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CN108883096A - 脉络膜新生血管抑制剂或玻璃膜疣抑制剂及其评价或筛选方法 - Google Patents

脉络膜新生血管抑制剂或玻璃膜疣抑制剂及其评价或筛选方法 Download PDF

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CN108883096A
CN108883096A CN201680074156.1A CN201680074156A CN108883096A CN 108883096 A CN108883096 A CN 108883096A CN 201680074156 A CN201680074156 A CN 201680074156A CN 108883096 A CN108883096 A CN 108883096A
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acid
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Abstract

CNV的治疗药仅存在利用对症疗法的医药，强烈谋求用于根治的治疗药。另外，不存在干性AMD的治疗药，强烈谋求用于根治干性AMD的治疗药。本发明提供一种脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其含有具有视网膜色素上皮细胞的上皮间质转化抑制活性的化合物作为有效成分。另外，本发明提供一种玻璃膜疣抑制剂，其含有具有视网膜色素上皮细胞的上皮间质转化抑制活性的化合物作为有效成分。

Description

脉络膜新生血管抑制剂或玻璃膜疣抑制剂及其评价或筛选 方法
技术领域
本发明系涉及一种脉络膜的新生血管的预防或治疗用医药。
另外，本发明涉及一种玻璃膜疣抑制剂及这种药剂的评价或筛选方法。
背景技术
脉络膜新生血管(Choroidal Neovascularization；CNV)是在眼底的黄斑部由脉络膜产生新生血管的疾病，该疾病除了可见于老年性黄斑变性(Age-related MacularDegeneration；AMD)以外，也可见于视网膜血管样条纹、病理性近视、眼组织胞浆菌病、外伤后的脉络膜破裂等。
由于脉络膜新生血管脆弱，因此血液成分会渗出，引起视网膜水肿、视网膜下液的潴留。另外，因脆弱的新生血管破裂而出血，会使对视力下降产生影响的障碍加速地进行(非专利文献1)。
例如，对于老年性黄斑变性的脉络膜新生血管，使用阻碍新生血管的抗VEGF药等血管新生抑制剂(非专利文献2)。
AMD是因年龄增加等主要因素使视网膜的黄斑部产生障碍而导致丧失视力的疾病。若AMD发展，则有物体或线状物看起来变形(视物变形症)、变得无法识别颜色、对光变得敏感的情况，而对生活质量(Quality of Life)产生大的影响。并且，若病重，则有视野的一部分欠缺(中心暗点等)，甚至失明的情况(非专利文献3)。
AMD根据特征性的病状而大致分类为湿性AMD(渗出型AMD)与干性AMD(萎缩型AMD)。湿性AMD是以异常的新生血管与该新生血管的破裂为特征的类型。湿性AMD从视网膜色素上皮细胞(Retinal Pigment Epithelium；RPE细胞)下的脉络膜新生血管，从这些脆弱的血管渗出血液成分，而引起视网膜水肿或视网膜下液的潴留。另外，因脆弱的血管破裂而出血，会使对视力下降产生影响的障碍加速地进行(非专利文献1)。
作为AMD的治疗方法，对湿性AMD使用阻碍血管新生的抗VEGF(VascularEndothelial Growth Factor；血管内皮生长因子)药等血管新生抑制剂(非专利文献2)。
另一方面，干性AMD是根据视力、眼底检查结果、图像观察结果、排除标准、重症度分类等标准而进行诊断的疾病(非专利文献4)。现认为一个原因是：由于被称为玻璃膜疣(drusen)的构造物，导致视细胞紊乱(非专利文献5)。有一部分干性AMD有转移为湿性AMD的例子的报道。
[在先技术文献]
[非专利文献]
非专利文献1：岩田英嗣等人(2011)；老年性黄斑变性；现代医学第59卷第1号第133至138页。
非专利文献2：平山真理子等人(2011)；渗出型老年性黄斑变性的抗VEGF治疗；医学进展Vol.236第1165至1167页。
非专利文献3：石田晋等人(2010)；年龄增加与AMD Pharma Medica Vol.28；No.12；第9至12页。
非专利文献4：高桥宽二等人(2015)；萎缩型老年性黄斑变性的诊断标准；日眼会志119；第671至677页。
非专利文献5：安川力(2011)；Seminar 5；老年性黄斑变性(AMD)的前体病变及其症状；Geriatric Medicine Vol.49；No.4；第409至412页。
发明内容
本发明的目的在于提供一种CNV的预防和/或治疗剂。
另外，本发明的目的在于提供一种玻璃膜疣抑制剂。
使用以VEGF为靶的抗体等的新生血管的阻碍是对症疗法，并非对产生VEGF的细胞本身的行为加以抑制或加以改善。另外，对于抗体等生物学制剂而言，治疗期间越长，需要越高的医疗费。并且，对于需要眼内注射的医药而言，侵入性高，对患者的负担大。因此，业界强烈谋求用于根治治疗CNV的、侵入性低且经济的治疗药。
本发明的发明人等为了解决前述课题而进行了努力研究，结果发现，通过特定的非类固醇性抗炎剂(NSAIDs；Nonsteroidal anti-inflammatory agents)、醛糖还原酶抑制剂(aldose reductase inhibitor)、白三烯受体拮抗剂(leukotriene receptorantagonist)、化学介质释放抑制剂(chemical mediator release inhibitor)及血栓素A2受体拮抗剂(thromboxane A2receptor antagonist)抑制视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)的上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition；EMT)，可抑制RPE细胞中的VEGF的表达，能够预防和/或治疗脉络膜新生血管，从而完成了本发明。
即，本发明涉及：
(1)一种脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，含有选自由扎托布洛芬(zaltoprofen)、奥沙普嗪(oxaprozin)、泰普菲酸(tiaprofenic acid)、氟芬那酸(flufenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、舒林酸(sulindac)、依帕司他(epalrestat)、扎鲁司特(zafirlukast)、氨来呫诺(amlexanox)、塞曲司特(seratrodast)及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种作为有效成分；
(2)如前述(1)所记载的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，是口服剂；
(3)如前述(1)或(2)所记载的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，前述脉络膜新生血管在老年性黄斑变性、息肉状脉络膜血管病变(PCV；polypoidal choroidalvasculopathy)、或视网膜血管瘤样增生(RAP；retinal angiomatous proliferation)中产生。
另外，在本发明中，期待可通过抑制玻璃膜疣而改善干性AMD的视野歪曲等症状。然而，尚无干性AMD的有效治疗药，业界强烈谋求用于根治干性AMD的治疗药。
本发明的发明人等为了解决前述课题而进行了努力研究，结果获得了如下的新见解：玻璃膜疣是由RPE细胞引起上皮间质转化的情况所引起的构造体。基于该见解，本发明的发明人等发现：能够简便地在RPE细胞中诱导EMT；能够在RPE细胞中再现玻璃膜疣；对能够抑制RPE细胞中的EMT的EMT抑制化合物进行评价或筛选，这些化合物能够抑制RPE细胞中的玻璃膜疣；从而完成了本发明。
即，本发明涉及：
(4)一种玻璃膜疣抑制剂，含有具有视网膜色素上皮细胞的上皮间质转化抑制活性的化合物作为有效成分；
(5)如前述(4)所记载的玻璃膜疣抑制剂，其中，具有前述上皮间质转化抑制活性的化合物是对前述细胞中的间质系标记(mesenchymal marker)或细胞外基质(ECM；extracellular matrix)的表达进行抑制的药剂；
(6)如前述(5)所记载的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述间质系标记为选自由Snail、Slug、钙黏蛋白3(cadherin 3)、MMP1(matrix metalloproteinase 1；基质金属蛋白酶1)及MMP7(matrix metalloproteinase 7；基质金属蛋白酶7)所组成的组中的至少1种；和/或前述细胞外基质为选自由COL5A3(Collagen Type V Alpha 3 Chain)、COL6A3(CollagenType VI Alpha 3Chain)、LAMC2、HMMR(Hyaluronan Mediated Motility Receptor；透明质酸介导运动因子受体)及TNC(thymic nurse cell；胸腺保育细胞)所组成的组中的至少1种；
(7)如前述(4)至(6)中任一项所记载的玻璃膜疣抑制剂，其中，具有前述上皮间质转化抑制活性的化合物为非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂和/或血栓素A2受体拮抗剂；
(8)如前述(7)所记载的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述非类固醇性抗炎剂为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、布洛芬、氟比洛芬及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述醛糖还原酶抑制剂为依帕司他和/或其药学上可容许的盐；前述白三烯受体拮抗剂为选自由扎鲁司特(zafirlukast)、孟鲁司特(montelukast)、普仑司特(pranlukast)及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述化学介质释放抑制剂为氨来呫诺和/或其药学上可容许的盐；和/或前述血栓素A2受体拮抗剂为塞曲司特和/或其药学上可容许的盐。
另外，本发明涉及：
(9)一种老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，含有丙酸系非类固醇性抗炎剂、氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂、芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂、或血栓素A2受体拮抗剂作为有效成；该醛糖还原酶为依帕司他和/或其药学上可容许的盐；
(10)如前述(9)所记载的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述丙酸系非类固醇性抗炎剂为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、布洛芬(ibuprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂为选自由氟芬那酸、甲芬那酸及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂为舒林酸和/或其药学上可容许的盐；前述白三烯受体拮抗剂为选自由扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；和/或前述化学介质释放抑制剂为氨来呫诺和/或其药学上可容许的盐；前述血栓素A2受体拮抗剂为塞曲司特和/或其药学上可容许的盐。
另外，本发明涉及：
(11)一种老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，是将血管新生抑制剂与前述(4)至(8)中任一项所记载的玻璃膜疣抑制剂组合而成的。
另外，本发明系涉及：
(12)一种玻璃膜疣抑制剂的评价或筛选方法，包括：在活体外(in vitro)，在被验药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞中的上皮间质转化的抑制。
另外，本发明涉及：
(13)一种玻璃膜疣抑制剂的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被验药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞的集块(focus)的抑制。
另外，本发明涉及：
(14)一种老年性黄斑变性预防和/或治疗药的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被验药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞中的上皮间质转化的抑制。
另外，本发明涉及：
(15)一种老年性黄斑变性预防和/或治疗药的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被验药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞的集块的抑制。
由于本发明的化合物可通过抑制RPE细胞的EMT而抑制VEGF的表达，因此可用作脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂。并且，本发明作为医药品具有足够的安全性。
另外，从另一观点出发，根据本发明，能够使用EMT抑制化合物而有效地抑制玻璃膜疣。
附图说明
图1是表示根据EMT标记分子的表达变化来验证RPE细胞中的EMT诱导的结果的图表。
图2是表示根据经时性的EMT标记表达变化来验证RPE细胞中的EMT诱导的结果的图。
图3是表示奥沙普嗪抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图4是表示依帕司他抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图5是表示扎鲁司特抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图6是表示氨来呫诺抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图7是表示扎托布洛芬抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图8是表示氟芬那酸铝抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图9是表示甲芬那酸抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图10是表示舒林酸抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图11是表示泰普菲酸抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图12是表示塞曲司特抑制RPE细胞的EMT的情况的图表。
图13是表示验证奥沙普嗪对RPE细胞的VEGF及EMT标记的表达量所产生的影响的结果的图表。
图14是表示验证依帕司他对RPE细胞的VEGF及EMT标记的表达量所产生的影响的结果的图表。
图15是表示验证扎托布洛芬对RPE细胞的VEGF及EMT标记的表达量所产生的影响的结果的图表。
图16是表示验证依托度酸(etodolac)对RPE细胞的VEGF及EMT标记的表达量所产生的影响的结果的图表。
图17是表示验证吲哚美辛(indometacin)对RPE细胞的VEGF及EMT标记的表达量所产生的影响的结果的图表。
图18是表示验证氟芬那酸铝对RPE细胞的VEGF及EMT标记的表达量所产生的影响的结果的图表。
图19是表示验证甲芬那酸对RPE细胞的VEGF及EMT标记的表达量所产生的影响的结果的图表。
图20是表示验证塞曲司特对RPE细胞的VEGF及EMT标记的表达量所产生的影响的结果的图表。
图21是表示通过激光诱导纤维化试验来验证扎托布洛芬的CNV抑制效果的结果的图表。
图22是表示通过激光诱导纤维化试验来验证扎托布洛芬的CNV抑制效果的结果的荧光眼底照片。
图23是表示通过激光诱导纤维化试验来验证扎托布洛芬的EMT抑制效果的结果的图表。
图24是表示通过激光诱导纤维化试验来验证扎托布洛芬的EMT抑制效果的结果的荧光显微镜照片。
图25是表示通过激光诱导纤维化试验来验证扎托布洛芬的EMT抑制效果的结果的荧光显微镜照片。
图26是将表示AMD患者玻璃膜疣中的RPE细胞的形态的染色照片与表示健康者的RPE细胞的形态的染色照片进行比较的图。
图27是将表示AMD患者玻璃膜疣中的RPE细胞的上皮系标记的染色性的免疫染色照片与表示健康者的RPE细胞的上皮系标记的染色性的免疫染色照片进行比较的图。
图28是将表示AMD患者玻璃膜疣中的RPE细胞的间质系标记的染色性的免疫染色照片与表示健康者的RPE细胞的间质系标记的染色性的免疫染色照片进行比较的图。
图29是将表示AMD模型动物的RPE细胞的上皮系标记及间质系标记的染色性的免疫染色照片与表示健康模型动物的RPE细胞的上皮系标记及间质系标记的染色性的免疫染色照片进行比较的图。
图30是表示通过运动能力的亢进来验证RPE细胞中的EMT诱导的结果的图表及照片。
图31是表示通过玻璃膜疣样构造体的形成来验证RPE细胞中的EMT诱导的结果的照片。
图32是表示在RPE细胞的EMT诱导模型中利用EMT抑制化合物来抑制运动能力的亢进的情况的图表。
图33是表示在RPE细胞的EMT诱导模型中利用EMT抑制化合物来抑制运动能力的亢进的情况的图表。
图34是表示在RPE细胞的EMT诱导模型中利用EMT抑制化合物来抑制运动能力的亢进的情况的图表。
图35是表示EMT抑制化合物在RPE细胞的EMT诱导模型中抑制玻璃膜疣样构造体的情况的照片。
图36是表示EMT抑制化合物在RPE细胞的EMT诱导模型中抑制玻璃膜疣样构造体的情况的照片。
图37是表示EMT抑制化合物在RPE细胞的EMT诱导模型中抑制玻璃膜疣样构造体的情况的照片。
图38是表示EMT抑制化合物在RPE细胞的EMT诱导模型中抑制玻璃膜疣样构造体的情况的照片。
图39是表示EMT抑制化合物在RPE细胞的EMT诱导模型中抑制玻璃膜疣样构造体的情况的照片。
图40是表示用于评价玻璃膜疣抑制的活体内(in vivo)模型试验中的玻璃膜疣样构造体的诱导结果的照片。
图41是表示诱导得到的玻璃膜疣样构造体中的E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的染色结果的照片。
图42是表示诱导得到的玻璃膜疣样构造体中的细胞角蛋白(Cytokeratin)的染色结果的照片。
图43是表示诱导得到的玻璃膜疣样构造体中的纤维连接蛋白(Fibronectin)的染色结果的照片。
图44是表示诱导得到的玻璃膜疣样构造体中的波形蛋白(Vimentin)的染色结果的照片。
图45是通过HE染色(hematoxylin-eosin staining；苏木精－伊红染色)来表示奥沙普嗪对形成玻璃膜疣样构造体的药理评价的照片。
图46是通过E-钙黏蛋白的免疫染色来表示奥沙普嗪对形成玻璃膜疣样构造体的药理评价的照片。
图47是通过纤维连接蛋白的免疫染色来表示奥沙普嗪对形成玻璃膜疣样构造体的药理评价的照片。
图48是通过HE染色来表示依帕司他对形成玻璃膜疣样构造体的药理评价的照片。
图49是通过E-钙黏蛋白的免疫染色来表示依帕司他对形成玻璃膜疣样构造体的药理评价的照片。
图50是通过纤维连接蛋白的免疫染色来表示依帕司他对形成玻璃膜疣样构造体的药理评价的照片。
图51是通过HE染色来表示扎托布洛芬对形成玻璃膜疣样构造体的药理评价的照片。
图52是通过E-钙黏蛋白的免疫染色来表示扎托布洛芬对形成玻璃膜疣样构造体的药理评价的照片。
图53是通过纤维连接蛋白的免疫染色来表示扎托布洛芬对形成玻璃膜疣样构造体的药理评价的照片。
具体实施方式
以下，对本发明进行详细说明。
[脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂]
本发明的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂含有选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种作为有效成分。
在本说明书中，所谓“脉络膜新生血管(CNV)”是指新的血管从眼底的脉络膜产生、增生和/或扩展。虽然并不受限定，但从脉络膜产生的新生血管通过布鲁赫膜(Bruchmembrane)和/或视网膜色素上皮细胞所存在的层而扩展。CNV可通过公知的方法进行检査。虽然并不受限定，但CNV例如可通过使用荧光素(fluorescein)等荧光色素的眼底血管造影法来进行检査。
在本说明书中，所谓“视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)”是指存在于眼的视网膜下的单层的立方上皮细胞。
本发明的发明人等推测RPE细胞中的上皮间质转化(EMT)为CNV的主因。在本说明书中，所谓“上皮间质转化(EMT)”是指在上皮细胞中失去上皮性的性状而变得获得间质系的性状的现象。通过解除上皮细胞中的细胞间粘附，细胞的形态发生变化，而获得运动能力。作为上皮细胞表达的上皮系标记的表达受到抑制，间质系标记的表达或细胞外基质(ECM)的分泌变得亢进(在本说明书中，也将上皮系标记、间质系标记和/或ECM称为EMT标记)。
本发明的发明人等对于CNV的产生建立以下的假说，并进行了验证。本发明的发明人等发现，若通过某种外部刺激而在RPE细胞中产生EMT，则RPE细胞会发生变性而产生玻璃膜疣。认为在形成玻璃膜疣的过程中从布鲁赫膜剥离的RPE细胞由于从布鲁赫膜正下方的脉络膜毛细管板供给氧与营养被阻断，因此由于局部的低氧状态而使VEGF或一部分的MMPs(matrix metalloproteinases；基质金属蛋白酶)的分泌亢进。另外，认为即使未达到形成玻璃膜疣的情况下，在RPE细胞中也会产生EMT，由此使自RPE细胞的间质系标记及细胞外基质的分泌亢进，并且VEGF及一部分的MMPs的分泌亢进。通过这些MMPs，在布鲁赫膜产生分解及穿孔，通过VEGF，诱导自脉络膜的血管新生。
由于新生血管脆弱，因此容易引起血液的漏出。另外，若因脆弱的新生血管的破裂而产生视网膜下出血，则会急剧地引起视力下降，而导致失明。
作为与CNV相关的疾病(ICD10：国际疾病分类第10版(2003年修改))，例如可例举：老年性黄斑变性、渗出型老年性黄斑变性、玻璃膜疣、渗出性视网膜炎、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、渗出性视网膜病变、中心性浆液性脉络膜视网膜病变、中心性浆液性脉络膜病变、出血性视网膜色素上皮脱离、增生性玻璃体视网膜病变、增生性视网膜病变、浆液性视网膜色素上皮脱离、特发性脉络膜新生血管、视网膜水肿、视网膜血管新生、视网膜血管瘤样增生(RAP)、视网膜血管病变、萎缩型老年性黄斑变性、血管新生性黄斑病变、软性玻璃膜疣、近视性脉络膜新生血管、黄斑变性、黄斑病、黄斑部血管异位、黄斑病变等。
作为针对这些疾病的功能效果，例如可例举伴有中央凹下脉络膜新生血管的老年性黄斑变性。
另外，作为与CNV相关的疾病(标准病名ICD10)，例如可例举：近视性脉络膜新生血管、特发性脉络膜新生血管等。
作为针对这些疾病的功能效果，例如可例举病理性近视的脉络膜新生血管。
另外，作为与CNV相关的疾病(标准病名ICD10)，例如可例举：糖尿病黄斑水肿、1型糖尿病性黄斑水肿、1型糖尿病黄斑病变、2型糖尿病性黄斑水肿、2型糖尿病黄斑病变、糖尿病黄斑病变等。
作为针对这些疾病的功能效果，例如可例举糖尿病黄斑水肿。
另外，作为与CNV相关的疾病(标准病名ICD10)，例如可例举：由视网膜静脉阻塞症引起的黄斑水肿、视网膜中央静脉栓塞症、视网膜中央静脉血栓症、视网膜中央静脉阻塞症、由视网膜中央静脉阻塞症引起的黄斑水肿、视网膜静脉血栓症、视网膜静脉阻塞症等。
作为针对这些疾病的功能效果，例如可例举视网膜静脉阻塞症所伴随的黄斑水肿。
作为老年性黄斑变性(AMD)的分类，除了干性AMD与湿性AMD的大致划分以外，还报道有初期AMD、中期AMD或后期AMD的分类，非进行性AMD或进行性AMD的分类等。虽然并无限定，但作为湿性AMD的特殊型，有视网膜血管瘤样增生(RAP)。
虽然并无限定，CNV中的新生血管有在布鲁赫膜或RPE细胞的上方向各种方向扩展的情形，也有如息肉状脉络膜血管病变(polypoidal choroidal vasculopathy：PCV)这样在RPE细胞下形成息肉状的新生血管的情形。
渗出型AMD已知有伴有包含中央凹下的CNV的病情。这种AMD有时被分为典型AMD、PCV或RAP这3种病型，可各自选择初次治疗。
在本说明书中，只要是产生CNV的视网膜疾病，则不论为基于何种分类的疾病，均成为预防和/或治疗的对象。
在AMD的分类中，尤其是湿性AMD(渗出型AMD)经由漏血或湿润化，在中央凹下产生CNV，由于在该CNV周围多见视网膜下出血，因此，与CNV的相关性强。
若基于这种推测的产生CNV的机制，则扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐分别通过强力地抑制RPE细胞的EMT，而抑制与CNV的发生或扩展相关的VEGF或MMPs等的产生，从而期待能够从根本上预防和/或治疗CNV。
可以通过公知的方法对产生EMT、或EMT得到抑制进行测定或评价。虽然并无限定，例如失去上皮性的性状可通过测定下述的上皮系标记的表达来确认。另外，例如获得间质系的性状可通过测定下述的间质系标记的表达或细胞外基质(ECM)的分泌来确认。基因的表达、蛋白质的表达或分泌可通过微阵列、实时PCR(Polymerase chain reaction；聚合酶链式反应)法、PCR法、蛋白质印迹(western blot)法、ELISA(enzyme-linkedimmunosorbent assay；酶联免疫吸附试验)法、免疫组织染色等公知的方法进行测定。另外，例如运动能力的亢进可通过吉姆萨染色(Giemsa staining)等组织染色、侵袭实验(Invasion Assay)法等公知的方法进行测定。另外，例如细胞的形态变化可通过HE染色等组织染色等公知的方法进行测定。
在本说明书中所谓“预防”是指对于个体防止疾病或症状的发病、延迟疾病的发病、或防止疾病的复发。
在本说明书中所谓“治疗”是指对于个体减轻疾病的症状、使疾病的症状消失、或抑制疾病症状的维持、或抑制症状的进行、病重、恶化或者加重。
在本说明书中，所谓“抑制RPE细胞的EMT”是指抑制失去RPE细胞中的上皮系的性状的情况、抑制获得间质系的性状的情况、或者使所获得的间质系的性状丧失的情况。虽然并无限定，例如在RPE细胞中，可通过检测维持上皮系标记的表达的情况、抑制间质系标记的表达的情况、抑制ECM的表达和/或分泌的情况、或抑制运动能力的亢进的情况，而对RPE细胞的EMT抑制进行评价。
具有RPE细胞的EMT抑制活性的化合物(在本说明书中也称为EMT抑制化合物)包括已知在上皮细胞中对EMT具有抑制活性的化合物。EMT抑制化合物包括非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂及血栓素A2受体拮抗剂；就发挥出显著的EMT抑制效果的观点而言，可使用扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特或它们药学上可容许的盐。就血－视网膜屏障(BRB；Blood retinal barrier)的透过性的观点而言，EMT抑制化合物优选为与脂溶性等BRB透过性相关的因子优异的化合物。虽然并无限定，但脂溶性高的化合物由于BRB透过性优异，因此即使在不直接送达眼的经口给药等的情况下，也可期待对视网膜疾病的高预防、高治疗效果。另外，就根据症状而能够长期给药的观点而言，EMT抑制化合物优选为副作用少的化合物。作为副作用，虽然并无限定，可例举：食欲不振、腹泻、口炎、消化不良、胃炎、搔痒感、肝功能异常等。就这些BRB透过性和/或副作用的观点而言，优选为扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特或它们药学上可容许的盐。这些成分可通过公知的方法进行合成而使用，也可购买市售品而使用。
在本说明书中，“药学上可容许的盐”并无特别限制，具体而言，可例举：有机酸盐、无机酸盐、有机碱、或无机碱。作为有机酸盐，例如可例示：乙酸盐、三氟乙酸盐、丁酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐等单羧酸盐；富马酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、丙二酸盐等多元羧酸盐；乳酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐等羟基羧酸盐；甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等有机磺酸盐。作为无机酸盐，例如可例示：盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐。作为与有机碱的盐，例如可例示：与甲胺(methylamine)、三乙胺、三乙醇胺、二乙醇胺、吗啉、哌嗪、吡咯烷、三吡啶、甲基吡啶、乙二胺等有机胺的盐。作为与无机碱的盐，例如可例举：铵盐；与钠或钾等碱金属、钙或镁等碱土金属、铝等金属的盐等各种盐。这些盐可单独使用1种，也可将2种以上任意地组合而使用。“药学上所容许的盐”也可包含盐的溶剂合物或水合物。
本发明的发明人等发现，选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种显著地抑制间质系标记或细胞外基质(ECM)的表达。
在本说明书中，间质系标记并无限定，可使用公知的间质系标记，例如可例举：Snail(SNAI1)、Slug(SNAI2)、MMP1(基质金属蛋白酶1)、MMP7(基质金属蛋白酶7)、MMP2(基质金属蛋白酶2)、MMP3(基质金属蛋白酶3)、MMP9(基质金属蛋白酶9)、N-钙黏蛋白(CDH2)、CDH3、ZEB1、ZEB2(SIP1)、α-SMA(Alpha-Smooth Muscle Actin；α-平滑肌肌动蛋白)、波形蛋白(VIM)、FSP-1(Fibroblast-Specific Protein-1；成纤维细胞特异性蛋白-1)、β-链蛋白(β-catenin)、OB-钙黏蛋白、α5β1整联蛋白(α5β1integrin)、多配体聚醣1(Syndecan-1)、ETS(E-twenty six)、Twist1、Goosecoid、LEF-1(lymphoid enhancer factor-1；淋巴增强因子-1)、FOXC2(Forkhead box protein C2；叉头框蛋白C2)、miR10b、miR21、RDX(Radixin；根蛋白)、RHOA(ras homolog gene family,member A；ras同源基因家族成员A)、TJP1(Tight Junction Protein 1；紧密连接蛋白1)、CTNNB1、HAS2(hyaluronan synthase 2；透明质酸合成酶2)、SERPINE1(Plasminogen activator inhibitor1；纤溶酶原激活物抑制剂1)、MSN(Moesin；膜突蛋白)、TCF3(transcription factor 3；转录因子3)、ITGAV(IntegrinSubunit Alpha V；整联蛋白亚基αV)等。为了评价EMT抑制，这些间质系标记可使用1种，也可组合使用。
由于能够有效地评价RPE细胞中的EMT抑制，因此间质系标记优选为选自由Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7、MMP3、ZEB2、CDH2及VIM所组成的组中的至少1种，更优选为选自由Snail、Slug、CDH3、MMP1及MMP7所组成的组中的至少1种。
在本说明书中，ECM并无限定，可使用公知的ECM作为标记，例如可例举：5α3型胶原蛋白(COL5A3)、COL6A3、层粘连蛋白γ2(LAMC2)、透明质酸介导运动因子受体(Hyaluronan-Mediated Motility Receptor，HMMR)、肌腱蛋白C(TNC)、纤维连接蛋白1(FN1)、COL1A1、COL1A2、COL5A1、COL5A2、COL11A2、COL13A1、COL16A1、COL27A1、硫酸软骨素蛋白多醣4(CSPG4；Chondroitin Sulfate Proteoglycan 4)、层粘连蛋白β3(LAMB3)、丝甘蛋白聚糖(SRGN；serglycin)、SPARC(Secreted Protein Acidic and Rich in Cysteine；富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白)等。为了评价EMT抑制，这些ECM可使用1种作为标记，也可组合使用。
由于能够有效地评价RPE细胞中的EMT抑制，因此ECM优选为选自由COL5A3、COL6A3、层粘连蛋白γ2(LAMC2)、透明质酸介导运动因子受体(HMMR)、肌腱蛋白C(TNC)、COL1A1、COL1A2、SRGN、FN1、COL5A2、COL13A1及LAMB3所组成的组中的至少1种；更优选为选自由COL5A3、COL6A3、层粘连蛋白γ2(LAMC2)、透明质酸介导运动因子受体(HMMR)及肌腱蛋白C(TNC)所组成的组中的至少1种。
另外，在本说明书中，上皮系标记并无限定，可使用公知的上皮系标记，例如可例举：ID1、ID2、MUC1、细胞角蛋白18(KRT18；Keratin 18)、THBS1(thrombospondin 1；血小板反应蛋白1)、VIL2(villin 2)、E-钙黏蛋白(CDH1)等。这些上皮系标记可使用1种，也可组合使用。
在本说明书中，作为EMT抑制化合物，除了扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特或它们药学上可容许的盐以外，还可包含已知在上皮细胞中对EMT具有抑制活性的化合物或成分。虽然并无限定，例如可例举：阿立塞替(Alisertib)、MK-0457(陶扎色替(Tozasertib))、PHA-739358(达鲁舍替(danusertib))、AMG-900、巴拉塞替(Barasertib)、CYC116、MLN8054、贝加灵(Baicalin)、黄芩素(Baicalein)、羽扇豆醇(Lupeol)、Istanbulin A(9a-羟基-3,4a,5-三甲基-4,5,6,7,8a,9-六氢苯并[f][1]苯并呋喃-2,8-二酮)、植醇(Phytol)、二氟二苯基甲酮(EF24)、Crucmin、间苯三酚(Phloroglucinol)、白花丹素(Plumbagin)、雷帕霉素(Rapamycin)、FK506(他克莫司(Tacrolimus))、沙利度胺(Thalidomide)、LY550410、SB-505124、SD-208、TAPI-0、TAPI-1、JNJ-38877605、PF-04217903、AG1478(Tyrphostin)、埃罗替尼(Erlotinib)、吉非替尼(Gefitinib)、拉帕替尼(Lapatinib)、PD153035、PD158780、WHI-P154、BMS-536924、A83-01、D4476、LY-364947、SB-431542、SD-208、AZD6244(司美替尼(Selumetinib))、CI-1040、PD0325901、GDC-0941(Pictilisib(4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉))、PI-103、PIK-90、ZSTK474、API-2、AZD0530(塞卡替尼(Saracatinib))、PP1、2-羟基桂皮醛(2-Hydroxycinnamaldehyde)、5-氮杂-dC(5-aza-dC)、BI 5700、塞来昔布(Celecoxib)、CX-4945(Silmitasertib(5-[(3-氯苯基)氨基]苯并[c][2,6]萘啶-8-羧酸))、双硫仑(Disulfiram)、甲磺酸艾日布林(Eribulin mesyate)、吴茱萸碱(Evodiamine)、EW-7203、法舒地尔(Fasudil)、尼达尼布(Nintedanib)、扶正化瘀方(Fuzheng Huayu recipe)、葡萄籽原花青素(Grape seed proanthocyanidins)、伏立诺他(Vorinostat)、除莠霉素(Herbimycin)A、恩替诺特(Entinostat)、和厚朴酚(Honokiol)、NPI-0052、甲烯土霉素(Methacycline)、达沙替尼(Dasatinib)、Ki26894、NSC 74859、NVP-LDE-225(Erismodegib(索尼吉布))、帕布昔利布(Palbociclib)、松属素(Pinocembrin)、丹酚酸(SalvianolicAcid)B、索拉非尼(Sorafenib)、白藜芦醇(Resveratrol)、S-烯丙基半胱氨酸(S-Allylcysteine)、水飞蓟宾葡甲胺(Silibinin meglumine)、辛伐他汀(Simvastatin)、森可曼(Centchroman)、ML327、GN-25、曲古柳菌素(Trichostatin)A、萨拉西诺甙(Sarasinoside)A1、帕比司他(Panobinostat)、达努塞替(Danusertib)、半胱氨酸C(Cystatin C)、百里醌(Thymoquinone)、乌司他丁(Ulinastatin)、Dendrofalconerol A(DF-A)、人参皂苷(ginsenoside)(人参皂角苷(ginseng saponin))、南蛇藤籽萃取物、水杨苷(西洋白柳萃取物)、水杨酸、窃衣萃取物、蛇床子素、马斯卡丁葡萄皮萃取物、通心络(Tongxinluo)、原矢车菊素C1(桂皮)、睡茄根萃取物(Withania somnifera rootextract)、清胰化积方(Qingyihuaji)、玫瑰茄萃取物、表没食子儿茶素没食子酸酯、原花青素(葡萄籽萃取物)、丹参酚酸B等。
[渗出型老年性黄斑变性预防和/或治疗剂]
湿性AMD所使用的现有的血管新生抑制剂由于是以使用抗体的医药为中心，因此存在治疗费用变得昂贵的问题。尤其在湿性AMD的治疗中，若中止给药，则会再次发生血管新生，失明的危险性会变高。通过使用本发明，能够抑制血管新生抑制剂的用量、给药间隔、给药次数，可期待医疗经济上的效果。通过本发明，对于抑制RPE细胞中的EMT的情况，可期待阻止干性AMD向湿性AMD转移，或者也可期待湿性AMD的根治。通过本发明，由于能够抑制RPE细胞中的EMT，因此也可将本发明用作VEGF产生抑制剂或VEGF表达抑制剂。
[EMT诱导模型]
本发明的发明人等开发出通过包括对上皮性细胞赋予刺激的工序的方法，而在活体外诱导EMT的模型。通过使用EMT诱导模型，能够评价各种上皮性细胞中由EMT所产生的影响。另外，能够评价和/或筛选在各种上皮性细胞中药剂是否抑制EMT。
上皮性细胞只要是公知的上皮性细胞，则无特别限制，就评价由EMT所产生的影响的观点而言，上皮性细胞优选使用RPE细胞，更优选使用人RPE细胞，进一步优选使用作为RPE细胞株的ARPE-19。使用这种RPE细胞的EMT诱导模型可在基因表达、蛋白质的分泌、运动能力、集块形成等方面评价EMT。
对上皮性细胞赋予的刺激可例举利用药物所产生的刺激、利用机械操作所产生的刺激、利用电气操作所产生的刺激等，并无特别限制，就可显著地诱导EMT的观点而言，优选为包括使药物接触细胞的刺激。作为前述药物，并无限定，优选为选自由细胞因子、生长因子及趋化因子所组成的组中的至少1种。
作为刺激所使用的细胞因子，可使用公知的物质，例如可例举：白细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-16、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)等。就可显著地诱导EMT的观点而言，细胞因子优选为选自由IL-1β、IL-6、INF-γ及TNF-α所组成的组中的至少1种，更优选为选自由IL-1β、IL-6及TNF-α所组成的组中的至少1种，进一步优选为IL-1β和/或TNF-α。细胞因子可单独使用，也可组合使用。
作为刺激所使用的生长因子，可使用公知的物质，例如可例举：转化生长因子(TGF-β；Transforming growth factor-β)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growthfactors；FGFs)、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor；HGF)、上皮细胞生长因子(epidermal growth factor；EGF)、血小板衍生生长因子(platelet-derived growthfactor；PDGF)等。就可显著地诱导EMT的观点而言，生长因子优选为选自由TGF-β、EGF及FGFs所组成的组中的至少1种，更优选为TGF-β和/或EGF。生长因子可单独使用，也可组合使用。
作为刺激所使用的趋化因子，可使用公知的物质，例如可例举：IL-8、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α；macrophage inflammatory protein 1-alpha)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1；monocyte chemoattractant protein 1)、RANTES(regulated on activationnormal T cell expressed and secreted；调节激活正常T细胞表达分泌因子)、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)等。就可显著地诱导EMT的观点而言，趋化因子优选为选自由MIP-1α、MCP-1及RANTES所组成的组中的至少1种，更优选为MIP-1α和/或MCP-1。趋化因子可单独使用，也可组合使用。
前述刺激例如可将选自由IL-1β、IL-6、INF-γ及TNF-α所组成的组中的至少1种细胞因子、选自由TGF-β、EGF及FGFs所组成的组中的至少1种生长因子及选自由MIP-1α、MCP-1及RANTES所组成的组中的至少1种趋化因子组合而使用。
刺激时的细胞因子、生长因子、或趋化因子的浓度可通过上皮性细胞的种类、细胞的状态、细胞因子等的种类等而适当调节，例如优选为1ng/mL以上，更优选为5ng/mL以上；进一步优选为10ng/mL以上，特别优选为15ng/mL以上，最优选为20ng/mL以上。另外，细胞因子、生长因子、或趋化因子的浓度优选为1μg/mL以下，更优选为700ng/mL以下，进一步优选为500ng/mL以下，特别优选为200ng/mL以下，最优选为100ng/mL以下。另外，细胞因子、生长因子、或趋化因子的浓度优选为1ng/mL至1μg/mL，更优选为5ng/mL至700ng/mL，进一步优选为10ng/mL至500ng/mL，特别优选为15ng/mL至200ng/mL，最优选为20ng/mL至100ng/mL。
虽然并无限定，但在细胞因子为IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、或IL-16的情况下，细胞因子的浓度优选为1ng/mL至1μg/mL，更优选为5ng/mL至700ng/mL，进一步优选为10ng/mL至500ng/mL，特别优选为15ng/mL至200ng/mL，最优选为20ng/mL至100ng/mL。
另外，虽然并无限定，但在细胞因子或趋化因子为INF-γ、TNF-α、MIP-1α的情况下，其浓度优选为10ng/mL至1μg/mL，更优选为20ng/mL至800ng/mL，进一步优选为30ng/mL至700ng/mL，特别优选为40ng/mL至600ng/mL，最优选为50ng/mL至500ng/mL。
另外，虽然并无限定，但在生长因子为TGF-β、EGF的情况下，生长因子的浓度优选为1ng/mL至200ng/mL，更优选为2ng/mL至100ng/mL，进一步优选为3ng/mL至50ng/mL，特别优选为4ng/mL至600ng/mL，最优选为5ng/mL至25ng/mL。
刺激时的反应时间可通过上皮性细胞的种类、细胞的状态、细胞因子等的种类等而适当调节，例如可设为至少5分钟以上，就在EMT中失去上皮性的性状而获得间质性的性状的观点而言，优选设为至少10分钟以上，更优选设为至少1小时以上，进一步优选设为至少10小时以上，特别优选设为至少24小时以上，最优选设为至少48小时以上。另外，刺激时的反应时间可设为例如120小时以内，就在EMT中失去上皮性的性状而获得间质性的性状的观点而言，优选设为108小时以内，更优选设为96小时以内，进一步优选设为84小时以内，特别优选设为72小时以内，最优选设为60小时以内。另外，刺激时的反应时间可设为例如5分钟至120小时，就在EMT中失去上皮性的性状而获得间质性的性状的观点而言，优选设为10分钟至108小时，更优选设为1小时至96小时，进一步优选设为10小时至84小时，特别优选设为24小时至72小时，最优选设为48小时至60小时。
刺激时的反应温度可通过上皮性细胞的种类、细胞的状态、细胞因子等的种类等而适当调节，例如可设为4℃至50℃，优选为10℃至45℃，更优选为20℃至40℃，进一步优选为30℃至37℃。
评价是否对细胞诱导了EMT的方法，并无限定，可例举：测定对上皮性细胞刺激前和/或后的选自由上皮系标记、间质系标记及ECM所组成的组中的至少1种的表达(分泌)；观察细胞的形态变化；或测定细胞的运动能力的变化。虽然并无限定，但若对RPE细胞诱导EMT，则会确认到上皮系标记受到抑制的间质系标记亢进、运动能力亢进和/或细胞形态变形为纺锤状，细胞彼此凝集而形成玻璃膜疣样构造体(Focus)等现象。
基因的表达或蛋白质的表达或分泌可通过微阵列、实时PCR法、PCR法、蛋白质印迹法、ELISA法、免疫组织染色等公知的方法进行测定。运动能力的变化可通过吉姆萨染色等组织染色、侵袭实验法等公知的方法进行测定。另外，例如细胞的形态变化可通过HE染色等组织染色等公知的方法进行测定。
[CNV抑制的评价]
可使用EMT诱导模型，在活体外评价CNV的抑制。即，在对RPE细胞诱导EMT后，对药剂的存在下与非存在下的VEGF的表达量进行比较，由此可评价因药剂抑制RPE细胞中的VEGF的表达而产生的CNV抑制。关于EMT的状态的测定，例如可例举测定选自由上皮系标记、间质系标记及ECM所组成的组中的至少1种的表达(分泌)。若RPE细胞中的EMT受到抑制，则间质系标记和/或ECM受到抑制。EMT标记或VEGF的表达例如可通过mRNA(messengerribonucleic acid；信使核糖核酸)的表达量进行评价。
从细胞提取RNA的步骤可使用公知的RNA提取方法。优选使用市售的RNA提取试剂盒等。
对mRNA的表达进行定量分析的步骤并无限定，优选使用实时PCR法。作为通过实时PCR法测定的EMT标记，可使用前述的上皮系标记、间质系标记、ECM等EMT标记；就使用可再现性良好地通过实时PCR法进行测定的EMT标记的观点而言，作为上皮系标记，优选为ID1、ID2、MUC1、细胞角蛋白18(KRT18)、THBS1、VIL2、E-钙黏蛋白(CDH1)，更优选为MUC1、细胞角蛋白18(KRT18)、E-钙黏蛋白(CDH1)。作为间质系标记，优选为Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7、MMP3、ZEB2、CDH2、波形蛋白，更优选为Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7、波形蛋白。另外，作为ECM，就使用可再现性良好地通过实时PCR法进行测定的EMT标记的观点而言，优选为COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC、COL1A1、COL1A2、CSPG4、SRGN、FN1、VIM、COL5A2、COL13A1、LAMB3，更优选为COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC、FN1。
[玻璃膜疣抑制剂]
本发明的玻璃膜疣抑制剂含有具有视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)的上皮间质转化(EMT)抑制活性的化合物作为有效成分。
在本说明书中，所谓“玻璃膜疣”是指对于健康的老年人也可见的随着年龄增加变化而存在于RPE细胞下方或RPE细胞周边的沉积物。在组织学上是RPE细胞的基底膜与布鲁赫膜之间的胶原纤维层中的多形性物质的沉积，构成成分为细胞器等细胞成分、细胞膜样残渣物、非酯化胆固醇、补体、RPE细胞的分泌物等。形成玻璃膜疣的黄斑部的沉积物在电子显微镜下有存在于RPE细胞的基底膜内侧的基底膜沉积物(basal laminar deposit)与存在于外侧的基底线沉积物(basal linear deposit)。
一种说法认为，对于人类而言，玻璃膜疣根据眼底镜检查结果可分类为硬性玻璃膜疣(63μm以下)与软性玻璃膜疣(63μm以上)。软性玻璃膜疣若发生融合则称为融合性玻璃膜疣(confluent drusen)，玻璃膜疣融合、扩大而发生视网膜色素上皮脱离(PED；pigmentepithelium detachment)的情况被称为玻璃膜疣性PED(Drusenoid PED)。另外，近年来报道了被分类为另外一种玻璃膜疣的假性玻璃膜疣(pseudodrusen)会影响预后(prognosis)，因此在临床上是重要的。在本说明书中，“玻璃膜疣”除了包括硬性玻璃膜疣、软性玻璃膜疣以外，还包括假性玻璃膜疣等与玻璃膜疣类似的沉积物或构造物。
日本的AMD的诊断基准包括作为前体病变的软性玻璃膜疣(63μm以上)与RPE细胞异常。以往并不知晓玻璃膜疣的形成机制，难以于根本上进行预防或治疗。在完成本发明时，本发明的发明人等获得了如下的新见解：玻璃膜疣是由于RPE细胞引起EMT而产生的构造体。
本发明的发明人等预测：以RPE细胞为首的上皮细胞会因老化、UV(Ultra Violet；紫外线)光等外部刺激而使其性状发生变化，而获得保有细胞外基质的分泌亢进、运动能力的获得等的性状(将其称为间质性的性状)。由此强烈地推测：玻璃膜疣是由于在黄斑部产生的视网膜色素上皮细胞的性状转换而生成的。
因此，发明者等使用视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)，根据细胞发生性状转换的情况，而确认获得保有细胞外基质的分泌亢进、运动能力的获得等的性状，而且最终形成由细胞成分与其分泌物所构成的等同于玻璃膜疣的集块(也称为“Focus”)，在验证其发生机制的同时，获得了在相同过程中生成的该玻璃膜疣样构造体(集块(Focus))与生物体中产生的玻璃膜疣同等的确证。
在本说明书中，所谓“玻璃膜疣抑制”是指减少所形成的玻璃膜疣的数量或者分解所形成的玻璃膜疣，或者缩小所形成的玻璃膜疣的大小(可根据直径、面积、体积等而适宜地规定)或者防止增大，也包括防止形成新的玻璃膜疣。虽然并无限定，但在减少所形成的玻璃膜疣的数量的情况下，例如与不利用药剂进行处理的对照相比，玻璃膜疣的数量至少减少5％以上，优选为10％以上，进一步优选为20％以上，特别优选为30％以上，最优选为40％以上。玻璃膜疣的数量可通过公知的方法进行评价，例如可使用眼底照片。另外，虽然并无限定，但在缩小所形成的玻璃膜疣的大小或者防止增大的情况下，例如与不利用药剂进行处理的对照相比，至少玻璃膜疣的大小不变化，优选为缩小5％以上，更优选为缩小10％以上，进一步优选为缩小20％以上，特别优选为缩小30％以上，最优选为缩小40％以上。玻璃膜疣的大小可通过公知的方法进行评价，例如可使用眼底照片、频域光学相干断层扫描计(SD-OCT)检查结果、利用荧光素或靛氰绿(indocyanine green)等所进行的荧光眼底造影等。另外，虽然并无限定，在防止形成新的玻璃膜疣的情况下，例如与不利用药剂进行处理的对照相比，防止形成至少5％以上的新的玻璃膜疣，优选为10％以上，进一步优选为20％以上，特别优选为30％以上，最优选为40％以上。新的玻璃膜疣的形成可通过公知的方法进行评价，例如可使用眼底照片、荧光眼底造影等。玻璃膜疣抑制的评价方法只要能够进行恰当的评价，则无特别限定，优选由玻璃膜疣的数量、厚度、体积进行综合评价。
玻璃膜疣的形成与AMD病情的发展、即视野或视力的降低相关。一种说法报道有由于视网膜上的玻璃膜疣的数量增加以及各个玻璃膜疣的形成进行、大小增大，而导致干性AMD的病情发展，从而观察到地图状萎缩等症状。另外，伴随玻璃膜疣的生成，在玻璃膜疣下的脉络膜产生新生血管，可看到湿性AMD特征性的视网膜水肿、视网膜下液的潴留。有报告称，该新生血管脆弱，若发生破裂，则有AMD从干性AMD转移为湿性AMD的病例。
另外，已知作为新生血管的诱导因子的VEGF(vascular endothelial growthfactor；血管内皮生长因子)及作为VEGF受体的VEGFR(血管内皮生长因子受体)在细胞产生EMT时表达会亢进，但基于作为干性AMD病情的玻璃膜疣形成是由EMT引起的这样的新见解，推测在干性AMD中若产生玻璃膜疣也会诱发血管新生。
因此，认为抑制玻璃膜疣除了预防、治疗干性AMD以外，也关系到预防、治疗湿性AMD，还关系到预防、治疗转移至湿性AMD的前阶段的干性AMD的血管新生。
另外，本发明的发明人等建立了如下假说：AMD的病情发展得非常缓慢的情况的原因之一在于新生成的玻璃膜疣与被分解(抑制)的玻璃膜疣的平衡。以下，具体地进行说明。即使为健康者，也会因年龄增加变化而生成玻璃膜疣，由于分解(抑制)占优势，因此在保持这种平衡关系的期间，AMD的病情不易发展。然而，若该平衡关系失衡，玻璃膜疣的生成比分解(抑制)占优势，则玻璃膜疣缓慢地残存，AMD的病情发展。本发明的发明人等推测对该平衡关系强烈地产生影响的主要因素是EMT。即，对于健康者，由于EMT受到抑制，因此RPE细胞维持原本的上皮性的性状，但若因年龄增加或外部刺激等而导致EMT的亢进占优势，则RPE细胞会失去上皮性的性状而变得具有间质系的性状。如后述的实施例中所示，在获得了间质系的性状的RPE细胞中，作为玻璃膜疣的构成要素的胶原蛋白等ECM的生成亢进。另一方面，在生物体中，这些ECM虽然被分解酶MMP(matrix metalloproteinases)分解，但由于EMT的亢进而抑制MMP的活性的TIMP(tissue inhibitors of metalloproteinases；金属蛋白酶组织抑制剂)的表达也亢进。通过抑制MMP的活性，ECM不被分解，而抑制玻璃膜疣的分解。结果因EMT的亢进，玻璃膜疣亢进，导致AMD发展。
另外，通过抑制EMT，而抑制作为玻璃膜疣的构成要素的胶原蛋白等ECM的表达，另外抑制TIMP的表达，因此显著地表达出MMP等的活性，而促进ECM的分解。结果玻璃膜疣的生成受到抑制，而抑制AMD的发展，并且可期待由玻璃膜疣的显著分解所引起的AMD的治愈。本发明的发明人等推测，在生物体中，因EMT亢进，由TIMP引起的抑制机构发挥作用，使玻璃膜疣的生成变得占优势，AMD的病情缓慢地发展。
基于这种推测的AMD发展的机制，可通过利用外部因子抑制EMT，而抑制与间质系的性状相关的因子的过度表达，和/或使生物体的玻璃膜疣分解的机构充分地发挥作用，而改善玻璃膜疣的生成与分解的平衡关系。本发明的发明人等确立了能够再现生物体的玻璃膜疣的细胞模型，使用该细胞模型对抑制EMT的化合物进行评价、筛选，也验证了利用该化合物是否会抑制玻璃膜疣。
作为AMD的分类，除了干性AMD与湿性AMD的大致划分以外，还报道有初期AMD、中期AMD或后期AMD的分类、非进行性AMD或进行性AMD的分类等。在本说明书中，只要是与玻璃膜疣发病、加重相关的AMD，则无论为何种分类均成为预防和/或治疗的对象。
初期AMD、中期AMD或后期AMD的分类是由NIH(National Institutes of Health；美国国立卫生研究院)所提倡的(参照NIH Eligibility Categories：A Randomized，Placebo-Controlled，Clinical Trial of High-Dose Supplementation With VitaminsC and E，Beta Carotene，and Zinc for Age-Related Macular Degeneration andVision Loss Arch Ophthalmol.2001October；119(10)：1417-1436)。该分类根据一只眼中的玻璃膜疣的尺寸(Drusen Size)、玻璃膜疣的区域(Drusen Area)、色素异常(PigmentAbnormalities)及另一只眼的症状，将AMD的类别分为无AMD(1类)、初期AMD(2类)、中期AMD(3a类、3b类)、后期AMD(4a类、4b类)。
无AMD(1类)是指在一只眼中无玻璃膜疣或玻璃膜疣的尺寸较小(小于63μm)，在玻璃膜疣的区域内为小于直径125μm的圆(5个至15个玻璃膜疣)，无色素异常，且在另一只眼中也为相同的症状。根据该分类，由于即使在无AMD(1类)中也产生玻璃膜疣，因此可成为利用本发明的玻璃膜疣抑制剂的预防和/或治疗的对象。
对于被分类为玻璃膜疣的尺寸及区域进一步增大的症状的初期AMD或中期AMD，推测本发明的玻璃膜疣抑制剂会更有效地使用。
基于玻璃膜疣是由RPE细胞引起EMT而产生的构造体的新见解，而理解通过抑制RPE细胞中的EMT，玻璃膜疣得到抑制。
如前所述，具有RPE细胞的EMT抑制活性的化合物(在本说明书中也称为EMT抑制化合物)包括已知在上皮细胞中具有对EMT的抑制活性的化合物。作为在RPE细胞中抑制EMT的化合物，也包括在本发明中新发现的、使用RPE细胞株的EMT诱导模型而观察到EMT抑制的化合物。
虽然并无限定，EMT抑制化合物可以是抑制间质系标记或细胞外基质(ECM)的表达的药剂。
关于本发明的玻璃膜疣抑制剂，EMT抑制化合物并无限定，可为非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂和/或血栓素A2受体拮抗剂。
非类固醇性抗炎剂(NSAIDs)并无限定，例如可例举：奥沙普嗪、扎托布洛芬、普拉洛芬(pranoprofen)、阿明洛芬(alminoprofen)、苯恶洛芬(benoxaprofen)、柏莫洛芬(bermoprofen)、布氯酸(bucloxic acid)、卡洛芬(carprofen)、布洛芬(ibuprofen)、异丁普生(ibuproxam)、吲哚洛芬(indoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、泰普菲酸、萘普生(naproxen)、氟诺洛芬(flunoxaprofen)、氟比洛芬、氟比洛芬酯(flurbiprofen axetil)、非诺洛芬钙(fenoprofen calcium)、萘普生、吡酮洛芬(Piketoprofen)、吡咯布洛芬(pirprofen)、丙替嗪酸(protizinic acid)、舒洛芬(suprofen)、噻洛芬酸(Tiaprofenicacid)、希莫洛芬(Ximoprofen)、洛索洛芬钠(loxoprofen sodium)等丙酸系NSAIDs；醋氯芬酸(aceclofenac)、阿西美辛(Acemetacin)、阿氯芬酸(Alclofenac)、氨芬酸钠(Amfenacsodium)、哌氨托美丁(Antolmetinguacil)、丁苯羟酸(bufexamac)、桂美辛(Cinmetacin)、氯吡酸(Clopirac)、联苯乙酸(Felbinac)、芬克洛酸(fenclozic acid)、芬替酸(Fentiazac)、葡美辛(glucametacin)、异丁芬酸(ibufenac)、吲哚美辛(Indometacin)、吲哚美辛法呢酯(indomethacin farnesil)、三苯唑酸(isofezolac)、伊索克酸(Isoxepac)、氯那唑酸(Lonazolac)、甲嗪酸(Metiazinic acid)、奥沙美辛(Oxametacin)、吡拉唑酸(pirazolac)、丙谷美辛(proglumetacin)、噻拉米特(Tiaramide)、托美丁(Tolmetin)、托品辛(Tropesin)、佐美酸(Zomepirac)、依托度酸(Etodolac)、双氯芬酸钠(DiclofenacSodium)、舒林酸、萘丁美酮(Nabumetone)、芬布芬(Fenbufen)、马来酸丙谷美辛(Proglumetacin maleate)、莫苯唑酸(Mofezolac)等芳基乙酸系NSAIDs；因法来酸(enfenamic acid)、依托芬那酯(Etofenamate)、氟芬那酸(Flufenamic acid)、异尼辛(Isonixin)、甲氯芬那酸(Meclofenamic acid)、氟芬那酸铝(Flufenamate aluminum)、甲芬那酸、尼氟灭酸(niflumic acid)、他尼氟酯(talniflumate)、特罗芬那酯(Terofenamate)、托芬那酸(Tolfenamic acid)等氨基芳基羧酸系NSAIDs；布马地宗(Bumadizon)、布替布芬(Butibufen)、芬布芬、联苯丁酸(xenbucin)等芳基丁酸系NSAIDs；环氯茚酸(clidanac)、酮咯酸(Ketorolac)、替诺立定(Tinoridine)等芳基羧酸系NSAIDs；醋氨沙洛(acetaminosalol)、贝诺酯(benorylate)、溴水杨醇(Bromosaligenin)、乙酰水杨酸钙、二氟尼柳(Diflunisal)、依特柳酯(Etersalate)、芬度柳(Fendosal)、龙胆酸、乙二醇水杨酸酯、水杨酸咪唑、精氨酸乙酰水杨酸、美沙拉嗪(Mesalazine)、水杨酸吗啉、水杨酸1-萘酯、奥色拉嗪(olsalazine)、帕沙米特(Parsalmide)、乙酰水杨酸苯酯、水杨酸苯酯、乙酰水杨酰胺(salacetamide)、水杨酰胺O-乙酸、水杨酸硫酸酯(salicylsulfuric acid)、双水杨酯、柳氮磺吡啶(Sulfasalazine)等水杨酸系NSAIDs；甲芬那酸、氟芬那酸、托芬那酸等芬那酸系NSAIDs；布可隆(Bucolome)等嘧啶系NSAIDs；安吡昔康(Ampiroxicam)、替诺昔康(Tenoxicam)、吡罗昔康(Piroxicam)、美洛昔康(Meloxicam)、氯诺昔康(Lornoxicam)、屈恶昔康(Droxicam)、伊索昔康(Isoxicam)等昔康系NSAIDs；依匹唑(Epirizole)、二苯酰胺吡唑(Difenamizole)等吡唑系NSAIDs；阿扎丙宗(apazone)、苄哌立隆(benzpiperylone)、非普拉宗(Feprazone)、莫非布宗(Mofebutazone)、吗拉宗(morazone)、羟布宗(Oxyphenbutazone)、保泰松(Phenylbutazone)、哌布宗(Pipebuzone)、异丙安替比林(Propyphenazone)、雷米那酮(Ramifenazone)、琥布宗(Suxibuzone)、噻唑丁炎酮(thiazolinobutazone)等吡唑啉酮系NSAIDs；盐酸噻拉米特、依莫法宗(Emorfazone)等碱性NSAIDs等、或者它们药学上可容许的盐。这些NSAIDs可单独使用1种，也可将2种以上任意地组合而使用。这些NSAIDs可通过公知的方法进行合成而使用，也可购买市售品而使用。
这些NSAIDs中，就发挥出显著的EMT抑制效果的观点而言，优选为丙酸系NSAIDs、氨基芳基羧酸系NSAIDs或芳基乙酸系NSAIDs，更优选为丙酸系NSAIDs、芬那酸系NSAIDs或芳基乙酸系NSAIDs，更优选为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、布洛芬、氟比洛芬、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种，进一步优选为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、氟芬那酸、甲芬那酸及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种。
醛糖还原酶抑制剂并无限定，例如可例举：依帕司他、折那司他(Zenarestat)、司他吉尔(スタチール)、索比尼尔(Sorbinil)等。这些醛糖还原酶抑制剂可单独使用1种，也可将2种以上任意地组合而使用。这些醛糖还原酶抑制剂可通过公知的方法进行合成而使用，也可购买市售品而使用。
这些醛糖还原酶抑制剂中，就发挥出显著的EMT抑制效果的观点而言，优选为依帕司他和/或其药学上可容许的盐。
白三烯受体拮抗剂并无限定，例如可例举：扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特等半胱氨酰白三烯1型(CysLT1；Cysteinyl leukotriene 1)受体的拮抗剂、齐留通(zileuton)等5-脂氧合酶抑制剂等。这些白三烯受体拮抗剂可单独使用1种，也可将2种以上任意地组合而使用。这些白三烯受体拮抗剂可通过公知的方法进行合成而使用，也可购买市售品而使用。
这些白三烯受体拮抗剂中，就发挥出显著的EMT抑制效果的观点而言，优选为扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特等半胱氨酰白三烯1型(CysLT1)受体的拮抗剂，更优选为选自由扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种，进一步优选为扎鲁司特和/或其药学上可容许的盐。
化学介质释放抑制剂并无限定，例如可例举：氨来呫诺、色甘酸钠、吡嘧司特钾、异丁司特(Ibudilast)等。这些化学介质释放抑制剂可单独使用1种，也可将2种以上任意地组合而使用。这些化学介质释放抑制剂可通过公知的方法进行合成而使用，也可购买市售品而使用。
这些化学介质释放抑制剂中，就发挥出显著的EMT抑制效果的观点而言，优选为氨来呫诺和/或其药学上可容许的盐。
血栓素A2拮抗药并无限定，例如可例举血栓素A2受体拮抗药或血栓素A2合成酶抑制药。作为血栓素A2受体拮抗药，例如可例举塞曲司特或雷马曲班(Ramatroban)等，作为血栓素A2合成酶抑制药，例如可例举盐酸奥扎格雷(Ozagrel hydrochloride)等。这些血栓素A2拮抗药可单独使用1种，也可将2种以上任意地组合而使用。这些血栓素A2拮抗药可通过公知的方法进行合成而使用，也可购买市售品而使用。
这些血栓素A2拮抗药中，就发挥出显著的EMT抑制效果的观点而言，优选为塞曲司特和/或其药学上可容许的盐。
[老年性黄斑变性预防和/或治疗剂]
本发明的玻璃膜疣抑制剂主要用作老年性黄斑变性预防和/或治疗剂。作为这种老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，含有丙酸系非类固醇性抗炎剂、氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂、芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂、或血栓素A2受体拮抗剂作为有效成分，前述醛糖还原酶抑制剂可使用依帕司他和/或其药学上可容许的盐。这种有效成分参照[玻璃膜疣抑制剂]的项目中所说明的成分。
[与血管新生抑制剂的并用]
在本发明中，可提供将血管新生抑制剂与本发明的玻璃膜疣抑制剂组合而成的AMD预防和/或治疗剂。
在本说明书中，所谓“血管新生抑制剂”是指具有防止血管新生的效果的药剂、具有防止血管新生加重的效果的药剂、或具有使所形成的新生血管减少或者消失的效果的药剂。作为血管新生抑制剂，并无限定，可例举：抗VEGF抗体或该VEGF抗体的片段(Fab片段、单链可变区片段(scFv)等)、抗VEGF抗体的片段与IgG分子的Fc区域的融合蛋白质、抗血管新生适体(RNA适体等)等。血管新生抑制剂也可使用已上市的公知的血管新生抑制剂，并无限定，例如可例举：贝伐单抗(Avastin(注册商标))、雷珠单抗(Lucentis(注册商标))、阿柏西普(Eylea(注册商标))、哌加他尼钠(Macugen(注册商标))、ESBA-1008、兰帕珠单抗(Lampalizumab)、MC-1101、盐酸多西环素(Doxycycline Hyclate)、爱米司他盐酸盐等。具体而言，可综合考虑患者的症状及状态、所期待的治疗效果等，将前述的EMT抑制化合物与血管新生抑制剂适宜地组合而使用。
关于AMD，已知在所形成的玻璃膜疣下的脉络膜中发生血管新生，推测抑制玻璃膜疣下的血管新生与抑制玻璃膜疣相互作用，而获得优异的AMD的预防、治疗效果。作为在AMD中发生血管新生的分类，可例举湿性AMD、初期和/或中期AMD。关于初期和/或中期AMD，推测除了玻璃膜疣的数量或大小增加以外，还生成脆弱的新生血管。另外，关于干性AMD，推测在产生玻璃膜疣时也会诱发血管新生。由于从该脆弱的新生血管渗出血液成分，或脆弱的血管破裂，向湿性AMD的转移会急速地进行。另外，认为重要的是从会产生微小的脆弱血管的初期AMD开始预防性地进行治疗。因此，在本发明中，玻璃膜疣抑制剂是通过与血管新生抑制剂并用，优选用于湿性AMD的预防和/或治疗，更优选用于中期AMD的预防和/或治疗，进一步优选用于初期和/或中期AMD的预防和/或治疗。
通过将本发明的玻璃膜疣抑制剂用作并用药，能够抑制血管新生抑制剂的用量、给药间隔、给药次数，可期待医疗经济上的效果。
另外，在一个实施方式中，本发明的玻璃膜疣抑制剂可与光动力疗法(PDT)并用而用于治疗。在光动力疗法中，使用选择性地转移至新生血管的维替泊芬(Verteporfin)等药剂，但已知因激光照射，多少会对正常的脉络膜产生伤害。因此，通过降低光动力疗法中的维替泊芬等药剂的用量、或降低激光的照射时间、照射量，并且使用本发明的玻璃膜疣抑制剂，可进行有效的AMD的预防和/或治疗。
另外，在一个实施方式中，本发明的玻璃膜疣抑制剂也可将血管新生抑制剂与光动力疗法适宜地组合而用于AMD的预防和/或治疗。
[EMT诱导模型]的项目中所述的使用RPE细胞的EMT诱导模型由于在基因表达、蛋白质的分泌、运动能力、集块形成等方面显示出与AMD的玻璃膜疣相同的性状，因此可有效地用作AMD的细胞模型。
[被检物质的评价或筛选方法]
可使用前述的EMT诱导模型，在活体外对药剂敏感性进行评价。此外，本发明的EMT诱导模型对于玻璃膜疣抑制剂的评价或筛选有用。
虽然并无限定，但例如可利用RPE细胞的EMT诱导模型，在活体外再现玻璃膜疣，使这种玻璃膜疣样构造体在不同浓度的被验药剂的存在下或非存在下进行接触，测定添加药剂前后的玻璃膜疣样构造体的状态并进行比较，由此进行药剂的评价或筛选。另外，药剂的评价或筛选也可通过如下方式进行：在RPE细胞中，在药剂的存在下或非存在下诱导EMT，测定在药剂的存在下或非存在下的玻璃膜疣样构造体的状态并进行比较。玻璃膜疣样构造体的状态的测定例如可例举：测定选自由上皮系标记、间质系标记及ECM所组成的组中的至少1种的表达(分泌)；观察细胞的形态变化；或测定细胞的运动能力的变化。若RPE细胞中的EMT受到抑制，则确认到间质系标记和/或ECM受到抑制、运动能力受到抑制和/或细胞形态从纺锤状变形为立方状而抑制玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成等现象。
在根据玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成度而进行药剂的评价和/或筛选的情况下，并无限定，可通过包括如下步骤的方法进行：使用EMT诱导模型对RPE细胞诱导EMT、使RPE细胞与被验药剂接触而使其反应、测定细胞的玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成。在一个实施方式中，使用EMT诱导模型对RPE细胞诱导EMT与使RPE细胞与被验药剂接触而使其反应也可同时进行。在一个实施方式中，前述方法也可包括在接触反应后将细胞固定的步骤。
在使RPE细胞与被验药剂接触而使其反应的步骤中，包括将被验药剂的浓度从低浓度至高浓度分阶段地进行反应。被验药剂的浓度可根据药剂的种类等适当地调节，例如可设为0μM(非存在下、非添加时)至500μM，也可为0.1μM至400μM，也可为0.5μM至300μM。
RPE细胞与被验药剂的接触反应时间例如可设为5分钟至120小时，就通过抑制EMT而充分地抑制间质性的性状的观点而言，优选设为10分钟至108小时，更优选设为1小时至96小时，进一步优选设为10小时至84小时，特别优选设为24小时至72小时，最优选设为48小时至60小时。
RPE细胞与被验药剂的接触反应温度可根据药剂的种类等适当地调节，例如可设为4℃至50℃，优选为10℃至45℃，更优选为20℃至40℃，进一步优选为30℃至37℃。
在接触反应后将细胞固定的步骤中，作为细胞的固定方法，可使用公知的方法。虽然并无限定，但例如可使用聚甲醛将细胞固定。
在测定细胞的玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成的步骤中，还可包括对细胞进行染色和/或对玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成率或形成抑制率进行分析。
细胞的染色并无限定，可使用公知的染色法，优选为荧光染色，更优选为利用荧光物质的核染色和/或肌动蛋白染色。作为核染色，例如可例举7-AAD(7-氨基放线菌素D)、吖啶橙(Acridine Orange)、DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole；4',6-二脒基-2-苯基吲哚)、DMAO、溴化乙啶(Ethidium Bromide)、赫斯特染色、碘化丙啶(PI；Propidium Iodide)等，就染色性的观点而言，优选为赫斯特染色。作为肌动蛋白染色，例如优选使用鬼笔环肽(Phalloidin)。
玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成率或形成抑制率的分析例如包括将未添加候选药剂时的玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成状态与添加有特定浓度的候选药剂时的玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成状态图像化，并进行数值化。并且，包括通过将两者的数值数据进行对比而算出玻璃膜疣样构造体(Focus)形成率或形成抑制率。将玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成状态图像化并进行数值化可通过公知的图像化技术、数值化技术而进行，例如可将玻璃膜疣样构造体(Focus)的直径、面积、体积等设为指标，就更准确地进行再现性高的分析的观点而言，优选测定玻璃膜疣样构造体(Focus)的体积并进行数值化，也优选对玻璃膜疣样构造体(Focus)的数量、厚度、体积进行综合评价并进行数值化。
在通过间质系标记和/或ECM的抑制而进行药剂的评价和/或筛选的情况下，并无限定，可通过包括如下步骤的方法进行：使用EMT诱导模型对RPE细胞诱导EMT；使RPE细胞与被验药剂接触而使其反应；在接触反应后从细胞提取RNA；对mRNA的表达进行定量分析。在一个实施方式中，使用EMT诱导模型对RPE细胞诱导EMT与使RPE细胞与被验药剂接触而使其反应也可同时进行。
使用EMT诱导模型对RPE细胞诱导EMT的步骤及使RPE细胞与被验药剂接触而使其反应的步骤参照玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成度的项目。
在接触反应后从细胞提取RNA的步骤可使用公知的RNA提取方法。优选使用市售的RNA提取试剂盒等。
对mRNA的表达进行定量分析的步骤并无限定，优选使用实时PCR法。作为通过实时PCR法进行测定的EMT标记，可使用在前述的玻璃膜疣抑制剂的项目中所说明的间质系标记、ECM等EMT标记，就使用可再现性良好地通过实时PCR法进行测定的EMT标记的观点而言，作为间质系标记，优选为Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7、MMP3、ZEB2、CDH2，更优选为Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7。另外，作为ECM，就使用可再现性良好地通过实时PCR法进行测定的EMT标记的观点而言，优选为COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC、COL1A1、COL1A2、CSPG4、SRGN、FN1、VIM、COL5A2、COL13A1、LAMB3，更优选为COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC。
在通过运动能力的抑制而进行药剂的评价和/或筛选的情况下，并无限定，可通过包括如下步骤的方法进行：使用EMT诱导模型对RPE细胞诱导EMT；使RPE细胞与被验药剂接触而使其反应；在接触反应后回收细胞；使用所回收的细胞进行侵袭实验。在一个实施方式中，使用EMT诱导模型对RPE细胞诱导EMT与使RPE细胞与被验药剂接触而使其反应也可同时进行。
使用EMT诱导模型对RPE细胞诱导EMT的步骤及使RPE细胞与被验药剂接触而使其反应的步骤参照玻璃膜疣样构造体(Focus)的形成度的项目。
接触反应后的细胞可通过公知的方法进行回收，并使用市售的侵袭实验试剂盒等而进行运动能力的评价。运动能力的评价可通过对细胞的移动(浸润)进行图像分析和/或对浸润细胞数进行计数而进行。
此处，所评价的被验药剂可为已知的具有上皮间质转化抑制活性的化合物，另外也可为尚未知具有上皮间质转化抑制活性的化合物。并且，也可为新合成的化合物。
[制剂等]
本发明根据需要与添加剂一并制剂化为适合给药的剂型。例如，可以作为适合口服给药的剂型即片剂、胶囊剂、糖浆剂、细粒剂、颗粒剂、散剂、或丸剂的形式提供。本发明还可以作为适合非口服给药的剂型即注射剂、眼科用剂或贴剂的形式提供。本发明除了这些制剂以外，还可以作为经药物递输系统化的制剂的形式提供。
使用本发明的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂、或玻璃膜疣抑制剂时的用量根据对象疾病的种类、患者的年龄、体重、适应症状及其剂型等而异，例如为注射剂的情况下，成人可以1天1次至数次每天将约1mg至约1000mg以1次或分数次进行给药，在口服给药的情况下，通常成人可以1天1次至数次每天将0.01mg至10000mg、优选为0.1mg至5000mg、更优选为0.5mg至2500mg以1次或分数次进行给药，在注射剂的情况下，通常对于成人可将0.0001mg至2000mg以1次或分数次进行给药。另外，在滴眼剂或插入剂的情况下，可将0.000001％(w/v)至10％(w/v)、优选为0.00001％(w/v)至1％(w/v)、更优选为0.0001％(w/v)至0.1％(w/v)的有效成分浓度的药剂以1天1次或数次进行给药。并且，在贴剂的情况下，对于成人可贴附含有0.0001mg至2000mg的贴剂。
在本说明书中，所谓“Cmax”是指给药间隔内所获得的药剂的血浆峰值浓度。若为现有的药剂，则可根据药剂的interview form或随附文书而求出。Cmax是在给药后约1小时至约48小时、约1小时至约20小时、约1小时至约18小时、约1小时至约16小时、约1小时至约12小时、约1小时至约10小时、约1小时至约8小时、约1小时至约6小时、或约1小时至约4小时产生。
虽然并无限定，关于使用扎托布洛芬作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为25mg至360mg，更优选设为50mg至300mg，进一步优选设为70mg至260mg，特别优选设为80mg至240mg，最优选设为80mg。另外，在单次使用的情况下，关于扎托布洛芬的用量，可将1天量设为80mg至160mg。关于扎托布洛芬的用量，可将1天最高量设为240mg。在扎托布洛芬的情况下，Cmax为20.4μM(“日本药局方扎托布洛芬片非类固醇性镇痛·消炎剂Soluirubin(注册商标)片80”医药品interview form、2012年4月(修订第4版)、单次给药时)。扎托布洛芬的用量优选为产生约20.4μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。另外，扎托布洛芬的Cmax根据配合的添加物的种类等可以为16.8μM(“非类固醇性镇痛·消炎剂Soleton片(注册商标)80日本药局方扎托布洛芬片”医药品interview form、2015年8月修订(第6版)、单次给药时)。此情况下，扎托布洛芬的用量优选为产生约16.8μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，扎托布洛芬的1天量可设为240mg至360mg、240mg至300mg、240mg至260mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，扎托布洛芬的1天量可设为120mg至360mg、120mg至300mg、120mg至260mg、120mg至240mg、120mg至220mg、120mg至200mg、120mg至180mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，扎托布洛芬的1天量可设为60mg至360mg、60mg至300mg、60mg至260mg、60mg至240mg、60mg至200mg、60mg至160mg、60mg至120mg、60mg至80mg。前述的给药优选为利用注射剂或口服的给药。通过产生前述的血液浓度，可期待扎托布洛芬透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
虽然并无限定，关于使用奥沙普嗪作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为100mg至700mg，更优选设为200mg至600mg，进一步优选设为300mg至500mg，特别优选设为400mg。药物血浆峰值浓度(Cmax)是通过公知的方法算出的，奥沙普嗪的情况下，Cmax为340.9μM(“持续性消炎·镇痛剂Alvo(注册商标)片100mg Alvo(注册商标)片200mg奥沙普嗪制剂”医药品interview form、2011年11月(新式修订第3版)、反复给药时)。奥沙普嗪的用量优选为产生约340.9μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，奥沙普嗪的1天量可设为400mg至700mg、400mg至600mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，奥沙普嗪的1天量可设为200mg至700mg、200mg至600mg、200mg至500mg、200mg至400mg、200mg至300mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，奥沙普嗪的1天量可设为100mg至700mg、100mg至600mg、100mg至500mg、100mg至400mg、100mg至300mg、100mg至150mg。前述的给药优选为利用注射剂或口服的给药。通过产生前述的血液浓度，可期待奥沙普嗪透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
虽然并无限定，关于使用泰普菲酸作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为60mg至900mg，更优选设为100mg至800mg，进一步优选设为150mg至700mg，特别优选设为200mg至600mg，最优选设为600mg。另外，在单次使用的情况下，关于泰普菲酸的用量，可将1天量设为200mg。关于泰普菲酸的用量，可将1天最高量设为600mg。泰普菲酸的情况下，Cmax为69.15μM(“镇痛·抗炎剂、Surgam(注册商标)片100mg、200mg”医药品interviewform、2014年8月修订(修订第5版)、单次给药时)。泰普菲酸的用量优选为产生约69.15μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，泰普菲酸的1天量可设为600mg至900mg、600mg至800mg、600mg至700mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，泰普菲酸的1天量可设为300mg至900mg、300mg至800mg、300mg至700mg、300mg至600mg、300mg至500mg、300mg至400mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，泰普菲酸的1天量可设为150mg至900mg、150mg至800mg、150mg至700mg、150mg至600mg、150mg至500mg、150mg至400mg、150mg至300mg、150mg至250mg、150mg至200mg。前述的给药优选利用注射剂或口服进行。通过产生前述的血液浓度，可期待泰普菲酸透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
虽然并无限定，关于使用氟芬那酸铝作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为75mg至1250mg，更优选设为150mg至1000mg，进一步优选设为200mg至800mg，特别优选设为250mg至750mg，最优选设为375mg至750mg。另外，在单次使用的情况下，关于氟芬那酸铝的用量，可将1天量设为250mg。关于氟芬那酸铝的用量，可将1天最高量设为750mg。氟芬那酸铝的情况下，Cmax为27.91μM(“非类固醇性消炎·镇痛·退热剂Opyrin(注册商标)片125mg”医药品interview form、2011年12月制作(新式第4版)、单次给药时)。氟芬那酸铝的用量优选为产生约27.91μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，氟芬那酸铝的1天量可设为750mg至1250mg、750mg至1000mg、750mg至800mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，氟芬那酸铝的1天量可设为400mg至1250mg、400mg至1000mg、400mg至800mg、400mg至750mg、400mg至500mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，氟芬那酸铝的1天量可设为200mg至1250mg、200mg至1000mg、200mg至800mg、200mg至500mg、200mg至400mg、200mg至300mg、200mg至250mg。前述的给药优选利用注射剂或口服进行。通过产生前述的血液浓度，可期待氟芬那酸铝透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
虽然并无限定，关于使用甲芬那酸作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为150mg至2250mg，更优选设为250mg至1800mg，进一步优选设为400mg至1600mg，特别优选设为500mg至1500mg，最优选设为1000mg至1500mg。另外，在单次使用的情况下，关于甲芬那酸的用量，可将1天量设为500mg。关于甲芬那酸的用量，可将1天最高量设为1500mg。甲芬那酸的情况下，Cmax为38.54μM(“镇痛·消炎·退热剂Pontal(注册商标)片250mg”医药品interview form、2015年7月修订(第9版)、单次给药时)。甲芬那酸的用量优选为产生约38.54μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，甲芬那酸的1天量可设为1000mg至2250mg、1000mg至1800mg、1000mg至1600mg、1000mg至1500mg、1000mg至1200mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，甲芬那酸的1天量可设为500mg至2250mg、500mg至1800mg、500mg至1600mg、500mg至1500mg、500mg至1200mg、500mg至1000mg、500mg至800mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，甲芬那酸的1天量可设为150mg至2250mg、250mg至1800mg、250mg至1600mg、250mg至1500mg、250mg至1200mg、250mg至1000mg、250mg至800mg、250mg至500mg、250mg至300mg。前述的给药优选利用注射剂或口服进行。通过产生前述的血液浓度，可期待甲芬那酸透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
虽然并无限定，关于使用舒林酸作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为30mg至500mg，更优选设为100mg至450mg，进一步优选设为200mg至400mg，特别优选设为250mg至350mg，最优选设为300mg。舒林酸的情况下，Cmax为10.10μM(“非类固醇性消炎·镇痛剂Clinoril(注册商标)片50、100”医药品interview form、2011年3月修订(修订第3版)、单次给药时)。舒林酸的用量优选为产生约10.10μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，舒林酸的1天量可设为300mg至500mg、300mg至450mg、300mg至400mg、300mg至350mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，舒林酸的1天量可设为200mg至500mg、200mg至450mg、200mg至400mg、200mg至350mg、200mg至300mg、200mg至250mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，舒林酸的1天量可设为100mg至500mg、100mg至450mg、100mg至400mg、100mg至350mg、100mg至300mg、100mg至250mg、100mg至200mg。前述的给药优选利用注射剂或口服进行。通过产生前述的血液浓度，可期待舒林酸透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
虽然并无限定，关于使用依帕司他作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为10mg至400mg，更优选设为50mg至300mg，进一步优选设为100mg至200mg，特别优选设为150mg。依帕司他的情况下，Cmax为12.2μM(“醛糖还原酶抑制剂日本药局方依帕司他片Kinedak(注册商标)片50mg”医药品interview form、2013年11月修订(第6版)、单次给药时)。依帕司他的用量优选为产生约12.2μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，依帕司他的1天量可设为150mg至400mg、150mg至300mg、150mg至200mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，依帕司他的1天量可设为75mg至400mg、75mg至300mg、75mg至200mg、75mg至150mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，依帕司他的1天量可设为37mg至400mg、37mg至300mg、37mg至200mg、37mg至150mg。前述的给药优选利用注射剂或口服进行。通过产生前述的血液浓度，可期待依帕司他透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
虽然并无限定，关于使用扎鲁司特作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为10mg至200mg，更优选设为20mg至150mg，进一步优选设为30mg至100mg，特别优选设为40mg至80mg。扎鲁司特的情况下，Cmax为0.8μM(“白三烯受体拮抗剂/支气管哮喘治疗剂Accolate(注册商标)片20mg扎鲁司特片”医药品interview form、2015年1月制作(修订第9版)、单次给药时)。扎鲁司特的用量优选为产生约0.8μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，扎鲁司特的1天量可设为40mg至200mg、40mg至150mg、40mg至100mg、40mg至80mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，扎鲁司特的1天量可设为20mg至200mg、20mg至150mg、20mg至100mg、20mg至80mg、20mg至40mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，扎鲁司特的1天量可设为10mg至200mg、10mg至150mg、10mg至100mg、10mg至80mg、10mg至40mg、10mg至20mg。前述的给药优选利用注射剂或口服进行。通过产生前述的血液浓度，可期待扎鲁司特透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
虽然并无限定，关于使用氨来呫诺作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为10mg至150mg，更优选设为15mg至100mg，进一步优选设为20mg至80mg，特别优选设为25mg至50mg。氨来呫诺的情况下，Cmax为16.0μM(“哮喘·过敏性鼻炎治疗剂日本药局方氨来呫诺片Solfa(注册商标)25mg片Solfa(注册商标)50mg片”医药品interview form、2012年10月修订(修订第2版)、单次给药时)。氨来呫诺的用量优选为产生约16.0μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，氨来呫诺的1天量可设为75mg至150mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，氨来呫诺的1天量可设为37mg至150mg、37mg至100mg、37mg至75mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，氨来呫诺的1天量可设为18mg至150mg、18mg至100mg、18mg至75mg、18mg至37mg。前述的给药优选利用注射剂或口服进行。通过产生前述的血液浓度，可期待氨来呫诺透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
虽然并无限定，关于使用塞曲司特作为有效成分时的用量，优选为将成人的1天量设为8mg至120mg，更优选设为25mg至110mg，进一步优选设为50mg至100mg，特别优选设为70mg至90mg，最优选设为80mg。塞曲司特的情况下，Cmax为31.03μM(“血栓素A2受体拮抗剂Bronica(注册商标)片40、80”医药品interview form、2016年10月修订(第4版)、单次给药时)。塞曲司特的用量优选为产生约31.03μM以上的Cmax的给药量，只要发挥出本申请发明的效果，则也可为产生Cmax的1/2量以上或Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量。就产生前述Cmax的观点而言，塞曲司特的1天量可设为80mg至120mg、80mg至110mg、80mg至100mg、80mg至90mg。就产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的观点而言，塞曲司特的1天量可设为50mg至120mg、50mg至110mg、50mg至100mg、50mg至90mg、50mg至80mg、50mg至70mg。就产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的观点而言，塞曲司特的1天量可设为25mg至120mg、25mg至110mg、25mg至100mg、25mg至90mg、25mg至80mg、25mg至60mg、25mg至40mg。前述的给药优选利用注射剂或口服进行。通过产生前述的血液浓度，可期待塞曲司特透过BRB，而有效地抑制CNV或玻璃膜疣。
在本说明书中，制剂的剂型并无特别限制，可为液剂(悬浮剂、乳剂、胶囊剂、糖浆剂、注射剂等)、或固形制剂(粉末剂、细粒剂、颗粒剂、丸剂、片剂等)。
本说明书中所提供的制剂并无限定，可具有4.0至8.5的pH值。就显著地发挥本发明的效果的观点而言，制剂的pH值优选为4.5以上，更优选为5.0以上，进一步优选为5.5以上，特别优选为6.0以上，最优选为6.5以上。另外，就显著地发挥本发明的效果的观点而言，制剂的pH值优选为8.0以下，更优选为7.8以下，进一步优选为7.7以下，特别优选为7.6以下，最优选为7.5以下。另外，就显著地发挥本发明的效果的观点而言，制剂的pH值优选为4.5至8.0，更优选为5.0至7.8，进一步优选为5.5至7.7，特别优选为6.0至7.6，最优选为6.5至7.6。
[固形制剂]
本说明书中所提供的制剂只要无损稳定性等，则可根据制剂的形态，添加惯用的载体成分，并通过惯用的方法进行制备。例如，若为片剂，则可通过将粉末状的活性成分与制药上容许的载体成分(赋形剂等)进行混合并压缩成形来制备。并且，固形制剂中的颗粒剂等粉粒剂也可通过各种造粒法(挤出造粒法、粉碎造粒法、干式压密造粒法、流动床造粒法、滚动造粒法、高速搅拌造粒法等)来制备，片剂可将前述造粒法、压片法(湿式压片法、直接压片法)等适当地组合来制备。对于片剂，可实施糖衣包覆而制成糖衣片。并且，片剂可为单层片，也可为两层片等积层片。固形制剂的优选的剂型为片剂(例如口中咀嚼型的片剂)。
在固形制剂中，作为载体成分或添加剂，例如可例举：赋形剂(D-山梨糖醇、D-甘露糖醇、木糖醇等糖醇，葡萄糖、白糖、乳糖、果糖等糖类，结晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、磷酸氢钙、小麦淀粉、米淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉、糊精、β-环糊精、轻质硅酸酐、氧化钛、偏硅酸铝酸镁、滑石粉、高岭土等)；崩解剂(低取代度羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羟丙基淀粉、部分α化淀粉等)；黏合剂(甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等纤维素衍生物，聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、丙烯酸系高分子、明胶、阿拉伯胶、聚三葡萄糖、α化淀粉、琼脂、黄蓍胶、海藻酸钠、海藻酸丙二醇酯等)；润滑剂(硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸聚烃氧酯、鲸蜡醇、滑石粉、氢化油、蔗糖脂肪酸酯、二甲基聚硅氧烷、蜂蜡、白蜂蜡等)；抗氧化剂(二丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯、丁基羟基苯甲醚(BHA)、生育酚、柠檬酸等)；涂布剂(羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯、羧甲基乙基纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、聚乙烯醇缩醛二乙基氨基乙酸酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯、甲基丙烯酸共聚物、聚乙烯醇缩醛二乙基氨基乙酸酯、虫胶等)；着色剂(姜黄萃取液、核黄素、氧化钛、胡萝卜素液等)；矫味剂(阿斯巴甜、抗坏血酸、甜菊、薄荷脑、甘草粗萃取物、单糖浆等)；发泡剂(碳酸氢钠等)；流动化剂(偏硅酸铝酸钠、轻质硅酸酐等)界面活性剂(聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油单硬脂酸酯、山梨糖醇酐单硬脂酸酯、山梨糖醇酐单月桂酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯、聚山梨醇酯类、月桂基硫酸钠、聚乙二醇6000等聚乙二醇类、蔗糖脂肪酸酯等)；塑化剂(柠檬酸三乙酯、聚乙二醇、甘油三乙酸酯、鲸蜡醇等)；甜味剂(蔗糖、甘露糖醇、阿斯巴甜等天然或合成甜味剂)；调味剂(薄荷脑等)；吸附剂、防腐剂、湿润剂、抗静电剂等。
在制剂为固形制剂的情况下，选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物的含量并无限定，相对于制剂的总量，可设为0.1重量％至30重量％，优选为0.5重量％至25重量％，更优选为0.5重量％至20重量％。另外，本化合物的含量可为0.01重量％至3重量％，也可为0.02重量％至2重量％，也可为0.03重量％至1重量％。
[眼科用剂]
在制成眼科用剂的情况下，性状并无特别限定，例如可为液体状、流动状、凝胶状、半固体形状、或固体形状等任一性状。眼科用剂的种类并无特别限定。例如可例举：滴眼剂、眼软膏(水溶性眼软膏、油溶性眼软膏)及眼内注射剂(例如玻璃体内注射剂)等。
另外，固体形状以外的液体状、流动状、凝胶状、半固体形状、或固体形状等的眼科用剂可为水性组合物，也可为如软膏剂等这样的油性组合物。
眼科用剂的制备方法已熟知。可将选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种或EMT抑制化合物与药学上所容许的基质或载体、根据需要的药学上所容许的眼科用制剂用的添加剂及其他有效成分(本化合物以外的生理活性成分或药理活性成分)进行混合来制备。
作为基质或载体，例如可例举：水；极性溶剂这样的水性溶剂；多元醇；植物油；油性基质等。作为眼内注射剂的基质或载体，可例举：注射用蒸馏水或生理用食盐水。基质或载体可单独使用1种，也可将2种以上组合而使用。
作为制成眼科用剂时的添加剂，例如可例举：界面活性剂、香料或清凉化剂、防腐剂、杀菌剂或抗菌剂、pH值调节剂、等渗剂、螯合剂、缓冲剂、稳定化剂、抗氧化剂及黏稠化剂等。眼内注射剂中也可包含溶解助剂、悬浮化剂、等渗剂、缓冲剂、无痛剂、稳定化剂及防腐剂等。添加剂可单独使用1种，也可将2种以上组合而使用。
在眼科用剂为固形制剂以外的例如液体状、流动状、凝胶状、或半固体形状等制剂的情况下，眼科用组合物中的选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物的含量相对于组合物的总量，可设为0.00001重量％以上，优选为0.0001重量％以上，更优选为0.001重量％以上。另外，眼科用组合物中的选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物的含量相对于组合物的总量，可为0.01重量％以上，也可为0.1重量％以上，也可为1重量％以上。若为前述范围，则充分地获得视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。
另外，在眼科用剂为固形制剂以外的例如液体状、流动状、凝胶状、或半固体形状等制剂的情况下，眼科用组合物中的选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物的含量相对于组合物的总量，可设为10重量％以下，优选为5重量％以下，更优选为3重量％以下。若为前述范围，则成为充分地获得视网膜疾病的预防、改善或治疗效果，并且在滴眼时异物感更少的制剂。
在眼科用剂为固形制剂以外的例如液体状、流动状、凝胶状、或半固体形状等制剂的情况下，作为眼科用组合物中的本化合物的含量，相对于组合物的总量，可设为0.00001重量％至10重量％、0.00001重量％至5重量％、0.00001重量％至3重量％、0.0001重量％至10重量％、0.0001重量％至5重量％、0.0001重量％至3重量％、0.001重量％至10重量％、0.001重量％至5重量％、0.001重量％至3重量％、0.01重量％至10重量％、0.01重量％至5重量％、0.01重量％至3重量％、0.1重量％至10重量％、0.1重量％至5重量％、0.1重量％至3重量％、1重量％至10重量％、1重量％至5重量％、1重量％至3重量％。
眼科用剂为包含水分的组合物时，眼科用剂的pH值并无限定，优选为4以上，更优选为5.5以上，进一步优选为6以上，进一步更优选为6.5以上。若为前述范围，则成为本化合物对热及光的稳定性良好的制剂。另外，眼科用剂的pH值优选为9以下，更优选为8.5以下，进一步优选为8以下，进一步更优选为7.5以下。若为前述范围，则对眼的刺激得到抑制。
[注射剂]
注射剂可使选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物溶解或分散至注射用蒸馏水或生理用食盐水等中，并通过例如日本药局方所记载的公知的方法来制备。另外，注射剂中也可包含溶解助剂、悬浮化剂、等渗剂、缓冲剂、无痛剂、稳定化剂及防腐剂等药学上所容许的载体，或者还可包含药学上所容许的注射剂用的添加剂。
注射剂中可配合视网膜疾病的预防、改善或治疗成分以外的药理活性成分或生理活性成分。作为这种药理活性成分及生理活性成分，例如可例举：神经营养因子、去充血成分、眼肌调节药成分、抗炎药成分或收敛药成分、抗组织胺药成分或抗过敏药成分、维生素类、氨基酸类、抗菌药成分或杀菌药成分等。
注射剂中的选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物的含量相对于制剂的总量，优选为0.001重量％以上，更优选为0.01重量％以上，进一步优选为0.1重量％以上。另外，优选为80重量％以下，更优选为60重量％以下，进一步优选为50重量％以下。若为前述范围，则可充分地获得视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。
注射剂中的选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物的含量相对于制剂的总量，可设为0.001重量％至80重量％、0.001重量％至60重量％、0.001重量％至50重量％、0.01重量％至80重量％、0.01重量％至60重量％、0.01重量％至50重量％、0.1重量％至80重量％、0.1重量％至60重量％、0.1重量％至50重量％。
在注射剂中，添加剂及选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物以外的药理活性成分或生理活性成分可单独使用1种，也可将2种以上组合而使用。
[胶囊剂]
胶囊剂可通过利用惯用的方法，向胶囊(软质或硬质胶囊)内填充粉粒剂(粉剂、颗粒剂等)来制备。在制剂为胶囊剂的情况下，该制备物中的选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物的含量并无限定，相对于制剂的总量，可设为0.01重量％至3重量％，优选为0.02重量％至2重量％，更优选为0.03重量％至1重量％。优选将这种液状制备物填充至软胶囊等中制成软胶囊剂等而使用。
在制剂为硬胶囊剂的情况下，不包含胶囊包衣的该硬胶囊剂用的内容物中的选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种、或EMT抑制化合物的含量并无限定，相对于制剂的总量，可设为0.1重量％至30重量％，优选为0.5重量％至25重量％，更优选为0.5重量％至20重量％。另外，本化合物的含量可为0.01重量％至3重量％，也可为0.02重量％至2重量％，也可为0.03重量％至1重量％。
作为液剂时的添加物，可例举：油性基质(例如橄榄油、玉米油、大豆油、芝麻油、棉籽油等植物油；中链脂肪酸三甘油酯等)、水性基质(例如聚乙二醇400、水)、凝胶基质(例如羧基乙烯基聚合物、胶质等)、界面活性剂(例如聚山梨醇酯80、氢化蓖麻油、甘油脂肪酸酯、山梨糖醇酐倍半油酸酯等)、悬浮化剂(例如高岭土、羧甲基纤维素钠、黄蓍胶、白蜂蜡或各种界面活性剂、阿拉伯胶、阿拉伯胶粉末、黄原胶、大豆卵磷脂等)、分散剂、乳化剂、稳定化剂、缓冲剂、溶解助剂、消泡剂(二甲基聚硅氧烷、硅消泡剂等)、pH值调节剂(柠檬酸、苹果酸、磷酸氢钠、磷酸氢二钾等)、防腐剂(保存剂)、清凉化剂(l-薄荷脑、薄荷水等)等。另外，这些液剂中均可适当添加抗氧化剂、甜味剂、酸味剂、着色剂、香料及呈味剂等。
液剂例如可通过使各成分溶解或分散至作为载体成分的水性介质(纯化水、含乙醇的纯化水等)中，根据需要进行过滤或灭菌处理，并填充至规定的容器中，再进行灭菌处理来制备。
前述组合物只要发挥出本发明的效果则无特别限定，例如可制成医药品、准药品、功能性食品等。
[功能性食品]
本发明也可作为功能性食品而提供。在本说明书中，所谓功能性食品是指国家或公共组织许可、指定的具有医药品的功效的饮食品或基于企业向国家等申报预定效果的内容而显示功能性的饮食品。功能性食品可例举：特定保健用食品、营养功能食品、显示功能性的食品、老人用食品、健康辅助食品(营养均衡食品、增补剂)等。也包括包含表明医药品的功效或功能性的包装或容器、随附文书、使用说明书等的饮食品。也包括在向国家等提交的申请书中表明医药品的功效或功能性的饮食品。这种表明可例举：关于脉络膜新生血管的预防和/或治疗的表明、关于对AMD、初期AMD、中期AMD、干性AMD、湿性AMD等AMD的预防和/或治疗的表明、关于视野的歪曲(视物变形症)、视野的色调、光过敏、急剧的视力下降、中心暗点等对于AMD而言为特征性的症状的预防、改善和/或治疗的表明等。
[实施方式]
关于前述的实施方式，并无限定，本发明公开以下的实施方式。
一种脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，含有选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种作为有效成分。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，是口服剂或注射剂。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，前述口服剂为固形制剂。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，前述固形制剂为片剂。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，是液剂。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，前述液剂为眼科用剂或胶囊剂。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，前述脉络膜新生血管在老年性黄斑变性、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、或视网膜血管瘤样增生(RAP)中产生。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，前述脉络膜新生血管因RPE细胞的EMT而产生。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，为了抑制RPE细胞的EMT，投予充分量的选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，为了抑制RPE细胞中的间质系标记或细胞外基质的表达，投予充分量的选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，前述间质系标记为选自由Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7、MMP3、ZEB2、CDH2及VIM所组成的组中的至少1种。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，前述细胞外基质为选自由COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC、COL1A1、COL1A2、SRGN、FN1、COL5A2、COL13A1及LAMB3所组成的组中的至少1种。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生20.4μM以上的Cmax的给药量给予扎托布洛芬或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生16.8μM以上的Cmax的给药量给予扎托布洛芬或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予扎托布洛芬或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予扎托布洛芬或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生340.9μM以上的Cmax的给药量给予奥沙普嗪或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予奥沙普嗪或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予奥沙普嗪或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生69.15μM以上的Cmax的给药量给予泰普菲酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予泰普菲酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予泰普菲酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生27.91μM以上的Cmax的给药量给予氟芬那酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予氟芬那酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予氟芬那酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生38.54μM以上的Cmax的给药量给予甲芬那酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予甲芬那酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予甲芬那酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生10.10μM以上的Cmax的给药量给予舒林酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予舒林酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予舒林酸或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生12.2μM以上的Cmax的给药量给予依帕司他或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予依帕司他或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予依帕司他或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生0.8μM以上的Cmax的给药量给予扎鲁司特或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予扎鲁司特或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予扎鲁司特或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生16.0μM以上的Cmax的给药量给予氨来呫诺或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予氨来呫诺或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予氨来呫诺或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生31.03μM以上的Cmax的给药量给予塞曲司特或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予塞曲司特或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予塞曲司特或其盐。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有扎托布洛芬或其盐25mg至360mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有奥沙普嗪或其盐100mg至700mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有泰普菲酸或其盐60mg至900mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有氟芬那酸或其盐75mg至1250mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有甲芬那酸或其盐150mg至2250mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有舒林酸或其盐30mg至500mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有依帕司他或其盐10mg至400mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有扎鲁司特或其盐10mg至200mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有氨来呫诺或其盐10mg至150mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其作为1天量含有塞曲司特或其盐8mg至120mg。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，1天给予1次至3次。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，1天给予1次或2次。
如前述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，1天给予1次。
一种VEGF产生抑制剂，含有选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种作为有效成分。
一种VEGF表达抑制剂，含有选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种作为有效成分。
一种玻璃膜疣抑制剂，含有具有视网膜色素上皮细胞的上皮间质转化抑制活性的化合物作为有效成分。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为抑制前述视网膜色素上皮细胞中的间质系标记或细胞外基质的表达的药剂。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为抑制前述视网膜色素上皮细胞的运动能力的亢进的药剂。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述间质系标记为选自由Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7、MMP3、ZEB2、CDH2及VIM所组成的组中的至少1种。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述细胞外基质为选自由COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC、COL1A1、COL1A2、SRGN、FN1、COL5A2、COL13A1及LAMB3所组成的组中的至少1种。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述间质系标记为选自由Snail、Slug、钙黏蛋白3、MMP1及MMP7所组成的组中的至少1种和/或前述细胞外基质为选自由COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR及TNC所组成的组中的至少1种。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂和/或血栓素A2受体拮抗剂。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述非类固醇性抗炎剂为丙酸系非类固醇性抗炎剂、氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂、或芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂，前述白三烯受体拮抗剂为半胱氨酰白三烯1型(CysLT1)受体的拮抗剂或5-脂氧合酶抑制剂。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述丙酸系非类固醇性抗炎剂为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、布洛芬、氟比洛芬及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂为选自由氟芬那酸、甲芬那酸及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂为舒林酸和/或其药学上可容许的盐；前述醛糖还原酶抑制剂为依帕司他和/或其药学上可容许的盐；前述白三烯受体拮抗剂为选自由扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述化学介质释放抑制剂为氨来呫诺和/或其药学上可容许的盐；和/或血栓素A2受体拮抗剂为塞曲司特和/或其药学上可容许的盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为选自由阿立塞替(Alisertib)、MK-0457(陶扎色替(Tozasertib))、PHA-739358(达鲁舍替(danusertib))、AMG-900、巴拉塞替(Barasertib)、CYC116、MLN8054、贝加灵(Baicalin)、黄芩素(Baicalein)、羽扇豆醇(Lupeol)、Istanbulin A(9a-羟基-3,4a,5-三甲基-4,5,6,7,8a,9-六氢苯并[f][1]苯并呋喃-2,8-二酮)、植醇(Phytol)、二氟二苯基甲酮(EF24)、Crucmin、间苯三酚(Phloroglucinol)、白花丹素(Plumbagin)、雷帕霉素(Rapamycin)、FK506(他克莫司(Tacrolimus))、沙利度胺(Thalidomide)、LY550410、SB-505124、SD-208、TAPI-0、TAPI-1、JNJ-38877605、PF-04217903、AG1478(Tyrphostin)、埃罗替尼(Erlotinib)、吉非替尼(Gefitinib)、拉帕替尼(Lapatinib)、PD153035、PD158780、WHI-P154、BMS-536924、A83-01、D4476、LY-364947、SB-431542、SD-208、AZD6244(司美替尼(Selumetinib))、CI-1040、PD0325901、GDC-0941(Pictilisib(4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉))、PI-103、PIK-90、ZSTK474、API-2、AZD0530(塞卡替尼(Saracatinib))、PP1、2-羟基桂皮醛(2-Hydroxycinnamaldehyde)、5-氮杂-dC(5-aza-dC)、BI 5700、塞来昔布(Celecoxib)、CX-4945(Silmitasertib(5-[(3-氯苯基)氨基]苯并[c][2,6]萘啶-8-羧酸))、双硫仑(Disulfiram)、甲磺酸艾日布林(Eribulin mesyate)、吴茱萸碱(Evodiamine)、EW-7203、法舒地尔(Fasudil)、尼达尼布(Nintedanib)、扶正化瘀方(Fuzheng Huayu recipe)、葡萄籽原花青素(Grape seed proanthocyanidins)、伏立诺他(Vorinostat)、除莠霉素(Herbimycin)A、恩替诺特(Entinostat)、和厚朴酚(Honokiol)、NPI-0052、甲烯土霉素(Methacycline)、达沙替尼(Dasatinib)、Ki26894、NSC 74859、NVP-LDE-225(Erismodegib(索尼吉布))、帕布昔利布(Palbociclib)、松属素(Pinocembrin)、丹酚酸(SalvianolicAcid)B、索拉非尼(Sorafenib)、白藜芦醇(Resveratrol)、S-烯丙基半胱氨酸(S-Allylcysteine)、水飞蓟宾葡甲胺(Silibinin meglumine)、辛伐他汀(Simvastatin)、森可曼(Centchroman)、ML327、GN-25、曲古柳菌素(Trichostatin)A、萨拉西诺甙(Sarasinoside)A1、帕比司他(Panobinostat)、达努塞替(Danusertib)、半胱氨酸C(Cystatin C)、百里醌(Thymoquinone)、乌司他丁(Ulinastatin)、Dendrofalconerol A(DF-A)、人参皂苷(ginsenoside)(人参皂角苷(ginseng saponin))、南蛇藤籽萃取物、水杨苷(西洋白柳萃取物)、水杨酸、窃衣萃取物、蛇床子素、马斯卡丁葡萄皮萃取物、通心络(Tongxinluo)、原矢车菊素C1(桂皮)、睡茄根萃取物(Withania somnifera rootextract)、清胰化积方(Qingyihuaji)、玫瑰茄萃取物、表没食子儿茶素没食子酸酯、原花青素(葡萄籽萃取物)及丹参酚酸B所组成的组中的至少1种。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，是口服剂或注射剂。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述口服剂为固形制剂。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述固形制剂为片剂。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，是液剂。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其中，前述液剂为眼科用剂或胶囊剂。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生20.4μM以上的Cmax的给药量给予扎托布洛芬或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生16.8μM以上的Cmax的给药量给予扎托布洛芬或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予扎托布洛芬或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予扎托布洛芬或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生340.9μM以上的Cmax的给药量给予奥沙普嗪或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予奥沙普嗪或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予奥沙普嗪或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生69.15μM以上的Cmax的给药量给予泰普菲酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予泰普菲酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予泰普菲酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生27.91μM以上的Cmax的给药量给予氟芬那酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予氟芬那酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予氟芬那酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生38.54μM以上的Cmax的给药量给予甲芬那酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予甲芬那酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予甲芬那酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生10.10μM以上的Cmax的给药量给予舒林酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予舒林酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予舒林酸或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生12.2μM以上的Cmax的给药量给予依帕司他或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予依帕司他或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予依帕司他或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生0.8μM以上的Cmax的给药量给予扎鲁司特或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予扎鲁司特或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予扎鲁司特或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生16.0μM以上的Cmax的给药量给予氨来呫诺或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予氨来呫诺或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予氨来呫诺或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生31.03μM以上的Cmax的给药量给予塞曲司特或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/2量以上的血液浓度的给药量给予塞曲司特或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其以产生前述Cmax的1/4量以上的血液浓度的给药量给予塞曲司特或其盐。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有扎托布洛芬或其盐25mg至360mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有奥沙普嗪或其盐100mg至700mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有泰普菲酸或其盐60mg至900mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有氟芬那酸或其盐75mg至1250mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有甲芬那酸或其盐150mg至2250mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有舒林酸或其盐30mg至500mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有依帕司他或其盐10mg至400mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有扎鲁司特或其盐10mg至200mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有氨来呫诺或其盐10mg至150mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，其作为1天量含有塞曲司特或其盐8mg至120mg。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，1天给予1次至3次。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，1天给予1次或2次。
如前述的玻璃膜疣抑制剂，1天给予1次。
一种老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，含有前述的玻璃膜疣抑制剂作为有效成分。
一种老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，含有丙酸系非类固醇性抗炎剂、氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂、芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂、或血栓素A2受体拮抗剂作为有效成分，该醛糖还原酶抑制剂为依帕司他和/或其药学上可容许的盐。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述丙酸系非类固醇性抗炎剂为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、布洛芬、氟比洛芬及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂为选自由氟芬那酸、甲芬那酸及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂为舒林酸和/或其药学上可容许的盐；前述白三烯受体拮抗剂为选自由扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述化学介质释放抑制剂为氨来呫诺和/或其药学上可容许的盐；前述血栓素A2受体拮抗剂为塞曲司特和/或其药学上可容许的盐。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，是口服剂或注射剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述口服剂为固形制剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述固形制剂为片剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，是液剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述液剂为眼科用剂或胶囊剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述老年性黄斑变性为干性AMD。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述老年性黄斑变性为湿性AMD。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述老年性黄斑变性为无AMD、初期AMD和/或中期AMD。
一种老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，是将血管新生抑制剂与前述的玻璃膜疣抑制剂组合而成的。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述血管新生抑制剂为抗VEGF抗体或该VEGF抗体的片段、抗VEGF抗体的片段与IgG分子的Fc区域的融合蛋白质和/或抗血管新生适体。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述血管新生抑制剂为选自由贝伐单抗、雷珠单抗、阿柏西普、哌加他尼钠、ESBA-1008、兰帕珠单抗、MC-1101、盐酸多西环素及爱米司他盐酸盐所组成的组中的至少1种。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述玻璃膜疣抑制剂为口服剂或注射剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述口服剂为固形制剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述固形制剂为片剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，是液剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述液剂为眼科用剂或胶囊剂。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述老年性黄斑变性为干性AMD。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述老年性黄斑变性为湿性AMD。
如前述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，前述老年性黄斑变性为无AMD、初期AMD和/或中期AMD。
一种在活体外诱导玻璃膜疣的方法，包括：使选自由细胞因子、生长因子及趋化因子所组成的组中的至少1种接触细胞。
如前述的方法，其中，前述细胞为视网膜色素上皮细胞。
如前述的方法，其中，前述细胞为ARPE-19。
如前述的方法，其中，前述细胞因子为选自由IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-16、TNF-α及IFN-γ所组成的组中的至少1种。
如前述的方法，其中，前述生长因子为选自由TGF-β、FGFs、HGF、EGF及PDGF所组成的组中的至少1种。
如前述的方法，其中，前述趋化因子为选自由IL-8、MIP-1α、MCP-1、RANTES及嗜酸性粒细胞趋化因子所组成的组中的至少1种。
如前述的方法，其中，前述接触的时间为10分钟至108小时。
如前述的方法，其中，前述接触的温度为4℃至50℃。
如前述的方法，其中，前述玻璃膜疣的诱导包括以上皮系标记、间质系标记、ECM的分泌、运动能力的亢进和/或Focus的形成作为指标进行评价。
一种玻璃膜疣抑制剂的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被验药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞中的上皮间质转化的抑制。
一种玻璃膜疣抑制剂的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被验药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞的集块的抑制。
一种老年性黄斑变性预防和/或治疗药的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被验药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞中的上皮间质转化的抑制。
一种老年性黄斑变性预防和/或治疗药的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被验药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞的集块的抑制。
如前述的评价或筛选方法，包括：使选自由细胞因子、生长因子及趋化因子所组成的组中的至少1种接触前述视网膜色素上皮细胞。
如前述的评价或筛选方法，其中，前述视网膜色素上皮细胞为ARPE-19。
如前述的评价或筛选方法，其中，前述细胞因子为选自由IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-16、TNF-α及IFN-γ所组成的组中的至少1种。
如前述的评价或筛选方法，其中，前述生长因子为选自由TGF-β、FGFs、HGF、EGF及PDGF所组成的组中的至少1种。
如前述的评价或筛选方法，其中，前述趋化因子为选自由IL-8、MIP-1α、MCP-1、RANTES及嗜酸性粒细胞趋化因子所组成的组中的至少1种。
如前述的评价或筛选方法，其中，前述接触的时间为10分钟至108小时。
如前述的评价或筛选方法，其中，前述接触的温度为4℃至50℃。
一种具有上皮间质转化抑制活性的化合物的用途，用于制造脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂。
一种具有上皮间质转化抑制活性的化合物的用途，用于制造VEGF产生抑制剂。
一种具有上皮间质转化抑制活性的化合物的用途，用于制造玻璃膜疣抑制剂。
一种具有上皮间质转化抑制活性的化合物的用途，用于制造老年性黄斑变性预防和/或治疗剂。
如前述化合物的用途，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为抑制前述视网膜色素上皮细胞中的间质系标记或细胞外基质的表达的药剂。
如前述化合物的用途，其中，前述间质系标记为选自由Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7、MMP3、ZEB2、CDH2及VIM所组成的组中的至少1种。
如前述化合物的用途，其中，前述细胞外基质为选自由COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC、COL1A1、COL1A2、SRGN、FN1、COL5A2、COL13A1及LAMB3所组成的组中的至少1种。
如前述化合物的用途，其中，前述间质系标记为选自由Snail、Slug、钙黏蛋白3、MMP1及MMP7所组成的组中的至少1种，和/或前述细胞外基质为选自由COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR及TNC所组成的组中的至少1种。
如前述化合物的用途，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂和/或血栓素A2受体拮抗剂。
如前述化合物的用途，其中，前述非类固醇性抗炎剂为丙酸系非类固醇性抗炎剂、氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂、或芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂；前述白三烯受体拮抗剂为半胱氨酰白三烯1型(CysLT1)受体的拮抗剂或5-脂氧合酶抑制剂。
如前述化合物的用途，其中，前述丙酸系非类固醇性抗炎剂为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、布洛芬、氟比洛芬及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂为选自由氟芬那酸、甲芬那酸及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂为舒林酸和/或其药学上可容许的盐；前述醛糖还原酶抑制剂为依帕司他和/或其药学上可容许的盐；前述白三烯受体拮抗剂为选自由扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述化学介质释放抑制剂为氨来呫诺和/或其药学上可容许的盐；和/或血栓素A2受体拮抗剂为塞曲司特和/或其药学上可容许的盐。
如前述化合物的用途，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为选自由阿立塞替(Alisertib)、MK-0457(陶扎色替(Tozasertib))、PHA-739358(达鲁舍替(danusertib))、AMG-900、巴拉塞替(Barasertib)、CYC116、MLN8054、贝加灵(Baicalin)、黄芩素(Baicalein)、羽扇豆醇(Lupeol)、Istanbulin A(9a-羟基-3,4a,5-三甲基-4,5,6,7,8a,9-六氢苯并[f][1]苯并呋喃-2,8-二酮)、植醇(Phytol)、二氟二苯基甲酮(EF24)、Crucmin、间苯三酚(Phloroglucinol)、白花丹素(Plumbagin)、雷帕霉素(Rapamycin)、FK506(他克莫司(Tacrolimus))、沙利度胺(Thalidomide)、LY550410、SB-505124、SD-208、TAPI-0、TAPI-1、JNJ-38877605、PF-04217903、AG1478(Tyrphostin)、埃罗替尼(Erlotinib)、吉非替尼(Gefitinib)、拉帕替尼(Lapatinib)、PD153035、PD158780、WHI-P154、BMS-536924、A83-01、D4476、LY-364947、SB-431542、SD-208、AZD6244(司美替尼(Selumetinib))、CI-1040、PD0325901、GDC-0941(Pictilisib(4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉))、PI-103、PIK-90、ZSTK474、API-2、AZD0530(塞卡替尼(Saracatinib))、PP1、2-羟基桂皮醛(2-Hydroxycinnamaldehyde)、5-氮杂-dC(5-aza-dC)、BI 5700、塞来昔布(Celecoxib)、CX-4945(Silmitasertib(5-[(3-氯苯基)氨基]苯并[c][2,6]萘啶-8-羧酸))、双硫仑(Disulfiram)、甲磺酸艾日布林(Eribulin mesyate)、吴茱萸碱(Evodiamine)、EW-7203、法舒地尔(Fasudil)、尼达尼布(Nintedanib)、扶正化瘀方(Fuzheng Huayu recipe)、葡萄籽原花青素(Grape seed proanthocyanidins)、伏立诺他(Vorinostat)、除莠霉素(Herbimycin)A、恩替诺特(Entinostat)、和厚朴酚(Honokiol)、NPI-0052、甲烯土霉素(Methacycline)、达沙替尼(Dasatinib)、Ki26894、NSC 74859、NVP-LDE-225(Erismodegib(索尼吉布))、帕布昔利布(Palbociclib)、松属素(Pinocembrin)、丹酚酸(SalvianolicAcid)B、索拉非尼(Sorafenib)、白藜芦醇(Resveratrol)、S-烯丙基半胱氨酸(S-Allylcysteine)、水飞蓟宾葡甲胺(Silibinin meglumine)、辛伐他汀(Simvastatin)、森可曼(Centchroman)、ML327、GN-25、曲古柳菌素(Trichostatin)A、萨拉西诺甙(Sarasinoside)A1、帕比司他(Panobinostat)、达努塞替(Danusertib)、半胱氨酸C(Cystatin C)、百里醌(Thymoquinone)、乌司他丁(Ulinastatin)、Dendrofalconerol A(DF-A)、人参皂苷(ginsenoside)(人参皂角苷(ginseng saponin))、南蛇藤籽萃取物、水杨苷(西洋白柳萃取物)、水杨酸、窃衣萃取物、蛇床子素、马斯卡丁葡萄皮萃取物、通心络(Tongxinluo)、原矢车菊素C1(桂皮)、睡茄根萃取物(Withania somnifera rootextract)、清胰化积方(Qingyihuaji)、玫瑰茄萃取物、表没食子儿茶素没食子酸酯、原花青素(葡萄籽萃取物)及丹参酚酸B所组成的组中的至少1种。
如前述化合物的用途，是口服剂或注射剂。
如前述化合物的用途，其中，前述口服剂为固形制剂。
如前述化合物的用途，其中，前述固形制剂为片剂。
如前述化合物的用途，是液剂。
如前述化合物的用途，其中，前述液剂为眼科用剂或胶囊剂。
一种具有上皮间质转化抑制活性的化合物，用于脉络膜新生血管的预防和/或治疗。
一种具有上皮间质转化抑制活性的化合物，用于抑制VEGF的产生。
一种具有上皮间质转化抑制活性的化合物，用于抑制玻璃膜疣。
一种具有上皮间质转化抑制活性的化合物，用于预防和/或治疗老年性黄斑变性。
如前述的化合物，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为抑制前述视网膜色素上皮细胞中的间质系标记或细胞外基质的表达的药剂。
如前述的化合物，其中，前述间质系标记为选自由Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7、MMP3、ZEB2、CDH2及VIM所组成的组中的至少1种。
如前述的化合物，其中，前述细胞外基质为选自由COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC、COL1A1、COL1A2、SRGN、FN1、COL5A2、COL13A1及LAMB3所组成的组中的至少1种。
如前述的化合物，其中，前述间质系标记为选自由Snail、Slug、钙黏蛋白3、MMP1及MMP7所组成的组中的至少1种；和/或前述细胞外基质为选自由COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR及TNC所组成的组中的至少1种。
如前述的化合物，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂和/或血栓素A2受体拮抗剂。
如前述的化合物，其中，前述非类固醇性抗炎剂为丙酸系非类固醇性抗炎剂、氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂、或芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂；前述白三烯受体拮抗剂为半胱氨酰白三烯1型(CysLT1)受体的拮抗剂或5-脂氧合酶抑制剂。
如前述的化合物，其中，前述丙酸系非类固醇性抗炎剂为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、布洛芬、氟比洛芬及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂为选自由氟芬那酸、甲芬那酸及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂为舒林酸和/或其药学上可容许的盐；前述醛糖还原酶抑制剂为依帕司他和/或其药学上可容许的盐；前述白三烯受体拮抗剂为选自由扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特及它们药学上可容许的盐所组成的组中的至少1种；前述化学介质释放抑制剂为氨来呫诺和/或其药学上可容许的盐；和/或血栓素A2受体拮抗剂为塞曲司特和/或其药学上可容许的盐。
如前述的化合物，其中，前述具有上皮间质转化抑制活性的化合物为选自由阿立塞替(Alisertib)、MK-0457(陶扎色替(Tozasertib))、PHA-739358(达鲁舍替(danusertib))、AMG-900、巴拉塞替(Barasertib)、CYC116、MLN8054、贝加灵(Baicalin)、黄芩素(Baicalein)、羽扇豆醇(Lupeol)、Istanbulin A(9a-羟基-3,4a,5-三甲基-4,5,6,7,8a,9-六氢苯并[f][1]苯并呋喃-2,8-二酮)、植醇(Phytol)、二氟二苯基甲酮(EF24)、Crucmin、间苯三酚(Phloroglucinol)、白花丹素(Plumbagin)、雷帕霉素(Rapamycin)、FK506(他克莫司(Tacrolimus))、沙利度胺(Thalidomide)、LY550410、SB-505124、SD-208、TAPI-0、TAPI-1、JNJ-38877605、PF-04217903、AG1478(Tyrphostin)、埃罗替尼(Erlotinib)、吉非替尼(Gefitinib)、拉帕替尼(Lapatinib)、PD153035、PD158780、WHI-P154、BMS-536924、A83-01、D4476、LY-364947、SB-431542、SD-208、AZD6244(司美替尼(Selumetinib))、CI-1040、PD0325901、GDC-0941(Pictilisib(4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉))、PI-103、PIK-90、ZSTK474、API-2、AZD0530(塞卡替尼(Saracatinib))、PP1、2-羟基桂皮醛(2-Hydroxycinnamaldehyde)、5-氮杂-dC(5-aza-dC)、BI 5700、塞来昔布(Celecoxib)、CX-4945(Silmitasertib(5-[(3-氯苯基)氨基]苯并[c][2,6]萘啶-8-羧酸))、双硫仑(Disulfiram)、甲磺酸艾日布林(Eribulin mesyate)、吴茱萸碱(Evodiamine)、EW-7203、法舒地尔(Fasudil)、尼达尼布(Nintedanib)、扶正化瘀方(Fuzheng Huayu recipe)、葡萄籽原花青素(Grape seed proanthocyanidins)、伏立诺他(Vorinostat)、除莠霉素(Herbimycin)A、恩替诺特(Entinostat)、和厚朴酚(Honokiol)、NPI-0052、甲烯土霉素(Methacycline)、达沙替尼(Dasatinib)、Ki26894、NSC 74859、NVP-LDE-225(Erismodegib(索尼吉布))、帕布昔利布(Palbociclib)、松属素(Pinocembrin)、丹酚酸(SalvianolicAcid)B、索拉非尼(Sorafenib)、白藜芦醇(Resveratrol)、S-烯丙基半胱氨酸(S-Allylcysteine)、水飞蓟宾葡甲胺(Silibinin meglumine)、辛伐他汀(Simvastatin)、森可曼(Centchroman)、ML327、GN-25、曲古柳菌素(Trichostatin)A、萨拉西诺甙(Sarasinoside)A1、帕比司他(Panobinostat)、达努塞替(Danusertib)、半胱氨酸C(Cystatin C)、百里醌(Thymoquinone)、乌司他丁(Ulinastatin)、Dendrofalconerol A(DF-A)、人参皂苷(ginsenoside)(人参皂角苷(ginseng saponin))、南蛇藤籽萃取物、水杨苷(西洋白柳萃取物)、水杨酸、窃衣萃取物、蛇床子素、马斯卡丁葡萄皮萃取物、通心络(Tongxinluo)、原矢车菊素C1(桂皮)、睡茄根萃取物(Withania somnifera rootextract)、清胰化积方(Qingyihuaji)、玫瑰茄萃取物、表没食子儿茶素没食子酸酯、原花青素(葡萄籽萃取物)及丹参酚酸B所组成的组中的至少1种。
如前述的化合物，是口服剂或注射剂。
如前述的化合物，其中，前述口服剂以固形制剂的形态提供。
如前述的化合物，其中，前述固形制剂为片剂。
如前述的化合物，以液剂的形态提供。
如前述的化合物，其中，前述液剂为眼科用剂或胶囊剂。
[实施例]
通过以下的实施例，具体地说明本发明，但本发明不受这些实施例所限定。
试验例1至试验例3及参考试验例2-4表示关于CNV的预防和/或治疗的试验。
试验例4至试验例8表示关于玻璃膜疣的预防和/或治疗的试验。
[试验例1：EMT细胞模型的构建]
试验例1-1：RPE细胞中的EMT的诱导条件的研究
发明人等对于RPE细胞(视网膜色素上皮细胞株：ARPE-19、以下相同)，使用细胞因子或生长因子(TNF-α/IL-1β/TGF-β)，在10种条件下进行了尝试刺激的实验，结果发现引起显著的EMT诱导。认为使用了细胞因子或生长因子的EMT诱导的细胞模型系反映了伴有CNV的患者的所推测的EMT诱导机制。
这10种条件如下。
(1)TNF-α100ng/mL
(2)IL-1β100ng/mL
(3)IL-1β20ng/mL
(4)TNF-α500ng/mL+TGF-β5ng/mL
(5)TNF-α200ng/mL+TGF-β5ng/mL
(6)TNF-α100ng/mL+TGF-β5ng/mL
(7)TNF-α100ng/mL+TGF-β10ng/mL
(8)TNF-α100ng/mL+TGF-β25ng/mL
(9)IL-1β100ng/mL+TGF-β5ng/mL
(10)IL-1β20ng/mL+TGF-β5ng/mL
试验例1-2：通过EMT标记分子的表达变化所进行的EMT的验证
从刺激后的RPE细胞提取RNA，并验证表达变化。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例1-1记载的条件下诱导EMT，在EMT诱导48小时后，回收细胞。将所回收的细胞利用PBS清洗，添加RLT缓冲液(QIAGEN公司)350μL，而制作RNA采集用溶解物。使用RNeasy微量试剂盒(QIAGEN公司#74004)，自溶解物提取总RNA，使用qRT-PCR用的SuperScript III First-StrandSynthesis SuperMix(Invitrogen公司#11752-250)，由所获得的RNA 2μg制作cDNA。将所获得的cDNA 50ng作为模板，依照制造厂商的草案进行实时PCR(ABI Prism 7500序列检测系统)，对各基因的mRNA的表达进行定量分析。针对各基因的特异性引物从Invitrogen公司购买。各基因Ct(Threshold Cycle)值是通过内在性对照进行归一化后，算出相对于非处理的样品的比率。将结果示于图1。
如图1中的A及图1中的B所示，在刺激后的RPE细胞中，作为上皮系标记的E-钙黏蛋白的表达降低(图1中的A)，作为间质系标记的N-钙黏蛋白的表达亢进(图1中的B)。这种钙黏蛋白转换是EMT的代表性现象。另外，确认到纤维连接蛋白所代表的间质系标记(图1中的C)及EMT相关转录因子群(Snail、Slug、ZEB1)的亢进(图1中的E至图1中的G)及I型胶原蛋白(COL1A1)所代表的ECM的表达亢进(图1中的D)，对于RPE细胞确认到因刺激而诱导EMT。
试验例1-3：利用微阵列所进行的经时性的EMT标记表达变化的验证
实施EMT诱导时间中的该时刻的EMT诱导状态的分析。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例1-1记载的条件下诱导EMT，EMT诱导1小时后、4小时后、12小时后、24小时后、48小时后、72小时后，回收细胞。将所回收的细胞利用PBS清洗，添加RLT缓冲液350μL，而制作RNA采集用溶解物。使用RNeasy微量试剂盒(QIAGEN公司#74004)，自溶解物提取总RNA，使用Low InputQuickAmp标定试剂盒(Agilent Technologies公司#5190-2305)进行荧光标记。经标记的cRNA使用人类全基因组寡聚DNA微阵列试剂盒(Agilent Technologies公司#G4112F)并依照制造厂商所规定的草案进行杂交。经杂交的载玻片使用基因表达清洗包(GeneExpression Wash Pack)(Agilent Technologies公司#5188-5327)进行清洗，利用Agilent微阵列扫描仪(Agilent Technologies公司#G2505B)进行扫描。扫描图像使用特征提取(Feature Extraction)软件第9.5.1版(Agilent Technologies公司)进行数值化。数值数据通过Grobal归一化法而进行标准化。将结果示于图2。
如图2所示，EMT标记的降低或亢进的峰值因各基因而为EMT诱导后12小时后，或72小时后，虽然产生了偏差，但降低的上皮系标记以及亢进的间质系标记和ECM如下所述。
作为因EMT诱导而降低的上皮系标记，确认有ID1、ID2、MUC1、细胞角蛋白18(KRT18)、THBS1、VIL2、E-钙黏蛋白(CDH1)。另外，确认到作为生长因子的TGFB2的降低。
作为因EMT诱导而亢进的间质系标记及ECM，确认有TWIST1、VIM、CD44、ZEB1、RDX、MMP9、FN1、RHOA、ZEB2、MMP2、TJP1、CTNNB1、MMP3、ETS1、SNAI1、SNAI2、HAS2、SERPINE1、CDH2、MSN、TCF3、SDC1、ITGAV、COL1A1、SPARC。另外，确认到作为生长因子的FGF1、FGF2、TGFB1的亢进。
[试验例2：CNV抑制试验]
试验例2-1：EMT标记的表达变化1
针对5个化合物(奥沙普嗪、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、扎托布洛芬)，使用前述的细胞模型对EMT抑制效果进行评价。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例1-1记载的条件下诱导EMT，同时添加各化合物(奥沙普嗪、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、扎托布洛芬)，在EMT诱导48小时后，回收细胞。作为对照，使用未添加评价化合物(被验药剂)的样品。将所回收的细胞利用PBS清洗，添加RLT缓冲液350μL，而制作RNA采集用溶解物。各化合物以以下的浓度使用。奥沙普嗪：300μM、依帕司他：30μM、扎鲁司特：3μM、氨来呫诺：30μM、扎托布洛芬：30μM。使用RNeasy微量试剂盒(QIAGEN公司#74004)，自溶解物提取总RNA，使用qRT-PCR用的SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix(Invitrogen公司#11752-250)，由所获得的RNA 2μg制作cDNA。将所获得的cDNA 50ng作为模板，依照制造厂商的草案进行实时PCR(ABI Prism 7500序列检测系统)，对各基因的mRNA的表达进行定量分析。针对各基因的特异性引物从Invitrogen公司购买。各基因Ct(Threshold Cycle)值是通过内在性对照进行归一化后，算出相对于非处理的样品的比率。将结果示于图3至图7。
在图3至图7的各图表中，左侧的柱状图表示未诱导EMT时的各基因的表达量。中间的柱状图表示诱导EMT时的各基因的表达量。右侧的柱状图表示给予EMT抑制化合物时的各基因的表达量。另外，图3至图7表示分别使用奥沙普嗪、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、扎托布洛芬作为EMT抑制化合物的结果。
在本说明书中，各EMT标记也记载为以下的简称。
钙黏蛋白(Cadherin)：CDH(CDH2、CDH3等)
基质金属蛋白酶：MMP(MMP1、MMP3、MMP7等)
纤维连接蛋白：FN(FN1等)
波形蛋白：VIM
1α1型胶原蛋白：COL1A1
1α2型胶原蛋白：COL1A2
5α2型胶原蛋白：COL5A2
5α3型胶原蛋白：COL5A3
6α3型胶原蛋白：COL6A3
13α1型胶原蛋白：COL13A1
层粘连蛋白β3：LAMB3
层粘连蛋白γ2：LAMC2
透明质酸介导运动因子受体：HMMR
肌腱蛋白C：TNC
锌指E盒结合同源盒(Zinc Finger E-Box Binding Homeobox)2：ZEB2
丝甘蛋白聚糖(Serglycin)：SRGN
硫酸软骨素蛋白多醣4：CSPG4
在图3至7的各图表中，第1排自左起为Snail、Slug、CDH3、COL5A3、COL6A3，第2排自左起为MMP1、MMP7、LAMC2、HMMR、TNC。
图3(奥沙普嗪)的第3排自左起为ZEB2、MMP3、COL1A1、COL1A2、CSPG4，第4排为SRGN。
图4(依帕司他)的第3排自左起为ZEB2、CDH2、FN1、VIM、COL1A1，第4排自左起为COL1A2、COL5A2、COL13A1、CSPG4、SRGN。
图5(扎鲁司特)的第3排自左起为MMP3、COL13A1、LAMB3、CSPG4。
图6(氨来呫诺)的第3排自左起为ZEB2、CDH2、MMP3、COL1A1、COL13A1。
图7(扎托布洛芬)的第3排自左起为ZEB2、FN1、COL13A1、CSPG4。
如图3至图7所示，EMT标记中，作为间质系标记的Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7及作为ECM的COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC在应用任一EMT抑制化合物时表达均被抑制。由此，确认这10种EMT标记成为共同被EMT抑制化合物抑制的指标。即使是这10种以外的EMT标记，也如图3所示，对于奥沙普嗪，确认到ZEB2、MMP3、COL1A1、COL1A2、CSPG4、SRGN的表达降低。如图4所示，对于依帕司他，确认到ZEB2、CDH2、FN1、VIM、COL1A1、COL1A2、COL5A2、COL13A1、CSPG4、SRGN的表达降低。如图5所示，对于扎鲁司特，确认到MMP3、COL13A1、LAMB3、CSPG4的表达降低。如图6所示，对于氨来呫诺，确认到ZEB2、CDH2、MMP3、COL1A1、COL13A1的表达降低。如图7所示，对于扎托布洛芬，确认到ZEB2、FN1、COL13A1、CSPG4的表达降低。确认这些EMT标记也可成为被EMT抑制化合物抑制的指标。
根据图3至图7，5个化合物(奥沙普嗪、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、扎托布洛芬)显示出显著地抑制EMT的情况。这些化合物通过显著地抑制EMT，而抑制与CNV的产生或扩展相关的VEGF等的产生，认为能够从根本上预防和/或治疗CNV。
试验例2-2：EMT标记的表达变化2
针对5个化合物(氟芬那酸铝(添加浓度：28μM(Cmax))、甲芬那酸(添加浓度：39μM(Cmax))、舒林酸(添加浓度：100μM)、泰普菲酸(添加浓度：1000μM)、塞曲司特(添加浓度：31μM(Cmax)))，通过与试验例2-1相同的方法，对EMT标记的表达变化进行评价。将结果分别示于图8至图12。
图8(氟芬那酸铝)的第1排自左起为Snail、Slug、COL5A3、COL6A3、MMP1，第2排自左起为MMP7、LAMC2、HMMR、TNC、FN1，第3排自左起为COL1A1、COL1A2、COL13A1、CDH2、MMP3，第4排自左起为VIM、CSPG4。
图9(甲芬那酸)的第1排自左起为Snail、CDH3、COL5A3、COL6A3、MMP1，第2排自左起为MMP7、LAMC2、HMMR、TNC、FN1，第3排自左起为COL1A1、COL1A2、COL13A1、MMP3、VIM，第4排为CSPG4。
图10(舒林酸)的第1排自左起为Snail、Slug、CDH3、COL5A3、COL6A3，第2排自左起为MMP1、MMP7、LAMC2、HMMR、TNC，第3排自左起为FN1、CDH2、MMP3、VIM、COL1A1，第4排自左起为COL1A2、COL13A1、CSPG4、ZEB2。
图11(泰普菲酸)的第1排自左起为Snail、Slug、CDH3、COL5A3、COL6A3，第2排自左起为MMP1、MMP7、LAMC2、HMMR、TNC，第3排自左起为FN1、CDH2、MMP3、VIM、COL1A1，第4排自左起为COL1A2、COL13A1、CSPG4、ZEB2。
图12(塞曲司特)的第1排自左起为Snail、CDH3、COL5A3、COL6A3、MMP1，第2排自左起为MMP7、LAMC2、HMMR、TNC、FN1，第3排自左起为CDH2、MMP3、VIM、COL1A1、COL1A2，第4排自左起为COL13A1、CSPG4、ZEB2。
如图8至图12所示，5个化合物(氟芬那酸铝、甲芬那酸、舒林酸、泰普菲酸、塞曲司特)也显示出显著地抑制EMT诱导时的EMT标记的表达的情况。这些化合物通过显著地抑制EMT，而抑制与CNV的产生或扩展相关的VEGF等的产生，认为能够从根本上预防和/或治疗CNV。
试验例2-3：VEGF的表达变化1
针对3个化合物(奥沙普嗪、依帕司他、扎托布洛芬)，使用前述的细胞模型对VEGF抑制效果进行评价。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例1-1记载的条件下诱导EMT，同时添加奥沙普嗪(Cmax：340.9μM)、依帕司他(Cmax：12.2μM)、或扎托布洛芬(Cmax：20.4μM)，在EMT诱导48小时后，回收细胞。各化合物以Cmax、Cmax的1/2浓度、Cmax的1/4浓度进行添加。作为对照，使用未添加评价化合物(被验药剂)的样品。将所回收的细胞利用PBS清洗，添加RLT缓冲液350μL，而制作RNA采集用溶解物。使用RNeasy微量试剂盒(QIAGEN公司#74004)，自溶解物提取总RNA，使用qRT-PCR用的SuperScript IIIFirst-Strand Synthesis SuperMix(Invitrogen公司#11752-250)，由所获得的RNA 2μg制作cDNA。将所获得的cDNA 50ng作为模板，依照制造厂商的草案进行实时PCR(ABI Prism7500序列检测系统)，对各基因的mRNA的表达进行定量分析。针对各基因的特异性引物从Invitrogen公司购买。各基因Ct(Threshold Cycle，阈值循环)值是通过内在性对照进行归一化后，算出相对于非处理的样品的比率。另外，针对各结果进行显著差异检验(Student t检验)，在p＜0.05的情况下标注“*”，在p＜0.01的情况下标注“**”。将结果示于图13至图15。
如图13所示，在RPE细胞中，VEGF因EMT的诱导而mRNA表达量亢进。奥沙普嗪浓度依赖性地抑制VEGF的表达亢进。在Cmax的1/4浓度下也可见显著的VEGF抑制效果(图13中的A)。作为间质系标记的纤维连接蛋白、Snail、波形蛋白因EMT的诱导而表达量亢进。奥沙普嗪浓度依赖性地抑制这些间质系标记的表达亢进(分别为图13中的B至图13中的D)。
如图14所示，在RPE细胞中，VEGF因EMT的诱导而mRNA表达量亢进。依帕司他浓度依赖性地抑制VEGF的表达亢进(图14中的A)。作为间质系标记的纤维连接蛋白、Snail、波形蛋白因EMT的诱导而表达量亢进。依帕司他浓度依赖性地抑制这些间质系标记的表达亢进(分别为图14中的B至图14中的D)。
如图15所示，在RPE细胞中，VEGF因EMT的诱导而mRNA表达量亢进。扎托布洛芬浓度依赖性地抑制VEGF的表达亢进。在Cmax的1/4浓度下也可见显著的VEGF抑制效果(图15中的A)。作为间质系标记的纤维连接蛋白、Snail、波形蛋白因EMT的诱导而表达量亢进。扎托布洛芬浓度依赖性地抑制这些间质系标记的表达亢进(分别为图15中的B至图15中的D)。
根据图13至图15，3个化合物(奥沙普嗪、依帕司他、扎托布洛芬)通过显著地抑制EMT，而显示出抑制VEGF的mRNA表达亢进的情况。这些化合物由于可抑制因EMT而表达亢进的VEGF，因此能够从根本上预防和/或治疗CNV。另外，根据这些结果认为，能够显著地抑制EMT的扎鲁司特或氨来呫诺也能够抑制VEGF，而从根本上预防和/或治疗CNV。
参考试验例2-4：VEGF的表达变化2
对于与前述奥沙普嗪、扎托布洛芬不同的作为NSAIDs的依托度酸(Cmax：42.5μM)与吲哚美辛(Cmax：2.79μM)，通过与试验例2-3相同的方法，使用前述的细胞模型对VEGF抑制效果进行评价。将结果分别示于图16或图17。
如图16所示，在RPE细胞中，VEGF因EMT的诱导而mRNA表达量亢进。但是，依托度酸未抑制VEGF的表达亢进(图16中的A)。作为间质系标记的纤维连接蛋白、Snail、波形蛋白因EMT的诱导而表达量亢进。但是，依托度酸未抑制这些间质系标记的表达亢进。在全部条件下均未见显著差异(分别为图16中的B至图16中的D)。
如图17所示，在RPE细胞中，VEGF因EMT的诱导而mRNA表达量亢进。但是，吲哚美辛未抑制VEGF的表达亢进(图17中的A)。作为间质系标记的纤维连接蛋白、Snail、波形蛋白因EMT的诱导而表达量亢进。但是，吲哚美辛未抑制这些间质系标记的表达亢进。在全部条件下均未见显著差异(分别为图17中的B至图17中的D)。
根据依托度酸及吲哚美辛的结果推测，由于无法抑制RPE细胞的EMT的化合物也无法抑制VEGF的表达亢进，因此对于CNV的预防和/或治疗无效。
试验例2-5：VEGF的表达变化3
针对3个化合物(氟芬那酸铝(Cmax：27.91μM)、甲芬那酸(Cmax：38.54μM)、塞曲司特(Cmax：31.03μM))，使用前述的细胞模型对VEGF抑制效果进行评价。通过与试验例2-3相同的方法，使用前述的细胞模型对VEGF抑制效果进行评价。将结果分别示于图18至图20。
如图18所示，在RPE细胞中，VEGF因EMT的诱导而mRNA表达量亢进。氟芬那酸铝浓度依赖性地抑制VEGF的表达亢进。在Cmax的1/4浓度下也可见显著的VEGF抑制效果(图18中的A)。作为间质系标记的纤维连接蛋白、Snail、波形蛋白因EMT的诱导而表达量亢进。氟芬那酸铝抑制这些间质系标记的表达亢进(分别为图18中的B至图18中的D)。
如图19所示，在RPE细胞中，VEGF因EMT的诱导而mRNA表达量亢进。甲芬那酸浓度依赖性地抑制VEGF的表达亢进。在Cmax的1/4浓度下也可见显著的VEGF抑制效果(图19中的A)。作为间质系标记的纤维连接蛋白、Snail、波形蛋白因EMT的诱导而表达量亢进。甲芬那酸抑制这些间质系标记的表达亢进(分别为图19中的B至图19中的D)。
如图20所示，在RPE细胞中，VEGF因EMT的诱导而mRNA表达量亢进。塞曲司特浓度依赖性地抑制VEGF的表达亢进。在Cmax的1/4浓度下也可见显著的VEGF抑制效果(图20中的A)。作为间质系标记的纤维连接蛋白、Snail、波形蛋白因EMT的诱导而表达量亢进。塞曲司特抑制这些间质系标记的表达亢进(分别为图20中的B至图20中的D)。
如图18至图20所示，3个化合物(氟芬那酸铝、甲芬那酸、塞曲司特)通过显著地抑制EMT，而显示出抑制VEGF的mRNA表达亢进的情况。这些化合物由于可抑制因EMT而表达亢进的VEGF，因此推测能够从根本上预防和/或治疗CNV。这些化合物由于可抑制因EMT而表达亢进的VEGF，因此能够从根本上预防和/或治疗CNV。另外，根据这些结果认为，能够显著地抑制EMT的扎鲁司特或氨来呫诺也能够抑制VEGF，而从根本上预防和/或治疗CNV。
[试验例3：用于评价CNV抑制的活体内模型试验]
已知通过对小鼠的眼底照射激光，会诱导脉络膜血管新生及EMT(参考文献：Ishikawa，et al，Exp Eye Res.2016 Jan；142：19·25)。因此，使用小鼠的激光照射模型，对扎托布洛芬的CNV及EMT的抑制效果进行评价。
通过将扎托布洛芬(东京化成工业株式会社制造)0.15g及阿拉伯胶(和光纯药工业株式会社制造)0.75g在水60mL中进行搅拌，而制作扎托布洛芬悬浮液。介质(Vehicle)是通过将阿拉伯胶0.75g溶解至水60mL中并进行搅拌而制作的。
其次，对C57BL/6J小鼠(8周龄、N＝13)的眼底，使用多色激光光凝固装置，在狭缝灯下对各眼进行4处激光照射。照射后，立即将介质或者扎托布洛芬溶液(25mg/kg)以1天1次口服给药3周，并进行以下的评价。需要说明的是，(1)与(3)使用同一个体。
(1)CNV评价(N＝3)
(2)EMT评价：1型胶原蛋白(N＝10)
(3)EMT评价：波形蛋白(N＝3)
试验例3-1：扎托布洛芬对由激光照射引起的脉络膜血管新生(CNV)的抑制效果
在激光照射2周后，从尾静脉给予荧光素钠(Fluorescite)静脉注射液500mg(Alcon Japan株式会社)(1mL/kg)，给予约1分钟后进行荧光眼底照片拍摄。根据所拍摄的荧光眼底照片，对各眼的4处，基于以下的评价基准进行评分。将结果示于图21，将代表图像示于图22。
[评价基准]
·无荧光······0
·稍见荧光······1
·见到中等程度的荧光······2
·见到强程度的倾向······3
如图21所示，关于由激光照射引起的CNV评分，与介质给予组相比，扎托布洛芬给予组的结果显著较低。
在图22中，箭头是因CNV而泄漏荧光的部分。如图22所示，关于由激光照射引起的CNV，与介质给予组(左侧照片)相比，在扎托布洛芬给予组(右侧照片)中显著地受到抑制。
试验例3-2：扎托布洛芬对由激光照射引起的EMT(EMT评价：1型胶原蛋白)的抑制效果
在激光照射3周后，通过颈椎脱臼使其安乐死并摘取眼球，在4％聚甲醛-磷酸缓冲液(和光纯药工业株式会社)中进行浸渍固定。从眼球去除角膜、晶状体、视网膜而形成眼杯的状态，利用PBST清洗3次。其次，使用50％甲醇，再使用100％甲醇溶液进行脱水处理，用封闭液(1％BSA、0.5％TritonX-100/PBS)进行60分钟的孵育。进而，在1次抗体(抗胶原蛋白抗体、Rockland公司)中静置一晩后，在2次抗体(Alexa488抗体、Life technologies公司)中使其反应1小时，置于载玻片上，由此制作平置的染色标本。标本使用显微镜拍摄利用抗1型胶原蛋白抗体所获得的染色图像的照片后，进行定量评价。将结果示于图23。
如图23所示，关于通过激光照射而产生的1型胶原蛋白染色体积，可知与介质给予组相比，扎托布洛芬给予组中显著地降低(p＜0.05)。即，明确了扎托布洛芬对EMT显示出显著的抑制效果。
试验例3-3：扎托布洛芬对由激光照射引起的EMT(EMT评价：波形蛋白)的抑制效果
在激光照射3周后，通过颈椎脱臼使其安乐死并摘取眼球，在4％聚甲醛-磷酸缓冲液(和光纯药工业株式会社制造)中进行浸渍固定。将经固定的眼球在10％蔗糖(和光纯药工业株式会社制造)及25％蔗糖中各浸渍3小时后，制作眼杯。制作冷冻切片，并贴附于载玻片。利用显微镜进行观察，选取能够确认到激光照射部位的切片。其次，将贴附有切片的载玻片放入利用水稀释10倍的HistoVT One(Nacalai Tesque株式会社制造)中，在70℃下浸渍15分钟。对切片滴加利用70％乙醇(和光纯药工业株式会社制造)稀释20倍的TrueBlack(Biotium公司制造)，在室温下静置数分钟后，对切片滴加5％山羊血清(Dako Japan株式会社制造)，在室温下静置30分钟而进行封闭。其次，对1次抗体(抗波形蛋白抗体、abcam公司制造)添加Can Get免疫组织染色液B(Immunostain Solution B)(东洋纺株式会社制造)，添加至切片，并静置一晩。进而，对二次抗体(Alexa Fluor546、Thermo FisherScientific公司制造)及Hoechst 33342(株式会社同仁化学研究所制造)添加Can Get免疫组织染色液B，添加至切片，并静置30分钟。利用荧光显微镜，在以下的条件下进行观察及拍摄。
·波形蛋白：激发波长520-550nm、检测波长580nm
·核：激发波长330-385nm、检测波长420nm
将拍摄结果示于图24及图25。图24表示介质给予组。图24的左侧照片表示明视野图像，右侧照片表示波形蛋白(红)与核(蓝)的重叠图像。在图25中，左侧照片表示介质给予组的波形蛋白，右侧照片表示扎托布洛芬给予组的波形蛋白。在图24及图25中，圈中表示由激光照射引起的波形蛋白阳性区域。
如图24所示，在激光照射部位的RPE附近出现色素少的部分(左侧照片)，确认到作为间质系标记的波形蛋白的染色(右侧照片)。由此认为，通过激光照射，RPE表达波形蛋白，而引起上皮间质转化(EMT)。并且，如图25所示，介质给予组的RPE为波形蛋白阳性(左侧照片)。另一方面，扎托布洛芬给予组中，与介质给予组相比，波形蛋白阳性面积缩小(右侧照片)。
由此明确，扎托布洛芬抑制激光照射模型中的EMT。即，认为扎托布洛芬通过抑制RPE的EMT而抑制玻璃膜疣形成。另外，即使是与扎托布洛芬不同的其他化合物，只要能够显著地抑制EMT，则推测也能够预防和/或治疗CNV。
[4.人类检体中的EMT的证明]
试验例4-1：AMD患者玻璃膜疣的形态观察
从美国国家疾病研究交流会(National Disease Research Interchange)取得健康人对照(Control)样品及AMD患者的视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)样品。这些组织样品利用二甲苯处理5分钟×3次、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用90％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用70％乙醇处理1分钟、利用水处理5分钟，而进行脱蜡。利用梅氏苏木精溶液进行4分钟染色，利用曙红液进行1分钟染色。在流水中处理5分钟，然后利用70％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用90％乙醇处理1分钟、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用二甲苯处理5分钟×3次，使用屈大麻酚将其封入。在室温下使其干燥15分钟以上，然后观察健康者的RPE细胞及AMD患者的RPE细胞。将利用苏木精-曙红染色所获得的染色结果示于图26。
通过仔细地研究图26的观察结果，本发明的发明人等发现：在健康者对照的黄斑部，RPE细胞的形态为立方状，通过细胞间粘附而整齐地排列为单层；在玻璃膜疣所存在的AMD患者的黄斑部，RPE细胞的形态变化为纺锤状，RPE细胞获得运动能力，细胞发生复层化。根据这些观察结果，本发明的发明人等推测，在AMD患者的黄斑部，RPE细胞的细胞间粘附减弱而产生形态变化，从而建立了如下假说：RPE细胞产生了失去上皮性的现象即EMT(Epithelial-mesencyamal transition，上皮-间质转化)。在以下的试验例4-2至试验例4-4中，基于该假说，进行了用于明在RPE细胞中产生EMT的试验。
试验例4-2：AMD患者玻璃膜疣中的上皮系标记的消失
通过免疫组织化学(IHC)验证健康人对照(Control)样品及AMD患者的视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)样品中的上皮系标记的消失。将组织样品在气相培养箱中在56℃孵育30分钟后，利用二甲苯处理5分钟×3次、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用90％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用70％乙醇处理1分钟、利用水处理5分钟，而进行脱蜡。使用特殊染色及IHC用的精致黑色素试剂盒(Delicate Melanin Bleach Kit forSpecial Stains and IHC)(Polysciences公司#24909-1)，依照制造厂商的草案而除去组织中的黑色素后，使用柠檬酸缓冲液pH值6.0，通过10分钟的微波处理而将抗原活化。在室温下静置30分钟后，利用PBS处理5分钟、利用3％过氧化氢/PBS溶液处理5分钟、利用PBS处理5分钟，而使内在性过氧化酶不活化。在3％BSA/PBS溶液中在室温下静置30分钟，而将组织进行封闭。作为1次抗体，将利用1.5％BSA/PBS溶液稀释至500倍的抗E-钙黏蛋白抗体(BDBiosience公司#610181)及稀释至1000倍的抗细胞角蛋白18抗体(Cell signalingTechnology公司#4548)对每1个组织滴加200微升，在4℃下使其与组织反应17小时。与1次抗体反应过的组织利用PBS清洗5分钟×3次后，使用Mouse on Mouse(M.O.M.)Elite过氧化酶试剂盒(Vector Laboratories公司#PK-2200)，在室温下使其与2次抗体反应30分钟，利用PBS清洗5分钟×3次后，依照制造厂商的草案在室温下进行30分钟的ABC反应。将组织利用PBS清洗5分钟×3次后，使用ImmPACT DAB过氧化酶(HRP)底物(Vector Laboratories公司#SK-4105)，在室温下显色3分钟。经显色的组织在使用M型新苏木精(武藤化学株式会社#30141)进行染色后，在流水中静置3分钟，利用70％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用90％乙醇处理1分钟、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用二甲苯处理5分钟×3次，使用屈大麻酚将其封入。在室温下使其干燥15分钟以上，然后观察健康者的RPE细胞及AMD患者的RPE细胞。将结果示于图27。
如图27所示，对于健康者对照(Control)，在细胞间粘附部位确认到作为上皮系标记的E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的染色，但在AMD患者玻璃膜疣的周边部，在细胞间并未确认到E-钙黏蛋白的染色(左侧染色照片)。另外，对于健康者对照，在RPE细胞整体确认到作为上皮系标记的细胞角蛋白18(Cytokeratin18)的强染色，但在AMD患者玻璃膜疣的周边部，与其相比信号降低(右侧染色照片)。
由此确认，AMD患者的RPE细胞发生了上皮性的丧失、降低。
试验例4-3：AMD患者玻璃膜疣中的间质系标记的亢进
通过免疫组织化学(IHC)验证健康人对照(Control)样品及AMD患者的视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)样品中的间质系标记的亢进。将组织样品在气相培养箱中在56℃孵育30分钟后，利用二甲苯处理5分钟×3次、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用90％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用70％乙醇处理1分钟、利用水处理5分钟，而进行脱蜡。使用柠檬酸缓冲液pH值6.0，通过10分钟的微波处理而将抗原活化。在室温下静置30分钟后，利用PBS处理5分钟、利用3％过氧化氢/PBS溶液处理5分钟、利用PBS处理5分钟，而使内在性过氧化酶不活化。在3％BSA/PBS溶液中，在室温下静置30分钟，而将组织进行封闭。作为1次抗体，将利用1.5％BSA/PBS溶液稀释至100倍的抗纤维连接蛋白抗体(abcam公司#45688)及稀释至10000倍的抗波形蛋白抗体(Sigma-Aldrich公司#6630)对每1个组织滴加200微升，在4℃下使其与组织反应17小时。与1次抗体反应过的组织利用PBS清洗5分钟×3次后，对于抗纤维连接蛋白抗体使用VECTASTAIN Elite ABC兔IgG试剂盒(VectorLaboratories公司#PK-6101)，对于抗波形蛋白抗体使用Mouse on Mouse(M.O.M.)Elite过氧化酶试剂盒(Vector Laboratories公司#PK-2200)，在室温下使其与2次抗体反应30分钟。利用PBS清洗5分钟×3次后，依照制造厂商的草案，在室温下进行30分钟的ABC反应。将组织利用PBS清洗5分钟×3次后，使用ImmPACT AMEC红过氧化酶(HRP)底物(VectorLaboratories公司#SK-4285)，在室温下显色3分钟，利用蒸馏水清洗5分钟。经显色的组织在使用M型新苏木精(武藤化学株式会社#30141)进行染色后，在流水中静置3分钟，使用VectaMount AQ水溶性封片剂(Vector Laboratories公司#H-5501)将其封入。在室温下使其干燥15分钟以上，然后观察健康者的RPE细胞及AMD患者的RPE细胞。将结果示于图28。
如图28所示，在健康者对照(Control)的正常部RPE细胞中，未见到作为间质系标记的纤维连接蛋白(Fibronectin)的染色。另一方面，在AMD患者的玻璃膜疣及RPE细胞中，纤维连接蛋白显示出阳性。另外，在健康者对照的RPE细胞中，未见到作为间质系标记的波形蛋白(vimentin)的染色。AMD患者玻璃膜疣的RPE细胞显示出波形蛋白阳性。
由以上的分析结果明确，AMD患者的RPE细胞丧失或减弱了健康时的上皮性的性状，在AMD中获得间质性的性状并亢进。即，明确了在AMD中，RPE细胞发生了从上皮性的性状向间质性的性状的转化、上皮-间质转化EMT。
试验例4-4：利用食蟹猕猴模型的验证
由健康的食蟹猕猴对照(Control)样品及AMD食蟹猕猴模型的视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)样品制作切片，通过免疫组织化学(IHC)验证上皮系标记的消失及间质系标记的亢进。将组织样品利用二甲苯处理5分钟×3次、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用90％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用70％乙醇处理1分钟、利用蒸馏水处理10分钟，而进行脱蜡。使用柠檬酸缓冲液pH值6.0，通过10分钟的微波处理而将抗原活化。在室温下静置30分钟后，利用PBS处理5分钟、利用3％过氧化氢/PBS溶液处理5分钟、利用PBS处理5分钟，而使内在性过氧化酶不活化。在3％BSA/PBS溶液中，在室温下静置20分钟，而将组织进行封闭。作为1次抗体，将利用1.5％BSA/PBS溶液稀释至500倍的抗E-钙黏蛋白抗体(BD Biosience公司#610181)及稀释至2000倍的抗细胞角蛋白18抗体(abcam公司#ab668)、稀释至600倍的抗纤维连接蛋白抗体(Epitomics公司#1574-1)对每1个组织滴加200微升，在4℃下使其与组织反应17小时。与1次抗体反应过的组织利用PBS清洗5分钟×3次后，对于抗E-钙黏蛋白抗体及抗细胞角蛋白18抗体使用VECTASTAIN Elite ABC小鼠IgG试剂盒(Vector Laboratories公司#PK-6102)，对于抗纤维连接蛋白抗体使用VECTASTAIN EliteABC兔IgG试剂盒(Vector Laboratories公司#PK-6101)，在室温下使其与2次抗体反应30分钟，利用PBS清洗5分钟×3次后，依照随附的草案，在室温下进行30分钟的ABC反应。将组织利用PBS清洗5分钟×3次后，对于抗E-钙黏蛋白抗体使用ImmPACT DAB过氧化酶(HRP)底物(Vector Laboratories公司#SK-4105)，对于抗细胞角蛋白18抗体及抗纤维连接蛋白抗体使用TMB过氧化酶底物试剂盒(Vector Laboratories公司#SK-4400)，在室温下显色3分钟，利用蒸馏水清洗5分钟。关于经显色的组织，对于抗E-钙黏蛋白抗体使用M型新苏木精(武藤化学株式会社#30141)，对于抗细胞角蛋白18抗体及抗纤维连接蛋白抗体使用VECTOR核快红(Vector Laboratories公司#H-3403)进行染色。在流水中静置10分钟，利用70％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用90％乙醇处理1分钟、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用二甲苯处理5分钟×3次，使用屈大麻酚将其封入。在室温下使其干燥15分钟以上，然后观察食蟹猕猴对照的RPE细胞及AMD的食蟹猕猴模型的RPE细胞。将结果示于图29。
黄斑仅存在于即使在灵长类中也为高等的灵长类，黄斑部变性症也仅存在于特定的灵长类。为了验证黄斑部变性症的病情，而对作为黄斑部变性症的模型动物被认知的食蟹猕猴的病情实施分析。
如图29所示，关于RPE细胞的形态，在健康的食蟹猕猴对照(Control)中，确认到RPE细胞为立方状，通过细胞间粘附而整齐地排列为单层。另一方面，在AMD的食蟹猕猴的RPE细胞中，形态变化为纺锤状，在玻璃膜疣的边缘部确认到细胞的复层。
另外，关于上皮系标记，在健康的食蟹猕猴对照(Control)的黄斑部，在RPE细胞的细胞间粘附部位确认到E-钙黏蛋白的染色，但在玻璃膜疣所存在的AMD的食蟹猕猴的RPE细胞中，在细胞间未确认到E-钙黏蛋白的染色。另外，在健康的食蟹猕猴对照中，在RPE细胞整体确认到较强的细胞角蛋白18的染色，但在AMD的食蟹猕猴的玻璃膜疣中，与对照相比，信号降低。
另外，关于间质系标记，在AMD的食蟹猕猴的玻璃膜疣中，纤维连接蛋白被染色，确认到向RPE细胞或玻璃膜疣蓄积。
根据前述的试验例的结果确认，在玻璃膜疣的RPE细胞中产生了EMT。因此，本发明的发明人等推测，若可抑制RPE细胞的EMT，则会抑制玻璃膜疣的形成。在以下的试验例5-1中，为了检索抑制RPE细胞的EMT的化合物，或为了评价候选药剂在RPE细胞中对EMT所产生的影响，而研究了在活体外能够对RPE细胞诱导EMT的细胞模型。
[5.EMT细胞模型的构建]
试验例5-1：RPE细胞中的EMT的诱导条件的研究
发明人等对于RPE细胞(视网膜色素上皮细胞株：ARPE-19、以下相同)，使用细胞因子或生长因子(TNF-α/IL-1β/TGF-β)，在10种条件下进行了尝试刺激的实验，结果发现引起显著的EMT诱导。认为使用细胞因子或生长因子的EMT诱导的细胞模型反映了AMD患者的所推测的EMT诱导机制。
这10种条件如下。
(1)TNF-α 100ng/mL
(2)IL-1 β 100ng/mL
(3)IL-1 β 20ng/mL
(4)TNF-α 500ng/mL+TGF-β 5ng/mL
(5)TNF-α 200ng/mL+TGF-β 5ng/mL
(6)TNF-α 100ng/mL+TGF-β 5ng/mL
(7)TNF-α 100ng/mL+TGF-β 10ng/mL
(8)TNF-α 100ng/mL+TGF-β 25ng/mL
(9)IL-1 β 100ng/mL+TGF-β 5ng/mL
(10)IL-1 β 20ng/mL+TGF-β 5ng/mL
试验例5-2：根据EMT标记分子的表达变化所进行的EMT的验证
从刺激后的RPE细胞提取RNA，验证表达变化。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例5-1记载的条件下诱导EMT，在EMT诱导48小时后，回收细胞。将所回收的细胞利用PBS清洗，添加RLT缓冲液(QIAGEN公司)350μL，而制作RNA采集用溶解物。使用RNeasy微量试剂盒(QIAGEN公司#74004)，自溶解物提取总RNA，使用qRT-PCR用的SuperScript III First-StrandSynthesis SuperMix(Invitrogen公司#11752-250)，由所获得的RNA 2μg制作cDNA。将所获得的cDNA 50ng作为模板，依照制造厂商的草案进行实时PCR(ABI Prism 7500序列检测系统)，对各基因的mRNA的表达进行定量分析。针对各基因的特异性引物从Invitrogen公司购买。各基因Ct(Threshold Cycle)值是通过内在性对照进行归一化后，算出相对于非处理的样品的比率。
将结果示于图1。
如图1中的A及B所示，在刺激后的RPE细胞中，作为上皮系标记的E-钙黏蛋白的表达降低(图1中的A)，作为间质系标记的N-钙黏蛋白的表达亢进(图1中的B)。这种钙黏蛋白转换是EMT的代表性现象。另外，确认到纤维连接蛋白所代表的间质系标记(图1中的C)及EMT相关转录因子群(Snail、Slug、ZEB1)的亢进(图1中的E至G)及I型胶原蛋白(COL1A1)所代表的ECM的表达亢进(图1中的D)，确认到RPE细胞因刺激而诱导EMT。
试验例5-3：利用微阵列所进行的经时性的EMT标记表达变化的验证
实施EMT诱导时间的玻璃膜疣样构造的形成与此时刻的EMT诱导状态的分析。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例5-1记载的条件下诱导EMT，在EMT诱导1小时后、4小时后、12小时后、24小时后、48小时后、72小时后，回收细胞。将所回收的细胞利用PBS清洗，添加RLT缓冲液350μL，而制作RNA采集用溶解物。使用RNeasy微量试剂盒(QIAGEN公司#74004)，自溶解物提取总RNA，使用Low InputQuickAmp标定试剂盒(Agilent Technologies公司#5190-2305)进行荧光标记。经标记的cRNA在人类全基因组寡聚DNA微阵列试剂盒(Agilent Technologies公司#G4112F)中，依照制造厂商所规定的草案进行杂交。经杂交的载玻片使用基因表达清洗包(AgilentTechnologies公司#5188-5327)进行清洗，利用Agilent微阵列扫描仪(AgilentTechnologies公司#G2505B)进行扫描。扫描图像使用特征提取(Feature Extraction)软件第9.5.1版(Agilent Technologies公司)进行数值化。数值数据通过Grobal归一化法而进行标准化。将结果示于图2。
如图2所示，EMT标记的降低或亢进的峰值根据各基因，而为EMT诱导后12小时后、或72小时后，产生了偏差，降低的上皮系标记以及亢进的间质系标记和ECM如下所述。
作为因EMT诱导而降低的上皮系标记，确认到ID1、ID2、MUC1、细胞角蛋白18(KRT18)、THBS1、VIL2、E-钙黏蛋白(CDH1)、TGFB2。
作为因EMT诱导而亢进的间质系标记及ECM，确认到FGF2、TWIST1、VIM、CD44、ZEB1、RDX、MMP9、FN1、TGFB1、RHOA、ZEB2、MMP2、TJP1、CTNNB1、MMP3、ETS1、SNAI1、SNAI2、HAS2、FGF1、SERPINE1、CDH2、MSN、TCF3、SDC1、ITGAV、COL1A1、SPARC。
在EMT诱导的24小时后，在接种有RPE细胞的培养板上形成玻璃膜疣样构造体。确认到E-钙黏蛋白及细胞角蛋白18所代表的上皮系标记群的表达降低与纤维连接蛋白/波形蛋白所代表的间质系标记及ECM群的表达亢进，在玻璃膜疣样构造体的形成与EMT诱导状态之间可见明确的相关性。
因此，确认玻璃膜疣样构造体的形成通过RPE细胞的EMT而产生。
试验例5-4：根据运动能力亢进所进行的EMT诱导的验证
使用细胞的运动能力·浸润能力的评价方法即侵袭实验法(细胞浸润分析)，评价由EMT引起的RPE细胞的运动能力亢进。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例5-1记载的条件下诱导EMT，在EMT诱导24小时后，回收细胞。所回收的细胞接种至BD BiocoatMatrigel侵袭小室(BD Biosciece公司#354480)，在37℃下进一步孵育24小时。孵育后，依照制造厂商的草案而除去非浸润细胞后，添加100％甲醇，在室温下以15分钟将细胞进行固定。添加吉姆萨染色液(Nacalai Tesque公司#37114-35)，在室温下染色30分钟后，利用PBS清洗5分钟×2次。清洗后，回收浸润的细胞所残留的膜，并封入至载玻片上。使其干燥15分钟以上，然后利用显微镜进行观察并拍摄图像，计数图像上的细胞数。将结果示于图30。
如图30中的A及图30中的B所示，RPE细胞的浸润细胞数因刺激而增加，确认到RPE细胞的运动能力亢进。作为上皮系细胞的RPE细胞通常不具有运动能力。如此，原本不具有运动能力的上皮系细胞获得运动能力的情况也是EMT的代表性现象。
试验例5-5：产生EMT的RPE细胞的形态观察
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例5-1记载的条件下诱导EMT，在EMT诱导48小时后观察细胞。并且，为了在低倍视野下观察培养板的整体图像，将观察后的细胞利用4％聚甲醛溶液在室温下处理30分钟并进行固定后，利用PBS清洗3次。利用100％甲醇在室温下处理10分钟×2次，添加吉姆萨染色液(NacalaiTesque公司#37114-35)，在室温下染色15分钟。利用甲醇清洗3次后，在室温下使其干燥3小时。利用显微镜观察经干燥的细胞。将结果示于图31。
在试验例5-1记载的条件下对RPE细胞诱导EMT时，在图22的B中如箭头所示，产生集块，确认到形成玻璃膜疣样构造体。另一方面，在未诱导EMT的情况下，如图31中的A所示，PRE细胞不形成集块而维持融合的状态。图31中的C及图31中的D是在低倍视野下观察有无EMT诱导的。在对RPE细胞诱导EMT的情况下，如图31中的D所示，确认到玻璃膜疣样构造体(Focus)在形态上近似于AMD患者的眼底照片的玻璃膜疣(图31中的E)。由此证明，在RPE细胞中，因由EMT诱导所引起的间质化亢进，而形成玻璃膜疣样构造体。另外，该RPE细胞中的玻璃膜疣样构造体可有效地用作在活体外再现AMD患者的玻璃膜疣的模型。
[6.EMT抑制化合物的评价和/或筛选]
试验例6-1：EMT标记的表达变化1
如前所述，确认通过对RPE细胞给予刺激，会引起EMT标记的变化或运动能力的亢进，而形成玻璃膜疣样构造体，从而构建出了能够进行EMT诱导的细胞模型。使用该细胞模型，选出抑制EMT的化合物。另外，通过使用该细胞模型，能够对EMT抑制化合物进行评价。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例5-1记载的条件下诱导EMT，同时添加评价化合物(也称为被验药剂)。作为EMT诱导对照，使用未添加评价化合物(被验药剂)的样品。在EMT诱导48小时后，利用4％聚甲醛溶液在室温下处理30分钟并将细胞进行固定后，利用PBS清洗3次。利用0.2％Triton-X/PBS溶液处理5分钟，利用PBS清洗3次。利用荧光染色溶液(0.2％鬼笔环肽(Phalloidin)-Alexa 568(MolecularProbes公司#A12380)/0.05％Hochest 33342(Invitrogen公司#H3570)/3％BSA-PBS)在室温下以1小时将细胞染色后，利用PBS清洗5分钟×3次。进行过荧光染色的细胞使用ImageExpress Micro(Molecular Devices公司)进行图像化，并使用MetaXpress2.0(MolecularDevices公司)进行数值化。由数值数据分析集块的形成度(集块水平)，以不添加化合物时的数值作为基准，根据以下的式1算出集块形成抑制率，验证各化合物的EMT抑制效果。集块的形成度(集块水平)是将集块的数与体积作为指标而求出的。
(式1)
表中的IC50使用以下的式2算出。
(式2)
IC50＝10∧(LOG(A/B)*(0.5-C)/(D-C)+LOG(B))
A：夹着50％的高浓度
B：夹着50％的低浓度
C：夹着50％的低浓度下的抑制率
D：夹着50％的高浓度下的抑制率
其结果为，在以下的化合物中确认到EMT抑制效果。
表1
在前述表1中所记载的EMT抑制化合物中，针对代表的5个化合物(奥沙普嗪、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、扎托布洛芬)，使用前述的细胞模型对EMT抑制效果进行评价。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例5-1记载的条件下诱导EMT，同时添加代表的5个化合物(奥沙普嗪、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、扎托布洛芬)，在EMT诱导48小时后，回收细胞。作为对照，使用未添加评价化合物(被验药剂)的样品。将所回收的细胞利用PBS清洗，添加RLT缓冲液350μL，而制作RNA采集用溶解物。使用RNeasy微量试剂盒(QIAGEN公司#74004)，自溶解物提取总RNA，使用qRT-PCR用的SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMix(Invitrogen公司#11752-250)，由所获得的RNA 2μg制作cDNA。将所获得的cDNA 50ng作为模板，依照制造厂商的草案进行实时PCR(ABI Prism 7500序列检测系统)，对各基因的mRNA的表达进行定量分析。针对各基因的特异性引物从Invitrogen公司购买。各基因Ct(Threshold Cycle)值是通过内在性对照进行归一化后，算出相对于非处理的样品的比率。将结果示于图3至图7。
在图3至图7的各图表中，左侧的柱状图表示未诱导EMT时的各基因的表达量。中间的柱状图表示诱导EMT时的各基因的表达量。右侧的柱状图表示给予EMT抑制化合物时的各基因的表达量。另外，图3至图7表示分别使用奥沙普嗪、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、扎托布洛芬作为EMT抑制化合物的结果。
在本说明书中，各EMT标记也记载为以下的简称。
钙黏蛋白(Cadherin)：CDH(CDH2、CDH3等)
基质金属蛋白酶：MMP(MMP1、MMP3、MMP7等)
纤维连接蛋白：FN(FN1等)
波形蛋白：VIM
1α1型胶原蛋白：COL1A1
1α2型胶原蛋白：COL1A2
5α2型胶原蛋白：COL5A2
5α3型胶原蛋白：COL5A3
6α3型胶原蛋白：COL6A3
13α1型胶原蛋白：COL13A1
层粘连蛋白β3：LAMB3
层粘连蛋白γ2：LAMC2
透明质酸介导运动因子受体：HMMR
肌腱蛋白C：TNC
锌指E盒结合蛋白2：ZEB2
丝甘蛋白聚糖(Serglycin)：SRGN
硫酸软骨素蛋白多醣4：CSPG4
如图3至图7所示，EMT标记中，作为间质系标记的Snail、Slug、CDH3、MMP1、MMP7及作为ECM的COL5A3、COL6A3、LAMC2、HMMR、TNC在应用任一EMT抑制化合物的情况下表达均被抑制。由此，确认这10种EMT标记成为共同被EMT抑制化合物抑制的指标。即使是这10种以外的EMT标记，也如图3所示，对于奥沙普嗪，确认到ZEB2、MMP3、COL1A1、COL1A2、CSPG4、SRGN的表达降低。如图4所示，对于依帕司他，确认到ZEB2、CDH2、FN1、VIM、COL1A1、COL1A2、COL5A2、COL13A1、CSPG4、SRGN的表达降低。如图5所示，对于扎鲁司特，确认到MMP3、COL13A1、LAMB3、CSPG4的表达降低。如图6所示，对于氨来呫诺，确认到ZEB2、CDH2、MMP3、COL1A1、COL13A1的表达降低。如图7所示，对于扎托布洛芬，确认到ZEB2、FN1、COL13A1、CSPG4的表达降低。确认到这些EMT标记也可成为被EMT抑制化合物抑制的指标。
试验例6-2：EMT标记的表达变化2
针对5个化合物(氟芬那酸铝、甲芬那酸、舒林酸、泰普菲酸、塞曲司特，通过与试验例6-1相同的方法而求出IC50。将结果示于表2。
[表2]
如表2所示，针对确认到EMT抑制效果的5个化合物(氟芬那酸铝(添加浓度：28μM(Cmax))、甲芬那酸(添加浓度：39μM(Cmax))、舒林酸(添加浓度：100μM)、泰普菲酸(添加浓度：1000μM)、塞曲司特(添加浓度：31μM(Cmax)))，通过与试验例6-1相同的方法，对EMT标记的表达变化进行评价。将结果分别示于图8至图12。
如图8至图12所示，对于5个EMT抑制化合物(氟芬那酸铝、甲芬那酸、舒林酸、泰普菲酸、塞曲司特)，也确认到使EMT诱导时的EMT标记的表达降低的情况。
试验例6-3：运动能力亢进的抑制试验
使用前述的试验例5-4中记载的侵袭实验法，确认在因EMT而运动能力亢进的RPE细胞中，由EMT抑制化合物所产生的影响。
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例5-1记载的条件下诱导EMT，添加5个化合物(奥沙普嗪、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、扎托布洛芬)，在EMT诱导24小时后，回收细胞。所回收的细胞接种至BD Biocoat Matrigel侵袭小室(BD Biosciece公司#354480)中，在37℃下进一步孵育24小时。孵育后，依照制造厂商的草案而除去非浸润细胞后，添加100％甲醇，在室温下以15分钟将细胞进行固定。添加吉姆萨染色液(Nacalai Tesque公司#37114-35)，在室温下染色30分钟后，利用PBS清洗5分钟×2次。清洗后，回收浸润的细胞所残留的膜，并封入至载玻片上。使其干燥15分钟以上，然后利用显微镜进行观察并拍摄图像，并计数浸润的细胞数。将结果示于图32至图34。
图32至图34是表示分别使用依帕司他、氨来呫诺、扎鲁司特作为EMT抑制化合物的结果。另外，在图32至图34的柱状图中，左侧的白色的柱状图表示EMT诱导时的RPE细胞的浸润细胞数，右侧的黑色的柱状图自左起依次为添加有低浓度至高浓度的EMT抑制化合物时的RPE细胞的浸润细胞数。
如图32至图34所示，在RPE细胞中，确认到由EMT所诱发的运动能力被EMT抑制化合物浓度依赖性地显著抑制。
[7.通过玻璃膜疣样构造体抑制试验所进行的药效评价]
在培养板上接种RPE细胞(ARPE-19)，在37℃孵育5天。对于RPE细胞，在试验例5-1记载的条件下诱导EMT，同时添加5个化合物(奥沙普嗪、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、扎托布洛芬)，在EMT诱导48小时后观察细胞。作为EMT诱导对照，使用未添加评价化合物(被验药剂)的样品。观察后的细胞利用4％聚甲醛溶液在室温下处理30分钟而进行固定化后，利用PBS清洗3次。利用0.2％Triton-X/PBS溶液处理5分钟，利用PBS清洗3次。利用荧光染色溶液(0.2％鬼笔环肽(Phalloidin)-Alexa 568(Molecular Probes公司#A12380)/0.05％Hochest 33342(Invitrogen公司#H3570)/3％BSA-PBS)，在室温下将细胞染色1小时后，利用PBS清洗5分钟×3次。进行过荧光染色的细胞使用Image Express Micro(MolecularDevices公司)进行图像化，并使用MetaXpress2.0(Molecular Devices公司)进行数值化。由数值数据分析集块的形成度，以未添加化合物时及未诱导EMT时作为基准算出集块形成抑制率，验证各化合物的EMT抑制效果。对于取得荧光图像后的细胞，为了以低倍视野观察整体图像，利用100％甲醇在室温下处理10分钟×2次，添加吉姆萨染色液(Nacalai Tesque公司#37114-35)，在室温下染色15分钟。利用甲醇清洗3次后，在室温下使其干燥3小时。利用显微镜观察经干燥的细胞。将结果示于图35至图39。集块的形成抑制率是根据前述的试验例6-1所示的式1而算出的。
图35至图39是表示分别使用奥沙普嗪、依帕司他、氨来呫诺、扎鲁司特、扎托布洛芬作为EMT抑制化合物的结果。如图35至图39所示，确认到EMT抑制化合物均浓度依赖性地抑制在RPE细胞模型中形成的玻璃膜疣样构造体。即，关于玻璃膜疣样构造体抑制试验中的IC50值，奥沙普嗪为61.0μM、依帕司他为16.9μM、氨来呫诺为32.5μM、扎鲁司特为3.8μM、扎托布洛芬为16.5μM。
基于玻璃膜疣是因RPE细胞发生EMT所引起的构造体这一新见解，通过对玻璃膜疣应用EMT抑制化合物，而显示出抑制玻璃膜疣的情况。由该结果推测，即使是公知的EMT抑制化合物，也对玻璃膜疣发挥相同的效果。
通过以下的方法，针对5个EMT抑制化合物，根据各药剂的interview form及随附文书求出药物血浆峰值浓度(Cmax)。
将结果示于表3。
[表3]
如表3所示，5个EMT抑制化合物均是对于所期待的针对AMD的效果的程度而言充分的血液浓度。
[试验例8：用于评价玻璃膜疣抑制的活体内模型试验]
试验例8-1：诱导在后眼部(视网膜区域)形成玻璃膜疣样构造体
(1)由在后眼部(视网膜区域)的炎症诱发所进行的玻璃膜疣样构造体的诱导方法
对小鼠后眼部视网膜周边给予重组小鼠TNF-a(R&D Systems公司#410-MT)400ng。
给药方法如下所述。
1)准备溶解于PBS中的TNF-a(160ng/μL)2.5μL。
2)以能够清楚观察到小鼠眼球的方式撑开眼睑。
3)将针插入至轻感抵抗之处，并注入药液(400ng/一眼)。
(2)眼球组织样品的制作方法
给药2周后摘取眼球，制作福尔马林固定石蜡包埋块。
(3)RPE细胞的形态观察
组织样品利用二甲苯处理5分钟×3次、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用90％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用70％乙醇处理1分钟、利用水处理5分钟，而进行脱蜡。利用梅氏苏木精溶液进行4分钟染色，利用曙红液进行1分钟染色。在流水中处理5分钟，然后利用70％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用90％乙醇处理1分钟、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用二甲苯处理5分钟×3次，使用屈大麻酚将其封入。在室温下使其干燥15分钟以上，然后观察无处理的RPE细胞及炎症诱导的RPE细胞。将结果示于图40。
如图40所示，通过炎症诱导而在视网膜区域形成玻璃膜疣样构造(由虚线包围的部分)。确认到无处理组的视网膜色素上皮细胞呈现立方状的形态，与邻接的细胞密合地接触，而显示出1层排列(上方照片)。另一方面，确认到炎症诱导后未观察到排列为1层的视网膜色素上皮细胞，而存在于玻璃膜疣样构造体的内部、周围，与邻接细胞的密合连接消失，其形态从立方状变为纺锤状(下方照片)。
(4)通过免疫组织化学所进行的各标记的评价方法
由块制作眼球组织切片。将组织样品在气相培养箱中在56℃孵育30分钟后，利用二甲苯处理5分钟×3次、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用90％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用70％乙醇处理1分钟、利用水处理5分钟，而进行脱蜡。使用特殊染色及IHC用的精致黑色素试剂盒(Polysciences公司#24909-1)，依照制造厂商的草案而除去组织中的黑色素后，使用柠檬酸缓冲液pH值6.0，通过10分钟的微波处理而将抗原活化。在室温下静置30分钟后，利用PBS处理5分钟、利用3％过氧化氢/PBS溶液处理5分钟、利用PBS处理5分钟，而使内在性过氧化酶不活化。在3％BSA/PBS溶液中在室温下静置30分钟，而将组织进行封闭。作为1次抗体，将利用1.5％BSA/PBS溶液稀释至500倍的抗E-钙黏蛋白抗体(BD Biosience公司#610182)及稀释至1000倍的抗细胞角蛋白抗体(Sigma公司#C2931)及稀释至1000倍的抗纤维连接蛋白抗体(abcam公司#45688)及稀释至100倍的抗波形蛋白抗体(Cell signaling Technology公司#5741)对每1组织滴加200μL，在4℃下使其与组织反应17小时。与1次抗体反应过的组织利用PBS清洗5分钟×3次后，在室温下与2次抗体(对于抗E-钙黏蛋白抗体及抗细胞角蛋白抗体使用Mouse on Mouse(M.O.M.)Elite过氧化酶试剂盒(Vector Laboratories公司#PK-2200)，对于抗纤维连接蛋白抗体及抗波形蛋白抗体使用VECTASTAIN Elite ABC兔IgG试剂盒(Vector Laboratories公司#PK-6101))反应30分钟，利用PBS清洗5分钟×3次后，依照制造厂商的草案在室温下进行30分钟的ABC反应。将组织利用PBS清洗5分钟×3次后，使用ImmPACT AMEC红过氧化酶(HRP)底物(VectorLaboratories公司#SK-4285)，在室温下显色3分钟。经显色的组织是在使用M型新苏木精(武藤化学株式会社#30141)进行染色后，在流水中静置3分钟，利用70％乙醇处理1分钟、利用80％乙醇处理1分钟、利用90％乙醇处理1分钟、利用100％乙醇处理1分钟×2次、利用二甲苯处理5分钟×3次，使用屈大麻酚将其封入。在室温下使其干燥15分钟以上，然后进行观察。将关于E-钙黏蛋白的结果示于图41。将关于细胞角蛋白的结果示于图42。将关于纤维连接蛋白的结果示于图43。将关于波形蛋白的结果示于图44。
如图41所示，在无处理的视网膜上皮细胞中，在细胞间见到强阳性的E-钙黏蛋白的染色，而保持了牢固的细胞间粘附(上方照片)。另一方面，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的内部及其周围的视网膜色素上皮细胞中，染色消失(下方照片)。
如图42所示，在无处理的视网膜上皮细胞中，在细胞间见到强阳性的细胞角蛋白的染色(上方照片)。另一方面，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的尤其是周围的视网膜色素上皮细胞中，染色消失(下方照片)。
如图43所示，在无处理的视网膜上皮细胞(由虚线包围的部分)中，信号为阴性，未见到纤维连接蛋白的表达(上方照片)。另一方面，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的内部及周围，染色为阳性，见到纤维连接蛋白的表达(下方照片)。
如图44所示，在无处理的视网膜上皮细胞(由虚线包围的部分)中，信号为阴性，未见到波形蛋白的表达(上方照片)。另一方面，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的内部及周围中，染色为阳性，见到波形蛋白的表达(下方照片)。
试验例8-2：药理评价：玻璃膜疣样构造体形成的抑制效果
(1)由在后眼部(视网膜区域)的炎症诱发所进行的玻璃膜疣样构造体的诱导方法
通过试验例8-1中所记载的方法，对小鼠后眼部视网膜周边给予重组小鼠TNF-a(R&D Systems公司#410-MT)400ng。
(2)评价化合物的给予
评价化合物悬浮于0.5％羧甲基纤维素水溶液中，奥沙普嗪系以成为600mg/kg/day的方式，依帕司他系以成为600mg/kg/day的方式，扎托布洛芬系以成为40mg/kg/day的方式，使用灌胃针(sonde)口服给药14天。
(3)RPE细胞的形态观察
通过试验例8-1中所记载的方法，准备眼球组织样品，分别通过HE染色、E-钙黏蛋白的免疫染色、或纤维连接蛋白的免疫染色而观察无处理的RPE细胞及炎症诱导的RPE细胞。
将奥沙普嗪的药理评价示于图45至图47。将依帕司他的药理评价示于图48至图50。将扎托布洛芬的药理评价示于图51至图53。
如图45所示，通过炎症诱导而在视网膜区域形成了玻璃膜疣样构造(由虚线包围的部分)(上方照片)。在奥沙普嗪给予组中，明显抑制了玻璃膜疣样构造体的形成(下方照片)。
炎症诱导后未观察到排列为1层的视网膜色素上皮细胞，而存在于玻璃膜疣样构造体的内部、周围，与邻接细胞的密合连接消失，其形态从立方状变为纺锤状。另一方面，在奥沙普嗪给予组中，大量地观察到保持立方状的形态的细胞。
如图46所示，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的内部及其周围的视网膜色素上皮细胞中，E-钙黏蛋白的染色消失(上方照片)。另一方面，在奥沙普嗪给予组的视网膜上皮细胞中，在细胞间见到强阳性的染色，而保持了牢固的细胞间粘附(下方照片)。
如图47所示，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的内部及周围中，染色为阳性，见到纤维连接蛋白的表达(上方照片)。另一方面，在奥沙普嗪给予组中，确认到玻璃膜疣样构造体的形成受到抑制，另外，染色信号强度也弱(下方照片)。
如图48所示，通过炎症诱导而在视网膜区域形成了玻璃膜疣样构造(由虚线包围的部分)(上方照片)。在依帕司他给予组中，明显抑制了玻璃膜疣样构造体的形成(下方照片)。
炎症诱导后未观察到排列为1层的视网膜色素上皮细胞，而存在于玻璃膜疣样构造体的内部、周围，与邻接细胞的密合连接消失，其形态从立方状变为纺锤状。另一方面，在依帕司他给予组中，大量地观察到保持立方状的形态的细胞。
如图49所示，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的内部及其周围的视网膜色素上皮细胞中，E-钙黏蛋白的染色消失(上方照片)。另一方面，在依帕司他给予组的视网膜上皮细胞中，在细胞间见到强阳性的染色，而保持了牢固的细胞间粘附(下方照片)。
如图50所示，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的内部及周围中，染色为阳性，见到纤维连接蛋白的表达(上方照片)。另一方面，在依帕司他给予组中，确认到玻璃膜疣样构造体的形成受到抑制，另外，染色信号强度也弱(下方照片)。
如图51所示，通过炎症诱导而在视网膜区域形成了玻璃膜疣样构造(由虚线包围的部分)(上方照片)。在扎托布洛芬给予组中，明显抑制了玻璃膜疣样构造体的形成(下方照片)。
炎症诱导后未观察到排列为1层的视网膜色素上皮细胞，而存在于玻璃膜疣样构造体的内部、周围，与邻接细胞的密合连接消失，其形态从立方状变为纺锤状。另一方面，在扎托布洛芬给予组中，大量地观察到保持立方状的形态的细胞。
如图52所示，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的内部及其周围的视网膜色素上皮细胞中，E-钙黏蛋白的染色消失(上方照片)。另一方面，在扎托布洛芬给予组的视网膜上皮细胞中，在细胞间见到强阳性的染色，而保持了牢固的细胞间粘附(下方照片)。
如图53所示，在通过炎症诱导所形成的玻璃膜疣样构造体的内部及周围中，染色为阳性，见到纤维连接蛋白的表达(上方照片)。另一方面，在扎托布洛芬给予组中，确认到玻璃膜疣样构造体的形成受到抑制，另外，染色信号强度也弱(下方照片)。
[制剂例]
(处方例1片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将羧甲基纤维素钙、羟丙甲纤维素、结晶纤维素、偏硅酸铝酸镁、硬脂酸镁等作为添加物，且包含奥沙普嗪100mg或者200mg的素片等，通常对于成人可将1天量400mg分成1次至2次进行口服给药。需要说明的是，根据年龄、症状而适当增减，1天最高量为600mg。
(处方例2-1片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将羧甲基纤维素钙、结晶纤维素、氧化钛、硬脂酸镁、玉米淀粉、乳糖水合物、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、聚乙二醇6000作为添加物，且包含扎托布洛芬80mg的膜包衣片等，通常对于成人可将1次80mg以1天3次进行口服给药。在单次使用的情况下，1次口服给药80mg至160mg。
(处方例2-2片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将巴西棕榈蜡、羧甲基纤维素钙、结晶纤维素、氧化钛、硬脂酸镁、玉米淀粉、乳糖水合物、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素作为添加物，且包含扎托布洛芬80mg的膜包衣片等，通常对于成人可将1次80mg以1天3次进行口服给药。在单次使用的情况下，1次口服给药80mg至160mg。
(处方例3片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将乳糖水合物、结晶纤维素、聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁、羟丙甲纤维素、氧化钛等作为添加物，且包含扎鲁司特20mg的膜包衣片等，通常对于成人可将1天40mg至80mg分成早餐后及就寝前的2次进行口服给药。需要说明的是，老年人的1天给药量为40mg，成人(老年人除外)的1天最高量为80mg。
(处方例4片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将玉米淀粉、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、硬脂酸镁、乳糖水合物等作为添加物，且包含氨来呫诺25mg或者50mg的素片，通常对于成人，可根据症状将1次25mg至50mg以1天3次，于早晨、傍晚及就寝前或者早晨、白天及傍晚进行口服给药。
(处方例5片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将D-甘露糖醇、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、硬脂酸镁、羟丙甲纤维素、氧化钛、聚氧乙烯(105)聚氧丙烯(5)二醇等作为添加物，且包含依帕司他50mg的膜包衣片等，通常对于成人，可将1次50mg以1天3次于每餐前进行口服给药。需要说明的是，可根据年龄、症状而适当增减。
(处方例6片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将玉米淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、羟丙甲纤维素、氧化钛、羟丙基纤维素、丙二醇、聚氧乙烯[160]聚氧丙烯[30]二醇等作为添加物，且包含泰普菲酸100mg或200mg的膜包衣片等，通常对于成人，可将1次200mg以1天3次进行口服给药。需要说明的是，可根据年龄、症状而适当增减。
(处方例7片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将羧甲基纤维素钙、羟丙甲纤维素、结晶纤维素、偏硅酸铝酸镁、硬脂酸镁等作为添加物，且包含氟芬那酸铝125mg或者250mg的素片等，通常对于成人，可将125mg至250mg分成1天3次进行口服给药。需要说明的是，根据年龄、症状而适当增减，1天最高量为750mg。
(处方例8片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将玉米淀粉、羟丙甲纤维素、偏硅酸铝酸镁、滑石粉、氧化钛等作为添加物，且包含甲芬那酸250mg的素片，通常对于成人，可1次口服给药500mg后，每6小时1次口服给药250mg。需要说明的是，根据年龄、症状而适当增减，1天最高量为1500mg。
(处方例9片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将纤维素、α化淀粉、硬脂酸镁等作为添加物，且包含舒林酸50mg或100mg的素片等，通常对于成人，可将1天量300mg分成1天2次进行口服给药。需要说明的是，根据年龄、症状而适当增减。
(处方例10片剂)
基于通常的片剂的制造方法进行压片，而制造片剂。制造将羟丙基纤维素、硬脂酸镁、玉米淀粉、乳糖水合物等作为添加物，且包含塞曲司特40mg或80mg的素片等，通常对于成人，可将1天1次80mg进行口服给药。

Claims (15)

1.一种脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，含有选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、依帕司他、扎鲁司特、氨来呫诺、塞曲司特及它们药学上可容许的盐所组成的群中的至少1种作为有效成分。
2.如权利要求1所述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，是口服剂。
3.如权利要求1或2所述的脉络膜新生血管的预防和/或治疗剂，其中，所述脉络膜新生血管在老年性黄斑变性、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、或视网膜血管瘤样增生(RAP)中产生。
4.一种玻璃膜疣抑制剂，含有具有视网膜色素上皮细胞的上皮间质转化抑制活性的化合物作为有效成分。
5.如权利要求4所述的玻璃膜疣抑制剂，其中，具有所述上皮间质转化抑制活性的化合物是对所述细胞中的间质系标记或细胞外基质的表达进行抑制的药剂。
6.如权利要求5所述的玻璃膜疣抑制剂，其中，所述间质系标记为选自由Snail、Slug、钙黏蛋白3、基质金属蛋白酶1及基质金属蛋白酶7组成的群中的至少1种；和/或
所述细胞外基质为选自由COL5A3、COL6A3、LAMC2、透明质酸介导运动因子受体及胸腺保育细胞所组成的群中的至少1种。
7.如权利要求4至6中任一项所述的玻璃膜疣抑制剂，其中，具有所述上皮间质转化抑制活性的化合物为非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂和/或血栓素A2受体拮抗剂。
8.如权利要求7所述的玻璃膜疣抑制剂，其中，所述非类固醇性抗炎剂为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、泰普菲酸、氟芬那酸、甲芬那酸、舒林酸、布洛芬、氟比洛芬及它们药学上可容许的盐所组成的群中的至少1种；
所述醛糖还原酶抑制剂为依帕司他和/或其药学上可容许的盐；
所述白三烯受体拮抗剂为选自由扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特及它们药学上可容许的盐所组成的群中的至少1种；
所述化学介质释放抑制剂为氨来呫诺和/或其药学上可容许的盐；和/或
所述血栓素A2受体拮抗剂为塞曲司特和/或其药学上可容许的盐。
9.一种老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，含有丙酸系非类固醇性抗炎剂、氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂、芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂、醛糖还原酶抑制剂、白三烯受体拮抗剂、化学介质释放抑制剂、或血栓素A2受体拮抗剂作为有效成分；
该醛糖还原酶抑制剂为依帕司他和/或其药学上可容许的盐。
10.如权利要求9所述的老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，其中，所述丙酸系非类固醇性抗炎剂为选自由扎托布洛芬、奥沙普嗪、布洛芬、氟比洛芬、泰普菲酸及它们药学上可容许的盐所组成的群中的至少1种；
所述氨基芳基羧酸系非类固醇性抗炎剂为选自由氟芬那酸、甲芬那酸及它们药学上可容许的盐所组成的群中的至少1种；
所述芳基乙酸系非类固醇性抗炎剂为舒林酸和/或其药学上可容许的盐；
所述白三烯受体拮抗剂为选自由扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特及它们药学上可容许的盐所组成的群中的至少1种；和/或
所述化学介质释放抑制剂为氨来呫诺和/或其药学上可容许的盐；
所述血栓素A2受体拮抗剂为塞曲司特和/或其药学上可容许的盐。
11.一种老年性黄斑变性预防和/或治疗剂，是将血管新生抑制剂与权利要求4至8中任一项所述的玻璃膜疣抑制剂组合而成的。
12.一种玻璃膜疣抑制剂的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被检药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞中的上皮间质转化的抑制。
13.一种玻璃膜疣抑制剂的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被检药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞的集块的抑制。
14.一种老年性黄斑变性预防和/或治疗药的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被检药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞中的上皮间质转化的抑制。
15.一种老年性黄斑变性预防和/或治疗药的评价或筛选方法，包括：在活体外，在被检药剂的存在下，测定视网膜色素上皮细胞的集块的抑制。
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