盐的预混料并且然后将该混合物压条。可以同时添加作为例如处于液态的蛋白酶抑制剂的本发明的细菌培养物以及任选的另外的酶。除了混合步骤和压条步骤以外，该过程还可以进一步包含研磨、挤出、切割、压模、冷却和/或包装的步骤。

共颗粒中细菌的配制

这些细菌培养物可以被配制为颗粒，例如，配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度造成的培养物的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com公开内容IPCOM000200739D中。

通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中，其涉及包含以下各项的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)少于10wt沸石(无水基底)；和(c)少于10wt磷酸盐(无水基底)，其中所述酶共颗粒包含从10wt％至98wt％的水分汇组分，并且该组合物另外还包含从20wt％至80wt％的洗涤剂水分汇组分。WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面的方法，优选地织物表面，该方法包括以下步骤：(i)将所述表面与在含水洗涤液中如在此要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触，(ii)漂洗和/或干燥该表面。

该多酶共颗粒可以包含本发明的细菌培养物和(a)选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：首次洗涤脂肪酶、清洁纤维素酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、脂氧合酶、漆酶及其混合物；和(b)选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：半纤维素酶、蛋白酶、护理纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶酸裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质酶、普鲁兰酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣聚糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、玻璃酸酶、软骨素酶、淀粉酶、及其混合物。

测定和洗涤剂组合物

洗涤剂组合物

可以将以下提及的洗涤剂组合物结合本发明的细菌培养物一起使用。

Biotex黑(液体)

5％-15％的阴离子型表面活性剂、<5％非离子型表面活性剂、香料、酶、DMDM和乙内酰脲。

标准洗涤剂B的组成

成分：7％LAS、3％AEOS/SLES、6.6％NI、5.5％皂(所有的百分数都是w/w)

碧浪Actilift组合物(液体)

成分：5％-15％阴离子表面活性剂；<5％非离子型表面活性剂、磷酸盐、皂；酶、光学增亮剂、苯并异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、香料、α-异甲基紫罗兰酮、香茅醇、香叶醇、芳樟醇。

碧浪灵敏性白色与彩色衣物洗涤剂组合物、液体洗涤剂组合物

成分：水、酒精乙氧基硫酸盐、醇乙氧基化物、氨基氧化物、柠檬酸、C12-18拔顶棕榈仁脂肪酸、蛋白酶、糖苷酶、淀粉酶、乙醇、1,2丙二醇、甲酸钠、氯化钙、氢氧化钠、有机硅乳液、跨硫酸EHDQ(这些成分以递减次序列出)。

碧浪Actilift彩色&风格组合物(液体)

成分：5％-15％阴离子表面活性剂；<5％非离子型表面活性剂、磷酸盐、皂；酶、香料、苯并异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、α-异甲基紫罗兰酮、丁苯基甲基丙醛、香茅醇、香叶醇、芳樟醇。

宝莹小&强大洗涤剂组合物(液体)

成分：15％-30％阴离子表面活性剂、非离子型表面活性剂、5％-15％皂、<5％聚羧酸盐、香料、磷酸盐、光学增亮剂

宝莹2合1与舒适西番莲粉末

硫酸钠、碳酸钠、十二烷基苯磺酸钠、膨润土、碳酸钠过氧化物、硅酸钠、沸石、水、柠檬酸、TAED、C12-15Pareth-7、硬脂酸、香精、丙烯酸钠/MA共聚物、纤维素胶、所修饰的玉米淀粉、氯化钠、羟乙磷酸四钠、EDTMP钙钠、苯胺吗啉三嗪基-氨基苯磺酸二钠、碳酸氢钠、苯丙基乙基聚甲基硅氧烷、丁苯基甲基丙醛、甘油硬脂酸酯、碳酸钙、聚丙烯酸钠、α-异甲基紫罗兰酮、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、纤维素、蛋白酶、柠檬烯、PEG-75、二氧化钛、糊精、蔗糖、聚芳基磺酸钠、CI 12490、CI 45100、CI 42090、硫代硫酸钠、CI 61585。

宝莹生物粉末

蔗糖、山梨醇、硅酸铝、聚甲醛三聚氰胺、聚芳基磺酸钠、CI 61585、CI 45100、脂肪酶、淀粉酶、黄胞胶、羟丙基甲基纤维素、CI 12490、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、硫代硫酸钠、CI 42090、甘露聚糖酶、CI 11680、羟乙磷酸、EDTA四钠。

Fairy非生物制品组合物(液体)

成分：15％-30％阴离子表面活性剂、5％-15％非离子表面活性剂、皂、苯并异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、香料

标准洗涤剂T组合物(粉末)

成分：11％LAS、2％AS/AEOS、2％皂、3％AEO、15.15％碳酸钠、3％硅酸钠、18.75％沸石、0.15％螯合剂、2％柠檬酸钠、1.65％AA/MA共聚物、2.5％CMC和0.5％SRP(所有的百分数都是w/w)。

标准洗涤剂X组合物(粉末)

成分：16.5％LAS、15％沸石、12％二硅酸钠、20％碳酸钠、1％sokalan、35.5％硫酸钠(所有的百分数都是w/w)。

嘉盛液体，原版：

成分：水、醇乙氧基硫酸盐、二乙二醇、醇乙氧化物、乙醇胺、直链烷基苯磺酸盐、脂肪酸钠、聚乙烯亚胺乙氧基化物、柠檬酸、硼砂、枯烯磺酸钠、丙二醇、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、二丙乙基四氨、氢氧化钠、甲酸钠、甲酸钙、二甲硅油、淀粉酶、蛋白酶、Liquitint^TM、氢化蓖麻油、香料。

汰渍液体，原版：

成分：直链烷基苯磺酸酯、丙二醇、柠檬酸、氢氧化钠、硼砂、乙醇胺、乙醇、醇硫酸盐、聚乙烯亚胺乙氧基化物、脂肪酸钠、乙氧基硫酸二季铵盐、蛋白酶、二乙二醇、月桂醇聚醚-9、烷基二甲胺氧化物、香料、淀粉酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、DTPA、甲酸钠、甲酸钙、聚乙二醇4000、甘露聚糖酶、Liquitint^TM蓝、二甲硅油。

汰渍冷水液体，清香型：

水、醇乙氧基硫酸酯、直链烷基苯磺酸酯、二乙二醇、丙二醇、乙醇胺、柠檬酸、硼砂、醇硫酸盐、氢氧化钠、聚乙烯亚胺、乙氧基化物、脂肪酸钠、乙醇、蛋白酶、月桂醇聚醚-9、乙氧基硫酸二季铵盐、月桂基胺氧化物、异丙苯钠、磺酸盐、香料、DTPA、淀粉酶、二钠、二氨基二苯乙烯、二磺酸盐、甲酸钠、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、甲酸钙、聚乙二醇4000、甘露聚糖酶、果胶酶、Liquitint^TM蓝、二甲硅油

液体汰渍加漂白剂Alternative^TM，生动白与鲜艳、原版以及清洁微风：

水、醇乙氧基硫酸钠、烷基硫酸钠、MEA柠檬酸、线形烷基苯磺酸酯、MEA盐、丙二醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、乙醇、脂肪酸钠、乙醇胺、月桂基胺氧化物、硼砂、月桂醇聚醚-9、DTPA、枯烯磺酸钠、甲酸钠、甲酸钙、线形烷基苯磺酸酯、钠盐、醇硫酸盐、氢氧化钠、乙氧基硫酸二季铵盐、香料、淀粉酶、蛋白酶、甘露聚糖酶、果胶酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、苯并异噻唑啉酮、Liquitint^TM蓝、二甲硅油、二丙基乙四胺。

汰渍去污笔(Tide to Go)：

去离子水、二丙二醇丁基醚、烷基硫酸钠、过氧化氢、乙醇、硫酸镁、烷基二甲基氧化胺、柠檬酸、氢氧化钠、三甲氧基苯甲酸、香料。

汰渍氧化加强：

碳酸氢钠、碳酸钠、过碳酸钠、醇乙氧化物、氯化钠、马来酸/丙烯酸共聚物、壬酰氧基苯磺酸盐、硫酸钠、着色剂、乙二烯三胺五乙酸钠盐、水合硅铝酸盐(沸石)、聚乙二醇、烷基苯磺酸钠、棕榈酸钠、淀粉、水、香料。

具有Downy阳花的超级汰渍：

水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、直链烷基苯磺酸盐：钠/MEA盐、丙二醇、乙醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺丙氧基乙氧基化物、聚乙烯亚胺乙氧基化物、醇硫酸盐、二甲硅油、香料、硼砂、脂肪酸钠、DTPA、蛋白酶、亚硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、淀粉酶、蓖麻油、甲酸钙、MEA、苯乙烯丙烯酯共聚物、丙铵丙酰胺、葡聚糖酶、甲酸钠、Liquitint^TM蓝。

汰渍生动白+鲜艳，原版：

碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、过碳酸钠、壬酰氧基苯酚酯磺酸、烷基硫酸盐、水、硅酸盐、聚丙烯酸钠乙氧基化物、聚乙二醇4000、香料、DTPA、棕榈酸、蛋白酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、硅胶、FD&C蓝1、纤维素酶、烷基醚硫酸盐。

HEY SPORT纺织品洗涤剂

水、十二烷基苯磺酸、月桂醇聚醚-11、peg-75羊毛脂、丙二醇、改性醇、大豆油酸钾、氢氧化钾、椰油两性二乙酸二钠、乙二胺三乙椰子烷基酰胺、香精、蓖麻醇酸锌、氯化钠、苯并异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、ci 16255、苯甲醇。

命名为汰渍、碧浪、嘉盛和Fairy的产品是由宝洁公司(Procter&Gamble)提供的可商购产品。命名为宝莹的产品是由联合利华和汉高公司(Unilever and Henkel)提供的可商购产品。命名为Hey Sport的产品是由Hey Sport提供的可商购产品。

织物柔软剂

可以将以下提及的织物柔软剂结合本发明的细菌培养物一起使用。

超级液体-四月清新

水、二乙基酯二甲基氯化铵、香料、淀粉、氯化铵、氯化钙、甲酸、聚二甲基硅氧烷、Liquitint^TM、苯并异噻唑啉酮、乙二烯三胺五乙酸盐(钠盐)。

介质和溶液

基本盐培养液(MSB)的制备

溶液A的制备

使用142g/L的磷酸氢二钠(西格玛公司(Sigma)#30435-500g，批次SZBE0760V)制备磷酸氢二钠溶液(1M)。使用136g/L的磷酸二氢钾(赛默飞世尔科技公司(Fisher)#P285-3，批次110377)制备磷酸二氢钾溶液(1M)。这些溶液的混合物的制备是通过将700mL的1M的磷酸氢二钠溶液与300mL的1M的磷酸二氢钾溶液组合，得到pH＝7.3的溶液。

溶液B的制备：亨特氏浓缩的碱

制备去离子水(700mL)、20g/L次氨基三乙酸(NTA)游离酸(赛默飞世尔科技公司#BP2670-100，批次126106)、14g/L氢氧化钾(赛默飞世尔科技公司#P251-3，批次136256)、59.3g/L硫酸镁七水合物(CAS#10034-99-8)和6.67g/L氯化钙(西格玛公司#C3881，批次088K0060)的溶液。添加另外的氢氧化钾颗粒直至沉淀溶解，此后添加0.0185g/L七钼酸铵四水合物(西格玛公司#M1019-100g，批次SLBD0365V)和0.195g/L硫酸亚铁七水合物(西格玛公司#31，007-7，批次05208KX)。使用10N氢氧化钾将pH调节至6.8。

金属“44”溶液的制备

制备去离子水(800mL)、2.5g乙二胺四乙酸(EDTA)(Acros#118432500，批次A0336458)、10.95g/L硫酸锌(赛默飞世尔科技公司#Z68-500，批次122848A)、5g/L硫酸铁七水合物(II)(西格玛公司#31,007-7，批次05208KX)、1.54g/L硫酸锰(赛默飞世尔科技公司#M113-500，批次121598)、0.392g/L硫酸铜(II)(西格玛公司目录号#451657)、0.250g/L硝酸钴(II)六水合物(西格玛公司目录号239267)和0.177g/L四硼酸钠(西格玛公司#B-9876，批次35H3556)的溶液。使用10N氢氧化钾将pH调节至6.8，此时溶液获得绿色着色。

溶液C的制备

在去离子水中制备20％硫酸铵(赛默飞世尔科技公司#A702-500，批次128025)溶液。

MSB溶液的制备

通过将40mL溶液A、10mL溶液B、和5mL溶液C混合到945mL去离子水中来制备MSB溶液。使用一次性真空灭菌过滤装置(赛默飞世尔科技公司#097403A)对培养基进行灭菌。

Schaffer氏培养基的制备

Schaffer氏培养基是通过混合8g/L营养肉汤、2.0212g/L氯化钾(西格玛公司#P3911)、0.492g/L硫酸镁七水合物、0.236g/L硝酸钙四水合物(马林克罗制药公司(Mallinckrodt)4236，批次#4236T04586)、0.0197g/L氯化锰(II)四水合物(赛默飞世尔科技公司AC20589，批次#955894)和0.000278g/L氧化铁(II，III)(斯特里姆化学品公司(Strem Chemicals)#93-2616，批次#20083200)制备的。使用液体循环将培养基高压灭菌20分钟。将pH在25℃调节至6.9±0.2。

芽孢杆菌孢子的制备

将Schaffer氏培养基(在250mL带挡板的锥形瓶中加入10mL)，用取自Remel平板计数琼脂划线平板的营养细胞的1个菌落接种，并且在30℃以200rpm搅拌7天，在此期间大部分营养细胞形成孢子。样品加热至80℃，持续10分钟，在4℃以12,000rpm离心3分钟，除去水相并用无菌去离子水替代，并以12,000rpm离心3分钟。将此重复三次。通过将900μL磷酸盐缓冲溶液(Weber#3127-29)和100μL孢子溶液混合到1500μL微量离心管(赛默飞世尔科技公司目录号#87003-294)中，对孢子溶液进行连续稀释。在最大设置下将此-1稀释液涡旋10秒。从该溶液中，将100μL进一步稀释到1500μL微量离心管中的900μL磷酸盐缓冲溶液中，并在最大设置(-2稀释)下涡旋10秒。这一直持续到达到-8稀释。获得标准方法琼脂平板(史密斯河生物制品(Smith River Biologicals))，并将100μL上述样品稀释液施加于平板并使用惰性L涂布器(赛默飞世尔科技公司目录号#14-373-76)进行涂布。将平板在23℃下孵育72小时，并手动计数CFU/mL并记录。

微生物营养细胞的制备

将胰蛋白大豆肉汤(10mL)添加到试管中，并用取自Remel平板计数琼脂划线平板的营养细胞的1个菌落接种，并在30℃以200rpm搅拌18小时。通过将900μL磷酸盐缓冲溶液(Weber#3127-29)和100μL微生物溶液混合到1500μL微量离心管(赛默飞世尔科技公司目录号#87003-294)中，对微生物溶液进行连续稀释。在最大设置下将此-1稀释液涡旋10秒。从该溶液中，将100μL进一步稀释到1500μL微量离心管中的900μL磷酸盐缓冲溶液中，并在最大设置(-2稀释)下涡旋10秒。这一直持续到达到-8稀释。获得标准方法琼脂平板(史密斯河生物制品(Smith River Biologicals))，并将100μL上述样品稀释液施加于平板并使用惰性L涂布器(赛默飞世尔科技公司目录号#14-373-76)进行涂布。将平板在23℃下孵育72小时，并手动计数CFU/mL并记录。

测定

测定I：洗涤测定

纺织品洗涤程序

将100毫升23℃的微孔过滤水(密理博公司(Millipore)Simplicity)添加至237mL瓶子(赛默飞世尔科技公司#03-313-15D)，向每个瓶子中添加4.4g/L的B型洗涤剂、0.1％的Lipex^TM 100L(诺维信公司(Novoymes A/S)，在空白处没有使用)、5-5.5×5.5cm的棉布小块布样(WFK测试织物有限公司(WFK Testgewebe)编码10A)和1-5×5cm的CS10小块布样(WFK测试织物有限公司)。将这些瓶子在设置为45°角的手动摇床(伯勒尔(Burrell)型号75)上摇动20分钟，搅拌设置为10。倾析洗涤液，除去布并放入30mL无菌注射器(赛默飞世尔科技公司#14-829-48)中，并将活塞压下22mL(至8mL标记)以排出过量的洗涤液。将所有布从注射器中除去，拉直，并放回原塑料瓶中，其中CS10在最上面。

漂洗和接种纺织品

基本盐培养液(MSB)热平衡至23℃。向含有洗过的棉花和CS10小块布样的237mL瓶中添加基本盐培养液(100mL)、0.1％脂肪酶100L和1mL在胰蛋白大豆肉汤中生长的营养培养物(或如表1中示出的希望浓度的微生物孢子制剂)遵循没有Lipex或微生物添加的相同程序制备空白对照样品以证明在其不存在时缺乏丁酸或己酸形成。将这些瓶子在设置为45°角的手动摇床上摇动20分钟，搅拌设置为10。将MSB溶液倾析并弃去。将布从每一个瓶子取出并放入无菌30mL注射器中，并将活塞压下22mL(至8mL标记)以排出过量的洗涤液。立即将CS10小块布样放入20mL GC小瓶(阿尔法莫斯公司(Alpha MOS)零件号码#202-0050)中，并使用GC卷边盖(阿尔法莫斯公司零件号码#202-0060)卷曲密封。将样品在23℃下孵育并且大约每10小时通过GC/FID(测定II)进行分析。

表1：用于当前工作的孢子浓度

测定II：GC/GID分析

如在此使用的，术语“气相色谱法”或“GC”是指分析型分析技术，其中将样品注射、汽化、使用分离样品的单独组分的载气通过柱。每个组分根据基于其在柱内的保留时间产生特定的峰。保留时间是从柱注入和洗脱之间经过的时间

如在此使用的，术语“火焰电离检测”或“FID”是指一种特定类型的检测方法，其中通过氢焰中有机化合物的燃烧产生离子。元件检测是通过对集电极板进行离子吸引，诱导与还原碳原子的比例相对应的电流来实现的。这与样品中有机化合物的浓度成正比。

如在此使用的，术语“气相色谱/火焰电离检测”或“GC/FID”是指GC和FID的组合，其中样品通过GC用于分离并通过FID用于检测。

GC/FID

使用在聚二甲基硅氧烷(PDMS)固相微提取纤维(SPME纤维(西格玛公司#57299U))上具有女50/30μm二乙烯基苯/carboxen的岛津GC-2010通过气相色谱(GC)分析样品。所使用的柱为内径为0.32且膜厚度为0.25μm的30.0m DB-FFAP(安捷伦公司(Agilent)零件号码#123-3232E，序列号#USB345626H)将数据使用GC解析版本2.40软件处理。

柱设置

GC柱的分析条件如下：柱温度80.0℃，平衡时间0.5分钟，柱加热炉温度程序设置为80℃，1分钟，并且然后以20℃/分钟的速率升高至200℃并在200℃保持4分钟，导致运行时间为11分钟。样品递送使用CTC Analytics CombiPAL自动进样器完成。

FID设置

用于FID的分析条件如下：温度设定为260.0℃，取样速率为80毫秒，补充气体氦气为30毫升/分钟，氢气流速为50.0毫升/分钟，且空气流速为400毫升/分钟。

自动进样器设置

使用了以下自动进样器的设置：SPME循环，纤维注射器，35℃预孵育5分钟，不搅拌，22.0毫米小瓶穿透，5分钟提取时间，54.0毫米注射穿透，10分钟解吸，无纤维烘烤，并且总运行时间为11分钟。

实例

材料与方法

如在此使用的，术语“菌株”或“微生物细胞”或微生物是指表1示出的在当前工作期间使用的微生物。

实例1

生物材料的鉴定，表征和保藏

根据布达佩斯条约，在美国农业部的农业研究机构培养物保藏中心(theAgricultural Research Service Culture Collection)(NRRL)，位于北大学街(NorthUniversity Street)1815号，皮奥瑞亚(Peoria)，伊利诺州，61604，美国，保藏了以下生物材料，并且给出以下登录号：

表1：生物材料的保藏

鉴定	登录号	保藏日期
			蒙氏假单胞菌	NRRL B-50256	2009年2月18日
污斑赖氨酸芽孢杆菌	NRRL-B-67160	2015年12月10日
			枯草芽孢杆菌枯草亚种	NRRL-B-67161	2015年12月10日
枯草芽孢杆菌	NRRL-B-67162	2015年12月10日
			枯草芽孢杆菌	NRRL-B-67163	2015年12月10日
枯草芽孢杆菌	NRRL-B-67164	2015年12月10日

这些菌株被保藏的条件是可确保其被国外专利法决定授权的未定期间可用来得到培养物。所述保藏物为所保藏菌株的基本上纯的培养物。需要按一些国家的国外专利法要求提供保藏物，在这些国家提交该主题申请的副本，或其后续文本。然而应理解，保藏物的可用性不构成将本发明主题用于由政府行为批准的专利权的实践的许可。

实例2

使用营养细胞接种物对丁酸和己酸的微生物减少

引言

脂肪酶可产生令人讨厌的的脂肪酸气味，从而导致脂质降解为短链挥发性脂肪酸。如在测定I中所述的在脂肪酶存在下洗涤和随后漂洗含有脂质的CS10小块布样导致形成丁酸和己酸。施用营养微生物细胞可导致这些酸的减少。

在本实例中，CS10小块布样根据测定I用Lipex^TM和微生物(NRRL B-50256、NRRL B-6760、NRRL B-6762)洗涤。包括CS10的空白样品，其中既不添加脂肪酶也不添加微生物，以证明在脂肪酶和微生物不存在时不产生丁酸和己酸。

表3：营养细胞处理后的丁酸减少百分比，如根据测定II所测量的。

微生物处理后与脂肪酶对照相比丁酸减少百分比

表5：营养细胞处理后的己酸减少百分比，如根据测定II所测量的。

微生物处理后与脂肪酶对照相比己酸减少百分比

结果与讨论

所有被研究的微生物当作为营养细胞施用时都能够减少在洗衣环境中由脂肪酶作用产生的丁酸和己酸水平(表3)。NRRL B50256在21.2小时表现出丁酸减少99.29％，并且研究完成后仍保持74.77％的减少。当用NRRL-B-67160或NRRL-B-67162处理时，丁酸的减少百分比从31.8小时提高到105.9小时，分别达到65.27％和76.48％的最终减少水平。

相对于己酸减少(表5)，NRRL B50256在31.8小时后证明了己酸减少98.43％，并且经105.9小时继续减少87.52％的己酸。NRRL-B-67160实现了经105.9小时减少56.71％的己酸。NRRL-B-67162实现了经105.9小时减少65.5％的己酸。

实例3

使用微生物孢子减少丁酸和己酸

引言

脂肪酶可产生令人讨厌的的脂肪酸气味，从而导致脂质降解为短链挥发性脂肪酸。如在测定I中所述的在脂肪酶存在下洗涤和随后漂洗含有脂质的CS10小块布样导致形成丁酸和己酸。施用萌发成营养细胞的微生物孢子可以导致这些酸的减少。

在本实例中，CS10小块布样根据测定I用脂肪酶(Lipex^TM，可获得自诺维信公司)和微生物孢子(NRRL B-50256、NRRL B-6761、NRRL B-6763、NRRL B-6764)洗涤。包括空白样品(CS10)，其中既不含有脂肪酶也不含有微生物孢子，以证明在脂肪酶和微生物孢子不存在时不产生丁酸和己酸。

表7：孢子处理后的丁酸减少百分比

使用微生物孢子丁酸减少百分比

表9：孢子处理后己酸减少百分比，如根据测定II所测量的。

使用微生物减少的己酸百分比

结果与讨论

几个被研究的微生物当作为孢子施用时都能够减少在洗衣环境中由脂肪酶作用产生的丁酸水平。菌株NRRL B50256在31.77小时后实现了99.74％的丁酸减少，并在84.73小时后继续减少了58.23％。NRRL B-67161没有证明丁酸的持续减少，表明该特性不是所有微生物的特征。NRRL B-67163证明在84.73小时后丁酸减少79.37％。NRRL B-67164在84.73小时后实现了85.06％的丁酸减少(表7)。

相对于己酸减少，NRRL B50256经42.4小时实现了95.66％的减少，并且在84.7小时后继续抑制了83.76％。NRRL B-67161没有证明己酸的持续减少，表明该特性不是所有微生物的特征。NRRL B-67163实现了在84.73小时后减少72.51％。NRRL B-67164经74.1小时实现了84.00％的减少并且在84.7小时保持了82.56％的减少(表9)。

生物材料的保藏

该菌株于下述条件下保藏：确保在本专利申请未决期间，依据该外国专利法律的授权的人能够获得所述培养物。这些保藏物代表所保藏菌株的基本上纯的培养物。需要按一些国家的国外专利法要求提供保藏物，在这些国家提交该主题申请的副本，或其后续文本。然而应理解，保藏物的可用性不构成将本发明主题用于由政府行为批准的专利权的实践的许可。

赖氨酸芽孢杆菌属物种62733是在登录号NRRL-B-67160下保藏的菌株污斑赖氨酸芽孢杆菌的另一个名称。

Claims

1.一种分离的培养物，其特征与选自下组的菌株的特征基本相同，该组由以下组成：

-具有保藏登录号NRRL-B-67164的菌株；

-具有保藏登录号NRRL B-50256的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67163的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67162的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67160的菌株；

-具有保藏登录号NRRL-B-67161的菌株；

-这些保藏菌株之一的后代；或

-这些菌株、突变体、或后代中的两种或更多种的混合物。

2.如权利要求1所述的培养物，其中该培养物具有与这些保藏菌株之一相同的特征。

3.如权利要求1或2所述的培养物，其中该培养物能够减少来自包含一种或多种游离脂肪酸的衣物物品的游离脂肪酸的量。

4.如权利要求3所述的培养物，其中该培养物能够减少一种或多种游离脂肪酸的量，这些游离脂肪酸具有从2至10个碳原子。

5.一种包含一种或多种选自下组的分离的培养物的组合物，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilissubsp.subtilis)、污斑赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus contaminans)或蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)。

6.如权利要求5中所述的组合物，其中该组合物是洗涤剂组合物、清洁组合物或漂洗助剂。

7.如权利要求5或6所述的组合物，其中该组合物包含如权利要求1-4中任一项所述的一种或多种培养物。

8.如权利要求5-7中任一项所述的组合物，其中该组合物以营养培养物、休眠培养物、或孢子培养物存在。

9.如权利要求5-8中任一项所述的组合物，其中该组合物进一步包含一种或多种选自下组的洗涤剂组分，该组由以下组成：表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。

10.如权利要求5-9中任一项所述的组合物，其中该组合物进一步包含选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：淀粉酶、阿拉伯糖酶、糖酶、纤维素酶、角质酶、DNA酶、半乳聚糖酶、脂肪酶、甘露聚糖酶、氧化酶、果胶酶、蛋白酶、以及木聚糖酶。

11.如权利要求10所述的组合物，其中该组合物包含脂肪酶。

12.如权利要求5-11中任一项所述的组合物，其中该培养物是枯草芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌。

13.如权利要求5-12中任一项所述的组合物，其中当在包含洗涤液的洗涤期间使用或在包含水和任选地漂洗助剂的漂洗期间使用时，用于漂洗的洗涤液或水中的每种培养物的浓度在1 x 10⁴至1 x 10¹²个细菌细胞/100mL的范围内，或该浓度优选地在1 x 10⁴至1 x10¹⁰个细菌细胞/100mL的范围内，在1 x 10⁴至1 x 10⁸个细菌细胞/100mL的范围内或在1 x10⁴至1 x 10⁶个细菌细胞/100mL的范围内。

14.一种或多种分离的培养物用于从包含一种或多种游离脂肪酸的物品防止或减少游离脂肪酸的量的用途，其中该培养物是芽孢杆菌属(Bacillus)，赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus)或假单胞菌属(Pseudomonas)的菌株。

15.如权利要求14所述的用途，其中该培养物是选自下组物种的菌株，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌枯草亚种、污斑赖氨酸芽孢杆菌或蒙氏假单胞菌。

16.如权利要求15所述的用途，其中该培养物是枯草芽孢杆菌。

17.如权利要求14-16中任一项所述的用途，其中该培养物是枯草芽孢杆菌和/或蒙氏假单胞菌。

18.如权利要求15所述的用途，其中该培养物是如权利要求1-4中任一项所述的培养物或如权利要求5-13中任一项所述的组合物。

19.如权利要求14-18中任一项所述的用途，其中该培养物减少这些游离脂肪酸，这些游离脂肪酸具有从2至10个碳原子。

20.如权利要求19所述的用途，其中该游离脂肪酸选自下组，该组由以下组成：乙酸、丁酸、癸酸、己酸、辛酸、庚酸、甲酸、壬酸和戊酸。

21.如权利要求14-20中任一项所述的用途，其中当用测定II测量时，丁酸和/或己酸的量减少至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、或至少90％。

22.如权利要求14-21中任一项所述的用途，其中该培养物在包含洗涤液的洗涤期间使用或在包含水和任选地漂洗助剂的漂洗期间使用。

23.如权利要求14-22中任一项所述的用途，其中用于漂洗的洗涤液或水中的每种培养物的浓度在1 x 10⁴至1 x 10¹²个细菌细胞/100mL的范围内，或该浓度优选地在1 x 10⁴至1x 10¹⁰个细菌细胞/100mL的范围内，或在1 x 10⁴至1 x 10⁸个细菌细胞/100mL的范围内。

24.如权利要求22所述的用途，其中用于漂洗的该洗涤液或水中每种培养物的浓度优选地在1 x 10⁴至1 x 10⁶个细菌细胞/100mL的范围内。

25.如权利要求14-24中任一项所述的用途，其中该物品是纺织品、织物、餐具或硬表面。

26.如权利要求14-25中任一项所述的用途，其中该一种或多种培养物是在洗涤循环或漂洗循环期间使用。

27.一种用于洗涤物品的方法，该方法包含以下步骤：

a.将该物品暴露于洗涤液；

b.完成至少一个洗涤循环；以及

c.任选地用任选包含漂洗助剂的水漂洗该物品，

其中该洗涤液和/或该漂洗水包含一种或多种如权利要求1-4中任一项所述分离的培养物，或如权利要求5-13中任一项所述组合物。

28.如权利要求27所述的方法，其中该物品是纺织品、织物、餐具或硬表面。

29.如权利要求27或28所述的方法，其中该硬表面是洗衣机或自动餐具洗涤机的内部。

30.如权利要求27所述的方法，其中该漂洗助剂是织物柔软剂。

31.如权利要求27-30中任一项所述的方法，其中该洗涤液或该漂洗水中的每种培养物的浓度在1 x 10⁴至1 x 10¹²个细菌细胞/100mL的范围内，或该浓度优选地在1 x 10⁴至1 x10¹⁰个细菌细胞/100mL的范围内，或在1 x 10⁴至1 x 10⁸个细菌细胞/100mL的范围内。

32.如权利要求31所述的方法，其中该洗涤液或漂洗水中培养物的浓度在1 x 10⁴至1 x10⁶个细菌细胞/100mL的范围内。

33.如权利要求27-32中任一项所述的方法，其中该培养物减少来自包含游离脂肪酸的物品的游离脂肪酸的量。

34.如权利要求33所述的方法，其中该培养物减少具有从2至10个碳原子的游离脂肪酸的量。

35.如权利要求34所述的方法，其中该游离脂肪酸选自下组，该组由以下组成：甲酸、乙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸和癸酸。

36.如权利要求27-35中任一项所述的方法，其中当用测定I测量时，丁酸和/或己酸的量减少至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、或至少90％。